KR20100082045A - 염증 및 통증 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 연골재생의 효과가 있는 글루코사민을 포함하고, 염증성 질환 및통증에 효과적인 인삼, 고추잎, 백작약, 감초, 우슬 추출물을 함유하는 관절염 치료용 조성물에 관한 것이다.

연골재생, 소염, 진통, 관절염, 생약추출물, 글루코사민

Description

염증 및 통증 치료용 조성물 {Pharmaceutical composition useful in the treatment pain and inflammation}

본 발명은 관절염 치료용 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로는 글루코사민을 포함하고 인삼, 고추잎, 백작약, 감초, 우슬 추출물을 함유한 조성물에 관한 것이다.

관절염(arthritis)이란 연화, 동통(pain)이 2주 이상 지속되는 부종과 발적 등의 증상을 특징으로 하는 질환이다. 관절염은 적어도 100가지 이상의 형태로 분류될 수 있으나 가장 빈번히 발병하는 것은 골관절염(osteoarthritis)과 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis)이다. 골관절염은 퇴행성 관절염(degenerative arthritis)이라고도 하며, 연령의 증가에 따른 관절의 노쇠로 인하여 뼈를 감싸고 있는 연골의 파괴로 심한 통증과 관절의 경직이 유발되며, 대부분의 경우 '극돌기(spurs)'라 불리는 뼈의 돌출물이 성장하여 통증을 더욱 악화시킨다. 특히 골관절염은 신진대사 및 세포 재생 능력이 저하되어 있는 고연령층에서 일어나는 퇴행성 질환으로, 그 근본적 치료가 거의 불가능하며, 외과적 수술, 약물 요법 및 물리 치료 등이 시행되고 있으나, 일부 보조 요법을 제외하면 많은 부작용의 위험을 감 수해야 한다. 류마티스 관절염은 관절이나 건(힘줄)의 활막에 비세균성 염증 반응이 만성적으로 나타나며, 이로 인해 활막이 증식되고 활액의 양이 증가하여 관절의 부종과 동통을 초래하는 질환이다.

관절염의 일반적인 치료 방법은 항염제 또는 진통제로 처방하여 통증만을 일시적으로 완화시키는 것이다. 그러나, 이러한 항염제 또는 진통제의 사용은 연골의 재생능력을 방해하여 관절의 연골 파괴를 가속화시키고, 과다 복용은 환자의 상태를 더욱 완화시키며, 위, 간, 신장 등에도 부작용을 발생시키는 문제점이 있다.

현재 임상적으로 많이 사용하고 있는 디클로페낙은 임상적 우수한 효과와 비례하여 임상적으로 많은 부작용을 가지는데, 디클로페낙의 유해효과는 환자의 약 20%에서 나타나는데 위장과 통증, 잠재 위장관 출혈, 위궤양, 장 손상과 간독성 등을 일으킬 수 있고, 디클로페낙은 150mg/kg 용량에서 신장의 혈류와 GFR(사구체여과율)의 장애를 일으키고(Katzung 약리학, Katzung, Bertram G, 한국맥그로 힐, pp580~587, 2006), 디클로페낙의 위장관 부작용에 관한 임상결과를 보면 진통효능이 있는 COX-2 억제제(셀레콕시브 등)와 NSAIDs(이부프로펜, 디클로페낙 등)를 투여하여 위장관의 부작용을 확인한 결과 NSAIDs 그룹이 COX-2 억제제 그룹에 비해 약 2배정도 부작용을 나타낸 인원이 많았고(JAMA, 284(10), 2000.9.), 또한 디클로페낙 투여시 ALT가 대조군에 비해 10~20배 이상이 증가하는 것으로 보고되었다(Biol. Lett. 2, pp279-282, 2006).

따라서, 부작용이 없으면서도 환자의 입장에서 봤을 때 연골재생, 염증, 통증 효과가 뚜렷하며 치료가 명확한 새로운 관절염 예방 및 개선 기능성 식품과 의 약품의 개발이 절실히 요구되고 있다.

