KR20110038569A

KR20110038569A - 인간 유래 성체 줄기세포를 함유하는 항암용 조성물

Info

Publication number: KR20110038569A
Application number: KR1020100031786A
Authority: KR
Inventors: 라정찬; 강성근; 우상규; 윤화영; 이희우; 서경원
Original assignee: 주식회사 알앤엘바이오
Priority date: 2009-10-08
Filing date: 2010-04-07
Publication date: 2011-04-14
Also published as: WO2011043524A1; US20120263685A1

Abstract

본 발명은 인간 유래 성체 줄기세포 및 이의 분비물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 함유하는 암 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 특히, 면역체계 활성을 통한 암(종양) 질환 예방 또는 치료의 효과를 나타내는 성체 줄기세포의 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따른 인간 유래 성체 줄기세포 용도는 정맥 투여 등의 간단한 방법으로 다양한 암 질환에 대한 세포치료제로서의 가치가 높으므로 항암 연구에 크게 유용하다.

Description

인간 유래 성체 줄기세포를 함유하는 항암용 조성물{Anti-tumor Composition comprising a Human-derived Adult Stem Cells}

본 발명은 인간 유래 성체 줄기세포 및 이의 분비물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 함유하는 암 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 인간 유래 성체 줄기세포 및 이의 분비물에 의해 암(종양)세포에 따른 케모카인의 발현을 억제시키고 면역체계를 활성화시키는, 성체 줄기세포의 신규 용도에 관한 것이다.

줄기세포(stem cell)란 자기 복제 능력을 가지면서 두 개 이상의 세포로 분화하는 능력을 갖는 세포를 말하며, 만능 줄기세포(totipotent stem cell), 전분화능 줄기세포(pluripotent stem cell), 다분화능 줄기세포(multipotent stem cell)로 분류할 수 있다.

만능 줄기세포(totipotent stem cell)는 하나의 완전한 개체로 발생해 나갈 수 있는 만능의 성질을 가진 세포로 난자와 정자의 수정 이후 8세포기까지의 세포가 이러한 성질을 가지며 이 세포를 분리하여 자궁에 이식하면 하나의 완전한 개체로 발생해 나갈 수 있다. 전분화능 줄기세포(pluripotent stem cell)는 외배엽, 중배엽, 내배엽층 유래의 다양한 세포와 조직으로 발생할 수 있는 세포로서, 수정 4~5일 후 나타나는 배반포(blastocyst)의 안쪽에 위치한 내세포괴(inner cell mass)에서 유래하며, 이를 배아 줄기 세포라 하며 다양한 다른 조직 세포로 분화되지만 새로운 생명체를 형성하지는 못한다. 다분화능(또는 다능성) 줄기세포(multipotent stem cell)는 이 세포가 포함되어 있는 조직 및 기관에 특이적인 세포로만 분화할 수 있는 줄기세포로서, 태아기, 신생아기 및 성체기의 각 조직 및 장기의 성장과 발달은 물론 성체조직의 항상성 유지와 조직손상 시 재생을 유도하는 기능에 관여하고 있으며 조직 특이적 다능성 세포들을 총칭하여 성체 줄기세포라 한다.

성체 줄기세포는 인체의 각종 장기에 이미 존재하는 세포를 채취, 줄기세포를 발전시킨 것으로 특정 조직으로만 분화되는 특징이 있다. 그러나 최근에는 성체 줄기세포를 이용, 간세포 등 각종 여러 조직으로 분화시키는 실험이 성공을 거두고 있어 주목된다.

한편, "암"이란 '제어되지 않은 세포성장'으로 특징지어지며, 이러한 비정상적인 세포성장에 의해 종양(tumor)이라고 불리는 세포 덩어리가 형성되어 주위의 조직으로 침투하고 심한 경우에는 신체의 다른 기관으로 전이되기도 한다. 학문적으로는 신생물(neoplasia)이라고도 불린다.

상기 암을 치료하기 위한 방법으로는 수술요법, 방사선 요법 및 항암제를 투여하는 화학요법 등이 있다. 항암제는 무제한 증식하는 암세포에 작용하여 암세포의 증식과 성장을 억제시키는 약물이다. 현재 널리 사용되고 있는 시스플라틴(cisplatin)이나, 사이크로포스파미드(cyclophosphamide) 등과 같은 알킬화 항암제는 DNA의 구성성분인 뉴클레오타이드 내의 질소와 공유결합하여 항암작용을 나타내며, 5-프루오로우라실(5-fluorouracil)은 핵산의 생합성에 관여하는 효소들을 억제하거나, DNA 혹은 RNA에 직접 삽입되어 활성을 나타내게 된다. 또한 아드리아마이신(adriamycin) 등의 항생물질(antibiotics)들은 DNA에 강력하게 작용하여 DNA 고유의 기능을 억제하여 항암 효과를 나타낸다. 그러나, 이들 항암제는 종양세포뿐만 아니라 정상세포 특히, 생체세포 중에서 빠른 증식과 분화를 하는 골수전구세포(bone marrow cells)나 장관상피세포(intestinal epitherium cell)에도 작용하여 신중독증, 구토 및 신경독성 등의 여러가지 부작용을 수반하는 단점이 있다. 이에 새로운 암 치료법으로 기대를 모으고 있는 치료방식이 우리 몸 자체의 면역기능을 이용한 면역요법이다.

줄기세포를 이용한 항암치료와 관련하여서는, 줄기세포를 이식하여 T세포 활성을 도모한 미국 등록특허 6210668호, 자가 줄기세포 이식을 기재한 미국 등록특허 5843435호, allogeneic 줄기세포 이식을 기재한 미국 등록특허 6143292호, 자살 유전자를 발현하는 중간엽 줄기세포를 함유하는 항암용 조성물에 관한 미국 공개특허 2008-0241115호등이 있으나, 아직 정맥 투여된 성체 줄기세포의 면역체계 활성을 통한 암 예방 또는 치료효과에 대한 보고는 없다.

