KR20110006388A

KR20110006388A - 진피 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 피부 질환 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20110006388A
Application number: KR1020090063994A
Authority: KR
Inventors: 마진열; 전원경; 이재훈
Original assignee: 한국 한의학 연구원
Priority date: 2009-07-14
Filing date: 2009-07-14
Publication date: 2011-01-20
Also published as: KR101115503B1

Abstract

본 발명은 진피(秦皮, Fraxini Cortex) 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 피부 질환 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명에 따른 진피 추출물은 면역글로불린 E(Ig E)를 감소시키는 효과 및 항산화 효과가 있으며 세포 독성이 거의 없어 아토피 피부염으로 대표되는 과민성 피부 질환의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

진피, 과민성 피부 질환, 알러지성 피부 질환, 아토피 피부염

Description

진피 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 피부 질환 예방 및 치료용 조성물{The composition for prevention and treatment of hypersensitive skin disease containing Fraxini Cortex Extract as an active ingredient}

본 발명은 과민성 피부 질환 치료제에 관한 것이다.

과민성(hypersensitive)이란 한번 이상의 항원 노출에 과도한 반응을 나타내는 것으로 일반적으로 알러지(allergy)란 말과 동일한 의미로 사용된다. 알러지(allergy)란 용어는 1906년 프랑스 학자 피케르가 처음으로 사용하였는데 대부분의 사람에게서 아무런 문제도 일으키지 않는 물질이 어떤 사람에게는 두드러기나 천식 등의 이상 과민 반응을 일으키는 것을 말한다. 과민성 피부질환(알러지성 피부 질환)은 원인이 외부로부터 피부에 접촉하여 일어나는 외인성 알러지성 피부 질환과 체내로 섭취되거나 체내의 신진 대사 및 병변에 의해 발생되는 내인성 알러지성 피부 질환으로 분류할 수 있고, 크게 접촉 두드러기(Contact urticaria), 접촉 피부염(Contact dermatitis) 및 아토피 피부염(atopic dermatitis)을 포괄한다. 접촉 두드러기는 물질에 접촉한 후 즉시 또는 수 분 내에 접촉한 피부 부위에 두드러기가 발생하는 질환으로 면역기전이 관여되는 알레르기성 뿐 아니라 비알레르기성 접촉 두드러기도 일어날 수 있다. 특히 접촉 두드러기는 기관지 천식이나 알레르기성 비염이 같이 동반되기도 한다.

접촉 피부염은 특정한 사람이 알레르기성 접촉피부염을 일으키는 데는 오랜 시간이 걸리는 것으로 정상적 인에게는 피부병을 일으키지 않으나 특정물질에 감작된 사람에게는 피부염을 일으킨다. 알레르기성 접촉 피부염을 일으키는 물질의 대부분 유기 화합물이다. 일단 이와 같은 물질들에 감작된 피부에 재차 접촉하게 되면 기억세포가 이를 감지하여 여러 화학 물질이 분비되어 염증을 일으키는 것으로 생각되고 있다. 접촉피부염은 접촉부위에 국한되는 경우가 많으므로 물질을 확인하는데 있어 부위확인이 매우 중요하다고 볼 수 있다. 아토피성 피부염의 원인은 아직까지 확실하게 규명되지 못하고 있으며, 증상도 피부건조, 습진 등으로 다양하게 표현된다.

