KR20110098738A

KR20110098738A - 아자아줄렌 화합물

Info

Publication number: KR20110098738A
Application number: KR1020117013446A
Authority: KR
Inventors: 리온; 첸치훙; 훙치이; 창요우론; 첸팅슈오
Original assignee: 재단법인 공업기술연구원
Priority date: 2009-04-29
Filing date: 2010-04-29
Publication date: 2011-09-01
Also published as: TWI410418B; TW201038556A; RU2524202C9; RU2011122916A; EP2491025A1; US20100280012A1; AU2010244019A1; CN102405217A; EP2491025A4; BRPI1005525A2; EP2491025B1; WO2010124648A1; NZ593004A; CN102405217B; MX2011006290A; IL213019A0; CA2747420C; AU2010244019B2; JP5538522B2; US8492374B2

Abstract

본 발명은 아자아줄렌 화합물을 개시한다. 본 발명에 따르는 아자아줄렌 화합물은 아래 화학식 1에 따르는 구조를 가진다. 화학식 1의 다양한 변형예는 각 특정하게 정의되어 사용된다. 상기 화합물은 암을 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명은 역시 암을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 화학식 1의 적어도 하나의 아자아줄렌 화합물의 효과적인 양을 적절하게 조절하며 사용하는 방법을 포함한다.
<화학식 1>

Description

아자아줄렌 화합물{AZAAZULENE COMPOUNDS}

본 발명은 아자아줄렌 화합물에 관한 것으로, 특히 암을 치료하고(/하거나) 단백질키나아제(PKs) 활동성을 조절하는 아자아줄렌 화합물에 관한 것이다.

단백질키나아제(PKs)는 세포단백질에서 특정한 티로신, 세린 또는 트레오닌 잔류물의 인산화를 촉매하는 효소이다. 단백질키나아제는 확산, 분화, 성장, 세포주기, 세포물질대사, 세포생존, 세포소멸, DNA 손상 복구, 세포운동성, 그리고 미세환경에 반응과 같은 세포기능 조절에 있어 세포 신호 형질도입이 가능하게 한다. 조절되지 아니한 단백질키나아제 활동성은 맥관형성, 암, 종양 성장, 종양 전이, 죽상 경화증, 나이 관련된 시력감퇴, 당뇨망막병증, 염증성질환이나 그 합병증과 같은 병들의 빈번한 원인이 된다.

단백질키나아제는 2개로 분류될 수 있는데, 단백질티로신키나아제(PTKs)와 세린/트레오닌키나아제(STKs)이다. 단백질 기재에서 티로신 잔류물로 ATP의 감마-인산염(r-phosphate)의 전이를 촉매하는 단백질 티로신 키나아제(PTKs)는 성인조직의 유지와 배발생동안 세포간 소통의 결과로 복수 세포 기관에서 발생하는 중요한 등가의 수정중 하나이다. 티로신 잔류물의 인산화는 단백질 티로신 키나아제의 효소적 활동성과 후속하는 신호 단백질의 보충을 조절한다. 단백질 티로신 키나아제(PTKs)의 두 분류는 세포에 존재하는데, 막관통수용체 PTKs와 비수용체 PTKs이다. 상기 PTKs는 세포신호경로의 중요한 구성이어서 그들의 촉매적 활동성은 엄격히 조절된다. 점 돌연변이나 과발현과 같은 메커니즘을 통해 이러한 효소의 조절되지 아니한 활동은 양성 확산 조건뿐만 아니라 암의 다양한 양상을 이끌 수 있다. 건강과 질병에서 단백질 티로신 키나아제(PTKs)의 중요성은 염증질환과 당뇨병에서 발생되는 PTK 신호의 차이가 있음을 통해 더 확인된다. PTK 활동성을 가진 성장인자수용체는 수용체 티로신 키나아제("RTKs")로 알려져 있다. 그들은 다양한 생물학적 활동성을 가진 막관통수용체의 거대한 분류를 구성한다. 상기 RTKs의 세포내 키나아제 영역은 2개 분류로 구분될 수 있는데, 키나아제 영역을 분리하는 아미노산 가지를 포함하는 것과 키나아제 영역이 연속적인 것이다. 이러한 키나아제의 활동성은 수용체의 이합체나 저중합체화를 유도하는 세포 영역에 결합된 배위자(ligand)에 의해 얻을 수 있다.따라서 활성화된 수용체는 크로스-인산화를 통해 촉매 영역 밖에서 티로신 잔류물을 자기 인산화할 수 있다. 이러한 자기인산화의 결과는 세포내에서 신호 형질을 도입하는 단백질을 위한 포스포티로신 결합 부위의 생성이나 적극 수용체 형태의 안정화이다. 포스포티로신 의존적인 방법으로 수용체 티로신 티나아제의 세포내 영역에 결합하는 신호 단백질은 RasGAP, 포스포이노시타이드 3 키나아제(PI3-kinase), 포스포리파제C(phospholipase C) 포스포티로신 포스포타제(phosphotyrosine phosphatase) SHP 그리고 Shc, Grb2, Crk와 같은 어댑터 단백질을 포함한다.

표피성장인자수용체(EGFR)는 EGFR(ErB1), ErB2, ErB3, ErB4 등 4개 요소로 구성된 포유류에 수용체 티로신 키나아제의 과에 속한다. 상기 EGFR는 1186 아미노산 잔류물 막투과 당단백질이다. 그것은 세포밖 배위자 결합 영역, 세포내 티로신 키나아제 영역 그리고 자기인산화부위를 포함하는 카르복실기(COOH) 영역으로 이루어진다. EGF, 형성 성장 인자베타(transforming growth factor-beta), 베타셀루린(betacellulin), 헤파린 결합 EGF, 에피레굴린(epiregulin) 또는 앰피레굴린(amphiregulin)과 같은 특정 배위자 결합은 확산, 이동, 분화와 생존과 같은 기본적인 세포 프로세스를 조절하는 세포 신호경로를 촉발하는 카르복시기 꼬리에 복수의 티로신 잔류물의 인산화를 야기한다. 상기 EGFR은 위의 방광, 폐, 위, 가슴, 뇌, 두경부, 자궁경관, 난소, 자궁내막 등과 같은 종양세포의 많은 유형으로 발현된다. 비정상적으로 높은 EGFR 활동성은 비소세포 폐암, 유방암, 난소암, 방광암, 전립선암, 침샘암, 췌장암, 자궁암, 대장암, 신장암, 두경부암, 다형교아종의 특징이 될 수 있다. EGFR에 표적된(targeted) 티로신 키나아제 억제제는 비정상적으로 높은 EGFR 키나아제 활동성과 EGFR 키나아제 장애질환을 갖는 암 치료를 위해 사용될 수 있다.

상기 RTK 아과중 하나는 혈소판유도성장인자수용체(PDGFR)그룹으로 언급되는데, 이는 PDGFR.alpha., PDGFR.beta., CSFIR, c-KIT and c-fms를 포함한다. 상기 수용체는 무관한 아미노산서열에 의해 방해되는 티로신 키나아제 영역의 세포 내영역과 이뮤노글로빈 같은 변하는 루프들로 이루어진 글리코실화된 세포밖 영역으로 구성된다. 상기 PDGFR 신호는 종양 혈관형성을 더욱 자극하는 내피세포에서 VEGF를 포함하는 개선된 혈관형성 신호 발현을 유도한다. 상기 PDGFR 신호경로는 세포확산, 세포이동, 혈관형성에서 중요한 역할을 하며, 종양의 높은 세포간 체액압력을 중재할 수 있다.

상기 PDGFR 아과와 유사성 때문에 후속 그룹으로 종종 포함되는 다른 그룹은 태아간장키나아제(flk)수용체 아과이다. 이 그룹은 키나아제 삽입 영역수용체 태아간장키나아제-1(KDR/FLK-1, VEGF-R2), flk-1R, flk-4 그리고 fms유사 티로신 키나아제 1(flt-1)으로 이루어진 것으로 알려져 있다. 비정상적으로 높은 PDGFR 활동성은 위장조직종양, 소세포폐암, 다형교아종, 전립선암의 특징일 수 있다. PDGFR에 표적된 티로신 키나제 억제제는 비정상적으로 높은 PDGFR 키나아제 활동성과 PDGFR 키나아제 장애질환을 갖는 암 치료에 사용될 수 있다.

FLT-3 (FMS유사 티로신 키나아제 3)은 구조적으로 PDGFR, 집락자극인자1(CSF1)과 관련된 III RTK 분류이다. 상기 RTK는 특정 친수성 삽입(키나아제 삽입)에 의하여 2개로 나누어지는 세포외 영역과 세포내 티로신 키나아제 영역에서 5개의 이뮤노글로블린 유사 영역을 포함한다. 상기 FLT-3 발현은 다능성조혈간세포, 골수세포, B-림프전구세포, 단구계열 세포에 상응하는 골수CD-34양성세포로 기재되었다. 상기 FLT3 발현은 높은 수준의 CD34를 발현하는 태아간장의 세포에 제한된다. 상기 FLT3 수용체 기능은 배위자의 활동성(FL)에 의하여 정의될 수 있다. 상기 FL은 초기의 활동인자이고 초기 조혈제전구세포의 생존, 확산, 분화를 지원한다. FLT3에 결합되는 배위자는 Ras/Raf/MAPK 그리고 PI3 인산화효소단계적연쇄반응 같은 몇 개의 후속 신호경로의 활성화뿐만 아니라 SHC, SHP-2, SHIP, Cbl, Cbl-b, Gab1, Gab2를 포함하는 복수의 세포질단백질의 인산화를 통해 후속하는 표지와 수용체 이합체를 진행시킨다.

FLT3유전자에서 내부직렬복제(ITD) 및/또는 삽입 그리고 드물게 삭제는 모든 급성 골수백혈병(AML)의 20~25%에 영향이 있다. 상기 복제된 서열은 엑손11(exon 11)에 속하지만 때로는 인트론11(intron)과 엑손 12를 포함한다. 매우 흔히 사용되는 명명은 FLT3-ITD이다. 매우 이종적인 분자구조이기에 FLT3-LM (length mutation)라는 용어는 더 적절한 것처럼 보인다. 이것은 급작성(RAEB 1 and RAEB 2)의 5~10% 골수이형성증후군(MDS) 난치빈혈증과 급성 림프백혈병(ALL)의 드문 사례들을 포함되는 것으로 또한 기재되었다. FLT-3에 표적된 티로신 키나아제 억제제는 비정상적으로 높은 FLT-3 키나아제 활동성과 FLT-3 키나아제 장애질환을 갖는 암 치료에 사용될 수 있다.

C-KIT, SCFR (줄기세포인자수용체)는 ATP결합영역과 포스포트랜스퍼라제영역에서 키나아제 삽입(KI)으로 분리되는 티로신 키나아제 활동성을 가진 세포내 영역과 매우 소수성 투과막 영역 그리고 5 Ig유사루프(5 Ig-like loops)를 가진 세포외 영역을 포함하는 CSF-1R, PDGFR, FLT-3에 구조적으로 관련된 타입III(type III) 수용체 티로신 키나아제로 알려진다. C-Kit는 조혈줄기세포, 비만세포, 멜라닌세포, 생식세포계통에서 세포원형막으로 발현된다. PTK활동성을 가진 SCF/MGF수용체(결합배위자(SCF))는 수용체이합체, 자기인산화, SH2영역을 포함하는 분자를 통해 신호 형질도입을 유도한다. 비정상적인 활동성 발현에 있어, 골수에서 비만세포과형성, 간, 비장, 림프절, 위장관과 벽, 기능성 돌연변이가 대부분 환자에게서 발견된다. 악성조혈세포성장의 임상적인 특징은 c-Kit 돌연변이과정의 위치와 시간, 연관된 병소의 수에 영향받는 것으로 알려져 있다. c-Kit에 표적된 티로신 키나아제 억제제는 비정상적으로 높은 c-Kit 키나아제 활동성과 c-Kit 키나아제 장애질환을 갖는 암 치료를 위해 사용될 수 있다.

티로신 키나아제 성장요인수용체과의 다른 구성요소는 혈관내피성장인자수용체(VEGFR)하위그룹이다. VEGFR는 PDGFR과 유사한 이합체 글리코단백질이지만 생체에서의 표적세포특이성과 다른 생물학적 기능을 갖는다. 특히, VEGFR는 혈관형성과 맥관형성에 본질적인 역할을 하는 것으로 현재 생각되고 있다. 맥관형성은 종양 성장과 생존에 본질적이다. VEGFR-1, -2, and -3와 같이 3개의 구별되는 VEGF가 있다. 그 각각은 맥관형성과정에 별개로 기여한다. VEGFR-1는 맥관형성동안에 VEGFR-2에 결합된 VEGFR를 조절하는데 역할을 하는 것으로 생각된다. VEGFR-2(KDR)는 맥관형성동안 내피세포의 확산, 이동, 생존을 활성화 시키고 매관형성을 위한 중요한 VEGF수용체로 인식된다. VEGF-3는 전이를 가능하게 하는 신생림프관형성 동안에 내피세포의 확산, 이동, 생존을 활성화시킨다. 이와 같이 구별되는 역할에도 불구하고, 모든 VEGF는 어느 정도 기능이 중복된다. 그러므로, 식별된 모든 VEGF 수용체의 억제는 맥관형성의 더 완벽한 배제를 보장할 수 있다. VEGFR에 표적된 티로신 키나아제 억제제는 고형 종양과 혈관장애질환의 치료를 위해 사용될 수 있다.

c-Met(간세포생장인자수용체)는 다기능적인 시토카인인 HGF/SF를 위한 매우 친화적인 수용체이다. 배위자 결합시 MET는 이합체가 되고 C-말단 영역에서 티로신 잔류물을 트랜스포스포릴레이트화하여 다양한 신호경로의 구성요소들과 상호작용하게 된다. 이들은 바인더 1, 포스포이노지타이드3 키나아제, c-Src와 연합된 Grb-2를 포함한다. 생리적인 조건하에서, MET-HGF/SF신호는 표적세포에 의존하는 넓은 범위의 생물학적인 활동성에 영향을 주는 것으로 알려져 있다. 이러한 활동성은 세포확산(mitogenesis)으로부터 세포형성(morphogenesis)과 운동성(motogenesis)으로 변한다. 이러한 다양한 활동성의 조정력은 파생된 형태형성(관상피구조의 형성), 근아세포 이동, 신경돌기 분기 등을 허용하는 공격성 생장의 유전프로그램을 형성한다. MET/HGF 표적세포는 상피중배엽간 세포, 조혈세포, 근아세포, 척수운동신경세포를 형성한다. MET-HGF/SF 신호는 정상적인 발육에 본질적이다: 양HGF대립형질에서 삭제돌연변이를 식생한 쥐배아는 임신중반에 죽어 손상된 간형성을 보여준다. MET와 그 배위자 간세포생장인자/산란인자(HGF/SF)는 비록 각각 상피중배엽기관의 세포에서 우세하지만 수많은 조직에서 발현된다. MET는 확대되어 신장, 감상선, 췌장, 골육종의 종양을 포함하는 많은 형태의 종양으로 과발현된다. c-Met에 표적된 티로신 키나아제 억제제는 비정상적으로 높은 c-Met 키나아제 활동성과 c-Met 키나아제 장애질환을 가진 암 치료를 위해 사용될 수 있다.

