KR20100061823A

KR20100061823A - 발로마시클로비르 다형체

Info

Publication number: KR20100061823A
Application number: KR1020107007032A
Authority: KR
Inventors: 마이크 에이치. 오네일; 그레고리 피. 붓케
Original assignee: 에피파니 바이오사이언스즈, 인코포레이티드
Priority date: 2007-09-21
Filing date: 2008-09-18
Publication date: 2010-06-09
Also published as: CN101827846B; JP2010540440A; US9492456B2; NZ583607A; US20130203785A1; AU2008305666A1; US20100240681A1; HK1148007A1; CA2700227A1; MX2010003056A; EP2195319A4; WO2009042081A1; EP2195319A1; AU2008305666B2; US20150051229A1; CN101827846A

Abstract

본 발명은 발로마시클로비르의 결정형, 발로마시클로비르 결정형의 제조방법, 이의 약학적 조성물 및 이의 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

발로마시클로비르 다형체{Valomaciclovir Polymorphs}

본 출원은 미국 가출원 제60/994,719호 (2007년 9월 21일 출원)에 대한 우선권주장 출원이다. 이 출원은 모두 본 출원 명세서의 내용에 참고로서 포함된다.

본 발명은 발로마시클로비르의 결정형, 발로마시클로비르 결정형의 제조방법, 이의 약학적 조성물 및 이의 이용방법에 관한 것이다.

상이한 결정구조로 존재할 수 있는 화합물의 능력은 다형성 (polymorphism)으로 알려져 있다. 이러한 상이한 결정형은 "다형변형(polymorphic modifications)" 또는 "다형체(polymorphs)"로 알려져 있다. 다형체는 동일한 화학적 조성을 가지나, 패킹(packing) 및 기하학적 구조가 다르고 녹는점, 형태, 색깔, 밀도, 경도, 변형성(deformability), 안정도, 용해도 등과 같은 물리적 성질이 다르다("polymorphism in Pharmaceutical Solids"의 다양체의 이론 및 근원 (1999) ISBN: 0-8247-0237)).

발로마시클로비르 스테아레이트 또는 고유코드(proprietary code) EPB-348, MIV-606 또는 RP-606 (도 1A)로써 USAN에 의해 알려진 발로마시클로비르 [L-발린, (3R)-3-[(2-아미노-1,6-디하이드로-6-옥소-9H-퓨린-9-일)메틸]-4-[(1-옥소옥타데실)옥시]부틸 에스테르]는 강하고 폭넓은 범위의 효능을 지닌 항대상포진제인 비고리형의 구아노신 유도체 H2G (도 1B)의 디에스테르 전구약물 (발린 및 스테아르산)이다. H2G는 인간 수두 대상포진 바이러스(human varicella zoster virus, VZV), 엡스타인-바 바이러스(Epstein-Barr virus, EBV), 인간 헤르페스 바이러스-6 (human herpes virus-6, HHV-6), HSV-1, 및 HSV-2에 대하여 강한 활성을 가진다. 미국 특허 제 5,869,493는 발로마시클로비르의 제조 및 활성에 대해 개시하고 있다.

발로마시클로비르는 대상포진 (shingles(zoster)) 및 다른 바이러스 질병의 경구용 활성제로써 개발 중에 있다. 발로마시클로비르는 몇가지 인간 임상연구 단계 I에서 매일 총 투여량 6.0 g까지 복수 복용 후에도 안전하고 내성이 좋았다(tolerated). 대상포진 환자에게 7일 동안 250, 500, 및 750 mg의 발로마시클로비르 현탁액과 대조군으로 아시클로비르(acyclovir)를 사용한 BID에서 임상 단계 II (M98-829)로부터의 결과는 대상포진 손상 치료 및 대상포진 후 신경통(post herpetic neuralgia)을 가지는 환자에서 발로마시클로비르를 추가적인 사용할 수 있음에 대한 근거를 위한 기능검증(proof of contept, POC)을 제공하였다.

발로마시클로비르는 구아닌 일부분, 아미노산 에스테르 및 긴사슬의 지방산 에스테르를 포함한다. 이러한 성분의 각각은 다양한 제형의 어려움을 가져왔고 발로마시클로비르도 예외는 아니다. 특허공개 (즉, 국제공개 제 WO98/34917, WO00/08025 및 WO03/02564) 및 미국특허 제 6,184,376는 발로마시클로비르의 다양한 합성방법에 대해 개시한다. 그러나 기존의 합성방법은 무정형의 물질, 무정형 및 결정형 물질의 혼합물 또는 미흡하게 특징지어진 부분적으로 질서 정연한 물질의 혼합물인 경향이었다. 이와 같은 결과의 물질은 종종 아주 좋지 않은 유동성 및 응집력을 가졌고 이는 취급 및 가공을 상당히 방해하였다. 발로마시클로비르의 이전의 임상 단계 I 및 II는 물질의 물리적 특징으로 인한 이러한 취급 및 가공의 어려움을 피하기 위하여 액상 현탁액으로 수행하였다. 그러나 액상의 현탁액은 투여하기가 쉽지 않고, 특히 대상포진의 주 환자인 나이가 많은 환자에게는 투여가 어렵기 때문에 이는 임상학적으로 바람직한 제형이 아니다.

따라서, 안정한 결정형의 발로마시클로비르 및 이의 안정한 형태의 재현가능한 제조방법의 필요성이 여전히 남아있다.

본 발명은, 제 1 측면에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르를 포함하는 안정한 결정형의 발로마시클로비르를 제공함으로써 상기의 문제점 및 다른 요구를 만족시킨다. 다형체 A는 가장 결정형이고 열역학적으로 가장 안정한 발로마시클로비르의 다형체이다.

제 2 측면에 있어서, 안정한 결정형의 발로마시클로비르 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.

제 3 측면에 있어서, 안정한 결정형의 발로마시클로비르의 재현 가능한 제조방법이 제공된다. 상기 방법은 발로마시클로비르를 저급 알카놀 용매 또는 저급 알카놀의 혼합 용액에서 적합한 내부온도로 가열함으로써 용해시키는 단계, 발로마시클로비르의 상당한 결정화를 위하여 교반하면서 냉각하는 단계, 및 결정 생성물을 수집하는 단계를 포함한다.

제 4 측면에 있어서, 본 발명은 치료학적 유효량의 안정한 결정형의 발로마시클로비르 또는 이의 약학적 조성물을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 바이러스 감염 환자의 치료방법을 제공한다. 본 발명의 방법을 사용하여 치료 가능한 바이러스 감염은, 이에 한정되지 않으나, 예를 들어 수두 대상포진 바이러스, 단순 포진 바이러스(herpes simplex viruses, HSV-1 및 HSV-2), 인간 헤르페스 바이러스(human herpers viruses, HHV-6, HHV-7 및 HHV-8), 엡스타인-바 바이러스(Epstein-Barr virus, EBV), 시토메갈로 바이러스(cytomegalovirus), 및 HIV에 의해 의한 것이다.

도 1은 발로마시클로비르 (A) 및 H2G (B)의 구조를 나타낸다.
도 2는 발로마시클로비르 다형체 A의 특유의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.
도 3은 발로마시클로비르 다형체 A의 특유의 DSC 열 분석도(thermogram)를 나타낸다.
도 4A 및 4B는 발로마시클로비르의 제조에 대한 합성 메커니즘을 나타낸다.
도 5 A-D는 발로마시클로비르의 제조에 있어서 최종단계의 다양성을 나타낸다.
도 5E는 샘플 로트 45-548-YS-00 및 12-03-011의 분말 XRD 패턴을 나타낸다.
도 5F는 샘플 로트 45-548-YS-00의 DSC를 나타낸다.
도 5G는 샘플 로트 2-03-011H의 DSC를 나타낸다.
도 5H는 발로마시클로비르 샘플 로트 12-03-018, 06-01159-2 및 146756의 DSC를 나타낸다.
도 5I는 발로마시클로비르 샘플 로트 12-03-018, 06-01159-2 및 146756의 분말 XRD 패턴을 나타낸다.
도 6은 재결정화 과정의 냉각곡선을 나타낸다.
도 7은 재결정된 발로마시클로비르 샘플의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.
도 8은 재결정된 발로마시클로비르 샘플의 DSC 열 분석도를 나타낸다.
도 9는 10-100 g 배치(batch)의 다형체 A의 HPLC 오버레이 플롯(plot)을 나타낸다.
도 10 A-D는 다형체 스크리닝 실험의 재결정화 패널을 나타낸다.
도 11A는 그룹 A의 회절 특성을 나타낸다.
도 11B는 그룹 A의 회절 특성을 나타낸다.
도 12A는 그룹 B1의 회절 특성을 나타낸다.
도 12B는 그룹 B1의 회절 특성을 나타낸다.
도 13A는 형태 B1 (로트 12-03-011)의 가변 온도형 XRD 특성을 나타낸다.
도 13B는 형태 B1 (로트 12-03-011)의 가변 열 특성을 나타낸다.
도 14A는 그룹 B2의 회절 특성을 나타낸다.
도 14B는 그룹 B2의 열 특성을 나타낸다.
도 15A는 그룹 B2의 원형의 열 특성을 나타낸다.
도 15B는 그룹 B2의 원형의 열 특성을 나타낸다.
도 16A는 그룹 B3의 회절 특성을 나타낸다.
도 16B는 그룹 B3 회절 특성을 나타낸다.
도 17A는 그룹 B3의 원형의 열 특성을 나타낸다.
도 17B는 그룹 B3의 원형의 열 특성을 나타낸다.
도 18A는 그룹 B4의 회절 특성을 나타낸다.
도 18B는 그룹 B4의 열 특성을 나타낸다.
도 19A는 그룹 B4의 원형의 열 특성을 나타낸다.
도 19B는 그룹 B4의 원형의 열 특성을 나타낸다.
도 20A는 그룹 C의 회절 특성을 나타낸다.
도 20B는 그룹 C의 열 특성을 나타낸다.

본 명세서는 다음의 정의 및 추가 설명에 비추어 보는 것이 바람직하다.

실시예 또는 여기서 달리 명시되지 않은 발명의 상세한 설명 및 청구항에서 사용되는 성분, 반응조건 등 양을 나타내는 모든 수는 모든 경우에 "약"으로 해석된다.

본 명세서에 있어서, 용어 '포함' 또는 '포함하는' 과 같은 다양한 표현은 언급된 성분, 정수 또는 단계, 또는 성분, 정수 또는 단계의 그룹을 포함하는 것으로 암시될 것이지만, 다른 종류의 성분, 정수, 또는 단계, 또는 성분, 정수 또는 단계의 그룹을 배제하지는 않는 것으로 이해될 것이다.

"약학적으로 허용 가능한 염" 모체(prent) 화합물의 바람직한 약리활성을 갖는 발로마시클로비르의 염을 나타낸다. 이러한 염은 (1)염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산으로 형성된 또는, 아세트산, 프로피온산, 헥산산, 시클로펜탄 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레익산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일) 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 1,2-에탄-디술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 벤젠술폰산, 4-클로로벤젠술폰산, 2-나프탈렌술폰산, 4-톨루엔술폰산, 캄포술폰산, 4-메틸비시클로[2.2.2]-옥트-2-엔-1-카르복실산, 글루코헵톤산, 3-페닐프로피온산, 트리메틸아세트산, 3차 부틸아세트산, 라우릴황산, 글루콘산, 글루탐산, 히드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산 등과 같은 유기산으로 형성된 산부가염; 또는 (2) 모계 화합물 내에 존재하는 산성 양자가 금속 이온, 예를 들어 알칼리 금속 이온, 알카리 토금속 이온 또는 알루미늄 이온으로 대체될 때, 또는 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, N-메틸글루카민 등과 같은 유기 염기와 배위될 때 형성되는 염을 포함한다.

"약학적으로 허용 가능한 담체 " 발로마시클로비르와 함께 투여되는 희석제, 보조제, 부형제 또는 담체를 나타낸다.

용어 "대상(subject)", "개체(individual)" 또는 "환자"는 여기서 상호 교환하여 사용이 가능하고 척추동물, 바람직하게는 포유동물을 나타낸다. 포유동물은 쥐과동물, 설치동물, 유인원, 인간, 가축동물(farm animal), 스포츠동물 및 애완동물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

"방지하는" 또는 "방지"는 질병 또는 장애 위험의 감소를 나타낸다(즉, 질병의 증상을 경험하거나 나타내지는 않았으나 질병에 노출될 수 있거나 취약할 수 있는 환자에 있어서 질병의 임상 증상 중 적어도 하나가 발병이 되지 않도록 하는 것을 말한다).

질병 또는 장애의 "치료하는" 또는 "치료'는, 몇몇 실시예에 있어서, 질병 또는 장애의 개선을 나타낸다(즉, 질병 또는 이의 임상 증상 중 적어도 하나의 발병을 저지하거나 감소시키는 것을 말한다). 다른 실시예에 있어서, "치료하는" 또는 "치료"는 환자에 의해 인식될 수 없는 적어도 하나의 물리적 변수(physical parameter)의 개선을 나타낸다. 또다른 실시예에 있어서, "치료하는" 또는 "치료" 는 물리적으로(예를 들어, 인식될 수 있는 증상의 안정화), 생리학적으로(예를 들어, 물리적 변수의 안정화) 또는 두가지 측면 모두에서 질병 또는 장애를 억제하는 것을 나타낸다. 또다른 실시예에 있어서, ""치료하는" 또는 "치료"는 질병 또는 장애의 시작이나 진행을 지연시키는 것을 나타낸다.

"치료적 유효량"은 질병의 치료를 위하여 환자에게 투여될 경우, 상기 질병을 치료하는데 충분한 발로마시클로비르의 양을 의미한다. "치료적 유효량"은 치료 받을 환자의 질병 및 질병의 정도 및 나이, 몸무게 등에 따라 달라질 수 있다.