아토피 피부염은 태열(胎熱)이라고도 하며, 피부의 만성적인 질환, 천식, 건초열(乾草熱)과 같은 알러지 질환과 동반하여 나타난다. 아토피 피부염은 알러지성 습진, 소아 습진, 굴전부 습진, 범발 신경 피부염 등으로도 불리며, 유아 습진에서부터 소년기, 사춘기, 성인에 나타나는 전형적인 태선화 피부염(lichenification)에까지 이르는 임상 및 조직학적 진행 과정을 보여주는 임상 범주의 질환이다. 원인은 자세히 알려지지 않았으나, 이 질환의 원인으로는 현재까지 알러지와 관련된 면역글로불린(Immunoglobulin)인 Ig E 증가에 따른 면역학적 결핍에 의하거나, T 림프구의 기능적 결여 등의 설이 가장 유력하다. 알러지를 일으키는 물질인 알러젠(allergen)이 호흡기, 소화기, 피부를 통해 체내에 들어오면 백혈구의 일종인 임파구(T-임파구와 B-임파구)가 작동해 Ig E 항체를 생성하고, Ig E는 점막이나 피부의 비만세포(mast cell)에 부착하게 된다. 이 때, Ig E가 낮으면 특이 항체에 대한 과민 면역반응을 일으키지 않으나 Ig E가 높으면 조직 내의 비만세포로부터 히스타민(histamine)이 분비되어 염증을 일으키게 되는 것이다. 면역제품들은 대부분 Ig E의 과잉면역을 억제하는 T-세포를 활성화시킴으로써 비만세포로부터 히스타민 분비를 억제한다. 아토피 피부염 환자들의 80% 이상에서 혈청 Ig E치가 증가되어 있으며, 이 수치는 대체적으로 아토피 피부염의 임상적 중증도와 비례한다.

아토피 피부염의 또 다른 원인으로 활성 산소를 들 수 있다. 활성 산소는 인체 산소 자유 라디칼(oxygen free radical) 및 이것으로부터 파생된 여러 가지 산소 화합물들을 의미한다. 피부 세포에서 과다 발생한 활성산소가 콜레스테롤이나 중성 지방 등과 결합하여 과산화지질이 생성되면, 세포의 내부에 침투되며, 일단 침투되면 쉽게 배출되지 않고, 세포를 파괴한다. 결과적으로, 과산화지질에 의해 피부 각질층의 보습기능을 빼앗겨 진드기, 집 먼지, 접촉성 자극 등에 민감해져 아토피성 피부염이 쉽게 발생하는 것이다. 아토피 피부염의 합병증으로는 환부의 이차적인 세균감염, 약물 부작용에 대한 감수성이 증가, 곰팡이류나 바이러스 등의 감염에 대한 저항력 감소 등을 들 수 있다.

현재 세계적으로 아토피 피부염 환자의 수는 약 20% 정도로 추산되며, 어린 이의 경우는 5~10%가 고통 받고 있다. 증상이 나타나는 시기는 대체로 생후 2~6개월 내이며, 특히 1세 미만의 영아에게서 가장 많이 나타나고, 85%가 만 다섯 살 내에 나타난다. 환자의 50%는 2세가 되기 전에 그 증상이 없어지므로 어릴 때 잠시 앓는 병이라고 알려져 있으나, 환자의 25%는 청소년기까지 그 증상이 지속되며, 나머지 25%는 성인이 되어도 없어지지 않고 계속된다.

아토피 피부염을 포함하는 각종 과민성 피부 질환은 환경적 요인으로 인해 환자의 수가 증가 추세에 있다. 질환을 치료하는 가장 좋은 방법은 알러젠을 제거하는 것이나 알러젠을 제거하는 것이 불가능하기 때문에 면역계 B 림프구에서 Ig G는 높이고 Ig E는 낮추거나 비만세포부터 히스타민 분비를 낮추기 위한 약물치료를 받는 것이 보편적인 방법이다. 또는 소양감을 경감시키거나 2차 감염을 방지하기 위해 스테로이드제 또는 항생제를 이용한 치료제를 이용하였는데, 치료 당시에는 효과가 나타나지만 투여를 중단하거나 치료 강도를 약하게 하면 부작용이 나타나므로 기본적인 치료가 되지 않고 있는 실정이다. 이외에도 민간요법을 이용한 여러 방법이 사용되고 있으나 현상유지만 가능하거나 임시방편으로만 가능할 뿐 근본치료는 되지 않고 있다. 이에 따라 부작용이 없고 질환의 근본치료가 가능한 천연 생약제제를 이용한 새로운 치료제의 개발을 필요로 하고 있다.

