KR20160109019A - 지방-유래 줄기세포를 함유하는 정맥혈관 투여를 통한 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

지방-유래 줄기세포를 함유하는 정맥혈관 투여를 통한 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 지방-유래 줄기세포, 바람직하게는 인체 지방-유래 줄기세포 또는 상기 지방-유래 줄기세포의 배양물를 유효성분으로 함유하며, 정맥혈관 투여를 통해 아토피 피부염을 예방 또는 치료할 수 있는 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 지방-유래 줄기세포를 함유하는 조성물은 육안병변, 조직학적 검사, IgE 및 관련 사이토카인 측정 등에서 아토피 피부염의 예방 또는 치료에 탁월한 효과가 있으며, 아토피 피부염과 같은 난치성 면역질환 또는 염증 질환의 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

지방-유래 줄기세포를 함유하는 정맥혈관 투여를 통한 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물{Composition for Prevention or Treatment of Atopic Dermatitis via Intravenous Injection Comprising Adipose-derived Stem Cell}
본 발명은 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 지방-유래 줄기세포를 유효성분으로 함유하며, 정맥혈관 투여를 통해 아토피 피부염을 예방 또는 치료할 수 있는 조성물에 관한 것이다.
아토피 피부염은 유아 및 어린이에게 높은 빈도(전 인구의 0.5%, 어린이 경우 5∼10%)로 나타나는 피부염증 질환으로서, 유전적 요소와 면역계 이상에 의한 발병도 주요 원인이지만, 현대사회에서는 외부로부터 침입한 균에 의한 감염, 정서적 요인 및 환경적 요인 등이 더욱 문제가 되고 있다. 특히 재발성의 만성 피부질환으로서 최근에는 청소년 이후 성인에 이르기까지 많은 사람들이 고통을 겪고 있는 질환이다. 일반적으로 건조한 피부와 아토피성 염증질환은 피부 각질의 손상을 야기함으로써 피부의 고유한 보호기능을 손상시키고, 손상된 피부는 쉽게 균에 감염되기 때문에 아토피 증상이 악화되게 된다.
현재 아토피 피부염에 대한 치료제로는 국소 스테로이드제, 면역억제제, 항히스타민제 및 세균감염을 예방하기 위한 항생제 연고 등이 사용되고 있으나, 이들 약물들은 다양한 부작용이 보고되어 있을 뿐만 아니라, 아토피 피부염에 대한 근본적인 치료제는 아니므로 이들을 지속적으로 적용하기가 곤란하다는 문제점이 있다.
이와 같은 상황에서 현재까지 아토피 피부염의 치료방법으로는 상기 언급한 스테로이드성 물질이 가장 효능이 뛰어나지만, 스테로이드성 물질을 장기간 사용할 경우 소아의 성장 장애, 비만, 당뇨병, 정신적 장애, 백내장 등의 부작용으로 인하여 그 사용이 제한되고 있다. 실제로 부신피질 호르몬제 등과 같은 스테로이드제는 비장, 림프절 및 골수에 있는 림프구, 단핵구를 고갈시켜 이들 세포들이 염증 부위에 이르는 양을 줄이거나 대식세포와 중성구 및 항원항체의 면역작용을 방해함으로써 염증반응을 억제한다.
또한, 아토피 피부염은 만성 피부 질환이기 때문에 스테로이드제를 장기간 및 고용량 사용할 경우 다양한 부작용이 나타날 수 있고, 사용하면 할수록 내성이 생겨 그 효과가 떨어지게 되며, 고용량으로 사용하게 됨으로써 감염에 대한 감수성이 증가하여 흔히 보기 힘든 심각한 감염증을 일으킬 수도 있다. 예를 들어, 스테로이드제는 당뇨, 백내장, 고혈압을 악화시키고, 혈액 내 콜레스테롤과 중성지방의 수치를 증가시키며, 어린이에 있어서는 성장을 억제하고 6개월 이상 복용시 어른이 되었을 때의 키가 줄어들기도 한다. 또한, 고관절, 견관절, 슬관절, 기타 다른 관절에서 뼈의 무혈관성 괴사를 일으킬 수 있으며, 위장관으로부터 칼슘의 흡수를 억제함으로써 뼈를 약화시켜 부러지기 쉽게 하고, 골다공증을 일으키기도 한다.
이와 같이, 종래 아토피 피부염에 대한 치료제는 모두 증상을 완화시키는 것에 초점을 맞추고 있으며, 근본적인 치료를 위한 접근방식의 치료제는 현재로서는 없는 상황이다. 이에, 종래 치료제들이 가진 단점을 극복하고자 여러 시도들이 이루어지고 있지만, 주로 현행 치료법의 한계를 극복하기 위한 대체 치료법들로서, 아토피 피부염을 포함하는 피부질환을 근본적으로 해결할 수 있는 치료제의 개발은 전무한 실정이다.
한편, 줄기세포의 피부질환 관련 적용 가능성에 대해서는 줄기세포가 증식하는 동안에 분비하는 인자(Secretory factor)에 대한 보고를 통해 기대되어 왔다. 예컨대, 오노 등은 환자의 피부 상처 부위에 대한 치유 효과를 TGF-α와 IL-6 같은 인자로 판단했으며(비특허문헌 1), 또한 중간엽 줄기세포(mesenchymal stem cell, MSC)가 마이토젠(mitogen)이나 동종 세포로 자극된 T-세포의 증식을 억제함으로써 면역반응을 억제시키는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 2). MSC는 골수, 제대혈, 지방, 근육 등의 조직으로부터 분리될 수 있는 다분화능을 가진 세포로서, MSC는 말초 관용(peripheral tolerance), 자가면역(autoimmunity), 종양 억제(tumor evasion) 등의 관점에서 면역조절제로서 기능할 수 있다. MSC는 인간, 비비(baboon) 및 쥐에서 T-임파구의 시험관내(in vitro) 활성화 및 증식을 억제함으로써 면역억제 기능을 가지며, 이러한 억제 기능은 동종항원(alloantigen), 마이토젠에 의해 유도되는 T-세포의 증식 및 CD3 및 CD28 항체에 의한 T-세포 활성화에 영향을 준다. MSC는 T-임파구(cytotoxic T lymphocyte, CTL)의 세포독성(cytotoxicity)을 저해하며, 이는 세포독성 자체를 직접 억제하는 것이 아니라 CTL의 증식을 억제함으로 이루어진다고 알려져 있다. 이러한 저해가 직접적인 세포-세포 접촉에 의한 것인지 여부는 명확하지 않으나, 수용성 인자들(soluble factor)을 매개로 이루어지는 것으로 예측되는데, 이와 같은 수용성 인자들은 MSC와 임파구의 직접 접촉을 통해 만들어지게 되고, TGF-β 및 HGF(hepatocyte growth factor)가 주요 억제 인자 중 하나임이 밝혀진 바 있다.
