KR20100031716A - 마크로락톤 유도체 - Google Patents

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KR20100031716A
KR20100031716A KR1020107000032A KR20107000032A KR20100031716A KR 20100031716 A KR20100031716 A KR 20100031716A KR 1020107000032 A KR1020107000032 A KR 1020107000032A KR 20107000032 A KR20107000032 A KR 20107000032A KR 20100031716 A KR20100031716 A KR 20100031716A
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사노피-아벤티스
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Abstract

본 발명은 미생물 ST 201196(DSM 18870)에 의해 형성되는 화학식 I의 화합물 또는 이의 생리학적으로 허용되는 염, 진균성 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 이의 용도, 화학식 I의 화합물을 함유하는 약제, 이의 제조 방법 및 미생물 ST 201196(DSM 18870)에 관한 것이다.
[화학식 I]
Figure pct00020

상기 화학식 I에서,
X 및 Y는 서로 독립적으로, OH, O-(C1-C6)-알킬, NH2 또는 NH-(C1-C6)-알킬이거나, X 및 Y는 함께 그룹 -O-를 형성하고,
R1 및 R2는 서로 독립적으로, Cl 또는 H이며,
R3은 H, (C1-C6)-알킬, C(=O)-(C1-C6)-알킬 또는 (C1-C6)-알킬렌-NH-(C1-C6)-알킬이고,
R4는 H, (C1-C6)-알킬 또는 C(=O)-(C1-C6)-알킬이다.

Description

마크로락톤 유도체{Macrolactone derivatives}
본 발명은 신규 마크로락톤, 및 이의 제조 방법과 용도에 관한 것이다. 미생물 균주 ST 201196(DSM 18870)은 진균 칸디다 알비칸스(Candida albicans)에 대해 강력히 항진균 활성을 갖는 신규 마크로사이클(macrocycle)을 형성할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 상기 화합물은 국소 및/또는 전신 진균성 장애의 치료에 적합하다.
다수의 항감염제가 감염성 질환의 치료시 치료학적으로 사용된다. 그러나, 병원성 유기체는 사용된 약제에 대해 점차 내성이 생겨가고, 하나에 대해서뿐만 아니라, 동시에 여러 개의 항감염성 그룹에 대해 내성을 갖는, "다중 내성 미생물"로 인하여 심지어 상당한 위험에 직면하게 된다. 심지어 시판중인 모든 항감염제에 대해 내성이 된 병원성 유기체가 존재한다. 이러한 형태의 미생물에 의해 유발되는 감염성 질환은 더 이상 치료할 수 없다. 따라서, 내성 미생물에 대해 사용될 수 있는 신규 제제에 대한 상당한 요구가 존재한다. 수천의 항감염제가 문헌에 기술되어 있음에도 불구하고, 대부분은 너무 독성이어서 약제로서 사용할 수 없다.
본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 화학식 I의 화합물의 생리학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.
[화학식 I]
Figure pct00001
상기 화학식 I에서,
X 및 Y는 서로 독립적으로, OH, O-(C1-C6)-알킬, NH2 또는 NH-(C1-C6)-알킬이거나, X 및 Y는 함께 그룹 -O-를 형성하고,
R1 및 R2는 서로 독립적으로, Cl 또는 H이며,
R3은 H, (C1-C6)-알킬, C(=O)-(C1-C6)-알킬 또는 (C1-C6)-알킬렌-NH-(C1-C6)-알킬이고,
R4는 H, (C1-C6)-알킬 또는 C(=O)-(C1-C6)-알킬이다.
바람직하게는, 본 발명은 X 및 Y가 함께 그룹 -O-를 형성하고, 결과적으로 상응하는 바람직한 화합물 중 X 및 Y가 이들이 결합된 C 원자와 함께, 에폭시드 그룹을 형성하는, 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.
보다 바람직하게는, 본 발명은 R1 및 R2가 Cl인, 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.
보다 바람직하게는, 본 발명은 R1이 Cl이고, R2는 H인, 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.
R3 및 R4는 바람직하게는, 서로 독립적으로, H, (C1-C6)-알킬 또는 C(=O)-(C1-C6)-알킬, 특히 바람직하게는 R3 및 R4가 모두 H이다. 특히 바람직하게는, 본 발명은 X 및 Y가 함께 그룹 -O-를 형성하고, R1 및 R2는 서로 독립적으로, Cl 또는 H이며, R3 및 R4는 서로 독립적으로, H, (C1-C6)-알킬 또는 C(=O)-(C1-C6)-알킬인 화학식 I의 화합물,
더욱이, X 및 Y가 함께 그룹 -O-를 형성하고, R1 및 R2는 Cl이며, R3 및 R4는 서로 독립적으로, H, (C1-C6)-알킬 또는 C(=O)-(C1-C6)-알킬인 화학식 I의 화합물,
더욱이, X 및 Y가 함께 그룹 -O-를 형성하고, R1은 Cl이며, R2는 H이고, R3 및 R4는 서로 독립적으로, H, (C1-C6)-알킬 또는 C(=O)-(C1-C6)-알킬인 화학식 I의 화합물,
더욱이 X 및 Y가 함께 그룹 -O-를 형성하고, R3 및 R4는 H이며, 이때 R1 및 R2는 서로 독립적으로, Cl 또는 H이며, 바람직하게는 R1 및 R2는 Cl(화학식 II의 화합물로서 또한 표시됨)이거나, 보다 바람직하게는 R1는 Cl이고, R2는 H(화학식 III의 화합물로서 또한 표시됨)이거나, 보다 바람직하게는 R1 및 R2는 H인 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.
[화학식 II]
Figure pct00002
[화학식 III]
Figure pct00003
(C1-C6)-알킬은 탄소수가 1 내지 6인 직쇄 또는 측쇄형의 알킬 그룹, 예를 들면, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 2급 부틸, 3급 부틸, n-펜틸 또는 n-헥실이다.
화학식 I의 화합물에서 키랄 중심은 달리 언급되지 않는 한, R 또는 S 배위로 존재할 수 있다. 본 발명은 광학적으로 순수한 화합물 및 에난티오머 혼합물과 디아스테레오머 혼합물과 같은 입체이성체 혼합물에 관한 것이다.