진피(秦皮, Fraxini Cortex)는 물푸레나무과(Oleaceae)의 물푸레나무(Fraxinus chinensis Roxb .)의 수피를 건조한 것을 말한다. 한방에서 신경통, 안충혈, 부종 등에 약재로 사용하며, 수피에 에스쿨린(esculin), 만니 톨(mannitol), 프랙신(fraxin), 에스쿨레틴(esculetin), 프랙세틴(fraxetin) 등의 성분이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다(육창수, 생약도감, 도서출판 경원; p421, 1997). 그러나 아토피 피부염 등의 과민성 피부 질환의 치료에 적용된 예는 없는 실정이다.

이에, 본 발명자들은 세포 독성이 없고, 치료 효과가 좋은 한약재들의 생리 활성을 연구하던 중 진피 추출물이 Ig E를 감소시키며, 환원력이 있어 항산화 효과를 나타내며, 면역 세포의 증식을 촉진하는 효과를 동시에 지니고 있으므로 아토피 피부염으로 대표되는 과민성 피부 질환 치료에 유용하게 이용될 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 진피(秦皮, Fraxini Cortex) 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 피부 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 진피 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 피부 질환 예방, 개선 및 치료용 기능성 화장품을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 진피 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 피부 질환 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 진피(秦皮, Fraxini Cortex) 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 피부 질환 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 진피 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 피부 질환 예방, 개선 및 치료용 기능성 화장품을 제공한다.

아울러, 본 발명은 진피 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 피부 질환 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 진피(秦皮, Fraxini Cortex) 추출물은 항산화 효과를 지니고 있으며, 과민성 질환의 대표 인자인 Ig E를 감소시키고, 세포 독성이 없으므로 아토피 피부염으로 대표되는 과민성 피부 질환의 치료에 효과적으로 이용될 수 있다.

본 발명은 진피(秦皮, Fraxini Cortex) 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 피부 질환 예방 및 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 진피 추출물은 세포 독성이 없고, Ig E의 생성을 감소시키며, Fe³ ⁺을 Fe² ⁺로 환원시키는 항산화 효과가 있다(표 1 참조).

이에, 본 발명에 따른 진피 추출물은 아토피 피부염으로 대표되는 과민성 피 부 질환의 예방, 개선 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

본 발명에 따른 진피 추출물은 물, C₁~C₄의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 제조될 수 있다. 상기 C₁~C₄의 알콜은 바람직하게는 에탄올 또는 메탄올, 더욱 바람직하게는 메탄올이다. 추출 방법은 상기 용매를 사용하여 냉침, 온침, 가열 등 통상의 추출방법이 가능하다. 이때, 증류수 추출은 고온에서 열탕추출과정을 거치는 것이 바람직하며 알코올 및 에틸 아세테이트 추출은 상온에서 추출작업을 거치는 것이 바람직하며, 추출액을 진공회전증발기를 이용하여 감압농축하고 동결 건조하여 분말상태의 한약재 추출물을 제조할 수 있다. 또한, 추출에 사용되는 진피의 양은 0.5-1 g/㎖인 것이 바람직하다.

또한, 상기 과민성 피부 질환은 접촉 두드러기, 접촉 피부염 및 아토피 피부염으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

또한, 상기 진피 추출물은 Ig E의 생성을 저하시키고, 항산화 활성을 가지며, 세포 독성이 없다.

또한, 본 발명의 조성물은 목욕용품, 비누, 의약품 연고류, 동물 의약품 또는 팩 제품의 원료로 사용하는 것이 가능하다.

상기 조성물은 바람직하게는 약학적 조성물이며, 상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다.

상기 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 붕해제로는 전분글리콜산나트륨, 크로스포비돈, 크로스카멜로스나트륨, 알긴산, 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 카르복시 메틸셀룰로오스 나트륨, 키토산, 구아검, 저치환도히드록시프로필셀룰로오스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 폴라크릴린 칼륨 등이 있다. 또한, 상기 조성물은 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨, 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1~90 중량부 포함되는 것이 바람직하다.