이에 본 발명자들은 지방 중간엽 줄기세포를 흑색종을 앓고 있는 마우스에 정맥투여한 후 종양세포의 크기가 현저하게 줄어드는 것을 관찰하고, 추가로 암 환자의 혈액에서 추출한 면역세포에 지방 중간엽 줄기세포를 처리하면 면역세포의 증식률이 현저하게 증가함을 관찰함으로써, 줄기세포의 면역체계 활성화에 따른 암 예방 또는 치료효과를 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 인간 유래 성체 줄기세포 및 이의 분비물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 함유하는, 암 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 인간 유래 성체 줄기세포 및 이의 분비물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 함유하는, 면역체계 활성용 조성물을 제공하는데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 인간 유래 성체 줄기세포 및 이의 분비물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 함유하는 암 예방 또는 치료용 조성물, 또는 면역체계 활성용 조성물을 제공한다.

이 때, 상기 성체 줄기세포는 지방, 자궁, 골수, 근육, 태반, 제대혈, 모낭 및 피부로 구성된 군에서 선택된 조직 유래일 수 있고, 특히 바람직하게는 지방조직, 예를 들어 인간 지방 조직 유래 중간엽 줄기세포(Human adipose tissue-derived mesenchymal stem cell, AT-MSCs)일 수 있다.

또한, 상기 인간 유래 성체 줄기세포 분비물은 예를 들어, TGF, bFGF, IGF, KGF, HGF, fibronectin, VEGF 및 Procollagen으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 물질일 수 있다.

인간 유래 성체 줄기세포 및/또는 이의 분비물은 인간 지방 조직 유래 성체 줄기 세포를 특정 성분을 함유하는 배지에 배양시킨 후, 배지를 수거한 다음 세포 데브리스(debris)를 제거하고 남은 브로스(broth)인 "인간 지방 조직 유래 성체 줄기세포 배양물"의 형태로 사용할 수 있다. 상기 인간 유래 성체 줄기세포의 함유량은 1 x 10⁵cells/100㎕ 내지 3 x 10⁵cells/100㎕ 인 것이 바람직한데, 1 x 10⁵cells/100㎕인 경우가 더욱 바람직하다.

또한, 상기 조성물은 방법적으로는 정맥으로 투여되는 것이, 시기적으로는 암 발병 초기에 투여되는 것이 바람직하다.

상기 암 예방 또는 치료용 조성물에 있어서, 치료 대상이 될 수 있는 암 질환은 신경교종, 신경교육종, 역형성 성상세포종, 수모세포종, 폐암, 소세포 폐 암종, 자궁경부 암종, 결장암, 직장암, 척삭종, 인후암, 카포시 육종, 림프관 육종, 림프관 내피 육종, 결직장암, 자궁내막암, 난소암, 유방암, 췌장암, 전립선암, 신장 세포 암종, 간 암종, 담관 암종, 융모막 암종, 정상피종, 고환 종양, 윌름 종양, 유잉 종양, 방광 암종, 혈관육종, 내피육종, 선암종, 한선 암종, 피지선 암종, 유두 암종, 유두선육종, 낭선육종, 기관지 암종, 수질 암종, 비만세포종, 중피종, 활막종, 흑색종, 평활근종, 횡문근종, 신경모세포종, 망막모세포종, 핍지교종, 청신경종, 혈관모세포종, 수막종, 송과체종, 상의세포종, 두개인두종, 상피 암종, 배아 암종, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 섬유육종, 점액종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종 또는 백혈병 등이 있다.

본 발명은 성체 줄기세포의 면역체계 활성화에 따른 암 예방 또는 치료 효과라는 새로운 기능에 관한 것으로, 세포 치료제이기 때문에 종래의 화학적 치료 등과 비교하여 안전할 뿐만 아니라, 정맥 투여 등의 간단한 방법으로 뛰어난 면역체계 활성에 따른 암 예방·치료효과를 발휘하므로 항암 세포 치료제로서 매우 유용하다.

도 1은 실시예 3의 실험 방법을 나타낸 공정도이다.
도 2는 실시예 3의 결과로, 실험군과 대조군의 기일 경과에 따른 종양 크기 변화를 나타낸 그래프이다.
도 3은 실시예 3의 결과로, 실험군과 대조군의 기일 경과에 따른 생존률을 나타낸 그래프이다.
도 4는 실시예 4의 실험 방법을 나타낸 공정도이다.
도 5는 실시예 4의 결과로, 실험군과 대조군의 기일 경과에 따른 종양 크기 변화를 나타낸 그래프이다.
도 6은 실시예 4의 결과로, 실험군과 대조군의 기일 경과에 따른 생존률을 나타낸 그래프이다.
도 7은 실시예 5의 결과로, 실험군과 대조군 1에서 줄기세포의 생존률을 WST-1 assay 결과, 생존한 줄기세포 수를 통해 측정한 그래프이다.
도 8은 실시예 5의 결과로, 실험군과 대조군 1에서 줄기세포의 생존률을 WST-1 assay 결과 흡광도를 통해 측정한 그래프이다.
도 9는 실시예 5의 결과로, 실험군과 대조군 2에서 종양세포의 생존률을 WST-1 assay 결과, 생존한 줄기세포 수를 통해 측정한 그래프이다.
도 10은 실시예 5의 결과로, 실험군과 대조군 1에서 종양세포의 생존률을 WST-1 assay 결과 흡광도를 통해 측정한 그래프이다.
도 11은 실시예 6의 결과로, 실험군, 대조군 1 및 대조군 2의 공초점 현미경 사진이다.
도 12는 실시예 6의 결과로, 실험군과 대조군 1의 줄기세포 수의 차이를 시간 별로 나타낸 그래프이다.
도 13은 실시예 6의 결과로, 실험군과 대조군 2의 종양세포 수의 차이를 시간 별로 나타낸 그래프이다.

이하 본 발명에 대하여 구체적으로 설명한다.

줄기세포(stem cell)란 자기 복제 능력을 가지면서 두 개 이상의 세포로 분화하는 능력을 갖는 세포를 말한다.

성체 줄기세포는 발생과정이 진행되어 배아의 각 장기가 형성되는 단계 혹은 성체단계에서 나타나는 줄기세포로 조직 및 기관에 특이적인 세포로만 분화할 수 있는 분화능(multipotent)을 가지고 있는 것으로 알려져 있다. 이러한 조직 특이적 분화능을 가진 줄기세포(multipotent stem cell)는 이 세포가 포함되어 있는 조직 및 기관에 특이적인 세포로만 분화할 수 있는 줄기세포로서, 태아기, 신생아기 및 성체기의 각 조직 및 장기의 성장과 발달은 물론 성체조직의 항상성 유지와 조직손상 시 재생을 유도하는 기능에 관여하고 있다.