RET는 GDNF, 뉴얼튜린(neurturin), 알테민(artemin), 퍼세핀(persefin)을 포함하는 교질세포유도신경성장인자(GDNF)과의 신경성장인자인 배위자의 티로신 키나아제 수용체이다. RET 활성화는 다른 글리코실 포스파티딜이노시톨 연관 GRF 수용체를 통해서 실현된다. RET의 3개 주요 유사형태는 긴 유사형태(RET51): 1114 아미노산 중간 유사형태(RET 43): 1106 아미노산과 짧은 유사형태(RET 9): 1072 아미노산과 같은 사람에서 발견된다. RET는 주로 신경능기원의 종양: 수질갑상선암, 갈색세포종, 신경아세포종에서 발현된다. 인간배아에서, RET는 발전하는 신경계와 비뇨생식시스템에서 그리고 신경능세포에서 발현된다. RET발현은 몇 개의 변이유도세포계(crest-derived cell lines), 비장, 가슴샘, 림프절, 침샘, 정원세포에서 그리고 최근에는 정상적인 갑상선 조직, 갑상선종, 유두성과 여포성 갑상선 세포 종양형성에서 발견된다. RET에 목표된 티로신 키나아제 억제제는 비정상적으로 높은 RET 키나아제 활동성과 RET 키나아제 장애질환을 가진 암 치료를 위해 사용될 수 있다.

c-ABL (v-abl Abelson murine leukemia viral oncogene homolog)은 3개의 핵이행신호(NLS)와 탄소말단에 밀접한 단일(NES)에 의하여 드라이브되는(driven) 핵과 세포질을 왕복하는 활동성을 보여준다. BCR/ABL는 세포질 이행역할을 하고 3개의 BCR-ABL 융합단백질은 종양포텐셜을 보여주고 있다. 3개의 하이브리드단백질은 ABL에 비할 단백질 키나아제 활동성을 증가시키며, 3BP1 (결합 단백질)은 SHI 활동성을 방지하는 SH3 영역에 정상적인 ABL을 결합한다. 핵 및 세포질 ABL은 다른 기능을 가진다.1-Nuclear c-ABL은 DNA손상후 세포소멸의 조절에 중요한 역할을 한다. 에이전트를 유발하는 모든 DNA 손상은 ATM의존방법으로 그리고 p53-homolog p73 단백질의 존재하에서 핵 c-ABL 키나아제를 활성화시킨다. 후자는 c-ABL의 SH3영역을 통해서 DNA손상후 c-ABL과 물리적으로 연합된다. 또한 DNA손상은 동시에 세포소멸로부터 세포를 보호하고 생장에레스트를 유도하는 Rb의 활성화를 유도하는 p53경로를 활성화시킨다. c-ABL에 의하여 유도되는 세포소멸의 정확한 메커니즘은 알려져 있지 않다. BCR-ABL의 핵트랩은 역시 백혈구성세포에서 세포소멸을 유도하는 것으로 알려져 있다. 2-세포질c-ABL: 핵에서 세포질로 c-ABL의 유출함으로 부착신호의 가능한 기능은 부착후 섬유아세포에서 발견된다. c-ABL에 목표된 티로신 키나아제 억제제는 비정상적으로 높은 c-ABL 키나아제 활동성과 c-ABL 키나아제 장애질환을 갖는 암 치료를 위하여 사용될 수 있다.

TIE (이뮤노글로블린과 EGF유사영역을 갖는 티로신 키나아제)는 2개의 하위 그룹으로 정의될 수 있다. TIE-1 (Ig 와 EGF 상동영역1을 갖는 티로신 키나아제)와 TIE-2/Tek은 독자적 구조 특성을 갖는 수용체티로신키나아제(RTK) 아과를 구성한다: 세포외영역과 세포질영역에서 분리된 티로신키나아제영역에서 3개의 상피세포성장인자(EGF)유사영역과 3개의 섬유결합소형태 III유사반복형을 측공하는(flanking) 2개의 이뮤노글로블린유사영역이 있다. 이러한 수용체는 내피조혈전구세포에 먼저 발현되고 맥관형성, 혈관형성, 조혈생성에 중요한 역할을 한다. 인간 TIE-1 cDNA는 18잔류물추정신호펩타이드, 727잔류물세포외영역, 354잔류물세포질영역을 가지고 1124아미노산(aa)잔류물전구단백질을 코딩한다. 매우 높은 친화도로 TIE-1를 결합하는 2개의 배위자(안지오포에틴-1(Ang1)과 안지오포에틴-2(Ang2))는 식별된다. Ang2는 Ang1에 길항자로 역할하는 것으로 보고되고 있다. TIE에 목표된(targeted) 티로신 키나아제 억제제는 고형 종양과 혈관장애질환의 치료를 위해 사용될 수 있다.

FGFR (섬유모세포증식인자수용체)는 3개의 이뮤노그로블린유사영역, 단일막투과헬릭스영역, 티로신 키나아제 활동성을 가진 세포내영역으로 구성된 세포외배위자영역으로 구성된다. 섬유모세포증식인자는 23개 구성요소로 이루어진 증식인자배위자의 가장 큰 과이다. FGFR는 3개의 세포외이뮤노글로블린유사영역(IgI, IgII, and IgIII), 단일경로막투과세그먼트, 분리티로신키나아제(TK1/TK2)영역으로 특징되는 단일배열구조를 공유한다. 발병성 FGFR돌연변이의 대부분은 미스센스(missense)이고, 모든 변이는 변성단백질과 관련된다. 어떤 돌연변이는 매우 반복적이다. FGFR2변이에 대해 식별된 돌연변이 메커니즘은 (a) 선택적으로 강화된 FGF-결합 친화성, (b) 비적합교배 FGF-결합 특이성, (c) FGF-독립적 공유이합체화 및 (d) 이소 스플리소폼(ectopic spliceoform) 발현이다. 이러한 메커니즘은 모든 연합된 표현형의 우세한 유전을 설명한다. FGFR에 목표된 티로신 키나아제 억제제는 비정상적으로 높은 FGFR 키나아제 활동성과 FGFR 키나아제 장애질환을 갖는 암 치료에 사용될 수 있다.

인슐린유사증식인자1(IGF1)는 심부전 치료의 유력한 대표로 생각되었었다. 그러나, 동물연구와 임상실험은 IGF1을 증가시키는 것이 만성적으로 유리한지 여부에 대한 문제를 제기하고 있다. 다른 조직에 대한 증가된 혈청IGF1수준의 이차적인 효과는 이러한 유익하지 못한 결과를 설명할 수 있다. 현재 연구의 목표는 이차적인 효과없이 심장근세포에 IGF1의 역할을 실험하는 것이고, IGF1 수용체(IGF1R)의 전사조절효과와 후속신호경로를 밝히는 것이었다. IGF1 수용체의 활성화는 체세포분열(mitosis-competent) 세포에서 생존과 확산이고 골격근조직과 심근 같은 조직에서 증식(hypertrophy)이다. 상기 IGFR 신호경로는 임신과 수유 기간에 젖샘조직의 정상적인 발달동안 매우 중요하다. 몇몇 증식인자와 호르몬은 이 전체 과정에 관련되고, IGF-1R은 이유가 완료될 때까지 세포소멸을 억제하는데 중요한 역할과 세포들의 분화에 역할을 한다. 상기 IGF-1R은 몇몇 암과 대개 유방암과 관련된다. 혈관화를 진행시킬수 있는 능력을 유추하여 원래 종양의 전이가능성을 증가시킴으로써 유방암에 더 연관된다. IGFR에 타겟된 티로신 키나아제 억제제는 비정상적으로 높은 IGFR 키나아제 활동성과 IGFR 키나아제 장애질환을 갖는 암 치료에 사용될 수 있다.

c-Src, c-Abl, 미토겐활성단백질(MAP) 키나아제, 포스포티딜이노시톨-3-키나아제(PI3K) AKT, EGF수용체와 같은 키나아제는 보통 암세포에서 활성화되고, 종양 생성에 기여하는 것으로 알려져 있다. 이들처럼 많은 것이 동일한 신호경로로 발생되는데, 예를 들면 HER 키나아제과구성요소(HER1 [EGFR], HER3, and HER4)는 세포확산을 진행시키기 위해 MAP키나아제와 PI3 키나아제를 통해 신호를 전송한다.

TrkA (트로포미오신관련키나아제A)는 신경영양요소, 신경생장인자(NGF)를 위한 높은 친화촉매수용체이고 따라서 뉴런신경의 분화와 생존을 포함하는 NGF의 여러 효과를 이루어낸다. 상기 TrkA수용체는 수용체티로신키나아제의 큰 과의 일부이다.

PTK 장애질환은 암, 어살트리티스(asarthritis), 당뇨망막병증, 재협착증, 간경변증, 죽상동맥경화증, 신생혈관형성, 사구체신염, 당뇨병성 신장질환, 혈전성 미세혈관(thrombic microangiopathy) 증후군, 이식거부, 자기면역질환, 당뇨병, 초면역장애를 포함한다.

암은 방광암, 유방암, 결장암, 신장암, 간암, 폐암, 두경부암, 담낭암, 난소암, 췌장암, 위암, 후두암, 갑상선암, 전립선암, 피부암, 그리고 백혈병, 급성림프성백혈병, 급성 림프아구성백혈병, B-세포 림프종, T-세포 림프종, Hodgkin 림프종, 비Hodgkin 림프종, 모발상세포림종, Burkett 림프종과 같은 림프계조혈조직종양, 그리고 급성 골수성백혈병, 만성 골수성백혈병, 다발성 골수성백혈병, 골수형성이상증후군, 급성전골수성백혈병과 같은 골수계조혈조직종양, 그리고 섬유육종, 횡문균육종과 같은 중간엽세포재생종양, 그리고 성상세포종, 신경아세포종, 교종, 신경초종과 같은 중추/말초신경계종양, 또는 악성흑색종, 수암, 기형암종, 골육종, 모낭갑상선암 또는 카포시육종를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 출원은 '복수개 키나아제 억제제 활동성을 가지 신규한 아자아줄렌 화합물'이라는 명칭으로 미합중국 예비특허출원번호 제61/173,883호(2009.4.29.출원)에 대하여 우선권 주장으로 출원되어 있다.

본 발명이 해결하고자 하는 첫번째 기술적 과제는 암을 치료하고/하거나 단백질키나아제(PKs) 활동성을 조절하는 아자아줄렌 화합물을 제공하는 것이다.

본 발명은 하기 화학식 1에 의해 표현된 아자아줄렌 화합물을 제공한다.

<화학식 1>

여기서,

중 하나는 단일결합이고 다른 하나는 이중결합이며,

A₁, A₂, A₃, A₄, A₅, A₆, A₇및 A₈ 각각은 독립적으로 탄소 또는 질소이고,

질소에 결합된 A₁와 A₈와 함께 A₂, A₃, A₄, A₅, A₆, A₇는 10개의 파이전자(pi electrons)를 가진 6,5-헤테로싸이클(6,5-fused heterocycle)을 형성하고,

R₁은 O, OR, S, SR, NH₂, NHR, NRR', NH, 또는 NR이고,

R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂ 및 R₁₃ 각각은 독립적으로 널(null), 수소, 할로, C₁-C₁₀ 알킬, C₂-C₁₀ 알케닐, C₂-C₁₀ 알키닐, C₃-C₂₀ 시클로알킬, C₃-C₂₀ 시클로알케닐, C₁-C₂₀ 헤테로시클로알킬, C₁-C₂₀ 헤테로시클로알케닐, C₃-C₂₀ 아릴, C₁-C₂₀ 헤테로아릴, NO₂, NO, N₃, SCN, CN, OCN, OR, OC(O)R, OC(S)R, OC(S)OR, OC(O)SR, OC(S)SR, OC(O)NRR', OC(S)NRR', ONRR', OS(O)R, OS(O)₂R, SR, SC(O)R, SC(S)R, SC(S)OR, SC(O)SR, SC(S)SR, SC(O)NRR', SC(S)NRR', S(O)R, S(O)₂R, S(O)NRR', S(O)₂NRR', S(O)OR, S(O)₂OR, NCO, NCS, NRR', N(R)-C(O)R', N(R)-C(O)OR', N(R)-C(S)R', N(R)-C(S)OR', N(C(O)R)-C(O)R', N(R)-S(O)R', N(R)-S(O)OR', N(R)-S(O)₂R', N(R)-S(O)₂OR', N(R)-OR', N(OR)-C(O)R', N(OR)-C(O)OR', N(OR)-C(S)R', N(OR)-C(S)OR', N(OR)-C(S)SR', N(OR)-S(O)R', N(OR)-S(O)OR', N(OR)-S(O)₂R', N(OR)-S(O)₂OR', C(O)R, C(O)OR, C(O)NRR', C(O)SR, C(S)R, C(S)OR, C(S)NRR', C(S)SR, C(NR)-R', C(NR)-OR', C(NR)-NR'R", C(NR)-SR', C(NOR)-R', C(NOR)-OR', C(NOR)-NR'R" 또는 C(NOR)-SR'이며, 또는 결합되어 있는 원자들과 함께 R₂ 과 R₃, R₃ 과 R₄, R₄ 과 R₅, R₅ 과 R₆, R₆ 과 R₇, R₈ 과 R₉, R₉ 과 R₁₀, R₁₀ 과 R₁₁, R₁₁ 과 R₁₂, 또는 R₁₂ 과 R₁₃는 C₃-C₂₀ 시클로알킬, C₃-C₂₀ 시클로알케닐, C₁-C₂₀ 헤테로시클로알킬, C₁-C₂₀ 헤테로시클로알케닐, C₃-C₂₀ 아릴, 또는 C₁-C₂₀ 헤테로아릴이고,

R, R' 및 R" 각각은 독립적으로 수소, 할로, C₁-C₁₀ 알킬, C₂-C₁₀ 알케닐, C₂-C₁₀ 알키닐, C₃-C₂₀ 시클로알킬, C₃-C₂₀ 시클로알케닐, C₁-C₂₀ 헤테로시클로알킬, C₁-C₂₀ 헤테로시클로알케닐, C₃-C₂₀ 아릴 또는 C₁-C₂₀ 헤테로아릴, 또는 결합되어 있는 원자들과 함께 R 과 R', R 과 R" 또는 R'과 R"는 C₁-C₂₀ 헤테로시클로알킬 또는 C₁-C₂₀ 헤테로시클로알케닐이며,

A₁, A₃, A₄, A₅, A₆, A₇ 및 A₈각각이 탄소, A₂가 질소, C

N이 C-N, 그리고 C

R₁이 C=O, C-OEt 또는 C-NH₂인 경우, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁ 및 R₁₂ 중 적어도 하나는 수소가 아니고, 여기서, C

N 이 C=N인 경우, C

R₁ 이 C-R₁이고, C

R₁ 이 C=R₁ 인 경우, CN 이 C-N임)

알킬(akyl)은 곧거나 가지친 탄화수소 체인 라디칼 그룹을 의미하는 것으로, 1개에서 20개 탄소원자를 가지고 단일결합으로 나머지 분자들과 결합되는데, 예를 들면 메틸, 에틸, 노르말프로필, 1-메틸에틸(아이소프로필), 노르말부틸, 노르말펜틸, 1,1-다이메틸에틸(터트부틸) 등이 이에 해당된다.

또한 알케닐(alkenyl)이란 용어는 직선이거나 가지친 탄화수소성분을 의미하는 것으로, 2개에서 20개의 탄소원자를 가진 적어도 하나의 이중결합을 포함하여 단일결합 또는 이중결합으로 나머지 분자들과 결합되는데, 예를 들면, 에테닐, 프로프-1-에닐, 부트-1-에닐, 펜트-1-에닐, 펜타-1,4-다이에닐 등이 이에 해당된다.

또한 알키닐(alkynyl)이라는 용어는 직선이거나 가지친 탄화수소성분을 의미하는 것으로, 2개에서 10개의 탄소원자를 가진 적어도 하나의 삼중결합을 포함하여 단일결합 또는 삼중결합으로 나머지 분자들과 결합되는데, 예를 들면, 에티닐, 프로프-1-이닐, 부트-1-이닐, 펜트-1-이닐, 펜트-3-이닐 등이 이에 해당된다.

또한, 시클로알킬(cycloalkyl)이라는 용어는 포화, 모노-, 비- 또는 트리싸이클릭 탄화수소성분을 의미하는 것으로 3개에서 20개의 탄소원자를 가지고 단일결합으로 나머지 분자와 결합하고 포화되는데, 예를 들면, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 데카리닐, 노르보난, 노르보넨, 아다마틸, 바이시클로[2.2.2]옥탄 등이 이에 해당된다.

또한, 시킬로알케닐(cycloalkenyl)이란 용어는 비방향족, 모노-, 비- 또는 트리싸이클릭 탄화수소성분을 의미하는 것으로 3개에서 20개의 탄소원자를 가지고 적어도 하나의 이중결합을 포함하는 것으로 시클로헥세닐과 같은 것이 있다.

또한, 헤테로시클로알킬(heterocycloalkyl)이라는 용어는 포화, 모노-, 비- 또는 트리싸이클릭 성분을 의미하는 것으로 1개에서 20개의 탄소를 가지고 4-테트라하이드로피라닐과 같이 적어도 하나의 다른 원자(질소, 산소나 황 등)를 가진 링 구조를 갖는다.

또한, 헤테로시클로알케닐(heterocycloalkenyl)이라는 용어는 비방향족, 모노-, 비- 또는 트리싸이클릭 성분을 의미하는 것으로 1개에서 20개의 탄소를 가지고 피라닐과 같이 적어도 하나의 이중결합과 다른 원자(질소, 산소나 황 등)를 가진 링 구조를 갖는다.

또한, 아릴(aryl)이라는 용어는 6개에서 30개의 탄소과 적어도 하나의 방향족 링을 가지는 구조성분을 의미하는 것으로 페닐, 페닐렌, 나프틸, 바이페닐, 나프틸렌, 피레닐, 안쓰릴, 아줄레닐, 페낸쓰릴을 예로 들 수 있다.