경구투여를 위한 고형제제에는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질캅셀제, 환 등이 포함된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 에어로졸 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 멸균된 수용액, 액제, 비수성용제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 좌제, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

과민성 피부 질환을 효과적으로 치료하기 위해서는 적합한 외용제형을 선택하는 것이 중요하다. 과민성 피부 질환을 치료하기 위해 진피 추출물을 적당히 희석하여 피부에 직접 도포할 수도 있으며, 본 발명의 과민성 피부 질환 예방 및 치료용 조성물이 환부에 효과적으로 적용될 수 있도록 연고제로 제조할 수 있다. 상기 연고제는 본 발명의 과민성 피부 질환 예방 및 치료용 조성물을 무기물질과 배합한 다음, 이를 지용성 기제로 코팅하여 제조한다. 상기 무기물질은 항균성, 소염효과, 표피재생 효과 등이 우수한 소재를 사용하는 것이 바람직하고, 이들의 구체적인 예로는 산화아연, 탄산아연, 산화철 등이 있다. 또한, 수용성 물질인 본 발명의 과민성 피부 질환 예방 및 치료용 조성물을 안전하게 함침 할 수 있는 세라믹 담체를 추가로 사용하는 것이 바람직하다. 상기 세라믹 담체로는 제올라이트, 활석, 석고, 모려분 및 이들의 혼합물이 바람직하게 사용된다. 이러한 세라믹 담체는 수용성 성분의 함침성이 우수하여 피부에 수용성 성분의 공급을 원활히 할 수 있다.

상기 조성물의 바람직한 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증 정도에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 kg당 본 발명의 조성물을 1일 0.0001 내지 100 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 과민성 피부 질환 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 진피 추출물은 세포 독성이 없고, Ig E의 생성을 감소시키며, Fe³ ⁺을 Fe² ⁺로 환원시키는 항산화 효과가 있으므로, 아토피 피부염으로 대표되는 과민성 피부 질환의 예방 및 치료용 기능성 화장품으로 유용하게 이용될 수 있다.

상기 기능성 화장품으로는 로션, 연고, 겔, 크림, 패치 또는 분무제 등이 있으나 여기에 국한되는 것은 아니다. 본 발명의 기능성 화장품을 제조함에 있어서, 통상적으로 함유되는 피부 외용제 조성물에 본 발명의 진피 추출물이 1 내지 15 중량부, 바람직하게는 2 또는 10 중량부로 첨가할 수 있다. 본 발명의 기능성 화장 품의 피부용 외형제에는 본 발명의 진피 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명에 따른 진피 추출물은 세포 독성이 없고, Ig E의 생성을 감소시키며, Fe³ ⁺을 Fe² ⁺로 환원시키는 항산화 효과가 있으므로, 아토피 피부염으로 대표되는 과민성 피부 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품으로 유용하게 이용될 수 있다.

본 발명의 진피 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 진피 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.

또한, 상기 건강기능식품의 형태 및 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 건강기능식품의 형태는 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등일 수 있고, 건강기능식품의 종류는 버터, 요구르트, 치즈를 포함한 유제품, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 유산균 제제, 발효유, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강기능식품은 통상의 건강기능식품과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01~0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g이다.

상기 외에 본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄 산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 제조예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 제조예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예 및 제조예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 한약재 추출물의 제조

<1-1> 물 추출물

서울시 경동시장 소재 속리산 한약방에서 시판중인 한약재 355 종을 적당한 크기로 세절하여 추출용기에 각 한약재 0.5-1 g과 물 5 ㎖을 가하여 환류 냉각 추출한 다음, 거름종이로 여과하여 추출물을 얻었다. 이후 용매를 감압 농축 및 건조하여 각 한약재의 추출물을 수득하였다(한국화학연구원에서 제공된 재료). 상기 한약재 추출물을 각각 100% DMSO에 녹여 RPMI 1640 배지[RPMI 배지(Gibco, 미국) 418 ㎖, 10× HEPES(Gibco) 7.5 ㎖, 2-메르캅토에탄올(Sigma-aldrich, 미국) 0.5 ㎖, 이탄산 나트륨(Sigma-aldrich) 15 ㎖, 100× 페니실린/스트렙토마이신(Gibco) 5 ㎖, 우태아 혈청(Gibco) 50 ㎖]로 1㎍/㎖ 농도가 되도록 희석하여 실험에 사용 하였다.

