KR20090098460A - 돼지질병 예방 및 치료용 자가면역혈청의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 돼지의 전신소모성증후군-양(樣), 즉 PMWS(Post Weaning Multisystemic Wasting Syndrome)질병을 예방하고 치료하는 돼지의 자가면역혈청을 제공하기 위한 것으로서,

본 발명의 제조방법은 양돈장에서 질병으로 문제가 되고 있는 원인균 또는 바이러스에 감염되었다 회복된 것으로 보이는 돼지의 혈액을 도축장에서 수거하고 원심하여 혈청을 분리한 다음 혼재되어 있을지도 모를 미생물을 제거하기 위하여 호루마린을 최종농도 0.1%~0.2% 되게 가하고 37℃에서 48시간 불활화시키며, 불활화가 끝난 돼지혈청 4,000㎖당 증류수 1,000㎖에 PEG(polyethylene glycol) 375gm, 식염 45gm을 가하여 용해한 후 혈청과 혼합하고 5℃에서 1시간 PEG혼합물을 회전시켜 면역혈청을 분획하며, 분획이 끝난 혈청, PEG혼합액을 5,000rpm으로 40분간 원심하여 면역혈청을 침전시키고 상청액을 버린 다음 침전시켜 수집한 면역혈청에 PBS(인산완충액)를 2,000㎖ 가하고 용해시킨 후 재차 원심침전하여 특수제조된 혈청에 보좌제로 lactose를 1%의 비율로 첨가하여 자가면역혈청이 제조되는 것이며,

이와 같은 본 발명은 본 발명은 질병으로 문제가 되고 있는 돼지에서 혈액을 수거하여 면역혈청을 특수제조한 다음 보좌제를 첨가시켜 돼지질병 예방 및 치료용 자가면역혈청을 제조하는 것으로서 본 발명의 자가면역혈청을 돼지에 투여할 시에 돼지의 전신소모성 증후군 질병이 발생되는 것을 사전에 예방하고 치료할 수 있는 지대한 효과가 있는 것이다.

돼지질병, 전신소모성증후군, 양돈장, 원인균 또는 바이러스, 불활화, 혈청, 자가면역혈청, 보좌제

Description

돼지질병 예방 및 치료용 자가면역혈청의 제조방법{Porcine disease prevention and manufacturing process of auto immune serum for cure}

본 발명은 돼지의 전신소모성증후군-양(樣), 즉 PMWS(Post Weaning Multisystemic Wasting Syndrome)질병을 예방하고 치료하는 돼지의 자가면역혈청으로서, 문제가 되고 있는 양돈장의 제조의뢰를 받아 여기서 출하되는 돼지(건강돈)의 혈액을 수거하고 혈청을 분리한 다음 특수처리하는 돼지질병 예방 및 치료용 자가면역혈청의 제조방법에 관한 것이다.

현재 우리나라에서 문제가 되고 있는 PMWS-양(樣) 질병을 예방하고 치료하기 위하여 여러가지 방법이 동원되고 있으나 질병은 끝일 줄 모르고 계속 만연되고 있어 양돈산업에 막대한 피해를 주고 있다.

돼지의 PMWS-양(樣) 질병은 야외에서 Circo 바이러스에 감염된 자돈이 PRRS(Porcine Reproductive and Respiratoory Syndrome Virus), Parvo 바이러스 등의 바이러스와 대장균, 위축성비염 등 세균의 병원미생물들과 복합감염을 일으켜 피해를 가중시키는 질병으로서 이들 질병의 몇몇 예방약으로도 예방이 되지 않아 이 PMWS-양(樣) 질병은 계속 늘어가고 있어 이에 대한 예방과 치료가 절실히 요구 되고 있는 실정인 것이다.

본 발명은 돼지의 전신소모성증후군-양(樣), 즉 PMWS(Post Weaning Multisystemic Wasting Syndrome)질병을 예방하고 치료하는 돼지의 자가면역혈청을 제공하기 위한 것으로서, 문제가 되고 있는 양돈장의 제조의뢰를 받아 여기서 출하되는 돼지(건강돈)의 혈액을 수거하고 혈청을 분리한 다음 특수처리하는 자가면역혈청을 제조하는 것이다.

동물이 질병에 감염되었다 회복되거나, 예방약을 접종 받으면 동물의 혈청 중에는 그 질병의 항원(세균 혹은 바이러스)에 대한 항체가 생성되고 이 항체로 감염원(세균 또는 바이러스)를 예방하고 치료할 수 있는 것이다.