본 발명에서는 성체 줄기세포, 바람직하게는 인간 유래 성체 줄기세포를 사용한다.

이는 지방, 자궁, 골수, 근육, 태반, 제대혈 또는 피부(상피) 등 의 조직 유래일 수 있다. 바람직하게는 지방 조직, 또는 모낭ㆍ양막 등 상피조직에서 얻어지는 성체 줄기세포를 이용할 수 있다. 특히, 중간엽 줄기세포(mesenchymal stem cells, MSCs)인 것이 바람직하고, 가장 바람직하게는 인간 지방 조직 유래 중간엽 줄기세포(Human adipose tissue-derived mesenchymal stem cell, AT-MSCs)일 수 있다.

"지방 조직 유래 성체 줄기 세포" 또는 "지방 조직 유래 중간엽 줄기세포"는 지방 조직으로부터 분리해 낸 미분화된 성체 줄기세포로서, 본 명세서에서는 축약하여 "지방 줄기세포"라고 지칭하기도 한다. 이는 당업계에 공지된 통상의 방법을 통해 수득할 수 있다.

상기 지방 줄기세포물의 획득에 사용되는 배지로서는 당업계에서 줄기세포 배양에 적합하다고 알려져 있는 통상적인 배지를 사용할 수 있는데, 바람직하게는 DMEM (Dulbecco's modified Eagle medium) 또는 Keratinocyte-SFM (Keratinocyte serum free medium)을 사용한다.

지방 줄기세포 배양용 배지는 지방 줄기세포의 미분화된 표현형의 증식을 촉진하면서 분화는 억제하는 첨가제로 보충될 수 있다. 또한, 배지는 일반적으로, 등장액 중의 중성 완충제(예컨대 인산염 및/또는 고농도 중탄산염) 및 단백질 영양분(예를 들면 혈청, 예컨대 FBS, 혈청 대체물, 알부민, 또는 필수 아미노산 및 비필수 아미노산, 예컨대 글루타민)을 함유할 수 있다. 나아가, 지질(지방산, 콜레스테롤, 혈청의 HDL 또는 LDL 추출물) 및 이 종류의 대부분의 보존액 배지에서 발견되는 기타 성분(예컨대 인슐린 또는 트랜스페린, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드, 피루빈산염, 임의의 이온화 형태 또는 염인 당원, 예컨대 글루코스, 셀레늄, 글루코코르티코이드, 예컨대 히드로코르티존 및/또는 환원제, 예컨대 β-메르캅토에탄올)을 함유할 수 있다.

또한, 배지는 세포가 서로 유착하거나, 용기벽에 유착하거나, 너무 큰 다발을 형성하는 것을 방지할 목적으로, 항응집제 (anti-clumping agent), 예컨대 Invitrogen이 판매하는 것들(Cat # 0010057AE)을 포함하는 것이 유익할 수 있다.

그 중에서도, 하기의 1이상의 추가의 첨가제를 사용하는 것이 유리할 수 있다:

ㆍ 줄기 세포 인자(SCF, Steel 인자), c-키트를 이량화하는 다른 리간드 또는 항체, 및 동일한 신호 전달 경로의 다른 활성제

ㆍ 다른 티로신 키나아제 관련 수용체, 예컨대 혈소판-유도된 성장 인자(Platelet-Derived Growth Factor; PDGF), 대식세포 콜로니-자극 인자, Flt-3 리간드 및 혈관 내피 성장 인자(Vascular Endothelial Growth Factor; VEGF)의 수용체를 위한 리간드

ㆍ 환형 AMP 농도를 높이는 인자, 예컨대 포르스콜린

ㆍ gp130을 유도하는 인자, 예컨대 LIF 또는 Oncostatin-M

ㆍ 조혈모 성장 인자, 예컨대 트롬보포이에틴(TPO)

ㆍ 변형성 성장 인자, 예컨대 TGFβ1

ㆍ 다른 성장 인자, 예컨대 표피 성장 인자(EGF)

ㆍ 뉴로트로핀, 예컨대 CNTF

ㆍ N-acetyl-L-cysteine (NAC)

ㆍ Hydrocortisone

ㆍ Ascrobic Acid

특히, 본 발명의 일 구체예에서 사용되는 지방 줄기세포를 수득하기 위한 배지는 NAC, 아스코르브산, 칼슘, 인슐린 및 하이드로코티손을 함유하는 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는, FBS, NAC, 아스코르브산, 칼슘, rEGF, 인슐린 및 하이드로코티손을 함유할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 인간 유래 성체 줄기세포 분비물을 유효성분으로 포함한다. 이러한 분비물은, 여러가지, 사이토카인, 아미노산, 성장인자 등을 포함하는데, 예를 들어, TGF, bFGF, IGF, KGF, HGF, fibronectin, VEGF 또는 Procollagen 등의 물질일 수 있다.

특히, 본 발명에서 지방 줄기세포 분비 단백질 성분들을 분석한 결과, TGF (166.7pg/ml), bFGF (916.15pg/ml), IGF (2490pg/ml), KGF (1054pg/ml), HGF (20778pg/ml), fibronectin (2402.3pg/ml), VEGF (6501.72pg/ml), Procollagen (842.23ng/ml)이 고농도로 분비되어 있었다. Passage 단계에 따른 지방줄기세포의 분비 단백질의 성분은 Passage가 증가할수록 VEGF의 농도가 434.62pg/ml에서 940.77pg/ml로 증가하는 경향을 보였지만, HGF (평균값 391.0 pg/ml), TGF (평균값 552.7 pg/ml), IGF (평균값 207.5 pg/ml), Procollagen (평균값 556.6 ng/ml)은 Passage별로 큰 변화를 보이지 않았다.

한편, 이러한 인간 유래 성체 줄기세포 분비물들에 의하여 종양에 따른 케모카인의 발현이 억제되거나, 면역세포의 기능을 강화시켜 면역체계가 활성화되는데 큰 기여를 하게 된다.

