KR20090097886A

KR20090097886A - 전염성 기관지염 치료용 조성물 및 방법

Info

Publication number: KR20090097886A
Application number: KR1020097012393A
Authority: KR
Inventors: 리차드 로젠블룸; 티모시 커밍스; 마이클 페터루티
Original assignee: 더 퀴글리 코포레이션
Priority date: 2006-12-14
Filing date: 2007-12-14
Publication date: 2009-09-16
Also published as: WO2008074031A1; JP2010522138A; MX2009006396A; US20100028268A1; EP2091549A1; CN101557815A; IL199113A0; AU2007333048A1; ZA200902679B; CA2668935A1

Abstract

전염성 기관지염의 예방차원의 처리 및 전염성 기관지염의 치료. 방법은 조류에 심황으로부터 수득할 수 있는 제 1 성분; 녹차로부터 수득할 수 있는 제 2 성분; 생강으로부터 얻을 수 있는 제 3 성분; 그리고 허용 가능한 캐리어를 포함하는 조성물의 양을 조류에 투여하는 것으로 구성된다. 본 발명에 따른 조성물은 전염성 기관지염에 걸릴 발병률을 감소시키거나 전달을 감소시키는 목적으로 이용될 수도 있다.

전염성 기관지염, 전염성 기관지염 바이러스성 균주, 심황 분말 추출물, 심황 유체 추출물, 심황 추출물, 심황 분말, 심황 팅크제, 녹차 분말, 녹차 분말 추출물, 녹차 유체 추출물, 녹차 팅크제, 생강 분말 추출물, 생강 유체 추출물, 생강 분말, 생강 팅크제

Description

전염성 기관지염 치료용 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING INFECTIOUS BRONCHITIS}

본 발명은, 전염성 기관지염(INFECTIOUS BRONCHITIS) 발병을 치료 또는 감소시키는 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은, 조류에서 전염성 기관지염을 치료 또는 감소시키는 방법 뿐만 아니라, 전염성 기관지염의 전염성을 감소시키는 방법에 관한 것이다.

전염성 기관지염은 닭에게서 코로노바이러스(coronavirus)에 의해 발생되는 매우 전염성이 큰 급성 호흡기 질환이다. 전염성이 가장 큰 가금류 질환으로 간주되며, 바이러스는 감염된 닭 또는 닭장, 장비 및 일반적인 작업장과 같은 오염된 표면과 직접 접촉에 의해 퍼질 수 있다. 전염성 기관지염은 어린 가금류에서 치사율이 특히 높다. 감염된 닭은 경련, 기침, 수란관의 병소로 인하여 더 낮아진 알 생산량, 또는 감염으로 인한 스트레스 유도 등을 겪게 된다. 또한, 전염성 기관지염은 잠복성 바이러스성 또는 세균성 감염을 자극할 수도 있고, 특히 닭고기 바베큐 사업에 심각한 경제적인 손실을 유발할 수도 있다. 현재까지 이 질환을 효과적으로 치료하는 방법이 없다.

전염성 기관지염과 싸우기 위해서는 비활성 바이러스 및/또는 살아있는 바이 러스로부터 유도된 백신을 이용하는 것이 공지되어있다. 그러나 비활성화 및/또는 살아있는 바이러스를 투여하면 여러 가지 문제들이 야기된다. 일부 경우에, 포르말린 및 자외선과 같은 비활성화 물질로 전염성 기관지염 바이러스를 비활성화시킨 후에는 면역성 성질이 상실될 수도 있다(M. S. Hofstad, Diseases of Poultry, Biester and Schwarte, Iowa University, Press. Ames. (1965), 615). 살아있는 비-감쇠된(attenuated) 또는 약하게 감쇠된 바이러스 백신의 1차 백신접종에 의해 건강한 닭들도 죽을 수 있거나 질병에 걸릴 수도 있다. 2주 내지 3주령이 안된 동물 및 현재 알을 낳거나 곧 낳을 닭들의 경우에 특히 위험하다.

