KR20110125670A - Ｒａｆ 키나제의 억제를 위한 피롤로［２,３-ｂ］피리딘 유도체 - Google Patents

Abstract

프로판-1-술폰산 {2,4-디플루오로-3-[5-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐]-페닐}-아미드, 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드, 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2-플루오로-페닐]-아미드, N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-2,5-디플루오로-벤젠술폰아미드, N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-3-플루오로-벤젠술폰아미드, 피롤리딘-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드, N,N-디메틸아미노-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드, 및 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체, 그의 형태 및 그의 용도를 설명한다. 특정 측면 및 실시양태에서, 설명된 화합물 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체, 및 그의 형태는 적어도 하나의 Raf 단백질 키나제에 대해 활성이다. Raf 단백질 키나제의 활성과 연관된 질환 및 상태를 포함하는 질환 및 상태, 예를 들어 흑색종, 신경교종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 및 담관암을 치료하기 위한 그의 사용 방법을 또한 설명한다.

Description

ＲＡＦ 키나제의 억제를 위한 피롤로［２,３-Ｂ］피리딘 유도체 {PYRROLO[2,3-B]PYRIDINE DERIVATIVES FOR THE INHIBITION OF RAF KINASES}

신규한 화합물 및 그의 용도를 개시한다. 특정 실시양태에서, 개시된 화합물은 키나제 억제제이다.

<발명의 개요>

본원에 개시된 특정 측면 및 실시양태에서, 화합물 및 다양한 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체, 그의 형태 및 그의 용도를 제공한다. 하나 이상의 Raf 키나제의 임의의 돌연변이를 포함하는 하나 이상의 Raf 키나제의 활성의 조절과 연관된 질환 및 상태를 치료하는데 있어서 화합물의 사용 방법이 본 발명에 따라 또한 고려된다. 따라서, 특정 실시양태에서, Raf 단백질 키나제의 조정을 수반하는 치료 방법에서 화합물 및 그의 염 형태에 대한 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 다양한 적응증, 바람직하게는 암, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 흑색종, 신경교종, 결장직장암, 갑상선암, 난소암, 폐암, 전립선암 및 담관암의 치료를 포함하는 Raf 단백질 키나제의 조정을 수반한 치료 방법을 위해 사용된다.

제1 측면에서, 프로판-1-술폰산 {2,4-디플루오로-3-[5-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐]-페닐}-아미드 (P-0001), 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 (P-0002), 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2-플루오로-페닐]-아미드 (P-0003), N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-2,5-디플루오로-벤젠술폰아미드 (P-0004), N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-3-플루오로-벤젠술폰아미드 (P-0005), 피롤리딘-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 (P-0006), N,N-디메틸아미노-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 (P-0007), 그의 임의의 염, 그의 임의의 제형, 그의 임의의 접합체, 그의 임의의 유도체, 및 그의 임의의 형태로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물을 제공한다. 특정 실시양태에서, P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, P-0007 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태는 A-Raf, B-Raf 및 c-Raf-1 (이들 키나제의 임의의 돌연변이 포함)을 포함하는 하나 이상의 Raf 단백질 키나제의 억제제이다.

제2 측면에서, 화합물 프로판-1-술폰산 {2,4-디플루오로-3-[5-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐]-페닐}-아미드 (P-0001), 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태를 제공한다. 특정 실시양태에서, P-0001 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태는 A-Raf, B-Raf 및 c-Raf-1 (이들 키나제의 임의의 돌연변이 포함)을 포함하는 하나 이상의 Raf 단백질 키나제의 억제제이다.

제3 측면에서, 화합물 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 (P-0002), 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태를 제공한다. 특정 실시양태에서, P-0002, 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태는 A-Raf, B-Raf 및 c-Raf-1 (이들 키나제의 임의의 돌연변이 포함)을 포함하는 하나 이상의 Raf 단백질 키나제의 억제제이다.

제4 측면에서, 화합물 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2-플루오로-페닐]-아미드 (P-0003), 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태를 제공한다. 특정 실시양태에서, P-0003, 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태는 A-Raf, B-Raf 및 c-Raf-1 (이들 키나제의 임의의 돌연변이 포함)을 포함하는 하나 이상의 Raf 단백질 키나제의 억제제이다.

제5 측면에서, 화합물 N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-2,5-디플루오로-벤젠술폰아미드 (P-0004), 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태를 제공한다. 특정 실시양태에서, P-0004, 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태는 A-Raf, B-Raf 및 c-Raf-1 (이들 키나제의 임의의 돌연변이 포함)을 포함하는 하나 이상의 Raf 단백질 키나제의 억제제이다.

제6 측면에서, 화합물 N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-3-플루오로-벤젠술폰아미드 (P-0005), 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태를 제공한다. 특정 실시양태에서, P-0005 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태는 A-Raf, B-Raf 및 c-Raf-1 (이들 키나제의 임의의 돌연변이 포함)을 포함하는 하나 이상의 Raf 단백질 키나제의 억제제이다.

제7 측면에서, 화합물 피롤리딘-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]아미드 (P-0006), 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태를 제공한다. 특정 실시양태에서, P-0006, 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태는 A-Raf, B-Raf 및 c-Raf-1 (이들 키나제의 임의의 돌연변이 포함)을 포함하는 하나 이상의 Raf 단백질 키나제의 억제제이다.

제8 측면에서, 화합물 N,N-디메틸아미노-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 (P-0007), 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태를 제공한다. 특정 실시양태에서, P-0007, 또는 그의 염, 그의 제형, 그의 접합체, 그의 유도체 또는 그의 형태는 A-Raf, B-Raf 및 c-Raf-1 (이들 키나제의 임의의 돌연변이 포함)을 포함하는 하나 이상의 Raf 단백질 키나제의 억제제이다.

화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 및 P-0007에 관하여, 명백하게 반대로 지시하지 않으면, 화합물의 명세서는 상기 화합물의 염 (제약상 허용되는 염 포함), 상기 화합물의 제형 (제약상 허용되는 제형 포함), 그의 접합체, 그의 유도체, 그의 형태, 및 그의 전구약물을 포함한다.

제9 측면에서, 본 발명은 대상체에게 유효량의 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 투여하는 것을 포함하는, 동물 대상체에서 Raf 단백질 키나제 매개 질환 또는 상태를 치료하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 이 방법은 대상체에게 유효량의 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 질환 또는 상태에 대한 하나 이상의 다른 치료법과 조합하여 투여하는 것을 포함한다.

제10 측면에서, 치료 유효량의 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 및 적어도 하나의 제약상 허용되는 담체, 부형제, 및/또는 희석제를 포함하는 조성물을 제공한다. 특정 실시양태에서, 조성물은 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 동일한 질환 적응증에 대해 치료상 효과적인 하나 이상의 화합물과 함께 포함할 수 있다. 관련 실시양태에서, 조성물은 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 동일한 질환 적응증에 대해 치료상 효과적인 하나 이상의 화합물과 함께 포함하고, 여기서 화합물은 질환 적응증에 대해 상승 효과를 갖는다. 한 실시양태에서, 조성물은 암 치료에 효과적인 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 및 동일한 암 치료에 효과적인 하나 이상의 다른 화합물을 포함하고, 여기서 화합물은 암 치료에 대해 상승 효과를 갖는다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 신경교종, 다형성 교모세포종, 모양세포성 성상세포종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 간암, 담낭 암, 위장관 기질 종양, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 신경교종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 결장직장암, 갑상선암, 난소암 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

제11 측면에서, 본 발명은 대상체에게 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 포함하는 유효량의 조성물을 투여하여 A-Raf, B-Raf, c-Raf-1, B-Raf V600E 돌연변이체, 또는 B-Raf V600E/T529I 돌연변이체에 의해 매개되는 질환 또는 상태를 치료하는 방법을 제공한다. 다양한 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 포함하는 유효량의 조성물을 질환 치료에 적합한 하나 이상의 다른 치료법과 조합하여 투여하여 A-Raf, B-Raf, c-Raf-1, B-Raf V600E 돌연변이체, 또는 B-Raf V600E/T529I 돌연변이체에 의해 매개되는 질환 또는 상태를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 포함하는 유효량의 조성물을 하나 이상의 적합한 항암 치료제, 예를 들어 하나 이상의 화학요법 약물과 조합하여 투여하여 B-Raf V600E 돌연변이체에 의해 매개되는 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 신경교종, 다형성 교모세포종, 모양세포성 성상세포종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 간암, 담낭 암, 위장관 기질 종양, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 신경교종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 결장직장암, 갑상선암, 난소암 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

제12 측면에서, 본 발명은 대상체에게 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 포함하는 유효량의 조성물을 암 치료에 효과적인 하나 이상의 다른 치료법 또는 의학적 절차와 조합하여 투여하여 암을 치료하는 방법을 제공한다. 다른 치료법 또는 의학적 절차는 적합한 항암 치료법 (예를 들어 약물 치료법, 백신 치료법, 유전자 치료법, 광역학적 치료법) 또는 의학적 절차 (예를 들어 수술, 방사선조사 치료법, 온열 처치법 (hyperthermia heating), 골수 또는 줄기 세포 이식)를 포함한다. 상기 측면의 특정 실시양태에서, 하나 이상의 적합한 항암 치료법 또는 의학적 절차는 화학요법제 (예를 들어 화학요법 약물)를 사용한 치료, 방사선조사 치료법 (예를 들어 x선, γ선, 또는 전자, 양성자, 중성자 또는 α 입자 빔), 온열 처치법 (예를 들어 극초단파, 초음파, 고주파 열치료), 백신 치료법 (예를 들어 AFP 유전자 간세포 암종 백신, AFP 아데노바이러스 벡터 백신, AG-858, 동종이계 GMCSF-분비 유방암 백신, 수상돌기 세포 펩티드 백신), 유전자 치료법 (예를 들어 Ad5CMV-p53 벡터, MDA7을 코딩하는 아데노벡터, 아데노바이러스 5-종양 괴사 인자 알파), 광역학적 치료법 (예를 들어 아미노레불린산, 모텍사핀 루테튬), 수술, 및 골수 및 줄기 세포 이식으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 신경교종, 다형성 교모세포종, 모양세포성 성상세포종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 간암, 담낭 암, 위장관 기질 종양, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 신경교종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 결장직장암, 갑상선암, 난소암 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

제13 측면에서, 본 발명은 대상체에게 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 포함하는 유효량의 조성물을 하나 이상의 적합한 화학요법제와 조합하여 투여하여 암을 치료하는 방법을 제공한다. 관련 실시양태에서, 하나 이상의 적합한 화학요법제는 알킬화제, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 아도젤레신, 알트레타민, 벤다무스틴, 비젤레신, 부술판, 카르보플라틴, 카르보쿠온, 카르모푸르, 카르무스틴, 클로람부실, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 다카르바진, 에스트라무스틴, 에토글루시드, 포테무스틴, 헤프술팜, 이포스파미드, 임프로술판, 이로풀벤, 로무스틴, 만노술판, 메클로레타민, 멜팔란, 미토브로니톨, 네다플라틴, 니무스틴, 옥살리플라틴, 피포술판, 프레드니무스틴, 프로카르바진, 라니무스틴, 사트라플라틴, 세무스틴, 스트렙토조신, 테모졸로미드, 티오테파, 트레오술판, 트리아지쿠온, 트리에틸렌멜라민, 트리플라틴 테트라니트레이트, 트로포스파미드 및 우라무스틴; 항생제, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 아클라루비신, 암루비신, 블레오마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 엘사미트루신, 에피루비신, 이다루비신, 메노가릴, 미토마이신, 네오카르지노스타틴, 펜토스타틴, 피라루비신, 플리카마이신, 발루비신, 및 조루비신; 항-대사물질, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 아미노프테린, 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 클라드리빈, 클로파라빈, 시타라빈, 데시타빈, 플록스유리딘, 플루다라빈, 5-플루오로우라실, 2'-F-아라-데옥시유리딘, 겜시타빈, 히드록시우레아, 머캅토푸린, 메토트렉세이트, 넬라라빈, 페메트렉세드, 프랄라트렉세이트, 아자티오프린, 랄티트렉세드, 테가푸르-우라실, 티오구아닌, 트리메토프림, 트리메트렉세이트 및 비다라빈; 면역요법제, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 알렘투주맙, 베바시주맙, 세툭시맙, 데닐류킨 디프티톡스, 갈릭시맙, 겜투주맙, 오파투무맙, 파니투무맙, 페르투주맙, 리툭시맙, 토시투모맙, 트라스투주맙 및 90 Y 이브리투모맙 티욱세탄, 이필리무맙 및 트레멜리무맙; 호르몬 또는 호르몬 길항제, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 아나스트로졸, 안드로겐, 비칼루타미드, 부세렐린, 데가렐릭스, 디에틸스틸베스트롤, 엑세메스탄, 플루타미드, 풀베스트란트, 고세렐린, 이독시펜, 레트로졸, 류프롤리드, 메게스트롤, 닐루타미드, 랄록시펜, 타목시펜, 4-히드록시타목시펜, 토레미펜 및 트립토렐린; 탁산, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) DJ-927, 도세탁셀, TPI 287, 라로탁셀, 오르타탁셀, 파클리탁셀 및 DHA-파클리탁셀 및 테세탁셀; 레티노이드, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 알리트레티노인, 벡사로텐, 펜레티니드, 이소트레티노인 및 트레티노인; 알칼로이드, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 데메콜친, 호모하링토닌, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 빈플루닌 및 비노렐빈; 항-혈관신생제, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) AE-941 (GW786034, 네오바스타트 (Neovastat)), ABT-510, 2-메톡시에스트라디올, 레날리도미드 및 탈리도미드; 토포이소머라제 억제제, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 암사크린, 벨로테칸, 에도테카린, 에토포시드, 에토포시드 포스페이트, 엑사테칸, 이리노테칸 (또한, 활성 대사물질 SN-38 (7-에틸-10-히드록시-캄토테신)), 루칸톤, 미톡산트론, 픽산트론, 루비테칸, 테니포시드, 토포테칸 및 9-아미노캄토테신; 키나제 억제제, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 악시티닙 (AG 013736), 다사티닙 (BMS 354825), 에를로티닙, 게피티닙, 플라보피리돌, 이마티닙 메실레이트, 라파티닙, 모테사닙 디포스페이트 (AMG 706), 닐로티닙 (AMN107), 파조파닙, 셀리시클립, 소라페닙, 수니티닙 말레이트, AEE-788, BMS-599626, UCN-01 (7-히드록시스타우로스포린) 및 바탈라닙; 표적화된 신호 전달 억제제, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 보르테조밉 및 겔다나마이신; 생물학적 반응 변형제, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 이미퀴모드, 인터페론-α 및 인터루킨-2; 및 다른 화학요법제, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 3-AP (3-아미노-2-카르복시알데히드 티오세미카르바존), 알트라센탄, 아미노글루테티미드, 아나글렐리드, 아스파라기나제, 브리오스타틴-1, 실렌기티드, 엘레스클로몰, 에리불린 메실레이트 (E7389), 익사베필론, 로니다민, 마소프로콜, 미토구아나존, 오블리메르센, 술린닥, 테스톨락톤, 티아조푸린, mTOR 억제제 (예를 들어, 템시롤리무스, 에버롤리무스, 데포롤리무스, 라파마이신), PI3K 억제제 (예를 들어 BEZ235, GDC-0941. XL147, XL765, CAL-101, PX-866, BGT226, GSK1059615), Cdk4 억제제 (예를 들어 PD-332991, AG-024322). Akt 억제제 (예를 들어, GSK2110183, SR13668), MEK 억제제 (예를 들어 PD0325901, AZD8330, GSK1120212, RO4987655, RDEA119, XL518), COX-2 억제제 (예를 들어 셀레콕시브, 로페콕시브, 발데콕시브, 루미라콕시브, 에토리콕시브), Hsp90 억제제 (예를 들어 타네스피마이신) 및 파르네실트랜스퍼라제 억제제 (예를 들어 티피파르닙)로부터 선택된다. 바람직하게는, 상기 암 치료 방법은 대상체에게 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 포함하는 유효량의 조성물을 카페시타빈, 5-플루오로우라실, 카르보플라틴, 다카르바진, 게피티닙, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, SN-38, 테모졸로미드, 빈블라스틴, 베바시주맙, 세툭시맙, 인터페론-α, 인터루킨-2, 에를로티닙, PD0325901, 라파마이신, BEZ235, 및 GDC-0941로 이루어지는 군으로부터 선택된 화학요법제와 조합하여 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 신경교종, 다형성 교모세포종, 모양세포성 성상세포종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 간암, 담낭 암, 위장관 기질 종양, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 신경교종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 결장직장암, 갑상선암, 난소암 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

제14 측면에서, 본 발명은 본원에 기재한 바와 같은 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007, 또는 그의 조성물을 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 화합물 또는 조성물은 예를 들어 바이알, 병, 플라스크 내에 패키지되고, 이는 예를 들어 상자, 봉투 또는 백 (bag) 내에 추가로 패키지될 수 있고, 상기 화합물 또는 조성물은 포유동물, 예를 들어 인간에게 투여하는 것에 대해 미국 식품의약국 또는 유사한 규제 기관의 승인을 받았고, 상기 화합물 또는 조성물은 단백질 키나제-매개 질환 또는 상태에 대해 포유동물, 예를 들어 인간 투여용으로 승인을 받았고, 본 발명의 키트는 용도, 및/또는 해당 화합물 또는 조성물이 단백질 키나제-매개 질환 또는 상태에 대해 포유동물, 예를 들어 인간 투여용으로 적합하거나 승인을 받은 다른 적응증에 대한 서면 지침서를 포함하며, 상기 화합물 또는 조성물은 단위 투여 또는 단일 투여 형태, 예를 들어 단일 투여 환제, 캡슐 등으로 패키지된다.

