KR20100131058A

KR20100131058A - Ｆｔｙ720을 유효성분으로 포함하는 미백용 조성물

Info

Publication number: KR20100131058A
Application number: KR1020090049738A
Authority: KR
Inventors: 김동석; 이주은; 김수연; 정윤미; 윤혜영; 백광진; 권년수
Original assignee: 중앙대학교 산학협력단
Priority date: 2009-06-05
Filing date: 2009-06-05
Publication date: 2010-12-15
Also published as: KR101083247B1

Abstract

본 발명은 면역억제제와 다발성경화증 치료제 용도로 이미 공지된 FTY720 또는 이의 유도체의 신규 미백 용도에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 FTY720 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 미백용 화장품학적 조성물 및 과다색소침착 질환의 치료 또는 예방용 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명 조성물의 유효성분인 FTY720는 멜라닌(melanin)의 합성과 티로시나아제(tyrosinase)의 발현을 억제함으로써 매우 뛰어난 미백효능을 발휘한다.

FTY720, 멜라닌 생성, β-카테닌(catenin), MITF (microphthalmia associated transcription factor), 티로시나제 활성 억제, 미백용 화장료 조성물

Description

ＦＴＹ720을 유효성분으로 포함하는 미백용 조성물{Hypopigmenting Composition Comprising FTY720 As an Active Ingredient}

본 발명은 FTY720 또는 이의 유도체의 신규 미백 용도에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 FTY720 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 미백용 화장품학적 조성물 및 과다색소침착 질환의 치료 또는 예방용 약제학적 조성물에 관한 것이다.

피부색을 결정하는 색소로는 멜라닌, 헤모글로빈, 카로티노이드가 있으며, 인간의 피부, 모발, 눈 등의 다양한 색깔은 이들 색소에 의해 결정된다. 그 중 피부에 있어 색깔을 결정하는 가장 중요한 색소는 멜라닌이며, 멜라닌의 성질 및 분포 정도에 따라 피부색이 결정된다.

인간에게 있어 피부나 모발의 색소는 햇빛, 특히 자외선의 유해한 영향으로부터 보호해주는 역할을 한다. 예를 들어, 색소가 부족한 사람(Albinos, 백색증)은 햇빛에 매우 민감하여 화상을 입기 쉬우며, 어린 나이에도 피부암 발생 확률이 높다. 단파장의 자외선(290-320 ㎚) 및 발암 물질은 피부에서 산소 라디칼을 형성시키는데, 이 산소 라디칼이 피부 세포를 공격하여 피부를 노화시키는 것으로 알려져 있다.

멜라닌의 주요 기능은 산소 라디칼을 제거하여 이에 의한 손상으로부터 피부를 보호하는 것이다. 그러므로, 멜라닌이 많다는 것은 물리적, 화학적 독성 물질로부터 피부를 보호하기 위한 효과적인 대응체계를 가지고 있다는 것을 의미한다. 그러나, 인간의 심미적 관점에서 볼 때 멜라닌의 침착으로 인한 주근깨, 기미 등은 네거티브적인 요인이 된다.

이러한 멜라닌의 생성을 촉진하는 요인들로는 햇빛(자외선) 뿐만 아니라 에스트로겐(estrogen), 프로스타글란딘(prostaglandin) 등의 인자들이 있다. 멜라닌의 생성 및 소멸 사이클은 다음과 같다. 멜라닌 세포(melanocytes)가 자극을 받으면, 세포내 함유되어 있는 티로신(tyrosine)이라는 아미노산이 자극에 의해 활성화되는 티로시나제(tyrosinase)와 결합하면서 멜라노좀(melanosome)을 생성한다. 이때 티로신은 산소와 결합하여 산화되고 티로시나제는 구리와 결합되는데, 만일 피부에 구리가 결핍되면 정상적인 멜라닌 생성에 장애를 주게 된다. 자외선 등의 자극은 멜라닌 생성 세포에 직접적인 영향을 미칠 뿐 아니라, 자극호르몬계(melanocyte stimulating hormone, MSH)에도 영향을 미쳐 뇌하수체중엽에서 멜라닌 세포 자극호르몬 분비가 많아지면 멜라닌의 생성을 촉진시킨다. 멜라닌 세포 내에 포함되어 있는 티로신이라는 아미노산은 티로시나제의 작용으로 도파(dopa)로 변하고, 이어 도파옥시다제(dopaoxidase)의 작용으로 도파키논(dopa-quinone)으로 변한 후, 멜라닌을 생성한다. 이와 같이 생성된 멜라닌은 피부세포로 전달되고 표피박리와 함께 멜라닌이 상실되어 소멸되는 순환 작용을 보인다.

