KR20110091523A

KR20110091523A - 아포 ａ에 활성인 티에노트리아졸로디아제핀 유도체

Info

Publication number: KR20110091523A
Application number: KR1020117012290A
Authority: KR
Inventors: 헤르만 켐펜; 다니엘 벨루스; 바바라 스타에헬린
Original assignee: 써코메드 엘엘씨
Priority date: 2008-10-30
Filing date: 2009-10-29
Publication date: 2011-08-11
Also published as: AU2009309691A1; KR101633742B1; US20110230460A1; ES2448567T3; AU2009309691B2; JP2012506896A; JP5490811B2; BRPI0914406A2; WO2010049466A1; CA2741934C; EP2362876B1; CA2741934A1; EP2362876A1; EA018620B1; CN102292341B; US8569288B2; CN102292341A; EA201100698A1

Abstract

본 발명은 식 (1)의 신규한 티에노트리아졸로디아제핀 유도체:

(상기 식에서, R¹은 CH₃이고, R²는 CH₃, -(CH₂)_n-R⁴, -(CH₂)_n-O-R⁴, 또는 -(CH₂)_n-S-R⁴이고, n은 1, 2, 3 또는 4이고, R⁴는 CH₃, CH₂CH₃ 또는 CH₂CH₂OCH₃이고, R³는 수소 또는 페닐 고리의 오르토/메타 위치 또는 메타/파라 위치에 연결되는 OCH₂O- 또는 -OCH₂CH₂O-이고; 또는 R¹ 및 R²는 수소이고, R³은 페닐 고리의 오르토/메타 위치 또는 메타/파라 위치에 연결되는 -OCH₂O- 또는 -OCH₂CH₂O-임); 및 그 약학적으로 허용되는 산 부가염에 관한 것이다. 상기 화합물 및 이를 포함하는 약학적 조성물은 심근경색증 및 뇌졸증과 같은 동맥경화성 동맥 질환, 및 알츠하이머병의 치료 및 예방에 유용하다.

Description

아포 Ａ에 활성인 티에노트리아졸로디아제핀 유도체{THIENOTRIAZOLODIAZEPINE DERIVATIVES ACTIVE ON APO A}

본 발명은 관상 동맥 질환 및 알츠하이머병의 치료에 유용한 신규한 티에노트리아졸로디아제핀 유도체 및 약학적 제제에 관한 것이다.

미국 특허 제 4,155,913 호에는 다수의 티에노트리아졸로디아제핀, 그 합성 방법, 약학적 조성물, 및 항경련제, 진정제, 근육 이완제, 정진 안정제 및 항불안제로서의 용도가 기재되어 있다.

미국 특허 제 5,854,238 호는 이와 같은 티에노트리아졸로디아제핀 화합물 중 하나인 9-메틸-4-페닐-6H-티에노[3,2-f]-s-트리아졸로[4,3-a][1,4]-디아제핀이 혈장 아포리포단백질 A1 (아포 A1)을 증가시킴에 있어 활성임을 기재하고 있다. 아포A1은 혈장 고밀도 리포단백질 (HDL)의 주요 단백질 구성 성분이다. HDL 및 아포 A1의 낮은 혈장 수준은 동맥경화성 동맥 질환의 결과로서 심근 경색증, 뇌졸증 및 다리뇌경색(leg infarctions) 발병 증가와 관련이 있는 것으로 알려져 있다. 상기 화합물은 따라서 이와 같은 동맥경화성 동맥 질환의 치료 및 예방에 유용하다.

미국 특허 제 6,444,664 호는 공지의 혈소판 활성 인자 (PAF) 길항 활성을 가지는 특정 벤조- 및 티에노트리아졸로디아제핀 유도체가 또한 아포 A1의 합성을 증진시키며, 동맥경화성 질환의 치료 또는 예방 방법에 유용한 것으로 기재하고 있다.

알츠하이머병을 가지는 환자는 낮은 수준의 아포 A1을 가지므로 (Merched A., Xia Y., Visvikis S., Serot J.M.,and Siest G., Neurobiol. Aging 21(1):27-30, 2000), 상기 언급한 아포 A1 합성을 증가시키는 디아제핀은 또한 알츠하이머병의 치료에 유용할 것이다.

발명의 개요

본 발명은 식 1의 신규 티에노트리아졸로디아제핀 유도체 및 그 약학적으로 허용되는 산 부가염에 관한 것이다:

(상기 식에서,

R¹은 CH₃이고, R²는 CH₃, -(CH₂)_n-R⁴, -(CH₂)_n-O-R⁴, 또는 -(CH₂)_n-S-R⁴이고, n은 1, 2, 3 또는 4이고, R⁴는 CH₃, CH₂CH₃ 또는 CH₂CH₂OCH₃이고, R³은 수소 또는 페닐 고리의 오르토/메타 위치 또는 메타/파라 위치에 연결되는 OCH₂O- 또는 -OCH₂CH₂O-이고; 또는

R¹ 및 R²는 수소이고, R³는 페닐 고리의 오르토/메타 위치 또는 메타/파라 위치에 연결되는 -OCH₂O- 또는 -OCH₂CH₂O-임).