임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 사용하여 질환 또는 상태를 치료하는 것을 포함하는 측면 및 실시양태에서, 본 발명은 동물 대상체 (예를 들어 포유동물, 예컨대 인간, 다른 영장류, 스포츠용 동물, 상업적인 목적의 동물, 예를 들어 소, 농장 동물, 예를 들어 말, 또는 애완동물, 예를 들어 개 및 고양이)에서 A-Raf-매개, B-Raf-매개 및/또는 c-Raf-1-매개 질환 또는 상태, 예를 들어 비정상적인 A-Raf, B-Raf 및/또는 c-Raf-1 활성 (예를 들어 키나제 활성)을 특징으로 하는 질환 또는 상태를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은 A-Raf-매개, B-Raf-매개 및/또는 c-Raf-1-매개 질환 또는 상태로 고통받거나 그 위험이 있는 대상체에게 유효량의 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, A-Raf-매개, B-Raf-매개 및/또는 c-Raf-1-매개 질환은 신경계 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 다발경색 치매, 두부 손상, 척수 손상, 알츠하이머 (Alzheimer) 병 (AD), 파킨슨 (Parkinson) 병, 발작 및 간질; 신생물 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 흑색종, 신경교종, 다형성 교모세포종, 모양세포성 성상세포종, 육종, 암종 (예를 들어 위장관, 간, 담도, (예를 들어 담관, 담관암종), 결장직장, 폐, 담낭, 유방, 췌장, 갑상선, 신장, 난소, 부신피질, 전립선), 림프종 (예를 들어 조직구 림프종), 신경섬유종증, 위장관 기질 종양, 급성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군, 백혈병, 종양 혈관신생, 신경 내분비계 종양, 예를 들어 갑상선 수질암, 유암종, 소세포 폐암, 카포시 (Kaposi) 육종 및 크롬친화성세포종; 신경병성 또는 염증성 기원의 통증, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 급성 통증, 만성 통증, 암-관련 통증 및 편두통; 심혈관 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 심부전, 허혈성 졸중, 심장 비대증, 혈전증 (예를 들어 혈전성 미세혈관병증 증후군), 아테롬성 동맥경화증 및 재관류 손상; 염증 및/또는 증식, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 건선, 습진, 관절염 및 자가면역 질환 및 상태, 골관절염, 자궁내막증, 반흔형성, 혈관 재발협착증, 섬유증 질환, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환 (IBD); 면역결핍 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 장기 이식 거부, 이식편 대 숙주 질환 및 HIV와 연관된 카포시 육종; 낭성 신장 또는 전립선 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 당뇨성 신증, 다낭성 신장 질환, 신경화증, 사구체신염, 전립선 비대증, 다낭성 간 질환, 결절성 경화증, 폰히펠-린다우 (Von Hippel Lindau) 병, 수질 낭성 신장 질환, 신결석증, 및 낭성 섬유증; 대사 장애, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 비만; 감염, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 헬리코박터 파일로리 (Helicobacter pylori) 감염, 간염 바이러스 감염 및 인플루엔자 바이러스 감염, 열병, HIV 및 패혈증; 폐 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 및 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS); 유전적 발병 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 누난 (Noonan) 증후군, 코스텔로 (Costello) 증후군 (안면피부골격 증후군), 레오파드 (LEOPARD) 증후군, 심장안면피부 증후군 (CFC), 및 심혈관, 골격, 장, 피부, 모발 및 내분비계 질환을 일으키는 신경 능선 증후군 비정상; 및 근육 재생 또는 퇴행과 관련이 있는 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 근감소, 근이영양증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 뒤시엔느 (Duchenne), 베커 (Becker), 에머리-드레이푸스 (Emery-Dreifuss), 지대, 안면견갑상완, 근긴장성, 안인두, 원위 및 선천성 근이영양증), 운동 뉴런 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 근위축성 측삭 경화증, 영아 진행성 척수 근위축증, 중간 (중간체) 척수근위축증, 연소성 척수 근위축증, 척수 연수 (spinal bulbar) 근위축증 및 성인성 척수 근위축증), 염증성 근증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 피부근염, 다발성근염 및 봉입체 근염), 신경근 접합부 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 중증 근무력증, 람버트-이튼 (Lambert-Eaton) 증후군 및 선천성 근무력 증후군), 내분비계 비정상으로 인한 근병증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 갑상선 기능 항진성 근병증 및 갑상선 기능 저하성 근병증), 말초 신경 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 샤르코-마리-투스 (Charcot-Marie-Tooth) 질환, 데제린-소타스 (Dejerine-Sottas) 질환 및 프라이드리히 (Friedreich) 운동실조증), 다른 근병증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 선천성 근긴장증, 선천성 이상근긴장증, 중심핵병 (central core disease), 소간상체 근병증, 근세관성 근병증 및 주기성 마비) 및 근육의 대사 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 포스포릴라제 결핍, 산 말타제 결핍, 포스포프럭토키나제 결핍, 탈분지 효소 결핍, 미토콘드리아 근병증, 카르니틴 결핍, 카르니틴 팔마틸 트랜스퍼라제 결핍, 포스포글리세레이트 키나제 결핍, 포스포글리세레이트 뮤타제 결핍, 락테이트 데히드로게나제 결핍 및 미오아데닐레이트 데아미나제 결핍)으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 질환 또는 상태는 흑색종, 신경교종, 다형성 교모세포종, 모양세포성 성상세포종, 육종, 간암, 담관암, 결장직장암, 폐암, 담낭 암, 유방암, 췌장암, 갑상선암, 신장암, 난소암, 부신피질 암, 전립선암, 조직구 림프종, 신경섬유종증, 위장관 기질 종양, 급성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군, 백혈병, 종양 혈관신생, 갑상선 수질암, 유암종, 소세포 폐암, 카포시 육종, 및 크롬친화세포종으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 질환 또는 상태는 흑색종, 신경교종, 다형성 교모세포종, 모양세포성 성상세포종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 간암, 담낭 암, 위장관 기질 종양, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 질환 또는 상태는 흑색종, 신경교종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 질환 또는 상태는 흑색종, 결장직장암, 갑상선암, 난소암 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

제15 측면에서, 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007은 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 A-Raf-매개, B-Raf-매개 또는 c-Raf-1-매개 질환 또는 상태의 치료를 위한 의약의 제조에 사용될 수 있다: 신경계 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 다발경색 치매, 두부 손상, 척수 손상, 알츠하이머병 (AD), 파킨슨병, 발작 및 간질; 신생물 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 흑색종, 신경교종, 다형성 교모세포종, 모양세포성 성상세포종, 육종, 암종 (예를 들어 위장관, 간, 담도, (예를 들어 담관, 담관암종), 결장직장, 폐, 담낭, 유방, 췌장, 갑상선, 신장, 난소, 부신피질, 전립선), 림프종 (예를 들어 조직구 림프종), 신경섬유종증, 위장관 기질 종양, 급성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군, 백혈병, 종양 혈관신생, 신경 내분비계 종양, 예를 들어 갑상선 수질암, 유암종, 소세포 폐암, 카포시 육종 및 크롬친화성세포종; 신경병성 또는 염증성 기원의 통증, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 급성 통증, 만성 통증, 암-관련 통증 및 편두통; 심혈관 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 심부전, 허혈성 졸중, 심장 비대증, 혈전증 (예를 들어 혈전성 미세혈관병증 증후군), 아테롬성 동맥경화증 및 재관류 손상; 염증 및/또는 증식, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 건선, 습진, 관절염 및 자가면역 질환 및 상태, 골관절염, 자궁내막증, 반흔형성, 혈관 재발협착증, 섬유증 질환, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환 (IBD); 면역결핍 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 장기 이식 거부, 이식편 대 숙주 질환 및 HIV와 연관된 카포시 육종; 낭성 신장 또는 전립선 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 당뇨성 신증, 다낭성 신장 질환, 신경화증, 사구체신염, 전립선 비대증, 다낭성 간 질환, 결절성 경화증, 폰히펠-린다우병, 수질 낭성 신장 질환, 신결석증, 및 낭성 섬유증; 대사 장애, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 비만; 감염, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 헬리코박터 파일로리 감염, 간염 바이러스 감염 및 인플루엔자 바이러스 감염, 열병, HIV 및 패혈증; 폐 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 및 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS); 유전적 발병 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 누난 증후군, 코스텔로 증후군 (안면피부골격 증후군), 레오파드 증후군, 심장안면피부 증후군 (CFC), 및 심혈관, 골격, 장, 피부, 모발 및 내분비계 질환을 일으키는 신경 능선 증후군 비정상; 및 근육 재생 또는 퇴행과 관련이 있는 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 근감소, 근이영양증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 뒤시엔느, 베커, 에머리-드레이푸스, 지대, 안면견갑상완, 근긴장성, 안인두, 원위 및 선천성 근이영양증), 운동 뉴런 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 근위축성 측삭 경화증, 영아 진행성 척수 근위축증, 중간 척수근위축증, 연소성 척수 근위축증, 척수 연수 근위축증 및 성인성 척수 근위축증), 염증성 근증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 피부근염, 다발성근염 및 봉입체 근염), 신경근 접합부 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 중증 근무력증, 람버트-이튼 증후군 및 선천성 근무력 증후군), 내분비계 비정상으로 인한 근병증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 갑상선 기능 항진성 근병증 및 갑상선 기능 저하성 근병증), 말초 신경 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 샤르코-마리-투스 질환, 데제린-소타스 질환 및 프라이드리히 운동실조증), 다른 근병증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 선천성 근긴장증, 선천성 이상근긴장증, 중심핵병, 소간상체 근병증, 근세관성 근병증 및 주기성 마비) 및 근육의 대사 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 포스포릴라제 결핍, 산 말타제 결핍, 포스포프럭토키나제 결핍, 탈분지 효소 결핍, 미토콘드리아 근병증, 카르니틴 결핍, 카르니틴 팔마틸 트랜스퍼라제 결핍, 포스포글리세레이트 키나제 결핍, 포스포글리세레이트 뮤타제 결핍, 락테이트 데히드로게나제 결핍 및 미오아데닐레이트 데아미나제 결핍). 한 실시양태에서, 질환 또는 상태는 흑색종, 신경교종, 다형성 교모세포종, 모양세포성 성상세포종, 육종, 간암, 담관암, 결장직장암, 폐암, 유방암, 부신피질 암, 췌장암, 갑상선암, 신장암, 난소암, 전립선암, 조직구 림프종, 신경섬유종증, 위장관 기질 종양, 급성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군, 백혈병, 종양 혈관신생, 갑상선 수질암, 유암종, 소세포 폐암, 카포시 육종, 및 크롬친화세포종으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 질환 또는 상태는 흑색종, 신경교종, 다형성 교모세포종, 모양세포성 성상세포종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 간암, 담낭 암, 위장관 기질 종양, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 질환 또는 상태는 흑색종, 신경교종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 질환 또는 상태는 흑색종, 결장직장암, 갑상선암, 난소암 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

본원에서 제공되는 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007은 다른 키나제에 비해 선택성과 함께, Raf 키나제 내의 바람직한 활성 프로필을 포함하여 Raf 키나제에 대한 바람직한 억제 활성을 보인다. 화합물은 향상된 약동학적 특성, 보다 큰 용해도, 보다 작은 Cyp 억제 등을 포함하여 하나 이상의 바람직한 특성을 추가로 보인다.

추가의 측면 및 실시양태는 하기 상세한 설명 및 청구의 범위로부터 자명할 것이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 명백히 달리 나타내지 않는 한, 하기 정의가 적용된다:

본원에서 설명되는 임의의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 내의 모든 원자는 명백하게 반대로 지시하지 않으면 그의 임의의 동위원소를 포함하는 것으로 의도된다. 임의의 제시된 원자에 대해, 동위원소는 본질적으로 그의 천연 발생 비율로 존재할 수 있거나, 또는 하나 이상의 특정 원자가 당업자에게 공지된 합성 방법을 사용하여 하나 이상의 동위원소에 대해 증가될 수 있음이 이해된다. 따라서, 예를 들어, 수소는 예를 들어 ¹H, ²H, ³H를 포함하고; 탄소는 예를 들어 ¹¹C, ¹²C, ¹³C, ¹⁴C를 포함하고; 산소는 예를 들어 ¹⁶O, ¹⁷O, ¹⁸O를 포함하고; 질소는 예를 들어 ¹³N, ¹⁴N, ¹⁵N을 포함하고; 황은 예를 들어 ³²S, ³³S, ³⁴S, ³⁵S, ³⁶S, ³⁷S, ³⁸S를 포함하고; 플루오로는 예를 들어 ¹⁷F, ¹⁸F, ¹⁹F를 포함하고; 클로로는 예를 들어 ³⁵Cl, ³⁶Cl, ³⁷C1, ³⁸Cl, ³⁹Cl을 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는", "치료법", "치료법들" 등은 물질, 예를 들어 본원에서 설명되는 임의의 하나 이상의 화합물(들)을 질환 또는 상태의 하나 이상의 증상, 즉 적응증을 예방, 경감 또는 완화하고/하거나 치료되는 대상체의 생존을 연장하기에 효과적인 양으로 투여하는 것을 의미한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "Raf 단백질 키나제 매개 질환 또는 상태"는 임의의 A-Raf 단백질 키나제, B-Raf 단백질 키나제 또는 c-Raf-1 단백질 키나제, 또는 그의 임의의 돌연변이를 포함하는 Raf 단백질 키나제 (Raf 키나제, 또는 Raf로도 언급됨)의 생물학적 기능이 질환 또는 상태의 발병, 과정 및/또는 증상에 영향을 미치고/미치거나, Raf의 조정이 질환 또는 상태의 발병, 과정 및/또는 증상을 변경시키는 질환 또는 상태를 지칭한다. Raf 매개 질환 또는 상태는 그에 대한 Raf 조정이 치료 이익을 제공하는 질환 또는 상태, 예를 들어 본원에 기재된 하나 이상의 화합물(들)을 포함하는 Raf 억제제(들)을 사용한 치료가 질환 또는 상태로 고통받거나 그 위험이 있는 대상체에게 치료 이익을 제공하는 질환 또는 상태를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "A-Raf 단백질 키나제 매개 질환 또는 상태" 등은 그의 임의의 돌연변이를 포함하는 A-Raf 단백질 키나제 (A-Raf 키나제, 또는 A-Raf로도 언급됨)의 생물학적 기능이 질환 또는 상태의 발병, 과정 및/또는 증상에 영향을 미치고/미치거나, A-Raf의 조정이 질환 또는 상태의 발병, 과정 및/또는 증상을 변경시키는 질환 또는 상태를 지칭한다. A-Raf 매개 질환 또는 상태는 그에 대한 A-Raf 억제가 치료 이익을 제공하는 질환 또는 상태, 예를 들어 본원에 기재된 하나 이상의 화합물(들)을 포함하여 A-Raf를 억제하는 화합물을 사용한 치료가 질환 또는 상태로 고통받거나 그 위험이 있는 대상체에게 치료 이익을 제공하는 질환 또는 상태를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "B-Raf 단백질 키나제 매개 질환 또는 상태" 등은 그의 임의의 돌연변이를 포함하는 B-Raf 단백질 키나제 (B-Raf 키나제, 또는 B-Raf로도 언급됨)의 생물학적 기능이 질환 또는 상태의 발병, 과정 및/또는 증상에 영향을 미치고/미치거나, B-Raf의 조정이 질환 또는 상태의 발병, 과정 및/또는 증상을 변경시키는 질환 또는 상태를 지칭한다. B-Raf 매개 질환 또는 상태는 그에 대한 B-Raf 억제가 치료 이익을 제공하는 질환 또는 상태, 예를 들어 본원에 기재된 하나 이상의 화합물(들)을 포함하여 B-Raf를 억제하는 화합물을 사용한 치료가 질환 또는 상태로 고통받거나 그 위험이 있는 대상체에게 치료 이익을 제공하는 질환 또는 상태를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "B-Raf V600E 돌연변이체 단백질 키나제 매개 질환 또는 상태" 등은 B-Raf V600E 돌연변이체 단백질 키나제 (B-Raf V600E 키나제, 또는 B-Raf V600E로도 언급됨)의 생물학적 기능이 질환 또는 상태의 발병, 과정 및/또는 증상에 영향을 미치고/미치거나, B-Raf V600E의 조정이 질환 또는 상태의 발병, 과정 및/또는 증상을 변경시키는 질환 또는 상태를 지칭한다. B-Raf V600E 매개 질환 또는 상태는 그에 대한 B-Raf V600E 억제가 치료 이익을 제공하는 질환 또는 상태, 예를 들어 본원에 기재된 하나 이상의 화합물(들)을 포함하여 B-Raf V600E를 억제하는 화합물을 사용한 치료가 질환 또는 상태로 고통받거나 그 위험이 있는 대상체에게 치료 이익을 제공하는 질환 또는 상태를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "B-Raf V600E/T529I 돌연변이체 단백질 키나제 매개 질환 또는 상태" 등은 B-Raf V600E/T529I 돌연변이체 단백질 키나제 (B-Raf V600E/T529I 키나제, 또는 B-Raf V600E/T529I로도 언급됨)의 생물학적 기능이 질환 또는 상태의 발병, 과정 및/또는 증상에 영향을 미치고/미치거나, B-Raf V600E/T529I의 조정이 질환 또는 상태의 발병, 과정 및/또는 증상을 변경시키는 질환 또는 상태를 지칭한다. B-Raf V600E/T529I 매개 질환 또는 상태는 그에 대한 B-Raf V600E/T529I 억제가 치료 이익을 제공하는 질환 또는 상태, 예를 들어 본원에 기재된 하나 이상의 화합물(들)을 포함하여 B-Raf V600E/T529I를 억제하는 화합물을 사용한 치료가 질환 또는 상태로 고통받거나 그 위험이 있는 대상체에게 치료 이익을 제공하는 질환 또는 상태를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "c-Raf-1 단백질 키나제 매개 질환 또는 상태" 등은 그의 임의의 돌연변이를 포함하는 c-Raf-1 단백질 키나제 (c-Raf-1 키나제, 또는 c-Raf-1로도 언급됨)의 생물학적 기능이 질환 또는 상태의 발병, 과정 및/또는 증상에 영향을 미치고/미치거나, c-Raf-1의 조정이 질환 또는 상태의 발병, 과정 및/또는 증상을 변경시키는 질환 또는 상태를 지칭한다. c-Raf-1 매개 질환 또는 상태는 그에 대한 c-Raf-1 억제가 치료 이익을 제공하는 질환 또는 상태, 예를 들어 본원에 기재된 하나 이상의 화합물(들)을 포함하여 c-Raf-1을 억제하는 화합물을 사용한 치료가 질환 또는 상태로 고통받거나 그 위험이 있는 대상체에게 치료 이익을 제공하는 질환 또는 상태를 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "Raf 억제제"는 적어도 하나의 A-Raf, B-Raf, c-Raf-1, 또는 그의 임의의 돌연변이를 억제하는 화합물, 즉 일반적으로 인정되는 Raf 키나제 활성 분석에서 결정될 때 IC₅₀이 500 nM 미만, 100 nM 미만, 50 nM 미만, 20 nM 미만, 10 nM 미만, 5 nM 미만 또는 1 nM 미만인 화합물을 의미한다. 상기 화합물은 반드시는 아니지만, 바람직하게는 다른 단백질 키나제에 비해 선택성을 갖는다. 즉, 또 다른 단백질 키나제에 비교할 때, 다른 키나제에 대한 IC₅₀을 Raf 키나제에 대한 IC₅₀으로 나눈 값은 >10, 또는 >20, 또는 >30, 또는 >40, 또는 >50, 또는 >60, 또는 >70, 또는 >80, 또는 >90, 또는 >100이다. 바람직하게는, 화합물은 다른 단백질 키나제, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) CSK, 인슐린 수용체 키나제, AMPK, PDGFR 또는 VEGFR에 비해 선택성이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "고체형"은 치료 목적을 위해 의도되는 동물 대상체에 대한 투여에 적합한 제약 활성 화합물의 고체 제제 (즉, 기체 또는 액체가 아닌 제제)를 의미한다. 고체형은 화합물의 임의의 복합체, 예를 들어 염, 공결정 또는 무정형 복합체, 및 임의의 다형체를 포함한다. 고체형은 실질적으로 결정, 반-결정질 또는 실질적으로 무정형일 수 있다. 고체형은 직접 투여되거나 또는 개선된 제약 특성을 갖는 적합한 조성물의 제조에 사용될 수 있다. 예를 들어, 고체형은 적어도 하나의 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 제형에 사용될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "실질적으로 결정질" 물질은 약 90% 초과의 결정화도를 갖는 물질을 포함하고; "결정질" 물질은 약 98% 초과의 결정화도를 갖는 물질을 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "실질적으로 무정형" 물질은 약 10% 이하의 결정화도를 갖는 물질을 포함하고; "무정형" 물질은 약 2% 이하의 결정화도를 갖는 물질을 포함한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "반-결정질" 물질은 결정화도가 10% 초과, 90% 이하인 물질을 포함하고; 바람직하게는 "반-결정질" 물질은 결정화도가 20% 초과, 80% 이하인 물질을 포함한다. 본 발명의 한 측면에서, 예를 들어 "반-결정질" 고체형을 제공하기 위해 화합물의 고체형의 혼합물, 예를 들어 무정형과 결정질 고체형의 혼합물이 제조될 수 있다. 상기 "반-결정질" 고체형은 당업계에 공지된 방법에 의해, 예를 들어 무정형 고체형을 결정질 고체형과 요구되는 비율로 혼합함으로써 제조될 수 있다. 일부 경우에, 산 또는 염기와 혼합된 화합물은 무정형 복합체를 형성하고; 반-결정질 고체는 화합물 성분의 양을 무정형 복합체 내의 화합물 및 산 또는 염기의 화학양론의 과량으로 사용하여, 그의 화학양론을 기초로 한 무정형 복합체의 양이 생성되고, 과량의 화합물이 결정 형태로 존재하도록 제조될 수 있다. 복합체의 제조에 사용되는 과량의 화합물의 양은 고체형의 생성되는 혼합물 내의 무정형 복합체 대 결정질 화합물의 요구되는 비율을 제공하도록 조정될 수 있다. 예를 들어, 산 또는 염기 및 화합물의 무정형 복합체가 1:1의 화학양론을 갖는 경우에, 화합물 대 산 또는 염기의 몰비가 2:1인 상기 복합체의 제조는 50% 무정형 복합체 및 50% 결정질 화합물의 고체형을 생성할 것이다. 상기 고체형의 혼합물은 예를 들어 개선된 생물제약 특성을 갖는 무정형 성분을 결정질 성분과 함께 제공함으로써 약품으로서 유용할 수 있다. 무정형 성분은 보다 쉽게 생체이용가능하고, 결정질 성분은 지연된 생체이용률을 가질 것이다. 상기 혼합물은 활성 화합물에 대한 신속한 노출 및 연장된 노출을 모두 제공할 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "복합체"는 제약 활성 화합물 및 고체형에 새로운 화학물질종을 형성하거나 생성하는 추가의 분자종의 조합물을 의미한다. 일부 경우에, 복합체는 염일 수 있다. 즉, 추가의 분자종이 화합물의 산/염기 기에 산/염기 반대 이온을 제공하여, 전형적인 염을 형성하는 산:염기 상호작용을 생성한다. 상기 염 형태는 일반적으로 실질적으로 결정이지만, 이들은 부분적으로 결정, 실질적으로 무정형, 또는 무정형 형태일 수도 있다. 일부 경우에, 추가의 분자종은 제약 활성 화합물과 조합되어 비-염 공결정을 형성한다. 즉, 화합물 및 분자종은 전형적인 산:염기 상호작용에 의해 상호작용하지 않지만, 실질적으로 결정질 구조를 계속 형성한다. 또한, 공결정은 화합물의 염 및 추가의 분자종으로 형성될 수 있다. 일부 경우에, 복합체는 실질적으로 무정형 복합체이고, 이것은, 전형적인 염 결정을 형성하지 않고 대신에 실질적으로 무정형 고체, 즉 그의 X-선 분말 회절 패턴이 예리한 피크를 보이지 않는 (예를 들어 무정형 할로 (halo)를 보이는) 고체를 형성하는 염-유사 산:염기 상호작용을 보유할 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "화학양론"은 2 이상의 성분의 조합물의 몰비, 예를 들어 무정형 복합체를 형성하는 산 또는 염기 대 화합물의 몰비를 의미한다. 예를 들어, 무정형 고체형을 생성하는 산 또는 염기와 화합물의 1:1 혼합물 (즉, 화합물 1몰당 1몰의 산 또는 염기)은 1:1의 화학양론을 갖는다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "조성물"은 임의의 그의 고체 형태를 포함하는 적어도 하나의 제약 활성 화합물을 함유하는, 치료 목적을 위해서 의도된 대상체에게 투여하기 적합한 제제를 지칭한다. 조성물은 화합물의 개선된 제형을 제공하기 위해 적어도 하나의 제약상 허용되는 성분, 예를 들어 적합한 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대상체"는 임의의 포유동물, 예를 들어 인간, 다른 영장류, 스포츠 동물, 상업적인 목적의 동물, 예를 들어 소, 농장 동물, 예를 들어 말, 또는 애완동물, 예를 들어 개 및 고양이를 포함하고 이로 제한되지 않는, 본원에서 설명되는 화합물로 치료되는 살아있는 유기체를 의미한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "생물제약 특성"은 대상체에 대한 투여시에 화합물의 용출, 흡수 및 분포를 포함하는, 본 발명의 화합물 또는 복합체의 약동학적 작용을 의미한다. 따라서, 본 발명의 화합물의 특정 고체형, 예를 들어 본 발명의 화합물의 무정형 복합체는 개선된 C_max (즉, 약물 투여 후에 혈장 내의 최대 달성 농도) 및 개선된 AUC (즉, 약물 혈장 농도 대 약물 투여 후의 시간의 곡선 하의 면적)에서 일반적으로 반영되는 활성 화합물의 개선된 용출 및 흡수를 제공하는 것으로 의도된다.