미백 화장품에 있어 멜라닌 생성을 억제하는 방법은 크게 다음과 같이 나눌 수 있다. 첫째로, 자외선을 차단하여 멜라닌 생성의 주원인을 제거하는 방법으로, 이 방법은 화장품 조성물로서 광산란제 또는 광차단제를 함유케하여 원하는 결과를 기대할 수 있다. 둘째로, 티로시나제가 활성을 나타내기 위해 필요한 글쿠코사민(glucosamine)과 같은 코어 탄수화물의 합성을 저해함으로써 멜라닌 생성을 억제시키는 방법이다. 셋째로, 코직산(kojic acid) 또는 알부틴을 이용하여 멜라닌 생성에 관여하는 효소인 티로시나제의 기능을 방해하는 방법이다. 넷째로, 하이드로퀴논(hydroquinone)과 같이 멜라닌 생성 세포인 멜라닌 세포에 대해 특이적인 독성을 가지는 화합물을 사용하여 멜라닌 세포의 세포분열을 방해하는 방법이다. 다섯째로, 생성된 멜라닌을 환원시켜 탈색하는 방법이 있다.

스핑고리피드(sphingolipid)로 통칭되는 세라마이드(ceramide) 또는 스핑고신-1-포스페이트 (sphingosine-1-phosphate, S1P) 등의 대사산물들은 고등세포의 막구조를 형성하는 주요 지질로서 단순히 구조적인 기능 이외에 최근에는 세포의 분화, 신호전달체계의 중간전달 물질로서의 역할을 하는 등 생리활성 기능이 밝혀지면서 많은 연구가 진행되고 있다. 특히 사람의 피부조직 표층에 존재하며 수분발산을 억제하여 피부건조를 방지하는 세라마이드의 기능이 밝혀지면서 화장품의 기능성 조성물로 다양한 형태의 천연 혹은 합성 스핑고리피드가 사용되기 시작했다.

FTY720 (Novartis, Basel, Switzerland)은 1992년에 동충하초의 일종인 Isaria sinclarii 배양액으로부터 면역억제적인 특징을 가진 균사 대사물인 Myriocin (ISP-1)의 구조적 변형을 통해 첫 번째로 합성 되었다 (Fujita et al., J Antibiot, Tokyo, 47:208-215,1994). 특히, FTY720은 스핑고리피드의 구조적 유사체로서 알려졌음에도 불구하고 멜라닌 합성조절 기능과 조절기전에 관한 연구는 보고되어 있지 않았다.

FTY720은 이미 임상적으로 신장이식 면역 거부 반응 억제제로도 사용되었으며, 다양한 분야에서 프로드럭(prodrug)으로서 주목을 받고 있다. FTY720는 S1P와 구조적으로 유사하나, 세포내 멜라닌 생성 조절 기전에 있어서는 기존의 S1P와 다르다는 점이 주목할 만하다.

한편, 최근 FTY720이 프로스타글란딘 D2와 비만세포로부터 시스테닐-류코트리엔(cysteinyl-leukotrienes)의 방출을 감소시킨다고 보고되었다. 또한, 세포내에서 FTY720은 직접적으로 cPLA2 활성을 억제하고, 따라서 아라키돈산의 방출을 감소시키고 순차적으로 프로스타글란딘의 합성을 억제한다(Payne SG., et al., Blood,109:1077-85,2007). 또한 인 비보(in vivo)에서 FTY720를 투여하면 흑색종 성장의 생쥐 모델동물에서 전이성 암의 성장을 유의적으로 억제시키는 경향을 나타내고, 종양관련 혈관형성 작용을 현저하게 억제하는 데 관여하기도 한다고 보고되었다(LaMontagne K.,et al., Cancer Res, 66(1):221-31,2006).

