KR20110068980A

KR20110068980A - 고병원성 돼지 생식기 및 호흡기 증후군(ｈｐｐｒｒｓ)에 대한 백신

Info

Publication number: KR20110068980A
Application number: KR1020117004020A
Authority: KR
Inventors: 마이클 비. 루프; 에릭 본
Original assignee: 베링거잉겔하임베트메디카인코퍼레이티드
Priority date: 2008-08-25
Filing date: 2009-08-24
Publication date: 2011-06-22
Also published as: UA106475C2; JP2014193902A; MX2011002046A; KR101653177B1; AU2009285843A1; AU2009285843B2; CL2011000382A1; WO2010025109A1; US20110117129A1; BRPI0917887A2; RU2011110910A; WO2010025109A8; EP2328612A1; RU2561595C2; JP5890469B2; CN102316895A; JP2012500852A; JP5619004B2; CA2734390A1; CN108704127A

Abstract

본 발명은 돼지에 영향을 미치는 바이러스 질환인 고병원성 돼지 생식기 및 호흡기 증후군(HP PRRS)과 같은 돼지 생식기 및 호흡기 증후군(PRRS)과 관련된 고열 질환 형태를 예방 및 치료하는데 사용하기 위한 방법 및 약독화된 바이러스 조성물에 관한 것이다.

Description

고병원성 돼지 생식기 및 호흡기 증후군(ＨＰＰＲＲＳ)에 대한 백신{Vaccine against highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome (HP PRRS)}

서열목록

본 출원은 서면 형식 및 컴퓨터 판독 형식의 서열목록을 포함하고, 그 교시와 내용은 본원에 참조로서 포함된다.

기술분야

본 발명은 일반적으로 감염성 질환에 대한 백신에 관한 것이다. 보다 구체적으로는, 본 발명은 돼지에 영향을 미치는 바이러스 질환인 고병원성 돼지 생식기 및 호흡기 증후군(HP PRRS)에 대한 백신에 관한 것이다.

돼지 생식기 및 호흡기 증후군(PRRS)은 심각한 돼지 질환으로 인식되어 있고 임신한 암퇘지의 생식 불능 또는 특히 젖먹이 돼지의 호흡 곤란을 특징으로 한다. 이 바이러스 질환은 처음 미국에서 1987년에 발견되었고, 이어서 유럽에서 발견되었으며, 1990년대 초에 아시아에서 동정되었다. 지금까지, PRRS는 양돈 국가에서 풍토병의 특징을 가지고 세계적으로 확산되어, 매년 막대한 경제적 손실을 일으켰다. PRRS의 병인은 돼지 생식기 및 호흡기 증후군 바이러스(PRRSV)로서, 마우스의 락테이트 데하이드로게나제-상승 바이러스(LDEV), 말 동맥염 바이러스(EAV) 및 원숭이 출혈열 바이러스(SHFV)와 함께 니도비랄레스(Nidovirales)목 내의 아테리비리데(Arteriviridae)과에 속한다.

작은 엔벨로프형 바이러스의 구성원인 PRRSV는 약 20개의 추정 단백질을 암호화하는 적어도 8개의 개방 판독 프레임(ORF)을 함유하는 약 15.1-15.5kb의 단일-가닥 양성-센스 RNA(+ssRNA) 게놈을 보유한다. 또한, 이 게놈은 5'-말단과 3'-말단에 2개의 미해독 영역(UTR)을 함유한다. 구체적으로, ORF1(ORF1a 및 ORF1b)은 5'-UTR의 하류에 위치하고 전체 게놈의 2/3 이상을 차지한다. ORF1a는 직접 해독되는 반면, ORF1b는 리보솜 프레임이동에 의해 해독되어, 큰 ORF1ab 폴리-단백질을 생산하고, 이는 단백분해적으로 절단되어 바이러스 전사 및 복제 기전과 관련된 산물이 된다. 3'-UTR의 상류에 위치한 ORF 2-7은 비리온과 관련된 일련의 바이러스 구조 단백질, 예컨대 엔벨로프 단백질(E) 및 뉴클레오캡시드 단백질(N)을 암호화한다. 이 단백질들은 모두 서브-게놈성 mRNA(sgmRNA)의 3'-공말단 네스티드 세트(3'-coterminal nested set)로부터 해독된다.

세계적으로 다른 지리학적 지역으로부터의 PRRSV 분리주의 계통발생적 분석은 2가지 주요 유전자형의 존재를 분명하게 시사한다: 유럽 원형을 대표하는 I형(Lelystad virus, LV) 및 원형으로서 북미 바이러스주(Northern American strain) ATCC VR2332를 대표하는 타입 II(VR2332의 게놈 서열은 GenBank 등록번호 AY150564 참조)(Murtaugh et al., Arch Virol. 1995; 140:1451-1460). 더욱이, 일부 연구들은 ORF5 및 비구조 단백질 2(NSP2)-암호화 유전자(nsp2)가 PRRSV 게놈에서 가장 유전자적으로 가변성인 영역을 나타낼 수 있다는 것을 밝혀냈다. VR2332의 NSP2 서열에 대해서는 스위스프롯(SwissProt) 등록번호 Q9WJB2 또는 서열번호 2를 참조한다. 또한, PRRSV 바이러스주는 이의 병원성이 매우 다르다는 것이 충분히 입증되어 있다.

2006년에, 처음엔 알지 못했으나 PRRS 증상을 가진 소위 "고열"병의 비교할 바 없는 대규모 발발이 일어났고, 이는 10개 지방 이상으로 확산하여 약 400,000의 치명적 증례를 가진 2,000,000 마리 이상의 돼지에게 영향을 미쳤다. 전형적인 PRRS와 달리, 수많은 성숙 암퇘지는 "고열"병에 감염되었다. 이러한 비전형적 PRRS 유행병은 초기에는 신경학적 증상(예, 오한), 고열(40-42℃), 홍반성 창백 발진 등을 나타내는 돼지 콜레라-유사 질환으로 동정되었다. 면역학적 분석과 함께 부검은 다발 기관이 심한 병리학적 변화를 나타내는 고 병원성 PRRSV로 감염된 것을 분명하게 밝혀냈다(Tian et al., PLoS ONE. 2007; 2(6): e526). 분리된 바이러스들의 전체-게놈 분석은 이 PRRSV 분리주가 타입 II로 분류되고 PRRSV의 중국 바이러스주인 HB-1(96.5% 뉴클레오타이드 동일성) 및 JX143(Yuan et al., 2007 International PRRS Symposium, Chicago)과 높은 상동성이라는 것을 나타냈다. JX143의 게놈 서열은 서열번호 1 또는 EMBL/GenBank 등록번호 EU708726을 참조한다. 또한, 이러한 바이러스 분리주는 독특한 분자 특징, 소위 비구조 단백질 2(NSP2)에 30개 아미노산의 불연속 결실을 포함하는 것으로 관찰되었다(Tian et al., PLoS ONE. 2007; 2(6): e526). PRRS의 "고열 질환" 형태는 이제 "고병원성 PRRS" 또는 HP PRRS라고 불리기도 한다.

PRRS 바이러스(PRRSV)의 분리 및 PRRS에 대한 변형 생(약독화) 또는 불활성화된 PRRSV를 함유하는 백신의 제조는 다수의 공개문헌(WO 92/21375, WO 93/06211, WO 93/03760, WO 93/07899, WO 96/36356)에 기술되어 있다. 특히, WO 93/03760은 PRRS 바이러스 분리, 배양, 약독화 방법뿐만 아니라 각 백신의 제조방법, 특히 PRRS 타입 II 원형 분리주 ATCC VR-2332를 개시한다. WO 96/36356은 전술 분리주의 특히 유용한 약독화 후손으로서, 시미안 세포에서 연속 계대배양하여 수득한 것을 개시하며, 이는 수탁번호 ATCC VR-2495로 기탁되어 있다. 각각의 변형 생(MLV) 백신 산물은 상표명 Ingelvac® PRRS MLV 하에 베링거 잉겔하임에서 시판되고 있다. 타입 II 분리주를 기반으로 한 다른 MLV 백신은 상표명 Ingelvac® PRRS ATP로 시판되고 있다.

PRRS의 예방에 적당한 전략은 백신접종이다. 하지만, 백신접종이 HP PRRS에 대해 효과적일지, 또한 어떤 종류의 백신이 사용될 수 있는지에 대해서는 지금까지 알려진 것이 없다.

본 발명자들은 PRRS 타입 II 바이러스의 약독화 바이러스주가 돼지 생식기 및 호흡기 증후군과 관련이 있는 고열 질환 형태의 효과로부터 돼지를 보호하고 백신접종하는데 사용될 수 있다는 놀라운 발견을 하게 되었다. PRRS 타입 II 바이러스의 약독화 바이러스주의 예방학적 특징의 동정은 HP PRRS 등에 대해 높은 위험이 있는 돼지의 치료를 가능하게 할 수 있다. 이러한 백신접종 또는 치료 프로그램은 2006년 중국에서 돼지 산업을 황폐화시키고 대략 2천만 마리의 돼지를 도살하게 된 것과 유사한 다른 HP PRRS 발발의 가능성 또는 충격을 줄이는데 도움을 줄 수 있다.

본원에 제공된 본 발명의 한 관점은 PRRS 타입 II 바이러스, 바람직하게는 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스의 유효량을 함유하는 면역원성 조성물을, 이를 필요로 하는 돼지에게 투여하는 것을 포함하여 고열 질환의 효과로부터 돼지를 예방학적으로 보호하는 방법을 포함한다. 상기 조성물은 추가로 약제학적으로 허용되는 담체를 함유할 수 있다. 또한, 조성물은 보강제를 포함할 수 있다. 이 방법은 예방이나 치료 대책으로 사용될 수 있다. 더욱이, 상기 면역원성 조성물의 유효량의 투여는 PRRS의 고열 질환 형태의 임상 징후의 빈도 또는 중증도의 경감을 초래한다.