용어 "제약상 허용되는"은 표시된 물질이 합리적으로 분별있는 의료 전문인으로 하여금 치료할 질환 또는 상태 및 각각의 투여 경로를 고려할 때 환자에게 물질을 투여하지 않게 할 특성을 갖지 않음을 나타낸다. 예를 들어, 이러한 물질은 예를 들어 주사용으로서 본질적으로 멸균될 것이 일반적으로 요구된다.

본 발명의 문맥에서, 용어 "치료상 효과적인" 또는 "유효량"은 물질 또는 물질의 양이 질환 또는 의학적 상태의 하나 이상의 증상을 예방하거나 경감시키거나 완화시키고/시키거나, 치료되는 대상체의 생존을 연장하는데 효과적임을 나타낸다.

본 발명의 문맥에서, 용어 "상승적으로 효과적인" 또는 "상승 효과"는 치료상 효과적인 2 이상의 화합물이 조합되어 사용되는 경우에 사용된 각각의 화합물 자체의 효과를 기초로 하여 예상되는 효과의 합보다 더 큰 개선된 치료 효과를 제공하는 것을 나타낸다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "조정하는" 또는 "조정하다"는 생물학적 활성, 특히 특정 생체분자, 예를 들어 단백질 키나제와 관련이 있는 생물학적 활성을 변경 (활성의 증가 또는 감소)하는 효과를 지칭한다. 예를 들어, 특정 생체분자의 억제제는 생체분자, 예를 들어 효소의 활성을 감소시켜서, 생체분자, 예를 들어 효소의 활성을 조정한다. 이러한 활성은 전형적으로 예를 들어 효소에 대해 억제제 화합물의 억제 농도 (IC₅₀)의 측면에서 표시된다.

"통증" 또는 "통증 상태"는 다음을 포함하고 이로 제한되지 않는 급성 및/또는 만성 통증일 수 있다: 관절염 (예를 들어 골관절염, 류마티스성 관절염, 강직성 척추염, 통풍); 등 통증 (예를 들어 좌골 신경통, 추간판 탈출증, 척추전방전위증, 신경근병증); 화상 통증; 암 통증; 월경통; 두통 (예를 들어 편두통, 군발성 두통, 긴장성 두통); 두부 및 안면 통증 (예를 들어 뇌신경통, 삼차신경통); 통각 과민증 (hyperpathia); 통각과민 (hyperpathia); 염증성 통증 (예를 들어, 과민성 장 증후군, 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 크론 (Crohn) 병, 방광염과 연관된 통증, 세균, 진균 또는 바이러스 감염에 따른 통증); 켈로이드 또는 상처 조직 형성; 분만 또는 출산 통증; 근육통 (예를 들어, 다발성 근염, 피부근염, 봉입체 근염, 반복적인 스트레스 손상 (예를 들어, 필기 근육 경련, 손목 터널 증후군, 건염, 건초염)의 결과로서); 근막 통증 증후군 (예를 들어 섬유근육통); 신경병증성 통증 (예를 들어 당뇨병성 신경병증, 작열통, 포착성 신경병증, 상완 신경총 손상, 후두신경통, 통풍, 반사성 교감신경 이영양증 증후군, 환상 사지 또는 절단후 통증, 포진후 신경통, 중추성 통증 증후군, 또는 외상 (예를 들어 신경 손상)에 의한 신경 통증, 질환 (예를 들어 당뇨병, 다발성 경화증, 길랑-바레 (Guillan-Barre) 증후군, 중증근무력증, 신경변성 질환, 예를 들어 파킨슨병, 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증, 또는 암 치료); 피부 질환 (예를 들어 대상포진, 단순포진, 피부 종양, 낭종, 신경섬유종증)과 연관된 통증; 스포츠 상해 (예를 들어 벤 상처, 염좌, 접질림, 타박상, 탈구, 골절, 척수, 두부); 척추관 협착증; 수술 통증; 촉각 이질통; 악관절 질환; 혈관 질환 또는 손상 (예를 들어 혈관염, 관상동맥 질환, 재관류 손상 (예를 들어 허혈, 졸중, 또는 심근경색 후)); 다른 특정 장기 또는 조직 통증 (예를 들어 눈 통증, 각막 통증, 뼈 통증, 심장 통증, 내장 통증 (예를 들어 신장, 담낭, 위장관), 관절 통증, 치통, 골반 과민증, 골반 통증, 신산통, 요실금); 다른 질환과 연관된 통증 (예를 들어 겸상적혈구 빈혈, AIDS, 대상 포진, 건선, 자궁내막증, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 규폐증, 폐 사르코이드증, 식도염, 가슴앓이, 위식도 역류 질환, 위 및 십이지장 궤양, 기능성 소화불량, 뼈 흡수 질환, 골다공증, 뇌 말라리아, 세균성 수막염); 또는 이식편 대 숙주 거부 또는 동종이식편 거부에 의한 통증.

본 발명의 키나제 표적 및 적응증

단백질 키나제는 다양한 생물학적 경로에서 생화학적 신호를 전파하는데 중요한 역할을 수행한다. 500종 초과의 키나제가 기재되어 있으며, 특정 키나제는 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 암, 심혈관 질환, 염증성 질환, 신경계 질환, 및 다른 질환을 비롯한 광범위한 범위의 질환 또는 상태 (즉, 적응증)와 관련이 있다. 따라서, 키나제는 소분자 치료적 개입을 위한 중요한 제어 지점을 대표한다. 본 발명에서 고려되는 구체적인 표적 단백질 키나제를 아래에서 설명한다:

A-Raf : 표적 키나제 A-Raf (즉, v-raf 쥐 육종 3611 바이러스 종양유전자 상동체 1)는 염색체 Xp11.4-p11.2에 의해 코딩되는 67.6 kDa 세린/트레오닌 키나제 (기호: ARAF)이다. 성숙 단백질은 RBD (즉, Ras 결합 도메인) 및 포르볼-에스테르/DAG-유형 아연 핑거 도메인을 포함하고, 세포막으로부터 핵으로의 유사분열 신호 도입에 관여한다. A-Raf 억제제는 신경계 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 다발경색 치매, 두부 손상, 척수 손상, 알츠하이머병 (AD), 파킨슨병; 신생물 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 흑색종, 신경교종, 육종, 암종 (예를 들어 결장직장, 폐, 유방, 췌장, 갑상선, 신장, 난소), 림프종 (예를 들어 조직구 림프종), 신경섬유종증, 골수이형성 증후군, 백혈병, 종양 혈관신생; 신경병성 또는 염증성 기원의 통증, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 급성 통증, 만성 통증, 암-관련 통증 및 편두통; 및 근육 재생 또는 퇴행과 관련이 있는 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 혈관 재협착, 근감소, 근이영양증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 뒤시엔느, 베커, 에머리-드레이푸스, 지대, 안면견갑상완, 근긴장성, 안인두, 원위 및 선천성 근이영양증), 운동 뉴런 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 근위축성 측삭 경화증, 영아 진행성 척수 근위축증, 중간 척수근위축증, 연소성 척수 근위축증, 척수 연수 근위축증 및 성인성 척수 근위축증), 염증성 근증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 피부근염, 다발성근염 및 봉입체 근염), 신경근 접합부 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 중증 근무력증, 람버트-이튼 증후군 및 선천성 근무력 증후군), 내분비계 비정상으로 인한 근병증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 갑상선 기능 항진성 근병증 및 갑상선 기능 저하성 근병증), 말초 신경 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 샤르코-마리-투스 질환, 데제린-소타스 질환 및 프라이드리히 운동실조증), 다른 근병증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 선천성 근긴장증, 선천성 이상근긴장증, 중심핵병, 소간상체 근병증, 근세관성 근병증 및 주기성 마비) 및 근육의 대사 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 포스포릴라제 결핍, 산 말타제 결핍, 포스포프럭토키나제 결핍, 탈분지 효소 결핍, 미토콘드리아 근병증, 카르니틴 결핍, 카르니틴 팔마틸 트랜스퍼라제 결핍, 포스포글리세레이트 키나제 결핍, 포스포글리세레이트 뮤타제 결핍, 락테이트 데히드로게나제 결핍 및 미오아데닐레이트 데아미나제 결핍)의 치료에 유용할 수 있다.

B-Raf : 표적 키나제 B-Raf (즉, v-raf 쥐 육종 바이러스 종양유전자 상동체 B1)는 염색체 7q34에 의해 코딩되는 84.4 kDa 세린/트레오닌 키나제 (기호: BRAF)이다. 성숙 단백질은 RBD (즉, Ras 결합 도메인), C1 (즉, 단백질 키나제 C 보존 영역 1) 및 STK (즉, 세린/트레오닌 키나제) 도메인을 포함한다.

표적 키나제 B-Raf는 세포막으로부터 핵으로의 유사분열 신호의 도입에 관여하고, 해마 뉴런의 시냅스후 반응에서 역할을 할 수 있다. 따라서, RAF 패밀리의 유전자는 Ras에 의해 제어되는 키나제를 코딩하고 성장 신호에 대한 세포 반응을 매개한다. 실제로, B-Raf 키나제는 RAS→Raf→MEK→ERK/MAP 키나제 신호전달 경로의 핵심 성분이고, 세포 성장, 분열 및 증식의 제어에 있어서 근본적인 역할을 수행하며, 구성적으로 활성화된 경우에는 종양발생을 일으킨다. Raf 키나제의 여러가지 이소형 중에서, B형 또는 B-Raf가 하류 MAP 키나제 신호전달의 가장 강력한 활성화제이다.

BRAF 유전자는 다양한 인간 종양, 특히 악성 흑색종 및 결장 암종에서 흔히 돌연변이된다. 가장 공통적으로 보고된 돌연변이는 악성 흑색종 종양의 80％에서 관찰된 뉴클레오티드 1796에서의 미스센스 티민 (T)에서 아데닌 (A)으로의 염기 전환 (T1796A. B-Raf 단백질에서의 아미노산 변화는 Val<600>→Glu<600>임)이다. 기능적 분석은 이러한 염기 전환이 RAS 활성화와는 무관하게 B-Raf를 우세한 형질전환 단백질로 전환시켜서 B-Raf 키나제 활성의 구성적 활성화를 유발하는 유일하게 검출된 돌연변이임을 밝혀냈다. 이를 기초로, 인간 종양은 촉매 도메인의 특정 아미노산을 "게이트키퍼 (gatekeeper)"로서 돌연변이시켜서 키나제 억제제에 대한 내성을 발생시킨다 [Balak, et. al., Clin Cancer Res. 2006, 12:6494-501]. 따라서, BRAF 내의 Thr-529의 돌연변이는 BRAF 억제제에 대한 내성 메카니즘으로 예상되며, 이는 코돈 529에서 ACC로부터 ATC로의 전이라고 여겨질 수 있다.

니이호리 (Niihori) 등은 심장 안면 피부 (CFC, cardio-facio-cutaneous) 증후군이 있는 43명의 개인 중 3명에서는 2개의 이형접합 KRAS 돌연변이를 확인하였고, 16명에서는 8개의 BRAF 돌연변이를 확인하였다고 보고하였고, RAS-RAF-ERK 경로의 조절이상이 상기 3가지 관련 장애의 공통적인 분자적 기초임을 제시하였다 [Niihori et al., Nat Genet. 2006, 38(3):294-6].

c-Raf-1 : 표적 키나제 c-Raf-1 (즉, v-raf 쥐 육종 바이러스 종양유전자 상동체 1)은 염색체 3p25에 의해 코딩되는 73.0 kDa STK (기호: RAF1)이다. c-Raf-1은 세포자멸에 의한 세포 사멸의 조절인자인 BCL2 (즉, 종양유전자 B-세포 백혈병 2)에 의해 미토콘드리아로 표적화될 수 있다. 활성 c-Raf-1은 세포자멸에 대한 BCL2-매개된 내성을 개선하고, c-Raf-1은 BAD (즉, BCL2-결합 단백질)를 인산화한다. c-Raf-1은 결장직장, 난소, 폐 및 신장 세포의 암종을 비롯한 암종과 관련이 있다. C-Raf-1은 또한 종양 혈관신생의 중요 매개자로서 관련이 있다 [Hood, J.D. et al., 2002, Science 296, 2404]. C-Raf-1 억제제는 급성 골수성 백혈병 및 골수이형성 증후군의 치료에도 유용하다 [Crump, Curr Pharm Des 2002, 8(25):2243-8]. Raf-1 활성화제는 신경내분비계 종양, 예를 들어 갑상선 수질암, 유암종, 소세포 폐암 및 크롬친화세포종의 치료에 유용할 수 있다 [Kunnimalaiyaan et al., Anticancer Drugs 2006, 17(2):139-42].