전술한 바와 같이 광범위한 종류의 세포에 대한 FTY720의 유효성에 관한 연구가 많이 진행되었으나, 멜라닌 세포에 대한 미백작용에 대한 연구 및 이의 기전 연구는 지금까지 이루어지지 않았다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허가 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

본 발명자들은 미백효과가 우수하고 사람의 피부에 안전하게 사용될 수 있는 스핑고리피드와 이의 대사물들의 미백 효능 및 그 기전에 대해 심도있게 연구하였다. 그 결과 FTY720 화합물이 멜라닌(melanin) 세포에서 멜라닌의 합성과 티로시나아제(tyrosinase)의 활성을 매우 강하게 억제함을 실험적으로 확인하였고, 이러한 FTY720의 미백 활성은 β-카테닌(catenin)의 발현 억제 및 전사인자인 MITF (microphthalamia-associated transcription factor)의 발현 억제 작용을 통해 이루어짐을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 FTY720을 유효성분으로 포함하는 미백용 조성물을 제공하는 것에 있다.

본 발명의 목적 및 장점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구의 범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 (a) FYT720 또는 이의 유도체의 화장품학적 유효량; 및 (b) 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하는 미백용 화장품학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 (a) FTY720 또는 이의 유도체의 약제학적 유효량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 과다색소침착 질환의 치료 또는 예방용 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 유효성분으로서 FTY720 또는 이의 유도체를 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "FTY720"은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물서, 성분명은 핑골리모드(Fingolimod)이며, 2-아미노-2-[2-(4-옥틸페닐)에틸]프로 판-1,3-디올(2-amino-2-[2-(4-octylphenyl)ethyl]propane-1,3-diol)의 IUPAC 정식 명칭을 갖는 화합물을 의미한다.

[화학식 1]

본 명세서에서 사용되는 용어 "FTY720의 유도체"는 FTY720 분자의 미백효능과 동일 또는 유사한 정도의 미백효능을 가진다면, FTY720 분자에 어떠한 화학적 개질(chemical modification)이 가해진 분자라도 모두 포함하는 의미이다. 상기 FTY720 유도체는 예를 들어 FTY720의 포스페이트 에스테르(phosphate ester of FYY720), 또는 이의 대사물, FTY720의 약제학적으로 허용되는 염 또는 화장품학적으로 허용되는 염, FTY720의 생물학적 동등체(bioisostere) 및 세포막의 투과를 용이하게 하기 위해 인산기(phosphate group)가 개질된 FTY720 분자를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 FTY720의 약제학적으로 허용되는 염 또는 화장품학적으로 허용되는 염은 예컨대 FTY720의 용해도를 증가시키기 위한 산부가염을 들 수 있으며, 가장 바람직하게는 FTY720의 염산염 이다.

본 발명은 FTY720가 멜라닌(melanin)의 합성과 티로시나아제(tyrosinase)의 발현을 상당한 정도로 억제한다는 사실을 밝힌 것에 기초한 것으로, FTY720 또는 이의 유도체의 신규 미백효능을 제공한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 의하면, 본 발명은 FTY720 또는 이의 유도체가 β-카테닌(catenin) 발현억제 또는 MITF (microphthalamia associated transcription factor) 발현억제 작용을 통해 미백활성을 나타내는 미백용 화장품학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 유효성분인 FTY720 또는 이의 유도체의 미백 활성은 β-카테닌(catenin)의 발현 감소 또는 전사인자인 MITF (microphthalamia-associated transcription factor)의 발현 감소 작용을 통해 이루어진다.

본 발명의 바람직한 구현예에 의하면, 본 발명은 FTY720 또는 이의 유도체의 함유량은 화장품학적 조성물 총 중량에 대해 0.01 내지 30.0 중량％의 범위인 미백용 화장품학적 조성물을 제공한다. FTY720 또는 이의 유도체의 함유량이 0.01 중량％ 미만인 경우에는 바람직한 미백 효과를 얻기 어려우며 30.0중량％를 초과하는 경우에는 증가된 유효성분 함유량에 따른 증가된 미백효과를 얻기 어렵고 비용이 증가하는 문제점이 있다.