최근 중간엽 줄기세포가 비특이적으로 임파구의 증식을 억제하거나 마이토젠이나 항원의 자극에 의한 임파구의 활성화를 억제하는 능력이 있는 것으로 보고되었다. 또한, 이들 중간엽 줄기세포에 의한 임파구의 억제는 T-세포의 경우와 달리 HLA-매칭(matching)이 필요하지 않는 것이 보고되었다. 특히 중간엽 줄기세포 자체가 HLA-DR과 같은 항원의 발현이 적어 그 자체로도 면역유발 능력이 약하며, 이들을 체내에 주입하였을 경우에도 면역부작용을 유발하지 않는 것이 발견되었다(특허문헌 1). 이러한 현상은 중간엽 줄기세포가 가진 고유 기능 중 하나인 면역 조절 능력 때문인데, 아토피 피부염과 같은 난치성 면역 질환의 치료에 응용될 수 있다는 점에서 중간엽 줄기세포의 면역질환 세포치료제로서의 가능성이 크다고 할 수 있다.
또한, 최근에는 제대혈 줄기세포를 이용한 아토피 치료제가 개발되어 임상진행 중에 있으며, 상기 제품은 아토피 증상 부위에 제대혈 줄기세포를 피하주사를 통해 투여하는 치료제이다. 그러나, 지금까지 지방-유래의 줄기세포를 이용하여 정맥혈관 투여를 통해 아토피 피부염을 예방 또는 치료할 수 있는 조성물에 대해서는 알려져 있지 않다.
이에, 본 발명자들은 제대혈 줄기세포보다 채취 및 분리가 쉬운 지방-유래 줄기세포를 정맥 주사하여 몸 전체의 면역기능을 조절함으로써 아토피 증상을 완화 및 치료할 수 있고, 또한 아토피 피부염 질환에서 중요한 요소인 면역글로불린 E를 억제하여 비만세포의 탈과립화를 사전에 차단함으로써 아토피 피부염의 병변을 완화할 수 있으며, 일시적으로 아토피 피부염을 완화시키는 약물과 달리 근본적인 원인을 치유하여 아토피 피부염에 대한 획기적인 치료 효과를 얻을 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
대한민국 공개특허공보 제10-2013-0096661호
Ohno, et al., J. Derm. Sci. (1995) 10, 241-245 Djouad F. et al., Blood (2003) 102(10), 3837-3844 Rasmusson I, et al., Transplantation (2003) 76(8), 1208-1213 Massimo Di Nicola, et al., Blood, (2002) 99(10), 3838-3843
본 발명은 지방-유래 줄기세포를 유효성분으로 함유하며, 아토피 피부염 병소에 대한 국소투여나 피부 도포를 통하지 않고 정맥혈관을 통해 전신에 투여함으로써 아토피 피부염을 예방 또는 치료할 수 있는 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 지방-유래 줄기세포 또는 상기 지방-유래 줄기세포의 배양물을 함유하는 정맥혈관 투여를 통한 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, '줄기세포'란 용어는 뛰어난 증식력을 가지며, 신체의 여러 조직으로 분화할 수 있는 능력을 갖는 세포를 포괄적으로 나타낸다.
또한, '배양물'이란 용어는 줄기세포와 세포배양을 통해 생산되는 세포 배양액으로부터 세포를 제외한 세포에서 분비된 성장인자, 사이토카인(cytokine), 케모카인(chemokine) 등을 포함하는 배지액 조성물을 나타낸다.
또한, '예방'이란 용어는 본 발명의 약학적 조성물의 투여로 인해 면역 질환 또는 염증 질환, 예컨대 아토피 피부염의 발병을 억제 또는 지연시키거나 완화시키는 모든 과정을 나타내며, 질병의 발생을 차단하는 좁은 의미로 해석되어서는 안된다.
또한, '치료'란 용어는 본 발명의 약학적 조성물의 투여로 인해 면역 질환이나 염증 질환, 예컨대 아토피 피부염의 증세가 호전되거나 이롭게 되는 모든 과정을 나타내며, 해당 질환의 증상이 완전히 사라지는 좁은 의미로 해석되어서는 안된다.
또한, '아토피 피부염'이란 용어는 그 발생의 직ㅇ간접적인 원인을 불문하고 본 기술분야에서 아토피 피부염으로 분류되는 모든 질환을 제한없이 포함하는 의미로 사용된다. 통상 아토피 피부염은 그 발병 시기 또는 그 발명 대상에 따라 유아형 아토피 피부염, 소아형 아토피 피부염, 성인형 아토피 피부염 및 임산부 아토피 피부염으로 분류되는데, 본 발명에서 아토피 피부염은 이러한 모든 유형의 아토피 피부염을 제한없이 포함하는 의미로 사용된다.