A-Raf, B-Raf 및/또는 C-Raf 억제제는 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 A-Raf-매개, B-Raf-매개 또는 c-Raf-1-매개 질환 또는 상태의 치료에 유용할 수 있다: 신경계 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 다발경색 치매, 두부 손상, 척수 손상, 알츠하이머병 (AD), 파킨슨병, 발작 및 간질; 신생물 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 흑색종, 신경교종, 다형성 교모세포종, 모양세포성 성상세포종, 육종, 암종 (예를 들어 위장관, 간, 담도, (예를 들어 담관, 담관암종), 결장직장, 폐, 담낭, 유방, 췌장, 갑상선, 신장, 난소, 부신피질, 전립선), 림프종 (예를 들어 조직구 림프종), 신경섬유종증, 급성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군, 백혈병, 종양 혈관신생, 위장관 기질 종양, 신경 내분비계 종양, 예를 들어 갑상선 수질암, 유암종, 소세포 폐암, 카포시 육종 및 크롬친화성세포종; 신경병성 또는 염증성 기원의 통증, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 급성 통증, 만성 통증, 암-관련 통증 및 편두통; 심혈관 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 심부전, 허혈성 졸중, 심장 비대증, 혈전증 (예를 들어 혈전성 미세혈관병증 증후군), 아테롬성 동맥경화증 및 재관류 손상; 염증 및/또는 증식, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 건선, 습진, 관절염 및 자가면역 질환 및 상태, 골관절염, 자궁내막증, 반흔형성, 혈관 재발협착증, 섬유증 질환, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환 (IBD); 면역결핍 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 장기 이식 거부, 이식편 대 숙주 질환 및 HIV와 연관된 카포시 육종; 낭성 신장 또는 전립선 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 당뇨성 신증, 다낭성 신장 질환, 신경화증, 사구체신염, 전립선 비대증, 다낭성 간 질환, 결절성 경화증, 폰히펠-린다우병, 수질 낭성 신장 질환, 신결석증, 및 낭성 섬유증; 대사 장애, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 비만; 감염, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 헬리코박터 파일로리 감염, 간염 바이러스 감염 및 인플루엔자 바이러스 감염, 열병, HIV 및 패혈증; 폐 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 및 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS); 유전적 발병 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 누난 증후군, 코스텔로 증후군 (안면피부골격 증후군), 레오파드 증후군, 심장안면피부 증후군 (CFC), 및 심혈관, 골격, 장, 피부, 모발 및 내분비계 질환을 일으키는 신경 능선 증후군 비정상; 및 근육 재생 또는 퇴행과 관련이 있는 질환, 예를 들어 (이에 제한되지 않음) 근감소, 근이영양증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 뒤시엔느, 베커, 에머리-드레이푸스, 지대, 안면견갑상완, 근긴장성, 안인두, 원위 및 선천성 근이영양증), 운동 뉴런 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 근위축성 측삭 경화증, 영아 진행성 척수 근위축증, 중간 척수근위축증, 연소성 척수 근위축증, 척수 연수 근위축증 및 성인성 척수 근위축증), 염증성 근증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 피부근염, 다발성근염 및 봉입체 근염), 신경근 접합부 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 중증 근무력증, 람버트-이튼 증후군 및 선천성 근무력 증후군), 내분비계 비정상으로 인한 근병증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 갑상선 기능 항진성 근병증 및 갑상선 기능 저하성 근병증), 말초 신경 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 샤르코-마리-투스 질환, 데제린-소타스 질환 및 프라이드리히 운동실조증), 다른 근병증 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 선천성 근긴장증, 선천성 이상근긴장증, 중심핵병, 소간상체 근병증, 근세관성 근병증 및 주기성 마비) 및 근육의 대사 질환 (예를 들어 (이에 제한되지 않음) 포스포릴라제 결핍, 산 말타제 결핍, 포스포프럭토키나제 결핍, 탈분지 효소 결핍, 미토콘드리아 근병증, 카르니틴 결핍, 카르니틴 팔마틸 트랜스퍼라제 결핍, 포스포글리세레이트 키나제 결핍, 포스포글리세레이트 뮤타제 결핍, 락테이트 데히드로게나제 결핍 및 미오아데닐레이트 데아미나제 결핍).

대안적인 화합물 형태 또는 유도체

본원에서 고려되는 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007은 구체적인 화합물과 관련하여 설명된다. 또한, 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007은 많은 상이한 형태 또는 유도체로 존재할 수 있고, 그 모두가 본 발명의 범위 내이다. 대안적인 형태 또는 유도체는 예를 들어 (a) 전구약물 및 활성 대사물질, (b) 호변이성질체, (c) 제약상 허용가능한 염 및 (d) 그의 수화물 및 용매화물 및 다른 형태를 포함하는 상이한 결정 형태, 다형성 또는 무정형 고체를 포함하는 고체형을 포함한다.

(a) 전구약물 및 대사물질

본원에서 설명되는 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 이외에, 본 발명은 또한 전구약물 (일반적으로 제약상 허용되는 전구약물), 활성 대사 유도체 (활성 대사물질), 및 이들의 제약상 허용되는 염을 포함한다.

전구약물은 생리학적 조건 하에 대사될 때 또는 가용매분해에 의해 전환될 때 목적하는 활성 화합물을 제공하는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 전구약물은 비제한적으로 활성 화합물의 에스테르, 아미드, 카르바메이트, 카르보네이트, 우레이드, 용매화물, 또는 수화물을 포함한다. 일반적으로, 전구약물은 비활성이거나, 또는 활성 화합물보다 활성이 작지만, 하나 이상의 유익한 취급, 투여, 및/또는 대사 특성을 제공할 수 있다. 전구약물은 화합물의 -NH 기가 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007의 피롤로[2,3-b]피리딘 고리의 1-위치 또는 술폰아미드기의 질소와 같은 아실화를 겪는 변이체를 포함할 수 있고, 여기서 아실기의 절단은 활성 약물의 유리 -NH 기를 제공한다. 일부 전구약물은 효소에 의해 활성화되어 활성 화합물을 생성하거나, 또는 화합물은 추가의 화학 반응을 거쳐 활성 화합물을 생성할 수 있다. 전구약물은 단일 단계로 전구약물 형태로부터 활성 형태로 진행될 수 있거나 또는 자체가 활성을 가질 수 있거나 또는 비활성일 수 있는 하나 이상의 중간체 형태를 가질 수 있다.

문헌 [The Practice of Medicinal Chemistry, Ch. 31-32 (Ed. Wermuth, Academic Press, San Diego, CA, 2001)]에 기재된 바와 같이, 전구약물은 개념상 2개의 비배타적 카테고리; 즉, 생체전구체 (bioprecursor) 전구약물 및 담체 전구약물로 나뉠 수 있다. 일반적으로, 생체전구체 전구약물은 하나 이상의 보호기를 포함하고 대사 또는 가용매분해에 의해 활성 형태로 전환되는, 비활성이거나 대응하는 활성 약물 화합물에 비해 낮은 활성을 갖는 화합물이다. 활성 약물 형태 및 임의의 방출된 대사 산물은 모두 허용되는 낮은 독성을 가져야 한다. 대체로, 활성 약물 화합물의 형성은 다음 종류 중 하나인 대사 과정 또는 반응을 포함한다:

산화 반응: 산화 반응은 알콜, 카르보닐 및 산 관능기의 산화, 지방족 탄소의 히드록실화, 지환족 탄소 원자의 히드록실화, 방향족 탄소 원자의 산화, 탄소-탄소 이중 결합의 산화, 질소-함유 관능기의 산화, 규소, 인, 비소 및 황의 산화, 산화에 의한 N-탈알킬화, 산화에 의한 O- 및 S-탈알킬화, 산화에 의한 탈아민화, 및 다른 산화 반응과 같은 반응으로 예시되고 이로 제한되지 않는다.

환원 반응: 환원 반응은 카르보닐 관능기의 환원, 알콜 관능기 및 탄소-탄소 이중 결합의 환원, 질소-함유 관능기의 환원, 및 다른 환원 반응과 같은 반응으로 예시되고 이로 제한되지 않는다.

산화 상태의 변화가 없는 반응: 산화 상태의 변화가 없는 반응은 에스테르 및 에테르의 가수분해, 탄소-질소 단일 결합의 가수분해 절단, 비-방향족 헤테로사이클의 가수분해 절단, 다중 결합에서 수화 및 탈수, 탈수 반응으로 인한 새로운 원자 연결기, 가수분해에 의한 탈할로겐화, 수소 할라이드 분자의 제거, 및 다른 상기 반응과 같은 반응으로 예시되고 이로 제한되지 않는다.

담체 전구약물은 예를 들어 섭취 및/또는 작용 부위(들)에 국소화 전달을 개선하는 수송 모이어티 (moiety)를 포함하는 약물 화합물이다. 바람직하게는, 상기 담체 전구약물에 대해, 약물 모이어티와 수송 모이어티 사이의 연결은 공유 결합이고, 전구약물은 비활성이거나 약물 화합물보다 활성이 작고, 전구약물 및 임의의 방출 수송 모이어티는 허용가능하게 비-독성이다. 수송 모이어티가 섭취를 향상시키도록 의도되는 전구약물에 있어서, 대개 수송 모이어티의 방출은 신속해야 한다. 다른 경우에, 느린 방출을 제공하는 모이어티, 예를 들어, 특정 중합체 또는 다른 모이어티, 예를 들어 시클로덱스트린을 사용하는 것이 바람직하다 (예를 들어, 본원에 참고로 포함된 쳉 (Cheng) 등의 미국 특허 출원 공개 2004/0077595, 출원 번호 10/656,838 참조). 상기 담체 전구약물은 종종 경구 투여된 약물에 대해 유익하다. 일부 경우에, 수송 모이어티는 약물의 표적화 전달을 제공하고, 예를 들어 약물은 항체 또는 항체 단편에 접합될 수 있다. 담체 전구약물은 예를 들어 하나 이상의 다음 특성을 개선하기 위해 사용될 수 있다: 증가된 친지성, 약리학적 효과의 증가된 지속시간, 증가된 부위-특이성, 감소된 독성 및 이상 반응, 및/또는 약물 제형화의 개선 (예를 들어, 안정성, 수 용해도, 바람직하지 않은 감각수용성 또는 물리화학 특성의 억제). 예를 들어, 친지성은 친지성 카르복실산을 사용하여 히드록실기를, 또는 알콜, 예를 들어, 지방족 알콜을 사용하여 카르복실산기를 에스테르화함으로써 증가될 수 있다 (Wermuth, 상기 문헌).

대사물질, 예를 들어, 활성 대사물질은 상기 설명된 바와 같은 전구약물, 예를 들어, 생체전구체 전구약물과 겹친다. 따라서, 상기 대사물질은 약리학상 활성 화합물, 또는 대상체의 체내에서 대사 과정으로부터 생성되는 유도체인 약리학상 활성 화합물로 추가로 대사되는 화합물이다. 이들 중에, 활성 대사물질은 상기 약리학상 활성 유도체 화합물이다. 전구약물에 있어서, 전구약물 화합물은 일반적으로 비활성이거나 대사 산물보다 활성이 더 작다. 활성 대사물질에 있어서, 모 화합물은 활성 화합물일 수 있거나 비활성 전구약물일 수 있다. 예를 들어, 일부 화합물에서, 하나 이상의 알콕시기는 약리학상 활성을 보유하면서 히드록실기로 대사될 수 있고/있거나 카르복실기는 에스테르화, 예를 들어, 글루쿠로니화될 수 있다. 일부 경우에, 중간체 대사물질(들)이 활성 대사물질을 제공하기 위해 추가로 대사되는 2 이상의 대사물질이 존재할 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 대사 글루쿠로니화에 의해 생성되는 유도체 화합물은 비활성이거나 활성이 작을 수 있고, 활성 대사물질을 제공하기 위해 추가로 대사될 수 있다.

화합물의 대사물질은 당업계에 공지된 일상적 기술을 이용하여 확인할 수 있고, 그 활성은 예를 들어 본원에서 설명되는 것과 같은 시험을 사용하여 결정될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Bertolini et al., 1997, J. Med. Chem., 40:2011-2016]; [Shan et al., 1997, J Pharm Sci 86(7):756-757]; [Bagshawe, 1995, Drug Dev. Res., 34:220-230]; Wermuth, 상기 문헌] 참조).

(b) 호변이성질체

일부 화합물은 호변이성을 나타낼 수 있음이 이해된다. 상기 경우에, 본원에 제공된 화학식은 가능한 호변이성질체 형태 중 하나만을 명백히 도시한다. 따라서, 본원에 제공된 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007은 도시된 화합물의 임의의 호변이성질체 형태를 나타내도록 의도되고, 화합물 그림에 도시된 구체적인 호변이성질체 형태로 제한되지 않음을 이해해야 한다.

(c) 제약상 허용되는 염

반대로 명시하지 않으면, 본원에서 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007은 상기 화합물의 제약상 허용되는 염을 포함한다. 따라서, 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007은 제약상 허용되는 염의 형태로 존재하거나 제약상 허용되는 염으로서 제형화될 수 있다. 고려되는 제약상 허용되는 염 형태는 모노, 비스, 트리스, 테트라키스 등을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 제약상 허용되는 염은 그들의 투여되는 양 및 농도에서 비-독성이다. 상기 염의 제제는 그의 생리학적 효과를 발휘하는 것을 방해하지 않으면서 화합물의 물리적 특징을 변경함으로써 약리학상 사용을 용이하게 한다. 물리적 특징에서 유용한 변경은 경점막 투여를 용이하게 하기 위해 융점을 낮추고, 보다 고농도의 약물 투여를 용이하게 하기 위해 용해도를 증가시키는 것을 포함한다. 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007은 충분히 산성인 및 충분히 염기성인 관능기를 보유하고, 따라서 임의의 많은 무기 또는 유기 염기, 및 무기 및 유기산과 반응하여 제약상 허용되는 염을 형성할 수 있다.

제약상 허용되는 염은 산 부가염, 예를 들어 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 히드로클로라이드, 아세테이트, 페닐아세테이트, 아크릴레이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 2-페녹시벤조에이트, 2-아세톡시벤조에이트, 디니트로벤조에이트, 히드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 메틸벤조에이트, 비카르보네이트, 부틴-1,4 디오에이트, 헥신-1,6-디오에이트, 카프로에이트, 카프릴레이트, 클로로벤조에이트, 신나메이트, 시트레이트, 데카노에이트, 포르메이트, 푸마레이트, 글리콜레이트, 글루코네이트, 글루카레이트, 글루쿠로네이트, 글루코스-6-포스페이트, 글루타메이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 이세티오네이트, 이소부티레이트, 감마-히드록시부티레이트, 페닐부티레이트, 락테이트, 말레이트, 말레에이트, 히드록시말레에이트, 메틸말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 이소니코티네이트, 옥타노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 파모에이트, 포스페이트, 일수소인산염, 이수소인산염, 오르토포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 2-포스포글리세레이트, 3-포스포글리세레이트, 프탈레이트, 프로피오네이트, 페닐프로피오네이트, 프로피오네이트, 피루베이트, 퀴네이트, 살리실레이트, 4-아미노살리실레이트, 세바케이트, 스테아레이트, 수베레이트, 숙시네이트, 술페이트, 피로술페이트, 비술페이트, 술파이트, 비술파이트, 술파메이트, 술포네이트, 벤젠술포네이트 (즉,베실레이트), 에탄술포네이트 (즉, 에실레이트), 에탄-1,2-디술포네이트, 2-히드록시에탄술포네이트 (즉,이세티오네이트), 메탄술포네이트 (즉,메실레이트), 나프탈렌-1-술포네이트, 나프탈렌-2-술포네이트 (즉, 나프실레이트), 프로판술포네이트, p-톨루엔술포네이트 (즉, 토실레이트), 자일렌술포네이트, 시클로헥실술파메이트, 타르트레이트, 및 트리플루오로아세테이트를 함유하는 것을 포함한다. 이들 제약상 허용되는 산 부가염은 적절한 대응하는 산을 사용하여 제조될 수 있다.

산성 관능기, 예를 들어 카르복실산 또는 페놀이 존재할 때, 제약상 허용되는 염은 또한 염기 부가염, 예를 들어 벤자틴, 클로로프로카인, 콜린, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, t-부틸아민, 디시클로헥실아민, 에틸렌디아민, N,N'-디벤질에틸렌디아민, 메글루민, 히드록시에틸피롤리딘, 피페리딘, 모르폴린, 피페라진, 프로카인, 알루미늄, 칼슘, 구리, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 칼륨, 나트륨, 아연, 암모늄, 및 모노-, 디- 또는 트리-알킬아민 (예를 들어 디에틸아민)을 함유하는 것, 또는 아미노산, 예를 들어 L-히스티딘, L-글리신, L-리신 및 L-아르기닌으로부터 유래되는 염을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 19^th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, Vol. 2, p. 1457, 1995]을 참조한다. 상기 제약상 허용되는 염기 부가염은 적절한 대응하는 염기를 사용하여 제조될 수 있다.

제약상 허용되는 염은 표준 기술에 의해 제조할 수 있다. 예를 들어, 유리-염기 형태의 화합물을 적합한 용매, 예를 들어 적절한 산을 함유하는 수성 또는 수성-알콜 용액에 용해시킨 후, 용액을 증발시켜 단리할 수 있다. 또 다른 예에서, 염은 유리 염기 및 산을 유기 용매 내에서 반응시켜 제조될 수 있다. 특정 화합물이 산인 경우, 목적하는 제약상 허용되는 염은 임의의 적합한 방법에 의해, 예를 들어 유리 산을 적절한 무기 또는 유기 염기로 처리함으로써 제조될 수 있다.

(d) 다른 화합물 형태

고체인 물질의 경우에, 화합물 및 염이 상이한 결정질 또는 다형성 형태로 존재할 수 있거나, 또는 공결정으로 제형화될 수 있거나, 또는 무정형 형태로 존재할 수 있거나, 또는 이들의 임의의 조합 (예를 들어, 부분적으로 결정, 부분적으로 무정형, 또는 다형체의 혼합물)일 수 있음이 당업자에 의해 이해되고, 이들은 모두 본 발명의 범위 및 특정된 화학식 내에 포함된다. 염이 산/염기 부가에 의해 형성되는, 즉, 관심있는 화합물의 유리 염기 또는 유리 산이 각각 대응하는 부가 염기 또는 부가 산과 산/염기 반응을 형성하여 이온 전하 상호작용을 생성하는 반면, 공결정은 중성 화합물 사이에 형성되는 새로운 화학물질종으로서, 화합물 및 추가의 분자종이 동일한 결정질 구조로 생성된다.

일부 경우에, 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007은 염기 부가 염, 예를 들어 암모늄, 디에틸아민, 에탄올아민, 에틸렌디아민, 디에탄올아민, t-부틸아민, 피페라진, 메글루민; 산 부가염, 예를 들어 아세테이트, 아세틸살리실레이트, 베실레이트, 캄실레이트, 시트레이트, 포르메이트, 푸마레이트, 글루타레이트, 히드로클로레이트, 말레에이트, 메실레이트, 니트레이트, 옥살레이트, 포스페이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트 및 토실레이트; 및 아미노산, 예를 들어 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 또는 발린을 포함하는 산 또는 염기와 복합체화된다. 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 산 또는 염기와 조합할 때, 결정질 물질, 예를 들어 일반적인 염 또는 공결정보다 무정형 복합체가 형성되는 것이 바람직하다. 일부 경우에, 복합체의 무정형 형태는 산 또는 염기와 혼합된 모 화합물의 분무-건조, 기계화학적 방법, 예를 들어 롤러 (roller) 다짐, 또는 마이크로파 조사와 같은 추가의 처리에 의해 용이해진다. 상기 무정형 복합체는 몇몇 잇점을 제공한다. 예를 들어, 유리 염기에 비해 용융 온도의 저하는 화합물의 생물제약 특성을 보다 개선하기 위한 추가의 처리, 예를 들어 고온 용융 압출을 용이하게 한다. 또한, 무정형 복합체는 쉽게 물러져서, 고체를 캡슐 또는 정제 형태로 로딩하기 위해 개선된 압축을 제공한다.

추가로, 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007은 확인된 물질의 수화 또는 용매화 형태 및 비수화 또는 비용매화 형태를 포함하도록 의도된다. 예를 들어, 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 염은 수화 및 비-수화 형태 둘 모두를 포함한다. 용매화물의 다른 예는 적합한 용매, 예를 들어 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸 아세테이트, 아세트산, 또는 에탄올아민과 조합된 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 포함한다.