화학식 I의 화합물의 생리학적으로 허용되는 염은 문헌(참조: Remington's Pharmaceutical Science (17th edition, page 1418 (1985))에 기술된 바와 같이, 이들의 유기 및 무기 염을 모두 의미하는 것으로 이해한다. 물리적 및 화학적 안정성과 용해도를 고려하여, 특히 나트륨, 칼륨, 칼슘 및 암모늄 염이 산성 그룹에 대해 바람직하다; 염산, 황산, 인산 또는 카복실산이나 설폰산, 예를 들면, 아세트산, 시트르산, 벤조산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산 및 p-톨루엔설폰산의 염이 특히 염기성 그룹에 대해 바람직하다.
더욱이, 본 발명은 본 발명에 따르는 화학식 I의 화합물의 모든 명백한 화학적 등가물에 관한 것이다. 이러한 형태의 등가물은 다소 화학적 차이를 나타내는 화합물이므로, 동일한 작용을 갖거나, 온화한 조건하에 본 발명에 따르는 화합물로 전환된다. 언급된 등가물은 또한, 예를 들면, 화학식 I의 화합물의 염, 환원 생성물, 산화 생성물, 에스테르, 에테르, 아세탈 또는 아미드 및 당해 분야의 전문가가 표준 방법을 사용하여 제조할 수 있는 등가물을 포함한다.
더욱이, 본 발명은,
1. 하나 이상의 화학식 I의 화합물이 배지에 축적될 때까지, Cl 공급원을 함유하는 배양 배지에서 적절한 조건하에 균주 ST 201196(DSM 18870) 또는 이의 변이체 및/또는 돌연변이체 중 하나를 발효시키고,
2. 배양 배지로부터 화학식 I의 화합물을 분리하고,
3. 임의로, 화학식 I의 화합물을 유도체화시키고/시키거나, 이를 생리학적으로 허용되는 염으로 전환시킴을 포함하는, 화학식 I의 화합물 또는 화학식 I의 화합물의 생리학적으로 허용되는 염의 제조 방법에 관한 것이다.
[화학식 I]
Figure pct00004
배양 배지는 하나 이상의 탄소 및 질소 공급원, 및 통상적인 무기 염을 함유하는 영양액 또는 고체 배지이다.
사용되는 Cl 공급원은, 예를 들면, NaCl 또는 CaCl2일 수 있다. 이 경우에, 균주 ST 201196(DSM 18870)은 바람직하게는 라디칼 R1 및 R2가 모두 Cl이거나, R1이 Cl이고, R2는 H인 화학식 I의 화합물을 생성한다. 바람직하게는, 본 발명은 R1 및 R2가 Cl인 화학식 I의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 더욱이, 본 발명은 바람직하게는 R1이 H이고, R2는 Cl인 화학식 I의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
바람직하게는, 본 발명은 X 및 Y가 그룹 -O-를 형성하고, 더욱이 R3 및 R4는 상기 기술한 바와 같거나, 바람직하게는 H인, 화학식 I의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
특히 바람직하게는, 본 발명은 화학식 II의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 보다 특히 바람직하게는, 본 발명은 화학식 III의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 더욱이, 본 발명은 특히 바람직하게는 R1, R2, R3 및 R4가 H인, 화학식 I의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르는 공정은 실험실용 규모(㎖ 내지 ℓ 규모)로 발효를 위해 및 공업용 규모(㎥ 규모)를 위해 사용될 수 있다.
발효를 위한 적절한 탄소 공급원은 탄수화물과 당 알콜(예: 글루코즈, 락토즈, 수크로즈 또는 D-만니톨) 및 탄수화물-함유 천연 생성물(예: 맥아 추출물 또는 효모 추출물)을 동화한다. 적절한 질소-함유 영양소는 다음과 같다: 아미노산; 펩티드 및 단백질과 이들의 분해 생성물, 예를 들면, Probion F(참조: Applied Microbiology and Biotechnology 1984, 19(1), 23-28), 카제인, 펩톤 또는 트립톤; 육즙; 효모 추출물; 글루텐; 그라운드 씨드(ground seed)(예: 옥수수, 밀, 콩, 대두 또는 목화 식물); 알콜 제조시 증류 잔사; 육분(meat meal); 효모 추출물; 암모늄 염; 질산염. 바람직하게는, 질소 공급원은 하나 이상의 합성적 또는 생합성적으로 수득되는 펩티드이다. 무기염은, 예를 들면, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속, 철, 아연, 코발트 및 망간의 클로라이드, 카보네이트, 설페이트 또는 포스페이트이다. 미량 원소는, 예를 들면, 코발트 및 망간이다.
본 발명에 따르는 물질의 형성을 위해 적합한 조건은 다음과 같다: 본 발명에 따르는 물질의 형성은 바람직하게는 0.05 내지 5%, 바람직하게는 0.1 내지 2.5%의 Probion F; 0.02 내지 1.0%, 바람직하게는 0.05 내지 0.5%의 CaCl2 x 2H2O; 0.02 내지 1.5%, 바람직하게는 0.05 내지 0.7%의 MgSO4 x 7H2O, 및 0.00001 내지 0.001%의 시아노코발라민, 1 내지 5%의 흡착기 수지 XAD-16, 또는 0.05 내지 5%, 바람직하게는 0.1 내지 2.5%의 귀리; 0.2 내지 5.0%, 바람직하게는 0.1 내지 2%의 글리세롤; 0.02 내지 1.0%, 바람직하게는 0.05 내지 0.5%의 CaCl2; 0.02 내지 1.5%, 바람직하게는 0.05 내지 0.7%의 MgSO4 x 7H2O 및 0.00001 내지 0.001%의 시아노코발라민을 함유하는 배양 배지에서 진행한다. 데이터(%)는 각 경우에 전체 영양액의 중량을 기준으로 한다.