발로마시클로비르의 다형체 스크리닝 연구로부터 이에 제한되지는 않으나 형태 A, B1, B2, B3, B4, C, 및 H를 포함한 몇 개의 상이한 형태가 밝혀졌다. 각 그룹은 상이한 열 특성뿐만 아니라 상이한 회절 특성을 가진다.

발로마시클로비르 다형체는 이에 한정되지 않으나, 시차주사열량계(differential scanning calorimetry, DSC), 편광 핫-스테이지 현미경 분석 (polarized light hot-stage microscopy, HSM), 열중량분석 (thermogravimetric analysis, TGA), FTIR(Fourier transform infrared spectroscopy), NMR(Fourier transform nuclear magnetic resonance) 분석기, 가변 온도형 분말 X-선 회절(XRD) 및 HPLC(high performance liquid chromatography)를 포함하는 분석방법을 이용하여 특징지어질 수 있다.

형태 A의 특유의 X-선 회절 데이터는 표 1에, 회절 패턴은 도 2에 및 특징적인 DSC 열 분석도는 도 3에 나타내었다. 표 1은 XRD 스펙트럼에 나타난 피크를 리스트하고 있다. 더 낮은 강도의 다른 피크들도 존재할 수 있다.

다형체 A의 특징적인 DSC 특성은 약 105℃ 내지 약 125 ℃에서 흡열(endotherm) 피크을 포함하고, 115 ℃ (일반적으로 20-30 J/g) 근처에서 중심이 있고 약 170 ℃ 내지 약 180 ℃에서 녹는 흡열(melting endotherm)을 포함하고 171 ℃ (일반적으로 약 20-30 J/g) 근처에서 중심이 있다. 몇몇 샘플은 추가로 작은 시그널을 나타내었다(약 6 J/g).

다형체 A X-선 분말 회절 패턴의 특징적 피크

2-θ 각도 (°)	d 수치 (옹스트롬(Angstrom))
14.7	6.01
15.5	5.72
18.6	4.76
19.5	4.54
20.8	4.26
21.8	4.07
22.9	3.87
24.3	3.66
25.5	3.49
27.0	3.31
29.9	2.98

정확한 회절 및 열 특성은 기기 타입 및 적용된 분석 조건에 따라 조금씩 다를 수 있다. 예를 들어, X-선 회절 패턴에 사용된 기기는 일반적으로 측정된 2-θ 각도에 대해서 +/- 0.2 오차를 가진다.

본 발명에 따른 "다형체 A" 는 표 1 또는 도 2에서 보여주는 바와 같이 실질적으로 동일한 X-선 회절패턴을 가지거나 도 3에서 보여주는 바와 같이 실질적으로 동일한 DSC 열 분석도를 가지는 발로마시클로비르의 결정형이다. 몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 적어도 약 90%의 다형체 A를 포함한다. 다른 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 적어도 약 95%의 다형체 A를 포함한다. 또 다른 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 적어도 약 99%의 다형체 A를 포함한다.

본문에 개시된 다형체 A 함량 또는 다형체의 다형체 순도는 이에 제한되는 것은 아니나, X-선 회절(XRD), DSC(differential scanning calorimetry), 편광 HSM(polarized light hot-stage microscope), TGA(thermogravimetric analysis), FTIR(Fourier transform infrared spectroscopy) 및 가변 온도형 분말 XRD를 포함하는 공지의 방법으로 결정될 수 있다.

본 발명에서는 고품질의 다형체 A 강화 발로마시클로비르의 재현 가능한 제조방법이 또한 제공된다. 상기 방법은 발로마시클로비르를 저급 알카놀 용매 또는 저급 알카놀의 혼합 용액에 적합한 내부온도로 가열함으로써 용해하는 단계, 발로마시클로비르의 상당한 결정화를 위하여 교반하면서 냉각하는 단계, 및 결정 생성물을 수집하는 단계를 포함한다.

도 5A의 반응식에 따라 제조된 발로마시클로비르 배치(batch) (로트 45-548-YS-00)는 다음과 같이 정제된다: 미정제 생성물을 CH₂Cl₂에 용해하였고, 상기 용액을 물로 세척하였고, CH₂Cl₂을 진공하에서 제거하였다. 잔여물을 i-PrOH에서 용해하였고, 생성물을 이소프로필 아세테이트로 침전시켰다. 상기 침전물을 여과, 건조 및 10 메쉬 스크린으로 진동시켰다.

다른 배치의 발로마시클로비르 (로트 12-03-011)를 도 5B의 반응식에 따라 제조하였고 다음과 같이 정제하였다: 미정제 생성물을 i-PrOH에 용해시켰고 70 ℃로 가열하였고, 상기 뜨거운 용액을 여과하였고, 5시간에 걸쳐 20 ℃로 냉각하였다. 생성물을 수집하고, i-PrOH로 세척 및 진공하에서 15시간 동안 45 ℃에서 건조시켰다.

또 다른 배치의 발로마시클로비르 (샘플 12-03-018)는 도 5C의 반응식에 따라 제조하였다. 합성 및 정제의 최종단계는 다음을 포함한다: 메실화된(mesylate) 염을 i-PrOH에 용해시키고 NEt₃를 첨가하고, 상기 혼합물을 70 ℃로 가열하였다. 상기 뜨거운 용액을 4시간에 걸쳐 20 ℃로 냉각하고 2시간 이상 동안 20 ℃에서 교반하였다. 결정 생성물을 여과, i-PrOH로 세척 및 진공하에서 건조하였다.

다른 두 배치의 발로마시클로비르 (로트 146756 및 로트 06-01159-2)를 CBZ-보호 그룹을 Boc-보호 그룹으로 대체하는 방법(도 5D)에 따라 제조하였다. 로트 146756의 최종 정제단계는 다음의 단계들을 두번 반복한다: 미정제 EPB-348 유리 염기를 가열하면서 CH₂Cl에 용해, 메탄술폰산 첨가, 20 ℃로 냉각, 16시간 동안 교반, 여과 및 건조시켰다. 잔여물을 i-PrOH에 용해시키고 NEt₃를 추가하였다. 상기 혼합물을 모든 고체가 녹을때까지 가열하였고, 20 ℃로 냉각, 4시간에 걸쳐 교반, 여과 및 건조하였다. 로트 06-01159-2의 정제의 최종단계는 다음의 단계를 두번 반복한다: 미정제 EPB-348 유리 염기를 CH₂Cl₂에 용해시키고 35 ℃로 가열하였다. 메탄술폰산을 첨가하고 상기 용액을 20 ℃로 냉각, 16시간에 걸쳐 교반, 여과 및 건조하였다. 잔여물을 i-PrOH에 용해시키고 NEt₃를 추가하였다. 상기 용액을 70 ℃로 가열, 20 ℃로 냉각, 2시간에 걸쳐 교반, 여과 및 건조하였다.

상기 배치들의 XRD 및 DSC 분석은 상이한 다형체 형태를 보였다. 도 5E, 5F 및 5G에서 보는 바와 같이, 로트 45-548-YS-00 및 로트 12-03-011의 분말 XRD 패턴 및 DSC 열 분석도는 다형체 A와 확연히 상이하다. 이들은 각각 형태 B2 및 B1으로 확인된다.

로트 12-03-018, 로트 146756 및 로트 06-01159-2의 분말 XRD 패턴 및 DSC 열 분석도 (도 5H 및 I)는 다형체 A에서 관찰되는 것과 유사하다. 그러나 이 물질들의 유동성 및 취급성은 나쁘고 및/또는 일관성이 없다(표 2). 예를 들어, 로트 146756 물질은 64의 Carr 지수를 가졌고 이는 매우 유동성이 나쁨을 의미한다. 상기 물질은 또한 수백 미크론 길이의 육안으로 보이는 응집을 생성했다. 육안으로 보이는 결과는 취급성이 나쁜 거의 끈적거리고 좋지 않은 분말 유동성을 가지는 물질이였다.

발로마시클로비르 배치 물리적 특성: Carr 지수, 입자 크기, 및 응집 크기

배치 (batch)	다형체 형태	Carr 지수	일반적 입자 크기 범위 (미크론)	응집 크기 (미크론)
146756	A	64	5-20	200
12-03-018	A	48	5-40	100
12-03-011	B1	42	2-15	100

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A의 제조방법이 다음과 같이 제공된다. 용매 리터당 발로마시클로비르 100 g 비율의 발로마시클로비르 및 저급 알카놀 용매의 혼합물을 교반하고 완전히 용해하기에 적합한 내부온도로 가열하였다. 상기 용액을 발로마시클로비르의 실질적 결정화에 영향을 미치기 위하여 제어된 온도구배하에서 교반하면서 냉각하였다. 상기 혼합물을 여과하고 결과물인 고체는 공기건조 및 진공오븐건조하여 흰색의 고체로서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르를 수득하였다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 구문 "표 1 또는 도 2에서 보는 바와 같이 실질적으로 동일한 X-선 회절패턴"은 몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A는 22.9°+/- 0.2°및 18.6°+/- 0.2°의 2-세타 각도를 갖는 것을 의미한다. 또한 다른 실시예에 있어서, 다형체 A는 22.9°+/- 0.2°, 18.6°+/- 0.2°, 19.5°+/- 0.2° 및 24.3°+/- 0.2°의 2-세타 각도를 갖는 것을 의미하기도 한다. 또 다른 실시예에 있어서, 다형체 A는 22.9°+/- 0.2°, 18.6°+/- 0.2°, 19.5°+/- 0.2°, 24.3+/2 0.2°, 20.8°+/- 0.2°, 21.8°+/- 0.2° 및 27.0°+/- 0.2°의 2-세타 각도를 갖는다. 또 다른 실시예에 있어서, 다형체 A는 22.9°+/- 0.2°, 18.6°+/- 0.2°, 19.5°+/- 0.2°, 24.3°+/- 0.2°, 20.8°+/- 0.2°, 21.8°+/- 0.2°, 27.0°+/- 0.2°, 14.7°+/- 0.2°및 15.5°+/- 0.2°의 2-세타 각도를 갖는다. 또 다른 실시예에 있어서, 다형체 A는 22.9°+/- 0.2°, 18.6°+/- 0.2°, 19.5°+/- 0.2°, 24.3°+/- 0.2°, 20.8°+/- 0.2°, 21.8°+/- 0.2°, 27.0°+/- 0.2°, 14.7°+/- 0.2°, 15.5°+/- 0.2°, 25.5°+/- 0.2° 및 29.9°+/- 0.2°의 2-세타 각도를 갖는다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "도 3에서 보여주는 바와 같이 실질적으로 동일한 DSC 열 분석도" 라는 구문은 몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A는 약 105 ℃ 내지 약 125 ℃에서 흡열의 특징적인 DSC 특성을 가지고 및 115 ℃ 근처에서 중심이 있고(일반적으로 20-30 J/g), 약 170 ℃ 내지 약 180 ℃에서 녹는 흡열이 있고 171 ℃ 근처에서 중심이 있다(일반적으로 약 20-30 J/g).

용어 "저급 알카놀 용매"는 발로마시클로비르가 용해될 수 있는 모든 저급 알카놀을 의미하고 1 내지 6 탄소원자의 1급, 2급 및 3급 알코올을 포함한다. 적합한 저급 알카놀 용매는, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 2-메틸-1-프로판올, 2-메틸-2-프로판올, 2,2-디메틸-1-프로판올 및 시클로헥산올을 포함한다. 다형체 A 강화 발로마시클로비르의 제조에 사용된 저급 알카놀 용매는 메탄올, 에탄올 또는 2-프로판올일 수 있다. 95:5 (v/v) 에탄올/2-프로판올이 혼합용매로 사용될 수 있다.

일반적으로, 몇몇 실시예에 따르면, 발로마시클로비르 및 용매의 혼합물(혼합용매로 사용되는 경우 미리 혼합된)은 거의 완전한 용해가 되도록 적합한 내부온도(예를 들어, 에탄올 또는 에탄올/2-프로판올의 혼합물이 사용되는 경우, 65 ℃ 내지 74 ℃, 또는 68 ℃ 내지 72 ℃)로 교반하면서 가열한다. 상기 가열공정은 약 1시간 30분에 걸쳐 수행하였다. 교반은 완전한 용해를 얻기 위하여 선택적으로 30분 동안 더 지속한다. 온도는 1시간에 5 ℃ 내지 15 ℃ 또는 1시간에 8 ℃ 내지 12 ℃의 속도로 냉각하였고, 냉각 사이클에 걸쳐 교반을 함께하였다. 내부온도가 55 ℃ 내지 61 ℃에 도달하면 고체는 대체로 용액으로부터 결정화된다. 온도가 상온(약 18 내지 25 ℃)에 이른 후, 1 내지 4시간 동안 계속해서 교반하고, 결과 혼합물은 여과 및 하룻밤 동안 진공 오븐에서 건조(온도 40 내지 50 ℃, 압력 3 ~ 15 in. Hg, 느린 질소 스위핑(slow nitrogen sweep))하여 다형체 A가 강화된 흰 고체를 수득한다.

용매 선택 및 온도 조절의 결합은 상기 공정의 재현가능성 및 대량 제조가능성을 높인다. 상기 공정은 10 g 내지 30 kg 범위로 실험하였다.

다른 용매 또는 결합을 사용하는 경우, 온도, 용해도 및 로딩 프로파일은 상기 공정에서 언급한 것과 다를 수 있고 당업자에 따라서 조절될 수 있다.

몇몇 실시예에 있어서, 본 발명의 공정에서 사용된 혼합용매는 특수 변성 알코올(Specially Denatured Alcohol, SDA) 3C에 해당하는 95:5 (v/v) 에탄올/이소프로판올이다. 비교적 저렴한 제품인 SDA 3C의 사용은 상기 공정을 보다 상업적으로 가능성 있게 하게 한다.