또 다른 형태의 백신주사는 변형된 생 바이러스 백신, Massachusetts 타입에서 유도된 것들, 보다 구체적으로, IBV W 48, M 41 및 82828 균주(Connecticut 분리물 예를 들면, A 5968 균주 제외)와 같은 병인성을 감소시키기 위해 25회 또는 그 이상의 배아 계대를 한 바이러스를 이용한다. 그러나, 이들 바이러스의 면역성 능력은 특정 바이러스성 전염성 기관지염 균주에만 특이적이다. 따라서, 이 백신은 바이러스의 항원 변이에 대해 조류를 면역화시킬 수 없고(Archiv fur die Gesamte Virusforschung 34, p. 32 (1971) and Cunningham C. H. Develop. Biol. Standard, 33 p. 311 (1976)), 그리고 효과적으로 발병을 예방할 수도 없다(Avian Diseases, Vol. 20, No. 1, pages 42 and 177 (1976) and Avian Diseases, Vol. 19, No. 2, pages 323 and 583 (1975)). 또한, IBV 타입에 상응하는 상이한 혈청 타입의 IBV 균주들에서 유도된 복합 백신을 이용한 가금류에 백신주사는 상호작용에 의해 각 출발 바이러스들의 면역성 성질을 감소시킨다(Am. J. Vet. Res. 36, 4, 524 and 525 (1965) and Avian Diseases 12, 577 (1968)).

이와 같은 통상의 문제점들로 인하여, 비-바이러스 계 치료 방법을 개발하는 연구가 실행되었다. 심황(turmeric), 녹차, 생강, 고추냉이로 구성된 조성물의 항-바이러스 성질을 설명하는 U.S. 공고. 2003/0185912 및 2005/0147697와 같은 몇 가지 문헌들이 있기는 하지만, 이들 공보들은 전염성 기관지염의 치료 방법에 대해서는 설명하지 못한다.

따라서, 전염성 기관지염의 치료, 발명 감소 또는 전염성을 감소시킬 방법이 필요하다.

본 발명은, 전염성 기관지염 치료를 위한 방법, 접촉성 전염성 기관지염의 발병률을 감소시키는 방법 및 전염성 기관지염의 전염성을 감소시키는 방법에 관한 것이다.

제 1 측면에서, 본 발명은 전염성 기관지염에 걸릴 경우 및/또는 전달 빈도를 감소시키기 위한 조성물의 예방학적 용도를 위한 방법에 관한 것이다. 이 방법은 전염성 기관지염 바이러스에 이미 노출된, 노출되었을 것 같은 또는 노출될 것 같은 조류에 심황으로부터 수득할 수 있는 제 1 성분, 녹차로부터 수득할 수 있는 제 2 성분을 포함하는 조성물의 유효량을 투여하는 단계들로 구성된다. 투여하였을 때 조성물의 이와 같은 양은 전염성 기관지염 바이러스에 걸리는 및/또는 전달의 발생률을 감소시키는데 효과적이다.

본 발명의 제 2 측면에서, 심황으로부터 수득할 수 있는 제 1 성분과 녹차로부터 수득할 수 있는 제 2 성분을 포함하는 조성물을 이용하여 전염성 기관지염을 치료하기 위한 조성물의 유효량을 투여함으로써 전염성 기관지염이 있는 조류를 치료할 수 있다.

본 발명의 제 3 측면은 심황으로부터 수득할 수 있는 제 1 성분, 녹차로부터 수득할 수 있는 제 2 성분 그리고 허용 가능한 담체를 포함하는 에어로졸, 분무, 연무(mist) 또는 액상 조성물에 관한 것이다. 에어로졸, 분무, 연무(mist) 또는 액상 조성물은 에어로졸 또는 액상 조성물에 적용할 수 있는 임의 통상적인 기술을 이용하여 전염성 기관지염을 치료 또는 예방차원에서 조류에 투여할 수 있는데, 예를 들면, 조류에 분무 또는 연무 투여할 수 있다.