우리나라 돼지에 피해를 주고 있는 주요 병원미생물은 대장균, 위축성비염균, 파스튜레라균, 돈단독균 등의 세균과 돼지콜레라 바이러스, 로타 바이러스, 전염성위장염 바이러스, 오제스키병 바이러스, Parvo 바이러스, PRRS 바이러스, PED(Porcine Epidemic Diarrhea) 바이러스 등으로 야외에서는 이들 미생물들이 복합 감염되어 질병을 일으키므로 이들 병원미생물들을 일시에 예방하는데 어려움이 있는 것이다.

또한, 이들 질병에 대한 예방약이 표준 균, 독주로 제조 응용되고 있으나 야외에서는 이들 미생물들의 변종이 수없이 생길 수 있어 이들 질병을 완전 예방하는데 어려움이 있으며, 이들 질병으로 문제가 되고 있는 양돈장에서 출하하는 돼지 (건강돈)의 혈청 중에는 문제가 되고 있는 모든 미생물(세균 또는 바이러스)에 대한 항체를 함유하고 있는 것이다.

본 발명은 이와 같이 양돈장에서 질병으로 문제가 되고 있는 원인균 또는 바이러스에 감염되었다 회복된 것으로 보이는 돼지의 혈액을 도축장에서 수거하고 원심하여 혈청을 분리한 다음 혼재되어 있을지도 모를 미생물을 제거하기 위하여 호루마린을 최종농도 0.1%~0.2% 되게 가하고 37℃에서 48시간 불활화시키며, 불활화가 끝난 돼지혈청 4,000㎖당 증류수 1,000㎖에 PEG(polyethylene glycol) 375gm, 식염 45gm을 가하여 용해한 후 혈청과 혼합하고 5℃에서 1시간 PEG혼합물을 회전시켜 면역혈청을 분획하며, 분획이 끝난 혈청, PEG혼합액을 5,000rpm으로 40분간 원심하여 면역혈청을 침전시키고 상청액을 버린 다음 침전시켜 수집한 면역혈청에 PBS(인산완충액)를 2,000㎖ 가하고 용해시킨 후 재차 원심침전하여 특수제조된 혈청에 보좌제로 lactose를 1%의 비율로 첨가하면 문제의 양돈장 축주가 제조의뢰한 본 발명의 돼지질병 예방 및 치료용 자가면역혈청이 제조되는 것이다.

본 발명은 질병으로 문제가 되고 있는 돼지에서 혈액을 수거하여 면역혈청을 특수제조한 다음 보좌제를 첨가시켜 돼지질병 예방 및 치료용 자가면역혈청을 제조하는 것으로서 본 발명의 자가면역혈청을 돼지에 투여할 시에 돼지의 전신소모성 증후군 질병이 발생되는 것을 사전에 예방하고 치료할 수 있는 지대한 효과가 있는 것이다.

본 발명은 돼지질병 예방 및 치료용 자가면역혈청의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명의 실시예를 설명하면 다음과 같다.

(실시예)

1. 질병으로 문제가 되고 있는 양돈장의 문제의 원인균 또는 바이러스에 감염되었다 회복된 것으로 보이는 돼지의 혈액을 도축장에서 수거하고 원심하여 혈청을 분리한 다음 혼재되어 있을지도 모를 미생물을 제거하기 위하여 호루마린을 최종농도 0.1%~0.2%가 되게 가하고 37℃에서 48시간 불활화 시킨다.

2. 불활화가 끝난 돼지혈청 4,000㎖당 증류수 1,000㎖에 polyethylene glycol(PEG) 375gm, 식염 45gm을 가하여 용해한 후 혈청과 혼합하고 5℃에서 1시간 PEG혼합물을 회전시켜 면역혈청을 분획한다.

3. 분획이 끝난 혈청, PEG혼합액을 5,000rpm에 40분간 원심하여 면역혈청을 침전시키고 상청액을 버린다.

4. 침전시켜 수집한 면역혈청에 PBS(인산완충액)를 2,000㎖ 가하고 용해시킨 다음 원심침전하여 상청액을 수확하면 이것이 특수제조된 면역혈청이 된다.

5. 특수제조된 면역혈청에 보좌제로 lactose를 1%의 비율로 첨가하면 본 발명의 자가면역혈청이 제조되는 것이다.