본 발명의 다른 바람직한 구현예에 의하면, 본 발명은 상기 화장품학적 조성물이 자외선 차단제 또는 광산란제를 추가로 포함하는 것인 미백용 화장품학적 조성물을 제공한다. 상기 자외선 차단제 또는 광산란제는 멜라닌 형성의 주요 인자인 자외선을 차단하는 역할을 하여 본 발명의 FTY720의 미백효능을 더욱 향상시키는 역할을 한다. 자외선 차단제 또는 광산란제는 예컨대 벤조페논계 화합물을 사용할 수 있다.

본 명세서에서 용어 "화장품학적 유효량"은 상술한 본 발명의 FTY720 또는 이의 유도체 화합물이 피부 미백 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.

본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수 (스킨), 영양 화장수 (밀크로션), 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해 화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 FTY720 또는 이의 유도체 화합물은 과다색소침착(hyperpigmentation)에 의한 질환의 치료 또는 예방용 약제학적 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "과다색소침착(hyperpigmentation)"은 피부 또는 손발톱의 특정 부위에서 멜라닌의 과도한 증가에 의해 다른 부위에 비해 검게 또는 어둡게 되는 것을 의미한다.

바람직하게는 상기 과다색소침착에 의한 질환은 기미, 주근깨, 노인성 색소반, 또는 일광흑색증(solar lentigines) 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 바람직한 구현예에 의하면, 상기 FTY720 또는 이의 유도체 화합물의 과다색소침착(hyperpigmentation)에 의한 질환의 치료 또는 예방 효능은 β-카테닌(catenin) 발현억제 또는 MITF (microphthalamia associated transcription factor) 발현억제 작용을 통해 이루어진다.

본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 질병 증상의 정도, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 한편, 본 발명의 약 제학적 조성물의 투여량은 바람직하게는 1일 당 0.01-2000 mg/kg(체중)이다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구로 투여되는 경우, 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 적용되는 질환의 종류에 따라, 투여경로가 결정되는 것이 바람직하다.

예를 들어, 본 발명의 약제학적 조성물은 멜라닌 색소의 과침착에 의한 피부 질환의 치료에 사용되기 때문에 피부에 국소적으로 적용되는 방식으로 투여되는 것이 바람직하다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

이상에서 상세하게 설명된 바와 같이, 본 발명은 FTY720 또는 이의 유도체를 유효성분으로 포함하는 미백용 화장품학적 조성물 및 과다색소침착 질환의 치료 또는 예방용 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명 조성물의 유효성분인 FTY720 또는 이의 유도체는 멜라닌(melanin)의 합성과 티로시나아제(tyrosinase)의 발현을 억제함으로써 매우 뛰어난 미백효능을 발휘한다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예

실시예 1: 세포 독성 실험

FTY720 (2-amino-2-[2-(4-octylphenyl)ethyl]propane-1,3-diol) (Calbiochem, San Diego, CA, USA) 의 세포 독성 여부를 측정하기 위하여, Mel-Ab 세포에 FTY720을 투여하여 세포독성 효과를 측정하였다.

우선, Mel-Ab 멜라닌 세포를 5%의 CO₂, 37 ℃ 하에서 10%의 우태아혈청(FBS), 100 nM TPA, 1 nM의 CT, 50 ㎍/mL의 스트렙토마이신, 및 50 ㎍/mL의 페니실린을 첨가한 DMEM에서 배양하였다. 상기와 같이 배양한 Mel-Ab 멜라닌 세포에 FTY720을 0, 0.01, 0.1, 1, 5, 10 μM의 농도별로 24 시간 동안 처리한 후 다시 배양하였다. 그 다음, 배양배지를 제거하고, 0.5 ㎖의 0.1% 크리스탈 바이올 렛(crystal violet)을 사용하여 염색한 후, FTY720의 Mel-Ab 멜라닌 세포에 미치는 영향을 측정하였다.

염색되지 않은 크리스탈 바이올렛은 수 회 세척하여 제거하고, 세포에 잔존하는 크리스탈 바이올렛을 95% 에탄올 1.0 ㎖을 사용하여 추출하였다. 추출된 크리스탈 바이올렛의 흡광도는 ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay) 리더(reader)를 사용하여 590 ㎚에서 측정하여 이 측정값을 세포의 증식정도로 평가하였다(Dooley et al., 1994). 측정 결과는 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타낸 바와 같이, FTY720은 0.01-5 μM 의 농도에서 Mel-Ab 멜라닌 세포에 독성을 보이지 않는 반면, 10 μM에서는 Mel-Ab 멜라닌 세포에 독성을 보임을 확인할 수 있었다.