또한, 본 발명은 PRRS 타입 II 바이러스, 바람직하게는 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스의 유효량을 함유하는 면역원성 조성물을 돼지에게 투여하는 것을 포함하여, 고열 질환에 대하여 돼지에게 백신접종하는 방법도 제공한다. 조성물은 추가로 약제학적으로 허용되는 담체를 함유할 수 있다. 이 조성물은 또한 추가로 보강제를 함유할 수도 있다. 면역원성 조성물의 유효량을 이용한 백신접종은 PRRS의 고열 질환 형태의 임상 징후의 중증도 또는 빈도를 경감시키는 것이 바람직하다.

고열 질환은 돼지 생식기 및 호흡기 증후군과 관련된 형태일 수 있다. 돼지 생식기 및 호흡기 증후군은 고병원성("HP PRRS")일 수 있다. HP PRRS 또는 고열 질환 형태는 다음 중 하나 이상의 임상 징후를 나타내는 돼지에서 검출될 수 있다: 종종 귀, 입, 코, 등 및 대퇴부 안쪽에서 관찰되는 발적, 혈반, 점상 출혈, 홍반성 창백 발진 및 여드름. 다른 일반적 증상으로는 고열(40℃ 이상), 우울, 식욕부진, 기침, 천식, 파행, 오한, 기도 장애 및 설사를 포함할 수 있다. HP PRRS는 HP PRRS 바이러스에 의해 유발된다.

본원에 제공된 본 발명의 다른 관점은 PRRS 타입 II 바이러스, 바람직하게는 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스의 유효량을 함유하는 면역원성 조성물을, 이를 필요로 하는 돼지에게 투여하는 것을 포함하여 HP PRRS 감염으로부터 돼지를 예방적으로 보호하는 방법을 포함한다.

2002년 중국에서 PRRS 타입 2 유전자형의 구성원인 것이 분명해지기 시작한 HP PRRS 바이러스는 소위 고열 질환과 연관성이 있다. HP PRRS 바이러스는 다른 PRRS 바이러스에 비해 감염 돼지 집단 내의 확산에 있어서 선택 우위를 나타내어 이후 여러 중국 지방에서 우세해지기 시작했다

"HP PRRS 바이러스"란 용어는 뉴클레오타이드 서열이 서열번호 1과 실질적으로 동일한 PRRS 바이러스주를 의미하지만, 이에 국한되는 것은 아니다. HP PRRS 바이러스는 바람직하게는 뉴클레오타이드 서열이 서열번호 1과 실질적으로 동일한 PRRS 바이러스주이다. '서열번호 1과 실질적으로 동일한'이란, PRRS 바이러스주의 뉴클레오타이드 서열이 서열번호 1과 85% 내지 100% 동일한 서열을 포함하나, 바람직하게는 단 HP PRRS 바이러스는 본원에 정의된 PRRS 타입 II 바이러스가 아닌 조건, 예컨대 뉴클레오타이드 상동성은 참조 바이러스 분리주인 VR2332와 ORF5에서 91% 미만, 바람직하게는 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 미만의 상동성이어야 하는 것을 의미한다. HP PRRS 바이러스주 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 1과 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88% 또는 89% 이상 동일한 것이 바람직하고, 마찬가지로 바람직하게는 단 HP PRRS 바이러스는 본원에 정의된 PRRS 타입 II 바이러스가 아닌 조건, 예컨대 뉴클레오타이드 상동성은 참조 바이러스 분리주인 VR2332와 ORF5에서 91% 미만, 바람직하게는 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 미만의 상동성이어야 한다. 더 더욱 바람직하게는, PRRS 바이러스주 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 1과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일하고, 마찬가지로 바람직하게는 단 HP PRRS 바이러스는 본원에 정의된 PRRS 타입 II 바이러스가 아닌 조건, 예컨대 뉴클레오타이드 상동성이 참조 바이러스 분리주인 VR2332와 ORF5에서 91% 미만, 바람직하게는 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 미만의 상동성이어야 한다.

또한, HP PRRS 바이러스란 용어는 NSP2 단백질 내에 일정한 변형을 가진 임의의 PRRS 바이러스주를 의미한다. 이 정의에 따르면, HP PRRS 바이러스주는 서열번호 2의 아미노산 위치 482에 있는 류신에 대응하는 아미노산이 결실되어 있는 NSP2 단백질을 암호화하고 고열의 임상 징후를 유발하는 PRRS 바이러스주이다. 대안적으로, 또는 서열번호 2의 아미노산 위치에서 결실된 류신 외에, 서열번호 2의 아미노산 534 내지 562에 대응하는 아미노산은 PRRS 바이러스-암호화된 NSP2 단백질로부터 결실될 수 있다. 이 문맥에서, 서열번호 2는 예시로서 이해되어야 하며, NSP2 단백질이란 용어는 서열번호 2의 NSP2 단백질에 제한되지 않을 것이다. 상기 교시를 기초로 하여, 당업자는 서열번호 2의 서열과 다르지만, 서열번호 2의 위치 482에 있는 류신에 대응하는 류신의 결실 및/또는 서열번호 2의 아미노산 534 내지 562에 대응하는 아미노산의 결실을 의미하는 동일한 변형을 나타내는 NSP2 단백질 서열을 가진, PRRS 바이러스주의 임의의 대응 변형을 쉽게 동정할 수 있다.

더욱이, HP PRRS 바이러스란 용어는 서열번호 1과 실질적으로 동일한(앞에서 정의한 바와 같다) 뉴클레오타이드 서열을 갖고, 서열번호 2의 아미노산 위치 482에 있는 류신에 대응하는 아미노산 및/또는 서열번호 2의 아미노산 534 내지 562에 대응하는 아미노산이 PRRS 바이러스-암호화된 NSP2 단백질로부터 결실된 NSP 단백질을 암호화하는 PRRS 바이러스주를 의미할 수 있다.

또한, HP PRRS 바이러스란 용어는 뉴클레오타이드 서열이 서열번호 1과 실질적으로 동일한 PRRS 바이러스주인 HP PRRS 바이러스를 의미하나, 단 HP PRRS 바이러스는 본원에 정의된 PRRS 타입 II 바이러스가 아닌 조건, 예컨대 뉴클레오타이드 상동성이 참조 바이러스 분리주인 VR2332와 ORF5에서 91% 미만, 바람직하게는 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 미만의 상동성이어야 하고, 서열번호 2의 아미노산 위치 482에 있는 류신에 대응하는 아미노산 및/또는 서열번호 2의 아미노산 534 내지 562에 대응하는 아미노산이 PRRS 바이러스-암호화된 NSP2 단백질로부터 결실된 NSP2 단백질을 암호화하는 것이다.

더욱이, HP PRRS 바이러스란 용어는 뉴클레오타이드 서열이 서열번호 1과 실질적으로 동일한 PRRS 바이러스주인 HP PRRS 바이러스를 의미하나, 바람직하게는 단 HP PRRS 바이러스는 본원에 정의된 PRRS 타입 2 바이러스가 아닌 조건, 예컨대 뉴클레오타이드 상동성이 참조 바이러스 분리주(앞에서 정의한 바와 같다)인 VR2332와 ORF5에서 91% 미만, 바람직하게는 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 미만의 상동성이어야 하고, aa 위치 536-550 또는 546-560 또는 476-490에 대응하는 펩타이드에 대한 반응성이 있는 항체가 반응성을 전혀 나타내지 않는 NSP2 단백질을 암호화하는 것이다.

더욱이, 다음과 같은 PRRS 바이러스 분리주는 HP PRRS 바이러스주인 것으로 알려져 있다. 결론적으로, 본 명세서에 사용된 HP PRRS 바이러스주란 용어는 다음 바이러스주 중 임의의 바이러스주 및 이의 임의의 후손을 포함할 것이다: HP PRRS 바이러스주 AH-1; AHCFSH; AHCFZC; BB07; BD-8; BQ07; CL07; CX07; CZ07; FY060915; FY080108; GC-2; GCH-3; GD1; GD2; GD2007; GD3; GD4; GDSD1; GDY1-2007; GDY2-2007; GDYF1; GS2008; GXHZ12; GXHZ13; GXHZ14; GXHZ16; GXHZ19; GXHZ2; GXHZ21; GXHZ4; GXLZ5; GXLZ7; GY; GZCJ; GZDJ; GZHW1; GZHW2; GZHX; GZJS; GZKB; GZKY; GZLJ1; GZWB; GZWM; GZZB; Hainan-1; Hainan-2; HB1; HB2; HB3; HB-Tsh1; HB-Xt1; HEN46; HeN-KF; HeN-LH; HeN-LY; HLJDF; HLJMZ1; HLJMZ2; HLJMZ3; HLJZY; HM-1; HN2; HN2007; HN3; HNId; HNIy; HNLY01; HNNX01; HNPJ01; HNsp; HNXT1; HNyy; HNyz; HQ-5; HQ-6; HUB; HuN; HUN1; HUN1 1; HUN15; HUN16; HUN17; HUN2; HUN3; HUN4; HUN5; HUN6; HUN7; Hunan-1; Hunan-2; Hunan-3; HUNH2; HUNH4; HuNhI; HUNL1; HUNX4; HZ061226; HZ070105; Jiangsu-1; Jiangsu-2; Jiangsu-3; Jiangxi-2; Jiangxi-4; JLYS; JN; JX1 ; JX143; JX2; JX-2; JX2006; JX3; JX4; JX5; JXA1; KS06; LC07; LJ; LS06; LS-4; LY07; NB070319; SC07; SD; SD14; SDWF2; SH02; ST-7; SX2007; SY0608; TJDMJ; TJZHJ2; TJZHJ3; TQ; TQ07; TW07; WF07; XJ07; XL2008; YN2008; YNBS; YNDL; YNMG; YNWS; YNYS; YNYX1 ; YNYX3; ZJ06; ZJCJ; ZJWL; ZX07; ZS070921. 후손은 전술한 임의의 모 바이러스에서 유래하고 대응 모 바이러스주와 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 및 99% 이상의 뉴클레오타이드 서열 동일성을 가진 바이러스 분리주를 의미하나, 이에 국한되는 것은 아니다.