<1-2> 메탄올 추출물

추출용매로 물 대신 메탄올을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 <1-1>의 추출방법과 동일하게 추출하여 각 한약재의 추출물을 수득하였다.

<1-3> 에탄올 추출물

추출용매로 물 대신 100% 에탄올을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 <1-1>의 추출방법과 동일하게 추출하여 각 한약재의 추출물을 수득하였다.

<1-4> 에탄올 수용액 추출물

추출용매로 물 대신 70% 에탄올 수용액을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 <1-1>의 추출방법과 동일하게 추출하여 각 한약재의 추출물을 수득하였다.

실시예 2: 세포 독성( Cell cytotoxicity ) 분석

상기 355 가지 한약재의 세포 독성 여부를 크리스탈 바이올렛 염색을 통하여 확인하였다. 즉, 한국세포주은행에서 분양받은 NCTC 클론 929(L-929) 세포주를 RPMI 1640 배지에서 T-75 플라스크(Nunc, 덴마크)에 배양하였다. 트립신-EDTA(Gibco)를 처리하여 세포를 떨어뜨린 후 현미경을 이용하여 세포수를 측정하였 다. 96 웰 플래이트(Nunc)를 이용하여 각 웰에 세포수가 1× 10⁴ 세포가 들어가도록 세포를 10% FBS가 첨가된 RPMI 1640 배지로 희석하여 최종 부피가 100 ㎕가 되도록 분주하였다. CO₂ 배양기에서 24시간 동안 배양한 후 세포가 제대로 안착되었는지 확인하고 배지를 버렸다. 각 한약재 추출물들을 농도에 맞게 각 웰에 처리한 후 10% FBS가 첨가된 RPMI 1640 배지를 이용하여 최종 부피가 100 ㎕가 되도록 하였다. 다시 CO₂ 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배지를 모두 버리고 건조시킨 후 0.5% 크리스탈 바이올렛 용액(crystal violet solution, Sigma-aldrich)을 이용하여 웰에 남아있는 세포를 모두 염색시켰다. 세포를 염색한 후 남은 크리스탈 바이올렛 용액을 모두 버린 후 건조시켰다. 33% 아세트산(Sigma-aldrich)으로 각 웰에 일정량씩 처리한 후 크리스탈 바이올렛 용액을 첨가시켰다. 첨가된 용액을 다른 96 웰 플래이트에 옮긴 후 ELISA 리더기(Biorad, 미국)를 이용하여 550 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 어떤 한약재도 처리하지 않았으며, 하기 수학식 1을 이용하여 상기 355가지의 한약재 추출물들에 대하여 각각의 세포 생존율을 구하였다.

그 결과, 238 종의 한약재에서 세포 독성이 없는 것으로 확인되었으며, 117 종은 세포 독성이 있는 것으로 확인되었다.

세포 생존율 (%) = AS/AC × 100

(상기 식에서, AS: 시료 첨가군의 흡광도, AC: 대조군의 흡광도)

실시예 3: 진피 추출물의 Ig E 생성량에 미치는 영향

상기 355 가지 한약재의 추출물들에서 과민성 질환 치료 효과가 있는지 여부를 알아보기 위해, 각 한약재 추출물들에서 과민성 질환에 있어서 대표적인 과민성 유발 요인인 Ig E의 생성량에 미치는 영향을 실험하였다. 구체적으로, 96 웰 플래이트의 각 웰에 1 ㎎/㎖ 농도의 LPS(lipopolysaccharide, Sigma-aldrich)를 20 ㎕, 500 ng/㎖ 농도의 IL-4(Sigma-aldrich) 및 한약재 추출물들을 각각 20 ㎕씩 처리하였다. 그 후 BALB/c 마우스(Nippon CLEA, 일본) 암컷 비장(spleen)을 적출한 다음, 트립신을 처리하여 단일세포로 떨어뜨린 것을 RPMI 1640 배지에 현탁시킨 후 96 웰 플래이트에 2 × 10⁶ 세포/㎖로 분주하였고, 각 웰 당 최종 부피는 200 ㎕로 하였다. 37℃, CO₂ 배양기에서 7일간 배양하였다. 7일 후 각 웰의 상등액을 100 ㎕씩 취하여 Ig E ELISA 키트인 BD 파민젠(BD pharmingen, 미국)을 이용하여 Ig E 양을 측정하였다. 측정은 ELISA 리더기를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였고, 상기 측정 결과에서 하기 수학식 2를 이용하여 Ig E 생성 감소율을 계산하였다. 이때, 대조군은 어떤 한약재 추출물도 첨가하지 않은 군으로 하였다.