제형화 및 투여

본원에서 설명되는 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 임의의 형태는 일반적으로 인간 대상체의 치료시에 사용될 것이다. 그러나, 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 및 그의 조성물은 또한 다른 동물 대상체의 유사하거나 동일한 적응증의 치료를 위해 사용될 수 있고, 주사 (즉, 비경구, 예를 들어 정맥내, 복강내, 피하 및 근육내), 경구, 경피, 경점막, 직장 또는 흡입을 포함하는 상이한 경로로 투여될 수 있다. 상기 투여형은 화합물이 표적 세포에 도달하도록 해야 한다. 다른 인자는 당업계에 잘 알려져 있고, 독성, 및 화합물 또는 조성물이 그의 효과를 발휘하는 것을 지연하는 투여형과 같은 고려사항을 포함한다. 기술 및 제형은 일반적으로 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21^st edition, Lippincott, Williams and Wilkins, Philadelphia, PA, 2005 (본원에 참고로 포함됨)]에서 찾을 수 있다.

일부 실시양태에서, 조성물은 제약상 허용되는 담체 또는 부형제, 예를 들어충전제, 결합제, 붕해제, 활주제, 윤활제, 복합화제, 가용화제 및 계면활성제를 포함할 것이고, 이들은 특정 경로에 의한 화합물의 투여를 용이하게 하기 위해 선택될 수 있다. 담체의 예는 탄산칼슘, 인산칼슘, 다양한 당, 예를 들어 락토스, 글루코스, 또는 슈크로스, 여러 종류의 전분, 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 지질, 리포좀, 나노입자 등을 포함한다. 또한, 담체는 예를 들어 주사용수 (WFI), 염수 용액, 덱스트로스 용액, 행크 (Hank) 용액, 링거 (Ringer) 용액, 식물유, 광유, 동물유, 폴리에틸렌 글리콜, 액체 파라핀 등의 멸균 용액을 비롯하여 용매로서 또는 현탁액을 위한 생리학상 적합성 액체를 포함한다. 또한, 부형제는 예를 들어, 콜로이드성 이산화규소, 실리카겔, 탈크, 규산마그네슘, 규산칼슘, 알루미노규산나트륨, 삼규산마그네슘, 분말 셀룰로스, 거대결정 셀룰로스, 카르복시메틸 셀룰로스, 가교결합된 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 나트륨 벤조에이트, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 스테아르산, 스테아르산알루미늄, 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 스테아르산아연, 나트륨 스테아릴 푸마레이트, 실로이드, 스테아로웨트 (stearowet) C, 산화마그네슘, 전분, 나트륨 전분 글리콜레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 디베헤네이트, 글리세릴 팔미토스테아레이트, 수소화 식물유, 수소화 면실유, 피마자유, 광유, 폴리에틸렌 글리콜 (예를 들어, PEG 4000-8000), 폴리옥시에틸렌 글리콜, 폴록사머, 포비돈, 크로스포비돈, 크로스카르멜로스 나트륨, 알긴산, 카제인, 메타크릴산 디비닐벤젠 공중합체, 나트륨 도큐세이트, 시클로덱스트린 (예를 들어, 2-히드록시프로필-델타-시클로덱스트린), 폴리소르베이트 (예를 들어 폴리소르베이트 80), 세트리미드, TPGS (d-알파-토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 1000 숙시네이트), 마그네슘 라우릴 술페이트, 나트륨 라우릴 술페이트, 폴리에틸렌 글리콜 에테르, 폴리에틸렌 글리콜의 디-지방산 에스테르, 또는 폴리옥시알킬렌 소르비탄 지방산 에스테르 (예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 트윈 (Tween)^®), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 예를 들어 지방산, 예를 들어 올레산, 스테아르산 또는 팔미트산으로부터의 소르비탄 지방산 에스테르, 만니톨, 자일리톨, 소르비톨, 말토스, 락토스, 락토스 일수화물 또는 분무 건조된 락토스, 슈크로스, 프럭토스, 인산칼슘, 이염기성 인산칼슘, 삼염기성 인산칼슘, 황산칼슘, 덱스트레이트, 덱스트란, 덱스트린, 덱스트로스, 셀룰로스 아세테이트, 말토덱스트린, 시메티콘, 폴리덱스트로셈, 키토산, 젤라틴, HPMC (히드록시프로필 메틸 셀룰로스), HPC (히드록시프로필 셀룰로스), 히드록시에틸 셀룰로스 등을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 경구 투여가 사용될 수 있다. 경구 투여용 제약 제제는 통상적인 경구 투여형, 예를 들어 캡슐, 정제, 및 액체 제제, 예를 들어 시럽, 엘릭시르, 및 농축 점적액 (drop)으로서 제형화될 수 있다. 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007은 고체 부형제와 합하고, 임의로 생성되는 혼합물을 연마하고, 원하는 경우 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물을 가공하여, 예를 들어 정제, 코팅 정제, 경질 캡슐, 연질 캡슐 용액 (예를 들어 수용액, 알콜 또는 오일 용액) 등을 얻을 수 있다. 적합한 부형제는 특히 충전제, 예를 들어 당, 예를 들어 락토스, 글루코스, 슈크로스, 만니톨, 또는 소르비톨; 셀룰로스 제제, 예를 들어, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 트라가칸트 검, 메틸 셀룰로스, 히드록시프로필메틸-셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스 (CMC), 및/또는 폴리비닐피롤리돈 (PVP: 포비돈), 오일상 부형제, 예를 들어 식물 및 동물유, 예를 들어 해바라기유, 올리브유, 또는 간유이다. 경구 투여 제형은 또한 붕해제, 예를 들어 가교결합된 폴리비닐피롤리돈, 한천, 또는 알긴산 또는 그의 염, 예를 들어 알긴산나트륨, 윤활제, 예를 들어 탈크 또는 스테아르산마그네슘; 가소제, 예를 들어 글리세롤 또는 소르비톨; 감미제, 예를 들어 슈크로스, 프럭토스, 락토스, 또는 아스파탐; 천연 또는 인공 향미제, 예를 들어 페퍼민트, 노루발풀유, 또는 체리 향료; 또는 상이한 용량 또는 조합물의 식별 또는 특성화를 위해 사용될 수 있는 염료 또는 안료가 함유할 수 있다. 또한, 당의정 코어에는 적합한 코팅이 제공된다. 상기 목적을 위해, 농축 당 용액이 사용될 수 있고, 이는 임의로 예를 들어, 아라비아고무, 탈크, 폴리비닐피롤리돈, 카르보폴 겔, 폴리에틸렌 글리콜, 및/또는 이산화티탄, 래커 (lacquer) 용액, 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 포함할 수 있다.

경구로 사용될 수 있는 제약 제제는 젤라틴으로 제조된 푸시핏 (push-fit) 캡슐 ("겔캡스 (gelcaps)"), 및 젤라틴 및 가소화제, 예를 들어 글리세롤 또는 소르비톨로 제조된 연질 밀봉 캡슐을 포함한다. 푸시핏 캡슐은 활성 성분을 충전제, 예를 들어 락토스, 결합제, 예를 들어 전분, 및/또는 윤활제, 예를 들어 탈크 또는 스테아르산마그네슘 및 임의로 안정화제와의 혼합물로 포함할 수 있다. 연질 캡슐에서, 활성 화합물은 적합한 액체, 예를 들어 지방 오일, 액체 파라핀, 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜에 용해되거나 현탁될 수 있다.

일부 실시양태에서, 주사 (비경구 투여), 예를 들어, 근육내, 정맥내, 복강내, 및/또는 피하 주사가 사용될 수 있다. 주사에 있어서, 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 및 그의 조성물은 멸균 액체 용액, 바람직하게는 생리학상 적합성 버퍼 또는 용액, 예를 들어 염수 용액, 행크 용액, 또는 링거 용액 중에 제형화된다. 또한, 분산액은 비-수용액, 예를 들어 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 에탄올, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 트리아세틴, 및 식물유 내에 제조될 수 있다. 또한, 용액은 보존제, 예를 들어 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산, 티메로살 등을 함유할 수 있다. 또한, 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 및 그의 조성물은 예를 들어 동결건조 형태를 비롯하여 고체 형태로 제형화되고, 사용 전에 재용해되거나 현탁될 수 있다.

일부 실시양태에서, 경점막, 국소 또는 경피 투여가 사용될 수 있다. 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007의 상기 제형에서, 투과될 장벽에 적절한 침투제가 사용된다. 상기 침투제는 당업계에 일반적으로 공지되어 있고, 예를 들어, 경점막 투여를 위해 담즙산염 및 푸시딘산 유도체를 포함한다. 또한, 투과를 용이하게 하기 위해 세제가 사용될 수 있다. 경점막 투여는 예를 들어 코 스프레이 또는 좌제 (직장 또는 질)를 통할 수 있다. 국소 투여를 위한 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007의 조성물은 당업계에 공지된 적절한 담체를 선택하여 오일, 크림, 로션, 연고 등으로서 제형화된다. 적합한 담체는 식물유 또는 광유, 백색 바셀린 (petrolatum) (백색 연질 파라핀), 분지쇄 지방 또는 오일, 동물 지방 및 고분자량 알콜 (C₁₂ 초과)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 담체는 활성 성분이 가용성이 되도록 선택된다. 또한, 유화제, 안정화제, 습윤제 및 항산화제뿐만 아니라 원하는 경우 색상 또는 향기 부여제가 포함될 수 있다. 국소 투여용 크림은 바람직하게는 광유, 자가-유화 밀랍 및 물의 혼합물로부터 제형화되고, 상기 혼합물 내에 소량의 용매 (예를 들어, 오일) 중에 용해된 활성 성분이 혼합된다. 추가로, 경피 수단에 의한 투여는 활성 성분 및 임의로 당업계에 공지된 하나 이상의 담체 또는 희석제로 함침된 경피 패치 또는 드레싱, 예를 들어 밴드 (bandage)를 포함할 수 있다. 경피 전달 시스템 형태로 투여되는 경우, 용량 투여는 물론 용량 계획 전체 동안 간헐적이기보다 연속적일 것이다.

일부 실시양태에서, 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 조성물은 흡입제로서 투여된다. 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 조성물은 건조 분말 또는 적합한 용액, 현탁액, 또는 에어로졸로서 제형화될 수 있다. 분말 및 용액은 당업계에 공지된 적합한 첨가제를 사용하여 제형화될 수 있다. 예를 들어, 분말은 적합한 분말 베이스, 예를 들어 락토스 또는 전분을 포함할 수 있고, 용액은 프로필렌 글리콜, 멸균수, 에탄올, 염화나트륨 및 다른 첨가제, 예를 들어 산, 알칼리 및 버퍼 염을 포함할 수 있다. 상기 용액 또는 현탁액은 스프레이, 펌프, 분무기 (atomizer), 또는 연무기 (nebulizer) 등을 통해 흡입함으로써 투여될 수 있다. 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 조성물은 또한 다른 흡입 치료제, 예를 들어, 코르티코스테로이드, 예를 들어 플루티카손 프로피오네이트, 베클로메타손 디프로피오네이트, 트리암시놀론 아세토니드, 부데소니드, 및 모메타손 푸로에이스; 베타 효능제, 예를 들어 알부테롤, 살메테롤, 및 포르모테롤; 항콜린제, 예를 들어 이프라트로프리움 브로마이드 또는 티오트로피움; 혈관확장제, 예를 들어 트레프로스티날 및 이로프로스트; 효소, 예를 들어 DNAase; 치료 단백질; 면역글로불린 항체; 올리고뉴클레오티드, 예를 들어 단일 또는 이중 가닥 DNA 또는 RNA, siRNA; 항생제, 예를 들어 토브라마이신; 무스카린 수용체 길항제; 류코트리엔 길항제; 시토카인 길항제; 프로테아제 억제제; 크로몰린 나트륨; 네도크릴 나트륨; 및 나트륨 크로모글리케이트와 조합으로 사용될 수 있다.

투여될 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 조성물의 양은 예를 들어 화합물 활성 (시험관 내, 예를 들어 화합물 IC₅₀ 대 표적, 또는 동물 효능 모델에서 생체내 활성), 동물 모델에서 약동학적 결과 (예를 들어 생물학적 반감기 또는 생체이용률), 대상체의 연령, 크기 및 체중, 및 대상체와 연관된 질환과 같은 인자를 고려하여 표준 절차에 의해 결정할 수 있다. 이들 및 다른 인자의 중요성은 당업자에게 잘 공지되어 있다. 일반적으로, 용량은 약 0.01 내지 50 mg/kg (치료될 대상), 또한 약 0.1 내지 20 mg/kg일 것이다. 다중 용량이 사용될 수 있다.

임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 조성물은 또한 동일한 질환을 치료하기 위한 다른 치료제와 조합으로 사용될 수 있다. 상기 조합 사용은 상이한 시간에 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 및 하나 이상의 다른 치료제의 투여, 또는 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 및 하나 이상의 다른 치료제의 동시-투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 용량은 당업자에게 잘 공지된 방법에 의해 조합 사용된 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 다른 치료제에 대해 수정될 수 있고, 예를 들어, 단독으로 사용된 화합물 또는 치료제에 비해 투여되는 양이 감소된다.

조합 사용은 다른 요법, 약물, 의학적 시술 등과 함께 사용하는 것을 포함하는 것이 이해되고, 여기서 다른 요법 또는 시술은 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 조성물과는 상이한 시간에 (예를 들어, 단시간 내에, 예를 들어 수시간 (예를 들어, 1, 2, 3, 4-24 시간) 내에, 또는 더 긴 시간 (예를 들어, 1-2일, 2-4일, 4-7일, 1-4주) 내에), 또는 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 조성물과 동일한 시간에 투여될 수 있다. 조합 사용은 또한 1회 또는 드물게 투여되는 요법 또는 의학적 시술, 예를 들어 수술과 함께 사용하는 것을 포함하고, 여기서 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 조성물은 다른 요법 또는 시술 전후에 단시간 또는 보다 긴 시간 내에 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 상이한 투여 경로로 또는 동일한 투여 경로로 전달된 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 조성물 및 하나 이상의 다른 약물 치료제의 전달을 제공한다. 임의의 투여 경로를 위한 조합 사용은 2개의 화합물이 투여될 때 그들의 치료 활성을 유지하는 방식으로 화학적으로 연결되는 제형을 비롯하여, 임의의 제형 내에 동일한 투여 경로로 함께 전달되는 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 조성물 및 하나 이상의 다른 약물 치료제의 전달을 포함한다. 한 측면에서, 다른 약물 치료제가 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 조성물과 동시-투여될 수 있다. 동시-투여에 의한 조합 사용은 공동-제형 또는 화학적으로 연결된 화합물의 제형의 투여, 또는 동일하거나 상이한 경로로 투여되는, 서로 단시간 내에 (예를 들어, 1시간, 2시간, 3시간, 24시간 이내에) 별개의 제형 내의 2개 이상의 화합물의 투여를 포함한다. 별개의 제형의 동시-투여는 하나의 장치, 예를 들어, 동일한 흡입 장치, 동일한 시린지 등을 통한 전달에 의한 동시-투여, 또는 서로 단시간 내에 별개의 장치로부터의 투여를 포함한다. 동일한 경로로 전달되는 임의의 하나 이상의 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 및 하나 이상의 추가의 약물 치료제의 동시-제형은 하나의 제형 내에 합해진 별개의 화합물, 또는 화학적으로 연결되지만 여전히 그들의 생물학적 활성을 유지하도록 변형된 화합물을 포함하는, 하나의 장치에 의해 투여될 수 있는 물질들의 제제를 함께 포함한다. 상기 화학적으로 연결된 화합물은 생체 내에서 실질적으로 유지되는 연결기를 가질 수 있거나, 연결기는 생체 내에서 파괴될 수 있어서, 2개의 활성 성분을 분리시킨다.

실시예

본 발명에 관한 실시예를 아래에 설명한다. 대부분의 경우에, 대체 기술을 사용할 수 있다. 실시예는 예시적인 것으로 의도되고 본 발명의 범위를 제한하거나 그로 한정되지 않는다. 일부 예에서, 화합물에 대해 지시된 질량 분광법 결과는 브로모 또는 클로로 치환기를 갖는 화합물과 같은 분자 내에서 원자의 동위원소 분포 때문에 하나 초과의 값을 가질 수 있다. 고체형의 형성을 위한 공지의 화합물의 합성은 예를 들어 그 개시내용을 화합물의 제조 방법에 관하여 본원에 참고로 포함하는 미국 특허 출원 11/473,347 (또한 PCT 공개 WO2007002433 참조), 및 미국 특허 출원 11/960,590 (공개 번호 2008/0167338)에서 찾을 수 있다.

실시예 1: 프로판-1-술폰산 {2,4-디플루오로-3-[5-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐]-페닐}-아미드 P-0001의 합성.

프로판-1-술폰산 {2,4-디플루오로-3-[5-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐]-페닐}-아미드 P-0001을 반응식 1에 제시된 바와 같이 2,4-디플루오로-페닐아민 1로부터 6개의 단계로 합성하였다.

<반응식 1>

단계 1: 3-아미노-2,6-디플루오로 벤조산 벤질 에스테르 (3)의 제조:

질소 분위기 하에 드라이아이스/아세톤 조로 냉각한 250 mL의 테트라히드로푸란 중의 2,4-디플루오로-페닐아민 (1, 5.11 mL, 50.7 mmol)에, n-부틸리튬 (헥산 중 1.60 M, 34.0 mL, 54.4 mmol)을 서서히 첨가하였다. 30분 후에, 40.0 mL의 테트라히드로푸란에 용해시킨 1,2-비스-(클로로-디메틸-실라닐)-에탄 (11.5 g, 53.4 mmol)을 서서히 첨가하였다. 1시간 후에 n-부틸리튬 (헥산 중 1.60 M, 31.9 mL, 51.1 mmol)을 서서히 첨가하였다. 반응물을 -78℃에서 30분 동안 교반한 후 40분에 걸쳐 실온으로 가온하였다. 반응물을 -78℃로 냉각하고, n-부틸리튬 (헥산 중 1.60 M, 35.1 mL, 56.1 mmol)을 서서히 첨가하였다. 70분 후에, 벤질 클로로포르메이트 (2, 7.97 mL, 55.8 mmol)를 반응물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 철야 교반한 후, 120 mL의 2 N 수성 염산을 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 실온으로 가온하였다. 유기층을 분리시켰다. 수성층을 탄산칼륨으로 염기화하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 합하고 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 목적하는 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (에틸 아세테이트/헥산 20%)에 의해 단리하여 무색 오일 (3, 10.6 g, 79.7%)을 얻었다.

단계 2: 2,6-디플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조산 벤질 에스테르 (5)의 제조:

150 mL의 디클로로메탄 중의 3-아미노-2,6-디플루오로-벤조산 벤질 에스테르 (3, 6.00 g, 22.8 mmol)에, 피리딘 (2.76 mL, 34.2 mmol) 및 프로판-1-술포닐 클로라이드 (4, 3.80 mL, 33.8 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 철야 교반한 후, 물에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 목적하는 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 단리하여 무색 오일 (5, 7.0 g, 83.1%)을 얻었다.

단계 3: 2,6-디플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조산 (6)의 제조:

30 mL의 메탄올 중의 2,6-디플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조산 벤질 에스테르 (5, 2.0 g, 5.4 mmol)에, 탄소 상의 20% 수산화팔라듐 (100 mg)을 첨가하였다. 반응물을 수소 하에 1 atm에서 15분 동안 교반하였다. 반응물을 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하여 목적하는 화합물을 백색 고체 (6)로서 얻고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.