"PRRS 타입 II 바이러스"란 용어는 ATCC-VR2332로 기탁된 바이러스 분리주 또는 ATCC-VR2332로 기탁된 바이러스 분리주의 임의의 후손과 실질적으로 동일한 PRRS 바이러스주를 의미하지만, 이에 국한되지는 않는다. 본 명세서에 사용된, '실질적으로 동일한'이란 ORF5 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 ATCC-VR2332로 기탁된 바이러스 분리주의 뉴클레오타이드 서열과 85% 내지 100% 동일하고 서열번호 3에 기재된 바와 같은 것을 의미한다. ORF5 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 3과 86%, 87%, 88% 또는 89% 이상 동일한 것이 바람직하다. 더 더욱 바람직하게는, ORF5 뉴클레오타이드 서열이 서열번호 3과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일한 것이다. 바람직하게는, 본 명세서에 사용된 PRRS 타입 II 바이러스는 ATCC-VR2332로 기탁된 바이러스 분리주 또는 ATCC-VR2332로 기탁된 바이러스 분리주의 임의의 후손(앞에서 정의한 바와 같음)과 실질적으로 동일하나, 서열번호 2의 아미노산 534 내지 562에 대응하는 아미노산의 NSP2 유전자 내의 결실을 보유하지 않는 PRRS 바이러스주이다. PRRS 바이러스 ATCC-VR2332의 전체 서열은 GenBank 등록번호 U87392에서 찾아볼 수 있다.

PRRS 타입 II 바이러스란 용어는 또한 전술한 임의의 PRRS 타입 II 바이러스주에서 유래하는 임의의 약독화된 바이러스를 포함할 수 있다. 예를 들어, PRRS 타입 II 바이러스란 용어는 또한 ATCC-VR2495로 기탁된 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스를 포함할 것이다. 또한, 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스는 ATCC-VR2332로 기탁된 바이러스 분리주의 임의의 약독화된 후손일 수 있다. 일부 바람직한 형태에서, PRRS 타입 II 바이러스 및 약제학적으로 허용되는 담체는 베링거 잉겔하임 베트메디카 인코퍼레이티드(St. Joseph, MO) 제품인 Ingelvac® PRRS MLV 백신(일련 번호 JA-A64A-149)일 수 있다. PRRS 타입 II 바이러스는 또한 중국 기원의 비-HP PRRS 바이러스주인 HB-1; BJ-4; CH-1a; CH-1R; CH-1 R01; HB-2; HN 1; HT06; HZ07; LS05; LY03; NH04; PL97-1; S1; SH061130; SX071226; TW07-1; WF03; XX03; ZJJ04; ZJJ05; ZJJ07로 알려진 분리주를 포함할 수 있다.

본 명세서에 제공되는 본 발명의 다른 관점은 유효량의 PRRS 타입 II 바이러스, 바람직하게는 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스를 함유하는 면역원성 조성물을 이를 필요로 하는 돼지에게 투여하는 것을 포함하여 HP PRRS 감염으로부터 돼지를 예방하는 방법으로, 상기 PRRS 타입 II 바이러스는 ATCC-VR2332로 기탁된 바이러스 분리주 또는 ATCC-VR2332로 기탁된 바이러스 기탁물의 임의의 후손과 실질적으로 동일한 PRRS 바이러스주인 방법을 포함한다. 상기 PRRS 타입 II 바이러스는 서열번호 2의 아미노산 534 내지 562에 대응하는 아미노산의 NSP2 유전자 내에 결실을 보유하지 않는 것이 바람직하다. 상기 PRRS 타입 II 바이러스는 ATCC-VR2495로 기탁된 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스인 것이 더 더욱 바람직하다. 더욱이, PRRS 타입 II 바이러스는 Ingelvac® PRRS MLV 백신(일련번호 JA-A64A-149)의 바이러스이다.

PRRS 타입 II 바이러스의 유효량은 바이러스의 유효 용량이 투여된 동물에서 면역 반응을 유인하거나 유인할 수 있는 바이러스의 양일 수 있다. 유효한 양은 백신 성분 및 투여 스케줄에 의존적일 수 있다. 불활성화된 바이러스 또는 변형 생 바이러스 제제가 사용된다면, 용량당 약 10^2.0 내지 약 10^9.0 TCID₅₀(조직 배양 감염 용량 50% 종말점), 더욱 바람직하게는 10^3.0 내지 약 10^4.0 TCID₅₀, 더 더욱 바람직하게는 약 10^4.0 내지 약 10^8.0 TCID₅₀을 함유하는 백신의 양이 권장될 수 있다.

본원에 기술된 PRRS 타입 II 바이러스는 불활성화된 전체 사멸 바이러스로서, 또는 PRRS 타입 II 바이러스의 약독화된 형태로서, 전술한 고열 질환의 영향으로부터 돼지를 예방하기 위해 사용될 수 있다. 또한, PRRS 타입 II 바이러스의 면역원성 단편 또는 분획을 비롯한 서브유닛도 고열 질환의 영향으로부터 돼지를 예방하는데 사용될 수 있다.

본원에 기술된 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스는 약제학적으로 허용되는 담체에 전술한 하나 이상의 바이러스주를 생존 상태로 함유하는 변형 생 백신(MLV)일 수 있다. 또한, 또는 대안적으로, 불활성화된 바이러스는 전술한 사백신(KV)을 제조하는 데에도 사용할 수 있다. MLV는 용량당 10¹ 내지 10⁷ 바이러스 입자, 더욱 바람직하게는 10³ 내지 10⁵ 바이러스 입자, 더 더욱 바람직하게는 10⁴ 내지 10⁵ 바이러스 입자의 투여를 허용하도록 제형화될 수 있다. KV는 용량당 10³ 내지 10¹⁰, 10⁴ 내지 10⁹, 10⁵ 내지 10⁸, 또는 10⁶ 내지 10⁷ 바이러스 입자의 불활성화전 역가를 기초로 하여 제형화할 수 있다.

PRRS 타입 II 바이러스, 바람직하게는 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스는 HP PRRS를 유발하는 PRRS 바이러스주에 돼지가 노출되기 전에 예방적으로 투여될 수 있고, 또는 HP PRRS를 유발하는 PRRS 바이러스주에 돼지가 노출됨과 동시에 돼지에 투여될 수 있고, 또는 HP PRRS를 유발하는 PRRS 바이러스주에 표적 돼지가 노출된 후 치료적으로 투여될 수 있다. 표적 돼지는 전술한 고열 질환 형태 또는 HP PRRS의 하나 이상의 임상 징후 또는 공통 증상들을 나타낼 수 있다. 표적 돼지는 특히 HP PRRS와 관련된 고열 질환에 민감할 수 있다. 표적 돼지는 HP PRRS에 특히 민감할 수 있다. 표적 돼지는 면역결핍으로 인해 HP PRRS에 민감할 수 있다. 표적 돼지는 돼지가 사육되는 장소 때문에 HP PRRS에 민감할 수 있다. 민감성 돼지는 중국에서 사육될 수 있다. 민감성 돼지는 중국의 한 지방, 예컨대 장시성, 허베이성, 상하이에서 사육될 수 있다[Tian et al., PloS ONE. 2007; 2(6):e526, 내용들은 본 발명에 참고인용된다]. 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스는 주사, 흡입 또는 이식을 통해 투여될 수 있고, 주사가 특히 바람직하다. 백신접종 또는 치료의 원하는 기간 및 유효성에 따라 PRRS 타입 II 바이러스, 바람직하게는 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스는 1회 또는 여러 번, 또한 간헐적으로, 예컨대 수일, 수주 또는 수개월 동안 매일 다른 투여량으로 투여될 수 있다. 이 중에서, 1회 용량 투여가 바람직하다. 주사는 원하는 양으로 중심 정맥 주사이거나 말초 주사일 수 있고, 또는 대안적으로 연속 주입일 수 있다. PRRS 타입 II 바이러스, 바람직하게는 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스는 경구, 비경구, 피하, 근육내, 피내, 설하, 경피, 직장, 경점막, 흡입을 통한 표면적, 협측 투여를 통해, 또는 이의 조합으로 투여될 수 있다. 또한, PRRS 타입 II 바이러스, 바람직하게는 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스는 약독화된 바이러스의 서방출을 허용할 수 있는 이식체 형태로 투여될 수 있다. 근육내 주사에는 0.5ml 내지 3ml 사이, 바람직하게는 1ml 내지 2.5ml 사이, 더욱 바람직하게는 1.5ml 내지 2ml 사이의 용적이 적용될 수 있다. 2ml의 근육내 주사가 가장 바람직하다. 피내 주사에는 0.05ml 내지 1ml 사이, 바람직하게는 0.1ml 내지 0.8ml 사이, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 0.5ml 사이, 더 더욱 바람직하게는 0.2 내지 0.4ml 사이의 용적을 투여한다. 가장 바람직하게는, 0.2ml의 피내 주사를 적용할 수 있다. 0.5ml 내지 5ml, 바람직하게는 1ml 내지 4ml, 더욱 바람직하게는 2ml 내지 3ml 사이의 PRRS 타입 II 바이러스 용적은 비내로 적용할 수 있다. 3ml 용적을 비내 적용하는 것이 가장 바람직하다.

약제학적으로 허용되는 담체는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 안정제, 희석제, 보존제, 항균제 및 항진균제, 등장제, 흡수지연제 등을 포함할 수 있다.

