KR20100129303A - 영지 포자유 지방 유제류의 품질 관리 방법 및 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 영지 포자유 지방 유제류 및 그 품질 관리 방법과 용도에 관한 것이다. 이는 영지 포자유 2~25%, 유화제 0.5~10%, 등장화제 0.2~5%를 포함하며, 나머지는 함유량은 물이며 지방 유제의 최종 pH값은 6~9로 조절한다. 본 발명의 품질 관리 방법은 제조시에 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드와 글리세롤 트리올레이트의 함유량을 정확히 측정하고 에르고스테롤의 함유량을 정확하게 측정하여, 본 제품의 품질 관리를 위한 방법의 근거로 삼는다. 지문(fingerprint)은 크로마토그램의 전체적인 모양으로부터 제품의 품질을 파악하는데 사용된다. 본 발명은 명확히 정의된 활성 성분을 갖고, 생물 활성이 우수하여, 종양 치료, 개체의 면역성 뿐만 아니라 방사선 요법 및 화학 요법을 받는 종양 환자의 삶의 질을 향상시키고 치료 후의 약물 독성을 감소시키면서 중양 치료를 할 수 있다. 본 발명은 동맥, 정맥 주사에 특히 적합하여, 빠른 개시 및 완벽한 흡수를 통해 영지 포자유가 직접 인체 혈액에 접근하는 것을 가능하게 할 뿐만 아니라 안전성이 높고, 품질을 신뢰할 수 있으며, 부작용이 낮다.
Description
본 발명은 영지 포자유(Ganoderma lucidum spore oil)에 관한 것으로서, 구체적으로 영지 포자유 지방 유제, 그 품질 관리 기술 및 의학적 용도에 관한 것이다.
80년대부터 일본은 영지의 항종양 측면에 대한 기초 연구를 시작하였으며, 90년대에 이르러 미국, 일본 및 다른 국가에서 영지를 임상 시험에 사용하였고, 특히 암 및 에이즈 치료에 사용하면서 국제 연구자들로부터 광범위한 주목을 받았다. 영지는 구멍장이 버섯과(Polyporaceae)에 속하는 곰팡이류인 적지(G.lucidum Karst)와 자지(G.japonicum Lloyd)의 일반명으로서, 건강 에너지를 뒷받침하는 등의 효과를 가지고 있어, ≪본경(
)≫에서 상등급품으로 일컬어지고 있다. 영지 포자(Ganoderma Lucidium spore)는 성숙기에 영지의 갓에서 튀어나오는 매우 미세한 포자로서, 영지의 생식 세포이며 영지의 유전적으로 활성인 물질을 함유하므로, 그 약용 가치는 점점 더 많은 관심을 끌고 있다. 영지 포자의 화학 성분은 지방산, 스테로이드, 트리테르페노이드, 알칼로이드, 락톤, 단백질과 아미노산, 글리코펩타이드, 비타민, 카로틴 및 무기 이온 등으로 매우 복잡하다. 최신 약리 연구는 영지 포자유가 영지 포자 내에서 종양 세포를 억제하는 주요 성분임을 시사하였다. 본 연구는 영지 포자유의 연구와 시험 분석을 통해 영지 포자유의 주요 성분이 오일 에스테르, 지방산, 영지산(Ganoderma lucidium acid)과 에르고스테롤 등 뿐 아니라 다른 많은 성분으로 이루어져 있음을 입증하였다.
현재 영지 포자유를 주요 성분으로 하는 글로시 영지 포자유 연질 캡슐(Glossy Ganoderma Spore Oil Soft Capsule)로 판매되어, 종양의 억제와 예방 뿐만 아니라 종양 수술 후 회복을 위한 면역력 증강 등에 사용되고 있다. 그러나 이것은 경구 제형으로, 투여 후 위장관을 통해 흡수되고, 직접 인체의 혈액으로 투여할 수는 없다. 영지 포자유는 비수용성이기 때문에 통상의 주사제로 제조하기는 상당히 어렵다. 그러나 이 문제는 영지 포자유 지방 유제를 통해 해결될 수 있고, 특허번호 ZL200410051661.3이고 발명의 명칭이 "영지 포자유 지방 유제"인 중국 특허가 이 문제를 정확히 해결하였다. 명칭이 "영지 포자유 정맥 주사 유제 및 그 제조 방법"인 특허 출원 번호 200510068335.8의 중국 발명 특허도 일종의 영지 포자유 정맥 주사 유제를 개시하고 있다. 이 두 특허는 지방유(fatty oil) 또는 주사용 오일을 모두 포함하는 영지 포자유 지방 유제를 개시하였으나, 기술이 복잡하고 활성 성분이 명확하게 정의되지 않았을 뿐만 아니라 주사용 영지 포자유의 정제 기술 및 지방 유제의 화학 성분 및 품질 관리 방법 등에 대한 추가 설명 등이 없는 결점이 있다.
시중에 영지 포자유, 영지 포자 및 영지 포자유 연질 캡슐, 영지 포자유 지방 유제 주사, 영지 포자유 지방 유제 복용제, 영지 포자 캡슐, 영지 포자 정제, 영지 포자 분말 등과 같은 영지 포자유 관련된 제품은 점점 더 많아지고 있지만, 진품인지를 분간하기 어렵고 품질도 감정하기가 어렵다. 영지 포자유의 품질 관리 방법에 관해서는 많은 문헌 보고가 있었고, 본 출원인도 영지 포자유 품질 관리 방법에 관해 몇 가지 발명 특허를 출원하였으나, 영지 포자유 지방 유제의 품질 관리 방법에 관해서는 보고된 바가 없다.
본 발명의 목적은 기존의 영지 포자유 지방 유제의 결점을 극복하여, 활성 성분이 명확히 정의되고, 생리 활성이 강한 영지 포자유 지방 유제류를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 영지 포자유 지방 유제의 품질 관리 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 추가적인 목적은 면역을 향상시키고, 방사선 요법과 화학 요법 약물의 독성을 감소시키면서 종양을 치료하기 위한 약제 제조에 대한 상기 영지 포자유 지방 유제의 용도를 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해 본 발명은 다음의 방안을 사용한다:
영지 포자유 지방 유제류는 영지 포자유 2~2.5 중량%, 유화제 0.5~10 중량%, 등장화제 0.2~5 중량% 및 나머지는 물을 포함한다.
지방 유제의 최종 pH는 6~9로 조정한다.
상기 영지 포자유 지방 유제 중에서 영지 포자유는 정제 후의 영지 포자유를 사용하며, 그 정제 방법은 다음과 같다: 영지 포자유를 원심 분리시켜 수분을 제거하고 영지 포자유 중량의 0.5%~10%인 흡착제를 첨가하여 균질하게 될 때까지 교반한다. 그리고나서 40~70℃로 가열하고, 20~40분간 온도를 일정하게 한 후 원심 분리, 미세 필터로 정제된 영지 포자유를 얻는다. 상술한 흡착제는 활성탄, 실리카겔, 중성 산화 알루미늄, 규조토 및 백토 중 하나 또는 둘 이상의 혼합물이다.
상기 영지 포자유 지방 유제 중에서 상기 유화제는 대두 레시틴, 달걀 노른자의 레시틴, 플루로닉(pluronic), 폴리글리세롤 팔미틱 디올(polyglycerol palmitic diol) 또는 알긴산염(alginate) 중 하나 또는 둘 이상의 혼합물로 최적화된다. 그 중에서도 가장 바람직한 것은 달걀 노른자 레시틴이나 대두 레시틴이다.
상기 영지 포자유 지방 유제 중 상기 등장화제는 글리세린, 글루코오스, 자일리톨, 말토오스 또는 소르비톨 중 하나 또는 둘 이상의 혼합물로 최적화되며, 가장 바람직한 것은 글리세린이다. 등장화제의 작용은 조제용 물질의 삼투압을 인체의 생리 삼투압과 비슷하게 만드는 것이다.
상기 영지 포자유 지방 유제의 제1 품질 관리 방법은 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드(1,2-oleic-3-palmitic triglyceride) 및/또는 글리세롤 트리올레이트(glycerol trioleate)의 함유량을 측정하는 것이다. 영지 포자유 지방 유제 1g당 2mg~62.5mg의 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드 및/또는 1.6mg~50.0mg의 글리세롤 트리올레이트가 존재한다.
상기 HPLC는 다음의 크로마토그래피 조건에 따라 수행된다: 옥타데실 실란을 충전제로 하고, 아세토니트릴, 이소프로판올, 디클로로메탄의 3가지 용제를 임의의 비율로 한 이원 또는 삼원 혼합물을 이동상으로 하고, 이동상의 유속은 0.5~2.0㎖/min이다. 그 후 증기화 광 산란 검출기 또는 시차굴절률 검출기로 검출하고, 이론단(theoretical plate) 수는 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드 또는 글리세롤 트리올레이트의 피크에 따라 계산하며, 둘다 2000 이상이어야 하고, 크로마토그래피 컬럼 온도는 10~50℃이다.
