KR20110127342A - 프로피오니박테리움 아크네스에 대한 항균 활성을 가지는 신규한 비피도박테리움 유산균 ｓｐｍ0308 및 상기 비피도박테리움 유산균 ｓｐｍ0308 또는 이의 배양물을 유효 성분으로 함유하는 여드름 개선용 항균 약학 조성물 - Google Patents
프로피오니박테리움 아크네스에 대한 항균 활성을 가지는 신규한 비피도박테리움 유산균 ｓｐｍ0308 및 상기 비피도박테리움 유산균 ｓｐｍ0308 또는 이의 배양물을 유효 성분으로 함유하는 여드름 개선용 항균 약학 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)에 대한 항균 활성을 가지는 신규한 비피도박테리움 유산균 SPM0308 및 상기 비피도박테리움 유산균 SPM0308 또는 이의 배양물을 유효 성분으로 함유하는 여드름 개선용 항균 조성물에 대한 것이다.
Description
본 발명은 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)에 대한 항균 활성을 가지는 신규한 비피도박테리움 유산균 SPM0308 및 상기 비피도박테리움 유산균 SPM0308 또는 이의 배양물을 유효 성분으로 함유하는 여드름 개선용 항균 조성물에 대한 것이다.
프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)는 혐기성 그램 양성 무포자 바실러스이고, 피부 및 장관에 존재하고 있다. 본래 사람에 대해서는 병원성이 낮은 것으로 생각되어 왔지만, 최근의 연구로부터 일부 만성 질병의 발병, 진행에 중요한 역할을 하고 있다는 것이 밝혀졌다. 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)는 1) 보체를 활성화하고, 2)호중구의 주화성 인자를 생산하며, 3) 호중구에 의한 효소 방출을 유발하는 등, 면역계를 강하게 활성화한다.
프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)가 발병, 진행에 관여하는 질병으로는 예를 들어 여드름, 사코이드증, 포도막염, 결막염, 각막염, 각막플릭텐, 심내막염, 척추관절염 등이 포함된다. 이런 이유로, 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)에 대해 우수한 항균작용을 가지는 약제의 개발이 요구되고 있다. 특히, 여드름은 지선성 모낭에 영향을 주는 만성 염증성 질병이고, 피부발진과 함께 안면, 경부, 가슴등에 호발한다. 면포, 붉은 구진, 농포, 경결, 소결절, 낭종 및 흉터 등과 같은 다양한 피부발진이 혼재하여 나타난다. 여드름은 통상 미소면포로부터 폐쇄면포가 형성되고, 그것이 개방면포 또는 염증성 면포인 붉은 구진, 농포로 이행되며, 중요한 경우는 여드름 흉터 등의 후유증이 남는다. 또한, 여드름은 청년 등에 있어서는 정신적 고뇌의 원인도 되기 때문에, 적절한 치료가 요구된다. 여드름은 모포중에 존재하는 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)가 리파아제를 생산하고, 피지성분 중의 트리글리세리드를 유리지방산으로 분해한다. 유리지방산은 모루두 상피를 자극해서 과각화를 일으키고, 면포형성을 유도한다. 게다가, 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)는 호중구 주화성 인자, 보체 활성화 인자, 프로테아제, 히알루노니다제 등을 생산하고, 병환부에 호중구가 유도되며, 모포상피를 파괴한다. 결과로서, 병환부에 고름집이 생성된다 (Shigeo Ikeda, eds., "Hyojun Hifukagaku (6th edition)" pages 270 ~ 272, Igaku-Shoin 발행, 2001를 참조). 따라서, 여드름 치료제로서는 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)에 대한 항균작용이 증가되고, 과각화 억제작용, 호중구 유도에 의한 염증의 억제작용을 함께 가지는 약제가 요망된다.
이러한 염증성 여드름 질환에 관련된 임상적 치료요법에 있어서는, 주로 테트라사이클린(tetracycline), 신다마이신(cindamycine), 에리스로마이신 (erythromycin) 등의 항생제가 주로 이용되어 왔으나, 이러한 항생제를 장기간 투여할 경우, 여드름의 원인균이 내성을 가지게 됨으로써, 치료효과가 떨어지는 문제점이 있었으며, 여드름 유발균인 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)는 그 인위적 배양이 어려워서, 이들 약제에 대한 감수성 실험이 미약할 수 밖에 없으므로, 적절한 약제선정에 어려움이 따랐다.