본 명세서에 사용된 "보강제"는 수산화알루미늄 및 인산알루미늄, 사포닌, 예컨대 Quil A, QS-21(Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPO-0100(Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL), 유중수 에멀젼, 수중유 에멀젼, 수중유중수 에멀젼을 포함할 수 있다. 에멀젼은 특히 경량의 액체 파라핀 오일(유럽 약전 타입); 알켄, 특히 이소부텐 또는 데센의 올리고머화로부터 초래되는 스쿠알렌 또는 스쿠알렌 오일과 같은 이소프레노이드 오일; 선형 알킬 기를 함유하는 알콜이나 산의 에스테르, 구체적으로 식물유, 에틸 올레이트, 프로필렌 글리콜 디-(카프릴레이트/카프레이트), 글리세릴 트리-(카프릴레이트/카프레이트) 또는 프로필렌 글리콜 디올레이트; 분지형 지방산 또는 알콜의 에스테르, 구체적으로 이소스테아르산 에스테르를 기반으로 할 수 있다. 에멀젼 형성을 위해 오일은 유화제와 함께 사용된다. 유화제는 비이온성 계면활성제, 구체적으로 소르비탄의 에스테르, 만나이드의 에스테르(예, 언하이드로만니톨 올레이트), 글리콜의 에스테르, 폴리글리세롤의 에스테르, 프로필렌 글리콜의 에스테르, 올레산의 에스테르, 이소스테아르산의 에스테르 또는 하이드록시스테아르산의 에스테르(이들은 경우에 따라 에톡시화된다), 및 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 공중합체 블록, 구체적으로 Pluronic 제품, 특히 L121이 바람직하다[Hunter et al., The Theory and Practical Application of Adjuvants(Ed. Stewart-Tull, D.E.S.). JohnWiley and Sons, NY, pp51-94(1995) 및 Todd et al., Vaccine 15:564-570(1997)].

예를 들어, 문헌["Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach" edited by M. Powell and M. Newman, Plenum Press, 1995]의 147쪽에 기술된 SPT 에멀젼, 및 동일 서적의 183쪽에 기술된 에멀젼 MF59를 사용하는 것이 가능하다.

보강제의 또 다른 예는 아크릴산 또는 메타크릴산의 중합체 및 말레산 무수물과 알케닐 유도체의 공중합체 중에서 선택되는 화합물이다. 유리한 보강제 화합물은 가교된, 특히 당 또는 폴리알콜의 폴리알케닐 에테르와 가교된 아크릴산 또는 메타크릴산의 중합체이다. 이 화합물들은 카보머(Phameuropa Vol. 8, No. 2, June 1996)라는 용어로 알려져 있다. 당업자는 또한 적어도 3개의 하이드록시 기, 바람직하게는 8개 이하의 하이드록시 기를 보유하는 폴리하이드록시화된 화합물과 가교되고, 적어도 3개의 하이드록시의 수소 원자가 적어도 2개의 탄소 원자를 가진 불포화 지방족 라디칼에 의해 치환되는 상기 아크릴계 중합체를 기술하는 미국 특허 2,909,462를 참조할 수 있다. 바람직한 라디칼은 탄소 원자를 2 내지 4개 함유하는 것, 예컨대 비닐, 알릴 및 다른 에틸렌계 불포화 기이다. 카보폴(Carbopol; BF Goodrich, Ohio, USA)이라는 상품명으로 판매되는 제품이 특히 적당하다. 이들은 알릴 수크로오스 또는 알릴 펜타에리트리톨과 가교된다. 이 중에서, Carbopol 974P, 934P 및 971P를 예로 들 수 있다. 말레산 무수물과 알케닐 유도체의 공중합체 중에서, EMA(Monsanto) 공중합체는 말레산 무수물과 에틸렌의 공중합체이다. 이 중합체들을 물에 용해하면, 산 용액이 되고, 이는 바람직하게는 생리학적 pH로 중화하여야 면역원성, 면역학적 또는 백신 조성물 자체에 혼입되는 보강제 용액이 될 수 있다.

또 다른 적당한 보강제로는 특히 α-토코페놀 아세테이트, RIBI 보강제 시스템(Ribi Inc.), 블록 공중합체(CytRx, Atlanta GA), SAF-M(Chiron, Emeryville CA), 모노포스포릴 지질 A, 아브리딘 지질-아민 보강제, 이.콜라이의 열불안정성 장독소(재조합체 또는 기타), 콜레라 독소, IMS 1314 또는 뮤라밀 디펩타이드를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.

보강제는 1회 용량당 약 100㎍ 내지 약 10mg의 양으로 첨가되는 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는, 보강제는 1회 용량당 약 100㎍ 내지 약 10mg의 양으로 첨가한다. 더 더욱 바람직하게는, 보강제는 1회 용량당 약 500㎍ 내지 약 5mg의 양으로 첨가한다. 더 더욱 바람직하게는, 보강제는 1회 용량당 약 750㎍ 내지 약 2.5mg의 양으로 첨가한다. 가장 바람직하게는, 보강제는 1회 용량당 약 1mg의 양으로 첨가한다.

또한, 본 발명은 HP PRRS에 대하여 표적 돼지를 치료하거나 면역화할 수 있는 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스의 생산방법도 제공한다. 이 방법은 다음과 같은 단계들 중 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다: (a) 이하에 기술되는 바와 같은, ATCC-VR2332 또는 ATCC-VR2332와 실질적으로 동일한 임의의 PRRS 타입 II를 변형하여 바이러스가 무독성이 되고 HP PRRS에 대하여 표적 돼지를 면역화할 수 있게 하기 위해 계대배양하는 단계, (b) 생산 바이러스 세포 또는 세포 배양물을 수거하는 단계, (c) 생산 바이러스 배양물에 안정제를 첨가하는 단계; 및/또는 (d) 생산 바이러스 배양물을 동결건조하는 단계. 바이러스 계대배양은 통상적인 증식 및 선택 기술을 포함할 수 있고; 예컨대 약독화된 표현형의 증대를 위해 적당한 숙주 세포에서의 연속적인 증식을 포함한다. 계대배양은 돌연변이를 획득한 바이러스주를 초래할 수 있고, 이중 대부분은 모 바이러스주의 성질을 크게 변경시키지는 않을 것이다. 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스는 숙주 세포에서 적어도 60회, 65회, 70회, 75회, 80회 또는 그 이상 계대배양된 ATCC-VR2332 또는 ATCC-VR2332와 실질적으로 동일한 임의의 PRRS 타입 II의 결과일 수 있다. 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스는 숙주 세포에서 적어도 50 내지 100회, 60 내지 90회, 70 내지 80회 또는 65 내지 75회 사이로 계대배양된 ATCC-VR2332 또는 ATCC-VR2332와 실질적으로 동일한 임의의 PRRS 타입 II의 결과일 수 있다. 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스는 숙주 세포에서 70 또는 75회 계대배양된 ATCC-VR2332 또는 ATCC-VR2332와 실질적으로 동일한 임의의 PRRS 타입 II의 결과일 수 있다. 적당한 숙주 세포는 시미안 세포주, 베로(Vero) 세포, 또는 돼지 폐포 대식세포를 포함할 수 있다. 바람직한 시미안 세포주는 MA-104이다. 숙주 세포는 세포 배양물일 수 있다. 세포주는 계대배양될 바이러스로 감염될 수 있다. 각 계대배양은 최종적으로 바이러스 감염된 세포주 또는 세포 배양물을 34℃ 내지 40℃ 사이, 더욱 바람직하게는 35℃ 내지 39℃ 사이, 더 더욱 바람직하게는 36℃ 내지 38℃ 사이, 더 더욱 바람직하게는 35℃ 내지 37℃ 사이의 온도에서 항온배양하는 것을 포함할 수 있다. 가장 바람직하게는, 각 계대배양이 37℃의 온도에서 최종 바이러스 감염된 세포주 또는 세포 배양물을 항온배양하는 것을 필요로 할 수 있다. 수거하는 단계는 바이러스 감염된 세포 배양물을 동결하는 것을 포함할 수 있다. 동결건조는 바이러스 감염된 세포 배양물로부터 수분을 승화시키는 단계를 포함할 수 있다.

또한, 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스를 생산하기 위해 바이러스 변형을 사용할 수도 있고, 이는 적당한 유전자 조작 기술에 의해 바이러스주의 핵산 서열을 직접 돌연변이시켜 달성할 수 있다. 이러한 기술은 핵산 재조합법 및 조작 방법에 의해 변형될 수 있는, 바이러스 게놈의 전체 길이의 상보성 핵산 카피의 작제를 이용할 수 있다. 이러한 방법은 부위 지시된 돌연변이유발을 이용할 수 있다. 이에 따라 바이러스 단백질의 항원성 부위 또는 효소적 성질이 변경될 수 있다.

또한, 본 발명은 전술한 임의의 방법을 수행하기 위한 키트(kit)를 제공한다. 이 키트는 용기, 바람직하게는 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스를 함유하는 면역원성 조성물, 약제학적으로 허용되는 담체, 보강제 및 PRRS 감염의 임상 징후 또는 효과, 바람직하게는 PRRS 또는 HP-PRRS의 고열 질환 형태의 빈도 또는 중증도를 경감시키도록 이를 필요로 하는 동물에게 상기 면역원성 조성물을 투여하기 위한 사용설명서를 포함할 수 있다. 키트는 또한 주사 수단 및/또는 다른 형태의 투여 수단을 포함할 수 있다. 또한, 키트는 용매를 포함할 수 있다. 약독화된 백신은 동결건조될 수 있고, 용매로 복원되어 주사 및/또는 흡입용 용액이 될 수 있다. 용매는 물, 생리식염수, 완충액 또는 보강 용매일 수 있다. 키트는 약독화된 바이러스, 용매 및/또는 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 분리 용기를 포함할 수 있다. 사용설명서는 하나 이상의 용기에 부착된 라벨 및/또는 인쇄물일 수 있다.