상기 영지 포자유 지방 유제의 제2 품질 관리 방법은 HPLC를 사용하여 그 제품 중 에르고스테롤의 함유량을 측정하는 것이고, 영지 포자유 지방 유제 1g당 에르고스테롤의 함유량은 0.04mg~7.5mg이다. 에르고스테롤은 균류 식물 중 특징적인 구성요소이고, 영지 포자유는 현재 알려진 유일한 균류 식물유이기 때문에 에르고스테롤은 영지 포자유를 기타 식물유와 구별하는 특징적인 구성요소로 다뤄질 수 있다.
크로마토그래피 조건: 옥타데실 실란을 충전제로 하고, 메탄올, 에탄올, 아세토니트릴, 메탄올 수용액, 에탄올 수용액 또는 아세토니트릴 수용액을 이동상으로, 또는 메탄올, 에탄올, 아세토니트릴 및 물의 삼원 또는 사원 혼합액을 이동상으로, 또는 테트라히드로푸란과 물의 혼합물을 이동상으로 하고, 테트라히드로푸란과 물의 부피비를 75:25로 한다. 검출 파장은 280±2nm이며, 이론단 수는 에르고스테롤 피크에 따라 계산하여 2000 이상이어야 한다.
영지 포자유 지방 유제의 제3 품질 관리 방법은 HPLC를 사용하여 몇 회분의 영지 포자유 지방 유제의 크로마토그램과 공통의 특징적인 피크로 구성된 영지 포자유 지방 유제의 표준 지문(standard fingerprint)을 비교하는 것이다. 상기 HPLC의 크로마토그래피의 조건은 크로마토그래피 컬럼은 옥타데실 실란을 크로마토그래피 컬럼용 충전제로 하고, 아세토니트릴-이소프로판올을 이동상으로 하고, 이들의 부피비를 53:47로 하며, 증기화 광 산란 검출기로 검출하고, 글리세롤 트리올레이트를 대조군으로 한다.
영지 포자유 지방 유제의 지문에는 15개의 공통 피크가 있고, 그 중 각각 총 피크 면적의 5% 이상인 4개의 지문 피크가 있으며, 글리세롤 트리올레이트 크로마토그램 피크의 상대 머무름 시간(relative retention time)을 1로 해서 다른 크로마토그램 피크의 상대 머무름 시간 뿐만 아니라, 상대 피크 면적을 계산한다. 그리고 상기 4개의 지문 피크는 머무름 시간 RT는 0.778이고, 상대 피크 면적이 9.54~15.36％인 피크 9; 평균 머무름 시간인 RT는 0.832이고, 상대 피크 면적이 5.76~9.43%인 피크 10; 글리세롤 트리올레이트에 대한 평균 머무름 시간인 RT는 1.000이고, 상대 피크 면적이 22.29~27.80%인 피크 11; 평균 머무름 시간인 RT는 1.075이고, 상대 피크 면적이 26.82~37.76%인 피크 12이다.
본 발명에 기재된 영지 포자유 지방 유제의 pH값은 제조 공정 중 NaOH 또는 인산염 완충용액으로 조정될 수 있다. 최종 pH값은 6~9이다.
영지 포자유 지방 유제의 종래의 다른 품질 지표는 이 분야에서 이미 알려진 방법으로 측정할 수 있으며, 그 중 유제 입자의 평균 직경은 100~500mm 사이에 골고루 분포된다. 직경이 1mm 보다 큰 입자는 1% 이하여야 하고, 직경이 5mm 보다 큰 유제 입자가 검출되어서는 안된다.
과산화물값: 2mmol/kg 보다 낮다.
세균 내독소값: 지방 유제 1㎖당 독소 함유량은 0.5EU 보다 적어야 한다.
본 발명의 영지 포자유 지방 유제는 우수한 약리학적 활성을 가지고 있어, 단독으로 또는 다른 약제와 혼합되어, 면역력을 향상시키고, 방사선 요법과 화학 요법 약물의 독성을 감소시키면서 종양 치료를 위한 약제 제조를 가능하게 한다. 상기 영지 포자유 지방 유제는 특히 동맥, 정맥 주사에 적합하여, 영지 포자유를 직접 사람의 혈액에 접근하게 할 수 있다. 최상의 제형은 주사용 지방 유제이다.
기존의 기술과 비교하면, 본 발명은 다음과 같은 유익한 효과를 갖는다:
1. 본 발명의 영지 포자유 지방 유제는 명확히 정의된 활성 성분을 갖고, 우수한 생물 활성을 가져, 단독으로 사용되거나 다른 항종양 약제와 함께 사용되어 종양을 치료하고, 개체의 면역력을 향상시키는 데 사용될 수 있으며, 방사선 요법과 화학 요법을 진행중인 종양 환자에게 있어서 그들의 삶의 질을 향상시키고 치료 후의 약물 독성을 감소시킬 수 있다.
2. 본 발명의 영지 포자유 지방 유제는 동맥 및 정맥 주사에 모두 적합하여, 빠른 개시 및 완벽한 흡수를 통해 영지 포자유가 직접 인체 혈액에 접근하는 것을 가능하게 한다.
3. 본 발명의 영지 포자유 지방 유제는 안전성이 높고, 품질을 신뢰할 수 있으며, 부작용이 낮은 제품이다.
4. 본 발명의 영지 포자유 지방 유제의 원료는 얻기 쉽고, 공정이 간단하며, 종래의 제조 설비와 공정으로 제조하기에 적합하여, 주사제에 대해 GMP 제조 능력을 갖춘 약학 공장에서 대규모로 대량 생산할 수 있다.
5. 본 발명의 품질 관리 방법은 제제 중 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드와 글리세롤 트리올레이트의 함유량을 정확히 측정할 수 있어, 이는 본 제품의 품질을 관리하는 방법과 근거로 사용되고, 방법이 간단하며, 작동성이 우수할 뿐만 아니라 재현성이 높다.
6. 본 발명의 품질 관리 방법은 제제 중 에르고스테롤의 함유량을 정확히 측정할 수 있고, 이는 본 제품의 품질을 관리하는 방법과 근거로 사용되고, 방법이 간단하며, 작동성이 우수할 뿐만 아니라 재현성이 높다.
7. 본 발명의 품질 관리 방법은 지문을 사용하여, 방법이 간단하고, 작동성이 좋을 뿐만 아니라 재현성이 높으며, 사용하기 쉽고, 크로마토그램의 전체적인 특징으로부터 영지 포자유 지방 유제의 품종과 품질 상태를 파악할 수 있으며, 영지 포자유 지방 유제의 품질 관리와 진위 감별을 위한 완전히 새로운 방법이다.
도 1은 트리글리세라이드 대조군의 0 내지 60분에서의 고성능 액체 크로마토그래피이다.
도 2는 영지 포자유 지방 유제의 0 내지 60분에서의 표준 지문이다.
도 3은 10회분 영지 포자유 지방 유제의 0 내지 60분에서의 지문이다.
도 2는 영지 포자유 지방 유제의 0 내지 60분에서의 표준 지문이다.
도 3은 10회분 영지 포자유 지방 유제의 0 내지 60분에서의 지문이다.
<실시예 1~6>
영지 포자유의 정제: 영지 포자유를 원심 분리하여 수분을 제거한 후 영지 포자유 중량의 5%인 활성탄을 첨가하고 균질하게 될 때까지 교반하였다. 그리고나서 50℃로 가열하고, 30분간 일정한 온도를 유지시킨 후 원심 분리와 미세여과로 정제된 영지 포자유를 얻을 수 있었다.
제조 방법: 질소 조건하에서, 유화제를 정제된 영지 포자유에 첨가하고, 유화제가 완전히 용해될 때까지 고속으로 분쇄하고, 50℃의 항온 수조와 고속 분산 조건하에서 12000rpm으로 유화시킨다. 오일상을 천천히 등장성 수용액에 넣어, 균일하게 혼합하고, NaOH에 의해 pH 6~9로 조정하며, 준비된 초기 유제를 균질기에 넣고 균질 압력을 60Mpa로 조정하여, 60℃ 온도에서 8회 균질화한다. 그 후 미세 여과막으로 여과하고 나서 수액병(infusion bottle)에 넣어 질소를 첨가하고, 부틸 고무 마개와 알루미늄 캡으로 봉하여, 살균 후 최종 제품을 얻었다. 상기 제품은 품질 관리 규정 뿐만 아니라 약전의 관련 제제 기준에 부합되었다.
상기 제조 방법을 참조하여, 실시예 1~6의 조성을 표 1에 나타내었고, 표 1에서의 질량 백분율은 중량 백분율을 사용하였다.
| 정제된 영지 포자유 | 유화제 | 등장화제 | 물 | pH | |
| 실시예 1 | 2％ | 달걀 노른자 레시틴 3% | 글리세린 5% | 90％ | 6.5 |
| 실시예 2 | 25％ | 플루로닉 5% | 말토오스 0.2% | 69.8％ | 8.5 |
| 실시예 3 | 20％ |
대두 레시틴 1.5% | 마니톨 2% | 76.5％ | 8.1 |
| 실시예 4 | 15％ | 달걀 노른자 레시틴 0.8% 대두 레시틴 2% |
글리세린 1.6% | 80.6％ | 7.5 |
| 실시예 5 | 7％ | 폴리글리세롤 팔미틱 디올 8% | 글루코오스 2% 글리세린 2% |
81％ | 7.0 |
| 실시예 6 | 18％ | 알긴산염 1% 달걀 노른자 레시틴 2% |
소르비톨 1% | 78％ | 7.9 |
[실시예 1~6의 조성]
<실시예 7> 영지 포자유 지방 유제 중 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드와 글리세롤 트리올레이트의 함유량 측정
HPLC로 측정:
크로마토그래피 조건: 옥타데실 실란을 충전제로 하고, 크로마토그래피 컬럼: Kromasil C18, 4.6mm×250mm, 5㎛ 컬럼, 컬럼 온도: 30℃, 이동상: 아세토니트릴:이소프로판올의 부피는 40:60로 하며, 증기화 광 산란 검출기로 검출하고, 유속: 0.5㎖/min이다. 이론단 수는 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드 또는 글리세롤 트리올레이트의 피크에 따라 계산되며, 둘다 2000 보다 크다.