미생물의 배양은 호기적으로, 즉, 예를 들면, 교반기 플라스크 또는 발효기에서 흔들거나 교반하에 침지 형태로 또는 임의로 공기 또는 산소의 도입과 함께 고체 배지에서 수행한다. 대략 18 내지 35 ℃, 바람직하게는 대략 20 내지 32 ℃, 특히 27 내지 30 ℃의 온도 범위에서 수행할 수 있다. pH 범위는 4 내지 10, 바람직하게는 6.5 내지 9여야 한다. 미생물은 일반적으로 이들 조건하에서 3 내지 18일, 바람직하게는 144 내지 216시간 동안 배양한다. 유용하게, 배양은 수많은 단계로 수행한다, 즉 먼저 하나 이상의 예비배양물을 액체 배양 배지에서 제조한 다음, 실제 제조 배지로, 예를 들면, 1:10 내지 1:100의 용적비로 주요 배양액을 접종한다. 예비배양물은, 예를 들면, 영양 세포 또는 자실체의 형태인 균주를 영양액에 접종하고, 이를 대략 3 내지 13일, 바람직하게는 96 내지 240시간 동안 성장시킴으로써 수득한다. 영양 세포 및/또는 자실체는, 예를 들면, 균주를 대략 3 내지 15일, 바람직하게는 7 내지 10일 동안 고체 또는 액체 배양 배지(예: 효모 한천)에서 성장시킴으로써 수득할 수 있다.
배지로부터 화학식 I의 물질의 분리 또는 정제는 천연 물질의 화학적, 물리적 및 생물학적 특성을 고려하면서, 공지된 방법에 따라 수행한다. HPLC는 배지 또는 개별적인 분리 단계에서 각각의 유도체의 농도를 시험하기 위하여 사용한다.
분리를 위해, 배양 브로쓰(culture broth)를 원심분리하고/하거나, 흡인 필터를 통해 여과한다. 균사체는 XAD에 의해 동결건조시키고, 이어서 천연 물질을 유기 용매(예: 메탄올 또는 2-프로판올)를 사용하여 동결건조물로부터 추출한다. 유기 용매상은 본 발명에 따르는 천연 물질을 함유하며; 이는 임의로 진공하에 농축시켜, 다시 정제한다.
본 발명에 따르는 하나 이상의 화합물의 추가의 정제는 적절한 물질, 바람직하게는, 예를 들면, 분자체 상에서, 실리카 겔, 알루미나 상에서, 이온 교환기 상에서 또는 흡착기 수지 상에서 또는 역상(RP)으로 크로마토그래피하여 수행한다. 이러한 크로마토그래피의 사용에 의해, 천연 물질 유도체가 분리된다. 본 발명에 따르는 화합물의 크로마토그래피는 완충 수용액 또는 수성과 유기 용액의 혼합물을 사용하여 수행한다.
수성 또는 유기 용액의 혼합물은 0 내지 100% 농도의 용매 또는 유기 용매와 혼화성인 모든 완충 수용액에서, 물, 바람직하게는 메탄올, 2-프로판올 및 아세토니트릴과 혼화성인 모든 유기 용매를 의미하는 것으로 이해된다. 사용되는 완충액은 상기 제시된 것과 동일하다.
이들의 상이한 극성을 근거로 하는 본 발명에 따르는 화합물의 분리는, 예를 들면, MCI®(흡착기 수지, Mitsubishi, Japan) 또는 Amberlite XAD®(TOSOHAAS) 상에서 또는 다른 소수성 물질, 예를 들면, RP-8 또는 RP-18 상에서 역상 크로마토그래피에 의해 수행한다. 더욱이, 분리는, 예를 들면, 실리카 겔, 알루미나 등에서 정상상(normal phase) 크로마토그래피에 의해 수행한다.
천연 물질 유도체의 크로마토그래피는 바람직하게는 완충, 염기성 또는 산성 수용액 또는 수용액과 알콜이나 다른 수혼화성 유기 용매의 혼합물을 사용하여 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법에 따라 수행한다. 아세토니트릴 및/또는 메탄올이 유기 용매로서 바람직하게 사용된다.
완충, 염기성 또는 산성 수용액은, 예를 들면, 0.5M 이하의 농도인 물, 인산염 완충액, 암모늄 아세테이트, 암모늄 포르메이트, 시트레이트 완충액, 및 바람직하게는 1% 이하의 농도인 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 암모니아, 트리에틸아민 또는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 모든 시판중인 산과 염기를 의미하는 것으로 이해한다. 완충 수용액의 경우에, 0.1% 암모늄 아세테이트가 특히 바람직하다.
크로마토그래피는, 예를 들면, 100% 물로 시작하여, 100% 용매로 끝나는 구배를 사용하여 수행하며; 5 내지 95% 아세토니트릴의 선형 구배가 바람직하게 작동된다.
또한, 겔 크로마토그래피 또는 소수성 상 위의 크로마토그래피를 또한 수행할 수 있다. 겔 크로마토그래피는 폴리아크릴아미드 또는 혼합 중합체 겔, 예를 들면, Biogel-P 2®(Biorad) 또는 Fractogel TSK HW 40®)(Merck, Germany) 상에서 수행한다. 상기 언급한 크로마토그래피의 순서는 가역적이다.
화학식 I의 화합물이 입체이성체 혼합물로서 존재하는 경우에, 입체이성체는 공지된 방법에 의해, 예를 들면, 키랄 칼럼에 의한 분리에 의해 분리할 수 있다.
화학식 I의 화합물의 3,5-디클로로티로신 아미노산의 OH 그룹[R3은 H이다]의 아실 그룹[R3은 C(=O)-(C1-C6)-알킬이다]으로 및/또는 화학식 I의 화합물의 3-하이드록시발린 아미노산의 OH 그룹[R4는 H이다]의 아실 그룹[R4는 C(=O)-(C1-C6)-알킬이다]으로의 유도체화는 자체가 공지된 방법(참조: J. March, Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 4th Edition, 1992)에 의해, 예를 들면, 염기의 존재하에 산 클로라이드와 또는 산 무수물과 반응시켜 수행한다.