본 발명은 한가지 성분으로 관절염 치료를 할 수 없으므로 관절염증상에 대한 연골재생 및 염증, 통증에 효과가 있는 복합 조성물로 글루코사민을 포함하고 여기에 몇가지 생약을 혼합한 조성물을 생산하여 전임상 실험을 통해 부작용을 감소하고 연골재생과 염증 및 통증에 대해 현저한 효과를 확인하였다.

본 발명은 상기 조성물에 대한 전임상, 임상 실험을 통하여 그 효능을 과학적으로 증명하고, 연골재생과 염증 및 통증에 효과가 있는 조성물을 제공하는데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 글루코사민을 포함하고 인삼, 고추잎, 백작약, 감초, 우슬 추출물을 함유한 조성물을 제공한다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

상기 구성에 있어서, 글루코사민(Glucosamine)은 체내에서 발견되는 천연물질로서, 생체중의 여러 가지 복합 당질의 당쇄중에 구성단위로 존재한다. 그 대표적인 것이 콘드로이친황산이나 히아론산의 뮤코다당류를 포함하는 프로테오글리칸이며, 종합조직, 피부조직, 연골 및 관절액등에 많이 분포되어 있다. 이들은 높은 보습효과를 가지고 세포의 기능이나 형태를 유지하며 윤활작용, 세포접착, 증식, 분화 등의 세포표면에 있어서 중요한 기능을 담당하고 있다. 글루코사민은 단독으로 관절염의 연골재생 치료에 기능성 식품으로 사용되고 있지만 관절염의 염증이나 통증을 완화하는 작용은 없으므로 완벽한 치료 효과를 나타내지 못하고 있는 실정이다.

인삼의 뇌두와 동체부위에 많이 함유되어 있는 인삼사포닌인 G-Ro는 여러가지 급성염증 모델실험에서 초산유도 혈관투과성의 억제효과와 카라기 닌(carrageenin)유도뷰종에 대한 억제적 효과를 나타내고 만성관절염증 모델(adjuvant-induced arthritis)에서도 유효성이 있음이 관찰되었다(Matsuda et al. 1990).

고추잎에는 캡사이신(capsaicin) 이라는 물질이 많이 들어있는데 캡사이신은 세포막에 존재하는 캡사이신 채널이라는 일종의 문을 열 수 있다. 그리고 이 채널을 통해 다량의 양이온이 세포내로 유입되면 통각신경세포를 흥분시켜 통증이 발생하게 된다. 이 통증이 매운 맛이다. 통증을 유발하는 캡사이신이 동시에 신경세포를 마비시켜 진통효과를 내기도 한다.

백작약(白灼藥)은 백작약(Paeonia japonica) 및 동속근연식물의 뿌리로서 이를 말려서 사용하며, 뿌리에는 파에오니플로린(paeoniflorin)이 함유되어 있고, 정유, 지방유, 수지, 탄닌, 당 등이 함유되어 있다. 진경작용, 진통, 항경련작용, 항균작용 등이 있다(정보섭; 향약대사전, 영림사, pp 524-525, 1998).

감초(Glycyrrhiza Radix)는 콩과(Leguminosae)의 다년생 초본인 감초 (Glycyrrhiza uralensis) 및 미감초의 근경으로, 성분으로는 트리터펜계 사포닌, 글리시리진(glycyrrhizin)등이 함유되어 있고, 혈중 콜레스테롤 강하, 항염증 및 항알레르기 작용, 위염증 치료, 강심작용을 한다(정보섭; 향약대사전, 영림사, pp 685-686, 1998).

우슬(牛膝)은 쇠무릎(Achyranthes japonica)의 뿌리를 말린 것으로, 당우슬 및 천우슬의 뿌리 두가지가 상용된다. 당우슬의 뿌리에는 트리테르페노이드 사포닌이 함유되어 있고, 다량의 칼륨염도 함유되어 있다. 예로부터 우슬은 정혈작용, 이 뇨효과, 혈압강하 효과, 진통작용이 알려져 있고, 보간(補肝), 보신(補腎)하고, 근골을 튼튼하게 하는 효능이 있다고 알려져 있다(정보섭; 향약대사전, 영림사, pp 340-341, 1998).