단계 4: 2,6-디플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조일 클로라이드 (7)의 제조:

2,6-디플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조산 (6, 1.50 g, 5.4 mmol)에, 7.0 mL의 톨루엔 및 티오닐 클로라이드 (15.0 mL, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 3시간 동안 환류로 가열한 후, 농축하여 조질 화합물 (7)을 얻고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.

단계 5: 프로판-1-술폰산 [3-(5-브로모-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 (9)의 제조:

삼염화알루미늄 (8.89 g, 66.7 mmol)에, 150 mL의 디클로로메탄을 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서 질소 분위기 하에 첨가하였다. 여기에, 20 ml의 디클로로메탄 중의 5-브로모-1H-피롤로[2,3-b]피리딘 (8, 1.64 g, 8.34 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 60분 동안 교반하고, 20 ml의 디클로로메탄 중의 2,6-디플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조일 클로라이드 (7. 3.50 g, 11.8 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 6시간 동안 교반한 후 실온으로 철야 가온하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 목적하는 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (디클로로메탄/메탄올 5%)에 의해 단리하여 백색 고체 (9, 1.2 g, 31.4%)를 얻었다.

단계 6: 프로판-1-술폰산 {2,4-디플루오로-3-[5-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐]-페닐}-아미드 (P-0001)의 제조:

프로판-1-술폰산 [3-(5-브로모-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 (9, 10 mg, 0.022 mmol)를 5 mL 마이크로파 바이알 내로 칭량하고, 2-메톡시피리미딘-5-보론산 (10, 4.4 mg, 0.028 mmol)과 합한 후, 600 ㎕의 아세토니트릴 및 500 ㎕의 1 M 탄산칼륨 및 스패툴라 팁 (spatula tip) (약 1 mg)의 [1,1"-비스(디페닐포스피노)-페로센]디클로로팔라듐(II)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로파 내에서 160℃에서 5분 동안 방사선조사하였다. 용액을 100 ㎕의 아세트산으로 중화시키고, 모든 물질을 4 mL 바이알에 옮기고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 조질 물질을 400 ㎕의 디메틸술폭시드에 용해하고 역상 HPLC에 의해 정제하고, 물 중 0.1% 트리풀루오로아세트산 및 아세토니트릴 중 0.1% 트리풀루오로아세트산, 20-100% 아세토니트릴로 16분에 걸쳐 6 mL/분으로 추출하였다. 적절한 분획을 합하고, 용매를 진공 하에 제거하여 목적하는 화합물 P-0001을 얻었다.

실시예 2: 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 P-0002의 합성.

프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 P-0002를 반응식 2에 제시된 바와 같이 2,4-디플루오로-페닐아민 1로부터 4개의 단계로 합성하였다.

<반응식 2>

단계 1: 프로판-1-술폰산 (2,4-디플루오로-페닐)-아미드 (11)의 제조:

110 mL의 디클로로메탄 중의 2,4-디플루오로-페닐아민 (1. 11.8 g, 91.4 mmol)에, 피리딘 (8.13 mL, 100 mmol) 및 프로판-1-술포닐 클로라이드 (4. 11.3 mL, 100 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 철야 교반한 후, 1 M 수성 염산에 붓고, 수성층을 분리하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 합하고 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 여과하였다. 여액을 진공 하에 농축하였다. 조질 물질을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 화합물 (11, 19.98 g, 92.9%)을 얻었다.

단계 2: 프로판-1-술폰산 (2,4-디플루오로-3-포르밀-페닐)-아미드 (12)의 제조:

-78℃ 아세톤/드라이아이스 조 내에서 냉각한 질소 분위기 하의 10 mL의 테트라히드로푸란 중의 프로판-1-술폰산 (2,4-디플루오로-페닐)-아미드 (11, 1.5 g, 6.38 mmol)에, 리튬 디이소프로필아미드 (테트라히드로푸란 중 0.80 M, 24 mL, n-부틸리튬 및 디이소프로필아민으로부터 새로 제조됨)를 첨가하였다. 30분 후에, N,N-디메틸-포름아미드 (542 ㎕, 7.018 mmol)를 반응물에 적가하였다. 반응물을 30분 동안 -78℃에서 교반한 후, 40분 동안 실온으로 가온하였다. 반응물을 물에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 여과하였다. 여액을 진공 하에 농축하고, 헥산 중의 5% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 화합물을 담황색 고체 (12, 300 mg, 18%)로서 얻었다.

추가의 물질은 다음 단계를 위해 유사하게 제조하였다.

단계 3: 프로판-1-술폰산 {3-[(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)-히드록시-메틸]-2,4-디플루오로페닐}-아미드 (14)의 제조:

1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-카르보니트릴 (13, 301 mg, 2.10 mmol), 프로판-1-술폰산 (2,4-디플루오로-3-포르밀-페닐)-아미드 (12, 1.11 g, 4.20 mmol) 및 수산화칼륨 (354 mg, 6.31 mmol)을 바이알 내에서 4.2 mL의 메탄올과 합하였다. 반응물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 용액을 0.1 N 수성 염산으로 중화시키고 에틸 아세테이트로 3x 추출하였다. 유기층을 합하고 염수로 세척한 후, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 이를 실온에서 주말에 걸쳐 교반시킨 후, 에틸 아세테이트 및 물로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척한 후 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 여액으로부터 용매를 제거하였다. 생성되는 물질을 헥산 중 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 화합물 (14, 315 mg)을 얻었다.

단계 4: 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 (P-0002)의 제조:

5 ml의 테트라히드로푸란에 용해시킨 프로판-1-술폰산 {3-[(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)-히드록시-메틸]-2,4-디플루오로페닐}-아미드 (14. 313 mg, 0.770 mmol)에, 데스-마틴 (Dess-Martin) 페리오디난 (327 mg, 0.770 mmol)을 고체로서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 물로 켄칭하였다. 수성층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 합하고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고 여과하였다. 여액을 진공 하에 농축하고, 생성되는 잔류물을 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 화합물 (P-0002, 179 mg)을 얻었다.

실시예 3: 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2-플루오로-페닐]-아미드 P-0003의 합성.

프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2-플루오로-페닐]-아미드 P-0003을 반응식 3에 제시된 바와 같이 4-클로로-2-플루오로-페닐아민 15로부터 9개의 단계로 합성하였다:

<반응식 3>

단계 1: 3-아미노-6-클로로-2-플루오로-벤조산 벤질 에스테르 (16)의 제조:

질소 분위기 하에 드라이아이스/아세톤 조로 냉각한 300 mL의 테트라히드로푸란 중의 4-클로로-2-플루오로-페닐아민 (15, 6.30 mL, 57.0 mmol)에, n-부틸리튬 (헥산 중 2.50 M, 24.4 mL)을 서서히 첨가하였다. 20분 후에, 테트라히드로푸란 (40.0 mL)에 용해시킨 1,2-비스-(클로로-디메틸-실라닐)-에탄 (12.9 g, 60.0 mmol)을 반응물에 서서히 첨가하였다. 1시간 후에, n-부틸리튬 (헥산 중 2.50 M, 25.0 mL)을 반응물에 서서히 첨가하였다. 반응물을 -78℃에서 20분 동안 교반한 후 60분에 걸쳐 실온으로 가온하였다. 반응물을 -78℃로 냉각한 후, n-부틸리튬 (헥산 중 2.50 M, 26.0 mL)을 서서히 첨가하였다. 80분 후에, 벤질 클로로포르메이트 (2, 10.0 mL, 70.0 mmol)을 반응물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 철야 교반한 후, 80 mL의 물 및 25 mL의 농축 염산을 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 실온으로 가온하였다. 유기층을 분리시켰다. 수성층을 탄산칼륨으로 염기화하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 합하고 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 목적하는 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (에틸 아세테이트/헥산 20%)에 의해 단리하여 무색 오일 (16, 12.5 g, 78.3%)을 얻었다.

단계 2: 6-클로로-2-플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조산 벤질 에스테르 (17)의 제조:

28 mL의 디클로로메탄 중의 3-아미노-6-클로로-2-플루오로-벤조산 벤질 에스테르 (16, 1.20 g, 4.3 mmol)에, 피리딘 (0.52 mL, 6.4 mmol) 및 프로판-1-술포닐 클로라이드 (4, 0.685 g, 4.8 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 철야 교반한 후, 물에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 목적하는 화합물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 단리하여 무색 오일 (17, 960 mg, 58.0%)을 얻었다.

단계 3: 6-클로로-2-플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조산 (18)의 제조:

100 mL의 테트라히드로푸란 중의 6-클로로-2-플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조산 벤질 에스테르 (17, 6.00 g, 15.6 mmol)에, 100 mL의 1.0 M 수성 수산화칼륨을 첨가하였다. 반응물을 환류로 철야 가열한 후, 물에 붓고, 1 N 수성 염산으로 pH 2로 산성화하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기부를 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하여 목적하는 화합물을 백색 고체 (18. 3.95 g, 85.8%)로서 얻었다.

단계 4: 2-플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조산 (19)의 제조:

10 mL의 메탄올 중의 6-클로로-2-플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조산 (18, 0.69 g, 2.3 mmol)에, 탄소 상의 20% 수산화팔라듐 (200 mg)을 첨가하였다. 반응물을 수소 하에 50 psi에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하여 목적하는 화합물 (19)를 백색 고체로서 얻고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.

단계 5: 2-플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조산 메틸 에스테르 (20)의 제조:

100 mL의 디클로로메탄 중의 2-플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조산 (19, 5.05 g, 19.3 mmol)에, N,N-디메틸포름아미드 (0.075 mL, 0.97 mmol)를 질소 분위기 하에 첨가하였다. 반응물을 얼음/물로 냉각한 후, 옥살릴 클로라이드 (디클로로메탄 중 2.00 M, 10.8 mL, 21.6 mmol)를 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3.0시간 동안 교반하였다. 반응물을 얼음/물로 냉각한 후, 메탄올 (36.0 mL, 0.89 mol)을 서서히 첨가하였다. 반응물을 실온에서 철야 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축하고, 헥산 중 30% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 화합물을 조질 백색 고체 (20, 4.0 g)로서 얻고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.

단계 6: 프로판-1-술폰산 (2-플루오로-3-히드록시메틸-페닐)-아미드 (21)의 제조:

133 mL의 테트라히드로푸란 중의 2-플루오로-3-(프로판-1-술포닐아미노)-벤조산 메틸 에스테르 (20, 3.80 g, 13.8 mmol)에, 리튬 테트라히드로알루미네이트 (테트라히드로푸란 중 1.00 M, 20.0 mL, 20.0 mmol)를 질소 분위기 하에 실온에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 8시간 동안 교반한 후, 10 g의 황산나트륨 10수화물을 첨가하였다. 12시간 후에, 반응물을 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하고, 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 화합물을 백색 고체 (21, 3.0 g, 87.9%)로서 얻었다.

단계 7: 프로판-1-술폰산 (2-플루오로-3-포르밀-페닐)-아미드 (22)의 제조:

5.0 mL의 테트라히드로푸란 중의 프로판-1-술폰산 (2-플루오로-3-히드록시메틸-페닐)-아미드 (21, 0.20 g, 0.81 mmol)에, 데스-마틴 페리오디난 (0.377 g, 0.89 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 10분 동안 교반한 후, 물에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 여과하였다. 여액을 진공 하에 농축하고, 헥산 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 화합물을 백색 고체 (22, 100 mg, 50.0%)로서 얻었다.

단계 8: 프로판-1-술폰산 {3-[(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)-히드록시-메틸]-2-플루오로-페닐}-아미드 (23)의 제조:

1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-카르보니트릴 (13, 132 mg, 0.923 mmol), 프로판-1-술폰산 (2-플루오로-3-포르밀-페닐)-아미드 (22, 151 mg, 0.616 mmol) 및 수산화칼륨 (104 mg, 1.85 mmol)을 환저 플라스크 내에서 1.2 mL의 메탄올과 합하였다. 반응물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 용액을 0.1 N 수성 염산으로 중화시키고 에틸 아세테이트로 3x 추출하였다. 유기층을 합하고 염수로 세척한 후, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 생성되는 물질을 에틸 아세테이트 및 디클로로메탄으로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 화합물 (23, 79 mg)을 얻었다.

단계 9: 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2-플루오로-페닐]-아미드 (P-0003)의 제조.

1 mL의 테트라히드로푸란에 용해시킨 프로판-1-술폰산 {3-[(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)-히드록시-메틸]-2-플루오로-페닐}-아미드 (23, 77 mg, 0.20 mmol)에, 데스-마틴 페리오디난 (92.5 mg, 0.218 mmol)을 고체로서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 물로 켄칭하였다. 수성층을 분리시키고 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 합하고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고 여과하였다. 여액을 진공 하에 농축하고, 생성되는 잔류물을 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적하는 화합물 (P-0003, 67 mg)을 얻었다.

실시예 4: N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-2,5-디플루오로-벤젠술폰아미드 P-0004의 합성.

N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-2,5-디플루오로-벤젠술폰아미드 P-0004를 반응식 4에 제시된 바와 같이 2,4-디플루오로-페닐아민 1로부터 6개의 단계로 합성하였다.

<반응식 4>

단계 1: (2,4-디플루오로-페닐)-카르밤산 벤질 에스테르 (24)의 제조:

2,4-디플루오로-페닐아민 (1, 50.00 g, 0.39 mol)을 550 mL의 무수 디클로로메탄 및 무수 피리딘 (61.27 g, 0.77 mol)에 첨가한 후, 온도를 <30℃에서 유지하면서 벤질 클로로포르메이트 (2, 79.28 g, 0.46 mol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 추가의 6.61 g (0.04 mol)의 벤질 클로로포르메이트를 첨가하고, 반응물을 추가로 2시간 동안 교반한 후, 추가의 6.61 g의 벤질 클로로포르메이트를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 철야 교반한 후, 감압 하에 농축하고, 250 mL의 물로 희석하였다. 2 M 수성 염산으로 pH를 2로 조정한 후, 3 x 250 mL의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 합하고 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 헥산 내에 슬러리화하고, 여과하고, 고체를 모으고 건조시켜 목적하는 화합물 (24, 78.6 g, 77%)을 얻었다,

단계 2: (2,4-디플루오로-3-포르밀-페닐)-카르밤산 벤질 에스테르 (25)의 제조:

질소 하의 환저 플라스크에, 디이소프로필아민 (17.68 g, 174.7 mmol) 및 100 mL의 무수 테트라히드로푸란을 질소 하에 첨가하였다. 용액을 -78℃로 냉각하고, 온도를 <-70℃에서 유지하면서 n-부틸리튬 (헥산 중 1.60 M, 109.2 mL, 174.7 mmol)을 적가하고, 반응물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 온도를 <-70℃에서 유지하면서 100 mL의 무수 테트라히드로푸란 중 (2,4-디플루오로-페닐)-카르밤산 벤질 에스테르 (24, 20.00 g, 76.0 mmol)를 적가하고, 반응물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 온도를 <-70℃에서 유지하면서 무수 디메틸포름아미드 (13.88 g, 190.0 mmol)를 적가하고, 반응물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 후, 실온으로 가온하고 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 150 mL의 물에 붓고, 2 M 수성 염산으로 pH 1로 산성화하고, 3 x 150 mL의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 합하고 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 헥산 내에 슬러리화하고, 여과하고, 고체를 모으고 건조시켜 목적하는 화합물 (25, 20.69 g, 93%)을 얻었다.

단계 3: {3-[(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)-히드록시-메틸]-2,4-디플루오로-페닐}-카르밤산 벤질 에스테르 (26)의 제조:

반응 용기 내로, (2,4-디플루오로-3-포르밀-페닐)-카르밤산 벤질 에스테르 (25, 10.00 g, 34.3 mmol), 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-카르보니트릴 (13, 4.91 g, 34.3 mmol), 50.00 mL의 무수 메탄올, 및 수산화칼륨 (2.77 g, 49.4 mmol)을 질소 하에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 철야 교반하였다. 반응 혼합물을 500 mL의 물에 붓고 3 x 500 mL의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 합하고 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 생성되는 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 화합물 (26, 4.62 g, 31%)을 얻었다.

단계 4: [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-카르밤산 벤질 에스테르 (27)의 제조:

환저 플라스크에 {3-[(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)-히드록시-메틸]-2,4-디플루오로-페닐}-카르밤산 벤질 에스테르 (26, 3.79 g, 8.72 mmol), 20.00 mL의 무수 테트라히드로푸란 및 데스-마틴 페리오디난 (4.44 g, 10.47 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 100 mL의 1 M 탄산칼륨 및 100 mL의 1 M 티오황산나트륨의 혼합물에 붓고, 3 x 150 mL의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 합하고 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 여액을 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 에테르 내에 슬러리화하고, 여과하고, 고체를 모으고 건조시켜 목적하는 화합물 (27, 2.97 g, 79%)을 얻었다.

단계 5: 3-(3-아미노-2,6-디플루오로-벤조일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-카르보니트릴 (28)의 제조:

반응 용기에 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-카르밤산 벤질 에스테르 (27, 1.78 g, 4.12 mmol), 36 mL의 무수 아세토니트릴 및 트리메틸실릴 요오다이드 (3.29 g, 16.47 mmol)를 질소 하에 첨가하고, 반응물을 실온에서 철야 교반하였다. 반응 혼합물을 20 mL의 메탄올로 희석하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 50 mL의 2 M 수산화나트륨으로 희석하고 3 x 50 mL의 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 합하고 200 mL의 10% 티오황산나트륨, 이어서 200 mL의 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 여액을 진공 하에 농축하였다. 조질 물질을 메탄올 내에 슬러리화하고, 고체를 여과에 의해 수집하고 건조시켜 목적하는 화합물 (28, 0.74 g, 60%)을 얻었다.

단계 6: N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-2,5-디플루오로-벤젠술폰아미드 (P-0004)의 제조:

2.7 mL의 테트라히드로푸란 중의 3-(3-아미노-2,6-디플루오로-벤조일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-카르보니트릴 (28, 100 mg, 0.335 mmol)에 0.24 mL의 피리딘을 첨가하였다. 2,5-디플루오로-벤젠술포닐 클로라이드 (29, 107 mg, 0.503 mmol)를 첨가하고, 용액을 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 1 M 수성 염산에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 조질 물질을 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 제거하여 목적하는 화합물 (P-0004, 105 mg)을 얻었다.

실시예 5: N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-3-플루오로-벤젠술폰아미드 P-0005의 합성.

N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-3-플루오로-벤젠술폰아미드 P-0005를 반응식 5에 제시된 바와 같이 3-(3-아미노-2,6-디플루오로-벤조일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-카르보니트릴 28로부터 1개의 단계로 합성하였다.

<반응식 5>

단계 1: N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-3-플루오로-벤젠술폰아미드 (P-0005)의 제조:

3.5 mL의 테트라히드로푸란 중의 3-(3-아미노-2,6-디플루오로-벤조일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-카르보니트릴 (28, 130 mg, 0.436 mmol)에 0.31 mL의 피리딘을 첨가하였다. 3-플루오로-벤젠술포닐 클로라이드 (30, 127 mg, 0.654 mmol)를 첨가하고, 용액을 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 1 M 수성 염산에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 조질 물질을 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출시킨 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 제거하여 목적하는 화합물 (P-0005, 167 mg)을 얻었다.