화학식 I의 화합물의 3,5-디클로로티로신 아미노산의 OH 그룹[R3은 H이다]의 알킬 그룹[R3은 (C1-C6)-알킬이다]으로 및/또는 화학식 I의 화합물의 3-하이드록시발린 아미노산의 OH 그룹[R4는 H이다]의 알킬 그룹[R4는 (C1-C6)-알킬이다]으로의 알킬화는 당해 분야의 숙련가에게 자체가 공지된 방법(참조: J. March, Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 4th Edition, 1992)에 의해, 예를 들면, 염기의 존재하에 (C1-C6)-알킬 브로마이드와의 반응에 의해 또는 메틸화의 경우에, 요오드화메틸 또는 Me2SO4과의 반응에 의해 수행한다.
페놀성 OH 그룹(R3=H)과 지방족 OH 그룹(R4=H) 사이의 선택적 미분화는 보호 그룹의 도입을 위해 당해 분야의 숙련가에게 자체가 공지된 방법(참조: T. W. Greene, P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 3rd Edition, 1999)에 의해 수행한다. 예를 들면, 페투스(Pettus) 등(참조: J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 6160-6168)은 아세톤 중 K2CO3의 존재하에 (C1-C6)-알킬 브로마이드와의 반응에 의해 또는 DBU 중 (CF3CO)2O 및 CuCl2 수화물의 존재하에 (C1-C6)-알킬-OH와의 반응에 의해 3급 지방족 알콜의 존재하에 페놀성 OH 그룹의 선택적 알킬화를 기술하고 있다. 페놀성 OH 그룹과 지방족 OH 그룹 사이의 미분화를 위한 다른 가능성은 비스-알킬화[R3 및 R4는 (C1-C6)-알킬이다]되거나 비스-아실화[R3 및 R4는 C(=O)-(C1-C6)-알킬이다]된 화학식 I의 화합물의 선택적 탈보호에 대해 당해 분야의 숙련가에게 자체가 공지된 방법에 의해 수행한다(참조: T. W. Greene, P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 3rd Edition, 1999)에 의해 수행한다. 예를 들면, 존스(Jones) 등(참조: J. Org. Chem. 2001, 66, 3688-3695)은 -20 ℃에서 3급 부틸암모늄 플루오라이드(TBAF)에 의한 TBS-보호된 3급 알콜의 존재하에 3급 부틸실릴(TBS)-보호된 페놀의 선택적 탈보호를 기술하고 있다. 더욱이, 페놀성 OH 그룹(R3=H)은 Cl-[(C1-C6)-알킬]-Cl 또는 Br-[(C1-C6)-알킬]-Br의 존재하에 H2N-(C1-C6)-알킬과의 반응에 의해 그룹 -(C1-C6)-알킬렌-NH-(C1-C6)-알킬로 유도체화될 수 있다.
X 및 Y가 -O-를 형성하는 화학식 I의 화합물의 X 및 Y가 서로 독립적으로, OH, O-(C1-C6)-알킬, NH2 또는 NH-(C1-C6)-알킬인 화학식 I의 화합물로의 유도체화는, 예를 들면, 에폭시드 그룹과 (C1-C6)-알콜레이트[Y가 O-(C1-C6)-알킬인 경우에 X는 OH이거나, X가 O-(C1-C6)-알킬인 경우에 Y는 OH이다], NH3[Y가 NH2인 경우에 X가 OH이거나, X가 NH2인 경우에 Y는 OH이다] 또는 H2N-(C1-C6)-알킬[Y가 NH-(C1-C6)-알킬인 경우에 X는 OH이거나, X가 NH-(C1-C6)-알킬인 경우에 Y는 OH이다]과의 반응에 의해 당해 분야의 숙련가에게 자체가 공지된 방법(참조: J. March, Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 4th Edition, 1992)에 의해 수행한다.
미생물 균주 ST 201196의 분리주는 하기의 번호로 2003년 11월 9일자로 부다페스트 조약의 규약에 따라, 도이췌 삼룽 폰 미크로오르가니즈멘 운트 젤쿨투렌(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen; German Collection of Microorganisms and Cell Cultures) 게엠베하(GmbH)(DSMZ)(Mascheroder Weg 1B, 38124 Brunswick, Germany)에 기탁되었다. 하기의 번호는 수탁번호로 지정되었다: DSM 18870.
균주 ST 201196(DSM 18870)의 영양 세포는 독특한 막대 형태를 갖는다. 고형 영양 배지에서, ST 201196(DSM 18870)는 오렌지-황색 자실체를 형성하며, 이는 둥근 점질 홀씨를 함유한다. 따라서, 균주 ST 201196의 분류법은 믹소박테리움 종(Myxobacterium sp.)으로서 기술될 수 있다.
균주 ST 201196(DSM 18870) 대신에, 본 발명에 따르는 하나 이상의 화합물을 합성하는 이의 돌연변이체 및/또는 변이체를 또한 사용할 수 있다.
돌연변이체는 게놈의 하나 이상의 유전자가 변형된 미생물로, 이때 본 화합물을 제조하기 위한 유기체의 능력을 담당하는 유전자 또는 유전자들은 기능적이고 유전될 수 있게 남는다.
이러한 형태의 돌연변이체는 물리적 방법에 의해, 예를 들면, 조사(예: 자외선 또는 X-선 빔을 사용함)나, 화학적 돌연변이 유발원(예: 에틸 메탄설포네이트(EMS); 2-하이드록시-4-메톡시벤조페논(MOB) 또는 N-메틸-N'-니트로-N-니트로소구아니딘(MNNG)), 또는 문헌(Brock et al., "Biology of Microorganisms", Prentice Hall, page 238-247 (1984))에 기술된 바와 같이 자체가 공지된 방법으로 제조할 수 있다.
변이체는 미생물의 표현형이다. 미생물은 이들의 환경에 적응하는 능력을 가지므로, 두드러진 생리학적 융통성을 나타낸다. 표현형 적응의 경우에, 미생물의 모든 세포가 관여되며, 이때 변형의 특성은 유전적으로 조절되지 않고, 변형된 조건하에 가역적이다(참조: H. Stolp, Microbial ecology: organismus, habitats, activities. Cambridge University Press, Cambridge, GB, page 180, 1988).