Ig E의 생성 감소율(%) = 100-(1-AS/AC) × 100

(상기 식에서, AS는 시료 첨가군의 흡광도, AC는 대조군의 흡광도이다)

그 결과, 355 종의 한약재 중에서 122 종의 한약재가 Ig E의 생성 감소 효과 를 가지는 것을 확인하였다. 상기 122 종의 한약재 중에서 80 종의 한약재가 세포 독성이 없는 것이었다.

실시예 4: FRAP ( Ferric Reducing / Anti - oxidant Power ) 분석을 통한 한약재의 항산화 효과 측정

본 발명자들은 상기 355 종의 한약재의 추출물들에서, 히스타민 과다 분비를 억제할 수 있는 항산화 효과 여부를 FRAP 분석을 통하여 확인하였다.

FRAP 분석은 3.6의 낮은 pH에서 Fe³ ⁺-TPTZ(ferric tripyridyltriazine)복합체가 환원제(antioxidant)에 의해서 파란색의 Fe² ⁺-TPTZ(ferrous tripyridyltriazine) 복합체로 될 때 흡광도를 측정하여 검색하고자 하는 화합물에 대한 환원력(ferric reducing ability)을 보는 것이다(IF Benzie 및 JJ Strain, Anal Biochem, 1996, 239, 70-76). 먼저 3.1 g의 C₂H₃NaO₂3H₂O(Sigma-aldrich)와 16 ㎖의 아세트산(C₂H₄O₂)을 넣어서 1 ℓ의 아세테이트 완충용액 (pH 3.6, 300 mM, Sigma-aldrich)을 만들었다. 그리고 40 mM HCl(Sigma-aldrich)로 10 mM의 TPTZ(2,4,6-tripyridyl-s-triazine, Sigma-aldrich)를 제조하였고, 증류수로 20 mM의 FeCl₃6H₂O를 제조하였다(IF Benzie 및 JJ Strain, 1996). FRAP 분석을 위한 반응액(working solution)은 100 ㎖ 아세테이트 완충용액, 10 ㎖ TPTZ 용액 및 10 ㎖ FeCl₃6H₂O를 각각 10 : 1 : 1의 비율로 섞어 실험에 사용하였다. 그리고 96 웰 플 래이트에 FRAP 반응액 190 ㎕를 넣고, 한약재 추출물 400 ng을 종류별로 DMSO 10 ㎕에 녹여 넣었다. 30분 동안 반응시킨 후 590 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때, FRAP 반응액(working solution)은 항상 실험 전에 만들어 사용하였다. 상기 측정 결과를 하기 수학식 3와 같이 계산하여 각 한약재 추출물들의 환원력을 환산하였다(Benzie FF et al,, Methods in enzymology, 1999, 299; 15-23).

Fe² ⁺의 평형 농도(mmol)/ℓ

이로써, 본 발명자들은 상기 결과에서 세포 독성이 없고, Ig E 생성 감소 효과를 가지는 한약재 중에서 Fe³ ⁺를 Fe² ⁺로 환원시켜 항산화 효과를 가지는 한약재로 지부자, 지유, 진교, 호장근, 차천초, 숙지황 및 진피 7종의 한약재를 선별하였다(표 1).