실시예 6: 피롤리딘-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 P-0006의 합성.

피롤리딘-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 P-0006을 반응식 6에 제시된 바와 같이 3-(3-아미노-2,6-디플루오로-벤조일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-카르보니트릴 28로부터 1개의 단계로 합성하였다.

<반응식 6>

단계 1: 피롤리딘-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 (P-0006)의 제조:

9.5 mL의 테트라히드로푸란 중의 3-(3-아미노-2,6-디플루오로-벤조일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-카르보니트릴 (28, 354 mg, 1.19 mmol)에 0.84 mL의 피리딘을 첨가하였다. 피롤리딘-1-술포닐 클로라이드 (31, 403 mg, 2.37 mmol)를 첨가하고, 용액을 60℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 1 M 수성 염산에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 조질 물질을 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 합하고 용매를 감압 하에 제거하여 목적하는 화합물 (P-0006, 127 mg)을 얻었다.

실시예 7: N,N-디메틸아미노-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 P-0007의 합성.

N,N-디메틸아미노-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 P-0007을 반응식 7에 제시된 바와 같이 3-(3-아미노-2,6-디플루오로-벤조일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-카르보니트릴 28로부터 1개의 단계로 합성하였다.

<반응식 7>

단계 1: N,N-디메틸아미노-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드 (P-0007)의 제조:

3-(3-아미노-2,6-디플루오로-벤조일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-카르보니트릴 (28, 50.0 mg, 0.168 mmol)에 0.50 ml의 피리딘을 첨가한 후 N,N-디메틸아미노-술포닐 클로라이드 (32, 54 ㎕, 0.51 mmol)를 첨가하고, 용액을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 1 M 수성 염산 및 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물, 이어서 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 조질 물질을 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적절한 분획을 합하고 용매를 감압 하에 제거하여 목적하는 화합물 (P-0007, 28 mg)을 얻었다.

실시예 8: 화합물 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007의 염 형태.

P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007은 유기염 복합체를 형성할 수 있어서 용해도를 개선하는, 약염기성 및 약산성 중심을 모두 제공하는 관능기를 갖는 것을 특징으로 한다. 예를 들어, 피롤로[2,3-b]피리딘 부분의 N-7은 약염기성 (pKa 대략 4-5)인 한편, 술폰아미드 질소는 약산성 (pKa 대략 7)이다. 약염기성 및 약산성 중심 때문에, 염 또는 염 복합체는 산 부가 또는 염기 부가에 의해 제조할 수 있다.

염기 부가염, 바람직하게는 유기 염기 부가염, 예를 들어 암모늄, 디에틸아민, 에탄올아민, 에틸렌디아민, 디에탄올아민, t-부틸아민, 피페라진, 메글루민, L-아르기닌, L-히스티딘, 및 L-리신은 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 적당히 가열하면서 (30-35℃) 20-50 용매 부피의 알콜 (예를 들어, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올) 또는 다른 적합한 용매, 예를 들어 아세톤에 용해시킴으로써 형성된다. 현탁액을 교반하고, 별도의 부분의 용매 내에서 연마시킨 1 당량의 염기를 첨가한다. 혼합물을 투명한 용액이 형성될 때까지 불활성 분위기 하에 교반한다. 용액을 여과하고, 용매를 감압 하에 여액으로부터 제거한다. 생성되는 필름은 진공 건조 시에 부서지기 쉬운 고체를 형성한다. 별법으로, 염 형태를 냉 용매, 예를 들어 헵탄, 메틸 t-부틸 에테르, 에틸 아세테이트 등을 용액에 첨가함으로써 침전시킨다. 생성되는 고체를 여과하고 진공 건조시켜 고체를 단리한다. 생성되는 고체를 DSC, XRPD, 용해도 및 고유 용출을 포함한 물리적 특성에 대해 평가한다.

산 부가염, 바람직하게는 유기산 부가염, 예를 들어 아세테이트, 베실레이트, 캄실레이트, 포르메이트, 푸마레이트, 말레에이트, 메실레이트, 니트레이트, 옥살레이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 및 토실레이트는 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 교반하고 가열하면서 (30-35℃) 20-50 용매 부피의 아세톤 (또는 다른 적합한 용매)에 용해시킨 후 1 당량의 산을 첨가함으로써 형성된다. 용액을 2-8℃로 서서히 냉각하고, 여과 또는 원심분리, 이어서 진공 건조에 의해 고체를 단리한다. 생성되는 고체를 DSC, XRPD, 용해도 및 고유 용출을 포함한 물리적 특성에 대해 평가한다.

P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007의 추가의 유기산 염 또는 염 복합체, 예를 들어 시트르산, 타르타르산, 숙신산, 글루타르산 및 아세틸살리실산 염 또는 염 복합체는 적합한 용매, 예를 들어 메탄올 내에 1:1 또는 1:2 화합물:산 비로 형성된다. P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007을 15-20 용매 부피의 메탄올에 첨가하고, 여기서 목적하는 고체는 분무 건조에 의해 또는 비-용매, 예를 들어 헵탄의 첨가 후 여과 및 진공 건조에 의해 단리한다. 생성되는 고체를 DSC, XRPD, 용해도 및 고유 용출을 포함한 물리적 특성에 대해 평가한다.

P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006 또는 P-0007의 광물산염, 예를 들어 황산염, 인산염 및 염산염은 메탄올 또는 에틸 아세테이트 용액으로부터 제조한다.

생성되는 염 또는 염 복합체는 또한 예를 들어 분무-건조 기술 또는 미세침전된 벌크 (bulk) 가공을 통해 바람직한 무정형 형태를 제공하도록 가공될 수 있거나, 직접 압축가능한 또는 캡슐화된 투여형을 제공하도록 적합한 부형제 물질을 사용하여 가공될 수 있다. 염 또는 염 복합체는 또한 전하 전달 파트너의 적절한 선택과 함께 모 화합물의 기계화학 (예를 들어, 롤러 다짐) 또는 마이크로파 방사선 조사에 의해 달성할 수 있다. 상기 방법은 용매 활용을 최소화하고, 수율, 순도 및 처리율 (throughput)을 증가시키고, 또한 통상적인 용매 기술을 이용하여 획득가능하지 않은 구성체를 달성하기 위해 사용된다.

실시예 9: 화합물 특성.

생화학적 분석에서 Raf 키나제 및 다른 키나제에 대한 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007의 억제 활성은 Raf 키나제에 대한 선택적인 활성을 보인다. IC₅₀은 모든 화합물에 대해 B-Raf V600E 돌연변이체에 대해 < 0.1 μM에서 측정되었다. 화합물은 세포 기반 분석에서 또한 효과적이었고, 여기서 BRaf V600E 돌연변이를 갖는 암 세포주의 성장 억제가 관찰되었고, 이때 상기 돌연변이가 없는 암 세포주에서 성장 억제는 보다 적거나 없었다. BRaf V600E 돌연변이를 갖는 Colo205 결장직장 종양 세포의 이종이식편 마우스 모델에서, 각각의 화합물을 사용한 처리는 10 mg/kg의 용량에서 종양 세포 성장의 유의한 억제를 보여주었다.

임의의 Raf 키나제에 대한 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007의 억제 활성은 질환의 치료에서 그들의 활성에 중요하지만, 본원에 기재된 화합물은 의약품으로서 또한 잇점을 제공하는 유리한 특성을 보인다. 생화학적 또는 세포 기반 분석에서 Raf 키나제, 특히 B-Raf V600E에 대한 키나제 억제 활성을 입증하는데 추가로, 화합물은 유리한 용해도, 유리한 약동학적 특성, 및 낮은 Cyp 억제를 보일 수 있다. 화합물을 다음 분석 또는 당업자에게 이용가능한 유사한 분석으로 평가한다.

생화학적 및 세포 기반 활성에 대한 분석은 예를 들어, 분석에 관련되어 본원에 참고로 포함되는 PCT 공개 WO 2007/002433에 설명된 바와 같이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 생화학적 활성 IC₅₀ 값은 A-Raf 키나제 활성, B-Raf 키나제 활성, c-Raf-1 키나제 활성, 또는 B-Raf V600E 키나제 활성의 억제에 관하여 결정되고, 여기서 펩티드 기질의 인산화의 억제가 화합물 농도의 함수로서 측정된다. 시험할 화합물을 디메틸 술폭시드 내에 0.1 mM의 농도로 희석한다. 이들을 총 8개의 희석점에 대해 96 웰 플레이트 내에서 15 ㎕을 30 ㎕의 디메틸 술폭시드 내로 7회 연속 희석하고, 각각의 희석점에 대해 1 ㎕을 분석 플레이트의 웰에 첨가한다. 384 웰 플레이트 내의 각각의 웰이 0.1 ng Raf 효소 (즉, 임의의 A-Raf, B-Raf, c-Raf-1 또는 B-Raf V600E, 업스테이트 바이오테크놀로지 (Upstate Biotechnology) 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조된), 50 mM HEPES (pH 7.0), 50 mM NaCl, 2 mM MgCl₂, 1 mM MnCl₂, 0.01% 트윈-20, 1 mM DTT, 및 기질로서 100 nM 비오틴-MEK1과 함께 10 ㎕ 부피 내에 1 ㎕의 화합물을 함유하도록 플레이트를 준비한다. 10 ㎕의 200 μM ATP (즉, 최종 100 μM ATP)를 첨가하여 반응을 개시한다. 키나제 반응물을 45분 동안 실온에서 인큐베이션한 후, 5 ㎕/웰의 중지 용액을 첨가한다 (공여자 비드 (스트렙타비딘 코팅된 비드, 퍼킨 엘머 (Perkin Elmer)), 수용자 비드 (단백질 A 코팅, 퍼킨 엘머), 및 항-포스포-MEK1/2 항체 (셀시그널 (CellSignal)) (각각 10 ㎍/mL의 최종 농도)를 갖는 25 mM Hepes (pH 7.5), 100 mM EDTA, 0.01% BSA). 플레이트를 3시간 동안 실온에서 인큐베이션하고, 엔비전 (Envision) 판독기 (퍼킨 엘머) 상에서 판독한다. Mek1의 인산화는 신호가 키나제 활성과 상호관련되도록 항-포스포-MEK1/2항체의 결합 및 공여자 및 수용자 비드의 회합을 일으킨다. 신호 대 화합물 농도를 사용하여 IC₅₀을 결정한다.

화합물을 B-Raf V600E 돌연변이를 갖는 또는 갖지 않는 세포, 예를 들어 B-Raf V600E 돌연변이를 갖는 세포주 (A375 및 COLO205), 및 야생형 B-RAF를 갖는 종양발생성 세포주 (SW620 및 SK-MEL-2)를 사용하는 다양한 세포 기반 분석으로 평가한다. 시약 및 분석 조건은 다음과 같다

A375 세포 성장 배지:

둘베코 (Dulbecco) 변형 이글 (Eagle) 배지, 4 mM L-글루타민, 4.5 g/L D-글루코스, 10% 태소 혈청.

COLO205 세포 성장 배지:

RPMI 1640, 2 mM L-글루타민, 1.5 g/L 중탄산나트륨, 4.5 g/L D-글루코스, 10 mM HEPES, 1.0 mM 피루브산나트륨, 10% 태소 혈청.

SW620 세포 성장 배지:

레이보비츠 (Leibovitz) L-15 배지, 2 mM L-글루타민, 10% 태소 혈청.

SK-MEL-2 세포 성장 배지:

최소 이글 필수 배지, 2 mM L-글루타민, 1.5 g/L 중탄산나트륨, 0.1 mM 비필수 아미노산, 1.0 mM 피루브산나트륨, 10% 태소 혈청.

제1일에, 세포를 96-웰 폴리스티렌 조직 배양 플레이트에서 200 ㎕/웰의 성장 배지 내에 2,000 세포/웰 (A375, COLO205, SK-MEL-2) 또는 SW620에 대해 5,000 세포/웰로 접종하고, 37℃ 및 5% CO₂에서 철야 인큐베이션한다.

제2일에, 디메틸 술폭시드 내의 4 mM의 화합물을 총 8개의 농도점에 대해 1:4 (10 ㎕과 30 ㎕ 디메틸 술폭시드)로 7회 연속 희석한다. 각각의 희석점에 대해, 1 ㎕ 분취액을 음성 대조군으로서 1 ㎕의 디메틸 술폭시드 (각각의 샘플은 0.5% 디메틸 술폭시드)와 함께, 세포 (20 μM에서 최고 희석점)를 담은 웰에 첨가한다. 세포를 3일 동안 37℃에서 5% CO₂ 내에서 인큐베이션한다.

제5일에, 셀 타이터 글로 (Cell Titer Glo; 프로메가 (Promega))를 해동시키고 100 ㎕을 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 1-2분 동안 진탕하였다. 플레이트를 10분 동안 실온에서 인큐베이션한 후, 형광 신호를 판독한다 (예를 들어, 사파이어 (Safire) 판독기 상에서). 측정된 형광은 세포수와 직접 상관성이어서, 화합물 농도의 함수로서 판독치를 이용하여 IC₅₀ 값을 결정할 수 있다.

다음 표는 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 및 P-0007에 대한 B-Raf 및 B-Raf V600E 생화학적 억제 활성 및 A375, COLO205, SW620 및 SK-MEL-2 세포 성장 억제 활성을 나타내는 데이타를 제공한다:

다음 표는 다른 단백질 키나제에 관하여 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 및 P-0007에 대한 생화학적 억제 활성을 나타내는 데이타를 제공한다:

화합물은 또한 Colo205에 대한 이종이식편 마우스 모델에서 생체내 활성을 나타낸다. 암컷 nu/nu 마우스에게 공여자 마우스로부터의 Colo-205 투관침 (trocar) 단편을 피하에 겨드랑이에서 높게 이식한다. 종양 성장을 대략 100 mg 크기까지 모니터링하고, 군 내의 평균 종양 부담 (burden)이 전체 평균 종양 부담의 10% 이내에 있도록 마우스를 처리군에 분포시킨다. 마우스를 5% DMSO 및 95% CMC (1%) 중 비히클 대조군, 양성 대조군 또는 화합물 (군 당 8마리 마우스)로 처리하고, 이때 화합물은 14일 동안 10 mg/kg로 매일 투약하였다. 마우스를 매일 관찰하고, 이때 종양 부담 및 체중은 매주 2회 측정한다. 종양 부담이 1500-2000 mg을 초과하는 동물 및 빈사 상태의 임의의 동물을 안락사시킨다. 비히클 대조군 마우스의 평균 종양 성장을 시험 화합물 마우스의 평균 종양 성장에 비교한다. 종양 성장 억제 %는 100 x [(종양 성장 대조군 - 종양 성장 시험 화합물) / 종양 성장 대조군]으로서 계산한다.

다음 표는 Colo205 이종이식편 마우스 모델에서 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006 및 P-0007에 대한 종양 성장 억제 %를 나타내는 데이타를 제공한다:

상대 용해도의 표시로서, 수용액 내에서 화합물의 혼탁도를 평가한다. 상이한 생리학적 구획, 예를 들어 위, 장 및 혈액 내에서 가능한 화합물 특성을 평가하기 위해, 다양한 pH를 갖는 일련의 수성 버퍼를 사용한다. 따라서, 각각의 화합물을 4개의 상이한 생리학상 관련 버퍼에 희석하고, 용액 혼탁도를 분광법에 의해 측정한다. 3개의 파장 (490, 535, 및 650 nm)에서 평균 광학 밀도를 0.01 초과로 상승시키기에 충분한 불용성 현탁액을 형성함으로써 혼탁도를 나타내는 화합물의 농도를 이용하여 그 버퍼 내에서 화합물 용해도의 한계를 정의한다.

화합물을 디메틸 술폭시드에 25 mM의 농도로 용해시킨 후, 96 웰 플레이트 내에서 1:1로 연속 희석하고, 여기서 순수한 디메틸 술폭시드 내에 10회 희석하고, 이때 각각의 열의 마지막 웰은 디메틸 술폭시드 블랭크이다. 분석 플레이트에서, 99 ㎕의 적절한 버퍼를 각각의 웰에 첨가하고, 1 ㎕의 각각의 샘플 희석액을 버퍼에 첨가하여, 상이한 pH를 갖는 수용액 내에서 일정 범위의 최종 총 농도를 달성한다. 사용된 버퍼는 인공 위액 (Simulated Gastric Fluid: SGF-pH 1.5) 0.5M NaCl (pH 1.5); 인공 장액 (Simulated Intestinal fluid: SIF-pH 4.5 및 pH 6.8) 0.05M NaH₂PO₄ (pH 4.5 및 6.8); 및 Hepes 버퍼 (HEPES-pH 7.4) 10 mM HEPES, 150 mM NaCl (pH 7.4)이다. 대조 화합물 파이렌, 에스트리올 및 프로프라놀롤 HCl을 또한 평가한다. 플레이트를 원심분리한 후 1분 동안 혼합하고, 존재하는 혼탁도 반영하는, 웰 당 4개의 위치에서 가시광 범위 내의 파장 (490, 535, 및 650 nm)를 판독하기 위해 테칸 사파이어 (Tecan Safire) II를 사용하여 흡광도를 판독한다. 각각의 웰에서 각각의 파장에 대한 평균 광학 밀도를 화합물 농도에 대하여 그래프로 그리고, 곡선이 각각의 파장에 대한 0.01의 역치 O.D.에 교차하는 농도를 종점 혼탁도 분석 결과로서 기록한다. 3개의 파장의 평균을 이용하여 화합물의 혼탁도를 비교한다. 화합물은 역치 농도가 < 31.3 μM이면 낮은 용해도, 역치 농도가 31.3 μM 내지 250 μM이면 중정도 용해도, 역치 농도가 > 250 μM이면 높은 용해도를 갖는 것으로 간주된다.

다음 표는 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 및 P-0007에 대한 각각의 pH에서 혼탁도 역치 농도에 기반하는 상대 용해도 (L = 낮은, M = 중정도, H = 높은)를 나타내는 데이타를 제공한다:

CYP (시토크롬 P450) 효소는 간에 존재하는 주요 약물 대사 효소이다. 각각의 CYP1A2, CYP2C19, CYP2C9, CYP2D6, CYP3A4(BFC) 및 CYP3A4(BQ)에 대한 CYP 효소 활성 (IC₅₀)의 억제를 화합물에 대해 결정하고, 여기서 공지의 기질의 대사 억제는 대사 생성물의 형광을 감소시킨다. 생성물의 형광을 화합물 농도의 함수로서 모니터링한다.