대조군 용액 제조: 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드 및 글리세롤 트리올레이트 대조군 2.98mg 및 2.67mg을 각각 측량하여, 25㎖ 부피 계측 플라스크에 넣고 나서, 메탄올 용액을 첨가하여 용해시켜 용액 1㎖당 각각 0.119mg 및 0.107mg의 함유량을 갖는 용액으로 조성하여 대조군 용액을 얻었다.
시험 용액 제조: 영지 포자유 지방 유제(실시예 1) 1.025g을 정밀하게 측량하고 나서 0.2g의 무수 황산나트륨을 첨가한 후 수조에서 가열하여 유제가 제 기능을 못하게 하였다. 분별 깔때기로 옮겨 매번 2.0㎖의 부피의 디에틸 에테르로 3회 추출한 후, 에테르 용액에 합쳐 증발, 건조시키고 이동상을 첨가하였다. 아세토니트릴:이소프로판올(40:60)에 용해시키고 100㎖ 부피 계측 플라스크로 옮겨, 눈금까지 희석하여 시험 용액을 얻었다.
측정 결과: 대조군 용액과 시험 용액 10㎕를 각각 정밀하게 측량하고, 측정을 위해 HPLC기에 주입하고 난 후 로그를 계산하였다. 유제 1g당 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드와 글리세롤 트리올레이트의 함유량은 각각 4.21mg와 3.43mg였다.
영지 포자유 지방 유제 1g당 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드의 함유량은 2mg~62.5mg에 부합하고/하거나 영지 포자유 지방 유제 1g당 글리세롤 트리올레이트의 함유량은 1.6mg~50.0mg에 부합하였다.
이것은 실시예 1의 지방 유제 품질이 요건에 부합함을 나타낸다.
<실시예 8> 영지 포자유 지방 유제 중 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드와 글리세롤 트리올레이트의 함유량 측정
HPLC로 측정:
크로마토그래피 조건: 옥타데실 실란을 충전제로 하고, 크로마토그래피 컬럼: Kromasil C18, 4.6mm×250mm, 5㎛ 컬럼, 컬럼 온도: 실온, 이동상: 아세토니트릴:디클로로메탄(59:41)으로 하며, 증기화 광 산란 검출기로 검출하고, 유속： 1.0㎖/min이다. 이론단 수는 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드 또는 글리세롤 트리올레이트 피크에 따라 계산되며, 둘다 2000 보다 크다.
대조군 용액 제조: 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드 및 글리세롤 트리올레이트 대조군 2.98mg 및 2.67mg을 각각 측량하고, 25㎖ 부피 계측 플라스크에 넣고 나서 메탄올 용액을 첨가하여 용해시켜, 용액 1㎖당 각각 0.119mg 및 0.107mg의 함유량을 갖는 용액으로 조성하여 대조군 용액을 얻었다.
시험 용액 제조: 영지 포자유 지방 유제(실시예 2) 302.45mg을 정밀하게 측량하여 속슬렛 추출기(Soxhlet extractor)에 넣고, 30㎖의 디에틸 에테르를 넣은 후 밤새 콜드 소킹(cold soaking)하며, 그 후 50㎖의 디에틸 에테르를 첨가하여 뜨거운 수조에서 8시간 동안 추출하였다. 소진되면 디에틸 에테르를 추출물로 회수하고, 잔여물은 이동상인 아세토니트릴:디클로로메탄(59:41)에 용해시키고 50㎖ 부피 계측 플라스크로 옮겨 눈금까지 희석하여 시험 용액을 얻었다.
측정 결과: 대조군 용액과 시험 용액 10㎕를 각각 정밀하게 측량하고, 측정을 위해 HPLC기에 주입하고 난 후 로그를 계산하였다. 영지 포자 1g당 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드와 글리세롤 트리올레이트의 함유량은 각각 59.28mg와 46.52mg였다.
영지 포자유 지방 유제 1g당 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드의 함유량은 2mg~62.5mg에 부합하고/하거나 영지 포자유 지방 유제 1g당 글리세롤 트리올레이트의 함유량은 1.6mg~50.0mg에 부합하였다.
이것은 실시예 2의 지방 유제 품질이 기준에 부합함을 나타낸다.
<실시예 9> 영지 포자유 지방 유제 중 에르고스테롤 함유량 측정
HPLC로 측정:
크로마토그래피 조건 및 파장 선택: 옥타데실 실란을 충전제로 하고, 메탄올을 이동상으로 하고, 검출 파장은 280mm으로 하였다. 이론단 수는 에르고스테롤 피크에 따라 계산되며, 2000 이상이어야 한다.
대조군 용액 제조: 적당량의 에르고스테롤 대조군을 측량한 후 메탄올을 첨가하여 용액 1㎖당 0.08mg의 에르고스테롤을 함유하는 용액으로 조성하여 대조군 용액을 얻었다.
시험 용액 제조: 영지 포자유 지방 유제(실시예 1) 10g을 정밀하게 측량하고 나서 2g의 무수 황산나트륨을 첨가한 후 수조에서 가열하여 유제가 제 기능을 못하게 하였다. 분별 깔때기로 옮겨 매번 20㎖의 부피의 디에틸 에테르로 3회 추출한 후, 에테르 용액에 합쳐 증발, 건조시키고 10㎖의 석유 에테르에 용해시켜 처리한 후 실리카겔 컬럼(100~200 메쉬, 10g, 직경 15mm)을 첨가하였다. 마지막으로 120㎖의 석유 에테르:에틸 아세테이트(90:10)의 혼합물로 용리시키고 용리액을 버리고, 120㎖의 석유 에테르:에틸 아세테이트(80:20)의 혼합물로 용리시키고 용리액을 모았다. 그리고 증발, 건조시키고 잔사를 메탄올에 용해시키고 10㎖ 부피 계측 플라스크로 옮겨, 메탄올로 눈금까지 희석시키고 균질하게 될 때까지 교반하여 시험 용액을 얻었다.
측정 결과: 대조군 용액과 시험 용액 10㎕를 각각 정밀하게 측량하고, 측정을 위해 HPLC기에 주입하고 난 후 로그를 계산였다. 유제 1g당 에르고스테롤 함유량은 0.6mg였다.
영지 포자유 지방 유제 1g당 에르고스테롤의 함유량은 0.004mg~7.5mg에 부합하고, 이는 실시예 1의 요건에 부합함을 나타낸다.
<실시예 10> 영지 포자유 지방 유제의 HPLC 표준 지문
참조 물질 용액 제조: 글리세롤 트리올레이트를 참조 물질로 하기 위해, 적당량의 글리세롤 트리올레이트 대조군을 측량하고 이동상으로 희석하여, 참조 물질 용액으로서 용액 1㎖당 글리세롤 트리올레이트 0.15mg을 함유하는 용액으로 만들었다.
시험 용액 제조: 영지 포자유 지방 유제(실시예 4) 0.533g을 정밀하게 측량하고 나서 0.2g의 무수 황산나트륨을 첨가한 후 수조에서 가열하여 유제가 제 기능을 못하게 하였다. 분별 깔때기로 옮겨 매번 2.0㎖의 부피의 디에틸 에테르로 3회 추출한 후, 에테르 용액에 합쳐 증발, 건조시키고 이동상을 첨가하였다. 아세토니트릴:이소프로판올(40:60)에 용해시키고 100㎖ 부피 계측 플라스크로 옮겨, 눈금까지 희석시켜 시험 용액을 얻었다.
주사용 참조 물질 용액 및 영지 포자유 지방 유제 시험 용액 10㎕를 각각 측량한 후, HPLC로 측정하여 60분에서의 크로마토그램을 기록하였다. 이는 도 1,2 및 3을 참조한다. 글리세롤 트리올레이트 크로마토그램의 상대 머무름 시간 및 상대적인 피크 면적을 1로 하여 상대 머무름 시간 및 상대적인 피크 면적을 계산하였다.