다형체 A는 가장 결정형이고 열역학적으로 가장 안정한 발로마시클로비르의 다형체이다. 경쟁적 및 비경쟁적 슬러리 실험으로 출발 다형체 형태에 관계 없이 최종 형태로써 다형체 A를 확인하였다. 다형체 A의 고체 분말은 보다 유동적이고 이는 정제 제형(tablet formulation)을 보다 쉽게 만든다.

몇몇 실시예에 있어서, 표 1 또는 도 2에서 보는 바와 같이 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 실질적으로 동일한 X-선 회절패턴을 갖는다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 도 3에서 보는 바와 같이 실질적으로 동일한 DSC 열 분석도를 갖는다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 표준 시료와 거의 일치하는 IR 스펙트럼을 갖는다.

본 발명의 고체 생성물의 유동성은 Carr 지수로 측정될 수 있다(Pharmaceutical Preformulation 및 formulation , A practical guide from candidate selection to commercial dosage form , Mark Gibson, Ed.; Interpharm Press, 2002; pages 386-7). 분말에 기계적 힘을 가하여 분말 유동성에 대한 저항을 관찰할 수 있다. 톡톡 두드림으로 인한 분말의 벌크 밀도(압축성)의 증가는 Carr 지수를 결정하는데 사용되었다. 몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 약 35 내지 약 50의 Carr 지수 수치 범위를 갖는다.

본 발명의 고체 생성물의 입자 크기는 편광현미경을 이용하여 실리콘 오일에서 측정할 수 있다. 몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 이 같은 시스템을 이용하여 측정하였을 때 10 내지 약 300 미크론의 입자 크기 범위를 갖는다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 육안으로 볼 때 흰색 또는 밝은 갈색 분말이다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 예를 들어 염화메틸렌과 같은 용매에 용해되었을 때 거의 투명한 용액을 형성한다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 0.2% 이하의 강열 잔류물(residue on ignition)을 갖는다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르에 존재하는 중금속(납(Pb)과 같은)은 0.002% 이하이다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 1.0% 이하의 수분함량을 갖는다. 상기 수분함량은 칼피셔식 수분적성법(Karl Fischer titration)에 의해 분석될 수 있다.

본 발명의 생성물의 용매 함량은 GC 분석법에 의해 결정될 수 있다. 몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 잔류 용매에 대하여 다음의 기준에 따른다: 아세톤, 에틸 아세테이트, 헵탄, 이소프로판올, 테트라히드로퓨란, 에틸 알코올에 대하여 NMT 0.5%; 아세토니트릴, 디클로로메탄, 톨루엔에 대하여 NMT 0.1%; 에틸렌 글리콜 디메틸에테르에 대하여 NMT 0.05%; 다른 각각의 용매에 대하여 NMT 0.05%; 전체 용매에 대하여 NMT 1.0%.

생성물의 순도 및 불순물의 양은 HPLC 분석에 의해 측정될 수 있다. 몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 무수 및 비용매 상에서 970 mcg/mg 이상의 순도를 갖는다. 다른 실시예에 있어서, 구아닌 스테아레이트 알코올을 제외한 불순물은 1.5% 이하로 다형체 A 강화 발로마시클로비르 내에 존재한다. 또 다른 실시예에 있어서, 구아닌 스테아레이트 알코올은 2.5% 이하로 존재한다. 또 다른 실시예에 있어서, 불순물은 1.0% 이하로 존재한다. 또 다른 실시예에 있어서, 총 불순물은 3.0% 이하로 존재한다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 표준 시료와 2.0% 이하의 유지시간(retention time) 차이를 갖는다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 입체이성질체 및 광학이성질체 불순물에 대하여 다음의 기준에 따른다: 4.0% 이하의 (S,S)-입체이성질체; 3.0% 이하의 (R,R)-입체이성질체 및 (S,R)-광학이성질체.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 무수 및 비용매 상에서 900 mcg/mg 이상의 효능(potency)을 갖는다. 효능은 조성물의 순도의 정량적 측정이다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 2 또는 그 이상의 상기의 서술한 특성을 가진다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 표 1 또는 도 2에서 보는 바와 같이 거의 동일한 X-선 회절패턴, 도 3에서 보는 바와 같이 거의 동일한 DSC 열 분석도, 거의 표준 시료와 일치하는 IR 스펙트럼, 약 35 내지 약 50의 Carr 지수 수치 범위, 10 내지 약 300 미크론의 입자 크기 범위, 0.2% 이하의 강열 잔여물, 1.0% 이하의 수분함량, 상기에 정의된 함량 이하의 잔류 용매, 및/또는 97% 이상의 순도를 가진다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 표 1 또는 도 2에서 보는 바와 같이 거의 동일한 X-선 회절패턴, 도 3에서 보는 바와 같이 거의 동일한 DSC 열 분석도, 거의 표준 시료와 일치하는 IR 스펙트럼, 약 35 내지 약 50의 Carr 지수 수치 범위, 10 내지 약 300 미크론의 입자 크기 범위, 0.2% 이하의 강열 잔여물, 1.0% 이하의 수분함량, 상기에 정의된 함량 이하의 잔류 용매, 및 97% 이상의 순도를 가진다.

발로마시클로비르의 다른 다형체는 형태 B1, B2, B3, B4, C, 및 H를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 상기 다형체는 실시예 5에 기술된 방법 및 조건을 이용하여 얻을 수 있다- 발로마시클로비르에 대한 다형체 스크리닝. 이들 다형체 형태는 발로마시클로비르 약물 생성물의 다형체 순도를 측정하는데 있어서 분석 기준으로써 유용하다. 다형체 B1, B2, B3, B4, C 및 H는 본 명세서에 기술된 방법을 이용하여 용이하게 형태 A 단독 또는 결합으로 변환되므로 본 발명의 다형체 A 강화 발로마시클로비르 조성물 제조에 있어서 원천 물질로 이용될 수 있다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 거의 다른 다형체 형태가 없다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 거의 형태 B1이 없다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 거의 형태 B2가 없다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 거의 형태 B3가 없다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 거의 형태 B4가 없다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 거의 형태 B1, B2, B3, 또는 B4가 없다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 거의 형태 C가 없다.

몇몇 실시예에 있어서, 다형체 A 강화 발로마시클로비르는 거의 형태 B1, B2, B3, B4, 또는 C가 없다.

본 발명은 또한 치료적 유효량의 본 발명의 다형체 A 강화 발로마시클로비르를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다.

본 발명의 방법을 이용하여 치료 가능한 바이러스 감염은 예를 들어 수두 대상포진 바이러스, 헤르페스 심플렉스 바이러스 (HSV-1 및 HSV-2), 인간 헤르페스 바이러스 (HHV-6, HHV-7 및 HHV-8), 엡스타인-바 바이러스(Epstein-Barr virus, EBV), 시토메갈로 바이러스(cytomegalovirus), 및 HIV에 의해 원인이 되는 것이다.

몇몇 실시예에 있어서, 바이러스 감염은 대상포진, 헤르페스 심플렉스 바이러스 (HSV-1 및 HSV-2), 인간 헤르페스 바이러스 6, 인간 헤르페스 바이러스 7, 인간 헤르페스 바이러스 8, 엡스타인-바 바이러스(Epstein-Barr virus, EBV), 및 시토메갈로 바이러스(cytomegalovirus)로부터 선택된 헤르페스 바이러스 감염이다. 이들 실시예에 있어서, 바이러스 감염은 수두(chicken pox), 대상포진, 입술 헤르페스(labial herpes)/입술의 발진(cold sore), 성기 헤르페스, 단핵세포증(mononucleosis), 카포시육종(Kaposi' s sarcoma), 만성피로, 돌발성 발진증(roseola infantum), 다발성 경화증, 비인두암 및 다른 악성종양과 같은 다양한 형태로 나타날 수 있다.

다른 실시예에 있어서, 바이러스 감염은 HIV 감염 또는 AIDS에 의해 나타나는 CMV 또는 헤르페스 케라티스(herpes keratis)와 같은 HIV 또는 동시감염된 HIV/HBV 또는 HIV/HCV 또는 다른 기회 감염성의 질병이다.

다형체 A 강화 발로마시클로비르는 특히 경구 또는 다른 전신 투여를 통한 바이러스 감염의 치료용 또는 예방용 약물의 제조에 사용될 수 있다.

다형체 A 강화 발로마시클로비르는 결정질이며 우수한 유동성을 가지고 공지의 과정 및 방법을 이용하여 용이하게 경구 투여용 정제를 만들 수 있다.

바이러스 감염의 치료 또는 예방의 또 다른 실시예는 이식(transplantation) 전, 이식 동안 또는 이식 후의 다형체 A 강화 발로마시클로비르의 사용을 포함한다.

몇몇 실시예에 있어서, 본 발명에 따른 다형체는 일반적으로 경구로 또는 전신으로 글루코코티코이드와 같은 면역 조절제와 함께 병용투여될 수 있다. 대표적인 글루코코티코이드는 알클로메타손, 데소나이드, 플루프레드니덴, 플루메타손, 히드로코르티손 및 이의 에스테르, 예를들어 히드로코르티손 부티레이트 또는 히드로코르티손 아세테이트, 클로베타손, 트리암시노론 아세토나이드, 베타메타손, 부데노시드, 데속시메타손, 디플로로산, 플루오시놀론, 플루옥시노니드 아세토나이드(fluoccinonide acetonide), 플루오코르톨론(fluocortolone), 플루티카손(fluticasone), 메틸프레드니솔론 아세포네이트(methylprednisolone aceponate), 모메타손, 로플레포니드(rofleponide) 등을 포함하고 이에 한정되는 것은 아니다. 히드로코르티손 또는 베타메타손 또는 덱스트로메타손과 같은 글루코르티코이드는 일반적으로 기존의 면역조절 투여방법에 따라 투여된다.

상기 기술된 용도 및 표시의 각각에 있어서 발로마시클로비르 API의 요구되는 양은 치료될 질병의 정도 및 수령인의 특성을 포함한 상당수의 요인에 따라 달라질 수 있고, 궁극적으로 담당 의사의 재량에 따라 달라질 수 있다. 그러나 일반적으로, 적당한 유효 투여량은 하루에 수령인의 몸무게 킬로그램 당 1 내지 150 mg의 범위가 될 것이다. 다른 적당한 투여량은 하루에 수령인의 몸무게 킬로그램 당 5 내지 120 mg의 범위가 될 것이다(표시되지 않았다면, 활성 성분의 총 무게는 발로마시클로비르에 대해서 계산된다). 하루에 바람직한 투여량은 하루에 걸쳐 적당한 간격으로 한번, 두번, 세번 또는 네번, 또는 더 많이 나누어 투여될 수 있다. 상기 나눔 투여량은 예를 들어, 단위 투여량 형태 당 약 50 내지 2000 mg, 또는 약 250, 500, 1000, 2000 또는 3000 mg의 활성 성분을 포함하는 단위 투여량 형태로 투여될 수 있다. 몇몇 실시예에 있어서, 단위 투여량은 1000 mg/일 이다.

투여방법은 다음과 같다: 수두 대상포진 바이러스 감염 (예를 들어, 대상포진)의 치료: 약 500 mg 내지 3 g의 일일 단회 투여로 3일 내지 7일 투여된다; 이와 달리, 약 500 mg 내지 3 g의 일일 총 투여량은 하루에 두번 250 mg 내지 1.5 g의 양으로 3일 내지 7일 투여된다. 예를 들어, 환자는 포진 발진의 시작의 72시간 이내에 일일 투여량 1000 mg, 2000 mg 또는 3000 mg으로 7일 동안 치료될 수 있다. 몇몇 실시예에 있어서, 수두 대상포진 바이러스 감염의 치료 또는 예방을 위한 투여량은 1 gm이고 7일 동안 투여된다. 다른 실시예에 있어서, 수두 대상포진 바이러스 감염의 치료 또는 예방을 위한 투여량은 2 gm이고 7일 동안 투여된다.

투여방법은 다음과 같다: 엡스타인-바 바이러스 (예를 들어, 단핵세포증)의 치료: 약 2.0 g의 일일 총 투여량이 하루에 두번 1.0 g으로 7 내지 21 일 동안 투여된다. 이식 환자에 있어서 이러한 일일 투여는 위험에 있는 기간 동안 3 내지 6 개월 동안 투여된다; 및 HIV 양성 환자에 있어서 이러한 일일 투여는 주로 삶의 질의 향상을 위하여 투여되는 것과 같이, 예를 들어 2년 또는 그 이상으로 투여된다. 몇몇 실시예에 있어서, 엡스타인-바 바이러스 (예를 들어, 단핵세포증)의 치료 또는 예방을 위한 투여량은 1 g 이고 7일 동안 투여된다.

투여방법은 다음과 같다: 인간 헤르페스 바이러스 6A (HHV-6A)의 억제: 500 mg 내지 3.0 g의 일일 총 투여량이 위험에 있는 기간 동안 하루에 1회 3 내지 6 개월 동안 투여된다.

투여방법은 다음과 같다: 인간 헤르페스 바이러스 8 (HHV-8)의 억제: 500 mg 내지 3.0 g의 일일 총 투여량이 위험에 있는 기간 동안 하루에 1회 3 내지 6 개월 동안 투여된다.

투여방법은 다음과 같다: 단순 헤르페스 바이러스 타입 1 및 2 바이러스 감염의 치료: 1.0 내지 4 g의 일일 총 투여량이 투여된다(5 내지 10 일 동안 500 mg 씩 하루에 2회 또는 2.0 g 씩 하루에 2회); 단순 헤르페스 바이러스 타입 1 및 2 감염의 억제; 250 mg 내지 1 g의 일일 총 투여량이 약 1 내지 10 년 동안 투여된다(대상에 따라).