또한, 헤테로아릴(heteroaryl)이라는 용어는 1개에서 30개의 탄소원자를 가지고 적어도 하나의 다른원자(질소, 산소 또는 황)을 가진 방향족링을 가지는 구조성분을 의미하는 것으로, 아크리디닐(acridinyl), 아자아줄레닐(azaazulenyl),벤지미다조릴(benzimidazolyl), 벤진도릴(benzindolyl), 벤지소자지닐(benzisoxazinyl),벤조[4,6]이미다조[1,2-a]피리디닐(benzo[4,6]imidazo[1,2-a]pyridinyl),벤조퓨라닐(benzofuranyl), 벤조나프토퓨라닐(benzonaphthofuranyl), 벤조띠아디아조릴(benzothiadiazolyl), 벤조띠아조릴(benzothiazolyl), 벤조띠오페닐(benzothiophenyl), 벤조트리아조릴(benzotriazolyl), 벤조띠오피라닐(benzothiopyranyl), 벤족사지닐(benzoxazinyl), 벤족사조릴(benzoxazolyl), 벤조띠아조릴(benzothiazolyl), 베타-카보리닐(.beta.-carbolinyl), 카바조릴(carbazolyl), 시노릴닐(cinnolinyl), 디벤조퓨라닐(dibenzofuranyl), 퓨라닐(furanyl), 이미다조릴(imidazolyl), 이미다조피리디닐(imidazopyridinyl), 이미다조띠아조릴(imidazothiazolyl), 인다조릴(indazolyl), 인도리지닐(indolizinyl), 인도릴(indolyl), 이소벤조띠에닐(isobenzothienyl), 이소인도리닐(isoindolinyl), 이소퀴노리닐(isoquinolinyl), 이소띠아조리디닐(isothiazolidinyl), 이소띠아조릴(isothiazolyl), 나프띠리디닐(naphthyridinyl), 옥타하이드로인도릴(octahydroindolyl), 옥타하이드로이소인도릴(octahydroisoindolyl), 옥사조리디노닐(oxazolidinonyl), 옥사조리디닐(oxazolidinyl), 옥사조로피리디닐(oxazolopyridinyl), 옥사조릴(oxazolyl), 옥시라닐(oxiranyl), 페리미디닐(perimidinyl), 페난쓰리디닐(phenanthridinyl), 페나쓰로리닐(phenathrolinyl), 페날사지닐(phenarsazinyl), 페나지닐(phenazinyl), 페노띠아지닐(phenothiazinyl), 페녹사지닐(phenoxazinyl), 프따라지닐(phthalazinyl), 프테리디닐(pteridinyl), 퓨리닐(purinyl), 피라지닐(pyrazinyl), 피라조릴(pyrazolyl), 피리다지닐(pyridazinyl), 피리디닐(pyridinyl), 피리도피리디닐(pyridopyridinyl), 피리미디닐(pyrimidinyl), 피로릴(pyrrolyl), 퀴나조리닐(quinazolinyl), 퀴노리닐(quinolinyl), 퀴녹사리닐(quinoxalinyl), 테트라조릴(tetrazolyl), 띠아디조릴(thiadiazolyl), 띠아조릴(thiazolyl), 띠오페닐(thiophenyl), 트리아지닐(triazinyl), 트리아조릴(triazolyl)을 예로 들 수 있으나, 이에 한정되는 것을 아니다.

또한, 상기 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 시클로알케닐, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알케닐, 아릴, 헤테로아릴은 다르게 언급되는 않는 한 치환된 것과 치환되지 아니한 것을 포함한다. 시클로알킬, 시클로알케닐, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알케닐, 아릴, 헤테로아릴에 사용될 수 있는 치환체는 C₁-C₂₀ 알킬(alkyl), C₂-C₂₀ 아케닐(alkenyl), C₂-C₂₀ 알키닐(alkynyl), C₃-C₂₀ 시클로알킬(cycloalkyl), C₃-C₂₀ 시클로알케닐(cycloalkenyl), C₁-C₂₀ 헤테로시클로알킬(heterocycloalkyl), C₁-C₂₀ 헤테로시클로알케닐(heterocycloalkenyl), C₁-C₁₀ 알콕시(alkoxy), C₃-C₃₀ 아릴(aryl), C₃-C3₂₀ aryloxy, C₁-C₃₀ heteroaryl, C₁-C₃₀ heteroaryloxy, amino, C₁-C₂₀ alkylamino, C₁-C₂₀ 디알길아미노(dialkylamino), C₃-C₂₀ 아릴아미노(arylamino), C₆-C₄₀ 디아릴아미노(diarylamino), C₁-C₁₀ 알킬설폰아미노(alkylsulfonamino), C₃-C₂₀ 아릴설폰아미노(arylsulfonamino), C₁-C₁₀ 알킬이미노(alkylimino), C₃-C₂₀ 아릴이미노(arylimino), C₁-C₁₀ 알킬설폰이미노(alkylsulfonimino), C₃-C₂₀ 아릴설폰이미노(arylsulfonimino), 하이드록실(hydroxyl), 할로(halo), 티오(thio), C₁-C₁₀ 알킬티오(alkylthio), C₃-C₂₀ 아릴티오(arylthio), C₁-C₁₀ 알킬설포닐(alkylsulfonyl), C₃-C₂₀ 아릴설포닐(arylsulfonyl), 아실아미노(acylamino), 아미노아실(aminoacyl), 아미노티오아실(aminothioacyl), 아미디노(amidino), 구아니딘(guanidine), 유레도(ureido), 시아노(cyano), 니트로(nitro), 니트로소(nitroso), 아지도(azido), 아실(acyl), 티오아실(thioacyl), 아실록시(acyloxy), 카르복실(carboxyl), 카르복실이스터(carboxylic ester)를 예를 들 수 있으나 이에 한정되는 것을 아니다. 반면에, 알킬, 알케닐 또는 알키닐에 사용될 수 있는 치환체는 위에서 언급된 치환체 모두를 포함한다. 시클로알킬, 시클로알케닐, 헤테로시클로아킬, 헤테로시클로알케닐, 아릴, 헤테로아릴 또한 서로 결합(fused)될 수 있다.

본 발명의 다른 실시예는 암 치료 방법을 다른 하나의 특징으로 들 수 있다. 상기 방법은 위에서 언급된 아자아줄렌 화합물을 적어도 하나를 효과적인 양을 어떤 분야에 조절하는 것을 포함한다. 상기 암은 백혈병(예를 들어, acute myelogenous leukemia), 소화기암(예를 들어, a gastrointestinal stromal tumor), 신장암(예를 들어, metastatic renal cell carcinoma), 폐암(예를 들어, small cell lung cancer)을 포함한다.

치료방법이나 치료라는 용어는 위에서 언급된 질환, 그러한 질환의 증상, 그러한 질환에 대한 소인에 관한 분야에서 상기 질환, 그 증상, 그에 대한 소인을 치료, 안정, 변경, 돌봄, 개선 또는 예방하는 것과 같이 치료적 효과를 얻기 위해 아자아줄렌 화합물을 조절하는 것을 의미한다.

본 발명에 따르는 다른 실시예는 상기 아자아줄렌 화합물과 제약적으로 수용가능한 운반체 중 적어도 하나의 효과적인 양을 함유하는 제약조성물을 포함한다.

상기 아자아줄렌 화합물은 가능하다면 유도체로 일컫는 그 염, 프로드럭(prodrugs), 용매화합물(solvates), 복합체(complexes), 방사성동위원소(radioisotope) 뿐만 아니라 그 자체 화합물도 포함한다. 예를 들어, 염은 아자아줄렌 화합물에서 음이온과 아미노와 같은 양전하그룹사이에서 형성될 수 있다. 적당한 음이온은 염화이온(chloride), 브롬화이온(bromide), 요오드화이온(iodide), 황화이온(sulfate), 질산환이온(nitrate), 인산화이온(phosphate), 구연산이온(citrate), 메탄설포네이트(methanesulfonate), 트리플로오로아세테이트(trifluoroacetate), 아세테이트(acetate), 말레이트(malate), 토실레이트(tosylate), 타트레이트(tartrate), 퓨무레이트(fumurate), 글루타메이트(glutamate), 글루쿠로네이트(glucuronate), 락테이트(lactate), 글루타레이트(glutarate), 말리에이트(maleate)를 포함한다. 유사하게, 염은 아자아줄렌 화합물에서 양이온과 카르복실레이트와 같은 음전하그룹 사이에서 형성될 수 있다. 적당한 양이온은 나트륨이온(sodium ion), 칼륨이온(potassium ion), 마그네슘이온(magnesium ion), 칼슘이온(calcium ion), 테트라메틸암모늄 같은 암모늄이온을 포함한다. 상기 아자아줄렌 화합물 역시 쿼터너리 니트로젠 원자를 함유하는 염들을 포함한다. 예를 들면, 프로드럭(prodrugs)은 에스터(esters)와 다른 제약적으로 수용할 수 있는 유도체(활성 아자아줄렌 화합물을 제공할 수 있는 분야에서 조절되는)를 포함한다. 상기 용매화합물(solvate)는 활성 아자아줄렌 화합물과 제약적으로 수용가능한 용매에서 형성된 분자를 의미한다. 예를 들면, 제약적으로 수용가능한 용매는 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸아세테이트, 아세트산, 에탄올아민을 포함한다. 복합체(complex)는 활성 아자아줄렌 화합물과 복합화물(예를 들어, 시클로덱스트린, 시클로판) 사이에서 형성될 수 있거나 활성 아자아줄렌 화합물과 무기양이온(예를 들어, 아연, 마그네슘, 칼슘, 은, 구리 양이온) 사이에서 형성될 수 있다.

또한, 본 발명의 범위 내에서 적어도 하나의 상기 아자아줄렌 화합물을 함유하는 조성물이 제공되는데, 암 치료에 사용을 위해, 그런 치료를 위한 약재의 생산을 위한 조성물의 사용을 위해 제공된다. 상기 암은 급성 골수성백혈병(AML)을 포함할 수 있다.

더 나아가 본 발명은 특정 분야에 단백질키나아제의 활동성을 억제하는 방법을 제공하는데, 적어도 하나의 상기 화학식 1의 아자아줄렌 화합물 효과적인 양을 특정 세포에 조절하는 것을 포함한다. 예를 들어, 상기 단백질키나아제는 AMPK, BLK, CSF1R, FGFR, FGR, FLT3, KDR, KIT, LCK, LYN, MAP4K5, NTRK, PHKG1, RET, SRC, STK, YES1을 포함한다. 게다가, 본 발명의 특정 분야에 단백질키나아제의 활동성을 억제하는 방법에서 상기 분야는 암세포일 수 있고, 상기 암세포는 급성 골수성백혈병의 세포를 포함할 수 있다.

본 발명에 따르는 아자아줄렌 화합물은, 암을 치료하고/하거나 단백질키나아제(PKs) 활동성을 효과적으로 조절할 뿐만 아니라, 의약적 또는 제약적으로도 활용도가 우수하다.

도 1은 B26 또는 운반체 조절후 BALB/c 생쥐에 MV4-11 피하 종양 이종이식 모델의 평균종양부피에 관한 그래프이다.

다음 상세한 설명은 본 발명을 실현하는 실시예에 의한 것으로 본 발명의 일반적인 원리를 보여주기기 위한 목적으로 기재되며 이에 의하여 본 발명이 한정되는 것으로 이해되어서는 아니되며 본 발명의 범위는 추가된 청구항과 관련되어 결정된다.

본 발명은 아자아줄렌 화합물에 관한 것으로, 선행기술에서 알려진 방법들로 준비될 수 있다. 예를 들면, 다음에 보여지는 실험법이 본 발명의 아자아줄렌 화합물을 준비하기 위한 합성방법을 제시하고 있다.

아자아줄렌 줄기의 제조를 위한 중간체는 아래 표 1에 나타난 실험법으로 합성될 수 있다.

인돌형 6,5-결합(fused)헤테로싸이클을 포함하는 아자아줄렌 화합물은 아래 표2의 실험법으로 합성할 수 있다.

벤지미더졸형 6,5-결합헤테로싸이클을 포함하는 아자아줄렌 화합물은 아래 표3의 실험법으로 합성할 수 있다.

3H-이미다조[4,5-b]피리딘, 3H-이미다조[4,5-c]피리딘 그리고 퓨린형 6,5-결합헤테로싸이클을 포함하는 아자아줄렌 화합물은 아래 표4의 실험법으로 합성할 수 있다.

2H-인다졸과 2H-벤조[d][1,2,3]트리아졸형 6,5-융해헤테로싸이클은 아래 표 5의 실험법으로 합성할 수 있다.

이미다조[1,2-a]피리딘, 이미다조[1,2-a]피리미딘, 이미다조[1,2-c]피리미딘 그리고 이미다조[1,2-a][1,3,5]트리아진형 6,5-결합헤테로싸이클을 함유하는 아자아줄렌 화합물은 아래 표 6의 실험법으로 합성할 수 있다.

위 실험법들을 통해 알 수 있듯이, 염기는 본 발명의 아자아줄렌 화합물의 합성을 용이하게 하기 위해 이용될 수 있다. 바람직하게는, 상기 염기는 암모니아, 메틸아민, 트리리메틸아민, 아닐린, 디메틸아미노피리딘, 프롤린(proline), N-메틸아닐린, 1,8-디아자키시클로[5.4.0]운덱-7-엔(1,8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene), 이아이소프로필에틸아민, 피롤리딘(pyrrolidine), 피레리딘(piperidine), 소디움아마이드(sodium amide), 리튬디아이소프로필아마이드(lithium diisopropylamide) 또는 소디움헥사메틸디시라자나이드(sodium hexamethyldisilazanide)과 같은 니트로젠(nitrogen)을 포함하는 화합물이다.

다른 유기 무기 염기도 위에서 살펴본 것과 같이 사용될 수 있는데, 니트로젠을 포함하지 아니한 유기 무기는 카보네이트(carbonates), 바이카보네이트(bicarbonates), 아세테이트(acetates), 포메이트(formates), 알킬리튬화합물(alkyl lithium compounds), 아릴리튬화합물(aryl lithium compounds), 금속알콕사이드(metal alkoxides), 그리냐드시약(Grignard reagents), 하이드록사이드(hydroxides), 포스페이트(phosphates), 바이설페이트(bisulfates), 하이드로설파이드(hydrosulfides) 또는 하이드라이드(hydrides)을 포함한다.

위 실험법들을 통해 살펴본 바와 같이, 산은 본 발명의 아자아줄렌 화합물의 합성을 용이하게 하기 위해 사용될 수 있다.

유기산 또는 무기산은 아세트산(acetic), 벤젠설폰산(benzenesulfonic),벤조산(benzoic), 캠퍼설폰산(camphorsulfonic), 시트릭산(citric), 이텐설폰산(ethenesulfonic),디클로로아세트산(dichloroacetic), 포름산(formic), 퓨마릭산(fumaric), 글루콘산(gluconic), 글루탐산(glutamic), 히퓨릭산(hippuric), 하이드로브롬산(hydrobromic),하이드로클로릭산(hydrochloric), 하이드로플루오릭산(hydrofluoric), 하이드로아이오딕산(hydroiodic), 이센티오닉산(isethionic), 라틱산(lactic), 말레익산(maleic), 말릭산(malic), 만들릭산(mandelic), 메탄설폰산(methanesulfonic), 무식산(mucic), 나이트릭산(nitric), 옥살산(oxalic), 파모익산(pamoic), 판도텐산(pantothenic), 포스포릭산(phosphoric), 석신산(succinic), 설퓨릭산(sulfuric), 타타릭산(tartaric), 파라톨루엔설폰산(p-toluenesulfonic), 트리플루오로아세트산(trifluoroacetic) 또는 트리플루오로메탄설폰산(trifluoromethanesulfonic) (acid) 등을 포함한다.

위의 실험법들에서와 같이, 커플링시약은 본 발명의 아자아줄렌 화합물의 합성을 용이하게 하기 위해 사용될 수 있는데, BOP, CDI, DCC, DEPBT, DIC, EDC.HCl, HATU, HBTU, HCTU, PyBOP, PyBrOP, TATU, TBTU, TDBTU 또는 TSTU 등을 포함한다.

위 실험법들에서 보이는 바와 같이, 금속함유촉매는 본 발명의 아자아줄렌 화합물의 합성을 용이하게 하기 위해 사용될 수 있는데, Fe, Ni, Co, Cu, Au, Pd, Pt, Rh 또는 Ru을 포함한다.

배위자는 금속의 촉매능을 용이하게 하기 위해 존재할 수 있다.

위 실험법들에서 용매의 존재하에 반응이 진행될 수 있고, 이 용매는 양성자성이나 비양성자성(protic or aprotic)일 수 있는데, 예를 들면, 양성자성으로는 물 또는 알콜이 포함된다. 비양성자성으로는 헥산(hexane), 톨루엔(toluene), 벤젠(benzene), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 클로로포름(chloroform),디메틸포르머마이드(dimethylformamide), 디메틸설폭사이드(dimethylsulfoxide) 또는 테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran)을 포함한다.