이에 본 발명자는 각 생약이 효과는 있지만 단독으로는 치료작용이 명확하지 못하기 때문에 여러 가지 생약을 적절히 조합한 복합 생약 추출물이 단독에 비해 약효 상승효과가 뚜렷하였으며, 의약품 만큼 우수한 연골재생 효과와 염증, 진통에 효과적으로 사용될 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 인삼, 고추잎, 백작약, 감초, 우슬로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 생약을 세척 및 건조한 후 중량의 약 1~25배, 바람직하게는 3~10배 분량의 정제수를 포함한 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올의 극성용매, 프로필렌글라이콜, 초산에틸, 부틸렌글리콜, 에테르, 클로로포름 용매 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 5~10배 분량의 정제수로 약 1~24시간, 바람직하게는 4~8시간 동안 환류냉각 추출하여 감압 여과 및 농축하여 본 발명의 인삼, 고추잎, 백작약, 감초, 우슬 추출물을 각각 수득할 수 있다.

본 발명은 상기 제조방법으로 수득된 추출물을 유효성분으로 포함하는 연골재생 효과와 염증, 진통의 예방 또는 치료 의약품 또는 건강식품 조성물을 제공한다. 보다 상세하게는, 본 발명은 인삼, 고추잎, 백작약, 감초, 우슬로 이루어진 추출물이며, 바람직하게는 추출물 구성의 배합비가 인삼추출물(0.1~1중량부):고추잎추출물(1~5중량부):백작약추출물(1~5중량부):감초추출물(0.5~3중량부):우슬추출물( 0.5~3중량부) 복합생약추출물을 포함하고 추가로 글루코사민(10~30중량부)를 포함할 수 있으며, 통상의 약학용 담체 또는 식품 첨가제를 혼합하여 연골재생 효과와 염증, 진통의 치료 또는 개선용 의약품 또는 건강식품 조성물을 제공한다.

본 발명은 관절염 치료 또는 개선 효과를 효과적으로 유지하는 범위 내에서 상기 생약추추물과 글루코사민을 적절하게 그 구성 생약을 첨가하거나 혹은 삭제하거나, 그 배합비를 적절하게 가감할 수 있으며, 본 발명의 목적에 적합하게 사용 될 수 있는 것들을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고제, 카타플라스마제, 경피흡수제, 좌제 및 멸균 주사용액 등의 액제 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 1~5000㎎/kg으로, 바람직하게는 1~2000㎎/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명의 추출물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 추출물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

또한, 본 발명의 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품 첨가제를 포함하 는 연골재생 효과와 염증, 진통 개선을 위한 건강 기능식품을 제공한다. 본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다. 상세하게는, 본 발명의 추출물을 유효성분으로 함유하는 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 연골재생 효과와 염증, 진통 개선용 건강 기능식품을 제공한다.

본 발명에 따른 조성물은 글루코사민, 생약 추출물 각각 단독의 연골재생과 항염증 및 항통증의 효과에 비해 약효상승 효과가 높아 연골재생 효과 또는 항통증, 함염증에 뛰어난 효과가 있다.

따라서, 본 발명은 글루코사민을 포함하고 천연약재를 이용하여 제조되므로 부작용 없이 연골재생 효과를 포함한 관절염에 의한 염증 및 통증을 완화할 수 있는 효과를 얻을 수 있다.

하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1 : 조성비 결정>

표1 과 같은 조건으로 조성비 결정을 위해 연골세포의 증식효과를 측정하였다. 조성물은 각각의 생약을 열수 추출한 후 각 추출물의 중량조성비를 구성하여 사용하였다.