본 발명은 상기한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)의 생육을 효과적으로 저해할 수 있는 안전한 물성의 새로운 천연 항균성 물질을 생산하는 균주인 비피도박테리움 유산균 SPM0308 을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 비피도박테리움 유산균 SPM0308 또는 이의 배양물을 유효 성분으로 함유하는 여드름 개선용 항균 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
본 발명은 상기와 같은 과제를 해결하기 위하여 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)의 생육을 특이적으로 억제할 수 있는 안전한 물성의 새로운 천연 항균성 물질을 생산하는 균주인 비피도박테리움 유산균 SPM0308 을 제공한다.
또한, 본 발명은 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)의 생육을 특이적으로 억제할 수 있는 유산균주인 비피도박테리움 아돌레센티스 SPM 0308(KCTC 11669BP) 또는 이의 배양물을 유효 성분으로 하는 여드름 개선용 항균 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 비피도박테리움 아돌레센티스 SPM0308(KCTC 11669BP)는 생균, 건조균 또는 사균인 것을 특징으로 하는 여드름 개선용 항균 조성물을 제공한다.
또 다른 실시예에 있어서, 본 발명은 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)의 생육을 특이적으로 억제할 수 있는 유산균주인 비피도박테리움 아돌레센티스 SPM 0308(KCTC 11669BP) 또는 이의 배양물을 유효 성분으로 하는 여드름 개선용 항균 조성물을 유효 성분으로 하는 의약품을 제공한다.
본 발명은 항균 활성을 갖는 신규 유산균인 비피도박테리움 유산균 SPM0308의 분리 및 동정, 나아가 본 발명에 따른 신규 유산균의 여드름 원인균에 대한 항균 활성 테스트로 구성된다.
본 발명에서 사용된 비피도박테리움 유산균 SPM0308 균주는 2010년 4월 7일자로 대한민국 특허균주 기탁기관인 한국과학기술연구소 생명공학연구소 내 유전자원센타에 기탁하여 기탁번호 KCTC 11669BP를 부여받은 바 있다.
또한, 본 발명은 비피도박테리움 유산균 SPM0308 또는 이의 배양물을 유효 성분으로 함유하는, 여드름을 예방하고 치료하는 의약품, 의약외품으로써 사용할 수 있는 여드름 개선용 항균 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르는 신규한 비피도박테리움 유산균 SPM0308 균주 및 상기 비피도박테리움 유산균 SPM0308 또는 이의 배양물을 유효 성분으로 함유하는 여드름 개선용 항균 조성물은 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)에 대하여 특이적 저해 활성 기능을 가지고 있어 피부에 서식하는 여드름 원인균 및 유해 세균에 대하여 항균 작용을 발휘하여 여드름 질환을 치료하고 예방할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 유산균주의 16S rDNA 염기서열
도 2는 본 발명에 따른 유산균주의 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)에 대한 생육 억제 효과를 측정한 결과를 나타낸다.
도 2는 본 발명에 따른 유산균주의 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)에 대한 생육 억제 효과를 측정한 결과를 나타낸다.
이하, 실시예에 따라서 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 본 발명이 이하의 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 비피도박테리움 아돌레센티스 SPM0308 분리 및 동정
<실시예 1-1> 인분으로부터 유산균의 분리
정상적인 섭식 습관을 갖는 20-30세의 건강한 성인 15명으로부터 분변을 수집하였다. 이후, BBL의 혐기성 샘플 컬렉션 & 트랜스포트 시스템(BBL's anerobic sample collection & transport system)을 이용하여 편성 혐기성(obligate anaerobic) 유산균을 분리하였다.
수집된 인분의 적당량을 생리식염수 100 ㎖에 현탁한 후, 적당량을 취하여 5% 양 혈청이 함유된 BL 아가 배지(Blood-Liver, Nissue)에 도말하였다. 박트론 혐기 챔버(Bactron Anaerobic chamber; Sheldon Manufacturing Inc.)를 이용하여 37℃에서 48시간 동안 배양하였다. 생존한 균주 중에서 0.5-2.0 mm 의 적갈색 중심 부분을 갖는 밝은 갈색, 유백색 또는 황갈색 형태의 비피도박테리움 속 미생물을 선별하였다. 선별된 유산균은 총 3 종이며, 이들을 각각 SPM0308, SPM1005, SPM1207로 명명하였다.
<실시예 1-2> 항균 활성을 나타내는 균주의 선발
상기 실시예 1-1 에서 분리된 유산균들 중에서 여드름 원인균의 성장 저해 및 항균 활성을 가진 유산균을 선별하였다.