나아가, 본 발명은 상기 정의된 식 1의 화합물을 함유하는 약학적 조성물, 및 심근 경색증 및 뇌졸증과 같은 동맥경화성 동맥 질환 및 알츠하이머병의 치료 및 예방 방법 및 심근 경색증 및 뇌졸증과 같은 동맥경화성 동맥 질환 및 알츠하이머병의 치료 및 예방을 위한 약제 제조에 있어서 상기 화합물의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 화합물 및 이를 포함하는 약학적 조성물은 심근 경색증 및 뇌졸증과 같은 동맥경화성 동맥 질환, 및 알츠하이머병의 치료 및 예방에 유용하다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 식 1의 화합물 및 그 약학적으로 허용되는 산 부가염에 관한 것이다:

(상기 식에서,

상기 정의된 바와 같은 식 1의 화합물은 그의 모든 결정형을 포함하는 것으로 이해된다.

R¹가 CH₃이고, R²가 -(CH₂)_n-R⁴, -(CH₂)_n-O-R⁴, 또는 -(CH₂)_n-S-R⁴인 식 1의 화합물에서, R¹ 및 R²를 포함하는 상기 고리 탄소 원자는 비대칭적으로 치환되며 입체이성질체가 형성된다. 이와 같은 화합물의 경우, 상응하는 식 1의 화합물의 정의에 라세미체 및 (S) 및 (R) 거울상이성질체 모두가 포함되는 것으로 이해된다.

식 1의 화합물 및 그 약학적으로 허용되는 산 부가염은 동맥경화성 동맥 질환, 특히 심근 경색증 및 뇌졸증, 및 알츠하이머병의 치료 및 예방에 유용하다.

아포 A1을 증가시키는 것은 동맥경화증 및 그 임상적 결과를 감소시키기 위하여 매우 타당성 있는 임상적 메커니즘이다. 아포 A1은 HDL 입자 주위를 감으며 플라그로부터 콜레스테롤을 제거하는 그 기능을 지지한다. 아포 A1의 투여는 인간 내에서 동맥경화성 플라그를 안정화시키고 감소시키는 것으로 입증되었다. 반대로, 아포 A1 결핍은 항진된 동맥경화증과 관련이 있다.

본 발명에 따른 화합물은 간을 자극하여 더 많은 아포 A1을 생산한다. 신체 자체의 아포 A1 생산을 증가시키는 치료적 접근법은 펩타이드, 예컨대 아포 A1을 증가시킴으로써 동맥경화증을 치료하는 것으로 현재 간주되고 있는 재조합 아포 A1 치료법과 관련될 가능성이 있는 면역 합병증을 피한다.

본 발명의 화합물은 디아제핀의 부분적 구조를 포함하나, 이는 벤조디아제핀 수용체 결합 활성을 완전히 결여하므로, 졸음 등과 같은 벤조디아제핀에 의하여 야기되는 원치 않는 부작용을 나타내지 않는다.

본 발명의 화합물은 또한 WEB2086 (apafant)와 같은 티에노트리아졸로디아제핀과 밀접한 관련이 있는 것으로 보이는 혈소판 활성 인자 (PAF) 길항 활성을 완전히 결여한다.

R¹이 CH₃이고, R²가 CH₃, -(CH₂)_n-R⁴, -(CH₂)_n-O-R⁴, 또는 -(CH₂)_n-S-R⁴이고, n이 1, 2, 3 또는 4이고, R⁴가 CH₃, CH₂CH₃ 또는 CH₂CH₂OCH₃이고, R³가 수소인 화합물이 바람직하다. R²가 CH₃이거나, R²가 -(CH₂)_n-O-R⁴이고, n이 1 또는 2이고, R⁴가 CH₃인 상기 화합물, 특히 R²가 CH₃인 상기 화합물이 가장 바람직하다.

R¹ 및 R²가 수소이고, R³이 페닐 고리의 오르토/메타 위치 또는 메타/파라 위치에 연결되는 -OCH₂O- 또는 -OCH₂CH₂O-인 화합물; 특히 R³이 -OCH₂O-인 상기 화합물이 또한 바람직하다. 바람직하게, 이러한 메틸렌디옥시 치환체는 페닐 고리의 메타/파라 위치에 연결된다.

실시예의 화합물들이 가장 바람직하다.