표1. 단위: 중량(g)
그룹	글루 코사민	인삼 추출물	고춧잎 추출물	백작약 추출물	감초 추출물	우슬 추출물
1	5	0.05	0.5	0.5	0.5	0.1
2	10	0.1	1	1	0.5	0.5
3 (compound 109)	20	0.5	2.5	2.5	1	1
4	30	1	5	5	3	3
5	40	2	10	10	10	10

결과는 도 1 에 나타냈다. 대조군, 글루코사민 단독, 양성대조군인 디클로페낙과 비교했을 때 2~4번 그룹 시험군에서 모두 연골세포의 우수한 증식효과를 확인하였고, 특히 3번 그룹 시험군 조건에서 가장 우수한 연골재생의 증식효과를 나타내어 이로부터 글루코사민 10~30중량부, 인삼추출물 0.1~1중량부, 고추잎추출물 1~5중량부, 백작약추출물 1~5중량부, 감초추출물 0.5~3중량부, 우슬추출물 0.5~3중량부를 함유하는 조성물에서 우수한 연골세포 증식효과를 나타내었다.

<실시예 2 : 조성물의 제조>

각 생약(인삼, 고춧잎, 백작약, 감초, 우슬) 추출물의 제조는 각 생약원료 분말에 정제수를 생약 중량의 8배를 첨가하고, 100℃에서 6시간 추출한 후 정제수를 감압증류 제거하여 생약 추출물을 얻은 다음에 표1 과 같이 글루코사민을 포함한 조성비 구성에 사용된다.

본 발명에서는 상기 방법으로 제조된 인삼추출물 0.5g, 고춧잎추출물 2.5g, 백작약추출물 2.5g, 감초추출물 1g, 우슬추출물 1g에 글루코사민 20g을 혼합하고 여기에 정제수 500 ㎖를 첨가 용해한 후 Wattman No.2로 감압 여과하여 수득된 복합 생약추출물을 compound 109로 명명하였다. 또한, 글루코사민을 제외한 복합 생약추출물을 compound 108로 명명하였다.

<실험예 1 : 연골세포의 증식촉진>

1-1. 실험동물의 사육

시험동물은 오리엔트로부터 토끼, SD계 랫트 및 ICR계 마우스를 공급 받아 온도 23±1℃, 상대습도 55 ± 15% 및 300-500 룩스(Lux)의 조도로 12시간 간격으로 명암이 조절되는 동물 사육실에서 일주일이상 순화시킨 후 육안적 증상을 관찰하여 정상적인 동물만을 실험에 사용하였으며, 음식과 물은 자유로이 섭취하게 하였다.

1-2. 시험군의 구성

표2.
번호	시험군 (N=10)
1	대조군
2	글루코사민 단독
3	compound 108
4	compound 109
5	양성대조군(Diclofenac)

1-3. 시험물질의 조제 및 투여

시험 물질을 각각 체중의 용량으로 (1㎖/10g체중) 경구투여 바늘(sonde)을 사용하여 경구로 강제 투여하였다. 투여 부피는 투여 당일에 측정된 체중에 따라 산출하였고, 대조군은 생리식염수만 투여하였다(1㎖/10g체중). 디클로페낙은 25mg/kg/0.1㎖의 용량으로 경구 투여하였다.

1-4. 연골 세포분리

3~4주령 토끼에서 무균상태에서 연골조직을 분리한 후 0.2% collagenase type II로 37℃ 4시간 처리한 후 100㎛ 필터로 여과하여 연골 세포를 얻었다. 세포 는 37℃, 5% CO2에서 연골세포배지(DMEM/F12, 10%FBS, Insulin, nonessential amino acid, penicillin, Gibco BRL products)로 2일마다 교체해주었다.