그리고, 상기 인간 유래 성체 줄기세포 및/또는 이의 분비물은 인간 지방 조직 유래 성체 줄기 세포를 특정 성분을 함유하는 배지에 배양시킨 후, 배지를 수거한 다음 세포 데브리스(debris)를 제거하고 남은 브로스(broth)인 "인간 지방 조직 유래 성체 줄기세포 배양물"의 형태로도 사용할 수 있고, 각각의 성분을 추출하여 단독으로 또는 함께 사용할 수도 있다.

즉, 성체 줄기세포와 분비물, 배지성분을 모두 포함하는 형태, 분비물 및 배지성분만을 포함하는 형태, 분비물만을 분리하여 단독으로 또는 성체 줄기세포와 함께 사용하는 형태, 또는 성체줄기세포만을 투여하여 체내에서 분비물을 생성하는 형태로 사용하는 것도 모두 가능하다.

본 발명은 일 관점에서, 인간 유래 성체 줄기세포를 이용하여 암(종양) 질환을 치료하는 용도에 관한 것이다. 따라서, 인간 유래 성체 줄기세포 및 이의 분비물을 유효성분으로 함유하는 암 예방 또는 치료용 조성물 또는 이를 이용하는 암 질환 치료방법에 관한 것이다.

'암'이란 제어되지 않은 세포성장으로 특징지어지며, 이러한 비정상적인 세포성장에 의해 종양(tumor)이라고 불리는 세포 덩어리가 형성되어 주위의 조직으로 침투하고 심한 경우에는 신체의 다른 기관으로 전이되기도 한다.

'항암'이라는 용어는 암 질환의 치료 즉, 암세포의 증식을 억제하거나 암세포를 죽이는 것뿐만 아니라, 암 질환의 예방, 즉 암 발병 이전에 암에 대한 저항력을 높이는 것도 함께 포함하는 것으로 해석된다. 따라서, 본 명세서에서 "암 예방 또는 치료"라는 용어와 '항암'이라는 용어는 혼재하여 사용되었다.

'치료하는'이란 용어는, 달리 언급되지 않는 한, 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, '치료'란 용어는 '치료하는'이 상기와 같이 정의될 때 치료하는 행위를 말한다. 따라서, 포유 동물에 있어서 암의 "치료" 또는 "치료요법" 은 하기의 하나 이상을 포함한다:

(1) 암의 성장을 저해함, 즉, 그 발달을 저지시킴,

(2) 암의 확산을 예방함, 즉, 전이를 예방함,

(3) 암을 경감시킴, 즉, 암의 퇴행을 야기시킴,

(4) 암의 재발을 예방함, 및

(5) 암의 증상을 완화함(palliating).

이러한 암은 수술, 방사선 및 화학요법으로 치료를 하더라도 많은 경우에 근본적인 치유가 되지 못하고 환자에게 고통을 주며 궁극적으로는 죽음에 이르게 하는 난치성 만성질환이다. 지난 수십 년간의 수술요법, 화학요법(항암제치료), 방사선요법 등은 많은 발전에도 불구하고 암에 대한 궁극적인 해결책이 되지 못하고 있다.

이에 새로운 암 치료법으로 기대를 모으고 있는 치료방식이 우리 몸 자체의 면역기능을 이용한 면역요법이다. '면역요법'이란 저하된 면역을 활성화시켜 암의 극복을 돕는 요법으로 암 치료법 중 수술요법, 화학요법(항암제), 방사선요법은 암세포를 직접 공격하는 것인 반면, 면역요법은 환자 자신이 가지고 있는 면역력에 작용해 이를 활성화시킴으로써 자신의 면역력으로 암을 치료하는 간접적인 치료방법이다.

암에 대한 면역요법은 여러 가지 방식으로 시도되어 오고 있다. 면역 증강제를 투여하여 면역세포로 하여금 암세포를 공격하도록 하는 치료방법이 있고, 세포성 면역을 수행하는 주된 면역 세포인 림프구를 직접 암의 치료제로 이용하는 방법도 있다. 면역요법은 인체에 이미 존재하는 면역반응을 이용한 치료법이므로 기존의 암 치료법에서 피할 수 없는 부작용을 최소한으로 줄일 수 있으며 고통 없이 암을 치유시킨다는 점에서 가장 안전한 치료법이라 할 수 있다.

본 발명은 이러한 면역 체계 활성을 통한, 성체 줄기세포의 암 예방 또는 치료, 즉 항암효과에 관한 것이다.

따라서, 본 발명은 다른 관점에서, 인간 유래 성체 줄기세포를 이용하여 면역 체계를 활성화시키는 용도에 관한 것이다. 따라서, 인간 유래 성체 줄기세포 및 이의 분비물을 유효성분으로 함유하는, 면역체계 활성용 조성물 또는, 이를 이용하는 면역체계 활성화 방법에 관한 것이다.

'면역체계 활성화'란 체내에서 면역을 담당하는 세포인 면역세포들의 증식률 및 그 활성을 높여 면역기능을 강화시키는 것을 의미하며, 체내에서 암에 대한 면역을 담당하는 주된 세포는 세 종류로, 대식세포, B 림프구(B세포), T 림프구(T세포)이다.

특히, T 림프구 중 NKT 세포(Natural Killer T lymphocyte)는, T 세포 수용체와 함께 NK 세포 수용체도 겸하는 독특한 세포로서, T 세포와 NK 세포라는 별도의 림프구의 특징을 가지고 있다. 이 NKT 세포는 마우스에서 암세포의 간암과 폐암으로의 전이 억제에 중요한 작용세포이며, 또한 NKT 세포는 암세포, 기생충 및 리스테리아와 결핵균 등의 세포 내 감염세균의 배제에 중요한 역할을 하는 세포이다. 또한, 암세포를 효과적으로 저지할 수 있는 세포는 NKT 세포뿐만 아니라 자연살해세포(natural killer cell), LAK 세포(lymphokine-activated killer cell) 및 대식세포(macrophage) 등이 있다. 즉 자연살해세포, LAK 세포 및 대식세포의 활성은 암세포 성장의 저지 및 암 전이에 효과적인 것으로 확인되었으며, 면역자극제에 의한 자연살해세포의 활성화는 암세포의 전이에 의한 번식을 효과적으로 억제한다.