식 1의 화합물은 약학적으로 허용되는 유기산 및 무기산과 함께 산 부가염을 형성한다. 본 발명의 목적에 적합한 산은 염산, 브롬산, 황산, 인산, 포름산, 아세트산, 푸마르산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 말레산, 타르타르산, 시트르산, 트리플루오로아세트산, 메탄술폰산, 파라-톨루엔술폰산, 10-캠포술폰산 등을 포함한다. 분리 또는 정제를 위하여, 약학적으로 허용되지 않는 염, 예컨대 피크린산 또는 과염소산을 가지는 염을 사용하는 것 또한 가능하다.

본 발명은 또한 상기 기재한 화합물의 임의의 수화물, 용매화물 또는 특히 결정형, 및 그 약학적으로 허용되는 염, 및 또한 비대칭 탄소 원자를 가지는 상응하는 화합물의 라세미체 또는 (S) 또는 (R) 거울이성질체에 관한 것이다.

식 1의 신규 화합물은 다양한 합성 경로를 따라, 예를 들어 미국 특허 제 4,155,913 호에 기재된 바에 따라 제조될 수 있다.

한 공정에서, 상기 식 1의 화합물은 치환체 R¹, R² 및 R³이 상기한 바와 같은 정의를 가지는 식 2의 화합물과 아세트산 히드라지드 또는 히드라진과의 반응 후, 아세트산 오르토에스테르와의 반응에 따라 식 1의 화합물 내 존재하는 디아제핀 고리에 결합되는 메틸-치환된 s-트리아졸 고리를 생산함으로써 제조될 수 있다.

식 2의 티오디아제피논은 상응하는 디아제피논 (즉, =S가 =O로 대체되어 있는 식 2)으로부터 Lawesson 시약과의 반응 또는 기타 아미드를 티오아미드로 변환시키는 동등한 방법에 의하여 얻을 수 있다. 이와 같은 디아제피논은 R³이 상기 기재한 바와 같은 정의를 가지는 식 3의 화합물의 고리화를 통하여 얻을 수 있다.

식 3의 화합물은 적절하게 치환된 할로아세틸 클로라이드로 아미노 작용기에서 아실화된 다음, 소듐 아지드와 반응하여 아지드 작용기를 아미노 작용기로 환원시킨 후 고리화되거나, 또는 상기 할로아세틸화 화합물이 암모니아 발생 시약의 존재 하에 직접 고리화될 수 있거나, 또는 식 3의 화합물은 R¹ 및 R²가 상기 기재한 바와 같은 정의를 가지고 X가 에스테르 잔기, 특히 활성화된 에스테르 잔기인 α-아미노산 유도체 H₂NCR¹R²COX 와 반응하거나, 또는 아미노기가 적합하게 보호되는 α-아미노산 클로라이드와 반응한 다음, 고리화 반응을 위하여 탈보호되어 =S가 =O로 대체된 식 2의 화합물을 생성할 수 있다. 식 3의 화합물은 공지되어 있거나 공지의 절차에 따라 얻을 수 있다.

대안적으로, 식 1의 화합물은 치환체 R¹, R² 및 R³이 상기 기재한 바와 같은 정의를 가지는 식 4의 화합물의 고리화 반응에 의하여 제조될 수 있다.

식 4의 중간체는 식 3의 화합물을 아세트산 오르토에스테르와 반응시킨 다음 히드라진과 반응시키고, 최종적으로 R¹ 및 R²가 상기 기재한 바와 같은 정의를 가지고 α-아미노산 작용기가 적절하게 보호된 형태이고 COX가 활성화된 카르복시산 작용기를 나타내는 α-아미노산 유도체 H₂NCR¹R²COX 와 반응시킴에 의하여 얻을 수 있다. 이와 같은 아미노 보호기 및 카르복실 작용기 활성화 방법은 당업계에 공지되어 있다.

본 발명은 신규 중간체, 특히 치환체들이 식 1에 정의된 바와 같은 의미를 가지는 식 2, 3 또는 4의 신규 중간체에 관한 것이다.

본 발명은 또한 식 1의 화합물 및 그 약학적으로 허용되는 산 부가염을 활성 성분으로서 포함하고, 특히 상기 언급된 질환의 치료에 사용될 수 있는 약학적 조성물에 관한 것이다. 비(nasal), 구강(buccal), 직장과 같은 장관 투여, 또는 특히 경구 투여용 조성물이 바람직하다. 상기 조성물은 활성 성분 단독 또는 바람직하게 약학적으로 허용되는 담체를 함께 포함한다. 상기 약학적 조성물은 정제, 당과, 캡슐, 과립, 로젠지, 츄잉검, 좌제, 용액, 현탁액, 에멀젼 등의 형태일 수 있으며, 당업계에 공지된 표준 절차에 따라 제조된다.