본 발명에 있어서, 상기 지방-유래 줄기세포는 인체 지방-유래 줄기세포(Human Adipose-derived Stem Cell, hAdSC)인 것이 바람직하지만 이에 한정되는 것은 아니며, 경우에 따라 인간 이외의 포유동물 유래의 지방-유래 줄기세포도 제한없이 사용될 수 있다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 상기 지방-유래 줄기세포는 세포의 표면마커 중에서 CD73, CD90 및 CD105(95% 이상, 양성 마커)는 발현되고, CD14, C31, CD34, CD45 및 HLA-DR(5% 이하, 음성 마커)은 발현되지 않는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 약학적 조성물은 일정 세포수 이상의 인체 지방-유래 줄기세포를 포함한다. 상기 인체 지방-유래 줄기세포는 1×105∼10×109 세포수의 범위로 포함되는 것이 바람직하고, 1×107∼5×108 세포수의 범위로 포함되는 것이 더욱 바람직하며, 5×107∼3×108 세포수의 범위로 포함되는 것이 더욱 바람직하다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 인체 지방-유래 줄기세포를 얻기 위한 배양용 배지로는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)을 기본 배지로 하는 것이 바람직하지만 이에 한정되는 것은 아니며, 시판되는 또는 종래 공지된 임의의 세포 배양용 배지가 제한없이 사용될 수 있다. 이러한 시판되는 또는 종래 공지된 배지의 다른 예로는 McCoys 5A 배지, Eagle's basal 배지, CMRL 배지, Glasgow 최소 필수 배지, Ham's F-12 배지, Iscove's modified Dulbecco's 배지, Liebovitz' L-15 배지, RPMI(Rosewell Park Memorial Institute) 1640 배지, Keratinocyte-SFM(Keratinocyte serum free medium), MEM(Minimum Essential Medium) 등을 들 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 기본 배지, 예컨대 DMEM 배지에는 FBS(fetal bovine serum), 아스코르브산(ascorbic acid), 에스트라디올(estradiol), 하이드로코티손(hydrocortisone), EGF(epidermal growth factor), FGF(fibroblast growth factor), IGF(insulin-like growth factor) 및 PDGF(platelet-derived growth factor)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 인자들이 소정의 농도로 포함되는 것이 바람직하다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 인체 지방-유래 줄기세포를 얻기 위한 배양용 배지는 DMEM 배지에 1∼20%(v/v)의 FBS, 0.1∼500ng/㎖의 인슐린, 1∼100㎍/㎖의 아스코르브산, 0.1∼10ng/㎖의 에스트라디올, 0.1∼100ng/㎖의 하이드로코티손, 0.1∼200ng/㎖의 EGF, 0.1∼200ng/㎖의 FGF, 0.1∼200ng/㎖의 IGF 및 0.1∼200ng/㎖의 PDGF가 포함될 수 있다. 보다 바람직하게는, 인체 지방-유래 줄기세포를 얻기 위한 배양용 배지는 DMEM 배지에 1∼20%(v/v)의 FBS, 0.1∼500ng/㎖의 인슐린, 1∼100㎍/㎖의 아스코르브산, 0.1∼10ng/㎖의 에스트라디올, 0.1∼100ng/㎖의 하이드로코티손, 1∼200㎍/㎖의 EGF, 0.1∼100ng/㎖의 FGF, 0.1∼100ng/㎖의 IGF 및 0.1∼100ng/㎖의 PDGF가 포함될 수 있다. 더욱 바람직하게는, 인체 지방-유래 줄기세포를 얻기 위한 배양용 배지는 DMEM 배지에 1∼20%(v/v)의 FBS, 1∼100ng/㎖의 인슐린, 1∼100㎍/㎖의 아스코르브산, 0.1∼10ng/㎖의 에스트라디올, 0.1∼100ng/㎖의 하이드로코티손, 1∼50ng/㎖의 EGF, 1∼50ng/㎖의 FGF, 1∼50ng/㎖의 IGF 및 0.1∼50ng/㎖의 PDGF가 포함될 수 있다. 본 발명에 따르면, 상기 배양용 배지는 필요에 따라 소정 농도, 예컨대 1%(v/v) 농도의 페니실린/스트렙토마이신이 보충될 수도 있다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 상기의 조건에서 배양된 인체 지방-유래 줄기세포 배양물은 세포성장인자로서 1∼10ng/㎖의 EGF, 0.1∼100ng/㎖의 VEGF(vascular endothelial growth factor), 0.01∼10ng/㎖의 HGF(hepatocyte growth factor), 1∼100pg/㎖의 TGF(transforming growth factor), 0.01∼10ng/㎖의 PDGF 및 0.01∼20ng/㎖의 bFGF를 가지며, 각 세포성장인자가 갖는 피부 보호작용을 통해 아토피 피부염을 완화시킬 수 있다. 또한, 상기 배양물은 줄기세포에서 분비된 성장인자, 사이토카인, 케모카인 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 지방-유래 줄기세포를 함유하는 약학적 조성물은 아토피 유발물질로서 집먼지 진드기에서 추출된 Df(Dermatophagoides farinae)에 의해 Nc/Nga 마우스에서 유발된 아토피 피부염에 대해 적용될 수 있으며, 상기 마우스에 본 발명의 약학적 조성물을 투여하면 시간이 경과함에 따라 아토피 피부염 병변의 상태가 호전되었고(도 3a 내지 도 7 참조), 상기 결과로부터 본 발명의 약학적 조성물은 아토피 피부염 환자 또는 경미한 증상의 잠재적 아토피 증상을 보유하고 있는 일반인에게 유용하게 적용될 수 있음을 확인하였다.
본 발명은 일정 세포수의 인체 지방-유래 줄기세포를 함유하는 세포치료제를 정맥주사를 통해 아토피 치료에 도움을 주는 세포치료제로서, 아토피 피부염의 예방 및 치료 또는 완화 작용에 도움을 주는데 유용한 약학적 조성물을 제공한다. 또한, 상기와 같은 줄기세포를 얻기 위해서는 일정한 줄기세포 배양용 배지와 줄기세포를 포함하는 조성물이 필요하며, 본 발명에서는 그와 같은 인체 지방-유래 줄기세포 배양용 배지 조성과 세포치료제 조성물을 제공한다. 상기와 같이 중간엽 줄기세포로서 인체 지방-유래 줄기세포를 효과적으로 배양하여 얻는 일과 이 조성물을 정맥투여하는 일은 신규한 세포치료제를 제공한다는 의미가 있다.