본 발명에 따르는 하나 이상의 화합물을 합성하는 돌연변이체 및/또는 변이체에 대한 스크리닝(screening)은 다음 방법에 따라 수행한다:
- 발효 배지의 동결건조
- 유기 용매에 의한 동결건조물의 추출
- 고체 상을 사용한 배양 여액으로부터 화합물의 추출
- HPLC, TLC에 의해 또는 생물학적 활성의 시험에 의해 분석.
기술된 발효 조건은 ST 201196(DSM 18870) 및 이의 돌연변이체 및/또는 변이체에 대해 적용한다.
신속히 성장하는, 호기성 병원성 유기체의 항진균 활성의 검출을 위해, CLSI(Clinical and Laboratory Standards Institute, M7-A7, Vol. 26, No. 2)의 방법에 따르는 부용 희석법(bouillon dilution method)(microdilution)이 사용된다. IC50 값을 측정한다. 이는 시험 유기체 칸디다 알비칸스(Candida albicans)의 성장을 50%만큼 억제하기 위하여 필요한 활성 물질의 농도이다.
화학식 II의 화합물은 IC50 값이 칸디다 알비칸스에 대해 0.06 ㎍/㎖이다. 화학식 IV의 화합물은 IC50 값이 칸디다 알비칸스에 대해 0.41 ㎍/㎖이다.
더욱이, 본 발명은 특히 진균성 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 사람 또는 수의학적 의약품에서 약제로서의, 화학식 I의 화합물 또는 이의 생리학적으로 허용되는 염의 용도에 관한 것이다. 바람직하게는, 본 발명은 국소 및/또는 전신성 진균 장애의 치료를 위한 화학식 I의 화합물 또는 이의 생리학적으로 허용되는 염의 용도에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 하나 이상의 화학식 I의 화합물을 함유하는 약제에 관한 것으로, 이때 화학식 I의 화합물 또는 화합물들은 물질 자체로 또는 바람직하게는 하나 이상의 통상적인 약물학적으로 적합한 비히클 또는 부형제와의 혼합물로서 투여될 수 있다.
본 발명에 따르는 화합물은 2 내지 9, 특히 5 내지 7의 pH 범위에서 고체 상태 및 용액으로 안정하므로, 통상적인 추출 제제로 혼입할 수 있다.
본 발명에 따르는 약제는 경구 또는 비경구로 투여될 수 있지만, 대체로 직장 투여가 또한 가능하다. 적절한 고체 또는 액체 추출 제제 형태는, 예를 들면, 과립, 분말, 정제, 제피정제, (마이크로)캅셀제, 좌제, 시럽, 에멀젼, 현탁제, 에어로졸, 드롭제 또는 앰풀 형태인 주사용 액제와, 활성 물질의 연장된 방출을 갖는 제제이며, 이의 제제에 붕해제, 결합제, 피복제, 팽윤제, 활택제 또는 윤활제, 향미 부가제, 감미료 또는 가용화제, 예를 들면, 탄산마그네슘, 이산화티탄, 락토즈, 만니톨 및 다른 당, 탈크, 우유 단백질, 젤라틴, 전분, 비타민, 셀룰로즈 및 이의 유도체, 동물성 또는 식물성 오일, 폴리에틸렌 글리콜 및 용매(예: 멸균수, 알콜, 글리세롤 및 다가 알콜)와 같은 약물학적으로 적합한 비히클 또는 부형제가 통상 사용된다.
임의로, 경구 투여용 용량 단위는, 예를 들면, 적절한 중합체 또는 왁스 등에 입자 형태로 활성 물질을 피복 또는 혼입시켜 서방출을 위하여 또는 보다 장기간으로 이를 연장하기 위하여 마이크로캅셀화시킬 수 있다.
바람직하게는, 약제학적 제제는 용량 단위로 제조하여 투여하며, 이때 각각의 단위는 활성 성분으로서 특정량의 본 발명에 따르는 천연 물질 유도체 중 하나 이상의 화합물을 함유한다. 고체 용량 단위(예: 정제, 캅셀제 및 좌제)의 경우에, 이 용량은 하루에 대략 500 ㎎ 이하이지만, 바람직하게는 대략 0.1 내지 200 ㎎이고, 앰풀 형태인 주사 용액의 경우에는, 대략 200 ㎎ 이하이지만, 바람직하게는 대략 0.5 내지 100 ㎎일 수 있다.
투여할 하루 용량은 포유동물의 체중, 연령, 성별 및 상태에 따라 좌우된다. 그러나, 특정 상황하에서, 보다 높거나 보다 낮은 하루 용량이 또한 적합할 수 있다. 하루 용량의 투여는 개별 용량 단위 형태로 또는 많은 보다 작은 용량 단위로 단일 투여하고, 특정 간격으로 세분화된 용량의 다회 투여에 의해 수행할 수 있다.
본 발명에 따르는 약제는 본 발명에 따르는 하나 이상의 화학식 I의 화합물과 하나 이상의 통상적인 비히클 또는 부형제를 임의로 혼합하고, 적절한 투여 형태로 만듦으로써 제조한다.
하기의 실시예는 어떠한 방법으로든 본 발명의 범위를 제한하지 않고, 본 발명의 보다 상세한 설명을 위해 이용되고자 한다.
%는 중량에 관한 것이다. 액체의 경우 혼합비는 다른 사항이 제시되지 않는다면, 용적에 관한 것이다.
실시예 1: -135 ℃에서 ST 201196( DSM 18870)의 저장
한천 플레이트(1% 신선한 빵 효모: 1% CaCl2 x 2H2O; 0.477% HEPES(20 mM); 0.00005% 시아노코발라민; 1.8% 한천; pH 7.2)를 균주 ST 201196(DSM 18870)으로 접종시키고, 30 ℃에서 약 7 내지 10일 동안 항온배양한다. 이 표면 배양의 세포는 멸균 스패튤라를 사용하여 한천 표면으로부터 긁어모으고, 크리오튜브에서 카시톤 배지(Casitone medium)(1% Casitone(Difco); 0.15% MgSO4 x 7H2O; pH 7.0) 1 ㎖에 현탁시켜, -135 ℃에서 저장한다.