또한 위 실험법들은 용매의 부존재하에서도 반응이 진행될 수 있다.

따라서, 합성된 아자아줄렌 화합물은 컬럼크로맘토그래프(column chromatography), 고압액체크로마토그래피(high-pressure liquid chromatography), 증류(distillation), 승화(sublimation) 또는 재결정(recrystallization)에 의하여 정제될 수 있다.

다른 아자아줄렌 화합물은 적당한 시작물질을 가지고 위 실험방법이 종래기술들로 준비될 수 있다.

또한, 아자아줄렌 화합물의 합성을 위하여 적당한 프로텍팅그룹을 부가하거나 제거하는 공정들이 위 실험방법중 전이나 후에 부가적으로 포함될 수 있다.

게다가, 다양한 합성 공정이 번갈아가며 순서가 바뀌어 수행되거나 화합물을 변경할 수 있다.

아자아줄렌 화합물 합성에 유용한 합성화학변형론과 프로텍팅그룹이용방법론은 잘 알려져 있는데, 예를 들어, R. Larock, 종합적인 유기적 변환, VCH Publishers (1989); T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 유기합성에서 프로텍팅그룹, 2.sup.nd Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser and M. Fieser, 피셔와 피셔의 유기합성을 위한 시약, John Wiley and Sons (1994); and L. Paquette, ed., ㅇ유기합성을 위한 시약 백과사전, John Wiley and Sons (1995) 과 그 후속판들에 개시되어 있다.

상기 아자아줄렌 화합물은 비방향족 이중결합과 적어도 하나의 어시메트릭 중심(asymmetric centers)을 포함할 수 있어서, 라세미체와 라세미혼합물(racemates and racemic mixtures), 단일 거울상이성질체(single enantiomers), 독립적인 부분입체이성질체(individual diastereomers), 부분입체이성질체 혼합물(diastereomeric mixtures) 및 cis- 또는 trans-이성질체 형태가 나올 수 있으며, 이의 모든 이성질체도 생각해 볼 수 있다.

또한, 본 발명에 따르는 제약조성물은 상기 아자아줄렌 화합물과 제약적 수용운반체 또는 염을 포함할 수 있다.

더 나아가, 본 발명은 암을 가진 환자에게 적어도 하나의 상기 아자아줄렌 화합물의 효과적인 양을 관리하는 방법을 제공한다.

위 효과적인 양은 치료되는 분야에 치료효과를 나타내기 위해 필요한 활성 아자아줄렌 화합물의 양을 의미한다.

효과적인 섭취량(doses)는 관련분야에 숙달된 전문가에 의해 인식되듯이 질환의 종류, 관리의 방법, 첨가제용법, 다른 치료처치에서의 공동사용가능성에 따라 변할 것이다.

제약적으로 수용운반체는 용매(solvents), 분산매체(dispersion media), 피복(coatings), 항균/항진제(antibacterial and antifungal agents), 등장/흡수지연제(isotonic and absorption delaying agents) 등을 포함할 수 있다.

본 발명의 아자아줄렌 화합물은 아자아줄렌이나 6,5-결합헤테로싸이클인식부위를 식별하는데 사용된다.

아자아줄렌이나 6,5-결합헤테로싸이클인식부위는 본 발명의 아자아줄렌 화합물의 아자아줄렌이나 6,5-결합헤테로싸이클인식부위에 결합하는 효소, 수용체(receptor), 채널(channel), 이동체(transporter), 기능성단백질(functional protein), RNA 또는 DNA 부위일 수 있다.

그러므로, 본 발명의 화합물은 효소, 수용체(receptor), 채널(channel), 운반체(transporter), 기능성단백질(functional protein), RNA 또는 DNA와 결합하는 장애나 질환에 관련된 진단제(diagnostic agents), 예후제(prognostic agents), 분자침(molecular probes), 분리구(separation tools), 치료제(therapeutic agents)로 사용될 수 있다.

채용되는 구성요소의 적당한 염은 무기양이온을 가진 것일 수 있는데, 예를 들면, 아연, 알루미늄 또는 지르코늄 염같이 비- 또는 테트라발렌트양이온 뿐만아니라 알칼리금속염(alkali metal salts), 특히 나트륨, 칼륨 암모늄염, 그리고 마그네슘, 칼슘 같은 알칼리토금속염일 수 있다.

또한, 디시클로헥실아민염(dicyclohexylamine salts), 메틸-D-글루카민(methyl-D-glucamine)과 같은 유기염기를 가진 염을 생각해 볼 수 있고, 아르기닌(arginine), 리신(lysine), 히스티딘(histidine), 글루타민(glutamine) 등과 같은 아미노산의 염을 생각해 볼 수 있다.

또한, 염기성 질소함유그룹은 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드과 같은 저 알킬할라이드; 디메틸, 디에틸, 이부틸, 다이아밀 설페이드와 같은 디알킬 설페이드; 데실, 로릴, 미리스틸, 스테아릴 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드와 같은 긴사슬할라이드; 벤질, 페네띨 브로마이드와 같은 에스마할라이드(asthma halides) 등을 쿼터나이즈 될 수 있다(quaternized).

염형성제로는 예를 들어 낮은 분자량알킬아민(메틸아민, 에틸아민, 트리에틸아민)이 사용될 수 있다.

물이나 오일에 용해되거나 분산될 수 있는 생성물이 얻어지게 된다.

본 발명의 처리방법을 실행하기 위해서, 적어도 하나의 아자아줄렌 화합물을 가지는 조성물이 특정분야, 예를 들어 포유동물에 비경구적으로, 경구로, 코로, 직장으로, 국부적으로, 구강으로 관리/집행될 수 있다.

비경구적이라는 의미는 적당한 주입기술뿐만 아니라, 피하, 피부내, 정맥 내부, 근육내, 관절내, 동맥내, 활액막내, 흉골내, 척수강내, 병변내 또는 두개내의 주입으로 언급된다.

살균주사조성물은 1,3-부탄디올에서 용액과 같이 무독성 비경구 수용 희석액이나 용매에서의 용액이나 현탁액일 수 있다.

마니톨, 물, 링거용액, 식염수(isotonic sodium chloride) 용액이 수용운반체나 용매로 채용될 수 있다.

게다가, 비휘발성유는 전통적으로 용매나 정지매체(합성 모노- 또는 디글리세라이드)으로서 채용되고 있다.

올레산(oleic acid)와 그 글리세라이드유도체와 같은 지방산은 주사제제를 준비하는 유용한데, 올리브나 카스터오일 특히 그 폴리옥시에틸레이트화물(polyoxyethylated versions)과 같은 천연 제약 수용 오일이 있다.

이러한 오일이나 현탁액은 또한 긴사슬 알콜 희석액이나 분산액, 카르복시메틸셀루로오스, 유사한 분산제를 포함한다.

또한, 트윈스(Tweens), 스팬스(Spans) 또는 다른 유사한 현탁제 또는 다른 복용형태나 고체, 액체로 제약적 수용가능한 제조에서 사용되는 생물학적가용능 강화제와 같은 일반적으로 사용되는 계면활성제는 약물제제의 목적을 위해 사용될 수 있다.

경구적 투입을 위한 조성물은 캡슐(capsules), 알약(tablets), 현탁액과 수성서스펜션(emulsions and aqueous suspensions), 분산액(dispersions), 용액(solutions)을 포함하는 복용형태일 수 있다.

알약의 경우에 통상 사용되는 운반체는 락토스와 전분을 포함한다.

또한, 마그네슘스테아레이트와 같은 윤활제가 전형적으로 첨가된다.

캡슐형태의 경구 조절을 위해서는 유용한 희석액은 락토스와 건조된 전분을 포함한다.

수성 서스펜션이나 현탁액이 경구용으로 관리되는 경우에 활성성분이 현탁제나 서스펜션제와 결합되어 오일상으로 서스펜션화(suspended)되거나 용해될 수 있다. 가능하다면, 특정 감미제, 향미제 또는 조색제가 첨가될 수 있다.

비강용 에어졸이나 흡입제 조성물은 종래 기술에 따라서 준비될 수 있는데, 예를 들면, 벤질알콜이나 다른 적당한 보존제, 생물적합성능을 강화시키는 흡수진척제, 플루오로카본, 다른 용해나 분산제를 채용하는 사린(saline)에서 용액으로 준비될 수 있다.

또한, 적어도 하나의 활성 아자아줄렌 화합물을 갖는 조성물은 직장에의 사용을 위해 좌약의 형태로 관리될 수 있다.

제약적조성물에서 운반체는 취급되는 부위에 해롭지 않고 조성물의 활성성분에 적합한(바람직하게는 활성성분을 안정화시킬 수 있는) 의미에서 수용할 수 있어야만 한다.

적어도 하나의 용해제는 활성 아자아줄렌의 보관, 운송을 위해 제약용 첨가제로서 사용될 수 있다. 예를 들면, 콜로이드 실리콘 옥사이드, 마그네슘스테아레이트, 셀룰로오스, 소디움라우릴설페이트 또는 D&C Yellow # 10이 있다.

상기 아자아줄렌 화합물은 생체외 시도에 의하여(by in vitro assays) 상기 질환 치료에서 효험을 위하여 예비적으로 스크린될(screened) 수 있고 그리고 나서 동물실험과 임상실험에 의하여 확정된다. 다른 방법은 또한 종래기술에서 평균적인 기술의 사람들에게 명확하다.

다음의 예시는 단순히 예를 드는 것에 불과할 뿐 이에 의하여 어떻게라도 본 발명이 제한되는 것은 아니다. 더 수고없이 당업자라면 충분히 재현할 수 있다. 모든 개시 내용은 그 자체로 참고문헌으로 활용된다.

또한, 본 발명은 상기 아자아줄렌 화합물로 세포에서 단백질키나아제나 단백질포스퍼타제의 활동성을 억제하는 방법을 제공한다.

상기 방법은 단백질키나아제 또는 포스퍼타제를 발현하는 세포를 아자아줄렌 화합물로 접촉하는 것을 포함한다.

단백질키나아제와 포스퍼타제는 신호케스케이드(signaling cascades)를 조절한다. 상기 신호케스케이드는 차례로 세포성장, 이동, 분화, 유전자발현, 근육수축, 글루코오스대사, 세포단백질합성, 세포주기조절을 통제한다.

상기 단백질키나아제는 포스페이트 그룹을 화학적으로 부가함으로써(인산화, phosphorylation) 다른 단백질을 수정하는 키나아제효소를 의미한다.

상기 단백질키나아제는 AMPK, BLK, CSF1R, FGFR, FGR, FLT3, KDR, KIT, LCK, LYN, MAP4K5, NTRK, PHKG1, RET, SRC, STK 또는 YES1를 예로 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다.

본 발명에 따르는 세포는 암환자에서 나온 것일 수 있다. 상기 세포는 역시 여기서 암세포를 의미한다.

상기 세포는 다양한 소스와 조직에서 분리된다. 예를 들면, 혈액샘플이나 생체검사로부터 분리될 수 있다.

상기 세포는 줄기세포, 섬유아세포, 림프구양세포일 수 있으며, 세포 기원이나 그 타입에 따라서 배양에서 번식할 수 있고, 불멸로 존재하지 않으면서 번식할 수 있다. 그렇지 아니하면 상기 세포는 바이러스, 종양유전자를 가진 플라스미드 또는 변성바이러스단백질(예를 들어, papilloma E6 or E7단백질)을 이용함으로써 불멸해질 수 있다.

아래 표 7은 예시적인 특정 화합물을 보여준다.

Compound No.	Structure
A1
B1
B2
B3
B4
B5
B6
B7
B8
B9
B10
B11
B12
B13
B14
B15
B16
B17
B18
B19
B20
B21
B22
B23
B24
B25
B26
B27
B28
B29
B30
B31
B32
B33
B34
B35
B36
B37
B38
B39
B40
B41
B42
B43
B44
B45
B46
B47
B48
B49
B50
B51
B52
B53
B54
B55
B56
B57
B58
B59
B60
B61
B62
B63
B64
B65
B66
B67
B68
B69
B70
B71
B72
B73
B74
B75
B76
B77
B78
B79
B80
B81
B82
B83
B84
B85
B86
B87
B88
B89
B90
B91
B92
B93
B94
B95
B96
B97
B98
B99
B100
B101
B102
B103
B104
B105
B106
B107
B108
B109
B110
B111
B112
B113
B114
B115
B116
B117
B118
B119
B120
B121
B122
B123
B124
B125
B126
B127
B128
B129
B130
B131
B132
B133
B134
B135
B136
B137
B138
B139
B140
B141
B142
B143

비교예 (화합물 A1) 3-(benzimidazol-2-yl)-1-azaazulen-2-one (A1)의 준비:

3-Formyl-1-azaazulen-2-one(0.1 mmol)을 에탄올 10mL과 물 5mL의 혼합물에 녹였다. o-Phenylenediamine(0.15 mmol)와 sodium bisulfite(0.2 mmol)을 첨가하고 1일동안 가열하며 리플럭스시켰다. 워킹업(working up)한 후 잔류물을 컬럼크로마토그래피로 정재하여 8.6 mg의 A1화합물을 수율 95%로 얻었다.

¹H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm) 12.28 (s, 1H), 9.41 (d, 1H), 7.70-7.68 (m, 2H), 7.63 (t, 1H), 7.55 (t, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.32 (t, 1H), 7.20-7.18 (m, 2H). LC-MS (m/z) 262 [M+1].

실시예 1 치환된 o-phenylenediamines로 3-formyl-1-azaazulen-2-ones의 축합공정.

3-Formyl-1-azaazulen-2-one(0.1 mmol)을 에탄올 10mL과 물 5mL의 혼합물에 녹였다. 치환된 o-phenylenediamine(0.15 mmol)와 sodium bisulfite(0.2 mmol)을 첨가하고 1일동안 가열하며 리플럭스시켰다. 워킹업(working up)한 후 잔류물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 목적화합물을 얻었다.

B1, ¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ(ppm) 11.53 (s, 1H), 9.56 (d, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.53-7.149 (m, 7H), 4.26 (t, 2H), 2.78 (t, 2H), 2.62 (q, 4H), 1.02 (t, 6H). LC-MS (m/z) 361 [M+1].

B2, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.31 (s, 1H), 9.36 (d, 1H), 7.68 (t, 1H), 7.65 (t, 1H), 7.57 (t, 1H), 7.48-7.45 (m, 2H), 7.34 (t, 1H), 7.04 (dt, 1H). LC-MS (m/z) 280 [M+1].

B4, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.58 (s, 1H), 12.39 & 12.37 (s, 1H), 9.44 & 9.42 (d, 1H), 8.07 & 8.01 (s, 1H), 7.87 & 7.86 (t, 1H), 7.73 & 7.14 (t, 1H), 7.63 & 7.62 (t, 1H), 7.54-7.49 (m, 2H), 7.41 & 7.39 (t, 1H). LC-MS (m/z) 330 [M+1].

B5, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.55 (s, 1H), 9.38 (d, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.15 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.80 (t, 1H), 7.71 (t, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.48 (t, 1H).

B6, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.74 (s, 1H), 9.11 (d, 1H), 7.73-7.81 (m, 5H), 7.56 (t, 3H), 7.27 (s, 2H).

B7, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.39 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.63 (t, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.36 (t, 2H), 3.97 (d, 1H), 3.40 (s, 1H).

B8, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.18 (s, 1H), 11.90, 11.95 (s, 1H), 9.30, 9.35 (d, 1H), 8.95, 9.12 (s, 1H), 7.44-7.60 (m, 3H), 7.36, 7.39 (d, 1H), 7.22-7.29 (m, 1H), 7.00, 7.07 (d, 1H), 6.69 (dt, 1H).

B15, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.37 (s, 1H), 9.44 (broad, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.02 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.73 (t, J=10 Hz, 1H), 7.63 (t, J=10.0 Hz, 1H), 7.54 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.41 (t, J=9.5 Hz, 1H), 7.22 (broad, 1H). LC-MS (m/z) 263 [M+1].

B18, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.38 (s, 1H), 12.19 (s, 2H), 9.30 (d, 2H), 8.16 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.93 (d, 1H), 7.73 (t, 1H), 7.61 (t, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.32-7.40 (m, 3H).

B19, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.59 (d, 1H), 12.36 (d, 1H), 9.35-9.40 (m, 1H), 8.07, 8.13 (s, 1H), 7.38-7.83 (m, 6H).

B20, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.16, 12.19 (s, 1H), 12.02 (s, 1H), 9.30, 9.35 (d, 1H), 9.16, 9.24 (s, 1H), 7.75, 7.89 (s, 1H), 7.45-7.60 (m, 3H), 7.37 (t, 1H), 7.16-7.29 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).

B22, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.28 (s, 1H), 12.00, 12.05 (s, 1H), 9.32, 9.37 (d, 1H), 7.41-7.60 (m, 4H), 7.27 (m, 2H), 6.99 (d, 1H), 3.28-3.35 (m, 8H).