약학적으로 허용되는 담체는 예를 들어 만노오스, 락토오스, 프럭토오스, 글루코오스, 수크로오스 또는 사카로오스와 같은 당, 만니톨, 자일리톨 또는 소르비톨과 같은 당 알콜, 전분, 예컨대 옥수수, 밀, 쌀 또는 감자 전분, 셀룰로오스 제제, 예를 들어 미세결정성 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스 (hyprolose), 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 (hypromellose), 또는 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 구아 검, 카라기난 또는 아카시아 검이다. 추가로 고려되는 고체 담체는 인산 마그네슘 또는 칼슘, 예를 들어 인산삼칼슘 또는 인산수소칼슘, 이산화규소, 실리케이트, 예를 들어 마그네슘 알루미늄 실리케이트 또는 칼슘 실리케이트, 및 이산화티타늄이다.

적합한 추가적인 담체는 특히 당, 당 알콜, 셀룰로오스 제제 및/또는 담체로서 상기 언급한 포스페이트 및 실리케이트, 이산화규소, 및 이산화 티타늄과 같은 충전제, 및 전분, 예를 들어, 옥수수, 밀, 쌀 또는 감자 전분, 구아 검, 젤라틴, 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 소듐 카르복시메틸셀룰로오스, 셀락, 트라간트, 크산탄 또는 폴리비닐 피롤리돈과 같은 결합제, 및/또는 상기 언급한 전분, 또한 소듐 또는 칼슘 카르복시메틸 전분 및 소듐 글리콜레이트 전분, 가교결합된 폴리비닐 피롤리돈 (크로스포비돈), 크로스카르멜로스, 알긴산 또는 소듐 알기네이트와 같은 그 염, 및 콜로이드성 이산화규소와 같은 붕해제이다. 추가적인 부형제는 특히 유량 조절제 및 윤활제, 예를 들어 규산, 탈크, 스테아린산 또는 마그네슘, 아연 또는 칼슘 스테아레이트와 같은 그 염, 글리세롤 모노스테아레이트, 글리세롤 팔미토스테아레이트, 및/또는 폴리에틸렌 글리콜 또는 그 유도체이다.

예를 들어 활성 성분의 확인 목적을 위하여 또는 상이한 투여량을 나타내기 위하여, 안료 및 염료를 상기 정제, 과립, 로젠지 또는 츄잉 검에 첨가할 수 있다.

경구 투여용 약학적 조성물은 또한 젤라틴으로 이루어지는 경질 캡슐 및 젤라틴 및 글리세롤 또는 소르비톨과 같은 가소제로 이루어지는 연질의 밀봉된 캡슐을 포함한다. 상기 캡슐은 활성 성분을 예를 들어 옥수수 전분과 같은 충전제, 결합제 및/또는 탈크 또는 마그네슘 스테아레이트와 같은 활택제, 및 임의로 안정화제와 혼합하여 과립의 형태로 함유할 수 있다.

경구 투여용 약학적 조성물은 또한 서방정 또는 캡슐과 같은 서방형, 필름 정제 및 장용 코팅 정제를 포함한다. 이와 같은 특별한 약학적 경구 조성물은 당업계의 표준 절차에 따르는 것들이다. 서방정은 예를 들어 폴리메타크릴레이트 및 폴리메타크릴레이트 코폴리머, 폴리아크릴레이트-폴리메타크릴레이트 코폴리머 또는 관련된 수지 폴리머와 같은 폴리머 성분을 포함할 수 있다. 필름 정제는 예를 들어 에틸 셀룰로오스 및 히드록시프로필 메틸셀룰로오스로 코팅함으로써 얻어진다. 적합한 장용 코팅은 예를 들어 에틸 셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트, 셀락, 히드록시프로필 셀룰로오스 아세테이트 숙시네이트, 및 폴리메타크릴레이트 및 폴리메타크릴레이트 코폴리머이다.

직장 투여용으로 적합한 약학적 조성물은 예를 들어 활성 성분과 좌제 기제의 조합으로 이루어지는 좌제이다. 적합한 좌제 기재는 예를 들어 천연 또는 합성 트리글리세라이드, 파라핀 탄화수소, 폴리에틸렌글리콜 또는 고급 알카놀이다.

본 발명의 약학적 조성물은 공지된 방법 자체대로, 예를 들어 전형적인 혼합, 과립화, 용해 또는 동결건조 공정에 의하여 제조된다.

상기 활성 성분의 투여량은 치료될 질환 및 종, 연령, 체중 및 개인적 상태, 개인적 약동력학적 데이트, 및 투여 방식에 따라 결정된다. 투여량은 개인적 요구 조건을 따르나, 약 0.1 mg/kg 내지 약 30 mg/kg의 투여량이 바람직하다. 약물이 비경구 투여되는 경우, 0.1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg 범위의 투여량이 바람직하다. 적합한 약학적 제형은 식 1의 활성 성분을 1 내지 1000 mg 함유할 수 있다.