		Ig E 감소(%)	항산화 효과
		Ig E 감소(%)	FRAP [Fe² ⁺의 평형 농도(mmol)/L]
지부자 (Kochia scoparia)	물	83	4.25
	메탄올	100	5.15
	에탄올	93	4.76
	에탄올 수용액	80	4.09
지유 (Sanguisorba officinalis)	물	57	4.32
	메탄올	69	5.24
	에탄올	64	4.85
	에탄올 수용액	55	4.17
진교 (Gentiana macrophylla)	물	83	4.41
	메탄올	100	5.35
	에탄올	93	4.95
	에탄올 수용액	80	4.25
호장근 (Polygonum cuspidatum)	물	34	4.23
	메탄올	41	5.13
	에탄올	38	4.75
	에탄올 수용액	33	4.08
차천초 (Plantago asiatica)	물	41	4.44
	메탄올	50	5.38
	에탄올	46	4.98
	에탄올 수용액	40	4.28
숙지황 (Rehmannia glutinosa)	물	10	4.60
	메탄올	12	5.58
	에탄올	11	5.16
	에탄올 수용액	10	4.44
진피 (Fraxinus rhynchophylla)	물	18	4.31
	메탄올	22	5.23
	에탄올	20	4.84
	에탄올 수용액	17	4.16

대조군과 통계학적으로 유의한 차이를 보임(^*p<0.05, ^**p<0.01)

제조예 1: 약학적 제제의 제조

<1-1> 산제의 제조

진피 추출물 2 g

유당 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<1-2> 정제의 제조

진피 추출물 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<1-3> 캡슐제의 제조

진피 추출물 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<1-4> 환의 제조

진피 추출물 1 g

유당 1.5 g

글리세린 1 g

자일리톨 0.5 g

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.

<1-5> 과립의 제조

진피 추출물 150 ㎎

대두 추출물 50 ㎎

포도당 200 ㎎

전분 600 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.

제조예 2: 연고제제

<2-1> 지용성(W/O 제형) 연고

진피 추출물 0.01-10.0%

스테아릴 알콜 7.0%

스테아린산 2.2%

스쿠알렌 3.4%

옥틸두오데칸올 5.0%

올리브유 6.0%

글리세린모노하우릴 지방산 에스텔 10.0%

이소프로필 아디페이트 2.0%

테고 0.3%

카복실비닐폴리머 3.0%

프로필렌 글리콜 5.0%

코직산 0.05%

알파-케토글루타민산 0.2%

시스테인 0.2%

파라벤류 0.3%

멸균 정제수 또는 0.02M 인산 또는 완충용액 잔량

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 지용성 연고를 제조하였다.

<2-2> 친수성(O/W형) 연고

진피 추출물 0.01-10.0%

백색바세린 25.0%

스테아릴알콜 20.0%

프로필렌글리콜 12.0%

프로필렌미스스틴산 0.1%

소디움 글리세린 모노라우렐 0.2%

폴리옥시에틸렌경화피마자유 4.0%

베타인 함유 양이온성 유화제 0.2%

모노스테아린산글리세린에스텔 0.1%

파라옥시안식향산프로필 0.1%

정제수 잔량

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 친수성 연고를 제조하였다.

<2-3> 크림

진피 추출물 0.01-10.0%

유동파라핀 6.0%

스쿠알란 4.0%

소르비탄세스퀴올레이트 0.5%

폴리솔베이트 60 1.5%

밀랍 10.0%

카프필릭/카프릭프리글리세라이드 5.0%

부틸렌글리콜 6.0%

프리에탄올아민 3.0%

방부제 2.0%

향료 미량

정제수 잔량

상기의 조성으로 진피 추출물을 함유하는 크림을 통상의 방법에 따라 제조할 수 있었다.

제조예 3: 건강기능식품의 제조

<3-1> 음료의 제조

꿀 522 ㎎

치옥토산아미드 5 ㎎

니코틴산아미드 10 ㎎

염산리보플라빈나트륨 3 ㎎

염산피리독신 2 ㎎

이노시톨 30 ㎎

오르트산 50 ㎎

진피 추출물 0.48~1.28 ㎎

물 200 ㎖

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.