또한, 이들 면역체계에 의한 항암, 항전이, 항바이러스의 작용들은 면역계의 여러 가지 사이토카인의 분비에 의해 매개된다. 특히 항암, 항전이, 항바이러스와 연관된 사이토카인으로서 대표적으로 알려져 있는 것은 감마인터페론(Interferon-γ;IFN-γ, 종양괴사인자-알파(tumor-necrosis factor-alpha; TNF-α) 등이다. 감마인터페론은 주로 T 세포에서 만들어져 면역반응을 조절하고 T, B 세포 호중구, 자연살해세포, 대식세포 등에 작용하여 이러한 면역세포들을 활성화시켜 암세포를 공격하므로 만성 골수성 백혈병, 신장암 치료제로 이용되고 있다. 또한, DNA 합성을 억제하고 세포증식을 직접 억제하는 작용이 강하여 암 치료뿐만 아니라 다른 인터페론처럼 바이러스 및 박테리아의 증식을 억제하여 항바이러스제제 및 다제내성균 및 진균감염증에 임상 적용되고 있다. TNF-α는 주로 대식세포에 의하여 생산되는데 염증반응 등 다양한 면역반응에 관여하며 특히 암세포에 대하여 강력한 독성을 나타낸다. 그러나, 항암요법에 이러한 사이토카인을 직접 사용하는 방법은 예기치 못한 염증반응, 구토 등 부작용을 야기시킬 수 있으므로, 최근에는 특정 사이토카인만을 처리하는 방법이 아니라 전반적인 면역계를 활성화시키는 물질을 찾아내려는 시도가 많이 이루어지고 있다.

특히, 본 발명의 인간 유래 성체 줄기세포는 상기 면역계를 활성화시키는 특정 사이토카인을 분비하는 것을 특징으로 하고 있다. 그리고, 상기 분비물들 중에서 일부는 암(종양)세포에 따른 케모카인 발현 등을 억제시켜 암 질환의 치료효과를 나타내게 된다.

면역체계를 활성화시켜 암(종양) 질환을 예방하기 위해 또는 치료하기 위해, 본 발명의 조성물을 약리학적 유효량으로 투여한다. 바람직하게는 면역체계를 활성화시켜 암(종양) 질환을 예방하기 위해 또는 암 질환 발병 초기에 투여하는 것이 시기적으로 바람직하다.

'약리학적 유효량(therapeutically effective amount)'은 투여되는 화합물의 량이 치료하는 장애의 하나 또는 그 이상의 증상을 어느 정도 경감하는 것을 의미한다. 따라서, 약리학적 유효량은, (1) 질환의 진행 속도를 역전시키거나 (2) 질환의 그 이상의 진행을 어느 정도 금지시키게 하는 것을 의미하며, (3) 질환과 관련된 하나 또는 그 이상의 증상을 어느 정도 경감(바람직하게는, 제거)하는 효과를 가지는 양을 의미한다.

본 발명의 조성물(세포치료제)은 임상투여시에 근육 또는 정맥 주사제와 같은 형태의 비경구 투여뿐 아니라 직접 질환 부위에 투여할 수 있으나, 가장 바람직하게는 정맥 주사에 의한 투여이다.

주사를 위해서, 바람직하게는 Hank 용액, Ringer 용액, 또는 생리 식염수 버퍼와 같은 약리학적으로 맞는 버퍼로 제형 될 수 있다. 점막 투과 투여를 위해서, 통과할 배리어에 적합한 비침투성제가 제형에 사용된다. 그러한 비침투성제들은 당업계에 일반적으로 공지되어 있다.

비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

따라서, 본 발명은 또 다른 관점에서, 지방 조직 유래 성체 줄기세포를 함유하는 조성물을 정맥 투여하는 단계를 포함하는, 면역체계 활성화 방법 또는 암 질환 치료방법에 관한 것이다.

사람의 경우, 세포치료제의 통상적인 투여량은 10⁴~10¹⁰ cells/body, 바람직하게는 10⁶~10⁸ cells/body, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 특히, 본 발명의 조성물은 1 x 10⁵cells/100㎕ 내지 3 x 10⁵cells/100㎕ 인 것이 바람직한데, 2 x 10⁵cells/100㎕인 경우가 가장 바람직하다.

그러나, 활성 성분의 실제 투여량은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 하며, 따라서, 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

인간 지방조직 유래 중간엽 줄기세포 분리 및 분비물 성분분석

지방흡입술(Liposuction)에 의해 복부지방으로부터 얻어진 인간 지방조직을 분리하여 PBS로 세척하였다. 조직을 잘게 자른 후 collagenase type1 (1mg/ml)을 첨가한 DMEM media를 이용해 37℃에서 2시간 동안 digestion하였다. PBS로 세척 후 1000rpm에서 5분간 원심분리 하였다. 상층액은 suction하고 바닥에 남은 펠렛은 PBS로 세척한 후 1000rpm으로 5분간 원심분리하였다. 100㎛ mesh에 필터링하여 debris를 제거한 후 PBS로 세척한 후, DMEM(10% FBS, 2mM NAC, 0.2mM ascorbic acid) 배지에 배양하였다.

하룻밤 지난 후 부착되지 않은 세포들은 PBS로 세척하고, 5% FBS, 2mM NAC, 0.2mM ascorbic acid, 0.09mM calcium, 5ng/ml rEGF, 5㎍/ml 인슐린 및 74ng/ml Hydrocortisone를 함유한 Keratinocyte-SFM media을 2일마다 교체하면서 계대배양하여 지방조직 유래 다분화능 중간엽 줄기세포를 분리하였다.

이하 실시한 실시예에서 사용한 각종 배지 및 시약의 입수처는 하기 표에 기재된 바와 같다.

품목	브랜드
Ascorbic acid	Sigma	USA
CaCl₂	Sigma	USA
Collagenase type I	Gibco	USA
DMEM (Dulbecco's modified Eagle medium)	Gibco	USA
DPBS (Dulbecco's Phosphate-Buffered Salines)	Welgene	한국
EGF (Epidermal growth factor)	Gibco	USA
FBS (Fetal Bovine Serum)	Gibco	USA
Hydrocortisone	Sigma	USA
Insulin	Gibco	USA
K-SFM (Keratinocyte-SFM)	Gibco	USA
NAC (N-acetyl Cysteine)	Sigma	USA

한편, 지방 줄기세포 배양액을 분석하여 분비물의 성분을 알기 위해 배양액을 시험샘플로 채취하여 원심분리하여 세포 debris를 제거하고, 즉시 시험하거나 분주하여 -20도에서 샘플을 보관하되 샘플을 얼렸다. 추후 실험과정에서 얼리고 녹이는 과정은 되도록 피하였다.