화합물을 디메틸 술폭시드 내에 100 mM의 농도로 용해시킨다. 이들을 1 ㎕을 82 ㎕의 아세토니트릴에 희석시킨다. 이어서, 상기 용액의 11 ㎕ 분취액을 204 ㎕의 보조인자 믹스 (cofactor mix) (1.3% NADPH 재생 시스템 용액 A, 1.04% NADPH 재생 시스템 용액 B (비디 바이오사이언시즈 (BD Biosciences)), 5% 아세토니트릴 및 0.05% 디메틸 술폭시드)에 첨가한다. 이어서, 이들을 총 10개의 지점에 대해 1:1 (160 ㎕ 대 160 ㎕ 보조인자 믹스)로 연속 희석한다. 상기 최종 혼합물의 10 ㎕ 분취액을 384 웰 분석 플레이트에 분배하고, 10분 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 효소 및 기질 믹스 (10 ㎕: 0.5 pmol CYP1A2/5 μM CEC; 1.0 pmol CYP2C9/75 μM MFC; 0.5 pmol CYP2C19/25 μM CEC; 1.5 pmol CYP2D6/1.5 μM AMMC; 1.0 pmol CYP3A4/50 μM BFC; 또는 1.0 pmol CYP3A4/40 μM BQ)를 이들 분석 플레이트에 첨가한다. 분석 플레이트를 37℃에서 인큐베이션하고 (CYP1A2 - 15분; CYP2C9 - 45분; CYP2C19, 2D6 및 3A4 - 30분), 테칸 사파이어 2 플레이트 판독기 (CYP1A2, 2C19 및 3A4 409 ex/460 cm; CYP2C9 및 2D6 409 ex/530 em)에서 판독한다. 신호 대 화합물 농도를 사용하여 IC₅₀을 결정한다. 상기 분석을 위한 효소 및 기질은 비디 바이오사이언시즈로부터 입수한다. 생체 내에서 CYP 효과를 결정하는데 다른 인자가 관여되지만, 화합물은 바람직하게는 IC₅₀ 값이 > 5 μM, 보다 바람직하게는 IC₅₀ 값이 > 10 μM이다.

다음 표는 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 및 P-0007에 대한 Cyp 억제 활성을 나타내는 데이타를 제공한다:

화합물 (임의의 그의 고체형 또는 제형 포함)의 약동학적 특성을 수컷 스프라그-도울리 래트 또는 수컷 비글 (Beagle) 개에서 평가한다. 래트에게 수술에 의해 이식된 경정맥 카테터 (catheter)를 통한 IV 주사에 의해 또는 경구 개비지 (oral gavage) (PO)에 의해 화합물을 매일 투약한다. 각각의 화합물을 디메틸 술폭시드 중의 20 mg/mL 원액 용액으로서 제조하고, 이를 더욱 희석하여 IV 또는 PO 제형을 위한 목적하는 농도의 투약 원액을 제공한다. IV 투약을 위해, 투약 원액을 솔루톨 (Solutol)®:에탄올:물의 1:1:8 혼합물로 희석한다. PO 투약을 위해, 투약 원액을 1% 메틸셀룰로스 내에 희석한다. 카세트 (cassette) 형식 (또는 각각의 화합물, 그의 고체형태 또는 그의 제형이 개별적으로 이루어지는)에서, 화합물을 IV 투약을 위해 각각 0.5 mg/mL 및 PO 투약을 위해 각각 0.4 mg/mL로 희석하고, 각각 1 mg/kg (2 mL/kg) 또는 2 mg/kg (5 mL/kg)로 투약한다. IV 투약한 동물에 대해, 꼬리 정맥 혈액 샘플을 리튬 헤파린 항응고제를 사용하여 매일 투약 후 5, 15, 30 및 60분 및 4, 8, 및 24시간에 수집한다. PO 투약한 동물에 대해, 꼬리 정맥 혈액 샘플을 리튬 헤파린 항응고제를 사용하여 매일 투약 후 30분, 1, 2, 4, 8 및 24시간에 수집한다. 개에게 50 mg/mL에서 적합한 제형 내의 경구 캡슐에 의해 매일 투약한다. 두부 정맥 혈액 샘플을 리튬 헤파린 항응고제를 사용하여 매일 투약 후 30분, 1, 2, 4, 8 및 24시간에 수집한다. 모든 샘플을 혈장으로 가공하고 LC/MS/MS에 의한 각각의 화합물의 나중의 분석을 위해 동결시킨다. 시간의 함수로서 혈장 수준을 도면으로 작성하여 AUC (ng*hr/mL)를 평가한다. 본 발명에 따른 화합물은 바람직하게는 앞서 설명된 화합물에 비해 개선된 약동학적 특성을 보이고, 즉, 이들은 앞서 설명된 화합물에 비해 AUC, Cmax 및 반감기 중 하나 이상에 대해 실질적으로 더 높은 값을 가진다.

실시예 10: 4가지 인간 암 세포주에서 표준 치료 (Standard-of-Care) 화학요법제와 조합한 화합물의 효능.

표준 화학요법제, 예를 들어 5-플루오로우라실, 카르보플라틴, 다카르바진, 게피티닙, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, SN-38, 테모졸로미드, 또는 빈블라스틴으로 조합한 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 또는 그의 염을 인간 종양 세포를 치사시키는 유효성에 대해 평가할 수 있다. 인간 종양 세포주, 예를 들어 A-375 (악성 흑색종), SK-MEL-2 (악성 흑색종, 피부 전이), COLO 205 (결장직장 선암종, 복수 전이) 또는 SW-620 (결장직장 선암종, 림프절 전이)을 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006, 또는 P-0007 단독으로 또는 상기 언급된 화학요법제 중 하나와 조합으로 치료할 수 있다.

종양 세포를 37℃에서 가습 분위기 (5% CO₂, 95% 공기) 내에서 단층으로서 성장시킨다. 세포를 적합한 배양 배지, 예를 들어 2 mM L-글루타민을 함유하고 10% 태소 혈청 (Ref DE14-801E, 캄브렉스 (Cambrex, 벨기에 베르비에))을 보충한 RPMI 1640 (Ref BE12-702F, 캄브렉스) 내에서 성장시킨다. 실험 용도를 위해, 종양 세포를 칼슘 또는 마그네슘을 갖지 않은 행크 배지 (Ref BE10-543F, 캄브렉스) 내에 희석된 트립신-베르센 (Ref 02-007H, 캄브렉스)을 사용한 5-분 처리에 의해 배양 플라스크로부터 탈착시킨다. 트립신 처리는 배양 배지 첨가에 의해 중화시킨다. 세포를 혈구계에서 계수하고 그들의 생활력을 0.25% 트리판 블루 배제에 의해 평가한다. 세포주를 제조자의 지시에 따라 미코텍트 (Mycotect) 분석 키트 (Ref 15672-017, 인비트로겐 (Invitrogen, 프랑스 세르지-퐁투아즈)를 사용하여 미코플라스마 (mycoplasma) 오염에 대해 검토한다. 미코플라스마 시험은 세포주의 배양 상등액으로부터 분석하고, 음성 및 양성 대조군에 대해 비교한다.

종양 세포 (웰 당 10,000개)를 96-웰 평저 미세적정 플레이트 (Ref 055260, 넝크 (Nunc, 프랑스 브루마스 더쳐)에 플레이팅하고, 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션한 후, 10% FBS를 보충한, 약물이 없는 배양 배지 100 ㎕ 내에서 처리한다. 각각의 세포주에 대해 사용할 각각의 화합물의 IC₅₀을 평가하기 위해, 종양 세포를 10% FBS를 보충하고 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006 또는 P-0007, 또는 5-플루오로우라실, 카르보플라틴, 다카르바진, 게피티닙, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, SN-38, 테모졸로미드 또는 빈블라스틴 중 하나를 함유하는 RPMI 1640의 200 ㎕ 최종 부피 내에서 인큐베이션한다. 화합물을 적합한 농도 범위에서, 예를 들어 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006 또는 P-0007, 5-플루오로우라실, 다카르바진 또는 게피티닙에 대해 10^-8 내지 10^-3 M, 카르보플라틴, 옥살리플라틴 또는 테모졸로미드에 대해 10^-9 내지 10^-4 M, 파클리탁셀 또는 SN-38에 대해 10^-11 내지 10^-6 M, 및 빈블라스틴에 대해 10^-15 내지 10^-10 M에서 시험한다. P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006 또는 P-0007은 DMSO 내에 용해시키고, 배양 배지로 목적하는 농도로 희석한다. 5-플루오로우라실 (50 mg/ml, 다코타 팜 (Dakota Pharm, 프랑스 르쁠레시스 로방송), 카르보플라틴 (10 mg/ml, 아구에탕 (Aguettant, 프랑스 리옹)), 및 파클리탁셀 (6 mg/ml, 브리스톨-마이어스 스퀴브 에스피에이 (Bristol-Myers Squibb SpA, 프랑스 뤼에유 말메종))을 배양 배지로 목적하는 농도로 희석한다. 다카르바진 (시그마 (Sigma, 프랑스 생 캉탱 팔라비에)) 및 빈블라스틴 (릴리 프랑스 에스.에이. (Lilly France S.A.. 프랑스 생 끌루))은 NaCl 0.9% 내에 용해시키고 배양 배지로 목적하는 농도로 희석시킨다. 게피티닙은 RPMI 1640 및 DMSO의 혼합 용액에 용해시키고 배양 배지로 목적하는 농도 (0.1% v/v의 최대 최종 DMSO)로 희석한다. SN-38 (엘케이티 래보래토리스, 인크. (LKT Laboratories, Inc., 미국 미네소타주 세인트폴))은 DMSO에 용해시키고 배양 배지로 목적하는 농도 (0.1% v/v의 최대 최종 DMSO)로 희석시킨다. 테모졸로미드 (엘케이티 래보래토리스, 인크., 미국 미네소타주 세인트폴)는 주사용수에 용해시키고 배양 배지로 목적하는 농도로 희석시킨다. 세포를 96시간 동안 시험 물질의 존재 하에 37℃에서 5% CO₂ 하에 인큐베이션한다. 처리의 끝에, 세포독성 활성을 MTT 분석에 의해 평가한다.

MTT 분석을 위해, 세포 처리의 끝에, 포스페이트 완충 염수 (PBS, Ref BE17-517Q, 캄브렉스) 중의 5 mg/ml 용액 0.22 μm 여과된 테트라졸륨 시약 (MTT, Ref M2128, 시그마) 20 ㎕을 각각의 웰에 첨가한다. 배양 플레이트를 2 h 동안 37℃에서 인큐베이션한다. 생성되는 상등액을 제거하고, 포르마잔 결정을 웰 당 200 ㎕의 DMSO에 용해시킨다. VICTOR³™ 1420 다중표지된 계수기 (월락 (Wallac), 퍼킨 엘머 (Perkin Elmer, 프랑스 코르타뵈))를 사용하여 각각의 웰에서 570 nm에서 흡광도 (OD)를 측정한다.

각각의 세포주 상에서 각각의 화합물에 대한 IC₅₀을 각각의 샘플의 OD 측정치로부터 결정한다. 세포 증식의 용량 반응 억제를 다음과 같이 표현한다:

각각의 농도에 대한 다수 측정치의 평균을 약물 농도에 대하여 도면으로 작성한다. XLFit 3 (IDBS, 영국)을 이용하여 용량-반응 곡선을 도면으로 작성한다. IC₅₀ (세포 증식의 50% 억제를 얻기 위한 약물 농도) 결정 값은 XLFit 3을 이용하여 반-로그 곡선으로부터 계산한다. 각각의 세포주에서 각각의 화합물에 대해 계산된 IC₅₀ 값을 이용하여 조합으로 사용할 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006 또는 P-0007 및 표준 화학요법제의 농도를 결정한다.

세포를 IC₅₀ 결과에 기초하여 5가지 농도의 P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006 또는 P-0007 및 5가지 농도의 5-플루오로우라실, 카르보플라틴, 다카르바진, 게피티닙, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, SN-38, 테모졸로미드 또는 빈블라스틴 중 하나의 조합물로 처리한다. 화합물 및 세포를 상기 설명된 IC₅₀ 결정에 따라 처리하고, MTT 분석에 의해 분석한다.

결과를 평가하여 조합물이 상승적인지 길항적인지 여부를 결정한다. 화합물 상호작용은 다중 약물 효과 분석에 의해 계산하고, 문헌 [Chou and Talalay, Adv. Enzyme Regul. 1984, 22: 27-55]에 설명된 방법에 따라 중앙 식 원리에 의해 수행한다.

조합 지수 (CI)는 효능 (D_m 또는 IC₅₀) 및 용량-효과 곡선의 형태 (m 값)를 고려하는 초우 (Chou) 등의 식 ([Adv. Enzyme Regul. 1984, 22: 27-55]; [Encyclopaedia of human biology, Academic Press, 1991, 2: 371-9]; [Synergism and Antagonism in Chemotherapy, Academic Press, 1991, 61-102])에 의해 계산될 것이다. 2개의 화합물의 CI에 대한 일반식은 다음과 같다:

여기서, 분모의 (D_x)₁ 및 (D_x)₂는 억제의 x%를 나타내는 화합물 1 및 화합물 2 단독에 대한 용량 (또는 농도)인 한편, 분자의 (D)₁ 및 (D)₂는 또한 x% 억제하는 (동효력 (iso-effective)) 조합한 화합물 (1 및 2) 모두의 용량이다. CI<1, =1, 및 >1은 각각 상승작용, 상가 효과 및 길항작용을 나타낸다.

(D_x)₁ 및 (D_x)₂는 초우 등 (J. Natl. Cancer Inst. 1994. 86:1517-24)의 중앙-효과 (median-effect) 식으로부터 계산할 수 있다

여기서, D_m은 중앙-효과 도면의 x-절편의 안티-로그로부터 얻어지는 중앙-효과 용량이고, x = 로그(D) 대 y = 로그{f_a/(1-f_a}}, 또는 D_m = 10^-(y-절편)m; m은 중앙-효과 도면의 기울기이고, f_a는 처리에 의해 영향을 받은 세포의 분율이다. 각각의 CI는 각각의 약물 비 농도에서 평균 영향을 받은 분율로부터 CalcuSyn 소프트웨어 (바이오소프트 (Biosoft, 영국))를 이용하여 계산될 것이다.

명세서에 인용된 모든 특허 및 다른 참조문은 발명이 속하는 당업계의 기술자의 기술 수준을 표시하고, 각각의 참조문이 그 전체가 개별적으로 참조로 포함된 것처럼 동일한 정도로 임의의 표 및 도면을 포함한 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.

당업자는 본 발명이 언급된 목적 및 잇점, 및 그에 내재하는 것을 얻도록 잘 적응됨을 쉽게 알 것이다. 현재 바람직한 실시양태를 대표하는 것으로서 본원에 기재된 방법, 변동, 및 조성물은 예시적인 것이고, 본 발명의 범위에 대한 제한으로서 의도되지 않는다. 그의 변화 및 다른 용도는 당업자에게 떠오를 것이고, 이는 청구항의 범위에 의해 규정되는 본 발명의 취지 내에 포함된다.

발명의 범위 및 취지를 벗어나지 않으면서 본원에 개시된 발명에 대해 다양한 치환 및 변형이 이루어질 수 있음은 당업자에게 쉽게 명백해질 것이다. 따라서, 그러한 추가의 실시양태는 본 발명 및 다음 청구항의 범위 내에 있다.

본원에 예시적으로 설명되는 발명은 적합하게는 본원에 구체적으로 개시되지 않은 임의의 요소(들), 제한(들)의 부재 하에 실시될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 각각의 경우에 본원에서 임의의 용어 "포함하는", "본질적으로 이루어지는" 및 "이루어지는"은 다른 2개의 용어로 교체될 수 있다. 따라서, 상기 용어 중 하나를 사용하는 본 발명의 실시양태에 대해, 본 발명은 이들 용어 중 하나가 이들 용어 중 다른 것으로 교체되는 다른 실시양태를 또한 포함한다. 각각의 실시양태에서, 용어는 그들의 확립된 의미를 가진다. 따라서, 예를 들어, 한 실시양태는 일련의 단계를 "포함하는" 방법을 포함할 수 있고, 다른 실시양태는 동일한 단계"로 본질적으로 이루어지는" 방법을 포함할 것이고, 제3 실시양태는 동일한 단계로 "이루어지는" 방법을 포함할 것이다. 사용된 용어 및 표현은 설명의 용어로서 사용되고 제한의 의미는 없고, 그러한 용어 및 표현의 사용에서 제시되고 설명된 특징 또는 그의 일부의 임의의 동등물을 배제하는 것은 의도되지 않고, 대신에 청구된 발명의 범위 내에서 다양한 변형이 가능함이 인정된다. 따라서, 본 발명은 바람직한 실시양태 및 선택적인 특징에 의해 구체적으로 개시되지만, 본원에 개시된 개념의 변형 및 변이가 당업자에 의해 이루어질 수 있고, 상기 변형 및 변이는 첨부된 특허청구범위에 의해 규정되는 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 간주됨을 이해해야 한다.

또한, 본 발명의 특징 또는 측면이 마르쿠시 (Markush) 군 또는 다른 대체 집단의 용어로 설명되는 경우에, 당업자는 본 발명이 또한 마르쿠시 군 또는 다른 군의 멤버의 임의의 개별적인 멤버 또는 하위군의 용어로 설명됨을 알 것이다.

또한, 반대로 지시하지 않으면, 다양한 수치값이 실시양태에 대해 제공되는 경우에, 추가의 실시양태는 임의의 2개의 상이한 값을 범위의 종점으로서 취함으로써 설명된다. 상기 범위는 또한 설명된 발명의 범위 내에 있다.

추가의 실시양태가 본 발명의 범위 내에 및 다음 특허청구범위 내에 있다.

Claims (15)

1. 프로판-1-술폰산 {2,4-디플루오로-3-[5-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐]-페닐}-아미드, 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드, 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2-플루오로-페닐]-아미드, N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-2,5-디플루오로-벤젠술폰아미드, N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-3-플루오로-벤젠술폰아미드, 피롤리딘-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드, N,N-디메틸아미노-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드, 및 그의 제약상 허용되는 염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물.
2. 제1항에 있어서, 프로판-1-술폰산 {2,4-디플루오로-3-[5-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐]-페닐}-아미드, 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
3. 제1항에 있어서, 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드, 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
4. 제1항에 있어서, 프로판-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2-플루오로-페닐]-아미드, 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
5. 제1항에 있어서, N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-2,5-디플루오로-벤젠술폰아미드, 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
6. 제1항에 있어서, N-[3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-3-플루오로-벤젠술폰아미드, 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
7. 제1항에 있어서, 피롤리딘-1-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드, 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
8. 제1항에 있어서, N,N-디메틸아미노-술폰산 [3-(5-시아노-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-카르보닐)-2,4-디플루오로-페닐]-아미드, 또는 그의 제약상 허용되는 염인 화합물.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 조성물.
10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 또는 제9항에 따른 조성물을 포함하는 키트.
11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 화합물 또는 그의 염.
12. B-Raf V600E 단백질 키나제 활성의 조정이 치료 이익을 제공하는 질환 또는 상태의 치료용 의약의 제조에 있어서 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 또는 제9항에 따른 조성물의 용도.
13. 흑색종, 신경교종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 질환 또는 상태의 치료용 의약의 제조에 있어서 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 또는 제9항에 따른 조성물의 용도.
14. 치료 유효량의 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 또는 제9항에 따른 조성물을 투여하는 것을 포함하는, B-Raf V600E 키나제-매개 질환 또는 상태로 고통받거나 그 위험이 있는 대상체를 치료하는 방법.
15. 치료 유효량의 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 염 또는 제9항에 따른 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 흑색종, 신경교종, 결장직장암, 갑상선암, 폐암, 난소암, 전립선암, 및 담관암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 질환으로 고통받거나 그 위험이 있는 대상체를 치료하는 방법.