제 4 측면에서, 본 발명은 심황으로부터 수득할 수 있는 제 1 성분 및 녹차로부터 수득할 수 있는 제 2 성분을 포함하는 동물 사료에 관한 것이다.

본 발명을 특징짓는 이와 같은 그리고 여러 다른 점들 및 신규한 특징은 여기에 첨부된 청구범위 및 이의 일부에서 특히 지적될 것이다. 그러나 본 발명의 더 나은 이해를 위해, 본 발명의 장점들 그리고 본원 발명을 이용하여 얻어진 목적들이 수반된 설명에 기재되어 있으며, 내용은 적절한 실시예들로 설명된다.

도 1은, VERO E6 세포에서 전염성 기관지염 바이러스 (IBV) 균주 Beaudette의 생존능에 대해 조성물 1의 영향을 설명하는 희석 log와 세포 농도를 나타낸 그래프.

도 2는, 발육계란에서 IBV 균주 Beaudette의 생존능에 조성물 1의 효과를 설 명하는 희석 log와 세포 농도의 그래프.

도 3은, 좌측이 조성물 1×10^-3희석으로 처리된 IBV에 노출 후 세포에 세포병변(cytopathic) 영향이 없음을 보여주고, 우측은 플라시보의 1×10^-3희석으로 처리된 IBV에 노출 후 세포에 세포병변(cytopathic) 효과를 주는 것을 보여주는, 도면.

한 측면에서, 본 발명은 전염성 기관지염 바이러스 (IBV)에 걸리거나 및 전달 경우를 감소시키기 위하여 조성물을 예방차원에서 이용하는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 전염성 기관지염 바이러스에 이미 노출된, 노출되었을 것 같은 또는 노출될 것 같은 조류에 심황으로부터 수득할 수 있는 제 1 성분, 녹차로부터 수득할 수 있는 제 2 성분, 그리고 선택적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물의 유효량을 투여하는 단계들로 구성된다. 투여하였을 때 조성물의 이와 같은 양은 전염성 기관지염 바이러스에 걸리거나 및/또는 전달의 발생률을 감소시키는데 효과적이다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 심황으로부터 수득할 수 있는 제 1 성분, 녹차로부터 수득할 수 있는 제 2 성분, 그리고 선택적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물의 유효량을 투여하여 전염성 기관지염에 걸린 조류를 치료하는 방법에 관한 것이다. 투여하였을 때 조성물의 이와 같은 양은 전염성 기관지염 바이러스에 걸리거나 및/또는 전달의 발생률을 감소시키는데 효과적이다.

이 방법에 사용되는 조성물에는 심황으로부터 수득할 수 있는 제 1 성분과 녹차로부터 수득할 수 있는 제 2 성분을 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물에 추가 선택적 성분으로 생강으로부터 얻을 수 있는 성분들 및/또는 고추냉이로부터 얻을 수 있는 성분들 또한 포함될 수도 있다.

여기에서 사용된 바와 같이, "허용 가능한(acceptable)"이란 불필요한 부작용(독성, 자극 및 알레르기 반응과 같은)없이 조류에 사용이 적절하고, 위험/유익 비율이 적절한 성분을 말한다.

또한, 여기에서 사용된 바와 같이, "안전한 유효량(safe and effective amount)"이란 여기에서 설명된 방법으로 사용하였을 때, 불필요한 부작용(독성, 자극 및 알레르기 반응과 같은) 없이 조류에 사용이 적절하고, 위험/유익 비율이 적절한, 원하는 치료요법적 반응을 얻는데 충분한 성분의 양을 말한다.