B24, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.10 (d, 1H), 9.40 (m, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.44 (m, 3H), 7.16 (m, 1H), 7.04 (m 3H), 3.60 (d, 2H), 3.20 (b, 1H), 2.41 (q, 2H), 1.24 (d, 6H).

B26, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.20 (s, 1H), 11.97 & 11.91 (s, 1H), 9.38 & 9.31 (d, 1H), 7.58-6.94 (m, 7H), 3.34 (s, 4H), 3.14 (s, 4H), 2.24 (s, 3H). LC-MS (m/z) 360 [M+1].

B27, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.21 (s, 1H) 9.37 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.53-7.60 (m, 1H), 7.53 (m, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.27-7.34 (m, 1H), 6.78 (t, 1H), 3.54 (m, 4H), 2.47 (m, 4H), 2.26 (s, 3H).

B32, ¹H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ1.61 (m, 2H), 11.34, 11.39 (s, 1H), 9.47, 9.51 (d, 1H), 7.45 (dd, 1H), 7.25-7.35, 7.67 (m, 3H), 7.18 (dd, 1H), 6.97-6.98 (m, 1H), 3.23 (s, 4H), 2.62 (s, 4H), 2.52-2.62 (m, 6H), 1.80 (m, 2H).

B33, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.82 (s, 1H), 11.47 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 8.94 (d, 1H), 7.74-7.84 (m, 3H), 7.58 (t, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.28 (d, 1H), 3.85 (d, 2H), 3.67 (d, 2H), 2.80 (s, 6H), 2.27 (dd, 2H), 2.11 (s, 2H).

B34, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 8.85 (d ,1H), 7.31 (d ,1H), 7.21 (t ,1H), 7.08 (m ,1H), 7.04 (m ,4H), 6.94 (m, 1H), 6.75 (d ,1H), 3.50 (t ,4H), 2.97 (d,4H), 2.46 (s ,2H), 2.34 (m ,2H), 2.27 (m ,4H), 1.41 (m ,4H), 0.76 (m ,6H).

B35, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.19 (d, 1H), 9.93 (m, 1H), 7.56 (m, 3H), 7.36 (t, 1H), 7.24 (q,1H), 7.15 (d,1H), 6.91 (t, 1H), 3.25 (m, 2H), 3.17 (s, 4H), 2.80 (d, 2H), 2.65 (s, 4H), 2.14 (s, 3H), 1.98 (m, 1H), 1.77 (d, 2H), 1.47 (q, 2H).

B36, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 9.20 (d ,1H), 7.62 (m ,2H), 7.56 (m ,1H), 7.38 (m ,4H), 7.17 (m ,1H), 7.10 (d ,1H), 3.80 (m ,2H), 3.69 (m ,4H), 2.83 (m ,4H), 2.68 (m ,2H), 2.07 (s ,1H).

B50, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.23 (s, 1H), 12.10, 12.12 (s, 1H), 9.31, 9.34 (d, 1H), 7.59 ( t, 1H), 7.51 (t, 1H), 7.38-7.44 (m, 2H), 7.27-7.33 (m, 1H), 3.03 (s, 4H), 2.53 (s, 4H), 2.27 (s, 3H).

B51, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.26 (s, 1H), 12.19 (s, 1H), 9.35 (d, 1H), 7.64 (t, 1H), 7.53 (t, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.38 (d, 1H), 7.31 (t, 1H), 6.96 (t, 1H), 3.03 (s, 4H), 2.53 (s, 4H), 2.26 (s, 3H).

B52, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.38 (s, 1H), 9.30 (d, 1H), 7.67 (t, 1H), 7.57 (t, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.29-7.36 (m, 2H), 3.54 (s, 3H), 3.16 (s, 2H), 2.48 (s, 2H), 2.27 (s, 2H), 1.26 (s, 2H).

B60, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6 + TFA-d) δ(ppm) 13.50 (s, 1H), 12.81 (s, 1H), 8.57 (d, 1H), 8.32 (d, 2H), 7.88 (m, 1H), 7.77 & 7.73 (d, 1H), 7.63 (t, 1H), 7.33 (t, 1H), 7.30 (d, 2H), 3.96 (s, 4H), 3.46 (s, 4H). LC-MS (m/z) 422 [M+1].

B75, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.25 (s, 1H), 12.21, 12.24 (s, 1H), 10.50, 10.56 (s, 1H), 9.39 (t, 1H), 8.81 (s, 2H), 7.93 (s, 2H), 7.29-7.66 (m, 6H).

B76, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.67, 11.79 (s, 1H), 9.24, 9.34 (d, 1H), 7.39-7.50 (m, 3H), 7.31 (t, 1H), 7.19 (t, 1H), 6.89, 6.95 (s, 1H), 6.70 (d, 1H), 3.50-3.57 (m, 5H), 2.91 (s, 2H), 2.65 (s, 2H), 1.84 (s, 2H).

B77, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.13 (s, 1H), 11.69, 11.81 (s, 1H), 9.25, 9.35 (d, 1H), 7.17-7.53 (m, 5H), 6.89, 6.94 (s, 1H), 6.69 (d, 1H), 3.47-4.07 (m, 6H), 3.17 (s, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.93 (d, 2H).

B85, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.18 (s, 1H), 11.96, 12.02 (s, 1H), 9.26, 9.30 (d, 1H), 7.51-7.57 (m, 2H), 7.44-7.49 (m, 2H), 7.33-7.38 (m, 2H), 7.21-7.30 (m, 2H), 2.72 (s, 2H), 2.63 (s, 2H), 2.32 (s, 2H), 1.94 (s, 2H), 1.25 (s, 2H).

B86, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.32 (s, 1H), 9.29 (d, 1H), 7.64 (t, 1H), 7.54 (t, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.32 (t, 1H), 7.27 (d, 1H), 3.28 (s, 3H), 2.68 (t, 2H), 2.64 (t, 2H), 2.33 (s, 4H), 1.87-1.91(m, 2H).

B101, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.90 (d, 1H), 9.30 (m, 1H), 7.55 (m, 3H), 7.46 (t, 1H), 7.25 (m, 3H), 6.93 (m 1H), 3.67 (d, 2H), 2.68 (m, 2H), 2.29 (s, 6H), 1.90 (d, 2H), 1.58 (m, 2H).

B102, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.20 (b, 1H), 11.90 (d, 1H), 8.30 (s, 1H), 9.30 (m, 1H), 7.54 (m, 3H), 7.40 (s 1H), 7.38 (m, 2H), 7.20 (m, 1H), 3.73 (d, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.03 (m, 2H), 1.70 (m, 2H), 1.21 (m, 2H).

B103, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.90 (d, 1H), 9.28 (m, 1H), 7.50 (m, 3H), 7.35 (t, 1H), 7.19 (m, 3H), 6.91 (t 1H), 3.63 (d, 2H), 3.58 (s, 1H), 2.66 (m, 2H), 2.26 (s, 6H), 1.88 (d, 2H), 1.55 (b, 2H).

B104, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.0 (d, 1H), 9.46 (m, 1H), 7.6 (d, 1H), 7.49 (m, 2H), 7.2-7.51 (m, 3H), 7.01 (b, 2H), 3.69 (m, 4H), 2.79 (q, 1H), 2.71 (b, 4H), 2.05 (b, 2H), 1.84 (b, 4H), 1.25 (s, 2H).

B105, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.96 (d, 1H), 9.37 (m, 1H), 7.56 (m, 3H), 7.40 (t, 1H), 7.29 (m,3H), 6.92 (m,1H), 3.67 (m, 1H), 3.3 (s, 4H), 3.12 (m, 2H), 2.69 (m, 2H), 2.53 (s, 4H), 2.17 (s, 3H), 1.92 (m, 2H), 1.62 (m, 2H).

B106, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 9.16 (d ,1H), 7.59 (t ,1H), 7.48 (t ,1H), 7.35 (m ,5H), 7.251 (1H,s), 7.08 (d ,1H), 3.37 (s ,2H), 3.29 (t ,1H), 2.75 (d ,4H), 2.58 (m ,4H), 1.22 (t ,3H).

B107, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.19 (b,1H), 11.88 (d, 1H), 9.28 (m, 1H), 9.31 (m, 1H), 7.55 (m, 3H), 7.41 (t, 1H), 7.21 (m,3H), 6.85 (t, 1H), 3.66 (m, 1H), 3.53 (b, 2H), 2.85 (q, 2H), 1.89 (b, 2H), 1.58 (m, 2H).

B108, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 9.18 (d ,1H), 7.60 (m ,2H), 7.52 (t ,1H), 7.37 (m ,4H), 7.27 (t ,1H), 7.10 (d ,1H), 3.74 (d ,2H), 2.41 (t ,1H), 2.30 (m ,4H), 1.94 (m ,4H).

B109, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 9.05 (d ,1H), 7.51 (m ,2H), 7.37 (m ,1H), 7.24 (m ,4H), 7.07 (m ,1H), 6.98 (t ,1H), 3.61 (d ,2H), 3.5 (m ,2H), 2.70 (t ,4H), 1.87 (d ,4H), 1.46 (m ,1H), 1.23 (m ,3H).

B110, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.1 (b, 1H), 11.77 (m, 1H), 9.32 (m, 1H), 7.42-7.50 (m, 3H), 7.34 (t, 1H), 7.22 (t, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.59 (m, 1H), 3.48 (m, 2H), 3.20 (m, 1H), 3.11 (m, 1H), 2.88 (m, 1H) , 2.25 (s, 6H), 2.21 (m, 1H), 1.87 (m, 1H).

B111, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 9.30 (d ,1H), 7.56 (m, 2H), 7.38 (d ,1H), 7.26 (m ,4H), 7.17 (s ,1H), 6.95 (d ,1H), 3.04 (s ,4H), 1.98 (s ,4H).

B112, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.58, 12.62 (s, 1H), 12.34 (s, 1H), 9.39, 9.41 (d, 1H), 7.97, 8.11 (s, 1H), 7.83, 7.87 (d, 1H), 7.70 (dd, 1H), 7.58-7.63 (dt, 1H), 7.49-7.53 (m, 2H), 7.36-7.40 (dt, 1H), 2.90 (s, 4H), 2.36 (d, 4H), 2.12 (d, 3H).

B113, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.54, 12.58 (s, 1H), 12.33 (s, 1H), 9.38, 9.40 (d, 1H), 8.00, 8.14 (s, 1H), 7.80, 7.84 (d, 1H), 7.69 (dd, 2H), 7.56-7.62 (m, 2H), 7.49-7.54 (m, 1H), 7.35-7.39 (m, 1H), 3.32 (s, 3H), 2.55 (s, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.72 (d, 2H).

B114, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.49, 12.53 (s, 1H), 12.31 (s, 1H), 9.38, 9.43 (d, 1H), 7.98, 8.17 (s, 1H), 7.75-7.82 (m, 3H), 7.63-7.72 (m, 3H), 7.55-7.61 (m, 3H), 7.49 (t, 1H), 7.35 (dd, 1H).

B115, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.30 (b, 1H), 9.38 (d, 1H), 8.6 (b, 1H), 7.90-7.88 (m, 2H), 7.79 (d, 1H), 7.66 (t 1H), 7.56 (t, 1H), 7.47 (m, 2H), 7.36 (m, 2H).

B116, ¹H-NMR (DMSO-d6) δ(ppm) 12.00 (s ,1H), 9.18 (d ,1H), 8.69 (s ,1H), 8.05 (s, 2H), 7.56-7.66 (m ,2H), 7.45-7.48 (m ,2H), 7.34 (t ,1H), 7.25 (d ,1H), 7.16 (d ,1H).

실시예 2: 알킬할라이드 / 알킬토실레이트로 B22과 B76의 N- 알킬레이션공정

CH₃CN용매의 B23 또는 B76 용액에 1.1 eq. 디이소프로필에틸아민, 1.2 eq. 알킬할라이드 또는 알킬토실레이트를 첨가하고 16시간동안 리플럭스환경에서 교반하였다. 반응후 상온으로 냉각하고 진공으로 농축한 후 실리카젤컬럼크로마토그래피로 정제하여 목적물질을 얻었다.

B23, ¹H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.9 (b, 1H), 9.27 (d, 1H), 7.56-7.50 (m, 2H), 7.46 (t, 1H), 7.39 (d, 1H), 7.25 (t, 1H), 7.17, (s, 1H), 6.93 (d, 1H), 3.16 (s,2H), 3.13 (t, 4H), 3.00 (t, 4H).

B28, ¹H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.18 (s, 1H), 11.87, 11.93 (2s, 1H), 9.28, 9.34 (2d, 1H), 7.49-7.55 (m, 2H), 7.45 (t, 1H), 7.36 (t, 1H), 7.24 (t, 1H), 7.13, 7.18 (2s, 1H), 6.92 (t, 1H), 3.11 (s, 4H), 2.54 (s, 4H), 2.39 (q, 2H), 1.04 (t, 3H).

B38 ¹H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.88, 11.94 (2s, 1H), 9.28, 9.34 (2d, 1H), 7.43-7.56 (m, 3H), 7.37 (t, 1H), 7.18-7.26 (m, 2H), 6.93 (t, 1H), 4.63 (t, 1H), 4.54 (t, 1H), 3.12 (s, 4H), 2.72 (t, 1H), 2.64 (s, 4H).

B39, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.88, 11.94 (2s, 1H), 9.29, 9.35 (d, 1H), 7.43-7.55 (m, 3H), 7.37 (t, 1H), 7.23 (q, 1H), 7.15 (d, 1H), 6.92 (t, 1H), 4.55 (t, 1H), 4.45 (t, 1H), 3.11 (s, 4H), 2.55 (t, 4H), 2.43 (t, 2H),1.88 (t, 1H), 1.82 (t, 1H).

B78, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.74, 11.88 (d, 1H), 9.40, 9.50 (d, 1H), 7.49-7.67 (m, 4H), 7.25-7.33 (m, 1H), 6.87-7.00 (m, 1H), 6.70-6.76 (m, 1H), 1.87-4.81 (m, 18H).

B79, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.72, 11.85 (s, 1H), 9.39, 9.49 (d, 1H), 7.44-7.67 (m, 4H), 7.25-7.33 (m, 1H), 6.90, 6.94 (s, 1H), 6.72 (t, 1H), 4.76 (d, 2H), 4.55 (d, 2H), 3.50-3.58 (m, 4H), 2.92 (d, 2H), 2.67 (d, 2H), 1.84-1.86 (m, 2H).

B80, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.13 (s, 1H), 11.68, 11.71, 11.28 (s, 1H), 9.24, 9.34 (d, 1H), 7.40-7.53 (m, 3H), 7.31-7.35 (m, 1H), 7.18-7.25 (m, 1H), 6.95-7.00 (m, 1H), 6.73-6.75 (m, 1H), 1.86-3.93 (m, 14H).

B81, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.31, 11.73, 11.87 (s, 1H), 9.38, 9.48, 9.75, 9.82 (d, 1H), 8.33-8.34, 7.81-7.84, 7.40-7.61 (m, 4H), 7.24-7.32 (m, 1H), 6.84-6.99 (m, 1H), 6.72 (t, 1H), 1.75-4.92 (m, 17H).

B83, ¹H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ1.81-4.55 (m, 22H), 11.19, 11.27 (s, 1H), 9.44, 9.50 (d, 1H), 6.68-7.62 (m, 6H).

B82, ¹H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ1.17-4.54 (m, 16H), 10.85, 11.11 (s, 2H), 9.37-9.40 (m, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.11-7.43 (m, 5H), 6.71-6.76 (m, 1H).

실시예 3: 아미노환원반응으로 B22과 B76의 N- 알킬레이션공정

에탄올 용매의 B23 또는 B76 용액에 2.5 eq. 트리에틸아민, 3.5 eq. 알데히드를 첨가하였다. 1시간후 5.6 eq. 소디움시아노보로하이드라이드를 첨가하고 24시간동안 상온에서 교반하였다. 낮은 압력에서 응축하여 컬럼크로마토그래피로 생성물을 얻었다.

B43, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.18 (s, 1H), 11.87, 11.93 (2s, 1H), 9.27, 9.33 (2d, 1H), 7.84-7.90 (m, 4H), 7.45-7.60 (m, 6H), 7.38 (t, 1H), 7.18-7.26 (m, 2H), 6.93 (t, 1H), 3.71 (s, 2H), 3.14 (s, 4H),2.62 (s, 4H).

B44, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.14 (s, 1H), 11.85, 11.91 (2s, 1H), 9.31, 9.36 (2d, 1H), 7.80 (d, 2H), 7.58 (d, 2H), 7.50-7.55 (m, 2H), 7.44 (t, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.24 (q, 1H), 7.17 (d, 1H), 6.93 (t, 1H), 3.66 (s, 2H), 3.20 (s, 4H), 2.57 (s, 4H).