1-5. 증식 어세이(proliferation assay)

연골조직에서 분리된 연골세포를 96-well plate에 3×10³/ml로 seeding하고 세포가 plate에 완전히 붙은 후 1%FBS-DMEM와 실시예1에서 선택된 3번의 조성물이 첨가된 배지로 48시간 배양한 후 cell proliferation kit(XTT, Roche)를 사용하여 세포 증식실험을 하였다. 실시예 1에서 선택된 3번 조성으로 연골세포의 증식효과를 확인한 결과 도 2 에 나타낸 바와 같이 본 발명의 compound 108은 연골세포의 증식을 촉진시켰지만 글루코사민을 포함한 복합 조성물 compound 109는 글루코사민 단독과 글루코사민을 제외한 복합 생약추출물인 compound 108의 연골세포의 증식효과에 비해 그 효과를 상승시키는 것을 확인하였다.

<실험예 2 : 항염증 효능 평가 실험>

2-1. 실험동물의 사육

실험동물 및 사육조건은 실험예 1-1과 같은 방법으로 사육되어 실험에 사용되었고, 시험물질의 조제 및 투여는 실험예 1-3의 조제방법으로 각각 준비하고 투여 부피는 투여 당일에 측정된 체중에 따라 산출하였고, 대조군은 생리식염수만 투여하였다(1㎖/10g체중). 디클로페낙은 25mg/kg/0.1㎖의 용량으로 경구 투여하였다.

2-2. 항염증 효능 평가 시험: 카라기난-유도 뒷발 부종실험 (Carrageenan-induced hind paw edema)

체중 150-170 g의 SD계 웅성 랫트를 사용하여 시험물질을 14일간 경구 투여한 후, 15일째 기염제로 1% 타입 IV 람다 카라기난-생리식염수(lambda carrageenan-saline) 용액 0.1㎖를 랫트의 오른쪽 뒷발의 족저 중심부 피하에 주사하여 부종을 유발하였다(Winter 등, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 111, 544-547. 1962). 기염제 투여 후 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간과 6시간에 부종측정기인 플레티스모메터(plethysmometer, Ugo Basile, Italy)로 발의 용적을 측정하여, 기염제 투여 전의 발의 용적과 비교하여 부종증가율을 산출하였다(수학식1 참조). 또한 대조군의 부종 증가율과 시험물질 투여군의 부종증가율을 비교하여 부종억제율을 산출하였다(수학식2 참조). 양성대조군으로는 디클로페낙(25mg/kg체중)을 사용하였다.

수학식1:

수학식2:

조성물을 2주간 반복 투여한 후, 1% 카라기난으로 족부종을 유발시킨 랫트의 족부종 변화를 관찰한 결과는 하기 표3 과 같다. 대조군의 발부피 증가율을 100% 대비하여 억제율로 표시하였다.

표3.
시험군	부종 억제율(%)
대조군	-
글루코사민 단독	10.62
compound 108	25.57***
compound 109	31.21***
양성대조군(Diclofenac)	33.69***
각 수치는 시험군당 N=10 랫트에 대한 평균±표준편차로 나타낸 것임, ***: 대조군에 대해 유의적으로 상이함(P<0.001)

실험 결과, 상기 표3 에서 나타낸 바와 같이 본 발명의 compound 108은 실험쥐에 유발된 부종을 유의적으로 억제하였지만 글루코사민을 포함한 복합 조성물 compound 109는 글루코사민단독과 compound 108에 비해 실험쥐에 유발된 부종을 유의적으로 억제하였으며, 부종 억제율의 상승정도는 소염진통제인 디클로페낙과 유사한 정도로 억제시켜, 소염효과가 우수함을 확인할 수 있었다. 하지만 디클로페낙은 소화기 궤양이나 위장 출혈, 설사와 같은 부작용을 야기하였지만 본 발명의 조성물은 부작용이 나타나지 않았다.