본 발명은 아포 A1의 낮은 혈장 수준에 의하여 야기되는 질병의 치료 및 예방을 위한, 상기 기재한 바와 같은 식 1의 화합물, 및 아포 A1의 낮은 혈장 수준에 의하여 야기되는 질병의 치료 및 예방용 약제 제조를 위한 식 1의 화합물의 용도에 관한 것이다. 이와 같은 질병의 예는 심근 경색 및 뇌졸증과 같은 상기 언급한 동맥경화성 동맥 질환, 및 알츠하이머병이다.

추가적인 측면에서, 본 발명은 상기 기재한 바와 같은 식 1의 화합물을 하나 이상의 기타 치료학적으로 유용한 물질과 함께 함유하는 혈장 아포 A1 향상 약제에 관한 것이다. 이러한 기타 치료학적으로 유용한 물질은 바람직하게 동맥경화성 동맥 질환 치료 또는 예방에 효율적인 것으로 알려진 화합물들, 예를 들어 스타틴, 피브레이트, 니아신 및 에제티미브이다.

다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 유효량으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 포유 동물, 특히 인간 내에서 혈장 아포 A1 수준을 증가시키는 방법, 및 나아가 본 발명의 화합물을 유효량으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 심근 경색증 및 뇌졸증과 같은 동맥경화성 동맥 질환, 또는 알츠하이머병에 걸린 포유 동물, 특히 인간을 치료하는 방법에 관한 것이다.

추가적인 측면에서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 유효량으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 동맥경화성 동맥 질환에 걸릴 위험이 있으나 이와 같은 질환에 걸리지 않은 환자 내에서 심근 경색증 및 뇌졸증과 같은 동맥경화성 동맥 질환을 예방하는 방법에 관한 것이다.

나아가, 본 발명은 본 발명의 화합물을 유효량으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 알츠하이머병에 걸릴 위험이 있으나 이러한 질환에 걸리지 않은 환자 내에서 알츠하이머병을 예방하는 방법에 관한 것이다.

이하 실시예들은 본 발명을 예시하기 위하여 제시되는 것이다.

실시예

실시예 1: 3- 벤조일 -2-(2- 브로모 -3- 메틸프로파노일아미노 )-티오펜

2-아미노-3-벤조일-티오펜 (R³이 수소인 화합물 3) 1.0 g을 2-브로모-2-메틸프로파노일 브로마이드로 아실화하여 1.49 g(86%)의 표제 화합물을 얻었다.

실시예 2: 2-(2-아미노-2- 메틸프로파노일아미노 )-3- 벤조일 -티오펜

실시예 1의 화합물 3.4 g을 환류 하에 에탄올 내에서 소듐 아지드로 비등시켰다. 조(crude) 아지드를 비등 에탄올 내에서 아연 및 암모늄 클로라이드로 직접 환원시켜 표제 화합물을 65%로 얻었다.

실시예 3: 1,3- 디하이드로 -3,3-디메틸-5- 페닐 -2H- 티에노 [2,3-e]-1,4- 디아제핀 -2-온

실시예 2의 화합물 55 mg을 환류에서 에탄올 함유 아세트산 내에서 비등시켰다. 고리화된 표제 화합물을 48% 수율로 얻었다.

실시예4 : 1,3- 디하이드로 -3,3-디메틸-5- 페닐 -2H- 티에노 [2,3-e]-1,4-디아제핀-2- 티온

실시예 3의 화합물 50 mg을 80℃에서 디에틸렌글리콜 디메틸 에테르 (diglyme) 내에서 디포스포러스 펜타설파이드 (P₂S₅) 및 탄산수소나트륨과 함께 가열하여 티온 (R¹=R²=메틸, R³=수소인 화합물 2) 49 mg (92%)를 얻었다.

실시예 5: 6,6-디메틸-4- 페닐 -9- 메틸 -6H- 티에노 [3,2-f]-s-트리아졸로[ 4,3-a][1,4]디아제핀 5

테트라하이드로퓨란 내 실시예 4로부터의 티온 49 mg을 실온에서 수성 히드라진과 함께 교반하였다. 결과 생성되는 화합물을 에탄올 내에서 트리에틸 오르토아세테이트와 혼합하고, 50℃로 가열하였다. 15 mg(28%)의 표제 화합물 5를 플래쉬 크로마토그래피에 의하여 분리하였다.

¹H-NMR (CD₃OD): 1.28 (6H,s,2 CH₃), 2.74 (3H,s,CH₃), 6.88 (1H,d,J=6Hz,ArH), 7.5 (6H,m,ArH).

LC (컬럼 YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm, 5μ; Inj. Vol. 10μL, 30℃, 유속 1.4 mL/분, A: 물 내 0.05% TF/ B: 아세토니트릴 내 0.05% TFA/ 구배 8분 내 5% B 에서 95% B): 체류 시간 4.42분, 순도 99.3%

MS: M+H⁺ m/z 계산치 309.41, 실측치 308.95

실시예 6: 3,4- 메틸렌디옥시 -α- 시아노아세토페논

메틸 3,4-메틸렌디옥시벤조에이트를 소듐 메탄올레이트의 존재 하에 90℃에서 아세토니트릴로 응결시켜 시아노아세토페논을 70% 수율로 얻었다.