여기에서 사용된 바와 같이, "억제하는(inhibiting)"이란 전염성 기관지염 바이러스 균주의 추가 생장을 감소 또는 방지하는 또는 정상 세포에 전염성 기관지염 바이러스의 부착을 방지하는 및/또는 처리될 사람 또는 동물로부터 전염성 입자의 일부 또는 전부를 제거하는 것을 말한다. 바이러스 억제를 결정하는 적절한 방법들은 예에서 논의된다.

여기에서 사용된 바와 같이,"전염성(transmissivity)" 또는 "전염시키는(transmitting)"은 한 숙주에서 다른 숙주로 미생물의 이동을 말한다.

본 발명에서 이용되는 모든 활성 화합물들은 이용가능할 경우 다른 소스로부터 수득될 수도 있다. 따라서, "~으로부터 얻을 수 있는" 또는 "~으로부터 구할지 도 모르는"이란 심황, 녹차, 생강 또는 고추냉이로부터 구할 수 있는 화합물 또는 조성물을 포함하고, 따라서 동일한 화합물 및/또는 조성물의 합성 형태뿐만 아니라 다른 소스들로부터 구한 동일한 화합물 및/또는 조성물들을 포함한다.

제 1 실시예에서, 본 발명의 조성물에는 심황으로부터 수득할 수 있는 제 1 성분과 녹차로부터 수득할 수 있는 제 2 성분이 여기에서 설명하는 하나 또는 그 이상의 유익한 효과를 제공하기 위한 안전한 유효량으로 포함된다.

본 발명의 조성물의 제 1 성분은 심황으로부터 수득할 수 있고, 여기에서 설명하는 하나 또는 그 이상의 유익한 효과를 제공하기 위한 안전한 유효량으로 이용된다. 심황(Curcuma longa), 또는 북부인도의 Haldi는 인도 요리에 통상적인 성분일뿐만 아니라 의약으로서도 매우 널리 이용된다. 심황의 근경(rhizome)은 의약으로 이용되고, 미세 분말로 식품으로도 이용된다.

심황의 근경의 황색 안료는 쿠르쿠미노이드(curcuminoids)로 알려진 세 가지 화합물로 구성된다. 세 가지 쿠르쿠미노이드는 쿠르쿠민(디페루로일메탄), 데스메톡시쿠르쿠민(하이드록시씨나모일 페루로일메탄), 비스-데스메톡시쿠르쿠민(디하이드록시씨나모일 페루로일메탄)이다 (참고 Drug Analysis, Chromatography and Microscopy, p. 169, Ann Arbor Science Inc., 1973). 심황의 필수 오일(Curcuma longa)은 주로 다음의 성분으로 구성된다: d-캄포르(약 1%), 사이클로-이소페렌미로센(약 85%), 그리고 p-톨일메틸카르비놀(약 5%), (참고 E. Gunther, The Essential Oil, pp. 123-4, Van Nostrand Co., 1955).

심황으로부터 수득된 본 발명 조성물의 성분에는 바람직하게는 쿠르쿠미노이 드 예를 들면, 쿠르쿠민(디페루로일메탄), 데스메톡시쿠르쿠민(하이드록시씨나모일 페루로일메탄), 비스-데스메톡시쿠르쿠민(디하이드록시씨나모일 페루로일메탄)이 포함되며, 그리고 이들 쿠르쿠미노이드의 두 가지 또는 그 이상의 혼합물이 포함된다.

심황으로부터 쿠르쿠미노이드를 분리하는 방법은 공지되어 있다(참고 Janaki and Bose, An Improved Method for the Isolation of Curcumin From Turmeric, J. Indian Chem. Soc. 44: 985, 1967). 또는, 본 발명에 이용되는 쿠르쿠미노이드를 합성 방법에 의해 준비할 수도 있다.

심황으로부터 수득될 수 있는 성분은 여러 형태로 본 발명의 조성물에 결합시킬 수 있다. 이와 같은 상이한 형태에는 바람직하게는 예를 들면 심황 분말 추출물, 심황 액체 추출물, Aquaresin® 심황, Oleoresin® 심황, 하나 또는 그 이상의 쿠르쿠미노이드 화합물, 그리고 심황 분말, 식물 심황의 전부 또는 일부 및 이의 혼합물을 포함하는 심황 추출물을 포함한다. 보다 구체적으로 심황으로부터 수득할 수 있는 제 1 성분은 심황 추출물이다.