실시예 2: Mel-Ab 세포의 멜라닌 합성 억제 효과

상기 실시예 1에서 설명된 방법과 동일한 방법으로 Mel-Ab 멜라닌 세포를 배양하고 여기에 FTY720을 각각 0, 0.01, 0.1, 1, 5 μM의 농도별로 처리한 후, 멜라닌 합성 정도를 측정하였다. 측정 결과는 도 2a 및 도 2b에 나타내었다. 도 2a 및 도 2b의 측정 결과에 나타나는 바와 같이, FTY720의 처리 농도가 증가함에 따라 멜라닌 합성이 억제되는 농도 의존적 멜라닌 합성 억제 효과를 나타내었다.

실시예 3: 티로시나아제(tyrosinase) 활성 억제 측정

본 실시예에서는 FTY720의 티로시나아제 활성 억제를 측정하였다. 상기 실 시예 1에서 설명된 방법과 동일한 방법으로 Mel-Ab 멜라닌 세포를 배양하고, 여기에 FTY720을 각각 0, 0.01, 0.1, 1, 5 μM의 농도별로 처리한 후, 멜라닌 생성 원료인 티로신(tyrosine)을 측정하고자 하는 세포 시료에 첨가하고, 멜라닌 생성량을 측정하여 멜라닌 생성 감소분을 계산하여 티로시나제 활성 저해율을 구하는 방법인 Koji Tomita 등의 방법을 약간 수정하는 방법을 적용하였다.

우선, Mel-Ab 멜라닌 세포를 96 웰 평판에 1 X 10⁵ 세포/웰의 밀도로 평판한 후 배양하고, 배양한 세포를 PBS로 세척하고, 1％ 트리톤-X/PBS (Triton-X/PBS)에서 용해시키고, 액체질소로 냉동과 해동을 반복하면서 분쇄하였다. 최종적으로 세포 분쇄물을 해동한 후, 10 ㎕의 10 mM L-DOPA를 96 웰의 각 웰에 첨가하여 혼합한 뒤, 37 ℃에서 10분 간격으로 1 시간 이상 측정하였다. 흡수율은 475 ㎚에서 측정하였고, 실험 값은 머쉬룸 티로시나제(mushroom tyrosinase)로 표준화하였다. 측정한 결과는 도 2c에 나타내었다.

도 2c에 나타나는 결과와 같이, 각기 다른 농도별로 FTY720를 처리함에 따라 티로시나제의 활성이 감소함을 확인할 수 있었다.

상기의 실시예 2 및 3과 도 2a, 도 2b 및 도 2c에 나타낸 결과에 의하면, FTY720 처리에 따라 티로시나제의 활성 감소되었고, 이에 따라 멜라닌 합성도 감소된 것임을 알 수 있었다.

실시예 4: Mel - Ab 멜라닌 세포에서 GSK -3β의 활성화와 GSK -3β억제제를 통한 멜라 닌 합성 조절 기전

FTY720의 멜라닌 합성 저해 작용이 어떠한 기전을 통해 이루어지는지 확인하기 위해, 배양된 Mel-Ab 멜라닌 세포에 1 μM 농도의 FTY720을 처리한 후, 0, 24, 48, 72 시간이 경과함에 따라 GSK-3β(Glycogen synthase kinase-3β)의 발현 및 인산화 정도와 β-카테닌(catenin)의 발현의 변화를 각각 관찰하였다. 그 결과를 도 3a에 나타내었다.

도 3a의 결과에 나타낸 바와 같이, Mel-Ab 멜라닌 세포에 FTY720을 처리한 후, 24 - 48 시간이 경과함에 따라 불활성 형태의 GSK-3β가 인산화된 활성 형태로 전환됨을 볼 수 있었다. 최근 GSK-3β가 cAMP에 의해 멜라닌세포 분화 조절에 관여한다는 보고가 되어 있고, 다양한 GSK-3β억제를 통해 멜라닌 합성이 증진된다는 보고도 있다(Khaled M., etal., J Biol Chem. 277(37):33690-97; Bellei B., etal., Cellular Signalling, 20:1750-61).