다형체 A 강화 발로마시클로비르는 단독으로, 예를 들어 캡슐로 투여되는 될 수 있는 반면에 이는 또한 약학적 제형으로 존재할 수도 있다. 이러한 제형은 다형체 A 강화 발로마시클로비르와 하나 또는 그 이상의 허용 가능한 담체/부형제 및 선택적으로, 다른 치료학적 성분을 함께 포함한다. 상기 담체는 제제의 다른 성분과 상용성의 면에서 허용 가능하여야 하고 수령인에게 유해하지 않아야 한다.

제형은 직장, 코, 국소(입 및 혀밑 포함), 질(vaginal) 또는 비경구 (피하, 근육내, 정맥내 및 피내 포함) 투여를 포함하나 이에 한정되지는 않는다. 몇몇 실시예에 있어서, 제형은 경구투여된다. 제형은 유닛 투여 형태, 예를 들어, 정제 및 서방성 캡슐로 편리하게 존재하고 약학분야에서 공지된 방법에 위해 제조될 수 있다.

이러한 방법은 다형체를 담체와 혼합하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 균일하게 다형체 A 강화 발로마시클로비르를 액상의 담체 또는 미세하게 쪼개진 고상의 담체와 함께, 또는 둘 다와 함께 제조되고, 필요에 따라 생성물을 성형함으로써 제조한다. 본 발명은 다형체 A 강화 발로마시클로비르를 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 매개체와 결합하거나 혼합하는 단계를 포함하는 약학적 조성물의 제조방법을 포함한다. 약학적 제형의 제조가 약학적 부형제를 친밀하게 혼합하는 단계를 포함하는 경우, 사용된 부형제는 사실상 염기성이 아니고 산성 또는 중성이다.

본 발명의 경구 투여용 제형은 캡슐, 카세제(cachets) 또는 정제와 같은 개별 유닛으로 존재할 수 있고 각각은 미리 결정된 양의 활성 성분을 포함한다. 또한, 제형은 수용액, 비수용액, 수중유형 액체 에멀션, 유중수형 액체 에멀션, 볼루스(bolus) 등 내에 활성 성분의 용액 또는 현탁액과 같은 분말 또는 과립제로써 존재할 수도 있다.

경구 투여용(예를 들어, 정제 및 캡슐) 조성물과 관련하여, 용어 "적합한 담체" 일반적 부형제, 예를 들어, 시럽, 아카시아, 젤라틴, 솔비톨, 트라거캔스, 폴리비닐피롤리돈 (포비돈), 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸-셀룰로스, 수크로스 및 전분과 같은 결합제와 같은 매개체; 예를 들어, 옥수수 전분, 젤라틴, 락토스, 수크로스, 미정질의 셀룰로스, 카올린, 만니톨, 디칼슘 포스페이트, 염화나트륨 및 알긴산과 같은 필러 및 담체; 및 마그네슘 스테아레이트, 소듐 스테아레이트 및 다른 금속 스테아레이트, 글리세롤 스테아레이트 스테아르산, 실리콘 액, 탈크 왁스, 오일 및 콜로이달 실리카와 같은 윤활제를 포함한다. 페퍼민트, 노루말풀 오일(oil of wintergreen), 체리향 등과 같은 착향제가 또한 사용될 수 있다. 투여량 형태를 용이하게 알아볼 수 있도록 착색제를 첨가하는 것이 바람직할 수도 있다. 정제는 잘 알려진 방법에 의해 코팅될 수도 있다.

정제는 선택적으로 하나 또는 그 이상의 부성분을 함께 압축 또는 몰딩함으로써 만들 수 있다. 압축된 정제는 결합제, 윤활제, 비활성 희석제, 방부제, 표면활성제 또는 분산제와 선택적으로 혼합된 활성 성분을 분말 또는 과립제와 같은 자유로운 유동성 형태로 적합한 기계로 압축함으로써 제조할 수 있다. 몰딩된 정제는 비활성의 액체 희석제로 촉촉해진 분말의 화합물의 혼합물을 적합한 기계로 몰딩함으로써 제조할 수 있다. 정제는 또한 선택적으로 코팅될 수도 분할선이 있을 수도 있으며 활성 성분을 서서히 또는 조절하여 방출할 수 있도록 제형될 수 있다.

경구 투여를 위한 적합한 다른 제형은 주로 수크로스 및 아카시아 또는 트라거캔스와 같은 착향된 베이스에 활성 성분을 포함하는 로젠지(lozenge); 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아와 같은 비활성의 베이스에 활성성분을 포함하는 빨아먹는 정제(pastilles); 및 적합한 액상 담체에 활성성분을 포함하는 구강 청결제를 포함한다.

몇몇 실시예에 있어서, 약학적 조성물은 결정성 발로마시클로비르, 크로스카멜로스 소듐, 포비돈 K-30, 트윈-80, 탈크, 및 마그네슘 스테아레이트를 포함하는 캐플릿(caplet)이다. 약학적 조성물의 다른 실시예는 결정성 발로마시클로비르 (77% w/w), 크로스카멜로스 소듐 (13.90%, w/w), 포비돈 K-30 (3.25%), 트윈-80 (1.10%), 탈크 (4.10%), 및 마그네슘 스테아레이트 (0.74%)을 포함하는 캐플릿이다.

몇몇 실시예에 있어서, 상기 약학적 조성물은 포비돈 K-30 및 트윈-80을 이용하여 결정성 발로마시클로비르 및 크로스카멜로스 소듐을 습식 과립제화함으로써 만들었다. 과립제는 이 후 건조 및 메쉬 스크린(#16)을 통해 스크리닝 하였다. 건조되고 스크리닝된 과립, 크로스카멜로스 소듐 및 탈크 분말을 혼합하였다. 마그네슘 스테아레이트를 첨가하였고 혼합된 물질을 #30 메쉬 스크린을 통해 스크리닝, 혼합 및 분리하였다. 상기 물질은 고속 로타리식 정제 압축기를 이용하여 압축하였고 캐플릿은 아셀라 코타(Accela Cota)의 오파드라이(Opadry) II 33G99020로 코팅하었다. 카나우바 왁스(canauaba wax)를 코팅 팬에 첨가하고 캐플릿을 윤기를 내고 패키징하였다.

몇몇 실시예에 있어서, 정제 공정은 과립화, 건조, 스크리닝, 혼합 및 압축작동을 포함한다. 벌크 캐플릿은 오파드라이 II 블루 33G99020로 코팅되고 카나우바 왁스 NF로 윤기를 냈다.

약학적 조성물 및/또는 다형체는 헤르페스 징후를 위해서 아시클로비르(acyclovir), 발시클로비르(valciclovir), 펜시클로비르(penciclovir), 팜시클로비르(famciclovir), 간시클로비르(ganciclovir) 및 이의 전구약물, 시도포비르(cidofovir), 포스카르네트(foscarnet) 등과 같은 다른 항바이러스제와 결합하여 투여될 수 있다.

HIV 치료에 있어서 약학적 조성물 및/또는 다형체는 일반적으로 약물 회피 돌연변이체의 생성을 막고 면역손상 환자에게 수반되는 감염을 치료하기 위하여 다른 HIV 치료와 병용 투여된다. 그러나, 특정 항감염제는 상응하는 단독치료에 상승적 반응(synergistic response)을 유도하므로, 활성 성분의 하나 또는 둘 다 소량의 투여량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, Cyp3A4에 의한 급성 신진대사(rapid metabolism)를 일으키는 약물에 있어서, HIV 단백질 분해효소 억제제 리토나비르(ritonavir)와의 병용 투여는 투여량을 감소시킬 수 있다. 여기서 기술된 다형체는 또한 각각의 항바이러스제는 일반적으로 각각의 활성 및 생물학적 이용 가능성을 나타내는 몰비로 병용 투여된다. 일반적으로 이러한 비는 다형체에 대하여 대략 250:1 내지 1:250, 또는 25:1 내지 1:25 일 수 있다. 그러나 예를 들어, 리토나비르와 같은 시토크롬 P450 길항제와 같이 더 낮을 수도 있다.

전형적인 HIV 항바이러스제는 알로부딘(alovudine, FLT), 지도부딘(zidovudine, AZT, ZDV), 스타부딘 (d4T, Zerit), 잘시타빈 (ddC), 디다노신 (ddI, Videx), 아바카비르 (ABC, Ziagen), 라미부딘 (3TC, Epivir), 엠트리시타빈 (FTC, Emtriva), 라세비르(racevir, racemic FTC), 아데포비르 (ADV), 엔타카비르 (BMS 30 200475), 알로부딘 (FLT), 테노포비르 디소프록실 푸마레이트 (TNF, Viread), 암도사비르(amdoxavir, DAPD), D-d4FC (DPC-817), -dOTC (샤이어(Shire) SPD754), 엘부시타빈 (아킬리온(Achillion) ACH-126443), BCH 10681 (샤이어), SPD-756, 라시비르(racivir), D-FDOC, GS7340, INK-20 (티오에테르 포스포리피드 AZT, 쿠세라(Kucera)), 2'3'-디디옥시-3'-플루오로구아노신 (FLG)와 같은 뉴클레오사이드 역전사효소 억제제(nucleoside reverse transcriptase inhibitors, NRTI) 및 MIV-210 및 리버셋(reverset, RVT, D-D4FC, 파마셋(Pharmasset, DPC-817)와 같은 이의 전구약물을 포함하나 이에 한정되지는 않는다.

전형적인 비뉴클레오사이드 역전사효소 억제제(non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors, NNRTI)는 델라비르딘(delavirdine, 레스크립터(Rescriptor)), 에파비렌즈(efavirenz, DMP-266, 수스티바(Sustiva)), 네비라핀(nevirapine, BIRG-587, 비라문(Viramune)), (+)칼라놀라이드 A 및 B((+)calanolide A 및 B (어드벤스트 라이프 사이언스), 카프라비린(capravirine, AG1549f S-1153; 화이자), GW-695634 (GW-8248; GSK), MIV-150 (메디비르(Medivir)), MV026048 (R-1495; 메디비르 AB/로슈), NV-05 2 2 (이데닉스 팜(Idenix Pharm.)), R-278474 (존슨 앤 존슨), RS-1588 (이데닉스 팜), TMC-120/125 (존슨 앤 존슨), TMC-125 (R-165335; 존슨 앤 존슨), UC-781 (바이오신(Biosyn Inc.)) 및 YM215389 (야마노우시(Yamanoushi))을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.

전형적인 HIV 단백질 분해효소 억제제는 PA-457 (파나코스(Panacos)), KPC-2 (쿠세라 팜(Kucera Pharm.)), 5 HGTV-43 (엔조 바이오켐), 암프레나비르 (VX-478, 아게네라제(Agenerase)), 아타자나비르 (레야타즈(Reyataz)), 인디나비르 설페이트 (MK-639, 크릭시반(Crixivan)), 렉시바 (포스암프레나비르 칼슘, GW-433908 또는 908, VX-175), 리토나비르 (노르비르(Norvir)), 로피나비르 + 리토나비르 (ABT-378, 칼레트라(Kaletra)), 티프라나비르, 넬피나비르 메실레이트 (비라셉트(Viracept)), 사퀴나비르 (인비라제(Invirase), 포르토바제(Fortovase)), AG1776 (JE-2147, KNI-764; 니폰 미닝 홀딩스(Nippon Mining Holdings)), AG-1859 (화이자), DPC-681/684 (BMS), GS224338 (질리어드 사이언스(Gilead Sciences)), KNI-272 (니폰 미닝 홀딩스), Nar-DG-35 (나르헥스(Narhex)), P(PL)-100 (P-1946; 프로시온 바이오파마(Procyon Biopharma)), P-1946 (프로시온 바이오파마), R- 944 (호프만-라로슈(Hoffmann-LaRoche)), RO-0334649 (호프만-라로슈), TMC-114 (존슨 앤 존슨), VX-385 (GW640385; GSK/베르텍스(Vertex)), VX-478 (베르텍스/GSK)를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.

다른 HIV 항바이러스제는 융합 억제제를 포함한 침입 억제제, CD4 수용체 억제제, CCR5 보조 수용체 억제제, 및 CXCR4 보조 수용체의 억제제, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 전구약물을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 침입 억제제의 예는 AMD-070 (AMD11070; 아노르메드(AnorMed)), 블락에이드(BlockAide)/CR (애드밴트랙스 팜(ADVENTRX Pharm.)), BMS 806 (BMS-378806; BMS), 엔푸르비르티드(Enfurvirtide, T-20, R698, 푸지온(Fuzeon)), KRH1636 (쿠레하 제약회사(Kureha Pharmaceuticals)), ONO-4128 (GW-873140, AK-602, E-913; 오노 제약회사(ONO Pharmaceuticals)), PRO-140 (프로제닉스 팜(Progenics Pharm)), PRO-542 (프로제닉스 팜), SCH-D (SCH-417690; 쉐링-프우(Schering-Plough)), T-1249 (R724; 로슈/트리메리스(Trimeris)), TAK-220 (타케다 켐(Takeda Chem. Ind.)), TNX-355 (타녹스) 및 UK 427,857 (화이자) 이다. 인테그라제 억제제의 예는 L-870810 (머크(Merck & Co.)), c-2507 (머크) 및 S(RSC)-1838 (시오노기/GSK) 이다.

본 발명을 실시예를 들어 예시하기로한다. 상기 실시예는 본 발명의 보호범위가 한정되는 것은 아니나 발명의 다른 측면뿐만 아니라 본 발명의 공정의 생성물의 제조방법의 이해 및 개요가 제공되도록 본 발명의 상세한 설명 및 상기의 일반적 설명과 함께 이해될 것이다.

실시예

실시예 1 - 발로마시클로비르 API 에 대한 분석 증명

발로마시클로비르 API 로트 A501S8-07-001에 대한 분석 증명은 본 발명의 생성물에 대하여 얻은 분석 데이터를 입증하기 위하여 표 3에서 보여준다.