B45, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.20 (s, 1H), 11.85, 11.91 (2s, 1H), 9.25, 9.31 (2d, 1H), 7.40-7.52 (m, 3H), 7.33 (t, 1H), 7.21 (q, 1H), 7.13 (t, 1H), 7.10 (d, 2H), 6.89 (t, 1H), 6.66 (d, 1H), 3.39 (s, 2H), 3.08 (s, 4H), 2.83 (s, 6H), 2.50 (s, 4H).

B46, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.18 (s, 1H), 11.87, 11.93 (2s, 1H), 9.28, 9.35 (2d, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.43-7.57 (m, 3H), 7.38 (t, 1H), 7.13-7.27 (m, 2H), 6.92 (t, 1H), 6.51 (d, 1H), 6.41 (d, 1H), 3.66 (s, 2H), 3.27 (s, 4H), 2.75 (s, 4H).δ

B47, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.88, 11.94 (2s, 1H), 9.27, 9.30 (2d, 1H), 8.53 (d, 2H), 7.43-7.55 (m, 3H), 7.37 (d, 2H), 7.34 (t, 1H), 7.14-7.25 (m, 3H), 6.92 (t, 1H), 3.59 (s, 2H), 3.15 (s, 4H), 2.58 (s, 4H).

B48, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.87, 11.94 (2s, 1H), 9.27, 9.33 (2d, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.42 (d, 2H), 7.75 (d, 1H), 7.43-7.56 (m, 3H), 7.36-7.39 (m, 2H), 7.23 (q, 1H), 7.15 (d, 2H), 6.92 (t, 1H), 3.58 (s, 2H), 3.12 (s, 4H), 2.57 (s, 4H).

B49, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.88, 11.94 (2s, 1H), 9.28, 9.34 (2d, 1H), 8.42, 8.52 (2d, 1H), 7.78 (t, 1H), 7.43-7.57 (m, 3H), 7.38 (t, 1H), 7.18-7.35 (m, 3H), 6.93 (t, 1H), 6.50 (s, 1H), 3.67 (s, 2H), 3.14 (s, 4H), 2.62 (s, 4H).

B87, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.11, 12.16 (s, 1H), 11.68, 11.80 (s, 1H), 9.25, 9.34 (d, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.17-7.51 (m, 5H), 6.89, 6.95 (s, 1H), 6.70 (d, 1H), 3.66 (s, 2H), 3.56 (s, 2H), 3.52 (s, 2H), 2.75 (s, 2H), 2.56 (s, 2H), 1.98 (s, 2H).

실시예 4: B22과 B76의 N- 아릴레이션공정

n-부탄올 용매에서의 1.5 eq. 할로헤테로아릴, 1eq. B23 또는 B76, 2 eq. N,N-디이소프로필에틸아민의 혼합물을 24시간동안 140℃로 교반하였다. 상온으로 냉각후 물로 희석하고 에틸아세테이트로 추출하였다. 용매는 감압분위기에서 증발시키고 잔류물은 실리카젤컬럼크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다.

B59, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.94, 11.99 (2s, 1H), 9.28, 9.34 (2d, 1H), 9.01 (s, 1H), 7.51-7.59 (m, 3H), 7.46 (t, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.24-7.27 (m, 2H), 6.99 (t, 1H), 5.71 (d, 1H), 3.57 (t, 4H), 3.23 (t, 4H).

B61, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.30, 11.33 (2s, 1H), 10.44, 10.53 (2s, 1H), 9.46, 9.49 (2d, 1H), 8.15 (s, 2H), 7.50 (q, 1H), 7.30-7.47 (m, 3H), 7.21 (t, 1H), 7.01-7.05 (m, 2H), 3.73 (s, 4H),3.31 (s, 4H).

B63, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.00, 12.06 (2s, 1H), 9.42, 9.48 (2d, 1H), 7.51-7.70 (m, 6H), 7.33 (q, 1H), 7.20 (d, 1H), 6.97 (t, 1H), 3.57 (t, 4H), 3.13 (t, 2H), 3.07 (t, 2H).

B64, ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.97, 12.02 (2s, 1H), 9.30, 9.36 (2d, 1H), 8.18 (d, 1H), 7.57-7.61 (m, 3H), 7.48 (t, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.24-7.28 (m, 2H), 7.03 (t, 1H), 6.93 (d, 1H), 6.70 (t, 1H), 3.68 (t, 4H), 3.22 (t, 4H).

B65, ¹H NMR (500 MHz, CDCl3) δ(ppm) δ11.20, 11.26 (2s, 1H), 9.45 (d, 1H), 8.35 (t, 1H), 8.15 (d, 1H), 7.17-7.50 (m, 7H), 7.01 (d, 1H), 6.67 (m, 1H), 3.67 (s, 4H), 3.32 (s, 4H).

B67, ¹H NMR (500 MHz, CDCl3) δ(ppm) 11.30, 11.36 (2s, 1H), 9.45 (m, 1H), 7.69-7.71 (m, 1H), 7.29-7.51 (m, 6H), 7.04 (m, 2H), 3.78 (t, 4H), 3.20 (t, 4H), 3.15 (s, 6H), 2.33 (s, 3H).

B68, ¹H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.93, 11.98 (2s, 1H), 9.29, 9.30 (2d, 1H), 8.39, 8.40 (d, 2H), 7.53-7.58 (m, 2H), 7.42-7.48 (m, 1H), 7.39 (t, 1H), 7.21-7.28 (m, 2H), 7.00 (t, 1H), 6.65 (t, 1H), 3.93 (t, 4H), 3.18 (t, 4H).

B69, ¹H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.94, 12.00 (2s, 1H), 9.29, 9.35 (2d, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.12 (t, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.52-7.56 (m, 2H), 7.46 (t, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.22-7.27 (m, 2H), 6.71-7.00 (m, 1H), 3.76 (t, 4H), 3.17 (t, 4H).

B93, ¹H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.17 (s, 1H), 11.74 (s, 1H), 8.11 (m, 2H), 7.49-7.53 (m, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.35 (m, 1H), 7.23 (m, 1H), 7.03 (m, 1H), 6.93 (d, 2H), 6.77 (d, 1H), 3.82 (s, 1H), 3.70 (s, 1H), 3.56 (s, 1H), 3.51 (s, 1H), 3.17 (s, 1H), 2.09 (s, 2H), 1.76 (s, 1H), 1.24 (m, 2H).

B94, ¹H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ2.04-4.04 (m, 10H), 12.12, 12.16 (s, 1H), 11.69, 11.81 (s, 1H), 9.24, 9.35 (d, 1H), 7.40-8.05 (m, 4H), 7.30-7.35 (m, 1H), 7.18-7.25 (m, 1H), 6.97, 7.03 (s, 1H), 6.75-6.85 (m, 1H), 6.67 (t, 1H), 6.50 (t, 1H).

B95, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.12, 12.15 (s, 1H), 11.66, 11.79 (s, 1H), 9.22, 9.32 (d, 1H), 8.30 (d, 1H), 8.05 (d, 1H), 7.18-7.54 (m, 5H), 6.92, 6.96 (s, 1H), 6.68-6.72 (m, 2H), 2.03-3.82 (d, 10H).

B96, ¹H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ1.93-3.65 (m, 10H), 12.14 (s, 1H), 11.71, 11.83 (s, 1H), 9.26 (d, 1H), 7.42-7.95 (m, 5H), 7.33 (d, 1 H), 7.22 (t, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.75 (d, 1H).

B97, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.13 (s, 1H), 11.69, 11.81 (s, 1H), 9.26 (s, 1H), 7.41-7.52 (m, 3H), 7.32 (d, 1H), 7.23 (t, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.76 (d, 1H), 5.89 (s, 1H), 3.68 (s, 2H), 3.48 (s, 2H), 3.31 (s, 4H), 3.04 (s, 6H), 2.11 (s, 3H), 2.01 (t, 2H).

B98, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.13 (s, 1H), 11.69, 11.80 (s, 1H), 9.23, 9.33 (d, 1H), 7.32-7.55 (m, 4H), 7.19-7.26 (m, 1H), 6.96, 7.01 (s, 1H), 6.77 (t, 1H), 6.55 (t, 1H), 3.98 (s, 2H), 3.66 (s, 2H), 3.62 (d, 2H), 2.55 (s, 2H), 2.00 (d, 2H).

B99, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.12 (s, 1H), 11.69, 11.81 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.41-7.52 (m, 3H), 7.33 (d, 1H), 7.21 (t, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.77 (d, 1H), 3.90 (s, 2H), 3.68 (s, 2H), 3.57 (s, 2H), 3.50 (s, 2H), 2.04(t, 2H).

B100, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.11 (s, 1H), 11.70, 11.82 (s, 1H), 9.23, 9.34 (d, 1H), 7.30-7.53 (m, 4H), 7.16 7.24 (m, 2H), 6.97-7.07 (m, 2H), 6.75(d, 1H), 3.93 (s, 2H), 3.67 (s, 2H), 3.54 (s, 2H), 3.46 (s, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.03 (t, 2H).

실시예 5: B22과 B76의 N- 아실레이션 / 설포닐레이션공정

디클로로메탄 용매에서 1 eq. B23 또는 B76, 1.5 eq. N,N-디이소프로필에틸아민의 혼합물에 1.2 eq. 아실클로라이드 또는 설포닐클로라이드를 첨가하고 밤새 상온에서 교반하였다. 소디움비카보네이트용액으로 씻고서 감압하에 용매를 증발시키고 잔류물은 실리카젤컬럼크로마토그래프로 정제하여 생성물을 얻었다.

B54, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.95, 12.00 (s, 1H), 9.28, 9.33 (d, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.44-7.57 (m, 3H), 7.38 (t, 1H), 7.19-7.27 (m, 2H), 6.96 (t, 1H), 3.55-3.58 (m, 4H), 3.05-3.12 (m, 4H).

B57, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.20 (s, 1H), 11.97, 12.02 (s, 1H), 9.32, 9.38 (d, 1H), 7.47-7.61 (m, 3H), 7.40 (t, 1H), 7.23-7.31 (m, 2H), 6.97-7.00 (m, 1H), 3.19-3.25 (m, 8H), 2.97 (s, 3H).

B58, ¹H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.7 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.92 (d, 1H), 7.68-7.78 (m, 3H), 7.52 (t, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.20 (t, 1H), 3.29-3.41 (m, 12H).

B88, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.13, 12.17 (s, 1H), 11.69, 11.83 (s, 1H), 9.25, 9.35 (d, 1H), 7.76, 8.01 (s, 1H), 7.40-7.52 (m, 3H), 7.33 (t, 1H), 7.21 (dd, 1H), 6.95, 6.99 (s, 1H), 6.74 (d, 1H), 3.24-3.71 (m, 8H), 1.86 (s, 2H).

B89, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.71, 11.83 (s, 1H), 9.24, 9.34 ( d, 1H), 7.33-8.09 (m, 5H), 7.18-7.22 (m, 1H), 6.96, 7.01 (s, 1H), 6.58, 6.75 (d, 1H), 3.66 (m, 4H), 2.42 (t, 2H), 2.34 (t, 2H), 2.25 (t, 2H), 1.98 (t, 2H), 1.88 (t, 2H).

B90, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.13, 12.17 (s, 1H), 11.71, 11.84 (s, 1H), 9.25, 9.35 (d, 1H), 7.41-7.54 (m, 3H), 7.33 (t, 1H), 7.19-7.26 (m, 1H), 6.97, 7.02 (s, 1H), 6.76 (t, 1H), 1.95-3.67 (m, 13H).

B91, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.13, 12.17 (s, 1H), 11.71, 11.83 (s, 1H), 9.25, 9.34 (d, 1H), 7.39-7.52 (m, 3H), 7.33 (t, 1H), 7.22 (dd, 1H), 6.75 (d, 1H), 6.67, 7.01 (s, 1H), 1.39-3.65 (m, 16H).

실시예 6: 유리아(urea)타입 화합물의 준비

시작물질 B6과 1.5 eq. 이소시아네이트 22를 디클로로메탄 용매에서 혼합하여 1일동안 상온에서 반응하도록 하였다. 워킹업 후 잔류물을 컬럼크로마토그래피로 정제하여 타겟 유리아화합물을 얻었다.

B55, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.21 (s, 1H), 11.92, 11.98 (2s, 1H), 9.28, 9.35 (2d, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.46-7.58 (m, 5H), 7.39 (t, 1H), 7.23-7.28 (m, 4H), 6.99 (t, 1H), 6.94 (t, 1H), 3.65 (s, 4H),3.15 (s, 4H).

B118, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.25 (s, 1H), 12.13 & 12.11 (s, 1H), 9.41 & 9.36 (d, 1H), 9.15 & 9.11 (s, 1H), 8.87 & 8.76 (s, 1H) 8.18-8.17 (m, 1H), 7.92 & 7.86 (s, 1H), 7.70-7.23 (m, 8H). LC-MS (m/z) 498 [M+1].

B119, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.21 (s, 1H), 12.09 (s, 1H), 9.35 (s, 1H), 9.17(s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.68 (d, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.58 (dd, 2H), 7.49 (t, 2H), 7.40 (d, 2H), 7.28 (t, 1H), 7.20 (d, 1H).

B120, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.09, 12.20 (s, 1H), 12.05, 12.08 (s, 1H), 9.32, 9.37 (d, 1H), 8.09-9.16 (m, 2H), 7.87 (t, 1H), 7.55-7.62 (m,2H), 7.46-7.52 (m, 1H), 7.36-7.41 (m, 1H), 6.80-7.30 (m, 3H).

B121, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.04, 12.06 (s, 1H), 9.31, 9.36 (d, 1H), 8.66, 8.70 (s, 1H), 8.60, 8.63 (s, 1H), 7.84, 7.87 (s, 1H), 7.54-7.61 (m, 2H), 7.44-7.51 (m, 3H), 7.38 (t, 1H), 7.16-7.30 (m, 4H), 6.96 (t, 1H).

B122, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.11 (s, 1H), 12.20 (s, 1H), 9.63, 9.67 (s, 1H), 9.32, 9.36 (d, 1H), 9.15, 9.25 (s, 1H), 7.81, 7.87 (s, 1H), 7.53-7.62 (m, 4H), 7.49 (t, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.28 (dd, 1H), 7.21 (t, 1H).

B123, ¹H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ12.02 (s, 1H), 9.30, 9.34 (d, 1H), 8.62, 8.74 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.50-7.59 (m, 2H), 7.46 (t, 1H), 7.35-7.40 (m, 1H), 7.20-7.28 (m, 2H), 7.10-7.15 (m, 3H), 2.62 (dd, 2H), 2.24 (s, 3H),1.15 (t, 3H).

B124, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.17 (s, 1H), 11.96, 11.99 (s, 1H), 9.29, 9.34 (d, 1H), 8.16, 8.27 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.36 (t, 1H), 7.34-7.59 (m, 3H), 7.24 (dd, 1H), 7.06, 7.12 (d, 1H).

B125, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.20 (s, 1H), 12.06, 12.08 (s, 1H), 9.32, 9.37 (d, 1H), 8.99, 9.08 (s, 1H), 8.49 (d, 1H), 8.21 (t, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.48 (t, 1H), 7.39 (t, 1H), 7.13-7.30 (m, 4H), 6.99 (dd, 1H).

B126, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.05 (s, 1H), 9.31, 9.36 (d, 1H), 9.30, 9.32 (s, 1H), 9.07, 9.16 (s, 1H), 7.84, 7.89 (s, 1H), 7.52-7.60 (m, 3H), 7.47 (t, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.15-7.31 (m, 4H), 6.74 (t, 1H).

B127, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.04, 12.06 (s, 1H), 9.30, 9.35 (d, 1H), 8.91, 8.93 (s, 1H), 8.82, 8.91 (s, 1H), 7.83, 7.87 (s, 1H), 7.45-7.60 (m, 5H), 7.38 (t, 1H), 7.17-7.28 (m, 2H), 7.11 (t, 2H).

B128, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.20 (s, 1H), 12.07, 12.08 (s, 1H), 9.32, 9.36 (d, 1H), 8.94, 9.04 (s, 1H), 8.46, 8.47 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.51-7.61 (m, 2H), 7.48 (t, 1H), 7.39 (t, 1H), 7.13-7.32 (m, 3H), 7.05 (t, 1H).

B129, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.19 (s, 1H), 12.06 (s, 1H), 9.32 (d, 1H), 8.79, 8.88 (s, 1H), 8.00 (1H, s), 7.84 (1H, s), 7.56 (t, 2H), 7.48 (t, 1H), 7.38 (d, 1H), 7.24-7.33 (m, 2H), 7.13-7.20 (m, 3H).