2-3. 항염증 효능 평가 시험: 아쥬반트-유도 관절염 실험 (Adjuvant-induced arthritis)

클라우드 등(Claude VW, et al.; Arthritis and Rheumatism, 12, pp472-482, 1969)의 방법에 따라, 150-170g 의 SD계 웅성 랫트를 사용하여 마이코박테리움 결핵균(Mycobacterium tuberculosis)이 1mg/㎖의 농도로 함유된 완전 프러운트 어쥬반트(complete Freund's adjuvant)를 랫트의 오른쪽 뒷발 족저 중심부에 0.1㎖/paw의 용량으로 피내주사 하였다. 시험물질은 어쥬반트 투여 후, 20일 동안 같은 시간에 경구로 투여하고 2일에 한번씩 발부종 정도를 부종측정기인 플레티스모메터로 측정하여, 상기 수학식 1 및 2에 따라 부종증가율 및 부종억제율을 산출하여 대조군과 비교하였다. 양성 대조군으로는 디클로페낙(25mg/kg체중)을 사용하였다. 대조군의 발부피 증가율을 100% 대비하여 억제율로 표시하였다.

상기와 같이 완전 프러운트 어쥬반트로 랫트의 관절염을 유발시킨 후, 조성물을 20일간 반복 투여시 부종율의 변화를 관찰한 결과는 하기 표4 와 같다.

표4.
시험군	부종 억제율(%)
대조군	-
글루코사민 단독	9.75
compound 108	27.49***
compound 109	33.28***
양성대조군(Diclofenac)	35.46***
각 수치는 시험군당 N=10 랫트에 대한 평균±표준편차로 나타낸것임, ***: 대조군에 대해 유의적으로 상이함(P<0.001)

실험 결과, 상기 표4 에서 나타낸 바와 같이 본 발명의 compound 108은 실험쥐에 유발된 부종을 유의적으로 억제하였지만 글루코사민을 포함한 복합 조성물 compound 109는 글루코사민단독과 compound 108에 비해 실험쥐에 유발된 부종을 유의적으로 억제하였으며, 부종 억제율의 상승정도는 소염진통제인 디클로페낙과 유사한 정도로 억제시켜, 소염효과가 우수함을 확인할 수 있었다. 하지만 디클로페낙은 소화기 궤양이나 위장 출혈, 설사와 같은 부작용을 야기하였지만 본 발명의 조성물은 부작용이 나타나지 않았다.

2-4. 항염증 효능 평가 시험: 아세트산-유도 혈관 투과성 시험 (Acetic acid-induced vascular permeability)

휘틀(Whittle BA.; Brit. J. Pharmacol., 22, pp246-253, 1964)의 방법에 따 라, 시험 전 12시간을 절식시킨 25-28 g의 ICR계 웅성 마우스에 시험물질을 경구로 투여하였다. 투여 30분 후, 2.5% 에반스 블루 용액(Evans blue solution, 0.1㎖/10g체중)을 꼬리 정맥을 통하여 투여하고, 20분 후 0.6% 아세트산 생리식염수(acetic acid saline solution)를 0.1㎖/10g체중의 용량으로 복강내 주사하여 혈관 투과성의 항진을 유도하였다. 20분 후, 경추 탈골로 마우스를 치사시켜 5㎖의 생리식염수를 복강에 가하고 복부를 가볍게 흔들어준 후 세척액을 취하였다. 세척액을 2,000rpm에서 10분간 원심분리한 후, 상층액을 취하여 스펙트로포토메터(spectrophotometer)를 사용하여 630 nm에서 흡광도를 측정함으로써 복강 내로 유출된 에반스 블루의 양을 산출하였다. 양성 대조군으로는 디클로페낙(25mg/kg체중)을 사용하였다. 대조군의 염색약 삼출양 증가율을 100% 대비하여 억제율로 표시하였다.

표5.
시험군	부종 억제율(%)
대조군	-
글루코사민 단독	8.23
compound 108	20.72**
compound 109	25.69**
양성대조군(Diclofenac)	27.64**
각 수치는 시험군당 N=10 마우스에 대한 평균±표준편차로 나타낸것임, **: 대조군에 대해 유의적으로 상이함(P<0.01)

실험 결과, 상기 표5 에서 나타낸 바와 같이 본 발명의 compound 108은 아세트산으로 유도된 복강 내 에반스 블루의 삼출량을 유의적으로 억제하였지만, 글루코사민을 포함한 복합 조성물 compound 109는 글루코사민단독과 compound 108에 비해 아세트산으로 유도된 복강 내 에반스 블루의 삼출량을 유의적으로 억제하였으 며, 부종 억제율의 상승정도는 소염진통제인 디클로페낙과 유사한 정도로 억제시켜, 소염효과가 우수함을 확인할 수 있었다. 하지만 디클로페낙은 소화기 궤양이나 위장 출혈, 설사와 같은 부작용을 야기하였지만 본 발명의 조성물은 부작용이 나타나지 않았다.