발로마시클로비르 API에 대한 분석 증명

테스트	설명서
특징	흰색 내지 밝은 갈색 분말
확인 (IR)	기준에 일치함
습기 (KF)	NMT 1.0%
용액 투명도	투명 내지 부분적으로 투명; 어느 정도의 섬유가 존재할 수 있음
강열 잔여물	NMT 0.2%
중금속 (Pb)	NMT 0.002%
입체이성질체 및 광학이성질체 불순물	(S,S)-입체이성질체 4.0% 이하; (R,R)-입체이성질체 및 (S,R) 광학이성질체 3.0% 이하
역가(potency) (HPLC)	무수 및 비용매 상에서 900 mcg/mg 이상
순도 (HPLC)	무수 및 비용매 상에서 970 mcg/mg 이상
확인	샘플 및 표준 시료의 유지시간의 차이는 2.0% 이하임
잔류 용매	아세톤, 에틸 아세테이트, 헵탄, 이소프로판올, 테트라히드로퓨란, 에틸 알코올에 대해서 NMT 0.5%; 아세토니트릴, 디클로로메탄, 톨루엔에 대하여 NMT 0.1%; 에틸렌 글리콜, 디메틸에테르에 대해서 NMT 0.05%; 다른 각각의 용매에 대해서 NMT 0.05%; 총 용매에 대해서 NMT 1.0%
불순물 (HPLC)	단일 불순물 1.5% 이하; 구아닌 스테아레이트 알코올: NMT 2.5% 공지의 불순물: C16 에스테르; N-7 이성질체; N-에틸 발린; 레지오이성질체; 구아닌 스테아레이트 알코올 (IV); C20 에스테르; 스테아레이트 알데히드 (III); 구아닌 스테아레이트 (II); O,O 디스테아레이트 ; V Boc; 공지의 불순물 없음 > 1.0%; 총 불순물 NMT 3.0%

실시예 2 - 발로마시클로비르 다형체 A의 재결정화 공정

기계적 교반기, 모델 210 T J KEM 온도 조절기/열전지(thermocouple)에 의해 조절되는 오일 배스, 요카고와(Yokagowa) 온도 기록기가 부착된 내부 열전지 및 건조튜브가 부착된 2L의 둥근 플라스크에, 110 g의 EPB 348 로트 146756, 55 mL의 2 프로판올 (피셔(Fisher), 로트 050564) 및 1045 mL의 200 순수 에탄올 (아퍼(Aaper), 로트 06128WA) (SDA 3C 변성 무수 알코올과 동등한)을 포함하는 1.1L의 미리-혼합된 용액을 첨가하였다. 상기 교반된 혼합물은 고체가 거의 완전히 용해되도록 72 ℃의 내부온도로 가열하였다. 가열은 약 30분에 걸쳐 진행되었다. 벌크의 고체가 용이하게 용액이 되었다; 마지막에 잠깐 72 ℃의 내부온도에서 완전한 용해를 위하여 30분 동안 교반되었다. 내부온도는 최대 74 ℃^*까지 허용되었다. 상기 용액은 냉각 시 교반하면서 1시간에 10 ℃^**의 속도로 냉각되었다. 상기 고체는 내부온도가 55 내지 61 ℃에 도달했을 때 용액으로부터 결정화되었다. 결정화 발열량은 2 ℃이였다. 교반은 상온(약 25 ℃)이 된 후 1시간 동안 계속한 후, 상기 혼합물을 여과, 공기 건조 및 밤새도록 진공 건조(50 ℃, 대기압의 반 정도의 진공, 늦은 질소 스위핑) 하여 106 g의 흰색 고체 (52772-10-6)를 수득하였다.

* HPLC 입증 (칼럼: 페노메넥스 이너실(페노메넥스 이너실(Phenomenex Inersil)) ODS-2, 250 x 4.6 mm, 5미크론 입자 크기; 이동상: 62:38 아세토니트릴:물/아세토니트릴 내의 0.2% 과염소산; 구배조건: 25분에 걸쳐 0 내지 95%; 유동속도: 1.5 mL/분; 검출: 254 nm)은 결정화 시간을 연장(결정화 후 현탁액을 밤새도록 교반하는 것을 포함) 시킴으로써 불순물(구아닌 스테아레이트 알코올)은 원래 시작수치 약 0.3 면적%에서 약 0.9 면적%로 증가하였음을 보여준다. 서술된 시간 및 온도를 준수함으로써 불순물의 증가는 최근 허용 가능한 것으로 인정되는 0.6 면적%로 제한된다.

** 시간당 5 ℃ 내지 시간당 12 ℃ 범위의 냉각 속도가 바람직하고 적당한 화학적 순도 및 다형체 형태의 생성물을 얻을 수 있다.

생성물의 특성은 도 2 및 3에서 보여주는 전형적인 발로마시클로비르 다형체 A와 유사한 회절 특성을 가진다.

실시예 3 - 결정화 공정 전개( Crystallization Process Development )

소량(1-5g)의 결정화는 스톡 물질(stock material)로서 로트 146756을 사용하여 수행하였다. 우수한 고상의 물질을 생성하는 경향의 몇몇 용매가 확인되었다(피리딘, DMF, 에탄올 등). 대부분의 이러한 용매의 낮은 실행 가능성 및 에탄올에 의해 나타나는 가능성으로 인해 에탄올이 추가의 연구를 위해 선택되었다.

첫번째 10 g 규모의 재결정

10.1 g의 EPB 348 샘플 (로트 # 146756)을 100 mL의 무수에탄올 (아퍼(Aaper) USP)로부터 재결정하였다. 필요한 내부온도는 완전한 용액을 얻기 전에 68 ℃로 승온하였다. 상기 용액을 1시간 동안 75 ℃에서 교반하고 가열을 중지하였다. 상기 교반된 혼합물을 교반하면서 하룻밤 동안 상온으로 서서히 냉각하였다. 생성된 결정은 여과 및 50 ℃에서 일정 중량이 되도록 건조하여 9.3 g의 흰색 고체 (샘플 52772-2-7)을 수득하였다.

두번째 10 g 규모의 재결정

재현가능성을 증명하기 위하여, 10.0 g의 동일한 샘플 EPB 348을 사용하여 상기 공정을 반복하였다. 분리 및 건조 후, 9.3 g의 흰색 고체 (샘플 52772-3-17)를 수득하였다. 양성자 NMR에 의하여 상기 물질은 샘플 EPB 348와 일치하였다.

세번째 10 g 규모의 재결정

상기 공정의 상용 가능성을 위하여 특수 변성 알코올(SDA) 3C와 동등한 제조된 변성 알코올을 사용하여 상기 공정을 반복하였다. 이는 5 부피의 2-프로판올을 95 부피의 무수에탄올에 첨가하여 제조하였고 결과의 용액을 철저히 혼합하였다. 10.0 g의 EPB 348을 100 mL의 상기 3C 변성 알코올에 첨가하고 결과의 용액을 70 ℃의 내부온도로 가열하고 자석으로 교반하면서 서서히 상온으로 이르게 하였다. 내부온도는 주기적으로 기록되었고 도 6에서 보는 바와 같이 그래프화 하였다. 상기 혼합물은 61.5 ℃에서 완전한 용액이 되었으나 내부온도 55.3 ℃로 냉각될 경우 고체를 형성하였다. 상기 교반된 현탁액을 상온으로 냉각한 후, 여과, 공기건조 및 진공오븐 건조(50 ℃, 대기압의 반 정도의 진공, 늦은 질소 스위핑)하여 9.37 g의 흰색 고체, 샘플 52772-5-8를 수득하였다.

첫번째 100 g 규모의 재결정

대량으로 시간 당 5 ℃의 냉각 속도로 조절하고 냉각동안 내부온도를 기록하면서 SDA 3C 알코올로부터 재결정하였다. 기계적 교반기, 모델 210 T J KEM 온도 조절기/열전지(thermocouple)에 의해 조절되는 오일 배스, 요카고와(Yokagowa) 온도 기록기가 부착된 내부 열전지 및 건조튜브가 부착된 2L의 둥근 플라스크에, 110 g의 EPB 348 로트146756, 55 mL의 2 프로판올 (피셔(Fisher), 로트 050564) 및 1045 mL의 200 순수 에탄올 (아퍼(Aaper), 로트 06128WA)로 이루어지는 1.1L의 미리-혼합된 용액을 첨가하였다. 상기 교반된 혼합물은 고체가 거의 완전히 용해되도록 72 ℃의 내부온도로 가열하였다. 상기 용액은 냉각 시 계속 교반하면서 1시간에 5 ℃의 속도로 냉각되었다. 상기 고체는 내부온도가 60 내지 61 ℃에 도달했을 때 용액으로부터 고체로 결정화되었다. 교반은 하룻밤 동안 계속한 후, 상기 혼합물을 여과, 공기 건조 및 진공 건조(50 ℃, 대기압의 반 정도의 진공, 늦은 질소 스위핑) 하여 106.7 g의 흰색 고체 (52772-8-10)를 수득하였다.

추가의 100 g 규모의 재결정

2회 추가 배치의 EPB-348를 이전에 서술된 바와 같이 로트 146756로부터 100 g 규모로 3C 에탄올에서 재결정화하였다. 상기 공정에서 변경은 1) 더 빠른 분리(고체를 하룻밤 동안 용액에 두기보다는 대기 온도에 도달 하였을 때 여과하였다) 및 2) 이전의 100 g 배치에 사용된 5 ℃/hr의 냉각 속도 보다는 10 및 15 ℃/hr의 냉각 속도로 수행하였다.

제 1 배치는 ~10 ℃/hr로 냉각되었고 제 2 배치는 처음에는 13 ℃/hr로 냉각되다가 따뜻한 주변 온도 조건으로 인해 시간 당 약 12 ℃로 늦추어 졌다. 각 배치는 52772-10-6 및 52772-12-27로 표시되었다. 두 배치 모두 상온으로 냉각 후 분리하여 고체를 수득하였고 다형체 형태를 위하여 XRD 및 불순물 프로파일을 위하여 HPLC로 분석하였다.

회절 및 열적 특성

10-그램 규모의 상기 재결정화 공정으로부터의 샘플의 X-선회절 패턴 및 DSC 열 분석도는 각각 도 7 및 8에서 보여준다. 재결정된 샘플의 X-선 회절및 열적 특성은 모두 다형체 A와 일치한다.

입자 크기 및 유동성 특성

분말에 기계적 힘을 가하여 분말 유동성에 대한 저항을 관찰할 수 있다. 톡톡 두드림(tapping)으로 인한 분말의 벌크 밀도 (압축성)의 증가는 Carr 지수를 결정하는데 사용될 수 있다. 상기 지수는 4개의 재결정된 배치의 각각에 대해 측정되었고 하기 표로 나타내었다.

편광현미경은 실리콘 오일 내의 재결정된 샘플의 입자 크기 범위를 측정하는데 사용되었다. 상기 입자 크기 범위는 분말 유동성 데이터와 함께 표 4에 나타내었다.

종합적 Carr 지수는 38 내지 56 범위이였다. Carr 지수는 입자 크기가 증가함과 함께 향상됨을 나타내고 이는 규모의 증가와 관련이 있었다. 상기 방법에 의해 제조된 물질은 육안으로 보았을 때 이전의 배치 보다 우수한 취급성 및 분말 유동성을 가졌다.

재결정된 발로마시클로비르 샘플의 Carr 지수 및 입자 크기

배치	실험	Carr 지수	전형적 입자 크기 범위
52772-2-7	1^st 10 g	53	20-50
52772-3-17	2^nd 10 g	56	10-30
52772-5-8	3^rd 10 g	44	35-50
52772-8-10	110 g	38	150-300

HPLC 분석

HPLC 분석은 4개 배치의 재결정된 물질에 대해서 수행되었다. (칼럼: 페노메넥스 이너실(Phenomenex Inersil) ODS-2, 250 x 4.6 mm, 5미크론 입자 크기; 이동상: 62:38 아세토니트릴:물/아세토니트릴 내의 0.2% 과염소산; 구배조건: 25분에 걸쳐 0 내지 95%; 유동속도: 1.5 mL/분; 검출: 254 nm). 샘플은 재결정을 위하여 출발물질로 사용된 로트 146756와 비교하였다.

HPLC에 의한 발로마시클로비르 샘플의 순도

분석 순서	배치	실험	HPLC (면적 %)
1	로트 146756	출발물질	98.8
	52772-2-7	첫번째 10 g	98.8
	52772-3-17	두번째 10 g	98.8
	52772-5-8	세번째 10 g	98.9
	52772-8-10	첫번째 100 g	98.4
2	로트 146756	출발물질	99.1
	52772-10-6	두번째 100 g	98.8
	52772-12-27	세번째 100 g	98.7

일반적으로, 에탄올 재결정된 물질의 불순물 프로파일은 출발물질의 프로파일과 유사하였다. 0.05 면적 퍼센트 이하의 개별 불순물은 통합하지 않았다. 3개의 10 g 규모의 재결정 및 첫번째 100 g 규모의 재결정의 샘플은 함께 분석하였다 (분석 시퀀스 1). 주요 불순물은 유지시간(retention time)에 의해 표 6에 나타내었다. HPLC 오버레이 플롯은 전형적인 크로마토그램을 나타내는 도 9에서 보여준다.

재결정된 발로마시클로비르(배치 52772-2-7, 52772-3-17, 52772-5-8 및 52772-8-10)의 불순물 프로파일

불순물	대략적인 면적%	재결정 시 변화
RRT 0.62	0.1	약간 감소
RRT 1.24	0.1	약간 감소
RRT 1.37	0.3 내지 0.9	증가
RRT 1.50	0.2	약간 감소
RRT 1.53	0.1	변화 없음
RRT 2.27	0.05	변화 없음

6개의 불순물이 >0.05 면적%로 있었고, RRT 0.62, 1.24, 및 1.50의 불순물은 모든 재결정된 샘플에 대하여 감소하였다.