시험에 사용되는 시약, 표준시약 대조선을 그리기 위한 표준품과 검체를 준비하였다. 표준시약 대조선을 만들기 위해 측정하고자하는 단백질의 표준품 (stock solution)을 폴리프로필렌 튜브에서 serial dilution하여 최고농도와 최저 농도 사이에 총 7개의 농도를 설정하여 만들었다.

항체가 붙어있는 시험용 microplate strips을 준비하고, Serial dilution한 표준시약 대조선과 지방 줄기세포 배양액 상층을 microplate에 분주하여 반응시켰다. 반응이 끝나면 표준시약과 검체를 회수하고 microplate를 washing buffer로 3회 세척하였다. 측정하고자하는 단백질의 항체에 대한 conjugate를 각각의 plate에 첨가하고 반응시켰다. 반응이 끝나면 conjugate를 회수하고 washing buffer로 3회 세척하였다. Substrate solution을 각각의 plate에 첨가하고 반응시켰다.

Substrate solution의 효소반응을 정지하기 위해 stop solution을 첨가하고 30분 이내에 540~570nm의 흡광도를 가지는 분광기를 이용하여 값을 측정하였다. 보다 세밀한 내용은 단백질 측정에 사용된 ELISA　Kit 정보에 따른다.

VEGF (R&D system Cat. No. DVE00)

HGF (R&D system Cat. No. DHG00)

TGF-b1 (R&D system Cat. No. DB100B)

IGF-1 (R&D system Cat. No. DG100)

Procollagen (TAKARA Cat. No. MK101)

지방 줄기세포 분비 단백질 성분들을 분석한 결과, TGF(166.7pg/ml), bFGF(916.15pg/ml), IGF(2490pg/ml), KGF(1054pg/ml), HGF(20778pg/ml), fibronectin(2402.3pg/ml), VEGF(6501.72pg/ml), Procollagen(842.23ng/ml)이 고농도로 분비되어 있음을 확인할 수 있었다.

인간 지방조직 유래 중간엽 줄기세포( AT - MSCs )의 항암효과

C57BL/7 마우스 흑색종 모델을 이용하여 실시예 1에서 수득한 지방조직 유래 중간엽 줄기세포(AT-MSCs)를 정맥 주사(intravenous injection:IV injection)로 투여한 후 종양 치유 능력을 확인하였다.

그룹 1(대조군): 8주령 마우스 암컷 4마리의 꼬리 정맥에 식염수 100㎕를 정맥주사(I.V)로 3일 간격으로 3번 투여하고, 첫 투여일로부터 13일 후에 흑색종 세포(B16)를 피하주사(S.C)로 주입하였다.

날짜	일	종류	양	주입방법
7월 7일	-13	saline	100㎕	I.V
7월 10일	-10	saline	100㎕	I.V
7월 13일	-7	saline	100㎕	I.V
7월 20일	0	B16	100㎕	S.C

그룹 2(실험군): 8주령 마우스 암컷 3마리의 꼬리 정맥에 상기 실시예 1에서 수득한 지방조직 유래 중간엽 줄기세포(AT-MSCs) 2 x 10⁵cells/100㎕를 정맥 주사(intravenous injection:IV injection)로 3일 간격으로 3번 투여하고, 첫 투여일로부터 13일 후에 흑색종 세포(B16)를 피하주사(S.C)로 주입하였다.

날짜	일	종류	양	주입방법
7월 7일	-13	AT-MSCs	2x10⁵/100㎕	I.V
7월 10일	-10	AT-MSCs	2x10⁵/100㎕	I.V
7월 13일	-7	AT-MSCs	2x10⁵/100㎕	I.V
7월 20일	0	B16	2x10⁵/100㎕	S.C

그 다음 암세포 투여 후 15일, 18일, 21일, 23일, 25일, 28일 및 30일 후에 종양 크기(Tumor volume)를 측정하였다.

그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

표 4에서 알 수 있는 바와 같이, 지방조직 유래 중간엽 줄기세포(AT-MSCs)를 암 세포 주입 전에 정맥 주사(intravenous injection:IV injection)로 투여한 경우에, 종양세포의 증식이 현저히 억제됨을 관찰할 수 있었다.

인간 지방조직 유래 중간엽 줄기세포( AT - MSCs )의 암 예방효과

생쥐모델에 지방유래 중간엽 줄기세포를 투여한 후 흑색종을 유발하였을 때, 미리 투여한 줄기세포에 의한 흑색종에 대한 암 예방효과를 분석하고자, 실험군C57BL/7 생쥐(n=5)에 2 x 10⁵ cells/100-200㎕의 지방유래 중간엽 줄기세포를 3일 간격으로 3회 꼬리정맥에 투여하고, 마지막 투여일로부터 7일 후에 5 x 10⁵ cells/100-200㎕ 의 B16/F10흑색종양세포를 생쥐 등 부위에 피하주사를 실시한 후, 흑색종양 크기 및 생존능을 측정하였다. 이때, 대조군(n=5)의 경우는 2 x 10⁵cells/100-200㎕의 지방유래 중간엽 줄기세포를 투여할 때 각 100-200㎕의 식염수(saline)를 대신 투여하였다(도 1).

상기 측정은 흑색종양세포 투여(0일) 후 15일째부터 30일까지 2일 간격으로 흑색종의 생성을 관찰하고, behavior, 즉 운동성 및 털의 윤기를 관찰하였으며, 흑색종양의 크기는 버니어 칼리퍼를 이용하여, [(width² *length)/2] 의 공식으로 부피를 계산하였다. 생존능은 생존 시간을 측정하였다.