여드름 원인균으로서 한국생명공학연구원의 유전자은행 (Korean Collection for Type Cultures, KCTC)으로부터 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes) KCTC 3320을 입수하였다. P. acnes KCTC 3320은 37℃에서 48시간 동안 Reinforced clostridial (RC) 배지 (Difco, USA)에서 무산소로 배양되었다(Bactron Anaerobic Chamber, Sheldon Manufacturing Inc., USA)
배양된 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)KCTC 3320을 서스펜션 형식으로 준비하고, 여기에 상기 분리된 유산균 SPM 0308, SPM1005, SPM1207을 1:1 비율로 혼합하고 8ml RC 배지에 첨가한 후 10초간 보텍스 믹스하였다. 그 후 무산소 환경(90% N2, 5% H2, 5% CO2) 하 120분간 37℃에서 배양시켰다. 대조군으로 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes) 서스펜션이 같은 양의 PBS와 혼합되었다. 배양 후, 각 서스펜션에 있는 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes) CFU가 평판계수법(plate count technique)으로 측정되었다. 그리고, P. acnes 생존률은 아래와 같은 식을 사용하여 측정하였다.
프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes) 생존률 =
(CFU of P. acnes incubated with Bifidobacter)/CFU of P. acnes incubated with PBS) × 100
결과는 평균±표준편차로 표현되었다. 자료의 통계적 평가를 위해, SPSS 15.0를 사용하여 one-way ANOVA가 적용되었다. 그 후 터키 검정법을 이용해 사후 검정 비교하였으며, 그 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2에서 보는 바와 같이 SPM0308 에 의한 항균 효과와 대조군 및 다른 유산균 SPM1005, SPM1207 에 의한 항균 효과의 차이에 대한 통계처리 결과 p<0.05으로 SPM0308 에 의한 항균 효과와 대조군 및 다른 유산균에 의한 항균 효과의 차이가 매우 크다는 것을 알 수 있다.
<실시예 1-3> SPM0308 의 균학적 성질의 동정
상기 분리된 SPM 0308의 유산균주를 당자화능을 시험해 본 결과 하기 표 1과 같은 당자화능 결과를 얻을 수 있었다.
| Sugar | B. adolescentis SPM0308 |
| L-Arabinose | - |
| D-Ribose | - |
| Xylose | - |
| Galactose | + |
| Fructose | + |
| Mannose | - |
| Mannitol | - |
| Sorbitol | - |
| Salicine | - |
| Cellobiose | - |
| Maltose | - |
| Lactose | - |
| Melibiose | + |
| Saccharose | - |
| Trehalose | - |
| Inuline | - |
| Melezitose | - |
| Raffinose | - |
| Starch | - |
| Gluconate | - |
또한, 상기 SPM0308 의 16S rDNA 염기서열을 분석하고, 분석 결과를 도 1에 나타내었다. 이와 같이 분석된 염기서열 목록의 결과를 가지고, 발생학적 계보를 파악하기 위해 이미 알려져 있는 균주들과의 16S rDNA 염기 서열을 비교해본 결과 하기 표 2와 같은 결과를 얻을 수 있었다.
| 비교균주의 스트레인 | 기탁번호 | 유사도 | 차이개수/비교개수 |
| Bifidobacterium adolescentis | ATCC 15703 | 99% | 5/1457 |
상기 표 1에 따른 당자화능 결과와 상기 표 2에 따른 16S rDNA 염기서열의 유사성을 종합적으로 동정해 본 결과 본 발명에 따른 유산균주는 비피도박테리움 아돌레센티스 SPM0308 로 명명하고 2010년 4월 7일자로 대한민국 특허균주 기탁기관인 한국과학기술연구소 생명공학연구소 내 유전자원센타에 기탁하여 기탁번호 KCTC 11669BP를 부여받았다.
Claims (4)
- 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)의 생육을 특이적으로 억제할 수 있는 유산균주인 비피도박테리움 아돌레센티스 SPM 0308(KCTC 11669BP)
- 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)의 생육을 특이적로 억제할 수 있는 유산균주인 비피도박테리움 아돌레센티스 SPM 0308(KCTC 11669BP) 또는 이의 배양물을 유효 성분으로 하는 여드름 개선용 항균 조성물.
- 제 2항에 있어서,
상기 비피도박테리움 아돌레센티스 SPM0308(KCTC 11669BP)는 생균, 건조균 또는 사균인 것을 특징으로 하는 여드름 개선용 항균 조성물.
- 제 2항의 여드름 개선용 항균 조성물을 유효 성분으로 하는 의약품.
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