<실험예 3 :진통 효능 평가 실험>

3-1. 실험동물의 사육

시험동물 및 사육조건은 실험예 1-1과 같은 방법으로 사육되어 실험에 사용되었고, 시험물질의 조제 및 투여는 실험예 1-3의 조제방법으로 각각 준비하고 투여 부피는 투여 당일에 측정된 체중에 따라 산출하였고, 대조군은 생리식염수만 투여하였다(1㎖/10g체중). 디클로페낙은 25mg/kg/0.1㎖의 용량으로 경구 투여하였다.

3-2. 진통 효능 평가 실험: 아세트산-유도 뒤틀림 현상 실험(Acetic acid-induced writhing syndrome)

시험 전 12시간을 절식시킨 25-28g의 ICR계 웅성 마우스에 시험 물질을 경구 투여하였다. 투여 30분 후, 0.7% 아세트산-생리식염수 용액을 0.1㎖/10g체중의 용량으로 복강내 주사하여 통증을 유발시킨 10분 후부터 10분간의 뒤틀림 현상(writhing syndrome)의 발생회수를 측정하였다(Koster 등, Fed. Proc. 18, pp412-418. 1959). 양성대조약물은 디클로페낙(25mg/kg체중)을 사용하였다. 대조군의 횟수를 100% 대비하여 억제율로 표시하였다.

표6.
시험군	뒤틀림 억제율(%)
대조군	-
글루코사민 단독	12.7
compound 108	76.1***
compound 109	85.3***
양성대조군(Diclofenac)	87.7***
각 수치는 시험군당 N=10 마우스에 대한 평균±표준편차로 나타낸것임, ***: 대조군에 대해 유의적으로 상이함(P<0.001)

실험 결과, 상기 표6 에서 나타낸 바와 같이 본 발명의 compound 108은 아세트산으로 유도된 뒤틀림 현상의 횟수를 유의적으로 억제하였지만, 글루코사민을 포함한 복합 조성물 compound 109는 글루코사민단독과 compound 108에 비해 아세트산으로 유도된 뒤틀림 현상의 횟수를 유의적으로 억제하였으며, 진통 억제율의 상승정도는 소염진통제인 디클로페낙과 유사한 정도로 억제시켜, 진통효과가 우수함을 확인할 수 있었다. 하지만 디클로페낙은 소화기 궤양이나 위장 출혈, 설사와 같은 부작용을 야기하였지만 본 발명의 조성물은 부작용이 나타나지 않았다.

3-3. 진통 효능 평가 실험: 핫 플레이트 테스트(Hot plate test)

시험 전 12시간을 절식시킨 25-28g의 ICR계 웅성 마우스를 사용하였으며, 동통반응은 55℃로 유지되는 핫 플레이트(Ugo Basile, Italy)에 조심스럽게 올려 놓고 핫 플레이트 위에 접촉할 때부터 뛰어오를 때까지의 시간(sec)을 측정한 것을 지표로 열감에 의한 동통 반응을 측정하였다(Wolfe G, MacDonald AD.; J. Pharmacol. Exp. Ther., 80, pp300-307, 1944). 시험물질은 시험 30분 전에 경구로 투여하였고, 양성 대조물질로는 디클로페낙(25mg/kg체중)을 사용하였다. 대조군의 반응시간을 100% 대비하여 억제율로 표시하였다.