도 1은 가시성 폐렴에 걸린 폐 면적의 비율을 점수를 매겨 평가하는 방식을 도시한 도면이다.
도 2는 백신접종 그룹 및 백신 미접종 그룹에 속하는 돼지의 직장 온도를 비교한 그래프이다.
도 3은 PRRSV에 대한 각 그룹의 혈청 반응을 측정하기 위해 평균 그룹 ELISA S/P 비를 사용한, 백신접종 그룹 및 백신 미접종 그룹에 속하는 돼지의 평균 S/P 비를 비교한 그래프이다.
도 4는 백신접종된 그룹과 백신 미접종된 그룹의 돼지들의 호흡기 질환 점수를 기록한, 백신접종 및 백신 미접종 그룹에 속하는 돼지의 그룹 평균 임상 점수를 비교한 그래프이다.
도 5는 백신접종 그룹 및 백신 미접종 그룹에 속하는 돼지의 평균 1일 중량 증가(ADG)를 비교한 그래프이다.
도 6은 MLV-백신접종 돼지 및 백신 미접종/항원공격을 받은(challenged) 돼지에서 PRRSV RT-PCR 양성 혈청의 비율을 정리한 그래프이다.

정의

본 명세서에 사용된 용어들은 특정 양태들을 설명하기 위한 것이지, 제한하기 위한 것이 아니다. 본 명세서 및 특허청구범위에 사용된, 단수 표현은 분명한 다른 언급이 없는 한 복수 표현을 포함하는 것이다.

본원에 언급된 수치 범위에서, 이 범위 사이의 각각의 수는 동일한 정확도로 분명하게 고찰되어야 한다. 예를 들어, 6 내지 9의 범위에서, 7과 8은 6과 9 외에 고찰되어야 하고, 6.0 내지 7.0의 범위에서는 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9 및 7.0이 분명하게 고찰되어야 한다.

본 명세서에 사용된 "약독화된 바이러스"는 PRRS 질환의 임상 징후를 유발하지 않고 표적 포유동물에서 면역반응을 유발할 수 있는 무독성 바이러스를 의미하기도 하고, 또한 약독화된 바이러스로 감염되고 약독화된 바이러스를 투여받지 못한 동물에서 임상 징후의 빈도 또는 중증도가 비-약독화된 PRRS 바이러스로 감염된 "대조군" 동물에 비해 감소된 것을 의미하기도 한다. 이러한 상황에서, "감소/감소된"이란 용어는 앞에서 정의한 대조군에 비해 적어도 10%, 바람직하게는 25%, 더욱 바람직하게는 50%, 가장 바람직하게는 100% 이상의 감소를 의미한다.

본 명세서에 사용된 "면역원성 단편"은 PRRSV에 대한 세포 및/또는 항체-매개의 면역반응을 비롯하여 숙주에서 면역반응을 유발할 수 있는 PRRS 타입 II 바이러스의 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 핵산 서열의 일부를 의미할 수 있다.

본 명세서에서 2 이상의 폴리펩타이드 또는 뉴클레오타이드 서열의 상황에서 사용된 "동일한" 또는 "동일성"은, 서열이 특정 영역 상에서 동일한 뉴클레오타이드 또는 잔기의 특정 비율을 보유한다는 것을 의미할 수 있다. 비율은 두 서열을 최적 정렬 후, 특정 영역 사이에서 두 서열을 비교하고 두 서열에서 동일한 잔기가 나타나는 위치의 수를 측정하여 정합 위치의 수를 수득하고, 정합 위치의 수를 특정 영역의 총 위치의 수로 나눈 후, 그 결과에 100을 곱하여 서열 동일성 비율을 수득함으로써 계산할 수 있다. 두 서열이 길이가 다르거나 정렬이 하나 이상의 엇갈린 말단을 생산하고 특정 비교 영역이 한 서열만을 포함하는 경우에, 한 서열의 잔기는 계산식의 분자가 아닌 분모에 포함시킨다.

PRRS 분리주 ATCC VR-2332는 1992년 7월 7일에 부다페스트 조약에 의거하여 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)(American Type Culture Collection, Rockville, Maryland)에 기탁했고, 수탁번호 ATCC VR-2332를 부여받았다.

PRRS 분리주 VR-2495는 1995년 1월 28일에 부다페스트 조약에 의거하여 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)(American Type Culture Collection, Rockville, Maryland)에 기탁했고, 수탁번호 ATCC VR-2495를 부여받았다.

본 명세서에 사용된 "면역원성 조성물" 또는 "백신"은 PRRS 타입 II 바이러스(MLV 또는 사멸 바이러스) 또는 이의 임의의 면역원성 단편 또는 분획, 바람직하게는 약독화된 PRRS 타입 II 바이러스, 예컨대 Ingelvac PRRS MLV 또는 Ingelvac PRRS ATP를 함유하는 조성물을 의미하고, 이는 숙주의 "면역학적 반응"을 PRRSV에 대한 세포 및/또는 항체 매개의 면역 반응으로 유발한다. 면역원성 조성물은 PRRSV 감염 및 이와 관련된 임상 징후들에 대해 예방 면역을 부여할 수 있는 것이 바람직하다.

본 명세서에 사용된 "면역학적 반응 또는 면역 반응을 유발하기 위해"는 면역원성 조성물 또는 백신을 투여받은 동물에게 투여된 면역원성 조성물 또는 백신에 대한 임의의 세포- 및/또는 항체-매개의 면역 반응을 의미한다. 보통, "면역 반응"은 다음과 같은 효과 중 하나 이상을 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다: 당해 조성물 또는 백신에 포함된 항원 또는 항원들에 대해 특이적으로 유도된 항체, B 세포, 헬퍼 T 세포, 억제인자 T 세포 및/또는 세포독성 T 세포 및/또는 yd T 세포의 생산 또는 활성화. 숙주는 면역원성 조성물이나 백신을 투여받지 않은 대조군에 비해 새로운 감염에 대한 내성이 향상되고/되거나 질환의 임상 중증도가 감소되도록 치료적 또는 예방적 면역학적 반응을 나타내는 것이 바람직하다. 이러한 예방은 최대 전술한 숙주 감염과 관련된 증상들의 결여 및 이를 비롯하여 빈도 또는 중증도의 감소에 의해 증명될 것이다.

본 명세서에 사용된 "예방 면역"은 PRRS, 바람직하게는 HP PRRS 감염에 대한 동물 그룹의 내성을, PRRS, 바람직하게는 PRRS 타입 II 함유 면역원성 조성물 또는 백신을 투여받지 않고 HP PRRS로 감염된 동물 대조군에 비해 증강시키는 것을 의미한다. 본 명세서에 사용된 "내성 증강"이란 용어는 면역원성 조성물 또는 백신을 투여받지 않은 PRRS로 감염된 동물 그룹에 비해, 본 발명의 면역원성 조성물 또는 백신을 투여받은 동물의 10% 미만, 바람직하게는 20% 미만, 더욱 바람직하게는 30% 미만, 더 더욱 바람직하게는 40% 미만, 더 더욱 바람직하게는 50% 미만, 더 더욱 바람직하게는 75% 미만, 더 더욱 바람직하게는 100% 미만이, 바람직하게는 본 명세서에 기술된 HP PRRS에 의해 유발되는, 고열과 관련된 하나 이상의 임상 증상들을 발생시키는 것을 의미한다.

본 명세서에 사용된 "실질적으로 상보적인"은 제1 서열이 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 또는 그 이상의 뉴클레오타이드 영역 상에서 제2 서열의 상보체에 대해 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 것, 또는 두 서열이 엄중 하이브리드화 조건 하에 하이브리드화한다는 것을 의미할 수 있다.

본 명세서에 사용된 "실질적으로 동일한"은 제1 및 제2 서열이 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 또는 그 이상의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 영역 상에서 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 것, 또는 핵산인 경우, 제1 서열이 제2 서열의 상보체에 실질적으로 상보적인 것을 의미할 수 있다.

본 명세서에 사용된 "돼지들", "돼지" 및 "새끼돼지"는 호환 사용될 수 있다.

"백신접종하다"는 PRRS 또는 HP-PRRS의 고열 질환 형태에 노출되기 전에 본 명세서에 기술된 면역원성 조성물 또는 백신을 투여하는 것을 의미한다.

"예방하다" 또는 "예방"은 본 발명의 면역원성 조성물을 투여받은 결과로서 PRRS의 고열 질환 형태 또는 HP-PRRS 감염의 임상 징후의 중증도 또는 빈도가 감소하는 것을 의미한다. 중증도 또는 빈도의 감소는 본 발명의 면역원성 조성물을 투여받지 않은 동물 또는 동물 그룹과 비교한 결과이다.

바람직한 양태

이하 실시예에는 본 발명의 따라 바람직한 재료 및 절차를 설명한 것이다. 본 명세서에 기술된 것과 유사하거나 동등한 임의의 재료 및 방법이 본 발명의 실행 또는 검사에 사용될 수 있지만, 이하에는 바람직한 방법, 장치 및 재료가 설명된다. 하지만, 이러한 실시예들은 단지 예시적인 것으로 본 발명의 전체 범위를 제한하는 것으로 간주해서는 안 된다.

실시예

이하 실시예는 PRRSV 분리주 JX143의 높은 독성의 성질을 예시한다. Ingelvac® PRRS MLV-백신접종된 돼지는 고독성 PRRSV 바이러스주를 이용한 항원공격 후 백신 미접종 돼지에 비해, 100% 생존율, 훨씬 높은 항체 반응, 임상 PRRS 및 바이러스혈증의 낮은 비, 덜 심각한 폐 병변, 더 적고 더 경미하며 더 짧은 임상 징후 및 직장 온도가 높은 기간의 단축을 나타낸다.

1. 재료 및 방법

1.1 백신 및 바이러스

Ingelvac® PRRS MLV 백신(일련번호 JA-A64A-149)은 베링거 잉겔하임 베트메디카에서 입수했다. 고독성 PRRSV 분리주 JX143은 Shanghai Veterinary Research Institute에서 분리했다. PRRSV JX143 조직 배양물(105.2TCID50/ml)은 돼지 접종을 위해 DMEM으로 5배 희석했다.

1.2 프라이머 및 시약

역전사 폴리머라제 및 DNA 래더(ladder)는 Tiangen 바이오테크놀로지 컴패니에서 구입했다. 2xPCR 혼합물은 Dongsheng 컴패니에서 입수했다. Trizol® 및 프라이머는 Invitrogen 컴패니에서 입수했다.