공통 피크 측정:
10회분의 영지 포자유 지방 유제의 지문 측정을 통해 얻어진 영지 포자유 지방 유제 지문을 HLPC 크로마토그램과 비교하여 공통의 특징적인 피크를 측정하고, 그 공통의 특징적인 피크로 구성된 영지 포자유 지방 유제의 HLPC 표준 지문을 얻을 수 있었다. 이 표준 지문은 다양한 피크의 상대 머무름 시간의 RSD가 모두 2% 보다 작은 15개의 특징적인 피크를 갖는다. 그 중 피크 1은 평균 RT는 0.133이고, RSD는 0.31%, 상대적인 피크 면적의 범위는 0.10~2.40%이다. 피크 2는 피크의 평균 RT는 0.152, RSD는 0.32%, 상대적인 피크 면적의 범위는 0.31~17.51%이다. 피크 3은 평균 RT는 0.239, RSD는 1.18%, 상대적인 피크 면적의 범위는 0.14~1.20%이다. 피크 4는 평균 RT는 0.285, RSD는 0.11%, 상대적인 피크 면적의 범위는 0.10~2.16%이다. 피크 5는 평균 RT는 0.296, RSD는 0.71%, 상대적인 피크 면적의 범위는 0.19~2.05%이다. 피크 6은 평균 RT는 0.479, RSD는 0.12%, 상대적인 피크 면적의 범위는 0.47~3.56%이다. 피크 7은 평균 RT는 0.608, RSD는 0.11%, 상대적인 피크 면적의 범위는 1.70~4.06%이다. 피크 8은 피크의 평균 RT는 0.648, RSD는 0.11%, 상대적인 피크 면적의 범위는 0.34~1.80%. 피크 9는 평균 RT는 0.778, RSD는 0.12%, 상대적인 피크 면적의 범위는 9.54~15.36%이다. 피크 10은 평균 RT는 0.832, RSD는 0.10%, 상대적인 피크 면적의 범위는 5.76~9.43%이다. 피크 11은 글리세롤 트리올레이트, 즉 참조 피크의 RT는 1.000, 상대적인 피크 면적의 범위는 22.29~27.80%이다. 피크 12는 평균 RT는 1.075, RSD는 0.10%, 상대적인 피크 면적의 범위는 26.82~37.76%이다. 피크 13은 평균 RT는 1.158, RSD는 0.21%, 상대적인 피크 면적의 범위는 1.31~2.03%이다. 피크 14는 평균 RT는 1.370, RSD는 0.13%, 상대적인 피크 면적의 범위는 1.22~1.72%이다. 피크 15는 평균 RT는 1.479, RSD는 0.15%, 상대 피크 면적이 0.54~1.03%이다.
<실시예 11> 영지 포자유 지방 유제 안전성 시험
실시예 4의 샘플에 대해 6개월간 가속 시험을 진행하였다.
관찰 조건: 온도는 37℃, 상대 습도는 90%로 하였다(내독소 검사와 무균 시험 방법은 중국 약전 2005년판의 관련 규정에 따라 진행하였다). 실험 결과는 표 2에 나타내었다.
| 실시예 4의 샘플 | 0개월 | 1개월 | 2개월 | 3개월 | 6개월 |
| pH값 | 7.5 | 7.4 | 7.5 | 7.3 | 7.4 |
| 평균 입자 직경 | 280nm | 290nm | 285nm | 298nm | 290nm |
| 과산화물값 | 1.22meq/kg | 1.13meq/kg | 1.25meq/kg | 1.28meq/kg | 1.26meq/kg |
| 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드 | 31.8mg/g | 31.1mg/g | 31.6mg/g | 31.7mg/g | 31.2mg/g |
| 글리세롤 트리올레이트 |
22.4mg/g | 21.9mg/g | 21.7mg/g | 22.1mg/g | 21.9mg/g |
| 에르스테롤의 함유량 | 1.53m/g | 1.52m/g | 1.50m/g | 1.51m/g | 1.49m/g |
| 내독소 시험 | 규정에 부합 | 규정에 부합 | 규정에 부합 | 규정에 부합 | 규정에 부합 |
| 무균 시험 | 규정에 부합 | 규정에 부합 | 규정에 부합 | 규정에 부합 | 규정에 부합 |
[6개월 가속 시험 관찰 결과]
시험 결과는 본 발명의 실험 샘플이 가속 검사 기간 동안에 기본적으로 안정하다는 것을 나타낸다.
<실시예 12> 영지 포자유 지방 유제 안전성 시험
1. 기니피그에서 아나필락시스 쇼크 반응(ASA): 24 마리의 하틀리 기니피그(Hartley Guinea pig)를 성별과 체중에 따라 수컷 3마리, 암컷 3 마리인 4군으로 무작위로 나누었다. 그들을 음성 대조군, 양성 대조군, 시험물질 저용량군 및 고용량군으로 나누었다. 복강 주사는 0.5㎖/마리의 복용 부피(dosage volume)로 격일에 한번씩 연속 5회 투여하였다. 모든 군의 동물은 마지막 복강 주사 후 12일째에 2.0㎖/마리의 복용 부피로 자극하여 동물 반응, 과민 반응 발생율과 그 정도를 관찰하여 아나필락시스 쇼크 반응을 측정하였다.
결과: 음성 대조군 중 한 마리씩의 기니피그에 배뇨 현상이 있었고(생리적 배뇨로 확인), 나머지 5 마리의 기니피그에는 이상이 없었으므로, 음성 대조군의 과민 반응 발생률은 0이었다. 양성 대조군의 기니피그는 모두 죽었으므로, 과민 반응 발생률은 100%였다. 저용량군 및 고용량군은 각각 한 마리씩의 기니피그에 배뇨 또는 배변이 있었으며(생리적 배뇨 또는 배변으로 확인), 나머지 기니피그에는 이상이 없었으므로, 시험물질 저용량군 및 고용량군의 과민 반응 발생률은 0이었다. 이는 현재의 실험 조건하에서 영지 포자유 주사 지방 유제 저용량군 및 고용량군(62.5, 125.0mg/kgㆍbw)은 하틀리 기니피그에서 뚜렷한 아나필락시스 쇼크 반응을 일으키지 않음을 나타낸다.
2. 래트에서 수동 피부 아나필락시스 시험(PCA): 시험용 SPF급 SD 래트 24마리를 성별과 체중에 따라 수컷 마리, 암컷 3 마리인 4군으로 무작위로 나누었다. 음성 대조군, 양성 대조군, 시험 물질 저용량군 및 고용량군으로 나누고(각각 125와 250mg/kgㆍbw, 등가 용량(equivalent dose)에 따라 계산하면 각각 임상 용도 용량 10g의 0.14와 0.28배에 해당). 격일에 한번 연속 5회 복강 주사로 투여하고, 마지막 감작 후 10일째에 채혈하여 면역 혈청을 준비하였다. 별도로 SPF급 SD 래트 24 마리를 상기 항체 제조 방법과 같이 동일한 군으로 나누고 모든 군의 동물에 해당 군의 면역 혈청 0.1㎖를 피내 주사하고, 수동 감작 48시간 후에 활성화시켰다. 그 결과, 음성 대조군과 시험물질 저용량군 뿐 아니라 고용량군에서도 래트들의 등 피부 안쪽에 청반(blue spot)이 없었고, 양성 대조군에는 명확한 청반이 검출되었다. 이는 본 실험 조건하에서, 영지 포자유 지방 유제를 주사한 SD 래트에서 분명한 과민 반응이 검출되지 않음을 나타낸다.
3. 토끼 혈관 자극: 4 마리의 건강한 뉴질랜드 토끼를 자가 좌우 귀 대비법(self-contrast method)을 사용하여, 좌측 귀에 시험 약물(100mg/㎖, 대략 임상 정맥 주사에 사용되는 농도와 등가)을 주사하고, 우측 귀에는 동일한 부피의 0.9% NaCl 식염수를 매일 1회 연속 7일 주사하였다. 마지막으로 약물을 투여한 지 48시간 후에 2 마리를 육안으로 검사하고, 나머지 2마리는 마지막으로 약물을 투여한 지 14일 후에 육안으로 검사하였다. 육안 및 현미경으로 검사한 결과, 약물을 투여한 쪽과 대조군쪽 모두 토끼 귀의 정맥 혈관 뿐 아니라 주변 조직에 병리학적 변화가 없었다. 이는 본 실험 조건하에서, 토끼 귀 정맥 및 주변 조직에 영지 포자유 지방 유제를 주사한 토끼에서 분명한 자극 반응이 검출되지 않았음을 나타낸다.
4. 토끼 근육 자극 시험: 4 마리의 건강한 뉴질랜드 토끼를 자가 좌우 대퇴사두근 대비법을 사용하여, 좌측 귀에 시험 약물(100mg/㎖, 대략 임상 정맥 주사에 사용되는 농도와 등가)을 주사하고, 우측에는 동일한 부피의 0.9% NaCl 식염수를 주사하며, 1.0㎖/측을 한번 투약하였다. 마지막으로 약물을 투여한 지 48시간 후에 2 마리를 육안으로 검사하고, 나머지 2 마리는 마지막으로 약물을 투여한 지 14일 후에 육안으로 검사하였다. 육안으로 관찰한 결과, 4 마리 토끼의 주사한 양쪽 근육에 분명한 이상이 검출되지 않았다. 현미경으로 관찰한 결과 투약 48시간 후 육안으로 검사한 1 마리와 14일 후에 육안으로 검사한 2 마리의 양쪽 주사 부위 근섬유가 나란하였으며, 이상 변화는 검출되지 않았다. 나머지 한 마리 토끼는 마지막 투약 48시간 후, 좌측 국소 근육 조직에서 미세하게 변성된 작은 섬유상 병소가 있었으며, 병소와 근섬유 사이에 대량의 염증세포 침윤이 있었고, 좌측 근육 조직에서는 조각 모양의 변성이 검출되었고, 근육 조직이 괴사하거나 심지어 사라졌다. 병소 및 근섬유 사이에 대량 염증세포 침윤이 있었고, 소량의 적혈구가 있었다. 음성 대조군인 우측에는 가벼운 기계적 자극이 있었다. 육안 관찰과 조합하면 좌측 국소 조직의 자극은 기계적 자극일 수 있다. 이는 본 실험 조건하에서, 영지 포자유 지방 유제를 주사한 토끼에서 분명한 자극 반응이 없었음을 나타낸다.