본 발명자들은 특정 조성의 배지를 통하여 배양된 줄기세포에 대하여 그 확인을 거친 후, 배양 결과로부터 얻어지는 일정 세포수의 인체 지방-유래 줄기세포를 의약용 물질로서의 가능성을 염두에 두고, 인체 지방-유래 줄기세포의 분화 특성을 고려하여 면역 이상과 관련된 피부 질환에 대해 연구를 거듭한 끝에 아토피 질환 동물 모델에서 본 발명의 인체 지방-유래 줄기세포의 아토피 치유 효과를 발견하게 되었다. 또한, 이와 같은 치유 효과를 규명하고자 아토피를 유발시킨 동물모델에 인체-유래 줄기세포를 정맥투여하여 회복 정도와 면역인자들을 분석한 결과, 본 발명의 인체 지방-유래 줄기세포를 사용하였을 때 아토피 증상이 호전되는 사실을 규명하였다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 임상 투여시에 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 즉, 본 발명의 약학적 조성물은 실제 임상 투여시에 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제가 포함될 수 있다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 동결되지 않은 채 사용되거나, 차후 사용을 위해 동결될 수 있다. 동결되어야 할 경우, 표준 냉동보존제(예를 들면, DMSO(dimethyl sulfoxide), 글리세롤, 폴리비닐피롤리돈, 폴리에틸렌 글리콜, 알부민, 덱스트란, 수크로오스, 에틸렌 글리콜, i-d 에리트리톨, D-리비톨, D-만니톨, D-솔비톨, i-이노시톨, D-락토오스, 콜린 클로라이드, 에피라이프(Epilife®) 세포동결배지(Cascade Biologics))가 동결 전 세포 집단에 첨가될 수 있다.
또한, 상기 약학적 조성물은 약학적 분야에서 통상의 방법에 따라 환자의 신체 내 투여에 적합한 단위투여형의 제제로 제형화시켜 투여할 수 있으며, 상기 제제는 1회 또는 수회 투여에 의해 효과적인 투여량을 포함할 수 있다. 이러한 목적에 적합한 제형으로는 비경구투여 제제로서 주사용 앰플과 같은 주사제, 주입 백과 같은 주입제, 및 에어로졸 제제와 같은 분무제 등이 바람직하다. 상기 주사용 앰플은 사용 직전에 주사액과 혼합하여 조제할 수 있으며, 주사액으로는 생리식염수, 포도당, 만니톨, 링거액 등을 사용할 수 있다. 또한 주입 백은 염화폴리비닐 또는 폴리에틸렌 재질의 것을 사용할 수 있으며, 박스터(Baxter), 벡톤 디킨슨(Becton Dickinson), 메드셉(Medcep), 내셔날 호스피탈 프로덕츠(National Hospital Products) 또는 테루모(Terumo) 사의 주입 백을 예시할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물에는 유효성분인 지방-유래 줄기세포 이외에 하나 또는 그 이상의 약학적으로 허용가능한 통상의 불활성 담체 및 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용되는 담체 및 희석제는 줄기세포 및 이를 이식받을 수혜자에 대해 생물학적 및 생리학적으로 친화적인 것일 수 있다. 희석제로는 염수, 수용성 완충액, 용매 및/또는 분산제를 들 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 이 외에도, 예를 들면, 주사제의 경우에는 보존제, 무통화제, 가용화제 또는 안정화제 등을, 국소투여용 제제의 경우에는 기제(base), 부형제, 윤활제 또는 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
이렇게 제조된 본 발명의 약학적 조성물은 본 기술분야에서 통상적으로 사용하는 투여방법을 이용하여 이식 및 기타 용도에 사용되는 다른 줄기세포와 함께, 또는 그러한 줄기세포와의 혼합물의 형태로 투여될 수 있으며, 바람직하게는 정맥주사를 통해 전신에 투여될 수 있다. 또한, 상기 투여는 주사기를 이용한 투여, 카테터를 이용한 비외과적 투여 및 질환부위 절개 후 주입 또는 이식 등 외과적 투여방법 모두 가능하지만, 주사기를 이용한 통상적인 투여가 보다 바람직하다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 비경구 투여를 위한 제제는 증류수, 0.05∼1%(w/v)의 염화나트륨(NaCl), 1∼100㎍/㎖의 아스코르브산, 0.01∼5%(v/v)의 인간 알부민 및 0.1∼5mM의 글루타민으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함할 수 있다. 투여 단위는, 예를 들면 개별 투여량의 1, 2, 3 또는 4배로, 또는 1/2, 1/3 또는 1/4배로 함유할 수 있다. 개별 투여량은 유효 약물이 1회에 투여되는 양을 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4배에 해당한다.
본 발명의 약학적 조성물의 인체 투여량은 치료하고자 하는 질환, 질환의 중증도, 투여경로, 환자의 체중, 연령 및 성별 등의 여러 관련 인자에 비추어 적절히 선택될 수 있으며, 성인에게 1×105∼10×109 세포수, 바람직하게는 1×107∼5×108 세포수, 더욱 바람직하게는 5×107∼3×108 세포수의 인체 지방-유래 줄기세포가 1 내지 6회 나누어 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은 지방조직을 줄기세포 배양용 배지로 배양함으로써 지방-유래 줄기세포를 제조하는 방법을 제공한다.
상기 지방조직은 인체 유래, 특히 피하지방 제거 시술을 받은 환자로부터 제거되어 버려지는 지방조직인 것이 바람직하지만 이에 한정되는 것은 아니며, 경우에 따라 인간 이외의 포유동물로부터 유래된 지방조직도 제한없이 사용할 수 있다.