B130, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.19 (s, 1H), 12.06 (s, 1H), 9.32, 9.37 (d, 1H), 8.87 (d, 1H), 8.69, 8.79 (s, 1H), 7.78-7.85 (m, 2H), 7.46-7.60 (m, 3H), 7.39 (t, 1H), 7.17-7.33 (m, 4H).

B131, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.19 (s, 1H), 12.08 (s, 1H), 9.32, 9.36 (d, 1H), 9.31, 9.40 (s, 1H), 8.01, 8.03 (s, 2H), 7.85, 7.88 (s, 1H), 7.56-7.68 (m, 4H), 7.48 (t, 1H), 7.39 (t, 1H), 7.13-7.30 (m, 3H).

B132, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.20 (s, 1H), 12.06, 12.08 (s, 1H), 9.32, 9.37 (d, 1H), 8.98, 9.01 (s, 1H), 8.69, 8.79 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.83, 7.89 (s, 1H), 7.46-7.61 (m, 5H), 7.39 (t, 1H), 7.20-7.30 (m, 3H).

B133, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.20 (s, 1H), 12.08 (s, 1H), 9.32, 9.37 (d, 1H), 9.02, 9.05 (s, 1H), 8.69, 8.79 (s, 1H), 7.84, 7.88 (s, 1H), 7.58-7.69 (m, 6H), 7.48 (t, 1H), 7.39 (t,1H), 7.18-7.28 (m, 2H).

B134, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 10.02-12.20 (m, 1H), 8.90-9.39 (m, 2H), 6.52-8.18 (m, 12H).

B135, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.08, 12.10 (s, 1H), 9.49, 9.58 (s, 1H), 9.32, 9.38 (d, 1H), 7.88, 7.91 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.52-7.61 (m, 2H), 7.49 (t, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.35 (dd, 1H), 7.16-7.31 (m, 2H).

B136, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.09 (s, 1H), 9.39, 9.47 (s, 1H), 9.32, 9.35 (d, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.08 (dd, 1H), 7.85-7.88 (m, 1H), 7.71-7.75 (m, 3H), 7.52-7.61 (m, 2H), 7.48 (t, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.13-7.30 (m, 2H).

B137, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.04, 12.06 (s, 1H), 9.31 , 9.36 (d, 1H), 9.26 (d, 1H), 8.18 (t, 2H), 7.88 (d, 1H), 7.51-7.61 (m, 2H), 7.47 (t, 1H), 7.39 (t, 1H), 7.13-7.30 (m, 2H,), 7.02 (d, 1H), 6.891-6.954 (m, 2H), 3.894 (s, 3H).

B138, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.04, 12.06 (s, 1H), 9.31 , 9.35 (d, 1H), 8.62, 8.65 (d, 2H), 7.83, 7.87 (s, 1H), 7.54-7.61 (m, 2H), 7.48 (t, 1H), 7.39 (t, 1H), 7.15-7.30 (m, 4H), 6.95 (t, 1H), 6.54 (d, 1H), 3.74 (s, 3H).

실시예 7: 아민을 가지고 커플링산 B7로 아마이드유도체 준비

B7과 1.5 eq. HBTU(2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate)를 디클로로메탄 용매에서 상온으로 밑둥근플라스크에서 혼합하였다. 10분후 3 eq. 아민을 적하 첨가하였다. 질소분위기에서 상온으로 밤새 교반하였다. 에틸아세테이트로 희석하고, 소디움카보네이트용액으로 씻은 후 유기층을 분리하고 무수마그네슘설페이트로 건조하고서 진공으로 증발시켰다. 초기생성물은 플라스크컬럼으로 정제되었다.

B71, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.42 (d, 1H), 10.10 (s, 1H), 9.42 (d, 1H), 7.73-7.82 (m, 3H), 7.63 (t, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.30 (d, 1H), 3.55 (t, 4H), 2.94 (t, 4H), 2.66 (s, 3H).

B72, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 9.39 (d, 2H), 8.51 (s, 2H), 8.24 (s, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.59-7.67 (m, 3H), 7.55 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.32 (t, 2H), 6.69 (s, 1H), 3.50 (t, 4H), 3.29 (t, 4H).

B73, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.42 (s, 1H), 12.28 (br, 1H), 10.25 (d, 1H), 9.43 (dd, 1H), 8.02 (dd, 1H), 7.90 (t, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.72 (m, 2H), 7.62 (m, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.05 (d, 1H), 3.30 (t, 4H), 2.01 (t, 4H).

B74, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.36 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.67-7.69 (m, 2H), 7.56 (d, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.36 (t, 1H), 7.22 (s, 1H), 4.11 (s, 1H), 3.67 (d, 1H), 3.51 (s, 1H), 3.20 (s, 1H), 2.64 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.32 (d, 2H), 1.83 (d, 2H), 1.79 (s, 1H), 1.26 (s, 1H).

B92, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.35 (s, 1H), 9.40 (t, 1H), 8.03 (m, 2H), 7.66 (m, 2H), 7.60 (m, 2H), 7.47 (d, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.09 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 6.65 (m, 1H), 3.59-3.84 (m, 5H), 3.20 (s, 1H), 1.99 (s, 2H), 1.83 (d, 2H), 1.61-1.82 (m, 2H), 1.26 (s, 1H).

실시예 8: imidazo [1,2-a]pyridine 타입 화합물의 준비

동일한 몰(mole)의 3- (bromoacetyl)-1-azaazulen-2-one와 2-aminopyridines를 에탄올 용매에 첨가하고 1일동안 가열하며 리플럭스시켰다. 용매는 진공으로 증방하고 잔류물은 에틸아세테이트와 소디움카보네이트용액 상으로 나누어졌다. 에틸아세테이트층이 분리되고 워크업되었다(worked up). 잔류물은 컬러크로마토그래피로 정제되어 생성물을 얻었다.

B9, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.84 (s, 1H), 9.33 (d, 1H), 8.67 (d, 1H), 8.66 (s, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.29 (t, 1H), 7.27 (t, 1H), 7.25 (t, 1H), 7.13 (d, 1H), 7.04 (t, 1H), 6.92 (t, 1H). LC-MS (m/z) 262 [M+1].

B10, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 12.27, 12.37 (s, 1H), 11.47, 11.53, 12.20 (s, 1H), 9.30, 9.40 (d, 1H), 8.13, 8.20 (s, 1H), 6.76-7.79 (m, 5H).

B13, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.95 (s, 1H), 9.44 (s,1H), 9.30 (d, 1H), 8.76 (s, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.31-7.40 (m, 2H), 7.22 (d, 1H), 7.11 (t, 1H).

B14, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 9.03 (d, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.30-7.7.36 (m, 2H), 7.13 (t, 1H), 3.90 (s, 3H).

B16, ¹H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.84 (s, 1H), 9.25 (d, 1H), 8.68 (d, 1H), 8.67 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.22-7.30 (m, 2H), 7.13 (d, 1H), 6.68-7.04 (m, 2H).

B17, ¹H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ11.85 (s, 1H), 9.26 (d, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.23-7.37 (m, 3H), 7.14 (d, 1H), 7.04 (t, 1H).

실시예 9: imidazo [1,2-a]pyrimidine 타입 화합물의 준비

동일한 몰의 3-(bromoacetyl)-1-azaazulen-2-one와 2-aminopyrimidines를 에탄올에 첨가하고 1일 동안 가열하며 리플럭스하였다. 용매를 진공하에서 증발되고 잔류물은 에틸아세테이트와 소디움카보네이트용액으로 분리되었다. 에틸아세테이트층을 분리하고 워크업했다. 잔류물은 컬럼크로마토그래프로 정제하여 생성물을 수득하였다.

B12, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 11.91 (broad, 1H), 9.36 (d, 1H), 9.07 (d, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.33 (t, 1H), 7.20 (d, 1H), 7.12-7.08 (m, 2H). LC-MS (m/z) 263 [M+1].

실시예 10: 인돌 타입 화합물의 준비

동일한 몰의 2-(3-fluorophenyl)acetic acid와 1-azaazule-2-one을 이튼시약(Eaton's reagent)(2㎖/mmole 반응물에 대해)으로 첨가한 후 1일 동안 80℃로 유지하였다. 50㎖ 물에 적하하여 30분동안 교반하였다. 생성물은 여과되고, 물로 워싱한 후 건조되었다(aspirated to dry). 일부의 3-(2-(3-fluorophenyl)acetyl)-1-azaazule-2-one (201mg)를 농축된 설퓨릭산(2㎖)에 용해시키고 얼음조에서 냉각하고서 농축된 니트릭산(65㎖)을 첨가하고 1시간동안 교반하였다. 5㎖물을 희석시키기 위하여 첨가하였다. 고체상 생성물은 여과되고 물과 메탄올로 씻고서 건조하여 니트로생성물을 얻었다. 3-(2-(5-fluoro-2-nitrophenyl)acetyl)-1-azaazule-2-one (57 mg), KF (41 mg) 그리고 N-methylpiperazine(109 mg)를 DMSO(3ml)용매에 첨가하고 3시간동안 120℃로 가열하였고, 희석을 위하여 물㎖를 첨가하였다. 고체상 생성물을 여과하고 물로 씻고서 건조하였다. 3-(2-(5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2-nitrophenyl)acetyl)-1-azaazule-2-one (10 mg)를 메탄올(5 mg) 용매에 용해시키고 14시간동안 레이니니켈(Raney Nickel) 존재하에 2기압 수소분위기에서 수소화하였다. 이어서 여과하고 진공하에서 농축하여 5.2 mg의 목적생성물 3-(5-(4-methylpiperazin-1-yl)-1H-indol-2-yl)-1-azaazule-2-one을 얻었다.

B143, ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ(ppm) 10.04 (s, 1H), 11.01 (s, 1H), 8.07 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.29(t, 2H), 7.16 (d, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.06 (t, 1H), 6.94 (d, 1H), 6.90 (s, 1H), 3.49 (b, 4H), 2.82 (b, 4H), 2.53(s, 3H).

실시예 11: 키나아제 제조

본 발명에 따르는 아자아줄렌 화합물은 하기 공정에 따라 생화학적 DELFIA (Dissociation Enhanced Lanthanide FIA) 어세이에 의하여 FLT-3, c-KIT와 KDR 키나아제의 활동성을 억제하는데 효과를 가지도록 취급된다. 상기 어세이는 Division of Cell Engineering, Biomedical Engineering Research Laboratories, Industrial Technology Research Institute, Bldg. 53, 195, sec. 4, Chung Hsing Rd. Chutung, Hsinchu, Taiwan 310, R.O.C.에 의하여 수행되었다.

FLT-3어세이는 HTScang FLT-3 키나아제어세이키트(Cell Signaling Technology^RTM)에 대한 프로토콜에서 기술된 원칙에 따라 수행되었다. 상기 어세이는 다음의 조건에서 수행되었다: FLT-3 소스: GST키나아제용해단백질는 아미노말단 GST 태그를 가지고 구성체 발현 인간FLT-3 (Arg571-Ser993) (GenBank 수탁번호 No. NM.sub.-004119)로 바큐로바이러스발현계를 사용하여 생산되었다, 기재: 1.5uM 가스트린전구체 미오틴화 페티드(Gastrin Precursor Biotinylated Peptide, with Tyr87 as phosphorylation site), 운반체: 1% DMSO, 전배양시간/온도: 5 분, 상온, 배양시간/온도: 30 분, 상온, 배양완충: 60 mM HEPES pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 3 uM Na₃VO₄, 1.25 mM DTT, 20 uM ATP, 정량법: DELFIA^RTM & Assay 방법.

FLT-3키나아제에 대한 본 발명에 따르는 아자아줄렌 화합물의 억제 효과는 아래 표 8에서 요약된다.

Compound No.	FLT-3 inhibition at 1uM (%)	FLT-3 inhibition at 0.1uM (%)
A1 (Prior Art)	59.4	11.5
B1	10.4	8.4
B2	59.9	18.9
B4	37.1	13.7
B5	27.1	12.8
B6	45.1	12.8
B7	8.7	-
B8	68.5	9.8
B9	19.1	5.8
B10	20.3	8.9
B11	27.3	12.5
B12	1.6	4.5
B14	9.6	-
B15	18.1	8.6
B16	16.5	4.8
B17	23.4	4.9
B18	40.2	16.4
B19	28.6	14.7
B20	33.3	16.7
B21	63.0	20.1
B22	83.9	29.1
B23	91.5	41.2
B24	71.5	19.1
B26	91.2	45.6
B32	8.1	8
B33	96.6	58.7
B34	85.4	40.2
B35	86.7	42
B36	64	24.8
B38	69.2	21.8
B39	78.6	24.3
B40	88.1	38.2
B43	67.2	33.5
B44	79.1	29
B45	77	27.3
B46	79.2	27.4
B49	72.2	21.9
B50	79.6	25.1
B51	66.6	20.6
B52	42.5	20.3
B54	91.6	46.0
B55	93.2	45.2
B57	81.5	29.5
B58	83.8	35.7
B59	96.1	55.6
B60	99.1	71.7
B61	74.3	17.7
B62	13.7	9.5
B63	33.4	18.9
B64	79.2	29.5
B65	60.5	16.3
B66	55.5	20.3
B67	95.3	43.3
B68	80.7	39.1
B69	77.3	29.3
B70	27.5	11.1
B71	39.3	6.8
B72	85.5	36.8
B73	22.3	23.7
B74	64.0	27.1
B75	37.1	13.4
B76	92.9	50.0
B77	94.3	47.1
B78	39.4	20.3
B79	36.6	22.3
B80	71.4	23.1
B81	21	9.9
B82	81.6	30.3
B83	21.2	11
B85	89.8	44.4
B87	91.6	39.8
B88	62.4	20.6
B89	56.7	20
B90	59.2	23.0
B91	42.5	14.3
B92	51.4	17.9
B93	89.4	44.2
B94	52.3	17
B95	37.7	14.4
B96	35.7	10.9
B97	44.6	8.8
B98	69.5	17.8
B99	51.8	17
B100	20.2	9.1
B101	90.7	46.8
B102	67.8	22.8
B103	87.4	36.5
B104	84.1	28.3
B105	86	38.7
B106	76.2	24.2
B107	92.9	42.5
B108	86.5	16
B109	35.2	17.3
B110	84.9	36.5
B111	75.0	24.5
B112	21.3	9.5
B113	42	14.8
B114	16.3	10
B115	72.7	25.4
B116	62.7	36.3
B118	76.3	57.9
B119	44.6	32
B120	10.1	10.2
B130	24	8.6
B131	7.3	7.9
B132	72.4	47.5
B133	53.3	30.5
B134	57.3	36.8
B135	62	41.4
B136	70.8	21
B137	19	14.3
B138	58.1	35.6

c-KIT 어세이는 HTScan^RTM c-KIT 키나아제 어세이 키트(Cell Signaling Technology^RTM)에 대한 프로토골에서 기재된 원칙에 따라 수행되었다. 상기 어세이는 다음 조건에서 수행되었다: c-KIT 소스: GST-c-KIT 융해 단백질은 아미노말단 GST 태그를 가지고 구성체 발현 인간c-KIT (Thr544-Val976)로 바큐로바이러스발현계를 사용하여 생산되었다, 기재: 1.5 uM 비오틴화 펩티드는 KDR의 Tyr-996을 둘러싸는 잔류물을 포함한다, 운반체: 1% DMSO, 전배양시간/온도: 5 분, 상온, 배양시간/온도: 30분 상온, 배양 완충: 60 mM HEPES pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 3 uM Na₃VO₄, 1.25 mM DTT, 20 uM ATP, 정량법: DELFIA.RTM.& Assay 방법.

c-KIT에 대한 본 발명에 따르는 아자아줄렌 화합물의 키나아제 억제 효과는 아래 표 9에 정리된다.

Compound No.	c-Kit inhibition at 1uM (%)	c-Kit inhibition at 0.1uM (%)
A1 (Prior Art)	64.5	34.1
B1	41.1	31.2
B2	57.9	6.4
B4	37.6	5
B5	56.8	15.2
B6	62.6	32.6
B7	57.3	34.8
B8	75.5	42.2
B9	24.4	16
B11	43.7	15.1
B13	25.6	32.2
B14	39.4	20.1
B15	43.1	8.5
B21	55.4	10.8
B70	86.6	40.5
B80	82.9	56.7
B81	17.2	28.9
B82	91.1	31
B83	19.7	-
B87	96.2	49.6
B88	89.2	47.2
B94	79.1	12.3
B95	82.6	48.3
B97	87.2	40.1
B118	36.8	66.6

KDR 어세이는 HTScan^RTM VEGFR-2 키나아제 어세이 키트(Cell Signaling Technology^RTM)에 대한 프로토콜에 기재된 원칙에 따라 수행되었다. 상기 어세이는 다음 조건하에서 수행되었다: KDR 소스: GST-키나아제 융해 단백질은 아미노말단 GST 태그를 가지고 구성체 발현 인간VEGFR-2 (Val789-Val1356) (GenBank 수탁번호 No. NM.sub.-002253) 로 바큐로바이러스발현계를 사용하여 생산되었다, 기재: 1.5 uM 가스트린 전구체 비오틴화 펩타이드(Gastrin Precursor Biotinylated Peptide, with Tyr87 as phosphorylation site), 운반체: 1% DMSO, 전배양시간/온도: 5 분 상온, 배양시간/온도: 30 분 상온, 배양 완충: 60 mM HEPES pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 3 uM Na₃VO₄, 1.25 mM DTT, 20 uM ATP, 정량법: DELFIA.RTM.& Assay 방법.