흑색종양세포 투여(0일) 후 15일부터 30일까지 흑색종양의 크기 측정(도 2) 및 생존률 측정 결과 지방유래 중간엽 줄기세포를 투여한 실험군은 대조군(saline 투여군)에 비해 종양형성의 억제효과와 생존능이 증진되었음을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 사람의 지방유래 중간엽 줄기세포가 흑색종양에 대한 항암예방효과가 있음을 보여준다.

인간 지방조직 유래 중간엽 줄기세포( AT - MSCs )의 암 예방 및 치료효과

생쥐모델에 지방유래 중간엽 줄기세포를 먼저 투여하고 흑색종을 유발한 후에 다시 지방유래 중간엽 줄기세포를 투여하여, 줄기세포의 투여로 인한 흑색종에 대한 항암효과를 분석하고자 본 실험을 수행하였다. 실험군 C57BL/7 생쥐(n=5)에 2 x 10⁵ cells/100-200㎕의 지방유래 중간엽 줄기세포를 3일 간격으로 3회 꼬리정맥에 투여하고, 마지막 투여일로부터 7일 후에 5 x 10⁵ cells/100-200㎕ 의 B16 /F10의 흑색종양세포를 생쥐 등 부위에 피하주사를 실시한 후, 종양세포 투여일(0일)로부터3일 후와 10일 후에 각각 순차적으로 2 x 10⁵cells/100-200㎕ 의 지방유래 중간엽 줄기세포를 꼬리정맥에 투여하여 흑색종양 크기 및 생존능을 측정하였다. 이때, 대조군(n=5)의 경우는 2 x 10⁵cells/100-200㎕의 지방유래 중간엽 줄기세포를 투여할 때 각 100-200㎕의 식염수(saline)를 대신 투여하였다(도 4).

흑색종양세포 투여 후 15일째부터 29일까지 2일 간격으로 흑색종양의 크기 측정(도 5) 및 생존능을 측정(도 6)한 (측정방법은 위 실시예 3과 같다)결과, 지방유래 중간엽 줄기세포 투여군은 대조군(saline 투여군)에 비해 현저하게 종양형성의 억제효과와 생존능이 증진되었음을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 사람의 지방유래 중간엽 줄기세포가 흑색종양에 대한 암 예방효과 및 치료효과가 있음을 보여주며, 생쥐모델에 지방 중간엽 줄기세포를 투여하고 흑색종을 유발한 후에 흑색종에 대한 항암효과의 결과보다 생쥐모델에 지방유래 중간엽 줄기세포를 먼저 투여하고 흑색종을 유발한 후에 다시 지방유래 중간엽 줄기세포를 투여한 치료방법이 훨씬 더 흑색종에 대한 항암효과가 뛰어남을 보여준다.

Indirect co - culture 를 통한 인간 지방조직 유래 중간엽 줄기세포( AT - MSCs )의 암 세포 증식억제효과의 확인

사람 지방유래 중간엽 줄기세포가 흑색종에 대한 항암효과가 있음을 실시예 2~4에서in vivo 실험을 통해 확인하였는데, 이러한 이유를 입증하기 위한 실험방법으로 사람 지방유래 중간엽 줄기세포와 흑색종양세포의 indirect 및 direct co-culture을 실시하여 in vitro에서 사람 지방유래 중간엽 줄기세포에 의해 흑색종양세포의 증식억제 효능을 분석하였다.

Indirect co-culture를 실시하기 위해, 실험군은 이원화 세포배양을 할 수 있는 24 transwell을 사용하여 well 바닥에 5 x 10⁴개의 사람 지방유래 줄기세포를 부착시키고 well에 있는 insert membrane 위에는 5 x 10⁴개의 B16 흑색종양세포를 부착시킨 후 항생제가 첨가된 OPTI-MEM (10% FBS첨가, Gibco)배지에서 5% CO₂ 공급 및 37℃ 조건으로 1, 2 및 3일간 배양하였다. 대조군 1은 줄기세포(AT-MSC)만을 단독으로 위와 같은 조건으로 배양하였으며, 대조군 2는 흑색종양세포(B16)만을 단독으로 위와 같은 조건으로 배양하였다.

그 후, WST-1 assay를 실시하여 세포 증식능을 분석하였다. WST-1 assay는 세포증식 능력이나 세포생존 능력을 발색 측정으로 정량하는 방법이다. 생세포 내의 미토콘드리아 탈수소효소에 의해 테트라졸리움(tetrazolium)염(WST-1)이 formazan 색소로 변환하는 것을 기본으로 하여 [³H]-티미딘(thymidine) 결합 측정법 대신에 non-RI로 측정할 수 있다. 배지에 첨가한 테트라졸리움염은 미토콘드리아의 호흡사슬에 존재하며 생존세포에만 활성이 있는 succinate-tetrazolium-reductase(EC 1.3.99.1)에 의해 formazan 색소로 변환한다. 생세포수가 증가하면 시료 중의 미토콘드리아 탈수소효소의 전체의 활성이 증가하여 이 효소활성의 증가가 formazan색소의 생성증가를 유도하기 때문에 formazan 색소와 배지 중에서 대사활성이 있는 세포의 수는 직선적인 상관관계를 나타내게 된다. 이 측정법은 세포를 세정하거나 결합할 필요가 없고, 미량 배양에서 ELISA reader에 의한 데이터 해석까지 동일한 microtiter plate에서 시행할 수 있는 장점이 있다. 또 증식능력이나 약제감수성 측정법에서 세포증식과 생존능력을 non-RI로 분광광도계로 정량할 수도 있다.

본 실시예에서 WST-1 assay는 각 세포가 부착된 well과 insert membrane을 분리해서 0.5 ml의 OPTI-MEM (10% FBS첨가, Gibco)배지와 테트라졸리움 (tetrazolium)염이 들어있는 WST-1 reagent 용액 50 ㎕를 첨가하여 5% CO₂ 공급 및 37℃ 조건으로 배양기에서 2시간 반응시키고 1 분간 부드럽게 혼합한 후 450 nm에서 흡광도를 측정하여 실시하였다.

상기한 방법으로 Indirect co-culture를 실시한 결과 사람 지방유래 줄기세포는 대조군1에 비해 증식억제가 없음을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 흑색종양세포가 사람 지방유래 줄기세포의 증식을 억제하지 못함을 보여준다(도 7, 도 8).