[부기 1]

Dulbecco의 PBS(인산완충액)

용액 1. NaCl …………………………………… 8.00gm

KCl …………………………………… 0.20

Na2HPO4 (.12H2O) …………………… 1.15 (3.627)

증류수 ………………………………… 800㎖

용액 2. CaCl2 (.2H2O) ……………………… 0.1 (0.1245)gm

증류수 ………………………………… 100㎖

용액 3. MgCl2 (.6H2O) ……………………… 0.1gm

증류수 ………………………………… 100㎖

* 따로 고압멸균하고 식힌 후 혼합한다.

[부기 2]

식염수 (4.5%)

식염 …………………………………… 45gm

증류수 ………………………………… 1,000㎖

<시험성적>

[표 1-1. 2007년도(7월 16일 - 12월 29일) 가검 출하돈혈청의 PRRSV(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus) 및 HCV(Hog Cholera Virus)에 대한 중화항체가]

혈청 No.	가검물체취 년월일	축주명	Virus 및 중화항체가		비고
			PRRSV	HCV
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30	07. 07. 16 07. 07. 16 07. 07. 18 07. 07. 19 07. 07. 19 07. 07. 20 07. 07. 20 07. 07. 23 07. 07. 24 07. 07. 25 07. 08. 02 07. 08. 06 07. 08. 07 07. 08. 08 07. 08. 09 07. 08. 14 07. 08. 14 07. 08. 14 07. 08. 21 07. 08. 21 07. 08. 21 07. 08. 22 07. 08. 24 07. 08. 24 07. 08. 27 07. 08. 31 07. 08. 31 07. 08. 31 07. 08. 31 07 .09. 03	마진우 최장필 허영희 김경확 장을자 이영규 유윤형 예종혁 박성원 유강남 박천재 차부환 박천재 박종근 박홍규 이명훈 서천농장 박재민 이윤기 이상무 권미야 박종배 김신호 여춘식 유재구 박천재 장을자 서성학 서인희 임경수	27 81 9 9 9 47 16 9 5 5 9 9 47 427 27 47 > 6,561 9 47 16 5 9 5 3 3 9 9 9 < 2 3	NT NT 64 4,096 NT 4,096 NT NT 1,024 2,187 > 65,536 3,802 3,802 1,259 NT 1,995 243 243 3,802 81 1,259 1,024 243 243 1,995 7,943 7,943 1,024 NT 4,096

[표 1-2. 2007년도(7월 16일 - 12월 29일) 가검 출하돈혈청의 PRRSV(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus) 및 HCV(Hog Cholera Virus)에 대한 중화항체가]

혈청 No.	가검물체취 년월일	축주명	Virus 및 중화항체가		비고
			PRRSV	HCV
31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60	07. 09. 03 07. 09. 05 07. 09. 06 07. 09. 06 07. 09. 07 07. 09. 08 07. 09. 09 07. 09. 11 07. 09. 11 07. 09. 13 07. 09. 14 07. 09. 14 07. 09. 14 07. 09. 18 07. 09. 18 07. 09. 20 07. 09. 20 07. 09. 21 07. 09. 21 07. 10. 01 07. 10. 01 07. 10. 04 07. 10. 04 07. 10. 05 07. 10. 06 07. 10. 06 07. 10. 06 07. 10. 09 07. 10. 09 07 .10. 09	강대기 장인식 차영식 김상돈 신호조 김용운 차용길 조동형 안재홍 전태권 노태호 정금옥 박성원 이창용 조용래 최장길 장영규 강현출 박진성 김선섭 최당열 이영규 조흥환 이동호 장석경 김영현 이정권 강승식 이일동 임남희	141 47 27 9 9 16 9 9 81 243 3 81 27 141 16 5 3 3 3 3 < 2 141 3 3 81 3 27 47 < 2 3	1,024 126 1,995 1,024 729 1,995 1,024 1,995 > 65,536 31,623 2,187 729 7,943 4,096 4,096 4,096 1,995 1,995 1,995 501 4,096 1,024 1,024 1,995 256 4,096 1,024 2 1,024 4,096

[표 1-3. 2007년도(7월 16일 - 12월 29일) 가검 출하돈혈청의 PRRSV(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus) 및 HCV(Hog Cholera Virus)에 대한 중화항체가]