심황으로부터 수득할 수 있는 성분이 이용될 때, 본 발명의 조성물의 각 그램에는 심황 분말 추출물과 같이 심황으로부터 수득할 수 있는 성분이 약 0.001 mg 내지 약 20 mg 포함된다. 이 범위는 복용 조성물, 예를 들면 Pharmline, Inc의 심황 추출물 95%를 이용하거나 분무 조성물, 예를 들면, Kalsec, Inc., Kalamazoo, Mich.,의 심황 뿌리 추출물 (Oleoresin® 심황)을 이용하는 것에 근거한다.

본 발명의 조성물의 제 2 성분은 녹차로부터 얻을 수 있다. 녹차로부터 수득 할 수 있는 제 2 성분은 항산화 효과를 가질 수 있다. 녹차는 관목 Camellia sinensis의 건조된 잎과 잎 싹이다. 녹차는 주로 중국과 일본에서 생산된다. 건조된 차 잎은 폴리페놀(약 36%), 주로 플라보놀(카테친 포함), 플라보노이드 및 플라본디올로 알려진 식물성 화학 물질로 구성된다. 잎에는 카페인, 테오브로민 및 테오필린을 포함하는 식물성 알칼로이드(약 4%)도 포함된다.

녹차의 약학 활성은 주로 이의 활성 화합물 때문이다. 본 발명에 유용한 녹차의 활성 화합물에는 플라보놀, 카테친, 플라보노이드, 플라보노디올, 식물 알카로이드, 카페인, 테오브로민, 테오필린, 페놀산, 단백질, 탄수화물, 그리고 미네랄을 포함하나 이에 국한시키지는 않는다.

녹차로부터 수득할 수 있는 제 2 성분은 녹차 분말, 녹차 추출물 예를 들면, 녹차 분말 추출물, 녹차 유체 추출물, 그리고 녹차의 하나 또는 그 이상의 활성 화합물들, 녹차 식물의 전부 또는 일부, 녹차 잎, 이의 팅크 또는 혼합물의 형태로 조성물에 포함될 수 있다. 적절하게는 본 발명의 조성물의 제 2 성분은 녹차 잎, 녹차 분말 그리고 녹차 추출물에서 선택된다. 보다 적절하게는 본 발명의 조성물의 제 2 성분은 녹차 추출물이다.

본 발명의 조성물 각 그램에는 녹차 추출물과 같이 녹차로부터 수득할 수 있는 성분이 약 0.001 mg 내지 약 20 mg 포함된다. 보다 바람직하게는 본 발명의 조성물 각 그램에는 녹차 추출물과 같이 녹차로부터 수득할 수 있는 성분이 약 0.01 mg 내지 약 15 mg 포함된다. 이와 같은 범위는 복용 조성물로써의 녹차 예를 들면, Stryker Botanies 및 분무 조성물로써의 녹차 추출물 예를 들면, Phytoway, Inc., Chang Sha, P. R. China을 기준으로 이용한다.

본 발명의 조성물에서 선택 성분은 안전한 유효량의 생강에서 얻을 수 있는 것이다. 남아시아가 자생인 생강은 1 피트까지 자라고 폭이 거의 1인치인 잔디모양의 잎을 가지는 2 내지 4개 뿌리의 다년생 식물이다. 흔히 식료품 가게에서 불리는 생강 뿌리는 실제로 식물의 땅밑 줄기와 벗겨낼 수 있는 나무 껍질과 같은 바깥층으로 구성된다.