1.3 동물 급원 및 그룹화

실험을 위해 29일령 50마리 돼지를 Henan Muyuan 사육 돼지 농장에서 구입했다. 이들은 도착 시 수집한 혈청 샘플을 가지고 각각 3회 검사를 실시하여 RT-PCR(PRRSV 및 PCV 2의 경우) 및 ELISA(항-PRRSV 키트, IDEXX Laboratory, Inc.)에 의해 PRRSV 및 PCV2 음성인 것을 확인했다. 돼지의 체중을 측정하고 각각 22마리, 14마리 및 14마리의 돼지를 포함하는 그룹 1, 2 및 3으로 무작위로 분류했다. 그 후, 돼지는 그룹마다 다른 방에 수용했다.

1.4 백신접종 및 바이러스 항원공격

그룹 1의 22마리 돼지(V/C)에게는 2ml 1회 용량의 Ingelvac® PRRS MLV 백신을 근육내로 0일째 백신접종했다. 그룹 2의 14마리 돼지(비-V/C)에는 0일째 2ml PBS를 주입했다. 그룹 1과 그룹 2 돼지들에게 항원공격은 28일째 3ml 희석된 PRRSV JX143을 비내 투여하여 실시했다. 그룹 3의 돼지(비-V/비-C)에게는 백신접종도 항원공격도 하지 않은 엄중한 음성 대조군으로 사용했고, 28일째 3ml DMEM을 주사했다. 그룹당 돼지 2마리를 14일과 42일째 각각 관찰하기 위해 부검했다. 나머지 돼지들은 49일째 부검했다.

1.5 직장 온도

직장 온도는 0일부터 49일까지(항원공격 후 21일까지) 매일 동일한 시간에 기록했다.

1.6 혈청학

혈청은 모든 돼지로부터 0일, 7일, 14일, 21일, 28일, 32일, 42일 및 49일에 수집하고, IDEXX PRRSV ELISA 키트를 이용해 항-PRRSV 항체에 대해 검사했다.

1.7 임상 평가

돼지는 0일부터 49일까지 매일 모니터하고 행동 변화 및 임상적 호흡 징후, 예컨대 호흡 및 기침의 중증도에 대해 채점했다. 임상 징후의 채점 시스템은 표 2에 제시했다.

^* 호흡: 점수 2(경미)는 자극했을 때 표재성 호흡, 콧물, 복부의 "쿵쿵거리는" 호흡에 해당한다. 점수 3(중증)은 빠른 표재성 호흡, 콧물, 입벌림 호흡, 복부 "쿵쿵거리는" 호흡에 해당한다.

^* 행동: 1. 입, 코, 귀 피부 및 다리 안쪽이 붉고, 울혈, 붉은 반점, 구진. 2. 우울, 거친 모발. 3. 식욕부진 4. 절름발이, 떨림, 경련. 5. 쇠약. 점수 2는 전술한 증상 중 하나 또는 2가지 항목에 해당한다. 점수 3은 전술한 증상 중 3가지 항목 또는 그 이상의 증상에 해당한다.

^* 기침: 점수 2는 비-습성 기침에 해당한다. 점수 3은 습성 기침에 해당한다.

1.8 생산성 평가

전체 돼지의 체중은 0일(백신접종 전), 28일(항원공격 전), 49일(항원공격 후 21일째)에 기록했다.

1.9 Ingelvac® PRRS MLV의 효능은 항원공격 대조군 및 음성 대조군과 비교하여, 백신접종된 돼지의 항원공격 후 임상 징후, 폐 병변 점수 및 직장 온도를 측정하여 평가했다. 돼지는 1) 3일 이상 동안 높은 직장 온도(41℃), 2) 우울, 식욕부진, 결막염, 기침, 호흡기 질환, 및 3) 폐렴이 분명할 때 PRRS에 임상적으로-감염된 것으로 간주했다.

1.10 폐 병변

부검은 49일째(PRRSV 항원공격 후 21일째)에 수행했다. 각 돼지마다, 폐는 맹검 방식으로 가시성 폐렴(부종, 울혈, 출혈, 충실하고 딱딱한 섬유성 구조)에 걸린 부위의 비율(0 내지 100%)에 대해 평가했다.

1.11 PRRSV RNA 검출 및 정량분석

혈청은 0일, 7일, 14일, 21일, 28일, 32일, 35일, 42일째 그룹 1(V/C)의 돼지 및 28일, 32일, 35일 및 42일째 그룹 2(비-V/C)의 돼지로부터 수집했다. 각 혈청 샘플 140㎕로부터 RNA 추출은 QIAamp 바이러스 RNA 미니 키트(QIAGEN)를 이용하여 수행했다. 그 다음, RT-PCR은 PRRSV RNA(Genbank)의 보존적 영역에 특이적인 프라임-프로브(Invitrogen) 조합(표 1)을 이용하여 수행했다.

각 RT 반응물은 RNA 주형 12.5㎕, dNTP 4㎕, 10x 완충액 2㎕, 프라이머 Qst 0.5㎕ 및 Quant 역전사효소 1㎕로 구성되었다. 이 혼합물은 37℃ 수조에서 1시간 동안 항온처리하고 -20℃에서 보관했다. 그 다음, RT 반응물 1㎕, SF14413 및 SR1549 프라이머 각각 1㎕, 10x 완충액 2㎕, dNTP 2㎕, rTaq 폴리머라제 5 유닛 및 총 용적을 20㎕로 채우는 물을 이용하여 수행했다. 반응 평판은 특정 조건(94℃에서 5분; 그 다음 94℃ 30초, 65℃ 30초, 72℃ 75초 40회, 마지막 72℃ 10분) 하에 서열 검출 시스템에서 진행시켰다. PCR 증폭된 단편은 아가로스 겔로 분리하고 자외선 하에 검출했다.

1.12 PRRSV 항원 검출을 위한 면역조직화학

PRRSV-특이적 항원을 검출하기 위한 면역조직화학은 부검 후 48시간 이내에 만든 포르말린-고정 및 파라핀-포매된 폐 조직 절편에 대해 PRRSV 항-N-단백질 모노클로날 항체(SR30 또는 SDOW17) 및 2차 접합 항체를 이용하여 수행했다.

2. 결과

2.1 항원공격 후 직장 온도 변화

고독성 PRRSV JX143을 접종한 후, 백신접종 그룹 및 백신 미접종 그룹의 돼지의 직장 온도는 빠르게 상승했다. 최고 온도는 41℃였고, 돼지의 75%가 항원공격 바이러스를 접종한 직후 열이 났다. 직장 온도는 백신접종 돼지의 경우 10일 이내에 항원공격전 수준으로 떨어지고, 비-V/C 그룹의 돼지는 더 오랜 기간 열이 났고 증가된 직장 온도가 훨씬 길게 유지되었다(도 2).

2.2 혈청학적 반응

평균 그룹 ELISA S/P 반응을 이용하여 PRRSV에 대한 각 그룹의 혈청학적 반응을 측정했다(도 3). 음성 대조군의 돼지는 전체 연구 동안 PRRSV 항체에 대해 음성을 유지했다. V/C 그룹에서, 항체는 백신접종 후 10 내지 14일째 처음 검출되었고, S/P 비 ≥0.4는 접종(p.i) 후 14일째 나타냈으며, 돼지 20마리 중 8마리가 양성이었고, p.i. 21일째 돼지 20마리 중 13마리가 V/C 그룹에서 양성이었다. V/C 그룹 중의 최고 S/P 비는 항원공격 후 관찰되었고, 연구 마지막까지 높게 유지되었다(ELISA S/P 약 2). 비-V/C 돼지는 항원공격 후 빠르게 혈청전환되었고; p.i. 7일째 돼지 12마리 중 9마리가 S/P 비가 ≥0.4인 양성이었다.

2.3 임상 징후

V/C 그룹 및 비-V/C 그룹의 호흡기 질환 점수를 기록했다(도 4). 항원공격 후, V/C 그룹의 돼지 20마리 중 5마리는 호흡기 징후 및 기침을 나타냈고, 2마리는 복부 "쿵쿵거리는" 호흡을 나타냈다. 비-V/C 그룹의 돼지 12마리 중 8마리는 p.i. 21일 전에 사망했고, 비-V/C 그룹의 나머지 돼지는 중증 호흡기 징후와 기침을 복부 "쿵쿵거리는" 호흡과 함께 나타냈다. 비-V/C 돼지는 10일 동안 연속해서 6 이상으로 채점되었고, 최고 점수는 7에 이르렀다. V/C 돼지는 유의적인 임상 징후를 나타내지 않았고 이들의 높은 평균 점수는 연속 7일 동안 4-5 범위였다. 엄격한 음성 대조군으로서, 비-V/비-C 돼지는 임상 징후를 전혀 나타내지 않았고, 평균 점수는 3(정상)이었다.

2.4 항원공격 전 및 항원공격 후의 평균 1일 체중 증가

평균 1일 체중 증가(ADG)는 도 5에 정리했다. 0일부터 28일까지, ADG는 백신접종 돼지(0.3301±0.0414Kg)와 백신 미접종 돼지(0.3008±0.0653Kg) 사이에 크게 다르지 않았다. 28일(항원공격 전일)부터 49일까지, 백신접종된 돼지는 비-V/비-C 대조군 돼지(0.3373±0.0800kg 대 0.3484±0.0890kg)와 유사한 ADG를 나타낸 반면, 비-V/C 돼지는 분명하게 훨씬 낮은 ADG(0.0392±0.2398)를 나타냈다.

2.5 백신접종 효능

항원공격 후, MLV-백신접종한 돼지는 항원공격 직후 평균 임상 징후 점수가 5인 임상 징후를 나타냈고, 돼지 3마리 이상이 높은 직장 온도(41℃) 및 폐 병변을 나타냈다. 방법 섹션에서 언급한 기준에 의해 정의되는 것처럼, MLV-백신접종한 돼지의 25%(5/20)는 PRRS를 나타냈고, 75%(15/20)는 예방되었다. 이에 반해, 백신 미접종 돼지 전부는 항원공격 후 PRRS를 나타냈고, 돼지 8마리는 부검 전에 사망했다.