<3-2> 츄잉껌의 제조

껌베이스 20%

설탕 76.36~76.76%

진피 추출물 0.24~0.64%

후르츠향 1%

물 2%

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 츄잉껌을 제조하였다.

<3-3> 캔디의 제조

설탕 50~60%

물엿 39.26~49.66%

진피 추출물 0.24~0.64%

오렌지향 0.1%

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 캔디를 제조하였다.

<3-4> 밀가루 식품의 제조

본 발명에 따른 진피 추출물을 밀가루 100 중량부에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.

<3-5> 유제품( dairy products )의 제조

본 발명에 따른 진피 추출물 5 내지 10 중량부를 우유 100 중량부에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

제조예 4: 기능성 화장품의 제조

<4-1> 유연 화장수의 제조

본 발명의 진피 추출물을 유효성분으로 함유하는 유연 화장수의 제조예는 다음과 같이 제조하였다.

진피 추출물 10.00 중량부

1,3-부틸렌글리콜 1.00 중량부

디소듐이디티에이 0.05 중량부

알란토인 0.10 중량부

디포타슘글리시리제이트 0.05 중량부

시트릭애씨드 0.01 중량부

소듐시트레이트 0.02 중량부

글리세레스-26 1.00 중량부

알부틴 2.00 중량부

하이드로제네이티드캐스터오일 1.00 중량부

에탄올 30.00 중량부

보존제 미량

착색제 미량

착향제 미량

정제수 잔량

<4-2> 영양 크림의 제조

본 발명의 진피 추출물을 함유한 영양크림의 제조예는 다음과 같이 제조하였다.

진피 추출물 10.0 중량부

1,3-부틸렌 글리콜 7.0 중량부

글리세린1.0D-판테놀 0.1 중량부

식물 추출물 3.2 중량부

마그네슘알루미늄실리케이트 0.3 중량부

PEG-40 스테아레이트 1.2 중량부

스테아릭애씨드 2.0 중량부

폴리소르베이트 60 1.5 중량부

친유형글리세릴스테아레이트 2.0 중량부

소르비탄세스퀴올리에이트 1.5 중량부

세테아릴알코올 3.0 중량부

미네랄오일 4.0 중량부

스쿠알란 3.8 중량부

카르릴릭/카프릭트리글리세라이드 2.8 중량부

식물성 오일 1.8 중량부

디메치콘 0.4 중량부

디포타슘글리시리제이트 미량

알란토인 미량

소듐 히아루로네이트 미량

토코페릴아세테이트 적량

트리에탄올아민적량보존제 적량

착향제 적량

정제수 잔량

Claims

진피(秦皮, Fraxini Cortex) 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 피부 질환 예방 또는 치료용 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 진피 추출물을 물, C₁~C₄의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하는 조성물.
제 2항에 있어서, 상기 C₁~C₄의 알코올은 메탄올인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 과민성 피부 질환은 접촉 두드러기, 접촉성 피부염 및 아토피 피부염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 진피 추출물은 Ig E의 생성을 저하시키는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 진피 추출물은 항산화 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 조성물.
진피 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 피부 질환 예방, 개선 또는 치료용 기능성 화장품.
제 7항에 있어서, 상기 과민성 피부 질환은 접촉 두드러기, 접촉성 피부염 및 아토피 피부염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 기능성 화장품.
제 7항에 있어서, 상기 진피 추출물은 Ig E의 생성을 저하시키는 것을 특징으로 하는 기능성 화장품.
제 7항에 있어서, 상기 진피 추출물은 항산화 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 기능성 화장품.
진피 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민성 피부 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품.
제 11항에 있어서, 상기 과민성 피부 질환은 접촉 두드러기, 접촉성 피부염 및 아토피 피부염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 건강기능식품.
제 11항에 있어서, 상기 진피 추출물은 Ig E의 생성을 저하시키는 것을 특징으로 하는 건강기능식품.
제 11항에 있어서, 상기 진피 추출물은 항산화 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 건강기능식품.