도 3a에 나타난 결과에 의해 FTY720이 GSK-3β를 활성화시켜 멜라닌 세포의 멜라닌 형성을 감소시킴으로써 미백 효과를 나타낸다고 일단 추정할 수 있었다. 이러한 추정을 확인하기 위해 GSK-3β의 억제제를 사용한 실험을 행하였다. 도 3b에 나타낸 결과에서 알 수 있는 바와 같이, GSK-3β의 억제제 [BIO, (2'Z,3'E)-6-bromoindirubin-3'-oxime; SB216763]를 FTY720과 함께 처리한 경우 멜라닌 함유량이 증가하지 않은 결과를 얻었다. 이러한 결과는 FTY720의 멜라닌 생성 억제 효과가 GSK-3β의 활성화에 의한 신호전달 경로에 의한 것이 아닌 것을 보여준다.

결론적으로, FTY720의 멜라닌 생성 억제 효과는 GSK-3β의 활성화 경로에 의 한 것이 아니라 β-카테닌(catenin)의 발현 억제를 통하여 이루어지는 것으로 결론을 얻었다.

또한, 상기의 실험과 동일한 조건에서 FTY720이 MITF(microphthalmia associated transcription factor)의 발현 수준에 미치는 영향을 측정하였다. 도 4의 결과에 나타낸 바와 같이, FTY720 처리의 초기에는 MITF의 발현 변화가 없다가 시간이 지남에 따라 점점 발현이 감소하여 48 시간에서 최대로 감소하고 72 시간에 다시 회복되는 것을 확인 할 수 있었다. 이러한 경향은 멜라닌 합성을 직접 조절하는 효소인 타이로시나제의 발현 양상에서도 동일하게 나타났다(도 4 참조). FTY720은 β-카테닌(catenin) mRNA의 발현을 저해하고 MITF의 발현의 감소를 유도함으로써 멜라닌 생성을 조절함을 알 수 있었다(도 5 참조).

실시예 5: 유연화장수 제조

FTY720을 포함하는 화장품학적 조성물의 한 제형으로서, FTY720 1 중량%, 글리세롤 3 중량%, 에탄올 5 중량%, 프로필렌글리콜 2 중량%, 미량의 향, 및 잔량의 정제수를 혼합하여 유연화장수를 제조하였다.

실시예 6: 수렴화장수 제조

FTY720을 포함하는 화장품학적 조성물의 한 제형으로서, FTY720 1 중량%, 밀랍 4 중량%, 유동파라핀 4 중량%, 스쿠알렌 4 중량%, 글리세린 3 중량%, 미량의 방부제, 미량의 향, 및 잔량의 정제수를 혼합하여 수렴화장수를 제조하였다.

실시예 7: 영양크림 제조

FTY720을 포함하는 화장품학적 조성물의 한 제형으로서, FTY720 0.5 중량%, 프로필렌글리콜 6 중량%, 글리세린 4 중량%, 유동파라핀 5 중량%, 스쿠알렌 3 중량%, 폴리솔베이트60 1.5 중량%, 및 잔량의 정제수를 혼합하여 수렴화장수를 제조하였다.

실시예 8: 마사지크림 제조

FTY720을 포함하는 화장품학적 조성물의 한 제형으로서, FTY720 0.2 중량%, 바셀린 7 중량%, 유동파라핀 10 중량%, 밀랍 2 중량%, 폴리솔베이트 2.5 중량%, 스쿠알렌 3 중량%, 글리세린 4 중량%, 프로필렌글리콜 6 중량%, 미량의 방부제, 및 잔량의 정제수를 혼합하여 마사지크림을 제조하였다.

실시예 9: 에센스 제조

FTY720을 포함하는 화장품학적 조성물의 한 제형으로서, FTY720 2 중량%, 프로필렌글리콜 2 중량%, 글리세린 4 중량%, 에탄올 7 중량%, 미량의 방부제, 미량의 향, 및 잔량의 정제수를 혼합하여 에센스를 제조하였다.