상기 줄기세포 배양용 배지는 DMEM을 기본 배지로 하는 것이 바람직하지만 이에 한정되는 것은 아니며, 시판되는 또는 종래 공지된 임의의 세포 배양용 배지가 제한없이 사용될 수 있다. 이러한 시판되는 또는 종래 공지된 배지의 다른 예로는 McCoys 5A 배지, Eagle's basal 배지, CMRL 배지, Glasgow 최소 필수 배지, Ham's F-12 배지, Iscove's modified Dulbecco's 배지, Liebovitz' L-15 배지, RPMI 1640 배지, Keratinocyte-SFM, MEM 등을 들 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 기본 배지, 예컨대 DMEM 배지에는 FBS, 아스코르브산, 에스트라디올, 하이드로코티손, EGF, FGF, IGF 및 PDGF로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 인자들이 소정의 농도로 포함되는 것이 바람직하다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 인체 지방-유래 줄기세포를 얻기 위한 배양용 배지는 DMEM 배지에 1∼20%(v/v)의 FBS, 0.1∼500ng/㎖의 인슐린, 1∼100㎍/㎖의 아스코르브산, 0.1∼10ng/㎖의 에스트라디올, 0.1∼100ng/㎖의 하이드로코티손, 0.1∼200ng/㎖의 EGF, 0.1∼200ng/㎖의 FGF, 0.1∼200ng/㎖의 IGF 및 0.1∼200ng/㎖의 PDGF가 포함될 수 있다. 보다 바람직하게는, 인체 지방-유래 줄기세포를 얻기 위한 배양용 배지는 DMEM 배지에 1∼20%(v/v)의 FBS, 0.1∼500ng/㎖의 인슐린, 1∼100㎍/㎖의 아스코르브산, 0.1∼10ng/㎖의 에스트라디올, 0.1∼100ng/㎖의 하이드로코티손, 1∼200㎍/㎖의 EGF, 0.1∼100ng/㎖의 FGF, 0.1∼100ng/㎖의 IGF 및 0.1∼100ng/㎖의 PDGF가 포함될 수 있다. 더욱 바람직하게는, 인체 지방-유래 줄기세포를 얻기 위한 배양용 배지는 DMEM 배지에 1∼20%(v/v)의 FBS, 1∼100ng/㎖의 인슐린, 1∼100㎍/㎖의 아스코르브산, 0.1∼10ng/㎖의 에스트라디올, 0.1∼100ng/㎖의 하이드로코티손, 1∼50ng/㎖의 EGF, 1∼50ng/㎖의 FGF, 1∼50ng/㎖의 IGF 및 0.1∼50ng/㎖의 PDGF가 포함될 수 있다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 상기 배양용 배지는 필요에 따라 소정 농도, 예컨대 1%(v/v) 농도의 페니실린/스트렙토마이신이 보충될 수도 있다. 또한, 상기 배양용 배지는 첨가제로 보충될 수 있다. 일반적으로, 상기 배양용 배지는 등장액 중의 중성 완충제(예컨대, 인산염 및/또는 고농도 중탄산염) 및 단백질 영양분(예를 들면, FBS, 말 또는 사람 혈청, 혈청 대체물 또는 알부민 등의 혈청, 또는 글루타민 등의 필수 아미노산 및 비필수 아미노산)을 함유할 수 있다. 아울러, 상기 배양용 배지는 지질(지방산, 콜레스테롤, 혈청의 HDL 또는 LDL 추출물) 및 이 종류의 대부분의 보존액 배지에서 발견되는 기타 성분(예컨대, 인슐린 또는 트랜스페린, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드, 피루빈산염, 임의의 이온화 형태 또는 염인 당원, 예컨대 글루코스, 셀레늄, 글루코코르티코이드, 예컨대 히드로코르티존 및/또는 환원제, 예컨대 β-머캅토에탄올)을 함유할 수 있으며, 미생물의 오염을 막기 위한 항생제 및 항진균제 등을 첨가할 수도 있다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 상기 지방-유래 줄기세포는 세포의 표면마커 중에서 양성 마커인 CD73, CD90 및 CD105(95% 이상)는 발현되고, 음성 마커인 CD14, C31, CD34, CD45 및 HLA-DR(5% 이하)은 발현되지 않는 것을 특징으로 한다.
상기 지방조직이 포함된 세포 배양용 배지는 통상의 세포 배양 조건, 예컨대 37℃, 5% CO2 조건 배양될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 지방-유래 줄기세포를 함유하는 조성물은 육안병변, 조직학적 검사, IgE 및 관련 사이토카인 측정 등에서 아토피 피부염의 예방 또는 치료에 탁월한 효과가 있으며, 종래 사용되고 있는 스테로이드 계열 치료제는 고농도, 장기간 사용시 부작용이 발생할 수 있는 문제점이 있지만, 본 발명의 약학적 조성물은 중간엽 줄기세포인 인체 지방-유래 줄기세포가 가진 고유 기능인 면역 조절 능력으로 인해 면역 부작용을 유발하지 않는다는 점에서 아토피 피부염과 같은 난치성 면역질환 또는 염증 질환의 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.
도 1은 인체 지방에서 분리한 줄기세포를 배양한 후 현미경으로 외관을 관찰한 사진이다.
도 2는 인체 지방-유래 줄기세포를 수득한 후, 유세포 분석기(Flow cytometry, FACS)로 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 3a는 아토피 피부염 유발 마우스에 인체 지방-유래 줄기세포를 정맥 투여 하는 동물실험 모델의 실험 일정을 나타낸 도면으로서, 하나의 직선상에 아토피 유발 연고를 처리한 시기, 본 발명의 줄기세포를 처리한 시기를 나타내었다.
도 3b는 본 발명의 약학적 조성물을 투여한 후 0주, 1주 및 2주에서의 아토피 병변 정도를 측정 결과를 보여주는 그래프이다.
