CN113908126A - 一种灵芝孢子油纳米乳及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药物制剂技术领域，具体公开了一种灵芝孢子油纳米乳及其制备方法。所述的灵芝孢子油纳米乳的制备方法，其包含如下步骤：S11.取表面活性剂和有机溶剂混合，搅拌均匀后得溶液；S12.将灵芝孢子油(GLSO)加入到步骤S11制备得到的溶液中，搅拌均匀后加入去离子水，继续搅拌均匀得灵芝孢子油初乳混合物；S13.将灵芝孢子油初乳混合物转移至高压均质机中进行均质得灵芝孢子油纳米乳。由该方法制备得到的灵芝孢子油纳米乳粒径均匀，无论是在水环境还是生理环境下，都能够在6天内保持相对稳定，使得芝孢子油纳米乳的粒径保持在70‑100nm之间。
Description
技术领域
本发明涉及药物制剂技术领域，具体涉及一种灵芝孢子油纳米乳及其制备方法。
背景技术
灵芝孢子油为黄色透明液体，主要成份是灵芝酸、不饱和脂肪酸、灵芝多糖等；其具有护肝、解毒、杀灭癌细胞和止痛等药理作用。但是灵芝孢子油溶解性以及渗透性差。
纳米乳(nanoemulsion)又称微乳液(microemulsion)，是由水、油、表面活性剂和助表面活性剂等自发形成，粒径为1～100nm的热力学稳定、各向同性，透明或半透明的均相分散体系；其为难溶性药物相关的研究提供了新思路。已有大量文献报道，纳米药物递送系统可有效改善难溶性药物的溶解度和渗透性，能提高药物生物利用度，增强药物治疗效果并减少对机体的代谢负担。但是现有技术针对灵芝孢子油纳米乳的研究报道较少。发明人在研究中发现，如何制备得到粒径均匀、体系稳定以及不会使得灵芝孢子油的化学结构基团发生改变的灵芝孢子油纳米乳是本发明的难点。
发明内容
为了克服现有技术中存在的至少之一的技术问题，本发明提供了一种灵芝孢子油纳米乳的制备方法。
本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：
一种灵芝孢子油纳米乳的制备方法，其包含如下步骤：
S11.取表面活性剂和有机溶剂混合，搅拌均匀后得溶液；
S12.将灵芝孢子油(GLSO)加入到步骤S11制备得到的溶液中，搅拌均匀后加入去离子水，继续搅拌均匀得灵芝孢子油初乳混合物；
S13.将灵芝孢子油初乳混合物转移至高压均质机中进行均质得灵芝孢子油纳米乳。
本发明提供了一种全新方法制备得到的灵芝孢子油纳米乳；通过在本发明的上述方法下制备得到的该灵芝孢子油纳米乳粒径均匀。
优选地，步骤S11中的表面活性剂为吐温80。
发明人在大量的研究中惊奇的发现：当表面活性剂选择为吐温80时，其包裹灵芝孢子油提高其稳定性与水溶性的同时，仍能保证其中活性成分的化学结构基团不被改变。
优选地，步骤S11中的有机溶剂为无水乙醇。
优选地，步骤S11中表面活性剂和有机溶剂的体积比为2～4:0.1～0.2；
最优选地，步骤S11中表面活性剂和有机溶剂的体积比为3:0.15。
优选地，步骤S12中，灵芝孢子油(GLSO)与步骤S11制备得到的溶液的体积比为4～6:3～3。
最优选地，步骤S12中，灵芝孢子油(GLSO)与步骤S11制备得到的溶液的体积比为5:3～3.5。
优选地，去离子水与步骤S11制备得到的溶液的体积比为40～45:5～10。
最优选地，去离子水与步骤S11制备得到的溶液的体积比为40～42:8～8.5。
发明人经大量的实验表明，在上述条件参数下制备得到的灵芝孢子油，其粒径均匀，保持在70nm左右。
优选地，在步骤S13中的灵芝孢子油初乳混合物中加入姜黄素，形成灵芝孢子油和姜黄素初乳混合物。
在灵芝孢子油初乳混合物中加入姜黄素，形成灵芝孢子油和姜黄素初乳混合物；二者相互作用，使得灵芝孢子油初乳混合物一方面复合了姜黄素的功效，同时，姜黄素的加入也不会引起灵芝孢子油的化学结构基团的改变；另一方面，发明人惊奇的发现：在灵芝孢子油初乳混合物中加入姜黄素可以进一步大幅提高制备得到的芝孢子油纳米乳的稳定性，使得制备得到的芝孢子油纳米乳无论是在水环境还是生理环境下，都能够在6天内保持相对稳定，使得芝孢子油纳米乳的粒径保持在70-100nm之间。
优选地，姜黄素在灵芝孢子油和姜黄素初乳混合物中的含量为0.1～1.0mg/mL。
最优选地，姜黄素在灵芝孢子油和姜黄素初乳混合物中的含量为0.2～0.8mg/mL。
优选地，步骤S13中的均质包括初步均质和高压均质；