실시예 7: 2-아미노-3-(3',4'- 메틸렌디옥시벤조일 )-티오펜

실시예 6의 3,4-메틸렌디옥시-α-시아노아세토페논을 온도를 5℃에서 50℃로 서서히 상승시키면서 메탄올 내 트리에틸아민의 존재 하에 2,5-디히드록시-1,4-디티안(클로랄(chloral) 및 소듐 하이드로설파이드로부터 얻음)과 반응시켰다. 플래쉬 크로마토그래피에 의하여 표제 화합물 (R³가 메타/파라 위치 내 메틸렌디옥시인 화합물 3)을 분리하였다.

실시예 8: 2- 브로모아세틸아미노 -3-(3',4'- 메틸렌디옥시벤조일 )-티오펜

실시예 7의 아미노케톤 3.9 g을 실온에서 디클로로메탄 내 브로모아세틸 클로라이드와 함께 교반하여 표제 화합물 4.3 g (86%)을 얻었다.

실시예 9: 5-(3',4'- 메틸렌디옥시페닐 )-1,3- 디하이드로 -2H-티에노[2,3-e]-1,4- 디아제핀 -2-온

염화메틸렌 내 실시예 8로부터의 브로모아세틸아미노케톤 4.3 g을 환류에서 수성 암모니아 처리하였다. 에탄올 내 아세트산 2.5 당량으로 환류함으로써 조 아민 (5.5 g)을 고리화하였다. 조 생성물 (8 g)을 플래쉬 크로마토그래피에 의하여 정제하여 표제 화합물 3.1 g (77%)를 얻었다.

실시예 10: 5-(3',4'- 메틸렌디옥시페닐 )-1,3- 디하이드로 -2H-티에노[2,3-e]-1,4- 디아제핀 -2- 티온

실시예 9의 화합물을 75℃에서 3.5 시간 동안 헥사메틸인산 트리아미드 (HMPT) 내 Lawesson's 시약 (2,4-비스-(p-메톡시페닐)-1,3-디티아포스페탄-2,4-디설파이드)과 함께 가열하여 표제의 티온 (R¹=R²=수소, R³=메타/파라 위치 내 메틸렌디옥시의 화합물 2)를 76%로 얻었다.

실시예 11: 4-(3',4'- 메틸렌디옥시페닐 )-9- 메틸 -6H- 티에노 [3,4-f]-s- 트리아졸로[4,3-a][1,4]디아제핀 6

실시예 10의 화합물과 디에틸렌글리콜 디메틸 에테르 (diglyme) 내 아세트산 히드라지드를 110℃로 서서히 가열하고, 기체 진전이 더 이상 관측되지 않을 때까지 상기 온도에서 몇 분 동안 유지시켰다. 결과 생성되는 표제 화합물 6을 증발시키고, 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의하여 정제하고, 40% 수율로 분리하였다.

¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD): 2.72 (3H,s,CH₃), 6.01 (2H,s,OCH₂O), 6.83 (1H,d,J=8Hz,ArH), 7.06 (3H,m,ArH), 7.57 (1H,d,J=6Hz,ArH).

LC (컬럼 YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm, 5μ; Inj. Vol. 10μL, 30℃, 유속 1.4 mL/분, A: 물 내 0.05% TF/ B: 아세토니트릴 내 0.05% TFA/ 구배 8분 내 5% B 에서 95% B): 체류 시간 4.01분, 순도 99.4%

MS: M+H⁺ m/z 계산치 325.37, 실측치 324.90

실시예 12: 9- 메틸 -4- 페닐 -6H- 티에노 [3,2-f]-s- 트리아졸로[4,3-a][1,4]디아제핀 7

비교 목적을 위하여 사용되는 표제 화합물 7 (Ro-11-1464로도 알려짐)을 미국 특허 제 4,155,913 호의 실시예 2에 따라 합성하였다.

¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD): 2.73 (3H,s,CH₃), 6.99 (1H,d,J=6Hz,ArH), 7.5 (6H,m,ArH).