2.6 육안 병변

부검 시, 비-V/C 그룹에서 생존한 돼지 4마리는 육안 병변, 예컨대 폐 손상/허탈, 황갈색 반점, 울혈, 서혜부 림프, 턱, 장간막 부종 및 울혈, 및 일부 간 괴사 등을 나타냈다. V/C 그룹의 몇몇 돼지는 유사하지만 훨씬 심하지 않은 병변을 나타냈다. 비-V/비-C 대조군 돼지는 육안 병변을 나타내지 않았다.

2.7 육안 폐 병변 점수

MLV-백신접종 돼지의 육안 폐 병변 점수는 비-V/C 돼지보다 훨씬 낮아서, MLV가 고병원성 PRRSV 접종에 대해 양호한 예방효과를 제공한다는 것을 시사했다(표 4, 여기서, 육안적 폐 병변 빈도의 범위는 0 내지 100%이다).

2.8 바이러스혈증 검출

PRRSV RT-PCR 양성 혈청의 비율은 도 6에 정리했다. 바이러스혈증은 백신접종 후 7일째 MLV-백신접종 돼지의 60%에서 검출되었고, 이는 항원공격 전에 20%까지 감소했다. 항원공격 후, 백신접종 돼지의 70%는 바이러스혈청을 나타냈고, 이는 p.i. 7일째 60%까지 감소했고 p.i. 21일째 20%가 바이러스혈증이었다. 이에 반해, 비-V/C 돼지의 100%는 항원공격 후 바이러스혈증이었고, 항원공격 후 바이러스혈증은 높게 유지되었고, 비-V/C 돼지의 70%가 항원공격 후 21일째 바이러스혈증이었다.

2.9 면역조직화학에 의한 항원 검출

현미경적 폐 병변은 현미경으로 관찰했다. PRRSV-감염 세포는 항원공격을 받은 모든 돼지에서 관찰되었다. MLV-V/C 돼지는 더 적은 PRRSV-감염 세포를 나타냈다. 총 세포 수 및 PRRSV-감염 세포 수는 여러 부위에서 기록했다. 세포 감염 비는 그룹마다 크게 달랐다: 비-V/C 돼지는 23.34±4.691, V/C 돼지는 9.36±8.069, 비-V/비-C 돼지는 0.24±0.114 (표 5).

아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)

VR02332

19910718

아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)

VR02495

19950128

<110> Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. <120> Vaccine against highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome (HP PRRS) <130> P10-0115/WO/1 <150> US 61/091,614 <151> 2008-08-25 <160> 3 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 15373 <212> DNA <213> PRRS Virus Strain JX143 <400> 1 atgacgtata ggtgttggct ctatgccacg gcatttgtat tgtcaggagc tgtgaccatt 60 ggcacagccc aaaacttgct gcacgggaac accctcctgt gacagccctc ttcaggggga 120 ttaggggtct gtccctaaca ccttgcttcc ggagttgcac tgttttacgg tctctccacc 180 cctttaacca tgtctgggat acttgatcgg tgcacgtgta cccccaatgc tagggtgttt 240 gtggcggagg gccaggtcta ctgcacacga tgtctcagtg cacggtctct ccttcctctg 300 aatctccaag ttcctgagct tggggtgctg ggtctatttt ataggcccga agagccactc 360 cggtggacgt tgccacgtgc attccccact gtcgagtgct cccccgccgg ggcctgttgg 420 ctttctgcga tttttccgat tgcacgaatg actagtggaa acctgaactt tcaacaaaga 480 atggtgcggg tcgcagctga aatctacaga cccggccaac tcacccctac agttctaaag 540 actctacaag tttatgaacg gggttgtcgc tggtacccca ttgtcgggcc cgtccctggg 600 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gcacatggtg ctcagttact tcaaaagtgg tcaccctcat ggccttctgt 9060 ttctgcaaga ccagctaaag tttgaggaca tgctcaaggt tcaacccctg atcgtctatt 9120 cggacgacct tgtgctgtat gccgagtctc cctccatgcc aaactaccac tggtgggttg 9180 aacatctgaa tcttatgctg ggtttccaga cggacccaaa gaagacaacc atcacagact 9240 caccatcatt cctaggttgc aggataataa atgggcgcca gctagtccct aaccgtgaca 9300 ggatcctcgc ggccctcgcc taccacatga aggcaagtaa tgtttctgaa tactacgcct 9360 cggcggctgc aatactcatg gacagctgtg cttgtttaga gtatgatcct gaatggtttg 9420 aagagctcgt ggttgggatg gcgcagtgcg cccgcaagga cggctacagc tttcctggcc 9480 caccgttctt cttgtccatg tgggaaaaac tcaggtccaa tcatgagggg aagaagtcca 9540 gaatgtgcgg gtactgcggg gccccggctc cgtacgccac tgcctgtggt ctcgatgtct 9600 gtgtttacca cacccacttc caccagcatt gtcctgttat aatctggtgt ggccacccgg 9660 cgggttctgg ttcttgtagt gagtgcgaac cccccctagg aaaaggcaca agccctctag 9720 atgaggtgtt agaacaagtt ccgtacaagc ctccgcggac tgtgatcatg catgtggagc 9780 agggtctcac ccctcttgac ccaggtagat accagactcg ccgcggatta gtctccgtta 9840 ggcgtggcat taggggaaat gaagtcgacc taccagacgg tgattacgct agcaccgcct 9900 tgctccctac ttgtaaagag atcaacatgg tcgctgtcgc ctctaacgtg ttgcgcagca 9960 ggtttatcat cggcccaccc ggtgctggga aaacacactg gcttcttcaa caagtccagg 10020 atggtgatgt catttacacg ccaactcacc agaccatgct cgacatgatt agggctttgg 10080 ggacgtgccg gttcaacgtt ccagcaggta caacgctgca attccctgcc ccctcccgta 10140 ccggcccatg ggttcgcatc ttggccggcg gttggtgtcc tggcaagaac tccttcctgg 10200 atgaagcggc gtattgcaat caccttgatg tcttgaggct tctcagtaaa acaactctca 10260 cttgcctagg agacttcaaa caactccacc ctgtgggttt tgactcccat tgctatgtat 10320 ttgacatcat gcctcagacc caattaaaga ccatctggag gttcgggcag aatatctgtg 10380 atgccattca accagattac agggacaaac ttatgtccat ggtcaacacg acccgtgtga 10440 cctacgtgga aaaacctgtc aggtatgggc aagtcctcac cccctaccac agggaccgag 10500 aggacggcgc cattactatc gactccagtc aaggcgccac atttgatgtg gttacactgc 10560 atttgcccac taaagattca ctcaacaggc aaagagctct tgttgctatc accagggcaa 10620 gacatgctat cttcgtgtat gacccacaca ggcaattgca gagcatgttt gatcttcccg 10680 cgaaaggcac acccgtcaac ctcgcagtgc accgtgacga acagctgatc gtattagaca 10740 gaaacaacag agaaatcacg gttgctcagg ctctaggcaa tggagataaa ttcagggcca 10800 cagataagcg cgttgtagat tctctccgcg ctatttgcgc agacctggaa gggtcgagct 10860 ccccgctccc caaggtcgcg cataacttgg gattctattt ctcacctgat ttgactcagt 10920 ttgctaaact cccggcagaa cttgcgcccc actggcccgt ggtgacaacc cagaacaatg 10980 aaaggtggcc agatcggctg gtagccagcc ttcgccctat ccataaatat agccgcgcgt 11040 gcattggtgc cggctatatg gtgggcccct cggtgttttt aggcacccct ggggttgtgt 11100 catactatct cacaaaattt gttagaggcg aggctcaagt gcttccggag acagtcttca 11160 gcaccggccg aattgaggta gattgtcgag agtatcttga tgatcgggag cgagaagttg 11220 ctgagtccct cccacatgcc ttcatcggcg atgtcaaagg taccaccgtt gggggatgtc 11280 atcacgttac ctccaaatac cttccgcgct tccttcccaa ggaatcagtt gcggtggtcg 11340 gggtttcgag ccccgggaaa gccgcgaaag cagtttgcac attgacggat gtgtacctcc 11400 cagaccttga agcgtacctc cacccagaga cccagtccag gtgctggaaa gtgatgttgg 11460 actttaagga ggttcgactg atggtatgga aagacaagac ggcctatttt caacttgaag 11520 gccgccattt tacctggtat caacttgcaa gctacgcctc atacatccga gttcctgtta 11580 attctactgt gtacttggac ccctgcatgg gccctgctct ttgcaacaga agggttgtcg 11640 ggtccaccca ttggggagct gacctcgcag tcacccctta tgattacggt gccaaaatta 11700 ttctgtctag tgcataccat ggtgaaatgc ctccaggtta caaaattctg gcgtgcgcgg 11760 agttctcgct tgatgaccca gtaaggtaca aacacacctg gggatttgaa tcggatacag 11820 cgtatctgta cgagtttact ggaaatggtg aggactggga ggattacaat gatgcgtttc 11880 gggcgcgcca gaaagggaaa atttataaag ctaatgccac cagcatgagg tttcattttc 11940 ccccgggccc tgtcattgaa ccaactttag gcctgaattg aaatgaaatg gggtctatgc 12000 aaagcctctt tgacaaaatt ggccaacttt ttgtggatgc tttcacggaa tttctggtgt 12060 ccattgttga tatcatcata tttttggcca ttttgtttgg cttcacaatc gccggttggc 12120 tggtggtctt atgcatcaga ctggtttgct ccgcggtact ccgtgcgcgc tctaccgttc 12180 accctgagca attacagaag atcttatgag gcctttcttt ctcagtgtca ggtggacatt 12240 cccacctggg gcgtcaaaca ccctttgggg gtgctttggc accataaggt gtcaaccctg 12300 attgatgaaa tggtgtcgcg tcgaatgtac cgcatcatgg aaaaagcagg gcaggctgcc 12360 tggaaacagg tggtgagcga ggctacattg tctcgcatta gtggtttgga tgtggtggct 12420 cactttcaac atcttgccgc tattgaagcc gagacttgta aatatttggc ctcccggcta 12480 cccatgctgc acaacctgcg cttgacaggg tcaaatgtaa ccatagtgta taatagtact 12540 ttggatcagg tgtttgccat tttcccaacc cctggttccc ggccaaagct tcatgatttt 12600 cagcaatggc taatagctgt acattcctcc atattttctt ccgttgcagc ttcttgtact 12660 ctttttgttg tgctgtggtt gcgaattcca atgctacgtt ctgtttttgg tttccgctgg 12720 ttaggggcaa cttttctttt gaactcatgg tgaattacac ggtatgcccg ctttgcccaa 12780 cccggcaggc agccgctgag atccttgaac ccggcaagtc tttttggtgc aggatagggc 12840 atgaccgatg tagtgagaac gatcatgacg aactagggtt catggttccg cctggccttt 12900 ccagcgaagg ccacttgacc agtgtttacg cctggttggc gttcctgtcc ttcagctaca 12960 cggcccagtt ccatcccgag atatttggga tagggaatgt gagtcaagtt tatgttgaca 13020 tcaagcacca attcatctgc gctgttcacg acggggataa cgccaccttg cctcgccatg 13080 acaatatttc agccgtattt cagacctact accaacacca ggtcgacggc ggcaattggt 13140 ttcacctgga atggctgcgc cctttctttt cctcttggtt ggttttaaat gtttcgtggt 13200 ttctcaggcg ttcgcctgca aaccatgttt cagttcgagt ctttcggaca tcaaaaccaa 13260 caccaccgca gcatcagact tcgttgtcct ccaggacatc agctgcctta ggcatggcga 13320 ctcgtcctct ccgacgattc gcaaaagttc tcagtgccgc acggcgatag ggacgcccgt 13380 gtacatcacc atcactgcca atgtcacaga tgaaaattat ctacattctt ctgatctcct 13440 catgctttct tcttgccttt tctatgcttc cgagatgagt gaaaagggat tcaaagtggt 13500 gtttggcaat gtgtcaggca tcgtggctgt gtgcgtcaac tttaccagct acgtccaaca 13560 cgtcaaggag tttacccaac gctccttagt ggtcgatcat gtgcgactgc ttcatttcat 13620 gacacctgag accatgaggt gggcaaccgt tttagcctgt ctttttgcca tcctactggc 13680 aatttgaatg tttaagtatg ttggggaagt gcttgaccgc gtgctgttgc tcgcgattgc 13740 tttttttgtg gtgtatcgtg ccgttctatc ttgctgtgct cgtcaacgcc agcaacaaca 13800 acagctctca tattcagttg atttataact taacgctatg tgagctgaat ggcacagatt 13860 ggctggcaca aaaatttgac tgggcagtgg agacttttgt catcttcccc gtgttgactc 13920 acattgtttc ctatggggca ctcaccacca gccatttcct tgacacagtt ggtctggcca 13980 ctgtgtccac cgccggatat tatcacgggc ggtatgtctt gagtagcatt tacgcagtct 14040 gtgctctggc tgcgctgatt tgctttgtca ttaggcttgc gaagaactgc atgtcctggc 14100 gctactcttg taccagatat accaacttcc ttctggacac taagggcaga ctctatcgtt 14160 ggcggtcgcc cgtcattgtg gagaaagggg gtaaggttga ggtcgaaggt cacctgatcg 14220 acctcaagag agttgtgctt gatggttccg cggcaacccc tttaaccaga gtttcagcgg 14280 aacaatgggg tcgtctctag acgacttctg caatgatagc acagctccac agaaggtgct 14340 tttggcgttt tccattacct acacgccagt gatgatatat gctctaaagg taagtcgcgg 14400 ccgactgcta gggcttctgc accttttgat ctttctgaat tgtgctttta ccttcgggta 14460 catgacattc gtgcactttg agagcacaaa tagggtcgcg ctcactatgg gagcagtagt 14520 tgcacttctt tggggagtgt actcagccat agaaacctgg aaattcatca cctccagatg 14580 ccgtttgtgc ttgctaggcc gcaagtacat tctggcccct gcccaccacg tcgaaagtgc 14640 cgcgggcttt catccgattg cggcaaatga taaccacgca tttgtcgtcc ggcgtcccgg 14700 ctccactacg gtcaacggca cattggtgcc cgggttgaaa agcctcgtgt tgggtggcag 14760 aaaagctgtt aagcagggag tggtaaacct tgttaaatat gccaaataac aacggcaagc 14820 agcaaaagaa 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Claims