도 3c는 본 발명의 약학적 조성물을 투여한 후 35일 차의 아토피 병변 정도를 측정한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 4는 상기 아토피 피부염 유발 마우스에 지방-유래 줄기세포를 정맥 투여한 후 표피 두께(epidermal thickness)를 조직학적 분석법으로 확인한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 5는 아토피 피부염 유발 마우스에 지방-유래 줄기세포를 정맥 투여한 후의 림프구 침투(Lymphocyte Infiltration) 정도를 조직학적 분석법으로 확인한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 6은 상기 아토피 피부염 유발 마우스에 지방-유래 줄기세포를 정맥 투여한 후 비만세포 탈과립(Mast Cell Degranulation)의 정도를 조직학적 분석법으로 확인한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 7은 아토피 피부염 유발 마우스에 지방-유래 줄기세포를 정맥 투여한 후 IgE 농도 억제 효과를 보여주는 그래프이다.
이하, 본 발명을 실시예를 통해 더욱 상세히 설명한다.
그러나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 인체 지방 유래 줄기세포의 수득
피하지방 제거 시술을 받은 환자로부터 동의를 얻고, 해당 환자로부터 지방흡인(liposuction) 방법을 통해 제거되어 버려지는 지방조직을 수거하였다. 지방조직의 세포외기질을 약 37℃ 배양기에서 30분 동안 콜라게나아제(collagenase)로 처리한 후, 원심분리하여 스트로마성 혈관 분획을 수득하였다. 얻어진 분획을 세척하고 세포 파편과 단핵 세포를 분리하였다. 분리된 단핵 세포를 10%(v/v) FBS, 1%(v/v) 페니실린/스트렙토마이신으로 보충된 DMEM을 배지로 사용하여 약 37℃, 약 5% CO2 배양기에서 배양시켜 인체 지방-유래 줄기세포를 수득하였다.
실시예 2. 줄기세포의 배양
실시예 1에서 얻어진 1.5×105 세포의 인체 지방-유래줄기세포를 증식하기 위한 배양용 배지로서 DMEM을 기본 배지로 하고, 여기에 주요 배지 성분으로서 다음과 같은 성분을 첨가하여 사용하였다: 10%(v/v)의 FBS, 10ng/㎖의 인슐린, 10㎍/㎖의 아스코르브산, 0.5ng/㎖의 에스트라디올, 1ng/㎖의 하이드로코티손, 1∼100ng/㎖의 EGF, 1∼100ng/㎖의 FGF, 1∼100ng/㎖의 IGF 및 1∼100ng/㎖의 PDGF. 또한, 1,000㎎/ℓ의 D-글루코스, 584 ㎎/ℓ의 L-글루타민 및 110㎎/ℓ의 나트륨 피루베이트 10%(v/v)를 페니실린-스트렙토마이신이 보충된 DMEM 배지에 가하고, 약 90%의 습도 및 약 37℃ 온도 조건 하에서 5% CO2 배양기에서 배양하였다.
실시예 3. 인체 지방-유래 줄기세포의 유세포 분석
실시예 2에서 제4 계대 후 얻어진 인체 지방-유래 줄기세포의 표면 항원을 유세포 분석기를 사용하여 분석하였다. 이를 위하여, 인체 지방-유래 줄기세포에 대해 알려진 양성 표면마커인 CD73, CD90 및 CD105와 음성 표면마커인 CD34 및 CD45를 각각에 처리한 다음, 상온 중에 30분 동안 암소에서 방치하였다. 상기 인체 지방-유래 줄기세포를 FACS 완충액 500㎕에 재현탁시키고, 유세포 분석기 시험관에 옮긴 다음, 유세포 분석을 실시하였다.
그 결과, 실시예 2에서 얻어진 인체 지방-유래 줄기세포는 보고된 바와 같이 CD73, CD90 및 CD105에 대해서는 양성이었고, CD34 및 CD45에 대해서는 음성이었다(도 2). 따라서, 실시예 2에서 얻어진 세포는 중간엽 줄기세포의 특성을 가짐을 알 수 있었다.
실시예 4. 인체 지방-유래 줄기세포의 아토피 피부염 치료 활성 평가
(1) 외형적 변화에 대한 평가
실험에 사용한 동물은 아토피 피부염 발현 생쥐(NC/Nga mouse)로서 8주령인 마우스를 구입하고 일주일간의 순화기간을 거친 후 9주령에 실험에 사용하였다. 아토피 피부염을 유발시키기 위하여 첫 유발일은 NC/Nga 마우스의 등쪽, 귓바퀴 윗부분까지 최대한 제모기로 제모를 한 후 제모 크림을 이용하여 털을 완벽히 제거하였다. 제모크림으로 제거한 후 1일째부터 평편한 스틱을 이용하여 집먼지 진드기 추출물 Df(Dermatophagoides farinae)를 함유하는 아토피 유발연고 100㎎을 등 쪽, 귓바퀴부분에 균일하게 도포하였다. 두 번째 유발일부터는 NC/Nga 마우스의 등 쪽, 귓바퀴 윗부분까지 다시 자란 털을 최대한 제모기로 제모한 후, 도포 부위에 4% SDS 수용액(150㎕)을 분무하고 헤어드라이기의 시원한 바람으로 완전히 건조시킨 후, 상기 아토피 유발연고 100㎎을 동일한 부위에 균일하게 도포하였다. 아토피 유발연고의 도포는 주 2회로 3주간 총 6회를 실시하여 아토피 피부염 질환 마우스 모델을 확립하였으며, 21일째 인체 지방-유래 줄기세포를 주사기 이용해 정맥 투여하고 시간에 따른 아토피 증상을 관찰하였다.