그러나 흑색종양세포는 대조군2에 비해, 현저하게 증식이 억제되었음을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 사람 지방유래 줄기세포가 흑색종양세포의 증식을 억제하였음을 보여준다(도 9, 도 10).

Direct co - culture 를 통한 인간 지방조직 유래 중간엽 줄기세포( AT - MSCs )의 암 세포 증식억제효과의 확인

Direct co-culture를 실시하기 위해, 실험군은 13 mm 세포배양용 디스크를 24-well plate에 넣고 1 ml의 항생제가 첨가된 OPTI-MEM (10% FBS첨가, Gibco)배지를 첨가한 후, CM-DiI으로 labeling한 5 x 10⁴개의 사람 지방유래 중간엽 줄기세포와 5 x 10⁴개의 B16 흑색종양세포를 함께 첨가하여 부착시켰다. 그 후, 5% CO₂ 공급과 37℃ 조건하에서 1 및 2일간 배양하였다. 대조군 1로 줄기세포(AT-MSC)만을 단독으로, 위와 같은 조건으로 배양하였으며, 대조군 2로 흑색종양세포(B16)만을 단독으로 위와 같은 조건으로 배양하였다.

세포가 부착된 디스크를 PBS로 세척 후 핵염색을 위해 hoechst 33342 용액으로 37℃에서 30분간 염색하였다. 세포 수 확인을 위하여 커버슬라이드에 마운팅한 후 공초점 레이저 주사현미경(Confocal Laser Scanning Microscope)을 통하여 사진을 촬영하고 세포 수를 측정하였다(도 11~13).

상기한 방법으로 direct co-culture를 실시한 결과에서도 흑색종양세포는 대조군에 비해 현저하게 증식이 억제되었음을 도 11~13을 통하여 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 사람 지방유래 줄기세포에 의해 흑색종양세포의 증식이 억제되었음을 보여주는 것이다.

따라서 본 연구의 결과들은 in vivo 및 in vitro 실험을 통해 사람의 지방유래 중간엽 줄기세포가 흑색종에 대한 항암효과가 있음을 보여주었으며, 사람의 지방유래 중간엽 줄기세포의 이용은 흑색종에 대한 항암치료의 가능성을 제시해주었다.

이상으로 본 발명의 내용을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

인간 유래 성체 줄기세포 및 이의 분비물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 유효성분으로 함유하는, 암 예방 또는 치료용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 분비물은 사이토카인, 아미노산 및 성장인자로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것임을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 분비물은 TGF(Transforming Growth Factor), bFGF(basic Fibroblast Growth Factor), IGF(Insulin-like Growth Factor), KGF(Keratinocyte Growth Factor), HGF(Hepatocyte Growth Factor), 피브로넥틴(fibronectin), VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor) 및 프로콜라겐(procollagen)으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것임을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 성체 줄기세포는 지방, 자궁, 골수, 근육, 태반, 제대혈, 모낭 및 피부로 구성된 군에서 선택된 조직 유래인 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 조성물.
제4항에 있어서, 상기 성체 줄기세포는 지방 조직 유래인 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 조성물.
제5항에 있어서, 상기 성체 줄기세포는 인간 지방 조직 유래 중간엽 줄기세포(Human adipose tissue-derived mesenchymal stem cell, AT-MSCs)인 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 인간 유래 성체 줄기세포는 1 x 10⁵cells/100㎕ 내지 3 x 10⁵cells/100㎕ 함유되어 있는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 암 예방 또는 치료용 조성물은 정맥으로 투여되는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 암 예방 또는 치료용 조성물은 암 발병 초기에 투여되는 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 암 질환은 신경교종, 신경교육종, 역형성 성상세포종, 수모세포종, 폐암, 소세포 폐 암종, 자궁경부 암종, 결장암, 직장암, 척삭종, 인후암, 카포시 육종, 림프관 육종, 림프관 내피 육종, 결직장암, 자궁내막암, 난소암, 유방암, 췌장암, 전립선암, 신장 세포 암종, 간 암종, 담관 암종, 융모막 암종, 정상피종, 고환 종양, 윌름 종양, 유잉 종양, 방광 암종, 혈관육종, 내피육종, 선암종, 한선 암종, 피지선 암종, 유두 암종, 유두선육종, 낭선육종, 기관지 암종, 수질 암종, 비만세포종, 중피종, 활막종, 흑색종, 평활근종, 횡문근종, 신경모세포종, 망막모세포종, 핍지교종, 청신경종, 혈관모세포종, 수막종, 송과체종, 상의세포종, 두개인두종, 상피 암종, 배아 암종, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 섬유육종, 점액종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종 또는 백혈병인 것을 특징으로 하는 암 예방 또는 치료용 조성물.
인간 유래 성체 줄기세포 및 이의 분비물을 유효성분으로 함유하는, 면역체계 활성용 조성물.
제11항에 있어서, 상기 분비물은 사이토카인, 아미노산 및 성장인자로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것임을 특징으로 하는 면역체계 활성용 조성물.
제11항에 있어서, 상기 분비물은 TGF, bFGF, IGF, KGF, HGF, 피브로넥틴, VEGF 및 프로콜라겐으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 포함하는 것임을 특징으로 하는 면역체계 활성용 조성물.
제11항에 있어서, 상기 성체 줄기세포는 지방, 자궁, 골수, 근육, 태반, 제대혈, 모낭 및 피부로 구성된 군에서 선택된 조직 유래인 것을 특징으로 하는 면역체계 활성용 조성물.
제14항에 있어서, 상기 성체 줄기세포는 지방 조직 유래인 것을 특징으로 하는 면역체계 활성용 조성물.
제15항에 있어서, 상기 성체 줄기세포는 인간 지방 조직 유래 중간엽 줄기세포(Human adipose tissue-derived mesenchymal stem cell, AT-MSCs)인 것을 특징으로 하는 면역체계 활성용 조성물.
제11항에 있어서, 상기 인간 유래 성체 줄기세포는 1 x 10⁵cells/100㎕ 내지 3 x 10⁵cells/100㎕ 함유되어 있는 것을 특징으로 하는 면역체계 활성용 조성물.
제11항에 있어서, 상기 면역체계 활성용 조성물은 정맥으로 투여되는 것을 특징으로 하는 면역체계 활성용 조성물.