실시예 10: 팩 제조

FTY720을 포함하는 화장품학적 조성물의 한 제형으로서, FTY720 1 중량%, 프 로필렌글리콜 6 중량%, 글리세린 4 중량%, 밀랍 2 중량%, 유동파라핀 30 중량%, 미량의 방부제, 미량의 향, 및 잔량의 정제수를 혼합하여 팩을 제조하였다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

도 1은 본 발명의 미백용 화장품학적 조성물의 유효성분인 FTY720의 농도에 따른 Mel-Ab 멜라닌 세포에 대한 독성을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.

도 2a는 본 발명의 미백용 화장품학적 조성물의 유효성분인 FTY720의 투여 농도별로 처리한 Mel-Ab 멜라닌 세포를 현미경으로 관찰한 사진이다. FTY720의 농도가 증가할 수록 멜라닌의 형성이 억제됨을 확인할 수 있다.

도 2b는 FTY720의 처리 농도에 따라 Mel-Ab 멜라닌 세포에서의 멜라닌 합성 억제효과를 그래프로 나타낸 도면이다.

도 2c는 FTY720의 처리 농도에 따라 Mel-Ab 멜라닌 세포에서의 티이로시나제(tyrosinase)의 농도의존적 억제효과를 그래프로 나타낸 도면이다.

도 3a는 본 발명의 미백용 화장품학적 조성물의 유효성분인 FTY720의 처리시간에 따른 GSK-3β의 활성 및 β-카테닌(catenin) 발현 변화를 측정한 사진이다.

도 3b는 본 발명의 미백용 화장품학적 조성물의 유효성분인 FTY720을 GSK-3β의 활성억제제 [BIO, (2'Z,3'E)-6-bromoindirubin-3'-oxime; SB216763]와 함께 처리한 경우 Mel-Ab 멜라닌 세포에서 멜라닌의 합성 결과를 측정하여 그래프로 나타낸 도면이다.

도 4는 Mel-Ab 멜라닌 세포에서 본 발명의 미백용 화장품학적 조성물의 유효성분인 FTY720의 처리시간에 따른 MITF (microphthalmia associated transcription factor)의 발현 및 티로시나아제(tyrosinase)의 발현 양상을 보여주는 도면이다.

도 5는 Mel-Ab 멜라닌 세포에서 본 발명의 미백용 화장품학적 조성물의 유효 성분인 FTY720의 처리시간에 따른 β-카테닌(catenin), MITF, 티로시나아제(tyrosinase)의 mRNA의 발현 변화를 확인한 그림이다.

Claims

(a) 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 유도체의 화장품학적 유효량; 및 (b) 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하는 미백용 화장품학적 조성물.

[화학식 1]
제 1 항에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물 또는 이의 유도체의 함유량은 화장품학적 조성물 총 중량에 대해 0.01 내지 30.0 중량％의 범위인 것을 특징으로 하는 미백용 화장품학적 조성물.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물의 유도체는 상기 화학식 1의 화합물의 포스페이트 에스테르(phosphate ester) 화합물 또는 이의 대사물, 상기 화학식 1의 화합물의 화장품학적으로 허용되는 염, 또는 상기 화학식 1 화합물의 생물학적 동등체(bioisostere)인 것을 특징으로 하는 미백용 화장품학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 화장품학적 조성물은 자외선 차단제 또는 광산란제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 미백용 화장품학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 화장품학적 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 이루어지는 군에서 선택되는 제형인 것을 특징으로 하는 미백용 화장품학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물 또는 이의 유도체는 β-카테닌(catenin) 발현억제 또는 MITF (Microphthalamia-associated transcription factor) 발현억제 작용을 통해 미백활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 미백용 화장품학적 조성물.
(a) 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 유도체의 약제학적 유효량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 과다색소침착 질 환(hyperpigmentation disease)의 치료 또는 예방용 약제학적 조성물.

[화학식 1]
제 7 항에 있어서, 상기 과다색소침착 질환은 기미, 주근깨, 노인성 색소반, 또는 일광흑색증(solar lentigines)인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 7 항에 있어서, 상기 화학식 1의 화합물의 유도체는 상기 화학식 1의 화합물의 포스페이트 에스테르(phosphate ester) 화합물 또는 이의 대사물, 상기 화학식 1의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 또는 상기 화학식 1 화합물의 생물학적 동등체(bioisostere)인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.