인체 지방-유래 줄기세포의 효과를 판정하기 위하여 제1군은 인산화 완충 식염수(phosphate buffered saline, PBS)를 투여한 대조군으로 마우스 10마리를 처리하고, Df에 의해 약 3주 후 아토피 피부염이 충분히 유발된 마우스 45마리를 선별한 후, 각각 7∼10마리씩 2, 3, 4, 5, 6군으로 나누어 제2군은 Df를 계속 도포한 아토피 피부염 유발 대조군으로 하고, 제3군은 양성대조군인 프리드니솔론 투여군(PDS, 3㎎/㎏), 제4군은 섬유아세포 투여군(FB, 마리당 2×105 세포), 제5군은 인체 지방-유래 줄기세포 저용량 투여군(AD-low, 마리당 2×105 세포) 및 제 6군은 인체 지방-유래 줄기세포 고용량 투여군(AD-high, 마리당 2×106 세포)으로 하였다. 이때, 정상군의 경우 아무 처리를 하지 않았고, 대조군의 경우 아토피 피부염 유발 후 동량의 증류수를 처리하여 각 시험 물질의 아토피 개선 효능을 평가하였다. 인체 지방-유래 줄기세포를 이용한 동물실험모델 일정은 도 3a에 나타내었다.
아토피 피부염 유발 마우스에 인체 지방-유래 줄기세포를 투여한 후 날짜별로 측정한 결과 시간이 지남에 따라 인체 지방-유래 줄기세포를 정맥투여한 마우스에서 아토피 피부염 증상이 더 호전되었고, 이때 그 세포수가 많은 조건에서 그 효과가 더 크게 나타나는 것을 확인하였다(도 3b 및 도 3c).
이를 조직학적으로 분석한 결과 표피의 두께는 아토피 유발 마우스에서는 약 180㎛로 측정되었고, 본 발명의 인체 지방-유래 줄기세포를 투여한 마우스에서는 약 115㎛로 두께가 감소한 것을 확인할 수 있었다(도 4).
또한, 실험동물을 안락사시키고, 부검시 아토피 피부염 병변 조직 부위를 확보하고 4% 파라포름알데히드(paraformaldehyde)에 조직을 고정시킨 후, 파라핀으로 H&E(hematoxylin & eosin) 및 톨루이딘 블루(toluidine blue)로 염색시키고 공초점현미경 시스템을 이용하여 분석한 경과, 림프구의 침투 정도는 아토피 유발 마우스에서는 약 3으로 측정되었고, 인체 지방-유래 줄기세포를 투여한 마우스에서는 약 1.5로 감소하였다(도 5). 아울러, 피부조직을 파라핀 포매한 후 톨루이딘 블루(toluidine blue) 염색법을 통하여 공초점 현미경으로 확인한 결과, 비만세포 탈과립 정도는 아토피 유발 마우스에서는 약 15로 측정되었고, 인체 지방-유래 줄기세포를 투여한 마우스에서는 약 10으로 감소하는 것을 확인하였다(도 6).
(2) IgE 농도억제 효과
정맥 투여 실험 종료 후, 마우스의 꼬리 정맥으로부터 혈액을 채취하여 급성면역질환에 관여하는 혈중 IgE 농도를 IgE ELISA 키트(Shibayagi Co., Ltd., Gunma Japan)를 사용하여 측정하였다. 이를 위하여, NC/Nga 마우스로부터 채취한 혈액을 6,000rpm으로 20분 동안 원심분리하여 혈청을 얻었다. 혈청내 총 IgE는 마우스 IgE ELISA 키트(Biolegnd. Inc. San Diego. USA)를 사용하고, 분광광도계(Spectrophotometer)를 이용하여 450㎚에서의 광학도(optical density; O.D)로 측정하였다.
그 결과, Df를 처리한 실험군에서는 대조군에 비해 통계적으로 유의하게 IgE의 농도가 약 13,000ng/㎖이 측정되었고, 인체 지방-유래 줄기세포를 투여한 실험군에서는 약 7000∼8000ng/㎖로 측정되었으며(도 7), 이로부터 인체 지방-유래 줄기세포를 저용량 또는 고용량 처리할 경우 음성대조군보다 절반 정도 IgE의 농도가 줄어드는 경향이 있음을 확인하였다.
상기 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 아토피 피부염 유발 동물모델에서 인체 지방-유래 줄기세포를 정맥투여한 후 시간에 따라 아토피 피부염의 증상이 좋아졌으며, 이는 본 발명에 따른 인체 지방-유래 줄기세포가 아토피 피부염으로 생긴 상처치료와 면역학적 염증 반응을 억제하여 아토피 피부염의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 나타낸다.
실시예 5. 인체 지방-유래 줄기세포를 포함하는 세포치료제 제조
인체 지방-유래 줄기세포를 생리식염수에 첨가하여 잘 혼합한 후 냉장상태에서 24시간까지 안정성 및 생존율 등의 본 실험에 적용하였고, 그 결과 안전성에 문제점이 나타나지 않음을 확인하여 처방으로 제품 사용이 가능한 기본 처방으로 결정하였다.
제조예 1. 인체 지방-유래 줄기세포를 포함하는 약학적 조성물의 제조
인체 지방-유래 줄기세포 3×108 세포를 생리식염수에 넣어 주사제를 조제하였다. 인체 지방-유래 줄기세포의 함량을 변경함으로써, 10 ㎖ 중의 함유량이 1×105∼10×109 세포수인 주사제를 조제할 수 있다.

Claims (16)

  1. 지방-유래 줄기세포 또는 상기 지방-유래 줄기세포의 배양물을 함유하는 정맥혈관 투여를 통한 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 지방-유래 줄기세포는 인체 지방-유래 줄기세포인 약학적 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서,
    상기 지방-유래 줄기세포는 세포의 표면마커 중에서 CD73, CD90 및 CD105는 발현되고, CD14, C31, CD34, CD45 및 HLA-DR은 발현되지 않는 약학적 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서,
    상기 인체 지방-유래 줄기세포는 1×105∼10×109 세포수의 범위로 포함되는 약학적 조성물.
  5. 청구항 4에 있어서,
    상기 인체 지방-유래 줄기세포는 5×107∼3×108 세포수의 범위로 포함되는 약학적 조성물.