所述初步均质的条件为：均质压力为150～300bar，均质时间为1～3min，出样频率为30～50Hz；所述高压均质的条件为：均质压力为1000～1500bar，均质时间为8～15min，出样频率为30～50Hz。
最优选地，所述初步均质的条件为：均质压力为200bar，均质时间为2min，出样频率为40Hz；所述高压均质的条件为：均质压力为1200bar，均质时间为10min，出样频率为40Hz。
本发明还提供了一种由上述方法制备得到的灵芝孢子油纳米乳。
有益效果：本发明提供了一种全新的灵芝孢子油纳米乳的制备方法，由该方法制备得到的灵芝孢子油纳米乳粒径均匀，体系稳定；此外，本发明还通过加入姜黄素，使得制备得到的灵芝孢子油纳米乳还复合有姜黄素的功效；尤其是，加入姜黄素后是得制备得到的芝孢子油纳米乳无论是在水环境还是生理环境下，都能够在6天内保持相对稳定，使得芝孢子油纳米乳的粒径保持在70-100nm之间。
附图说明
图1为本发明灵芝孢子油纳米乳的粒度分析结果图。
图2为本发明灵芝孢子油纳米乳的TEM(透射电镜)形貌尺寸图。
图3为本发明灵芝孢子油纳米乳的拉曼光谱图。
图4为本发明灵芝孢子油纳米乳的原子力显微镜(AFM)分析图。
图5为本发明灵芝孢子油纳米乳在水环境以及生理环境下的稳定性分析结果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
实施例1灵芝孢子油纳米乳的制备
S11.取3mL吐温80(Tween 80)和0.15mL无水乙醇，置于烧杯中，于室温下搅拌5分钟得溶液；
S12.将5mL灵芝孢子油(GLSO)缓慢注入步骤S11制备得到的溶液中，于室温下搅拌5min，继续向其中注入去离子水至终体积为50mL，形成灵芝孢子油初乳混合物；
S13.向步骤S12制备得到的灵芝孢子油初乳混合物中加入10mg姜黄素(CUR)，继续搅拌15min，形成灵芝孢子油和姜黄素的初乳混合物，之后转移至高压均质机中进行初步均质和高压均质即得所述的灵芝孢子油纳米乳(简写成GLSO@CUR-0.2mg/mL)；
所述的初步均质条件为：均质压力为200bar，均质时间为2min，出样频率为40Hz；所述的高压均质条件为：均质压力为1200bar，均质时间为10min，出样频率为40Hz。
实施例2灵芝孢子油纳米乳的制备
S11.取2mL吐温80(Tween 80)和0.1mL无水乙醇，置于烧杯中，于室温下搅拌5分钟得溶液；
S12.将4mL灵芝孢子油(GLSO)缓慢注入步骤S11制备得到的溶液中，于室温下搅拌5min，继续向其中注入去离子水至终体积为50mL，形成灵芝孢子油初乳混合物；
S13.向步骤S12制备得到的灵芝孢子油初乳混合物中加入20mg姜黄素(CUR)，继续搅拌15min，形成灵芝孢子油和姜黄素的初乳混合物，之后转移至高压均质机中进行初步均质和高压均质即得所述的灵芝孢子油纳米乳(简写成GLSO@CUR-0.4mg/mL)；
所述的初步均质条件为：均质压力为150bar，均质时间为3min，出样频率为30Hz；所述的高压均质条件为：均质压力为1000bar，均质时间为15min，出样频率为30Hz。
实施例3灵芝孢子油纳米乳的制备
S11.取4mL吐温80(Tween 80)和0.2mL无水乙醇，置于烧杯中，于室温下搅拌5分钟得溶液；
S12.将5mL灵芝孢子油(GLSO)缓慢注入步骤S11制备得到的溶液中，于室温下搅拌5min，继续向其中注入去离子水至终体积为50mL，形成灵芝孢子油初乳混合物；
S13.向步骤S12制备得到的灵芝孢子油初乳混合物中加入40mg姜黄素(CUR)，继续搅拌15min，形成灵芝孢子油和姜黄素的初乳混合物，之后转移至高压均质机中进行初步均质和高压均质即得所述的灵芝孢子油纳米乳(简写成GLSO@CUR-0.8mg/mL)；
所述的初步均质条件为：均质压力为300bar，均质时间为1min，出样频率为50Hz；所述的高压均质条件为：均质压力为1500bar，均质时间为8min，出样频率为50Hz。
将实施例1～3制备得到的灵芝孢子油纳米乳进行表征实验，实验结果如下：
(1)通过粒度分析检测，我们发现实施例1～3制备得到的灵芝孢子油纳米乳均为70nm左右的球形纳米粒子(图1)，随着姜黄素浓度的升高，该纳米体系粒度并未发生明显变化。图(2)TEM结果进一步证明这个结论。同时，灵芝孢子油纳米乳在负染条件下，无磷钨酸吸附，衬度不变，呈现“白色”灵芝孢子油纳米乳。