KDR키나아제에 대한 본 발명에 따르는 아자아줄렌 화합물의 억제 효과는 아래 표 10에 요약된다.

Compound No.	1uM	0.1uM
B1	3.7	-
B2	94.5	78.3
B4	17.8	14.4
B5	45.3	31.7
B6	63.3	29.7
B7	46.1	20.2
B8	63.8	15.9
B9	13.2	0.5
B26	96.9	71.3

실시예 12: 키나아제 패널 제조

본 발명에 따르는 B26 화합물의 키나아제 패널 어세이는 셀렉트 SelectScreen^® Kinase Profiling Services of Invitrogen에 의하여 수행되었다.

>50% 억제 효과를 보여주는 다양한 키나아제에 대하여 B26 화합물 1000nM의 억제효과는 아래 표 11에 요약되었다.

실험된 키나아제	% Inhibition
AMPK A1/B1/ G1	88
AMPK A2/B1/ G1	70
BLK	52
CSF1R ( FMS )	60
FGFR1	54
FGFR2	48
FGFR3	62
FGFR3 K650E	47
FGR	69
FLT3	95
FLT3 D835Y	98
FLT4 ( VEGFR3 )	50
KDR ( VEGFR2 )	64
KIT	61
LCK	63
LYN A	57
LYN B	51
MAP4K5 ( KHS1 )	60
NTRK1 ( TRKA )	89
NTRK2 ( TRKB )	84
NTRK3 ( TRKC )	76
PHKG1	53
RET	81
RET V804L	79
RET Y791F	79
SRC	50
SRC N1	52
STK4 ( MST1 )	59
YES1	73

실시예 13: 체외 세포 활동성 어세이

인간 MV4-11 (FLT3-ITD) 세포계는 American Tissue Culture Collection (ATCC number: CRL-9591)에서 얻었다. 세포계는 10%태아보빈세럼, 1 mmol/L 소디움피루베이트, 10 mmol/L HEPES (pH 7.4)를 포함하는 RPMI 1640에서 배양되었다. 상기 세포는 37℃, 5%이산화탄소의 습한 대기에서 성장과 유지되었다. MV4-11 세포는 96웰-미세적정접시(10,000 세포 per 웰(well))에 배치하고 시리얼 희석지시약이 첨가되었다.

배양주기말에(72시간, 37℃) 세포 생존력은 테트라졸리움색소, MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) (Promega, Madison, WI)에 의하여 결정되었다.

포머잔크리스탈(formazan crystals)은 DMSO에 의해 용해되었고, 600 nm 파장에서의 흡광도는 ELISA플레이트리더기를 이용하여 기록하였다. IC₅₀값은 비선형회귀를 이용하여 계산하였고, 처리되지아니한 것과 처리된 조절 세포의 흡광도에서 50%감소에 대해 필요한 농도로서 정의되었다.

MV4-11 세포에 대한 본 발명에 따르는 아자아줄렌 화합물이 억제 효과를 아래 표 12에 나타내었다.

Compound	IC₅₀ against MV4-11 (uM)
A1	≒1
B1	1-5
B2	1-5
B3	1-5
B4	1-5
B5	1.3003
B6	0.9162
B7	>5
B8	≒0.5
B9	1-5
B10	1-5
B11	1-5
B12	>5
B13	>5
B14	1-5
B15	1-5
B16	>5
B17	1-5
B19	1-5
B20	1-5
B21	0.4275
B22	0.0429
B23	0.0344
B24	0.075
B26	0.0211
B27	0.375
B28	0.0963
B32	1-5
B33	0.0542
B34	0.1513
B35	0.1591
B36	0.1507
B38	0.1185
B39	0.0622
B40	0.0723
B43	1-5
B44	0.1901
B45	0.318
B46	0.3142
B47	0.3002
B48	0.1485
B49	0.2486
B50	0.0507
B51	0.0991
B52	0.6351
B54	0.0740
B55	0.0938
B57	0.1045
B58	0.0672
B59	0.1465
B60	0.0059
B61	0.2696
B62	>5
B63	0.4732
B64	0.2504
B65	0.2784
B66	0.4656
B67	0.0778
B68	0.2345
B69	0.1-0.5
B70	≒1
B71	0.9567
B72	0.05-0.1
B73	≒1
B74	0.1629
B75	≒1
B76	0.0256
B77	0.0392
B78	0.1-0.5
B79	0.3458
B80	0.7957
B81	0.2082
B82	0.0186
B83	0.2274
B85	0.1306
B86	0.2527
B87	0.0886
B88	0.1444
B89	>5
B90	0.5037
B91	0.8759
B92	0.9099
B93	0.1293
B94	0.8524
B95	0.7706
B96	1-5
B97	0.1-0.5
B98	0.4183
B99	0.5996
B100	1-5
B101	0.0397
B102	0.1154
B103	0.042
B104	0.0691
B105	0.1769
B106	0.3153
B108	0.0891
B109	≒1
B111	0.1687
B112	1-5
B113	0.1-0.5
B114	1-5
B115	0.3063
B118	0.0641
B119	0.1-0.5
B120	0.6757
B121	0.1-0.5
B122	>5
B123	1-5
B124	≒5
B125	0.6796
B126	>5
B127	≒1
B128	1-5
B129	>5
B130	1-5
B131	1-5
B132	0.5802
B133	0.1-0.5
B134	0.6705
B135	0.6261
B136	1-5
B137	0.05-0.1
B138	0.718

실시예 14: 생체외 세포 어세이

종양 이종이식 설립과 B26 용법을 위한 절차가 IACUC에서 ITRI설립동물보호및이용위원회에 따라 실시되었다. 암컷 BALB/c 생쥐(생후 6 내지 8주)를 BioLASCO Co., Ltd(타이페이, 대만)에서 구매하였다. 암컷 BALB/c 생쥐의 피하로 1×10⁷ MV4-11 (FLT3-ITD)세포(1마리당)가 이식되었다. 치료는 종양이 150~200㎣크기가 되었을 때 시작하였다. 생쥐들은 무작위로 집단분류로 나누어졌다(통상적으로 효과적인 연구를 위해서 한 집단은 4마리로 한다). B26(50 and 150 mg/kg, 하루2번) 그리고 운반체는 주입후 16일째부터 14일 동안 경구투여로 투입했다. 종양부피는 매일 평가했고 몸무게는 일주일에 2번 측정했다. 종양의 칼리퍼측정은 0.5×[길이×폭²] 식으로 평균종양부피로 환산되었다.

BALB/c 생쥐에서 MV4-11 (FLT3-ITD) 피하 종양 이종이식 모델에서 14일동안 B26(50 또는 150mg/kg(하루2번)) 경구 관리는 복용의존적으로 유력하고 중요한 항종양효과를 보여주었다. 하루 2번 50 또는 150mg/kg B26복용은 각각 9일, 7일에 모든 생쥐에서 종양이 완벽하게 소멸하는 것을 보여주었다.

도 1을 참조하면, 실험하는 동안에 B26처리된 집단에서 몸무게 증가나 폐사의 심각한 억제는 관찰되지 않았다. 본 발명에 따라는 B26 화합물은 유망한 항종양, 항백혈병 활동성을 가진 신규하고 유력한 FLT3 억제제이다.

구현예에 의해서 실시예에 의하여 본 발명이 기재되는 한편, 개시된 구현예에 의하여 제한되게 해석되어서는 아니된다. 반대로 당업자에게 명확할 수 있는 다양한 변형예와 유사한 배열을 모두 포함하는 것으로 의도된다. 그러므로, 부가된 청구항의 범위는 모든 변형예와 배열을 아우르도록 가장 넓게 해성되어져야 할 것이다.

Claims

하기 화학식 1에 의해 표현된 아자아줄렌 화합물.
<화학식 1>

(위
중 하나는 단일결합이고 다른 하나는 이중결합이며,
A₁, A₂, A₃, A₄, A₅, A₆, A₇및 A₈ 각각은 독립적으로 탄소 또는 질소이고,
질소에 결합된 A₁와 A₈와 함께 A₂, A₃, A₄, A₅, A₆, A₇는 10개의 파이전자(pi electrons)를 가진 6,5-헤테로싸이클(6,5-fused heterocycle)을 형성하고,
R₁은 O, OR, S, SR, NH₂, NHR, NRR', NH, 또는 NR이고,
R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂ 및 R₁₃ 각각은 독립적으로 널(null), 수소, 할로, C₁-C₁₀ 알킬, C₂-C₁₀ 알케닐, C₂-C₁₀ 알키닐, C₃-C₂₀ 시클로알킬, C₃-C₂₀ 시클로알케닐, C₁-C₂₀ 헤테로시클로알킬, C₁-C₂₀ 헤테로시클로알케닐, C₃-C₂₀ 아릴, C₁-C₂₀ 헤테로아릴, NO₂, NO, N₃, SCN, CN, OCN, OR, OC(O)R, OC(S)R, OC(S)OR, OC(O)SR, OC(S)SR, OC(O)NRR', OC(S)NRR', ONRR', OS(O)R, OS(O)₂R, SR, SC(O)R, SC(S)R, SC(S)OR, SC(O)SR, SC(S)SR, SC(O)NRR', SC(S)NRR', S(O)R, S(O)₂R, S(O)NRR', S(O)₂NRR', S(O)OR, S(O)₂OR, NCO, NCS, NRR', N(R)-C(O)R', N(R)-C(O)OR', N(R)-C(S)R', N(R)-C(S)OR', N(C(O)R)-C(O)R', N(R)-S(O)R', N(R)-S(O)OR', N(R)-S(O)₂R', N(R)-S(O)₂OR', N(R)-OR', N(OR)-C(O)R', N(OR)-C(O)OR', N(OR)-C(S)R', N(OR)-C(S)OR', N(OR)-C(S)SR', N(OR)-S(O)R', N(OR)-S(O)OR', N(OR)-S(O)₂R', N(OR)-S(O)₂OR', C(O)R, C(O)OR, C(O)NRR', C(O)SR, C(S)R, C(S)OR, C(S)NRR', C(S)SR, C(NR)-R', C(NR)-OR', C(NR)-NR'R", C(NR)-SR', C(NOR)-R', C(NOR)-OR', C(NOR)-NR'R" 또는 C(NOR)-SR'이며,
또는 결합되어 있는 원자들과 함께 R₂ 과 R₃, R₃ 과 R₄, R₄ 과 R₅, R₅ 과 R₆, R₆ 과 R₇, R₈ 과 R₉, R₉ 과 R₁₀, R₁₀ 과 R₁₁, R₁₁ 과 R₁₂, 또는 R₁₂ 과 R₁₃는 C₃-C₂₀ 시클로알킬, C₃-C₂₀ 시클로알케닐, C₁-C₂₀ 헤테로시클로알킬, C₁-C₂₀ 헤테로시클로알케닐, C₃-C₂₀ 아릴, 또는 C₁-C₂₀ 헤테로아릴이고,
R, R' 및 R" 각각은 독립적으로 수소, 할로, C₁-C₁₀ 알킬, C₂-C₁₀ 알케닐, C₂-C₁₀ 알키닐, C₃-C₂₀ 시클로알킬, C₃-C₂₀ 시클로알케닐, C₁-C₂₀ 헤테로시클로알킬, C₁-C₂₀ 헤테로시클로알케닐, C₃-C₂₀ 아릴 또는 C₁-C₂₀ 헤테로아릴, 또는 결합되어 있는 원자들과 함께 R 과 R', R 과 R" 또는 R'과 R"는 C₁-C₂₀ 헤테로시클로알킬 또는 C₁-C₂₀ 헤테로시클로알케닐이며,
A₁, A₃, A₄, A₅, A₆, A₇ 및 A₈각각이 탄소, A₂가 질소, C
N이 C-N, 그리고 C
R₁이 C=O인 경우, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁ 및 R₁₂ 중 적어도 하나는 수소가 아니거나,
A₁, A₃, A₄, A₅, A₆, A₇ 및 A₈각각이 탄소, A₂ 가 질소, C
N 이 C=N, 그리고 C
R₁ 이 C-OEt, C-OBu, 또는 C-NH₂인 경우, R₂ 가 널(null)이고, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁ 및 R₁₂ 중 적어도 하나는 수소가 아님)
제 1 항에 있어서,
상기 A₂는 질소인 것을 특징으로 하는 아자아줄렌 화합물.
제 1 항에 있어서,
상기 A₁, A₃, A₄, A₅, A₆, A₇ 및 A₈는 탄소인 것을 특징으로 하는 아자아줄렌 화합물.
제 1 항에 있어서,
상기 R₈, R₉, R₁₀, R₁₁ 및 R₁₂ 각각은 독립적으로 치환된 피레라진-1-일(piperazine-1-yl)인 것을 특징으로 하는 아자아줄렌 화합물.
제 1 항에 있어서,
상기 R₈, R₉, R₁₀, R₁₁ 및 R₁₂ 각각은 독립적으로 치환된 호모피레라진-1-일(homopiperazine-1-yl)인 것을 특징으로 하는 아자아줄렌 화합물.
제 1 항에 있어서,
상기 R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂ 각각은 독립적으로 치환된 피레라딘-1-일(piperidine-1-yl)인 것을 특징으로 하는 아자아줄렌 화합물.
제 1 항에 있어서,
상기 R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂ 각각은 독립적으로 치환된 피롤리딘-1-일(pyrrolidine-1-yl)인 것을 특징으로 하는 아자아줄렌 화합물.
제 1 항에 있어서,
상기 R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂ 각각은 독립적으로 치환된 유레도(ureido)인 것을 특징으로 하는 아자아줄렌 화합물.
제 1 항에 있어서,
상기 C
N 은 C-N인 것을 특징으로 하는 아자아줄렌 화합물.
제 1 항에 있어서,
상기 C
R₁은 C=R₁인 것을 특징으로 하는 아자아줄렌 화합물.
제 10 항에 있어서,
상기 C=R₁은 C=O인 것을 특징으로 하는 아자아줄렌 화합물.
제 1 항에 있어서,
상기 아자아줄렌 화합물은 표 7(A1 제외)에 기재된 화합물들로 이루어진 군에서 선택된 하나이거나 그것들로부터의 기하이성체, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체, 약제용염, 프로드럭(prodrugs) 또는 용매화합물인 것을 특징으로 하는 아자아줄렌 화합물.
제 1 항의 아자아줄렌 화합물의 치료적으로 효과적인 양과 제약적으로 수용가능한 운반체를 포함하는 것을 특징으로 하는 제약조성물.
제 13 항에 있어서,
상기 제약조성물의 치료적으로 효과적인 양을 어떤 분야에 조절하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 질병을 취급하는 방법.
제 14 항에 있어서,
상기 질병은 세포확산장애인 것을 특징으로 하는 질병을 취급하는 방법.
제 14 항에 있어서,
상기 질병은 방광암, 유방암, 장암, 신장암, 간암, 폐암, 두경부암, 쓸개암, 난소암, 췌장암, 위암, 자궁암, 갑상선암, 전립선암, 피부암, 백혈병, 림프종, 중간엽세포재생 종양, 중추 또는 말초신경계 종양, 악성 흑색종, 수암, 기형암종, 골육종, 수질갑상선암 또는 카포시육종을 포함하는 것을 특징으로 하는 질병을 취급하는 방법.
제 14 항에 있어서,
상기 분야는 포유동물인 것을 특징으로 하는 질병을 취급하는 방법.
제 14 항에 있어서,
상기 분야는 인간인 것을 특징으로 하는 질병을 취급하는 방법.
제 13 항의 제약조성물의 치료적으로 효과적인 양을 세포에 조절하는 것을 특징으로 하는 세포에서 단백질키나아제의 활동성을 억제하는 방법.
제 19 항에 있어서,
상기 단백질키나아제는 AMPK, BLK, CSF1R, FGFR, FGR, FLT3, KDR, KIT, LCK, LYN, MAP4K5, NTRK, PHKG1, RET, SRC, STK 또는 YES1을 포함하는 것을 특징으로 하는 세포에서 단백질키나아제의 활동성을 억제하는 방법.
제 19 항에 있어서,
상기 세포는 암세포인 것을 특징으로 하는 세포에서 단백질키나아제의 활동성을 억제하는 방법.