실시예 2: -196 ℃에서 ST 201196( DSM 18870)의 저장
한천 플레이트(1% 신선한 빵 효모: 1% CaCl2 x 2H2O; 0.477% HEPES(20 mM); 0.00005% 시아노코발라민; 1.8% 한천; pH 7.2)를 균주 ST 201196(DSM 18870)으로 접종시키고, 30 ℃에서 약 7 내지 10일 동안 항온배양한다. 이 표면 배양의 세포는 멸균 스패튤라를 사용하여 한천 표면으로부터 긁어모으고, 크리오튜브에서 카시톤 배지(1% Casitone(Difco); 0.15% MgSO4 x 7H2O; pH 7.0) 1 ㎖에 현탁시켜, -196 ℃에서 저장한다.
실시예 3: 에를렌마이어 플라스크에서 ST 201196( DSM 18870)의 예비배양물의 제조
300 ㎖ 멸균 에를렌마이어 플라스크 중 영양액(1% 신선한 빵 효모: 1% CaCl2 x 2H2O; 0.477% HEPES(20 mM); 0.00005% 시아노코발라민; 1.8% 한천; pH 7.2) 100 ㎖를 균주 ST 201196(DSM 18870)으로 접종시키고, 회전식 진탕기에서 30 ℃ 및 180 rpm으로 7일 동안 항온배양한다. 이어서, 각 경우에 이 예비배양물 10 ㎖(10%)를 주 배양물의 제조시 사용한다.
실시예 4: 배지 1을 사용한 액체 주 배양물 ST 201196( DSM 18870)의 제조
다음의 영양액(1% Probion F: 0.1% CaCl2 x 2H2O; 0.2% MgSO4 x 7H2O; 0.00005% 시아노코발라민; 2% 흡착기 수지 XAD-16, pH 8.4) 100 ㎖를 함유하는 300 ㎖ 멸균 에를렌마이어 플라스크를 예비배양물(참조: 실시예 3) 또는 신선한 한천 플레이트(1% 신선한 빵 효모: 1% CaCl2 x 2H2O; 0.477% HEPES(20 mM); 0.00005% 시아노코발라민; 1.8% 한천; pH 7.2) 상에서 세척한 배양물 10 ㎖(10%)로 접종시키고, 30 ℃ 및 180 rpm으로 진탕기에서 항온배양한다. 본 발명에 따르는 물질의 최대 생산은 144 내지 216시간 후에 도달한다. 실시예 3에 기술된 것과 동일한 배양액의 144-196시간 경과된-침지 배양물(접종물 10%)은 10 내지 200 ℓ 발효기의 접종을 위해 충분하다.
실시예 5: 배지 2를 사용한 액체 주 배양물 ST 201196( DSM 18870)의 제조
다음의 영양액(1% 귀리: 0.5% 글리세롤; 0.1% CaCl2 x 2H2O; 0.2% MgSO4 x 7H2O; 0.00005% 시아노코발라민; 2% 흡착기 수지 XAD-16, pH 9.0) 100 ㎖를 함유하는 300 ㎖ 멸균 에를렌마이어 플라스크를 예비배양물(참조: 실시예 3) 또는 신선한 한천 플레이트(1% 신선한 빵 효모: 1% CaCl2 x 2H2O; 0.477% HEPES(20 mM); 0.00005% 시아노코발라민; 1.8% 한천; pH 7.2) 상에서 성장시킨 배양물 10 ㎖(10%)로 접종시키고, 30 ℃ 및 180 rpm으로 진탕기에서 항온배양한다. 본 발명에 따르는 물질의 최대 생산은 144 내지 216시간 후에 도달한다. 실시예 3에 기술된 것과 동일한 배양액의 144-196시간 경과된-침지 배양물(접종물 10%)은 10 내지 200 ℓ 발효기의 접종을 위해 충분하다.
실시예 6: 발효기에서 본 발명에 따르는 물질의 제조
1 내지 50 ℓ 발효기는 다음의 조건하에 작동한다:
접종물: 20%
영양 배지: 1% 귀리: 0.5% 글리세롤; 0.1% 효모 추출물; 0.1% CaCl2 x 2H2O; 0.2% MgSO4 x 7H2O; 0.00005% 시아노코발라민; 2% 흡착기 수지 XAD-16
접종 온도: 30 ℃
교반기 속도: 200 rpm
통기: 0.6 ㎥/h
pH 조절: 없음, KOH에 의해 멸균화 전 pH 7.6 ± 0.3
pO2 조절: 없음
소포체 부가제: 0.05% Desmophen(Bayer)
수행 시간: 155시간
pH 조절은 10% KOH 또는 10% H2SO4를 사용하여 수행한다.
실시예 7: 미생물 균주 ST201196 ( DSM 18870)의 진탕기 배양물로부터 화합물 II 및 III 의 분리
미생물 균주 ST201196(DSM 18870)의 발효 완결 후에, 실시예 4로부터의 배양 브로쓰(배양 브로쓰 60 ℓ)를 여과한다. XAD를 함유하는 생물량을 동결건조시킨 다음, 메탄올(4 x 5 ℓ)로 추출한다. 메탄올 추출물을 진공하에 8 ℓ로 감소시킨 다음, 약 3.0 ℓ의 CHP-20P 물질(MCI® Gel, 75-150 μ, Mitsubishi Chemical Corporation)로 충전된 칼럼을 제조하기 위하여 적용시킨다. 10 내지 95%의 메탄올 구배를 사용하여 용출을 수행한다. 칼럼 유동(120 ㎖/min)은 분획(1 ℓ 분획)으로 수거한다. 분획 11 내지 14를 합하고, 용매는 Rotavapor에서 제거한 다음, 분획 푸울을 동결건조시킨다(수율: 약 0.9 g).