2개의 불순물은, RRT 1.53 및 RRT 2.27, 재결정시 변화를 보이지 않았다.

1개의 불순물은, RRT 1.37, 재결정된 물질에 대해서 증가함을 보여주었다.

어떠한 새로운 불순물은 재결정된 물질에서 관찰되지 않았다.

RRT 1.37의 불순물은 시간에 따라 각 샘플에서 증가한다. "표준" 용액에서 상온에서 14시간에 걸쳐 0.3 내지 0.5로 증가함을 관찰하였다. 이러한 불순물은 시간에 따라 서서히 증가함을 보여주는 반면 분석 동안 용액 안정성의 부족은 이러한 불순물로 인해 관찰된 변화를 설명하지 않는다.

2개의 추가의 100 g 규모의 재결정의 샘플은 함께 분석되었다(분석 시퀀스 2). 주요 불순물은 유지시간에 의해 표 7에 나타내었다.

재결정된 발로마시클로비르 (배치 52772-10-6 및 52772-12-27)의 불순물 프로파일

불순물	대략적인 면적 %	재결정 시 변화
RRT 0.64	0.1	변화 없음
RRT 1.31	0.1	약간 감소
RRT 1.54	0.26 to 0.62	증가
RRT 1.72	0.2	약간 감소
RRT 1.76	0.1	변화 없음
RRT 2.73	0.05	변화 없음

2회의 HPLC 수행으로부터의 데이터를 비교한 첫번째 관찰은 유지시간 신호가 다르다는 것이다. 이것은 냉각된 자동화된 분석시스템 트레이(autosampler tray)를 갖는 상이한 HPLC의 사용(시퀀스 2), 미리-혼합된 이동상의 제조 및 다른 미묘한 차이점에 기인한다. 유지시간은 상기 방법의 시스템 적합한 기준 내였다.

두번째 관찰은 결정화 동안에 불순물 분리에 있어서 동일한 일반적 경향이 나타나는 것이다. 주요 이슈는 RRT 1.54의 불순물 (이전 RRT 1.37의 불순물에 상응하는)이였다. 상기 불순물은 재결정에서 증가함을 보인다; 그러나 불순물의 증가량은 빠른 분리(고체를 수득하기 전에 하룻밤 동안 숙성하지 않음) 및 빠른 냉각속도(승온된 온도에서의 노출 시간을 줄임)로 인해 감소함을 보여준다.

HPLC 데이터는 출발 배치 (146756)는 RRT 1.54의 0.26 면적%을 가지고 두번째 및 세번째 재결정된 100 g 배치에서 0.55 및 0.62 면적%로 성장하였음을 보여준다. 냉각된 자동화된 분석시스템 트레이는 HPLC 분석시 불순물의 성장을 최소화하기 위하여 사용되었다.

2개의 새로운 재결정된 배치(0.05 면적% 이상)에서는 새로운 불순물이 관찰되지 않았다.

HPLC 결과는 10 내지 12-13 ℃/hr의 냉각 속도를 이용하고 상온에 도달한 후 고체를 수집함으로써 RRT 1.54 (이전의 RRT 1.37)에서의 불순물의 축척이 다소 감소되었다.

유지시간은 사용된 HPLC 기기에 따라 다를 수 있음을 주의하여야 한다. 내부 표준은 대조군으로 사용되었다.

LCMS 분석

LCMS 분석은 분리된 생성물에서 성장하는(또는 농축되는) 불순물의 확인을 위하여 사용되었다. 상기 기술된 방법으로부터 HPLC 조건은 HPLC를 사용하여 관찰된 것처럼 LCMS에서 동일한 불순물 프로파일을 생성하도록 사용되었다. 과염소산 대신에 LC법에 필요한 LCMS에 적합한 산(TFA)으로 대신하였다.

주요 불순물은 발로마시클로비르의 데스 발린 유도체로 추정된다. 추정되는 불순물의 구조는 다음과 같다.

모체 API는 양이온 모드에서 619.4의 m/z를 가지고 이중 에스테르화된 전구약물과 일치됨이 관찰되었다. 주요 불순물(다이오드 어레이를 통한)은 발린 치환기를 제거한 후(상기에서 보여주는 바와 같이) 모체 구조의 MH⁺에 해당하는 520.3의 m/z를 가짐을 관찰하였다.

재결정 동안 성장하는 상기 불순물은 잠정적으로 데스 발린 불순물인 것으로 결론지었다.

잔류 용매 분석

이소프로판올 (IPA) 및 에탄올에 대한 GC 분석은 상기 기술된 재결정화 공정을 이용하여 10 및 100 g 규모로 재결정된 발로마시클로비르 배치로 수행하였다. 각 배치는 표 8에 나타내었다. 상기 샘플은 에탄올 및 IPA에 대하여 ICH 리밋 (5000 ppm)의 0.5, 1, 및 1.5 배에서 3점조절법을 이용하여 분석하였다. 샘플 용액의 스파이크 리커버리(Spike recoveries)는 샘플 매트릭스에 있어서 적합한 리커버리를 강조하기 위하여 수행되었다.

잔류 용매 분석 10-100g 규모 다형체 A 배치

배치	실험	에탄올 ( ppm )	IPA ( ppm )
52227-2-7	첫번째 10 g	<1990	ND
52772-3-17	두번째 10 g	<1905	ND
52772-5-8	세번째 10 g	ND	<1870
52772-8-10	첫번째 100 g	<1945	<1865
52772-12-27	세번째 100 g	<1950	<1865
스파이크 리커버리	NA	97.1 %	95.8 %

GC 잔류 용매 분석의 결과는 상당한 양의 EtOH 및 IPA가 생성물에 의해 유지되지 않았다. 스파이크 리커버리는 물질이 분석에 대해서 적합하게 대응함을 나타낸다.

실시예 4 - 발로마시클로비르 다형체 A의 대규모의 재결정 공정

4 Kg 규모의 재결정

2개의 추가 발로마시클로비르 배치를 이전에 서술한 바와 같이 3C 에탄올에서 4+ kg의 규모로 로트 146756으로부터 재결정하였다. 두 배치 모두 우수한, 흰색 물질이었고, XRD에 의해 다형체 A임을 확인하였다.

각 4+ kg 배치는 우수실험실기준(Good Laboratory Practices, GLP)하에서 특징이 파악되었다. 그 결과 상기 재결정 공정은 수 킬로그램 규모로 상당한 결과물을 생산하였다.

30 Kg 규모의 재결정

31.6 kg의 발로마시클로비르를 184.7 kg의 에틸 알코올 200 프루프 및 12.6kg의 이소프로필 알코올의 혼합물에 첨가하였고 결과 혼합물을 20분에 걸쳐 내부온도 68.2 ℃(18.4 ℃에서 시작하여)로 가열하여 투명 용액이 되었다. 상기 용액을 교반하면서 4시간에 걸쳐 1시간 당 10-15 ℃ 냉각속도로 상온(20.0 ℃)까지 냉각시켰다. 상기 혼합물을 20 ℃에서 4시간 더 교반하고 7시간 더 방치한 후 여과하였다. 고체잔여물을 69.8 kg의 에틸 알코올 및 3.6 kg의 이소프로필 알코올의 혼합물로 세척하여 69.3 kg의 젖은 케익(wet cake)상태의 생성물을 수득하였다. 젖은 케익 생성물은 진공 오븐(≤ 45 ℃, 진공 ~ 27 in. Hg, 느린 질소 스위핑)에서 건조하여 29.8 kg의 흰색 고체, 배치 A501S8 07 001을 수득하였다.

실시예 5 - 발로마시클로비르의 다형체 스크리닝

다형체 스크리닝 실험은 발로마시클로비르 활성 약학적 성분에 대하여 수행되었다. 스크리닝은 용매 재결정, 용융된 물질로부터의 재결정을 이용한 물질의 재결정, 어닐링(annealing) 실험, 및 슬러리 실험을 포함한다. 전체적으로 API는 100 초과의 결정성장 조건하에서 재결정되었고 분말 x-선 회절을 이용하여 분석되었다. x-선 데이터의 계량방법(chemometric treatment)은 샘플을 그룹대로 분류하는데 이용하였다. 상기 그룹은 열적, 광학적, 분광학적 및 다른 도구를 이용하여 어떤 그룹이 API의 고유의 고체상태 형태를 나타내는지를 실험하였다.

일반적으로, API는 많은 상이한 다형체 형태를 나타내고, 다수가 낮은 질서를 나타낸다. 고체상태 형태는 용매화 화합물(solvate) 또는 수화 화합물(hydrate)이 아니었다. 다형체 형태뿐만 아니라 물질은 액체 결정상태로도 존재한다. 실험 시 확인된 가장 안정한 다형체 형태는 형태 A (Polymorph A)로 표시되었다.

용매 재결정

다형체 스크리닝의 용매-기반 부분을 수행하기 위하여 테스트 물질을 약 100개의 상이한 결정성장 조건하에서 용매 재결정하였다. 재결정 실험의 규모는 약 15 mL이었다. 결정성장 조건을 변경하기 위한 중요한 방법은 용매 혼합물의 이원 구배조건 어레이를 이용함으로써 얻었다. 포화 온도, 성장 온도, 및 증발율(상대적 과포화도)도 결정성장 조건에 있어서 추가적 차이를 나타내기 위하여 달리하였다.

전반적으로 다형체 스크리닝은 4개의 상이한 재결정 패널로 나뉘었다. 상기 4개의 재결정 패널로부터 생성된 고체는 다른 방법(슬러리, 어닐링(annealing) 등)에 의해 생성된 샘플과 함께 분말 XRD로 분석하였다. 입자 효과를 줄이기 위하여, 2차원의 검출 시스템을 모든 XRD 스크리닝 데이터를 수집하는데 사용하였다. 수집된 XRD 데이터는 샘플의 결정형이 재결정에 의해 변화가 있는지를 확인하기 위하여 모든 프로파일 계량방법을 이용하여 평가하였다.

회절 데이터의 계랑분석은 샘플을 A 내지 H로 라벨링된 8 그룹(또는 클러스터)으로 분류하였다. 3개의 주요 그룹 및 소수의 5개의 그룹이 있다. 결정화 속도의 적합한 범위를 나타내는 완전 결정성 내지 완전 무정형(또는 액체 결정)의 범위에 있는 재결정된 샘플을 실험 시 분석하였다.

그룹 A는 24 멤버를 포함하였다. 몇몇 "받은대로(as received)" 배치는 이 그룹에 속하였다. 상기 그룹은 다른 글룹에 비하여 큰 결정성을 가졌다.

그룹 B는 가장 큰 그룹이며 43 멤버를 포함하였다. 상기 그룹은 낮은 결정성을 가졌고 추가의 그룹(B1 내지 B4)로 궁극적으로 분리되었다.

그룹 C는 23 멤버를 포함하였다. 상기 그룹은 무정형 또는 LC 샘플을 나타내었다.

다른 5 그룹(D 내지 H) 각각은 소수(1 또는 2 멤버)를 포함하였다. 각 그룹(A 내지 H)의 멤버 수를 표 9에 나타내었다. 각 (용매 기반) 재결정 실험에 대한 그룹의 표시는 도 10-A 내지 D의 하부에서 보여준다.

각 그룹의 대략적인 수
그룹	멤버	그룹	멤버
A	24	D	2
B1	43	E	1
B2		F	2
B3		G	1
B4		H	1
C	23

비경쟁적 슬러리 실험

용매 재결정 실험이외 비경쟁적 슬러리 실험도 신규한 고체상태 형태를 연구하기 위하여 또한 수행되었다. 이 실험은 상이한 다형체 형태의 용해도 차이에 달려있다(화합물이 상이한 다형체 형태로 존재하는 경우). 따라서, 초기 용해된 결정형 보다 낮은 용해도(더 안정한)를 갖는 다형체 형태 (및 용매 화합물)만이비경쟁적 슬러리 실험으로부터 만들어질 수 있다.

근본적으로, 고체가 (슬러리) 용매에 용해되었을 때, 포화용액을 궁극적으로 얻는다. 상기 용액은 용해된 다형체 형태에 대하여 포화된다. 그러나, 용액은 초기에 용해된 다형체 형태보다 더 안정한(더 안정한 형태는 더 낮은 용해도를 가진다) 다형체 형태에 대하여 포화된다. 따라서, 더 안정한 다형체 형태의 어느 하나가 핵을 이룰 수 있고 용액으로부터 침전될 수 있다. 또한, 비경쟁적 슬러리 실험은 API와 용매화합물을 형성하는 용매를 확인하는데 있어서 종종 사용된다.

슬러리 실험은 과량의 물질을 소량의 용매에 노출하고 결과의 현탁액을 주변 온도에서 약 1 주일 동안 교반함으로써 수행하였다. 고체는 기계적으로 여과하고, 결과물의 형태를 결정하기 위하여 XRD로 분석하였다. 분리 후 가능한 용매 제거 또는 물리적 변화를 방지하기 위하여, 샘플을 x-선 분석 전에 건조하지 않았다. 표 10은 이러한 비경쟁적 슬러리 실험의 결과를 나타낸다.

초기 형태 A와의 비경쟁적 슬러리 실험
용매	초기형태의 그룹	온도 (℃)	기간	최종형태의그룹
1-프로판올	A	25	1+ 주	A
아세토니트릴	A	25	1+ 주	A
EtOH	A	25	1+ 주	A
EtOAc	A	25	1+ 주	A
헵탄	A	25	1+ 주	A
IPA	A	25	1+ 주	A
이소프로필 아세테이트	A	25	1+ 주	A
이소프로필 에테르	A	25	1+ 주	A
MeOH	A	25	1+ 주	D
MTBE	A	25	1+ 주	A
니트로메탄	A	25	1+ 주	A
펫 에테르(pet ether)	A	25	1+ 주	A
sec-부탄올	A	25	1+ 주	A
톨루엔	A	25	1+ 주	A
물	A	25	1+ 주	A

슬러리 실험의 대부분은 x-선 산란 거동에 기초한 초기 다형체 형태에 상당한 변화를 나타내지 않았다. 하나의 용매, MeOH는 고체가 속했던 그룹을 변화시키기에 충분한 회절 특성을 변화시켰다. 상기 샘플에 수행된 추가적 실험은 "그룹의 특성" 으로 표시된 부분에서 상세히 설명된다.