LC (컬럼 YMC ODS-A 150 mm x 4.6 mm, 5μ; Inj. Vol. 10μL, 30℃, 유속 1.4 mL/분, A: 물 내 0.05% TF/ B: 아세토니트릴 내 0.05% TFA/ 구배 8분 내 5% B 에서 95% B): 체류 시간 4.16분, 순도 > 99.9%

MS: M+H⁺ m/z 계산치 281.36, 실측치 281.00

실시예 13: 인간 간세포에 의한 아포 A1 분비

인간 간세포를 미국 특허 제 6,444,664 호에 기재된 절차에 따라 기증자로부터 수득한 이식을 목적으로 사용되지 않은 간 조각으로부터 분리하였다. 상기 세포를 배양 접시 상에 cm² 당 1.5 x 10⁵ 생존 세포의 밀도로 시딩하고, 5% CO₂/95% 공기 분위기 내에서 37℃에서 10% 열 불활성화된 소태아혈청 (FCS), 2 mmol/L L-글루타민, 20 mU/mL 인슐린 (135 nmol/L), 50 nmol/L 덱사메타손, 100 U/mL 페니실린, 100 ㎍/mL 스트렙토마이신 및 100 ㎍/mL 카나마이신으로 보충된 Williams E 배지 10 cm² 당 1.5 mL으로 최초 24 시간 동안 유지하였다. 14-16 시간 후, 상기한 바와 동일한 배지를 이용하여 비-부착 세포를 플레이트로부터 세척하였다. 시딩 후 24 시간에, 인슐린 농도가 135 nmol/L 대신 10 nmol/L인 점을 제외하고 1 mL의 동일한 배지 내에서 상기 화합물과 인큐베이션을 개시하였다.

상기 인간 간세포를 화합물 5, 6 및 7로 (최종 DMSO 농도가 0.1% v/v 를 초과하지 않도록, DMSO 내에 용해됨) 100 μM, 30 μM, 10 μM 및 3 μM의 농도로 처리하고, 24 시간 동안 인큐베이션하였다. 모든 표본 및 대조군 내 DMSO 농도는 0.1%였다. 대조 웰은 DMSO (0.1% v/v) 만을 함유하였다. 상기 세포 상에 배지를 제거하고, 새로운 화합물을 가지는 새로운 배지로 교체하고, 24 시간 동안 인큐베이션하였다. 다음, 상기 배지를 다시 제거하고, 새로운 화합물을 가지는 새로운 배지로 교체하고, 또 24 시간 동안 인큐베이션하였다. 다음, 상청액을 모든 세포로부터 제거하고, 아포 A1 수준을 HRP 컨쥬게이션된 양 안티-아포 A1 항체 및 TMB/퍼옥시다아제 기판 색상 현상제로 상업적으로 유용한 ELISA (AlerCHECK^TM)을 이용하여 측정하였다. 상청액을 상기 키트 내에 제공되는 세척 완충액으로 1:4로 희석하였다.

최종 인큐베이션 후, 상기 세포를 PBS로 2회 세척하고, BCA (bicinchoninic acid) 시약을 각 웰에 첨가하여 표준 방법에 따라 총 세포 단백질을 분석하였다.

인간 간세포 내 아포 A1 분비 자극

	아포 A1 (세포 단백질 mg 당 분비 ng)
	5			6			7
농도	1st	2nd	평균	1st	2nd	평균	1st	2nd	평균
100μM	273	277	275	397	276	336	254	364	309
30μM	219	227	223	290	293	292	236	374	305
10μM	274	156	215	186	212	199	266	191	229
3μM	247	124	185	144	160	152	91	91	91

대조군 세포 (DMSO 단독으로 인큐베이션)는 세포 단백질 mg 당 66±9 ng의 아포 A1 분비를 보였다 (평균±8 웰의 SEM). 요약하면, 화합물 6, 및 특히 5는 3 μM의 낮은 농도에서도 인간 간세포 내에서 대조군 수준 이상의 아포 A1 분비를 자극시켰으며, 상기 농도에서 화합물 7 (대조 화합물)은 분명히 덜 활성이었다.

실시예 14: 중추 벤조디아제핀 수용체( BZD )에 결합

R.C. Speth et al., Life Sci. 24:351-358 (1979)에 기재된 바와 같이, 4℃에서 60 분 동안 0.4 nM [3H]플루니트라제팜의 토끼 대뇌피질막에 대한 결합과, 참조 리간드 디아제팜과 비교하여 본 발명의 화합물에 의한 대체를 측정함으로써 본 발명의 화합물의 중추 벤조디아제핀 수용체(BZD)에 대한 친화성을 측정하였다. 이 분석에서 디아제팜의 IC₅₀은 16 nM이다.

상기 수용체에 대한 특이적 결합은 과량의 비-표지된 리간드(디아제팜)의 존재 하에 측정된 총 결합과 비특이적 결합 간의 차이로서 정의된다. 그 결과를 화합물 5, 6 및 7의 존재하에 얻어진 대조군 특이적 결합의 백분율((측정된 특이적 결합/대조군 특이적 결합)x 100)로 나타낸다.

각각의 실험에서, 분석 적합성에 접근하기 위하여 각각의 참조 화합물을 화합물 5, 6 및 7과 동시에 시험하였다. 몇몇 농도에서 시험하였다 (IC₅₀ 값 측정을 위함).