  6. 청구항 1에 있어서,
    상기 지방-유래 줄기세포의 배양물은 EGF(epidermal growth factor), VEGF(vascular endothelial growth factor), HGF(hepatocyte growth factor), TGF(transforming growth factor), PDGF(platelet-derived growth factor) 및 bFGF(basic fibroblast growth factor)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 세포성장인자를 포함하는 약학적 조성물.
  7. 청구항 6에 있어서,
    상기 지방-유래 줄기세포의 배양물은 1∼10ng/㎖의 EGF, 0.1∼100ng/㎖의 VEGF, 0.01∼10ng/㎖의 HGF, 1∼100pg/㎖의 TGF, 0.01∼10ng/㎖의 PDGF 및 0.01∼20ng/㎖의 bFGF를 포함하는 약학적 조성물.
  8. 청구항 6에 있어서,
    상기 지방-유래 줄기세포의 배양물은 줄기세포에서 분비된 성장인자, 사이토카인 및 케모카인을 추가로 포함하는 약학적 조성물.
  9. 청구항 1에 있어서,
    비경구 투여용 의약품 제제의 형태인 약학적 조성물.
  10. 청구항 9에 있어서,
    상기 비경구 투여용 의약품 제제는 증류수, 0.05∼1%(w/v)의 염화나트륨, 1∼100㎍/㎖의 아스코르브산, 0.01∼5%(w/v)의 인간 알부민 및 0.1∼5mM의 글루타민으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 약학적 조성물.
  11. 지방조직을 줄기세포 배양용 배지로 배양함으로써 지방-유래 줄기세포를 제조하는 방법.
  12. 청구항 11에 있어서,
    상기 지방조직은 피하지방 제거 시술을 받은 환자로부터 제거되어 버려지는 지방조직인 방법.
  13. 청구항 11에 있어서,
    상기 줄기세포 배양용 배지는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지에 1∼20%(v/v)의 FBS, 0.1∼500ng/㎖의 인슐린, 1∼100㎍/㎖의 아스코르브산, 0.1∼10ng/㎖의 에스트라디올, 0.1∼100ng/㎖의 하이드로코티손, 0.1∼200ng/㎖의 EGF, 0.1∼200ng/㎖의 FGF, 0.1∼200ng/㎖의 IGF 및 0.1∼200ng/㎖의 PDGF가 포함된 배지인 방법.
  14. 청구항 13에 있어서,
    상기 줄기세포 배양용 배지는 DMEM 배지에 1∼20%(v/v)의 FBS, 1∼100ng/㎖의 인슐린, 1∼100㎍/㎖의 아스코르브산, 0.1∼10ng/㎖의 에스트라디올, 0.1∼100ng/㎖의 하이드로코티손, 1∼50ng/㎖의 EGF, 1∼50ng/㎖의 FGF, 1∼50ng/㎖의 IGF 및 0.1∼50ng/㎖의 PDGF가 포함된 배지인 방법.
  15. 청구항 11에 있어서,
    상기 줄기세포 배양용 배지는 1%(v/v) 농도의 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 배지인 방법.
  16. 청구항 11에 있어서,
    상기 지방-유래 줄기세포는 세포의 표면마커 중에서 CD73, CD90 및 CD105는 발현되고, CD14, C31, CD34, CD45 및 HLA-DR은 발현되지 않는 방법.
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190003383A (ko) * 2017-06-30 2019-01-09 주식회사 엑소코바이오 지방줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물의 피부염 개선 용도
JP2020532489A (ja) * 2017-06-30 2020-11-12 エクソコバイオ インコーポレイテッド 幹細胞由来のエキソソームを有効成分として含む組成物のかゆみの抑制又は改善の用途
EP3639832A4 (en) * 2017-06-30 2021-04-21 Exocobio Inc. USE OF A COMPOSITION INCLUDING AN EXOSOME DERIVED FROM ADIPEOUS STEM CELLS AS AN ACTIVE INGREDIENT TO REDUCE DERMATITIS
KR20230020250A (ko) 2021-08-03 2023-02-10 서울대학교병원 스컬캅플라본 ii 또는 이의 유도체를 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130096661A (ko) 2012-02-22 2013-08-30 주식회사 강스템홀딩스 줄기세포를 유효 성분으로 함유하는 면역 질환 또는 염증 질환의 예방 또는 치료용 조성물

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130096661A (ko) 2012-02-22 2013-08-30 주식회사 강스템홀딩스 줄기세포를 유효 성분으로 함유하는 면역 질환 또는 염증 질환의 예방 또는 치료용 조성물

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Djouad F. et al., Blood (2003) 102(10), 3837-3844
Massimo Di Nicola, et al., Blood, (2002) 99(10), 3838-3843
Ohno, et al., J. Derm. Sci. (1995) 10, 241-245
Rasmusson I, et al., Transplantation (2003) 76(8), 1208-1213

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190003383A (ko) * 2017-06-30 2019-01-09 주식회사 엑소코바이오 지방줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물의 피부염 개선 용도
JP2020532489A (ja) * 2017-06-30 2020-11-12 エクソコバイオ インコーポレイテッド 幹細胞由来のエキソソームを有効成分として含む組成物のかゆみの抑制又は改善の用途
EP3639832A4 (en) * 2017-06-30 2021-04-21 Exocobio Inc. USE OF A COMPOSITION INCLUDING AN EXOSOME DERIVED FROM ADIPEOUS STEM CELLS AS AN ACTIVE INGREDIENT TO REDUCE DERMATITIS
US11612621B2 (en) 2017-06-30 2023-03-28 Exocobio Inc. Use of composition comprising exosome derived from adipose-derived stem cell as effective ingredient in ameliorating dermatitis
KR20230020250A (ko) 2021-08-03 2023-02-10 서울대학교병원 스컬캅플라본 ii 또는 이의 유도체를 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물

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