PRRS 타입 II 바이러스의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물을 돼지에게 투여함을 포함하여, PRRS의 고열 질환 형태의 영향에 대하여 돼지에게 백신접종하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 PRRS의 고열 질환 형태가 HB-1 또는 JX143의 핵산 서열과 적어도 95% 상동성인 핵산 서열을 보유한 중국 PRRSV 유래인 방법.
제1항에 있어서, 상기 고열 질환 형태가 HP PRRS 바이러스에 의해 유발된 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 PRRS 타입 II 바이러스가 약독화된 것인 방법.
제3항에 있어서, 상기 PRRS 타입 II 바이러스가 수탁번호 ATCC VR-2332의 바이러스주의 약독화된 형태 또는 이의 후손임을 특징으로 하는 방법.
제4항에 있어서, 상기 PRRS 타입 II 바이러스가 수탁번호 ATCC VR-2495의 바이러스주 또는 이의 후손임을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 중국 PRRSV 바이러스주가 AH-1; AHCFSH; AHCFZC; BB07; BD-8; BQ07; CL07; CX07; CZ07; FY060915; FY080108; GC-2; GCH-3; GD1; GD2; GD2007; GD3; GD4; GDSD1; GDY1-2007; GDY2-2007; GDYF1; GS2008; GXHZ12; GXHZ13; GXHZ14; GXHZ16; GXHZ19; GXHZ2; GXHZ21; GXHZ4; GXLZ5; GXLZ7; GY; GZCJ; GZDJ; GZHW1; GZHW2; GZHX; GZJS; GZKB; GZKY; GZLJ1; GZWB; GZWM; GZZB; Hainan-1; Hainan-2; HB1; HB2; HB3; HB-Tsh1; HB-Xt1; HEN46; HeN-KF; HeN-LH; HeN-LY; HLJDF; HLJMZ1; HLJMZ2; HLJMZ3; HLJZY; HM-1; HN2; HN2007; HN3; HNId; HNIy; HNLY01; HNNX01; HNPJ01; HNsp; HNXT1; HNyy; HNyz; HQ-5; HQ-6; HUB; HuN; HUN1; HUN11; HUN15; HUN16; HUN17; HUN2; HUN3; HUN4; HUN5; HUN6; HUN7; Hunan-1; Hunan-2; Hunan-3; HUNH2; HUNH4; HuNhI; HUNL1; HUNX4; HZ061226; HZ070105; Jiangsu-1; Jiangsu-2; Jiangsu-3; Jiangxi-2; Jiangxi-4; JLYS; JN; JX1; JX143; JX2; JX-2; JX2006; JX3; JX4; JX5; JXA1; KS06; LC07; LJ; LS06; LS-4; LY07; NB070319; SC07; SD; SD14; SDWF2; SH02; ST-7; SX2007; SY0608; TJDMJ; TJZHJ2; TJZHJ3; TQ; TQ07; TWO7; WF07; XJ07; XL2008; YN2008; YNBS; YNDL; YNMG; YNWS; YNYS; YNYX1; YNYX3; ZJ06; ZJCJ; ZJWL; ZX07; 및 ZS070921로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 보강제를 추가로 포함하는 방법.
PRRS 타입 II 바이러스의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물을 돼지에게 투여함을 포함하여, PRRS 바이러스 JX143의 고열 질환 형태의 영향에 대하여 돼지에게 백신접종하는 방법.
PRRS 타입 II 바이러스의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물을 PRRS의 고열 질환 형태의 임상 징후의 빈도 또는 중증도의 경감을 필요로 하는 돼지에게 투여함을 포함하여, PRRS의 고열 질환 형태의 임상 징후의 빈도 또는 중증도를 경감시키는 방법.
PRRS 타입 II 바이러스의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물을 PRRS의 고열 질환 형태의 임상 징후의 빈도 또는 중증도의 경감을 필요로 하는 돼지에게 투여함을 포함하여, PRRS의 고열 질환 형태의 임상 징후의 빈도 또는 중증도를 경감시키는 방법으로서, 상기 PRRS의 고열 질환 형태가 HB-1 또는 JX143의 핵산 서열과 적어도 95% 상동성인 핵산 서열을 보유한 중국 PRRSV 유래인 방법.
PRRS 타입 II 바이러스의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물을 돼지에게 투여함을 포함하여, PRRS의 고열 질환 형태의 영향에 대하여 돼지에게 백신접종하기 위한 PRRS 타입 II 바이러스의 용도.
제12항에 있어서, 상기 PRRS의 고열 질환 형태가 HB-1 또는 JX143의 핵산 서열과 적어도 95% 상동성인 핵산 서열을 보유한 중국 PRRSV 유래인 용도.
PRRS 타입 II 바이러스의 유효량을 포함하는 면역원성 조성물을 돼지에게 투여함을 포함하여 PRRS의 고열 질환 형태의 영향에 대하여 돼지에게 백신접종하기 위한 약제학적 조성물의 제조를 위한 PRRS 타입 II 바이러스의 용도.
제14항에 있어서, 상기 PRRS의 고열 질환 형태가 HB-1 또는 JX143의 핵산 서열과 적어도 95% 상동성인 핵산 서열을 보유한 중국 PRRSV 유래인 용도.