5. 생체외 용혈 시험: 2% 적혈구로 현탁된 각 약물 튜브에 상이한 양의 영지 포자유 지방 유제(100mg/㎖, 임상 정맥 주사의 임상 농도와 등가)를 첨가하면 3시간내에 영지 포자유 지방 유제의 각 약물 튜브에서 용혈이나 적혈구의 응집이 없었다. 이는 본 실험 조건하에서, 3회분 영지 포자유 지방 유제에 대해 생체외 용혈 시험이 음성임을 나타낸다.
<실시예 13> 영지 포자유의 비글견(Beagle dog) 급성 독성 시험
실험은 4, 6, 8, 12, 16g/kgㆍbw 용량(인간 임상 용량 24, 36, 48, 72, 96배에 해당)의 5개 용량군으로 하고, 각 용량군을 비글견 한 마리로 하여 1회 정맥 투여하였다. 시험 결과, 비글견에게 단회 투약한 후 그 심전도, 혈액학 및 소변 검사에서 분명한 이상은 없었으나 혈액 생화학에 약간의 변화가 발생했으며, 용량이 많아질수록 지속 시간이 길어졌다. 용량이 12, 16g/kgㆍbw에 달하면, 동물은 조용해지고 활동이 감소하며 식욕이 감소하는 등의 증상이 나타났다. 비글견에 대한 영지 포자유 지방 유제 단회 정맥 주사는 무독성 반응 용량이 4g/kgㆍbw이고, 내성은 16g/kgㆍbw 보다 크다.
<실시예 14> H
22
간암 마우스에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 치료 효과 실험
성장이 양호한 7일 내지 11일째의 H22 종양을 선택해서, 마우스의 우측 겨드랑이 아래에 약 4.5~5×106 세포/마리를 피내 접종시켰다. 접종한 지 24시간 후 이들 마우스를 상이한 케이지로 무작위로 나누고, 정맥으로 투여하였다. 투약하는 동안 매일 체중을 측량하고, 8일째에 죽인 후 종양의 무게를 측량하였다. 각 군의 평균 종양 무게 및 종양 억제율을 계산하고, t 테스트를 수행하였다.
| 군 |
용량 mg/kg |
동물수 | 체중(g) | 종양 무게 （g） |
억제율 (%) | ||
| d1 | d8 | d1 | d8 | ||||
| 블랭크 유제 | 10 | 10 | 19.9±1.0 | 26.5±3.2 | 1.66±0.33 | ||
| CTX | 30 | 10 | 10 | 18.9±1.2 | 24.5±3.1 | 0.69±0.21** | 58.4 |
| 주사용 영지 포자유 지방 유제 | 1.0g/kg | 10 | 10 | 19.0±0.7 | 26.4±3.3 | 0.92±0.33** | 44.6 |
| 주사용 영지 포자유 지방 유제 | 0.5g/kg | 10 | 10 | 19.6±0.9 | 27.8±2.8 | 1.05±0.29** | 36.7 |
| 주사용 영지 포자유 지방 유제 | 0.25g/kg | 10 | 10 | 19.7±1.2 | 29.1±2.8 | 1.31±0.52 | 21.1 |
[H22 간암 마우스에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 종양 성장 억제 효과(
)]
d1, d8：접종 후 1일, 8일째
**P<0.05, 블랭크 유제군과 비교
표 3의 자료는 영지 포자유 지방 유제가 마우스의 종양 H22(간암)의 종양 성장을 억제할 수 있음을 나타낸다.
<실시예 15> 누드 마우스에 이식된 인간 위 선암 SGC-7901에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 치료 효과 실험
성장이 왕성한 시기의 인간 위 선암 SGC-7901의 종양 조직을 약 1.5 mm3 정도의 조각으로 잘라, 무균 조건하에서 누드 마우스 우측 겨드랑이의 피부 아래에 접종하여 이식한 누드 마우스를 취했다. 누드 마우스에 이식된 종양의 직경은 버니어 캘리퍼(vernier caliper)로 측량하고, 종양이 100-300mm3으로 자란 후에 동물을 군들로 무작위로 나누었다. 종양 직경 측량 방법을 사용하여 시험 물질의 항종양 효과를 동적으로 관찰하였다. 종양 직경은 매주 3회 측량하고, 그 때마다 마우스의 무게를 측량하였다. 실험군을 격일에 한번씩 정맥으로 투여하고, 양성 대조군 약제는 TAX 10mg/kg로 격일에 한번씩 투약하였다. 음성 대조군은 등가의 부피인 블랭크 유제이다. 상대적 종양 억제율 T/C(%)로 종양 세포에 대한 약물의 성장 억제 효과를 평가하였다. 시험 결과는 다음과 같다.
| 군별 |
용량 mg/kg |
동물수 | 체중(g) | TV(x±SD) | RTV (  |
T/C (%) |
P값 |
|||
| 시작 | 끝 | 시작 | 끝 | d12 | d33 | |||||
| 블랭크 유제 | 12 | 12 | 18.4±1.3 | 21.8±1.0 | 157 ±31 |
3055 ±2804 |
19.01 ±5.95 |
|||
| TAX | 10 | 6 | 6 | 18.0±1.9 | 19.1±0.8 | 144 ±103 |
1021 ±537 |
8.71 ±3.55 |
45.8 | <0.05 |
| 주사용 영지 포자유 지방 유제 | 1g/kg | 6 | 6 | 19.0±1.0 | 24.0±1.6 | 143 ±56 |
1508 ±415 |
11.02 ±2.37 |
58.0 | <0.05 |
| 주사용 영지 포자유 지방 유제 | 0.5g/kg | 6 | 6 | 18.6±1.1 | 22.9±1.6 | 156 ±92 |
2013 ±863 |
14.04 ±3.24 |
73.9 | |
| 주사용 영지 포자유 지방 유제 | 0.25g/kg | 6 | 6 | 18.2±1.4 | 23.2±1.2 | 142 ±26 |
2420 ±630 |
16.98 ±2.43 |
89.3 | |
[누드 마우스에 이식된 인간 위 선암 SGC-7901에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 치료 효과 실험（
）]
d9: 상이한 케이지로 나눈 후의 투여 시간
표 4로부터의 자료는 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약이 누드 마우스에 이식된 인간 위 선암 SGC-7901에 대해 억제 효과가 있음을 나타낸다.
<실시예 16> H
22
종양을 갖는 마우스에서 특정 세포의 면역 기능에 영향을 미치는 지에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 치료 효과 실험
ICR 마우스 50 마리를 취해, 이식가능한 종양의 연구 방법에 따라 H22 고형 종양을 접종하였다(무균 수술에서 종양 덩어리를 취한 후 중량을 재고, 글라스 조직 균질기로 분쇄하였다. 균질화한 후 무균 용기에 넣고, 생리 식염수로 1:3 세포 현탁액으로 희석시킨 후 각각의 마우스 우측 앞 겨드랑이 아래에 0.2㎖를 내피 접종하였다). 그 다음날 수컷 10 마리, 암컷 10 마리인 5군으로 무작위로 나누었다. 이는 정맥 주사 대조군(20 ㎖/kg, 블랭크군), 주사용 영지 포자유 지방 유제 고, 중, 저용량군(1, 0.5, 0.25g/kg) 정맥 주사 투여, 타이모신 a1 주사군(0.42 mg/kg) 피하 투여하였다. 타이모신 a1을 격일에 한번씩 투여한 것을 제외하고, 다른 군은 매일 1회, 모두 7회 투여하였다. 투약 후 1일째에 각 마우스 복부의 털을 3×3cm2 범위의 면적으로 제거하였다. 투약 후 2일째에 1%의 DNFB를 마우스 복부에 균일하게 발라주었다(DNFB는 일종의 합텐으로서, 피부 단백질과 조합하여 전(全)항원을 형성한 후 T 림프구를 자극하여 감작된 림프구로 증식시킨다). 마지막으로 투약한 지 30분 후 마우스의 우측 귀에 1%의 DNFB를 발라 공격하면 국소 부위에서 지연형 과민증(부종)이 발생하였다. 공격 24 시간 후에 경추를 탈구시켜 마우스를 죽이고, 좌우 귀를 잘라서 펀처로 귀의 일부에 직경 8mm의 구멍을 내어, 그 무게를 잰 후 좌우 귀 조각 중량 차이를 부기(swelling) 정도로 계산하고, 부기 억제율을 계산해서 각 군간 차이를 비교하였다.
| 군별 | 용량 (mg/kg) |
투약전 체중 | 투약후 체중 | 부기(mg) | 부기율(%) |
| 블랭크 유제 대조군 | 19.50±1.35 | 25.60±2.12 | 9.16±3.68 | 62.06±24.11 | |
| 주사용 영지 포자유 지방 유제 |
1000 | 19.40±1.35 | 25.50±2.12 | 12.73±3.70* | 88.52±28.94* |
| 500 | 19.80±1.69 | 25.30±2.11 | 12.84±3.79* | 76.53±15.19 | |
| 250 | 19.90±1.60 | 25.10±2.13 | 11.87±2.30 | 72.74±11.33 | |
| 타이모신 a1 | 0.42 | 19.30±1.34 | 25.10±2.18 | 13.50±3.44* | 89.12±19.76* |
[H22 간암 종양을 갖는 마우스에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 지연형 과민증(
，n=10)]
*P<0.05，**P<0.01, H22 종양이 있는 블랭크 유제 대조군과 비교
표 5의 자료는 영지 포자유 지방 유제의 고, 중 용량군은 부기 정도와 부기율을 현저히 향상시킬 수 있음을 나타낸다(P<0.05). 즉, 영지 포자유 지방 유제는 H22 종양이 있는 마우스에서 특정 세포의 면역 기능을 강화시킬 수 있다.