토끼 뇌 BZD 수용체에 특이적 결합

	대조군 특이적 결합의 %
	5			6			7
농도	1st	2nd	평균	1st	2nd	평균	1st	2nd	평균	농도
10^-9M	88.9	104.6	96.8	110.1	83.2	96.7				10^-9M
10^-8M	102.0	94.3	98.2	92.7	91.0	91.9	89.0	104.1	96.5	10^-8M
10^-7M	91.5	96.7	94,1	104.1	101.3	102.7	73.5	68.0	70.7	10^-7M
10^-6M	90.0	100.4	95.2	88.7	100.5	94.6	18.9	17.9	18.4	10^-6M
10^-5M							2.3	1.8	2.1	10^-5M

요약하면, 화합물 5 및 6은 벤조디아제핀 수용체에 유의한 친화성을 나타내지 않은 반면, 화합물 7 (대조 화합물)은 약 5 x 10^-7의 IC₅₀으로 표지된 리간드를 대체하여 중간 정도 친화성을 나타낸다.

Claims

식 1의 화합물 및 그 약학적으로 허용되는 산 부가염:

(상기 식에서,
R¹은 CH₃이고, R²는 CH₃, -(CH₂)_n-R⁴, -(CH₂)_n-O-R⁴, 또는 -(CH₂)_n-S-R⁴이고, n은 1, 2, 3 또는 4이고, R⁴는 CH₃, CH₂CH₃ 또는 CH₂CH₂OCH₃이고, R³는 수소 또는 페닐 고리의 오르토/메타 위치 또는 메타/파라 위치에 연결되는 OCH₂O- 또는 -OCH₂CH₂O-이고; 또는
R¹ 및 R²는 수소이고, R³은 페닐 고리의 오르토/메타 위치 또는 메타/파라 위치에 연결되는 -OCH₂O- 또는 -OCH₂CH₂O-임).
제1항에 있어서,
R¹은 CH₃이고, R²는 CH₃, -(CH₂)_n-R⁴, -(CH₂)_n-O-R⁴, 또는 -(CH₂)_n-S-R⁴이고, n은 1, 2, 3 또는 4이고, R⁴는 CH₃, CH₂CH₃ 또는 CH₂CH₂OCH₃이고, R³은 수소인 것을 특징으로 하는 식 1의 화합물.
제1항에 있어서,
R¹은 CH₃이고, R²는 CH₃이고, R³은 수소인 것을 특징으로 하는 식 1의 화합물.
제1항에 있어서,
R¹ 및 R²는 수소이고, R³은 페닐 고리의 오르토/메타 위치 또는 메타/파라 위치에 연결되는 -OCH₂O- 또는 -OCH₂CH₂O-인 것을 특징으로 하는 식 1의 화합물.
제1항에 있어서,
R¹ 및 R²는 수소이고, R³은 페닐 고리의 메타/파라 위치에 연결되는 -OCH₂O-인 것을 특징으로 하는 식 1의 화합물.
제1항에 따른 식 1의 화합물 또는 그 약학적으로 허용되는 산 부가염을 포함하는 약학적 조성물.
제6항에 있어서,
스타틴, 피브레이트, 니아신 및 에제티미브로부터 선택되는 화합물을 추가로 포함하는 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
아포 A1의 낮은 혈장 수준에 의하여 야기되는 질병의 치료 및 예방을 위한 식 1의 화합물 또는 그 약학적으로 허용되는 산 부가염.
제8항에 있어서,
동맥경화성 동맥 질환의 치료 및 예방을 위한 식 1의 화합물 또는 그 약학적으로 허용되는 산 부가염.
제8항에 있어서,
심근경색증 또는 뇌졸증의 치료 및 예방을 위한 식 1의 화합물 또는 그 약학적으로 허용되는 산 부가염.
제8항에 있어서,
알츠하이머병의 치료 및 예방을 위한 식 1의 화합물 또는 그 약학적으로 허용되는 산 부가염.
제1항에 따른 식 1의 화합물을 유효량으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 인간을 포함하는 포유동물 내에서 혈장 아포 A1 수준을 증가시키는 방법.
제12항에 있어서,
제1항에 따른 식 1의 화합물을 유효량으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 동맥경화성 동맥 질환 또는 알츠하이머병에 걸린 인간을 포함하는 포유동물을 치료하는 방법.
제12항에 있어서,
제1항에 따른 식 1의 화합물을 유효량으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 동맥경화성 동맥 질환에 걸릴 위험을 가지나 이러한 질환에 걸리지 않은 환자 내에서 동맥경화성 동맥 질환을 예방하는 방법.
제12항에 있어서,
제1항에 따른 식 1의 화합물을 유효량으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 알츠하이머병에 걸릴 위험을 가지나 이러한 질환에 걸리지 않은 환자 내에서 알츠하이머병을 예방하는 방법.