표7.
시험군	진통 억제율(%)
대조군	-
글루코사민 단독	12.73
compound 108	75.84***
compound 109	82.22***
양성대조군(Diclofenac)	84.21***
각 수치는 시험군당 N=10 마우스에 대한 평균±표준편차로 나타낸것임, ***: 대조군에 대해 유의적으로 상이함(P<0.001)

실험 결과, 상기 표7 에서 나타낸 바와 같이 본 발명의 compound 108은 진통을 유의적으로 억제하였지만, 글루코사민을 포함한 복합 조성물 compound 109는 글루코사민단독과 compound 108에 비해 진통을 유의적으로 억제하였으며, 진통 억제율의 상승정도는 소염진통제인 디클로페낙과 유사한 정도로 억제시켜, 진통효과가 우수함을 확인할 수 있었다. 하지만 디클로페낙은 소화기 궤양이나 위장 출혈, 설사와 같은 부작용을 야기하였지만 본 발명의 조성물은 부작용이 나타나지 않았다.

모든 결과에서 본 발명의 compound 109는 글루코사민 단독이나 생약 추출물 단독인 compound 108의 연골재생, 염증, 진통효과에 비해 복합 추출물일 경우 약효상승의 효과가 뚜렷한 것을 확인하였으며 그 상승의 정도는 소염진통제인 디클로페낙과 유사하지만 소화기 궤양과 같은 부작용을 야기한 디클로페낙과는 달리 본 발명의 조성물은 부작용을 야기하지 않았다.

<실험예 4: 조성물의 급성경구투여 독성실험>

6주령의 특정병원부재 (SPF) SD계 랫트를 사용하여 디클로페낙과 이 건 출원의 compound 108, 109'에 대한 급성독성실험을 실시하였으며, 실험군의 구성은 군당 암수 각각 5 마리씩의 동물에 대하여 디클로페낙, 추출물을 1g/kg, 2g/kg 및 5g/kg의 용량군으로 하였으며, 1회 경구투여 하였습니다. 디클로페낙, 추출물 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액 생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다.

실험결과, 디클로페낙을 투여한 모든 동물은 투여 후 10~20분경과 후 경련과 발작을 일으키며 사망하였으나, compound 108, 109'를 투여한 모든 동물에서는 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았으므로 이 발명의 compound 108, 109'가 독성을 나타내지 않는 것으로 확인되었다. 이상의 결과 본 발명의 compound 108, 109'는 랫트에서 5g/kg까지 독성변화를 나타내지 않는 안전한 물질로 판단되었다.

도 1은 글루코사민과 생약추출물의 조성비 결정을 위한 연골세포 증식효과에 대한 그래프이다.

도 2는 각 시험군에 대한 연골세포 증식효과에 대한 그래프이다.

Claims (6)

1. 글루코사민 10~30중량부, 인삼추출물 0.1~1중량부, 고추잎추출물 1~5중량부, 백작약추출물 1~5중량부, 감초추출물 0.5~3중량부, 우슬추출물 0.5~3중량부를 유효성분으로 함유하는 관절염, 통증, 염증 치료 또는 개선용 조성물.
2. 제 1 항에 있어서,

   상기 생약 추출물은 열수 추출물인 것을 특징으로 하는 관절염, 통증, 염증 치료 또는 개선용 조성물.
3. 제 1 항 또는 제 2 항의 조성물을 포함하는 관절염, 통증, 염증 치료 또는 예방용 약학조성물.
4. 제 3 항에 있어서,

   제 1 항 또는 제 2 항의 조성물을 유효성분으로 포함하는 정제, 산제, 연고제, 카타플라스마제, 경피흡수제 또는 액제 형태인 것을 특징으로 하는 관절염, 통증, 염증 치료 또는 예방용 약학조성물.
5. 제 1 항 또는 제 2 항의 조성물을 포함하는 관절염, 통증, 염증 개선용 건강 기능식품.
6. 제 5 항에 있어서,

   상기 식품은 식품 또는 식용음료의 형태로서 제제학적으로 허용되는 부형제를 추가로 포함하는 것임을 특징으로 하는 관절염, 통증, 염증 개선용 건강기능식품.

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