혈청 No.	가검물체취 년월일	축주명	Virus 및 중화항체가		비고
			PRRSV	HCV
61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90	07. 10. 10 07. 10. 10 07. 10. 11 07. 10. 12 07. 10. 13 07. 10. 13 07. 10. 15 07. 10. 16 07. 10. 17 07. 10. 17 07. 10. 19 07. 10. 19 07. 10. 22 07. 10. 23 07. 10. 24 07. 10. 25 07. 10. 26 07. 10. 26 07. 10. 29 07. 10. 30 07. 10. 31 07. 11. 01 07. 11. 01 07. 11. 01 07. 11. 06 07. 11. 08 07. 11. 08 07. 11. 12 07. 11. 12 07 .11. 13	박유덕 임도천 안재홍 정금옥 변정섭 박용덕 조근석 감강태 윤여을 김명현 박용찬 안종근 김희선 김은기 조웅래 김대학 박진성 장성순 김용운 이윤기 이종기 박성원 김학동 전영애 박종배 김병삼 최광식 권영석 임미경 변수천	27 9 27 5 3 3 3 3 5 9 3 9 3 9 9 9 3 9 3 9 9 3 3 3 9 < 2 3 9 3 < 2	31,623 4,096 1,024 < 2 1,024 1,995 7,943 1,024 7,943 4,096 4,096 4,096 7,943 256 1,995 1,024 16,384 7,943 16,384 4,096 1,995 4,096 501 31,623 4,096 501 31,623 4,096 4,096 16,384

[표 1-4. 2007년도(7월 16일 - 12월 29일) 가검 출하돈혈청의 PRRSV(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus) 및 HCV(Hog Cholera Virus)에 대한 중화항체가]

혈청 No.	가검물체취 년월일	축주명	Virus 및 중화항체가		비고
			PRRSV	HCV
91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119	07. 11. 14 07. 11. 15 07. 11. 16 07. 11. 19 07. 11. 19 07. 11. 19 07. 11. 21 07. 11. 21 07. 11. 26 07. 11. 26 07. 11. 27 07. 11. 27 07. 11. 29 07. 11. 29 07. 12. 05 07. 12. 07 07. 12. 07 07. 12. 07 07. 12. 11 07. 12. 11 07. 12. 12 07. 12. 14 07. 12. 15 07. 12. 18 07. 12. 18 07. 12. 20 07. 12. 22 07. 12. 28 07. 12. 29	조근성 임병중 황금승 박두철 최병식 유윤형 김상돈 이임웅 조중흠 최장필 강현출 조웅내 박진성 박신자 박성원 김서환 안재문 박진성 방희진 김점희 전태권 이필옥 김길재 정금옥 임병준 이찬용 김경원 김용운 김영석	3 243 < 2 3 7,943 3 5 3 9 501 3 3 3 3 < 2 3 3 9 < 2 3 27 3 27 9 3 3 5 9 3	1,995 31,623 126 7,943 4,096 1,280 1,995 4,096 > 65,536 1,995 501 1,024 1,995 1,024 1,024 < 2 4,096 1,024 4,096 7,943 7,943 31,623 1,995 1,995 31,623 > 65,536 31,623 1,995 31,623

표 1-1 ~ 1-4와 같이 출하돈의 돼지콜레라 및 PRRS(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome) 바이러스에 대한 중화항체가가 높은 것은 그 양돈장에 돼지콜레라 또는 PRRS 야외 바이러스가 존재하고 있음을 의미하는 것으로 2007년 7월 16일부터 12월 29일까지 조사한 성적에 의하면 돼지콜레라 바이러스에 대한 중화항체가 조사에서 조사건수 112개 양돈장 중 93개(83%)(중화항체가 1,024배->65,536배) 양돈장에 돼지콜레라 야외독이 존재하고 있을 가능성이 있어 이 시험성적을 축주에게 통보하여 이에 의한 피해를 미리 예방하게끔 조치하였고, PRRS 바이러스에 대한 중화항체가 조사에서는 조사건수 119개 양돈장 중 32개(27%)(중화항체 가 16배-7,943배) 양돈장에 PRRS 야외 바이러스가 존재하고 있을 가능성이 있어 이에 의한 피해를 예방 조치하게끔 시험결과를 축주에게 통보하였다.