<실시예 17> H
22
종양을 갖는 마우스에서 새망내피계(RES)의 식세포 작용에 영향을 미치는지에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 치료 효과 실험
실험 방법: ICR 마우스 50 마리를 취해 H22 고형 종양을 접종하고, 암컷, 수컷 반반씩 각 군당 10 마리인 5군으로 무작위로 나누었다. 실험에서 정맥 주사 대조군(20 ㎖/kg, 블랭크 유제), 영지 포자유 지방 유제를 주사한 고, 중, 저용량군(1, 0.5, 0.25g/kg) 정맥 주사 투여, 양성 대조군 약물 타이모신 a1 주사군(0.42 mg/kg) 피하 투여하였다. 타이모신 a1을 격일에 한번씩 투여한 것을 제외하고, 다른 군은 매일 1회, 모두 11회 투여하였다. 마지막 정맥 주사, ig 투여한 지 24시간 후 꼬리 정맥에 먹물(1:3으로 희석됨) 0.1㎖／10g을 주사하였다. 먹물을 주사한 지 1분 및 5분 후에 정량 채혈관을 사용하여 안와 정맥(post orbit venous plexus)에서 20㎕를 채혈한 후 2㎖의 0.1 % Na2CO3을 피펫으로 떨어뜨려 680mm에서 비색 분석을 수행하였다. 채혈한 지 5분 후에 마우스를 죽이고, 간, 비장, 흉선의 무게를 재고, 다음의 방정식에 따라 클리어런스 지수 K와 탐식계수 α값 뿐만 아니라 간과 비장 계수를 계산하였다. 얻어진 모든 자료는 통계적으로 처리하였다(t 테스트).
| 군별 | 용량 (mg/kg) |
클리어런스 지수 k | 탐식 계수 α |
간 계수 (g/100g) |
비장 계수 (g/100g) |
흉선 계수 (g/100g) |
| 블랭크 유제 대조군 | 0.05±0.02 | 4.98±0.76 | 6.52±0.98 | 0.85±0.14 | 0.24±0.04 | |
| 주사용 영지 포자유 지방 유제 | 1000 | 0.10±0.03** | 5.91±1.16* | 7.03±1.40 | 1.00±1.32 | 0.33±0.12* |
| 500 | 0.11±0.02** | 5.38±0.71 | 7.76±1.56* | 1.18±0.46* | 0.32±0.10* | |
| 250 | 0.10±0.02** | 5.51±1.13 | 7.03±1.52 | 1.55±0.58** | 0.27±0.08 | |
| 양성 대조 타이모신 a1 | 0.42 | 0.09±0.02** | 5.71±0.76* | 6.91±1.08 | 1.16±0.44* | 0.33±0.11* |
[H22 종양을 갖는 마우스에서 새망내피계(RES)의 식세포 작용에 영향을 미치는지에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 치료 효과 실험(
，n=10)]
*P<0.05，**P<0.01, H22 종양이 있는 블랭크 유제 대조군과 비교
표 6의 자료는 영지 포자유 지방 유제는 H22 종양이 있는 마우스에서 클리어런스 지수 k, 탐식계수 α 및 비장 계수를 뚜렷하게 개선하며, H22 종양이 있는 마우스에서 새망내피계의 식세포 작용을 강화시킬 수 있음을 나타낸다.
<실시예 18> H
22
종양을 갖는 마우스에서 시클로포스파미드(Cy) 화학 요법에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 독성 감소 효과 실험
실험 방법: ICR 마우스 60 마리를 취해, 암컷, 수컷 반반씩 각 군당 10 마리인 6군으로 무작위로 나누었다. 실험에서 블랭크 대조군, 정맥 주사 대조군(20 ㎖/kg, 블랭크 유제), 주사용 영지 포자유 지방 유제 고, 중, 저용량군(1, 0.5, 0.25g/kg) 정맥 주사 투여, 양성 대조군 약물 타이모신 a1 주사군(0.42 mg/kg) 피하 투여하였다. 타이모신 a1을 격일에 한번씩 투여한 것을 제외하고, 다른 군은 매일 1회, 모두 7회 투약하였다. 투여 4 및 5일째에 블랭크 대조군을 제외한 다른 군은 복강내 Cy(100mg/kg) 처리를 시작하여 연속 2일 동안 처리하였다. 투약을 종료한 지 24시간 후에 마우스를 죽이고, 죽이기 전에 무게를 재고, 안와 정맥에서 채혈하여, 말초 혈액 백혈구의 총수를 현미경으로 검사하였다. 동시에 한쪽의 완전한 대퇴골을 절개하여 골수내의 유핵세포수를 측정하였다. 흉선과 비장의 무게를 재기 위해 떼어내고, 흉선과 비장 계수를 계산하여, 통계적 처리를 수행하였다(t 테스트).
실험 결과: 결과는 H22 종양이 있는 마우스의 블랭크 대조군과 비교하여, 블랭크 유제+Cy 모델(100mg/kg，복강내)에서 말초 혈액 백혈구와 골수내의 유핵세포수 뿐만 아니라 흉선 및 비장 계수가 뚜렷하게 감소했음을 나타낸다(P<0.01). 시클로포스파미드(Cy) 모델군과 비교하면, 주사용 영지 포자유 지방 유제의 고용량군 및 타이모신 a1 주사군이 모두 H22 종양이 있는 마우스에서 Cy에 의한 말초 혈액 백혈구, 골수 유핵세포수, 흉선 계수 및 비장 계수의 감소를 뚜렷하게 막아낼 수 있음을 나타낸다(P<0.05，P<0.01). 결과는 표 7에 나타내었다.
| 군별 |
용량 (mg/kg) |
마우스 체중(g) | 비장 계수 (g/100g) |
흉선 계수 (g/100g) |
WBC (109/L) |
골수 유핵세포수 (105/근) |
|
| 투약전 | 투약후 | ||||||
| 블랭크 대조군 | 19.80 ±1.75 |
24.00 ±2.11 |
1.29 ±0.47** |
0.20 ±0.06** |
5.61 ±1.14** |
191.03 ±30.65** |
|
| 블랭크 유제 +Cy | 100 | 19.90 ±1.60 |
22.70 ±2.16 |
0.48 ±0.13 |
0.08 ±0.04 |
1.63 ±0.40 |
60.23 ±11.18 |
| 주사용 영지 포자유 지방 유제 +Cy |
1000+100 | 19.60 ±1.43 |
22.30 ±2.11 |
0.60 ±0.12* |
0.12 ±0.04* |
2.02 ±0.43* |
73.15 ±14.93* |
| 500+100 | 20.00 ±1.83 |
23.00 ±2.16 |
0.57 ±0.21 |
0.10 ±0.03 |
1.73 ±0.61 |
68.79 ±12.51 |
|
| 250+100 | 19.70 ±1.57 |
23.00 ±2.26 |
0.58 ±0.16 |
0.11 ±0.04 |
1.91 ±0.65 |
61.48 ±12.50 |
|
| 타이모신 a1 +Cy | 0.42+100 | 19.70 ±1.57 |
23.60 ±2.27 |
0.64 ±0.21* |
0.12 ±0.04* |
2.03 ±0.44* |
73.31 ±15.99* |
[H22 종양을 갖는 마우스에서 화학 요법에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 독성 감소 효과 실험(
，n=10)]
*P< 0.05，**P< 0.01와 블랭크 유제+Cy군과 비교
표 7의 자료는 H22 종양을 갖는 마우스에서 시클로포스파미드(Cy) 화학 요법에 대해 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약이 독성 감소 효과가 있음을 나타낸다.