(2)从图(3)中拉曼光谱结果可知，灵芝孢子油纳米乳在940.3，1306.8,1442.9cm-1的波段具有特征吸收峰，可归属于灵芝孢子油的特征拉曼图谱；此外，在1594.8和1631.5cm-1的波段具有特征吸收峰，可归属于姜黄素的特征拉曼图谱；实施例1～3制备得到的灵芝孢子油纳米乳中属于GLSO的特征吸收峰位置并未发生明显的偏移，这说明以TW80为聚合物外壳构建的纳米体系并不会破坏GLSO中活性成分的特征化学结构，在以聚合物外壳包裹GLSO提高其稳定性与水溶性的同时，仍能保证其中活性成分的化学结构基团不被改变。此外，姜黄素加入以及浓度的增加也不会引起灵芝孢子油的化学结构基团的改变。
(3)通过原子力显微镜(AFM)进一步对实施例1～3制备得到的灵芝孢子油纳米乳进行表征，如图(4)AFM结果可以看出，实施例1～3制备得到的灵芝孢子油纳米乳的纳米尺寸与透射电子显微镜下的颗粒尺寸基本一致，约70nm左右，其厚度约为2-4nm。
(4)我们还对实施例1制备得到的灵芝孢子油纳米乳在不同条件下的稳定性进行了监测分析，图(5)结果表明：实施例1制备得到的灵芝孢子油纳米乳在水环境(DW,distilled water)下能保持相对稳定，实施例1制备得到的灵芝孢子油纳米乳的粒度在144h的监测期内始终保持在70-100nm之间，变化并不明显。在与人血清(Human Serum)共孵育的条件下，实施例1制备得到的灵芝孢子油纳米乳的粒度变化相对明显，即从第144h开始至360h，该纳米体系的粒度由100nm升高至170nm左右。由此可见，无论是在水环境还是生理环境下，本发明制备得到的灵芝孢子油纳米乳都能够在6天内保持相对稳定。
Claims (10)
1.一种灵芝孢子油纳米乳的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：
S11.取表面活性剂和有机溶剂混合，搅拌均匀后得溶液；
S12.将灵芝孢子油(GLSO)加入到步骤S11制备得到的溶液中，搅拌均匀后加入去离子水，继续搅拌均匀得灵芝孢子油初乳混合物；
S13.将灵芝孢子油初乳混合物转移至高压均质机中进行均质得灵芝孢子油纳米乳。
2.根据权利要求1所述的灵芝孢子油纳米乳的制备方法，其特征在于，步骤S11中的表面活性剂为吐温80。
3.根据权利要求1所述的灵芝孢子油纳米乳的制备方法，其特征在于，步骤S11中的有机溶剂为无水乙醇。
4.根据权利要求1所述的灵芝孢子油纳米乳的制备方法，其特征在于，步骤S11中表面活性剂和有机溶剂的体积比为2～4:0.1～0.2；
最优选地，步骤S11中表面活性剂和有机溶剂的体积比为3:0.15。
5.根据权利要求1所述的灵芝孢子油纳米乳的制备方法，其特征在于，步骤S12中，灵芝孢子油(GLSO)与步骤S11制备得到的溶液的体积比为4～6:3～3；
最优选地，步骤S12中，灵芝孢子油(GLSO)与步骤S11制备得到的溶液的体积比为5:3～3.5。
6.根据权利要求1所述的灵芝孢子油纳米乳的制备方法，其特征在于，去离子水与步骤S11制备得到的溶液的体积比为40～45:5～10；
最优选地，去离子水与步骤S11制备得到的溶液的体积比为40～42:8～8.5。
7.根据权利要求1所述的灵芝孢子油纳米乳的制备方法，其特征在于，在步骤S13中的灵芝孢子油初乳混合物中加入姜黄素，形成灵芝孢子油和姜黄素初乳混合物。
8.根据权利要求7所述的灵芝孢子油纳米乳的制备方法，其特征在于，姜黄素在灵芝孢子油和姜黄素初乳混合物中的含量为0.1～1.0mg/mL；
最优选地，姜黄素在灵芝孢子油和姜黄素初乳混合物中的含量为0.2～0.8mg/mL。
9.根据权利要求1所述的灵芝孢子油纳米乳的制备方法，其特征在于，步骤S13中的均质包括初步均质和高压均质；
所述初步均质的条件为：均质压力为150～300bar，均质时间为1～3min，出样频率为30～50Hz；所述高压均质的条件为：均质压力为1000～1500bar，均质时间为8～15min，出样频率为30～50Hz；
最优选地，所述初步均质的条件为：均质压力为200bar，均质时间为2min，出样频率为40Hz；所述高压均质的条件为：均质压力为1200bar，均质时间为10min，出样频率为40Hz。
10.权利要求1～9任一项所述的制备方法制备得到的灵芝孢子油纳米乳。
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