실시예 8: RP -18 크로마토그래피에 의한 화합물 II 및 III 의 예비-분리
실시예 7로부터의 분획 푸울 11 내지 14를 메탄올 100 ㎖에 용해시키고, Luna® 10 μ C18 (2) 예비-칼럼(치수: 60 ㎜ x 21.2 ㎜)을 갖는 Phenomenex Luna® 10 μ C18 (2) 칼럼(치수: 250 ㎜ x 50 ㎜)에 적용시켜, 물 중 5 내지 95% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 40분 동안 용출시킨다(0.1% 암모늄 아세테이트, 아세트산을 사용하여 조절한 pH 4.6). 유동은 190 ㎖/min이고, 분획 크기는 190 ㎖이다. 이어서, 분획 28 내지 29 및 31을 다시 후처리한다.
실시예 9: 화합물 II 의 정제
실시예 8로부터의 분획 31을 먼저 동결건조시킨 다음(수율: 약 98 ㎎), 메탄올 50 ㎖에 용해시키고, XTerra® Prep MS C18 10 ㎛ 예비-칼럼(Waters, 치수: 19 x 10 ㎜)을 갖는 Phenomenex Luna® Axia 5 ㎛ C18 (2) 칼럼(치수: 100 ㎜ x 30 ㎜)상에서 HPLC로 다시 정제한다. 물 중 5 내지 95% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 40분 동안 용출한다(0.1% 암모늄 아세테이트를 부가하면서, 아세트산을 사용하여 조절한 pH 4.6). 칼럼 유동(50 ㎖/min)은 UV에 따라 분획으로 수거한다. 분획 4 내지 14는 화학식 II의 화합물을 함유하며, 동결건조 후, 38 ㎎(순도 > 95%)이 수득된다.
실시예 10: 화학식 I I 의 화합물의 특성
아세토니트릴/물로부터의 무색 고체, 결정
UV: 208, 232, 286 ㎚
ESI-MS: MW = 815.3312
실험식: C42H55Cl2N3O9
특정 회전(MeOH): -0.19°, αD = -38°
[표 1]
Figure pct00005
Figure pct00006

실시예 11: 화합물 III 의 정제
실시예 8로부터의 분획 28 내지 29(380 ㎖)를 XTerra® Prep MS C18 10 ㎛ 예비-칼럼(Waters, 치수: 19 x 10 ㎜)을 갖는 Waters XTerra® 10 ㎛ C18 칼럼(치수: 100 ㎜ x 30 ㎜)상에서 HPLC로 다시 정제한다. 물 중 10 내지 95% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 40분 동안 용출한다(10% 포름산을 부가하면서, pH=2.0). 칼럼 유동(70 ㎖/min)은 UV에 따라 분획으로 수거한다. 분획 45 내지 47은 화학식 III의 화합물을 함유하며, 동결건조 후, 약 5.4 ㎎(순도 > 50%)이 수득된다.
실시예 12: 화합물 III 의 특성
무색 고체
UV: 204, 232, 286 ㎚
ESI-MS: MW = 799.3002
실험식: C42H56ClN3O9
[표 2]
Figure pct00007
Figure pct00008

실시예 13: 화합물 IV 의 합성
화합물 II(80 ㎎, 0.098 mmol)를 아세토니트릴 5 ㎖에 용해시키고, 용액을 실온에서 탄산칼륨(27 ㎎, 0.196 mmol) 및 요오드화메틸(70 ㎎, 0.490 mmol)로 처리한다. 이어서, 혼합물을 50 ℃에서 12시간 동안 교반하다. 용액을 여과하고, XTerra® Prep MS C18 10 ㎛ 예비-칼럼(Waters, 치수: 19 x 10 ㎜)을 갖는 Phenomenex Luna® Axia 5 ㎛ C18 (2) 칼럼(치수: 100 ㎜ x 30 ㎜)상에서 HPLC로 정제한다. 물 중 5 내지 95% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 40분 동안 용출한다(0.1% 암모늄 아세테이트를 부가하면서, pH 4.6, 아세트산을 사용하여 조절). 칼럼 유동(50 ㎖/min)은 UV에 따라 분획으로 수거한다. 분획 4 내지 5는 목적하는 화학식 IV의 화합물을 함유하며, 동결건조 후, 50 ㎎(수율: 61%, 순도 > 95%)이 수득된다.
실시예 14: 화학식 I V 의 화합물의 특성
Figure pct00009
아세토니트릴/물로부터의 무색 고체, 결정
UV: 235, 286 ㎚
MW = 830.85
실험식: C43H57Cl2N3O9
[표 3]
Figure pct00010
Figure pct00011

실시예 15: 화합물 V 및 VI 의 합성
화합물 II(30 ㎎, 0.037 mmol)를 1,2-디클로로에탄 10 ㎖에 용해시키고, 용액을 실온에서 이소부틸아민(500 ㎕, 5.03 mmol)으로 처리한다. 이어서, 혼합물을 70 ℃에서 48시간 동안 교반하고, XTerra® Prep MS C18 10 ㎛ 예비-칼럼(Waters, 치수: 19 x 10 ㎜)을 갖는 Phenomenex Luna® Axia 5 ㎛ C18 (2) 칼럼(치수: 100 ㎜ x 30 ㎜)상에서 HPLC로 정제한다. 물 중 5 내지 95% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 40분 동안 용출한다(0.1% 암모늄 아세테이트를 부가하면서, pH 4.6, 아세트산을 사용하여 조절). 칼럼 유동(50 ㎖/min)은 UV에 따라 분획으로 수거한다. 분획 70은 화학식 V 및 VI의 두 화합물을 함유하며, 동결건조 후, 55:45의 비로 두 화합물 3 ㎎이 수득된다.