<실시예 19> 정상 마우스에서 시클로포스파미드(Cy) 화학 요법에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 독성 감소 효과 실험
실험 방법: ICR 마우스 60 마리를 취해, 암컷, 수컷 반반씩 각 군당 10 마리인 6군으로 무작위로 나누었다. 실험에서 블랭크 대조군, 정맥 주사 대조군(20 ㎖/kg, 블랭크 유제), 주사용 영지 포자유 지방 유제 고, 중, 저용량군(1, 0.5, 0.25g/kg) 정맥 주사 투여, 양성 대조군 약물 타이모신 a1 주사군(0.42 mg/kg) 피하 투여하였다. 타이모신 a1을 격일에 한번씩 투여한 것을 제외하고, 다른 군은 매일 1회, 모두 7회 투약하였다. 투여 4 및 5일째에 블랭크 대조군을 제외한 다른 군은 복강내 Cy(100mg/kg) 처리를 시작하여 연속 2일 동안 처리하였다. 투약 종료한 지 24시간 후에 마우스를 죽이고, 죽이기 전에 무게를 재고, 안와 정맥에서 채혈하여, 말초 혈액 백혈구의 총수를 현미경으로 검사하였다. 동시에 한쪽의 완전한 대퇴골을 절개하여 골수내의 유핵세포수를 측정하였다. 흉선과 비장의 무게를 재기 위해 떼어내고, 흉선과 비장 계수를 계산하여, 통계 처리를 수행하였다(t 테스트).
실험 결과: 결과는 블랭크 대조군과 비교하여, 블랭크 유제+Cy 모델(100mg/kg，복강내)에서 말초 혈액 백혈구와 골수내의 유핵세포수 뿐만 아니라 흉선과 비장 계수가 현저하게 감소했음을 나타낸다(P<0.01). 블랭크 유제+Cy군과 비교하여, 주사용 영지 포자유 지방 유제의 고용량군 및 타이모신 a1 주사군이 모두 정상 마우스에서 Cy에 의한 말초 혈액 백혈구, 골수 유핵세포수 및 비장 계수의 감소를 현저하게 막아낼 수 있었으며(P<0.05), 주사용 영지 포자유 지방 유제의 중용량군은 정상 마우스에서 Cy에 의한 골수 유핵세포수 및 비장 계수의 감소를 현저하게 막아낼 수 있었다(P<0.05). 결과는 표 8에 나타내었다.
| 군별 |
용량 (mg/kg) |
마우스 체중(g) | 비장 계수 (g/100g) |
흉선 계수 (g/100g) |
WBC (109/L) |
골수 유핵세포 (105/근) |
|
| 투약전 | 투약후 | ||||||
| 블랭크 대조군 | 19.40 ±1.07 |
25.20±2.15 | 0.55 ±0.19** |
0.32 ±0.14** |
10.67±3.03** | 200.18 ±21.17** |
|
| 블랭크 유제+Cy | 100 | 19.80 ±1.32 |
23.20±2.20 | 0.28 ±0.06 |
0.12 ±0.04 |
1.60 ±0.50 |
62.14 ±14.57 |
| 주사용 영지 포자유 지방 유제+Cy |
1000+100 | 19.10 ±1.20 |
23.00±2.11 | 0.34 ±0.06* |
0.12 ±0.06 |
1.98 ±0.26* |
77.29 ±14.41* |
| 500+100 | 19.90 ±1.37 |
23.30±2.11 | 0.35 ±0.08* |
0.13 ±0.07 |
1.75 ±0.55 |
74.89 ±11.44* |
|
| 250+100 | 19.30 ±1.16 |
23.10±2.13 | 0.35 ±0.08* |
0.13 ±0.05 |
1.61 ±0.46 |
65.73 ±19.41 |
|
| 타이모신 a1+Cy | 0.42+100 | 19.60 ±1.26 |
22.90±2.18 | 0.36 ±0.10* |
0.18 ±0.03** |
2.04 ±0.41* |
75.43 ±13.32* |
[정상 마우스에서 화학 요법에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 독성 감소 효과(
，n=10)]
*P< 0.05，**P< 0.01, 블랭크 유제+Cy와 비교
표 8의 자료는 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약이 정상 마우스에서 시클로포스파미드(Cy) 화학 요법에 독성 감소 효과가 있음을 나타낸다.
<실시예 20> H
22
종양을 갖는 마우스에서
60
Co 화학 요법에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 독성 감소 효과 실험
실험 방법: ICR 마우스 60 마리를 취해 이식가능한 종양의 연구 방법에 따라 H22 고형 종양을 접종하고, 접종한 지 24시간 후에 블랭크군인 10 마리를 제외하고 다른 50 마리는 500rad의 방사선량으로 60Co를 조사하였다. 60Co를 조사한 후에 암컷, 수컷 반반씩 각 군당 10 마리인 5군으로 무작위로 나누었다. 실험에서 블랭크 대조군, 정맥 주사 대조군(20 ㎖/kg, 블랭크 유제), 주사용 영지 포자유 지방 유제 고, 중, 저용량군(1, 0.5, 0.25g/kg) 정맥 주사 투여, 양성 대조군 약물 타이모신 a1 주사군(0.42 mg/kg) 피하 투여하였다. 타이모신 a1을 격일에 한번씩 투약한 것을 제외하고, 다른 군은 매일 1회, 모두 7회 투약하였다. 투약을 종료한 지 24시간 후에 마우스를 죽이고, 죽이기 전에 무게를 재고, 안와 정맥에서 채혈하여, 말초 혈액 백혈구의 총수를 현미경으로 검사하였다. 동시에 비장, 흉선 및 한쪽의 완전한 대퇴골을 떼어내어 골수내의 유핵세포수를 측정하였다. 흉선과 비장의 무게를 재고 흉선과 비장 계수를 계산하여, 통계 처리를 수행하였다(t 테스트).
실험 결과: 결과는 H22 종양이 있는 블랭크 대조군과 비교하면 블랭크 유제+60Co 모델(500 rad)군의 말초 백혈구와 골수내의 유핵세포수, 흉선, 비장 계수가 현저하게 감소함을 나타낸다(P<0.01). 60Co 모델군과 비교하면 타이모신 a1 주사군은 H22 종양이 있는 마우스에서 60Co에 의한 말초 혈액 백혈구와 골수내의 유핵세포수, 흉선 계수와 비장 계수의 감소를 현저하게 막아낼 수 있었으며(P<0.05), 정맥 주사용 영지 포자유 지방 유제 고용량군은 H22 종양이 있는 마우스에서 60Co에 의한 말초 혈액 백혈구수, 골수내의 유핵세포수 및 비장 계수의 감소를 현저하게 막아낼 수 있었다(P<0.05). 정맥 주사용 영지 포자유 지방 유제 중용량군은 H22 종양이 있는 마우스에서 60Co에 의한 말초혈액 백혈구수의 감소를 현저하게 막아낼 수 있었다(P<0.05). 결과는 표 9에 나타낸다.
| 군별 |
용량 (mg/kg) |
마우스 체중(g) | 비장 계수 (g/100g) |
흉선 계수 (g/100g) |
WBC (109/L) |
골수 유핵세포수(105/근) |
|
| 투약전 | 투약후 | ||||||
| 블랭크 대조군 | 19.40±1.26 | 24.50±2.37 | 0.62 ±0.20** |
0.27 ±0.13** |
5.17 ±0.61** |
239.48 ±53.92** |
|
| 블랭크 유제+60Co | 100 | 19.90±1.45 | 24.10±2.13 | 0.25 ±0.08 |
0.12 ±0.04 |
1.63 ±0.40 |
68.31 ±16.68 |
| 60Co+주사용 영지 포자유 지방 유제 |
1000 +100 | 20.00±1.63 | 24.60±2.41 | 0.33 ±0.08* |
0.14 ±0.05 |
2.02 ±0.41* |
85.60±18.60* |
| 500+100 | 19.70±1.57 | 24.10±2.13 | 0.29 ±0.03 |
0.14 ±0.03 |
2.03 ±0.42* |
79.05 ±16.51 |
|
| 250+100 | 19.60±1.07 | 24.30±2.21 | 0.29 ±0.05 |
0.12 ±0.03 |
1.94 ±0.54 |
79.93 ±17.37 |
|
| 60Co+타이모신 a1 | 0.42+100 | 19.60±1.51 | 24.20±2.25 | 0.33 ±0.04* |
0.17 ±0.07* |
1.98 ±0.31* |
82.71 ±13.58* |
[H22 종양을 갖는 마우스에서 60Co 방사선 요법에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 독성 감소 효과(
，n=10)]
*P< 0.05，**P< 0.01, 블랭크 유제+60Co군과 비교
표 9의 자료는 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약이 H22 종양이 있는 마우스에서 60Co 화학 요법에 대해 독성 감소 효과가 있음을 나타낸다.
<실시예 21> 정상 마우스에서
60
Co 화학 요법에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 독성 감소 효과 실험
실험 방법: ICR 마우스 60 마리를 취해, 블랭크 대조군인 10 마리를 제외하고 다른 50 마리는 500rad의 방사선량으로 60Co를 조사하였다. 60Co를 조사한 후에 암컷, 수컷 반반씩 체중에 따라 각 군당 10 마리인 5군으로 무작위로 나누었다. 실험에서 블랭크 대조군, 정맥 주사 대조군(20 ㎖/kg, 블랭크 유제), 주사용 영지 포자유 지방 유제 고, 중, 저용량군(1, 0.5, 0.25g/kg) 정맥 주사 투여, 양성 대조군 약물 타이모신 a1 주사군(0.42 mg/kg) 피하 투여하였다. 모든 군의 동물은 접종한 지 24시간 후에 타이모신 a1을 격일에 한번씩 투약한 것을 제외하고, 다른 군은 매일 1회, 모두 7회 투여하였다. 투약을 종료한 지 24시간 후에 마우스를 죽이고, 죽이기 전에 무게를 재고, 안와 정맥에서 채혈하여, 말초 혈액 백혈구의 총수를 현미경으로 검사하였다. 동시에 비장, 흉선 및 한쪽의 완전한 대퇴골을 떼어내어 골수내의 유핵세포수를 측정하였다. 흉선과 비장의 무게를 재고 흉선과 비장 계수를 계산하여, 통계 처리를 수행하였다(t 테스트).