[표 2. 2007년도 PRRS(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome)-양(樣) 바이러스 분리현황]

양돈장	이환자돈		사산태아	출하돈혈액	계
	혈액	장기유제
KJH INH SWH BHS DWO YJH LJY LGJ MJW GSIC KSH LJW	1 1 1 1 1 3 2 1 1	1 1 1 1	2		1 1 1 1 2 2 1 3 3 1 1 1
합계	12	4	2	0	18

표 2와 같이 PRRS-양(樣) 바이러스를 이환자돈의 혈액에서 12예, 장기유제액에서 4예, 사산태아에서 2예 등 모두 18예를 분리하였다. 이 PRRS-양(樣) 바이러스 분리결과로 미루어 보아 PRRS 바이러스가 PMWS-양(樣) 질병에 깊숙히 관여하고 있다는 것을 짐작케 한다.

[표 3. 중화시험법에 의한 분리 PRRS(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome)-양(樣) 바이러스의 동정시험]

분리 바이러스	구분	처리 및 바이러스역가(TCID50/0.1㎖)
		비처리	항혈청 처리
CNV-1 Suhyang Da San	동정된 PRRS 바이러스	10(4.5) 10(4.0) 10(5.5)	< 10(1.0) < 10(1.0) < 10(1.0)
KJH INH SWH BHS DWO YJH LJY LGJ MGW GSIC KSH LJW	분리 바이러스	10(4.5) 10(4.5) 10(4.0) 10(4.5) 10(3.5) 10(4.0) 10(4.5) 10(4.5) 10(4.0) 10(4.5) 10(4.5) 10(4.5)	< 10(1.0) < 10(1.0) < 10(1.0) < 10(1.0) < 10(1.0) < 10(1.0) < 10(1.0) < 10(1.0) < 10(1.0) < 10(1.0) < 10(1.0) < 10(1.0)

표 3에 나타낸 바와 같이 분리된 18개 PRRS(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome)-양(樣) 바이러스 중 양돈장별로 12개 바이러스를 선정하여 이미 동정된 PRRS 바이러스를 대조로 두고 중화시험법으로 동정시험을 실시하였던바 항혈청으로 처리한 것은 완전중화가 성립되어 조사한 12개 바이러스가 모두 PRRS 바이러스로 동정되었다.

[표 4. PMWS(Post Weaning Multisystemic Wasting Syndrome)-양(樣) 질병 발생 양돈장의 자가면역혈청요법 실시 이후의 치유현황]

자가면역혈청 제조			치유현황
년도	월	건수	치유건수	불치유건수	치유율(%)
2006	11 12	8 10	8 9	- 1	100 90
2007	1 2 3 4 5 6 7 8 9	9 10 12 19 21 17 27 19 20	8 9 8 16 18 17 26 19 20	1 1 4 3 3 - 1 - -	89 90 67 84 86 100 96 100 100
합계	11	172	158	14	92

표 4와 같이 2006년 11월부터 2007년 9월까지 11개월간 생산 공급한 자가면역혈청 건수는 172건이고, 이중 자가면역혈청요법을 실시하여 질병이 치유된 양돈장이 158건이고, 치유되지 않은 양돈장이 14곳으로 치유율은 92%로 양호하였다.

Claims (1)

1. 양돈장에서 질병으로 문제가 되고 있는 원인균 또는 바이러스에 감염되었다 회복된 것으로 보이는 돼지의 혈액을 도축장에서 수거하고 원심하여 혈청을 분리한 다음 혼재되어 있을지도 모를 미생물을 제거하기 위하여 호루마린을 최종농도 0.1%~0.2% 되게 가하고 37℃에서 48시간 불활화시키며, 불활화가 끝난 돼지혈청 4,000㎖당 증류수 1,000㎖에 PEG(polyethylene glycol) 375gm, 식염 45gm을 가하여 용해한 후 혈청과 혼합하고 5℃에서 1시간 PEG혼합물을 회전시켜 면역혈청을 분획하며, 분획이 끝난 혈청, PEG혼합액을 5,000rpm으로 40분간 원심하여 면역혈청을 침전시키고 상청액을 버린 다음 침전시켜 수집한 면역혈청에 PBS(인산완충액)를 2,000㎖ 가하고 용해시킨 후 재차 원심침전하여 특수제조된 혈청에 보좌제로 lactose를 1%의 비율로 첨가하여 자가면역혈청이 제조됨을 특징으로 하는 돼지질병 예방 및 치료용 자가면역혈청의 제조방법.