어닐링 ( annealing ) 실험

용매 재결정 실험 및 비경쟁적 슬러리 실험 이외에, 어닐링(annealing) 실험을 새로운 고체상태 형태을 조사하기 위하여 수행하였다. 상기 실험은 온도의 역할에 따라 구조적 변화를 구하는 것을 포함한다. 이는 다형체 시스템에서 일어날 수 있는 상 변화를 조사하기 위하여 가변 온도형 분말 x-선 회절, 핫-스테이지 현미경 분석(hot-stage microscopy), 및 DSC 실험을 이용하여 수득하였다.

대부분의 상기 실험은 다양한 형태의 열적 특성을 이해하기 위함이였다. 샘플을 어닐링 열처리하고 열적, x-선, 광학적 등의 거동에 있어서 변화를 살펴봄으로써 새로운 고체 형태를 야기시키는지에 대한 확인을 할 수 있었다.

용융된 물질로부터의 재결정

용융된 물질로부터의 재결정은 샘플을 가열하여 녹이고 이를 상이한 온도로 냉각하거나 상이한 속도로 냉각하여 결정화를 시도하도록 HS 현미경 또는 DSC를 이용하여 수행하였다. 샘플은 다른 결정형이 관찰되는지를 확인하기 위하여 XRD, DSC 등에 의해 분석하였다.

그룹의 특성

재결정 데이터를 회절 특성에 따라 다른 그룹으로 분리(표 7 참조)한 후, 각 그룹은 그룹의 다른 특성을 차별화할 수 있는지를 결정하기 위하여 조사하였다. 각 그룹의 특성은 각 그룹의 대표적인 회절 데이터를 다른 그룹과 비교함으로써 시작되었다. 이는 일반적으로 DSC 분석, TGA 분석, 핫 스테이지 현미경 분석, NMR 분석 및 다른 분들석에 의해 계속되었다.

그룹 A

이 그룹은 약 24 멤버를 가진다. 이 그룹의 특징적 회절 특성은 도 11A와 함께 도 11B의 이에 상응하는 열적 특성에서 보여진다. 이 그룹은 형태 A로 표시되었다. 형태 A를 야기시키는 샘플은 다형체 스크리닝 실험(다형체 형태 대조 결정화 실험, 결정 스크리닝 실험, 및 슬러리 실험)의 다른 타입으로부터 유래하였다.

형태 A의 샘플의 특성은 상당히 우수한 결정도 및 2개의 주요 열적 특징을 포함한다. 115-125 ℃ 근처에서의 큰 흡열성의 특징은 형태 A가 액상의 결정 상태로의 변화를 나타낸다.

115-125 ℃ 근처에서의 주요 흡열성의 시그널은 가끔 낮은 및/또는 높은 온도 위치에서 더 작은 식별 가능한 시그널(들)을 동반하였다. 가변 온도형 XRD는 형태 A가 형태 AE로 표시된 밀접하게 관련있는 형태로 가역적으로 변환됨을 나타낸다.

형태 A 물질의 샘플에서 관찰된 두번째 주요 흡열성의 특징은 약 170 ℃에서 녹는 것이었다.

형태 A의 분자 분광법 및 TGA은 API의 무수, 비용매 다형체 형태를 나타낸다.

그룹 B (B1-B4)

그룹 B로 설명되는 원초적인 계량적 데이터는 약 43 멤버를 포함하였다. 그룹 내에서 회절 특성의 가변성은 4개의 소그룹으로 구성되었음을 나타내었다. 이러한 소그룹은 그룹 B1, B2, B3 및 B4으로 표시되었다. 일반적으로, B 소그룹의 샘플은 서로 매우 유사한 특징을 나타내었고 형태 A의 샘플 보다 더 낮은 질서도(결정도)를 가졌다.

그룹 B1

그룹 B1의 회절 및 열적 특성은 각각 도 12A 및 12 B에서 보여진다. 특유의 열적 거동은 3개의 뚜렷한 특징을 포함한다. 첫번째 특징은 75-110 ℃ 범위에서 한 쌍의 흡열 피크가 있다. 두번째 특징은 115-125 ℃ 온도 범위에서 작은 흡열 피크가 있다. 세번째 특징은 170 ℃ 부근에서 녹는 흡열 피크가 있다.

75-110 ℃ 부근에서의 한 쌍의 흡열 피크는 형태 B1에서 형태 H로 변환되는 한 쌍의 가역적 고체-고체 다형체 변화에 기인한 것이였다. 이러한 전이는 가변 온도형 x-선 회절을 이용하여 계속되었다.

115-125 ℃ 부근에서의 흡열성의 신호는 형태 H가 액체 결정으로의 변환에 기인한 것이고 170 ℃에서 액화 (용융)가 계속되었다. 도 12B에서 보여지는 열 분석도의 가변성은 샘플의 결정도의 차이가 원인일 수 있음을 주의하도록 한다.

도 13A에서 보여지는 바와 같이 형태 H의 회절 패턴은 완전히 해결되지 않는다. 도 13B에서 사이클릭 DSC 열 분석도는 전이는 온도가 올라가고 낮아질 때 가역적임을 보여준다.

형태 B1 샘플의 분자 분광법 및 TGA는 API의 무수, 비용매 다형체 형태임을 나타낸다.

그룹 B2

그룹 B2는 B 소그룹 중 가장 크다. 이러한 형태의 회절 및 열적 특성은 각각 도 14A 및 14B에서 보여준다. 이 그룹은 더 많은 수 및 더 해상도가 높은 회절 피크를 기초로 하여 그룹 B1 그룹보다 높은 결정도를 가짐을 나타내었다.

이 그룹의 열적 특성은 세 지역의 흡열성의 특성을 포함한다. 첫번째 특성은 100-110 ℃ 범위에 걸쳐 일반적으로 크고 구불 구불한 흡열 피크이다. 이러한 특성은 DSC를 이용하여 가역성임을 나타내고(도 15A 및 15B 참조), 형태 B2가 가역적으로 형태 H로 바뀌는 형태 B2E로 표시되는 준안정한 상태로 변화함을 나타낸다. 두번째 열적 특성은 125 ℃ 근처에서 작은 흡열 피크가 있고 이는 형태 H가 액체 결정 상태로의 변화를 나타낸다. 최종적으로 액체 결정 상태는 약 170 ℃에서 액화한다.

형태 B2 샘플의 NMR 및 TGA는 API의 무수, 비용매 다형체 형태임을 나타낸다.

그룹 B3

이 그룹의 일반적 회절 및 열적 특성은 각각 도 16A 및 16B에서 보여준다. B3 샘플의 회절 및 열적 특성은 다른 그룹 B 샘플과 유사하였다.

형태 B3의 열적 특성은, 형태 B1이 75-110 ℃ 온도 범위에서 두개의 뚜렷한 흡열 피크를 가지는 반면 B3 샘플이 하나의 뚜렷한 흡열 피크 가지는 것을 제외하고는, B1과 가장 유사하였다. 75-110 ℃ 범위에서 초기 흡열은 형태 H로의 다형체의 변화를 나타내는 것으로 여겨진다. 형태 H는 약 125 ℃에서 액체 결정 상태로 변환하고 약 170 ℃에서 액화한다. 도 17A 및 17B는 다른 형태 B/H 쌍방성(enantiotropic) 쌍과 마찬가지로 형태 B3에서 H로의 변환은 가역성임을 나타내는 사이클릭 DSC 열 분석도를 보여준다.

가변 온도형 XRD 또한 형태 B3가 형태 H로 변환되기 전에 서서히 가역적으로 형태 B3E로 표시되는 밀접하게 관련되는 구조로 변화함을 나타낸다.

형태 B3 샘플의 분자 분광법 및 TGA는 API의 무수, 비용매 다형체 형태임을 나타낸다.

그룹 B4

회절 및 열적 특성은 각각 도 18A 및 18B에서 보여준다. 그룹 B2에 대한 이 그룹의 XRD 거동의 미묘한 차이는 다양한 각도에서 다소 증가된 및 부재의 모습을 포함한다. 이 그룹의 열적 특성은 그룹 B2와 유사하나 상이함을 나타낸다. 그룹 B4는 약 75-110 ℃의 온도 범위에 걸쳐 두개의 흡열을 나타내나 그룹 B2는 단지 하나의 흡열을 나타낸다.

그룹 B4는 75-110 ℃ 부근에서 흡열성의 지역을 지난 후 가역적으로 형태 H로 표시되는 준안정한 다형체 형태로 변환한다(도 19A 및 19B 참조). 이어서 물질이 액체 결정 상태로 변환하는 125 ℃ 근처에서 더 작은 흡열이 있다. 상기 상태는 온도가 물질이 액화되는 약 170 ℃에 이르기까지 유지된다.

가변 온도형 XRD는 온도에 따른 물질을 조사하기 위하여 사용되었다. 형태 B4도 형태 H로 변환되기 전에 서서히 가역적으로 형태 B4E로 표시되는 밀접하게 관련되는 구조로 변화함을 나타낸다.

형태 B4 샘플의 분자 분광법 및 TGA는 API의 무수, 비용매 다형체 형태임을 나타낸다.

그룹 B1-B4

모든 B 그룹 멤버의 XRD 패턴은 적은 수의 회절 피크 및 피크들이 넓고 종종 구불거린다는 관찰을 바탕으로 한 낮은 결정도를 가진다. 유사한 타입의 회절 특성으로 인해 이러한 일반적인 특성은 그룹 B1 내지 B4 및 이에 상응하는 명백한 준안정한 형태(B2E, B3E, B4E)로 구분하는 것을 어렵게 하였다. 가변 온도형 XRD 및 사이클릭 DSC는 이러한 상승된 온도 형태(H, B2E, B3E, B4E)가 냉각으로 인해 B1 내지 B4로 다시 가역적으로 변환함을 나타내는 것을 주의해야 한다. 주변 온도로 냉각으로 인한 형태 H, B2E, B3E, 및 B4E의 변환으로 인해 이러한 형태들을 분리하고 주변 온도에서 보다 연구하는 것이 방해되었다.

그룹 C

그룹 C는 23 멤버를 포함한다. 상기 그룹의 회절 및 열적 특성은 각각 도 20A 및 20B에서 보여준다. 이 그룹은 샘플이 액상의 결정 또는 무정형 상태이다. x-선 회절도는 단지 낮은 각도에서 작은 회절 신호와 함께 제동복사 산란현상(Bremsstrahlung scattering)을 나타낸다. 일반적으로, 액상의 결정 상태로 변할 때까지 가열된 다른 형태의 샘플은 상온으로 냉각한 이후에도 그 상태에서 유지되려는 경향이 있다. 다수 타입의 액체 결정이 있고 그 액체 결정 상태의 정확한 특성은 열방성(thermotropic)이라는 것 외에는 밝혀지지 않았음을 주의하여야 한다. 하나 이상의 액체 결정 상태로 존재하거나 본 실험 중 확인된 상이한 다형체 형태는 다른 타입의 액체 결정 상태를 형성할 수 있다.

그룹 H

그룹 H는 그룹 B의 샘플을 가열하여 첫번째 흡열 활성 범위를 지나 관찰되는 샘플이다. 각 B 그룹 샘플은 가역적으로 형태 H로 표시되는 다른 다형체 형태로 변화는 것이 관찰되었다. 118 ℃에서 형태 H의 회절 거동은 도 13에서와 같이 나타나는 곡선으로 나타난다(25 ℃에 나타나는 곡선은 형태 B1이고 140 ℃에 나타나는 곡선은 액체 결정이다).

에너지 관계

경쟁적 슬러리 실험은 에탄올 내에 형태들의 혼합물(보통 50:50)을 이용하여 며칠 동안 약 25 ℃에서 교반함으로써 수행하였다. 비경쟁적 슬러리 실험은 에탄올 내에 과량의 하나의 형태의 고체를 상온에서 교반함으로써 수행하였다. 에탄올은 다형체 형태에 대한 적당한 용해도 및 다형체 형태와 용매 화합물을 형성하지 않는다는 것에 기초하여 선택되었다.

경쟁적 및 비경쟁적 슬러리 실험에 있어서, 고체는 진공 여과되고 XRD에 의해 분석되었다. XRD 패턴은 용해되지 않은 고체가 다른 다형체 형태로 변화되었는지 여부를 판단하기에 사용된다. 하나의 예를 들면, 다른 다형체 형태는 초기 존재하던 두 형태 중 어느것도 아닌 다른 형태로 나타났다. 이것은 원래 형태 둘 다 최종 분리된 형태보다 준안정함을 나타낸다.

일반적으로, B 다형체 샘플은 용이하게 형태 A의 존재하에서 형태 A로 변환되었다. 이것은 형태 A가 B 다형체 보다 용해도가 낮고 열역학적으로 더 안정함을 나타낸다. 두 개의 다형체 형태 B 사이의 경쟁적 슬러리로 형태 A를 만들었고 이는 또한 에너지 관계를 지지한다.

비경쟁적 슬러리 실험은 B 그룹 다형체가 씨딩(seeding) (또는 형태 A의 도입) 없이도 용이하게 A로 변함을 나타낸다. 슬러리 데이터는 표 11에 나타내었다.