실험 결과: 결과는 블랭크 대조군과 비교하면 블랭크 유제+60Co 모델(500 rad)군의 말초 백혈구와 골수내의 유핵세포수 뿐만 아니라 흉선 및 비장 계수가 현저하게 감소함을 나타낸다(P<0.01). 60Co 모델군과 비교하면 타이모신 a1 주사군은 정상 마우스에서 60Co에 의한 말초 혈액 백혈구와 골수내의 유핵세포수, 흉선 계수와 비장 계수의 감소를 현저하게 막아낼 수 있었으며(P<0.05), 정맥 주사용 영지 포자유 지방 유제 고용량군은 정상 마우스에서 60Co에 의한 말초 혈액 백혈구수, 골수내의 유핵세포수, 비장 계수의 감소를 현저하게 막아낼 수 있었다(P<0.05). 결과는 표 10에 나타낸다.
| 군별 |
용량 (mg/kg) |
마우스 체중(g) | 비장 계수 (g/100g) |
흉선 계수 (g/100g) |
WBC (109/L) |
골수 유핵세포수(105/근) | |
| 투약전 | 투약후 | ||||||
| 블랭크 대조군 |
19.60±1.35 | 24.70 ±2.11* |
0.50 ±0.16** |
0.30 ±0.13** |
4.27 ±1.22** |
221.90 ±63.09** |
|
| 60Co+블랭크 유제 | 100 | 19.40±1.43 | 22.60 ±2.12 |
0.18 ±0.05 |
0.09 ±0.04 |
0.87 ±0.16 |
54.95 ±14.22 |
| 60Co+주사용 영지 포자유 지방 유제 |
1000+100 | 19.70±1.25 | 23.40 ±2.12 |
0.26 ±0.09* |
0.13 ±0.06 |
1.09 ±0.29* |
66.99 ±11.21* |
| 500+100 | 19.70±1.42 | 22.60 ±2.27 |
0.28 ±0.12* |
0.09 ±0.04 |
0.96 ±0.35 |
63.04 ±13.17 |
|
| 250+100 | 19.50±1.65 | 22.80 ±2.25 |
0.28 ±0.13* |
0.10 ±0.04 |
0.98 ±0.15 |
55.89 ±13.43 |
|
| 60Co+타이모신 a1 | 0.42+100 | 19.90±1.66 | 23.30 ±2.11 |
0.31 ±0.14* |
0.14 ±0.05* |
1.21 ±0.38* |
67.83 ±13.09* |
[정상 마우스에서 60Co 방사선 요법에 대한 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약의 독성 감소 효과(，n=10)]
*P< 0.05，**P< 0.01, 60Co+블랭크 유제군과 비교
표 10의 자료는 영지 포자유 지방 유제 정맥 주사 투약이 정상 마우스의 60Co 방사선 요법에 대해 독성 감소 효과가 있음을 나타낸다.
Claims (10)
- 정제된 영지 포자유 2~25 중량%, 유화제 0.5~10 중량%, 등장화제 0.2~5 중량% 및 나머지는 물로 구성되고, 지방 유제의 최종 pH는 6~9인 영지 포자유 지방 유제류.
- 청구항 1에 있어서,
정제된 영지 포자유는 추출 후 영지 포자유를 정제한 것으로, 정제 방법은 영지 포자유를 원심 분리시켜 수분을 제거하고, 영지 포자유 중량의 0.5%~10%인 흡착제를 첨가하여 균질하게 될 때까지 교반하고 40~70℃로 가열하여, 20~40분간 온도를 일정하게 한 후 원심 분리, 막 여과로 정제된 영지 포자유를 얻는 단계를 포함하고, 상술한 흡착제는 활성탄, 실리카겔, 중성 산화 알루미늄, 규조토 및 백토 중 하나 또는 둘 이상의 혼합물인 것을 특징으로 하는 영지 포자유 지방 유제류. - 청구항 1에 있어서,
상기 유화제는 대두 레시틴, 달걀 노른자 레시틴, 플루로닉(pluronic), 폴리글리세롤 팔미틱 디올(polyglycerol palmitic diol) 또는 알긴산염(alginate) 중 하나 또는 둘 이상의 혼합물인 것을 특징으로 하는 영지 포자유 지방 유제류. - 청구항 1에 있어서,
상기 등장화제는 글리세린, 글루코오스, 만니톨, 말토오스 또는 소르비톨 중 하나 또는 둘 이상의 혼합물인 것을 특징으로 하는 영지 포자류 지방 유제류. - 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용하여 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드(1,2-oleic-3-palmitic triglyceride) 및/또는 글리세롤 트리올레이트(glycerol trioleate)의 함유량을 측정하여 영지 포자유 지방 유제 1g당 2mg~62.5mg의 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드 및/또는 1.6mg~50.0mg의 글리세롤 트리올레이트가 존재하고,
상기 HPLC는 옥타데실 실란을 충전제로 하고, 아세토니트릴, 이소프로판올, 디클로로메탄의 3가지 용제를 임의의 비율로 한 이원 또는 삼원 혼합물을 이동상으로 하고, 이동상의 유속이 0.5~2.0㎖/min이며, 그 후 증기화 광 산란 검출기 또는 시차굴절률 검출기로 검출하고, 이론단(theoretical plate) 수는 1,2-올레익-3-팔미틱 트리글리세라이드 또는 글리세롤 트리올레이트의 피크에 따라 계산하며, 둘다 2000 이상이어야 하고, 크로마토그래피 컬럼 온도는 10~50℃인 크로마토그래피 조건에 따라 수행되는 것을 특징으로 하는 청구항 1의 영지 포자유 지방 유제의 품질 관리 방법. - 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용하여 에르고스테롤의 함유량을 측정하여 영지 포자유 지방 유제 1g당 에르고스테롤이 0.04mg~7.5mg 함유되며,
상기 HPLC는 옥타데실 실란을 충전제로 하고, 메탄올, 에탄올, 아세토니트릴, 메탄올 수용액, 에탄올 수용액 또는 아세토니트릴 수용액을 이동상으로, 또는 메탄올, 에탄올, 아세토니트릴 및 물의 삼원 또는 사원 혼합액을 이동상으로, 또는 테트라히드로푸란과 물의 혼합물을 이동상으로 하고, 테트라히드로푸란과 물의 부피비를 75:25로 하며, 검출 파장은 280±2nm로 하고, 이론단 수는 에르고스테롤 피크에 따라 계산하여 2000 이상인 크로마토그래피 조건에 따라 수행되는 것을 특징으로 하는 청구항 1의 영지 포자유 지방 유제의 품질 관리 방법. - 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 영지 포자유 지방 유제의 수 회분의 크로마토그램과, 공통의 특징적인 피크로 구성된 영지 포자유 지방 유제의 표준 지문을 비교하는 것을 특징으로 하는 청구항 1의 영지 포자유 지방 유제의 품질 관리 방법.
- 청구항 7에 있어서,
고성능 액체 크로마토그래피의 조건이 옥타데실 실란을 크로마토그래피 컬럼용 충전제로 하고, 아세토니트릴-이소프로판올을 이동상으로 하며, 이들의 부피비를 53:47로 하고, 증기화 광 산란 검출기로 검출하며, 글리세롤 트리올레이트를 대조군으로 하고,
영지 포자유 지방 유제의 지문에는 15개의 공통 피크가 있고, 그 중 각각 총 피크 면적의 5% 이상인 4개의 지문 피크가 있으며, 글리세롤 트리올레이트 크로마토그램 피크의 상대 머무름 시간(relative retention time)을 1로 해서 다른 크로마토그램 피크의 상대 머무름 시간 뿐만 아니라, 상대 피크 면적을 계산하며, 상기 4개의 지문 피크는 머무름 시간 RT는 0.778이고, 상대 피크 면적이 9.54~15.36％인 피크 9; 평균 머무름 시간인 RT는 0.832이고, 상대 피크 면적이 5.76~9.43%인 피크 10; 글리세롤 트리올레이트에 대한 평균 머무름 시간인 RT는 1.000이고, 상대 피크 면적이 22.29~27.80%인 피크 11; 평균 머무름 시간인 RT는 1.075이고, 상대 피크 면적이 26.82~37.76%인 피크 12인 것을 특징으로 하는 표준 지문. - 면역력을 향상시키고 방사선 요법 및 화학 요법 약물의 독성을 감소시키면서 종양을 치료하는 것을 특징으로 하는 청구항 1의 영지 포자유 지방 유제류의 용도.
- 청구항 9에 있어서,
상기 약물의 제형은 주사용 유제인 것을 특징으로 하는 용도.
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