실시예 16: 화학식 V의 화합물의 특성
Figure pct00012
MW = 889.97
실험식: C46H66Cl2N4O9
[표 4]
Figure pct00013
Figure pct00014

실시예 17: 화학식 VI 의 화합물의 특성
Figure pct00015
MW = 916.00
실험식: C48H68Cl2N4O9
[표 5]
Figure pct00016
Figure pct00017

실시예 18: 칸디다 알비칸스에 대한 항진균 활성의 측정
메탄올 중 활성 물질[예: 화학식 II의 화합물 또는 화학식 IV의 화합물] 1000 ㎍/㎖의 스톡 용액을 제조한다. 시험 균주(칸디다 알비칸스 FH 2173)를 -80 ℃에서 저장한다. 접종물을 신선한 액체 예비배양물로부터 제조한다. 예비배양물은 -80 ℃에서 저장된 물질의 비드 및 영양 배지(Sabourad dextrose broth, Difco) 30 ㎖로부터 제조되며, 37 ℃ 및 180 rpm으로 24시간 동안 항온배양한다. 접종물은 시험 용기의 접종 후, 필요한 수의 콜로니-형성 단위가 달성되도록 조절한다. 이를 위하여, 접종물은 590 ㎚의 파장에서 광도계에 의해 107 CFU/㎖(CFU: 콜로니 형성 단위)의 값으로 조절한다. 접종물의 조절 후, 현탁액을 영양액(Mueller Hinton broth, Difco) 1:100으로 희석한다. 미세역가 플레이트는 접종물을 제조한 지 15분 이내에 접종한다. 정확한 콜로니 수는 표면 배양에 의해 결정한다. 활성 물질 및 영양 배지(Mueller Hinton broth, Difco)의 스톡 용액을 사용하여, 미리 미세역가 플레이트 위에 희석 시리즈를 제조한다. 활성 물질은 20 ㎕의 용적으로 존재하며, 40 ㎕의 총 시험 용적이 수득되도록 접종물 20 ㎕로 처리한다. 접종된 미세역가 플레이트는 이어서 뚜껑으로 밀봉하고, 5% CO2 및 95% 대기 습기에서 20시간 동안 37 ℃에서 항온배양한다. 각각의 시험을 위하여, 활성 물질이 없는 대조용, 멸균 대조용 및, 참조 물질로서, 시프로플록사신 및 니스타틴을 384 웰의 미세역가 플레이트에서 함께 시험한다. 미세역가 플레이트는 590 ㎚의 파장에서 흡광의 측정에 의해 광도계로 판독한다. 이어서, IC50 값은 시험 유기체 칸디다 알비칸스의 성장을 50%만큼 억제하기 위하여 필요한 활성 물질의 농도로서 표준 과정에 따라 희석 시리즈의 값으로부터 계산한다.
DSMZ DSM18870 20061208

Claims (14)

  1. 화학식 I의 화합물 또는 화학식 I의 화합물의 생리학적으로 허용되는 염.
    [화학식 I]
    Figure pct00018

    상기 화학식 I에서,
    X 및 Y는 서로 독립적으로, OH, O-(C1-C6)-알킬, NH2 또는 NH-(C1-C6)-알킬이거나, X 및 Y는 함께 그룹 -O-를 형성하고,
    R1 및 R2는 서로 독립적으로, Cl 또는 H이며,
    R3은 H, (C1-C6)-알킬, C(=O)-(C1-C6)-알킬 또는 (C1-C6)-알킬렌-NH-(C1-C6)-알킬이고,
    R4는 H, (C1-C6)-알킬 또는 C(=O)-(C1-C6)-알킬이다.
  2. 제1항에 있어서, X 및 Y가 함께 그룹 -O-를 형성하는, 화학식 I의 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R3 및 R4가, 서로 독립적으로, H, (C1-C6)-알킬 또는 C(=O)-(C1-C6)-알킬인, 화학식 I의 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 있어서, X 및 Y가 함께 그룹 -O-를 형성하고, R1 및 R2는 서로 독립적으로, Cl 또는 H이며, R3 및 R4는 서로 독립적으로, H, (C1-C6)-알킬 또는 C(=O)-(C1-C6)-알킬인, 화학식 I의 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, R1 및 R2가 Cl인, 화학식 I의 화합물.
  6. 제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, R1은 Cl이며, R2는 H인, 화학식 I의 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 있어서, R3 및 R4가 H인, 화학식 I의 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중의 어느 한 항에 있어서, R1, R2, R3 및 R4가 H인, 화학식 I의 화합물.
  9. 약제의 제조를 위한, 제1항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 이의 생리학적으로 허용되는 염의 용도.
  10. 진균성 장애의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한, 제1항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 이의 생리학적으로 허용되는 염의 용도.
  11. 제1항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물을 하나 이상 함유하는 약제.
  12. 1. 하나 이상의 화학식 I의 화합물이 배양 배지에 축적될 때까지, Cl 공급원을 함유하는 배양 배지에서 적절한 조건하에 균주 ST 201196(DSM 18870) 또는 이의 변이체 및/또는 돌연변이체 중 하나를 발효시키고,
    2. 상기 배양 배지로부터 화학식 I의 화합물을 분리하고,
    3. 임의로, 화학식 I의 화합물을 유도체화시키고/시키거나, 이를 생리학적으로 허용되는 염으로 전환시킴을 포함하는, 화학식 I의 화합물 또는 화학식 I의 화합물의 생리학적으로 허용되는 염의 제조 방법.
    [화학식 I]
    Figure pct00019

    상기 화학식 I에서,
    X 및 Y는 서로 독립적으로, OH, O-(C1-C6)-알킬, NH2 또는 NH-(C1-C6)-알킬이거나, X 및 Y는 함께 그룹 -O-를 형성하고,
    R1 및 R2는 서로 독립적으로, Cl 또는 H이며,
    R3은 H, (C1-C6)-알킬, C(=O)-(C1-C6)-알킬 또는 (C1-C6)-알킬렌-NH-(C1-C6)-알킬이고,
    R4는 H, (C1-C6)-알킬 또는 C(=O)-(C1-C6)-알킬이다.
  13. 제12항에 있어서, X 및 Y가 함께 그룹 -O-를 형성하고, R1 및 R2는 서로 독립적으로, Cl 또는 H이며, R3 및 R4는 서로 독립적으로, H, (C1-C6)-알킬 또는 C(=O)-(C1-C6)-알킬인, 화학식 I의 화합물 또는 화학식 I의 화합물의 생리학적으로 허용되는 염의 제조 방법.
  14. 미생물 균주 ST 201196(DSM 18870).
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN109280073A (zh) * 2017-07-19 2019-01-29 南开大学 Nannocystins衍生物及其用途
CN109796468B (zh) * 2019-03-26 2021-08-31 南开大学 大环nannocystin衍生物、及其制备方法和用途
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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