다양한 다형체 형태 슬러리 상호전환

초기 형태	최종 형태
B1	A
B2	A
B3	A
B4	A
F	A
A-B1	A
A-B2	A
B1-B2	A

형태 C는 물질의 액상의 결정 상태이다. 액체로 존재하는 것은 슬러리 실험을 수행하지 않았다.

형태 H 다형체는 이의 가역적으로 흡열성의 (쌍방성(enantiotropic)) 관계인 B 다형체 보다 준안정한 것으로 여겨진다. 이는 형태 H 다형체가 B 다형체 보다 용해성이 높고 열역학적으로 덜 안정함을 나타낸다. 이는 H 다형체가 더 안정한 B 다형체로 변환하기 때문에 상온에서 분리할 수 없는 것과 일치한다.

다형체 스크리닝 결론

다형체 스크리닝 실험 (용매 재결정, 용융된 물질로부터의 재결정, 어닐링(annealing), 비경쟁적 슬러리)로부터 생성된 미처리 회절 데이터는 초기에는 계량방법(chemometric treatment)을 이용하여 8개의 다른 그룹으로 분리되었다. 이러한 다른 그룹의 분석은 계량방법에 의해 확인된 그룹을 개선하기 위하여 추가의 실험(예를 들어 DSC, TGA, HSM, NMR 등)을 수행하는데 사용하였다. 상기 그룹의 개선은 표 12와 같이 다형체 형태의 체계화로 나타내었다.

상이한 다형체 형태의 요약

형태 표시	상태	코멘트
A	열역학적으로 안정한 형태	결정화 및 추후 진행을 위한 A↔AE↔LC↔용융된 목적물(target)
B1	준안정한 다형체	B1↔H↔LC↔용융
B2	준안정한 다형체	B2↔B2E↔H↔LC↔용융
B3	준안정한 다형체	B3↔B3E↔H↔LC↔용융
B4	준안정한 다형체	B4↔B4E↔H↔LC↔용융
C	액상의 결정	이 그룹의 몇몇 샘플은 무정형일 수 있음
H	준안정한 다형체	B1-B4의 쌍방성 쌍

표 10에 나타난 상이한 형태의 표시는 비용매화된, 비수화된 형태이다. 본 연구시 용매화물은 없는 것으로 관찰되었다. 각 형태에 대한 정식 흡착/수화(sorption/hydration) 실험은 수행하지 않았으나 수화물도 발견되지 않았다. 일반적으로, API는 실제로 물에 녹지 않고 매우 친유성이며 이는 수화물을 형성하기가 쉽지 않음을 암시한다.

경쟁적 슬러리는 주변 조건하에서 분리될 수 있는 다형체 형태들 사이의 에너지 관계를 나타내는데 사용되었다. 비경쟁적 슬러리 실험(형태 A로 시작, 표 10 참조)는 어떠한 다형체 변화도 보여주지 않았다. 비경쟁적 슬러리 데이터와 함께 이는 다형체 스크리닝 시 발견되는 형태에서 형태 A가 API의 열역학적으로 안정한 형태임을 나타낸다.

실험방법

현미경 관찰

편광된 가시광 광원 및 편광가능 분석기(polarizable analyzer)로 구성된 짜이스 일반 현미경(Zeiss Universal microscope )을 샘플의 광학적 특성을 평가하기 위하여 사용하였다. 샘플(Specimens)은 일반적으로 한 방울의 침지 오일 및 커버 유리로 현미경 슬라이드 상에 고정하였다. 확대율은 일반적으로 250X이였다. 입자/결정 크기 및 형태의 관찰이 기록되었다. 복굴절(birefringence)의 존재도 기록되었다.

분자 분광법 - ¹ H- NMR

샘플은 1-10 mg을 디메틸술폭시드 (DMSO)-d₆에 0.05% (v/v) 테트라메틸실란 (TMS)과 용해시켜 준비하였다. 스펙트럼은 상온에서 베리안 제미니(Varian Gemini) 300 MHz FT-NMR 분광계로 얻었다.

적외선 분광기( Infrared Spectroscopy ) ( FTIR )

적외선 스펙트럼은 하릭 스플릿피 ATR (Harrick Splitpea^TMattenuated total reflectance) 장치가 설치된 니콜렛(Nicolet) 510 M-O 푸리에(Fourier) 변환 적외선 분광기(Fourier transform infrared spectrometer)로 얻었다. 스펙트럼은 4000 - 400 cm^-1영역에서 4 cm^-1의 해상도로 얻었고 각 분석에 대해서 128 스캔으로 수집하였다.

시차주사열량계( Differential Scanning Calorimetry , DSC )

DSC 데이터는 TA 인스트루먼트 2910 DSC로 수집하였다. 일반적으로 1 내지 10 mg의 질량 범위의 샘플은 알루미늄 샘플 팬 내에서 눌러주고 50 mL/분으로 질소 공급하고 10 ℃/분의 속도로 25 내지 약 175 ℃까지 스캔하였다.

열무게 측정 분석( Thermogravimetric Analysis , TGA )

TGA 데이터는 TA 인스트루먼트 2950 TGA로 수집하였다. 일반적으로, 5 내지 15 mg의 질량 범위의 샘플은 개방된 미리 무게측정된 백금 팬에 넣고 질소 공급하고 10 ℃/분의 속도로 25 내지 약 150 ℃까지 스캔하였다.

핫 스테이지 현미경 분석 ( Hot 스테이지 Microscopy , HSM )

편광된 가시광 광원 및 메틀 핫 스테이지 악세서리(Mettler hot stage accessory)로 구성된 짜이스 일반 현미경이 사용되었다. 샘플은 한 방울의 침지 오일 및 커버 유리로 현미경 슬라이드 상에 고정되었다. 확대율은 일반적으로 200X이였다. 샘플은 3 또는 10 ℃/분의 속도로 25 ℃에서 약 175 ℃까지 가열되었다(상 변화 관찰, 재결정, 거품 진화 등이 기록되었다).

분말 유동성 ( Powder Flow )

분말 유동성 특성은 Carr 지수를 이용하여 비교하였다. 분말에 기계적 힘을 가하여 분말 유동성에 대한 저항을 관찰하였다. 톡톡 두드림(tapping)으로 인한 분말의 벌크 밀도(압축성)의 증가는 Carr 지수를 측정하는데 이용될 수 있다. Carr 지수 및 정성적 유동성 특성을 하기 표 13에서 개략적으로 나타내었다.

압축성 ( Carr 지수)	유동성
5-12	자유로운 유동성
12-16	우수한 유동성
18-21	보통
23-35	나쁨
33-38	아주 나쁨
>40	대단히 나쁨

배치를 테스트 전에 <1000 미크론의 체로 걸렀다. 이것은 샘플 내의 덩어리들을 제거하기 위해 필요했다.

HPLC ( High Performance Liquid Chromatography )

LC 데이터는 LC-410 펌프, LC-235 다이오드 어레이 검출기 및 200 시리즈 오토샘플러로 구성된 Perkin Elmer HPLC를 이용하여 수집하였다. HPLC는 펠티어(peltier) 조절기 샘플 트레이 및 칼럼 히터가 설치되었다. 데이터는 클라이언트-서버 LIMS를 통해 수집되었다.

적용된 HPLC 방법은 다음과 같다: 칼럼: 페노메넥스 이너실(Phenomenex Inersil) ODS-2, 250 x 4.6 mm, 5미크론 입자 크기; 이동상: 62:38 아세토니트릴:물/아세토니트릴 내의 0.2% 과염소산; 구배조건: 25분에 걸쳐 0 내지 95%; 유동속도: 1.5 mL/분; 검출: 254 nm. 결정화의 시간이 길어질수록(결정화 후 현탁액의 하룻 동안의 교반을 포함한) 불순물(구아닌 스테아레이트 알코올)은 원래 시작수치 약 0.3 면적%에서 약 0.9 면적%으로 증가하였다. 시간 및 온도에 따른 불순물의 증가는 최근 허용 가능한 0.6 면적%까지 제한되었다.

LCMS ( Liquid Chromatography Mass Spectrometry )

데이터는 다음의 요소를 포함하는 애질런트(Agilent) 1100 LC/MS 시스템을 이용하여 수집되었다: G1367A 웰-플레이트 샘플러, 구획을 가열하는 G1316A 칼럼, G1315A 다이오드 어레이 검출기, G1322A 진공 탈가스기(vacuum degasser), G1312A 이원 펌프(binary pump), 및 G1946C 질량 검출기 (electrospray single-quad).

LC 조건은 이전에 기술된 HPLC 방법에 기준하여 선택되었다. 상기 방법에 대한 주요 변경은 과염소산 대신 포름산을 사용하였다. 샘플은 UV 다이오드 어레이 및 양이온 모드 MS에 의한 전기분무(electrospray)를 이용하여 분석되었다.

X-선 분말 회절 ( XRD )

X-선 분말 회절 패턴은 XYZ 스테이지, 위치제어를 위한 레이져 비디오 현미경, 및 2차원 하이스타(Histar) 면적 검출기가 설치된 부루커 D8 디스커버리 회절계 (Bruker D8 Discovery diffractometer)를 이용하여 얻었다. 수집 시간은 보통 60초이였다. 40kV 및 40mA에서 작동되는 Cu Kα 방사선(Cu Kα radiation) 1.5406 옹스트롬 소스(source)가 샘플에 방사선을 조사하기 위하여 사용되었다. X-선 광학은 0.5mm의 바늘구멍 조준기(pinhole collimator)와 연결된 고벨 (Gobel) 거울을 포함한다. 세타-세타 연속스캔이 15cm길이의 샘플-검출기로 수행되었고, 4-40°범위의 유효 2θ 제공한다. 샘플은 낮은 백그라운드의 석영판에 고정시켰다. 가변 온도형 핫 스테이지 몇몇 실험에서 샘플 온도를 조정하기 위하여 사용되었다.

상기에서는 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만, 해당 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 하기의 특허 청구의 범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.

Claims

결정성 발로마시클로비르 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제 1 항에 있어서,
X-선 분말 회절도(powder diffractogram)에서 22.9°+/- 0.2°, 18.6°+/- 0.2°, 19.5°+/- 0.2°, 24.3°+/- 0.2°, 20.8°+/- 0.2°, 21.8°+/- 0.2°, 27.0°+/- 0.2°, 14.7°+/- 0.2°, 15.5°+/- 0.2°, 25.5°+/- 0.2°, 및 29.9°+/- 0.2°에서 특징적 흡수 피크를 가지는 결정성 발로마시클로비르.
결정성 발로마시클로비르 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 약학적으로 허용 가능한 부형제 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물.
제 3 항에 있어서,
상기 결정성 발로마시클로비르는 X-선 분말 회절도에서 22.9°+/- 0.2°, 18.6°+/- 0.2°, 19.5°+/- 0.2°, 24.3°+/- 0.2°, 20.8°+/- 0.2°, 21.8°+/- 0.2°, 27.0°+/- 0.2°, 14.7°+/- 0.2°, 15.5°+/- 0.2°, 25.5°+/- 0.2°, 및 29.9°+/- 0.2°에서 특징적 흡수 피크를 가지는 약학적 조성물.
제 1 항 또는 2 항에 있어서,
상기 결정성 발로마시클로비르는 적어도 90%의 순도인 결정성 발로마시클로비르.
제 1 항 또는 2 항에 있어서,
상기 결정성 발로마시클로비르는 적어도 95%의 순도인 결정성 발로마시클로비르.
제 1 항 또는 2 항에 있어서,
상기 결정성 발로마시클로비르는 적어도 99%의 순도인 결정성 발로마시클로비르.
다음의 단계를 포함하는 결정성 발로마시클로비르의 제조방법:
발로마시클로비르를 적절한 내부온도로 가열하여 저급 알카놀 용매 또는 저급 알카놀의 혼합 용액에 용해하는 단계;
상기 용액을 발로마시클로비르의 상당한 결정화를 위하여 교반하면서 냉각하는 단계; 및
상기 결정성 발로마시클로비르를 수집하는 단계.
제 8 항에 있어서,
상기 저급 알카놀 용매는 에탄올인 결정성 발로마시클로비르의 제조방법.
제 8 항에 있어서,
상기 저급 알카놀의 혼합 용액은 95:5 (v/v) 에탄올/2-프로판올의 혼합물인 결정성 발로마시클로비르의 제조방법.
제 8 항에 있어서,
상기 내부온도는 약 65℃ 내지 약 74 ℃의 범위인 결정성 발로마시클로비르의 제조방법.
제 11 항에 있어서,
상기 내부온도는 약 68 ℃ 내지 약 72 ℃의 범위인 결정성 발로마시클로비르의 제조방법.
제 8 항에 있어서,
상기 냉각은 1시간 당 약 5℃ 내지 약 15 ℃의 속도인 결정성 발로마시클로비르의 제조방법.
제 13 항에 있어서,
상기 냉각은 1시간 당 약 8℃ 내지 약 12 ℃의 속도인 결정성 발로마시클로비르의 제조방법.
필요로 하는 대상에 치료적 유효량의 제 1 항의 결정성 화합물 또는 제 3 항의 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 대상의 바이러스 감염의 치료 또는 예방 방법.
제 15 항에 있어서,
상기 바이러스 감염은 수두 대상포진(varicella zoster) 바이러스 감염인 방법.
제 15 항에 있어서,
상기 바이러스 감염은 단순 헤르페스(herpes simplex) 바이러스 감염인 방법.
제 15 항에 있어서,
상기 바이러스 감염은 인간 헤르페스 바이러스 감염인 방법.
제 15 항에 있어서,
상기 바이러스 감염은 엡스타인-바(Epstein Barr) 바이러스 감염인 방법.
제 15 항에 있어서,
상기 바이러스 감염은 시토메갈로(cytomegalovirus) 바이러스 감염인 방법.
제 15 항에 있어서,
상기 바이러스 감염은 HIV 감염인 방법.