본 발명에 이용될 수도 있는 생강의 활성 화합물에는 1,8-씨네올, 10-데하이드로진져디온, 10-진져롤, 6-진져디온, 6-진져롤, 6-쇼가올, 8-.베타.-17-에폭시-.람다.-트란스-12-ene-15,16-디올, 8-진져롤, 8-쇼가올, 9-옥소-네롤리돌, 아세타알데히드, 아세트산, 알라닌, .알파.-리놀렌-산, .알파.-리놀렌산, . 알파.-페란드렌, .알파.-피엔, .알파.-테르피넨, .알파.-테르피네올, .알파.-진기베렌, 아르커쿠민, 아르기닌, 아스코르브산, 아스파라긴, .베타.-비사볼올, .베타.-카로텐, .베타.-엘레멘, .베타.-유데스몰, .베타.-이오논, .베타.-미리센, .베타.-페란드렌, .베타.-피넨, .베타.-세리넨, .베타.-세스퀴페란드렌, .베타.-시토스테롤, .베타.-튜존, 보닐-아세테이트, 붕소, 카페인산, 칼슘, 캠펜, 캄포르, 카프르산, 카프릴산, 캅사이신, 카르요피렌, 챠비콜, 클로로젠산, 크롬, 시트랄, 시트로넬랄, 시트로넬랄, 코발트, 구리, 쿠멘, 쿠르쿠민, 시스틴, 델피니딘, .델타.-카디넨, 에레몰, 에틸 아세테이트, 에틸-미리스테이트, 파페살, 파르네센, 페루린산, 푸르푸랄, .감마.-아미노부티린산, .감마.-테르피넨, 게라니알, 게라니올, 게나닐-아세테이트, 진져레논, 글루타민산, 글리신, 헥사하이드로쿠르쿠민, 히스티딘, 이소진져 레논-B, 이소루이신, 캠페롤, 레시틴, 리모넨, 리놀레산, 마그네슘, 망간, 메티오닌, 무파, 미레센, 미리세틴, 미리스틴산, 네랄, 네올, 네롤리돌, 니코틴산, 니켈, 올레산, 옥살산, p-코루마린산, p-씨멘, p-하이드록시-벤조산, 팔미드산, 판토테인 산, 파라돌, 패트코우린 알코올, 페닐알라닌, 퀘르세틴, 리보플라빈, 셀레니움, 쉬키민-산, 테르피넨-4-ol, 티아민, 트립토판, 바닐라산, 바닐린, 아연, 그리고 징거론을 포함하나 이에 국한시키지는 않는다. 이들 활성 화합물의 두 가지 또는 그 이상의 혼합물도 이용할 수 있다.

생강은 생강 분말 추출물, 생강 유체 추출물, 생강 뿌리 분말, Aquaresin® 생강, 올레오레진 생강, 그리고 생강의 하나 또는 그 이상의 활성 화합물, 생강 식물의 전부 또는 일부, 이의 팅크 및 이의 혼합물을 포함하는 생강 추출물을 포함한 많은 여러 형태로 본 발명의 조성물에 포함될 수 있다. 적절하게는 본 발명의 조성물의 선택 성분은 생강 추출물, 그리고 생강 분말에서 선택된다.

본 발명의 조성물의 각 그램에는 생강 추출물과 같은 생강으로부터 수득할 수 있는 성분이 약 0.001 mg 내지 약 30 mg 포함된다. 적절하게는 조성물의 각 그램에는 생강 추출물과 같이 생강으로부터 얻을 수 있는 성분이 약 0.01 mg 내지 약 20 mg 포함된다. 이들 범위는 복용 조성물로 예를 들면, Stryka Botanies의 생강 뿌리 분말 그리고 분무 조성물로 예를 들면, Kalsec, Inc. of Kalamazoo, Mich의 생강 추출물 K (Aquaresin® 생강)을 기준으로 이용한다.

여러 성분들의 양은 생강 뿌리 추출물과 같은 성분의 한 형태로 제공된다. 이와 같은 성분이 또 다른 형태로 존재하는 경우, 이용되는 양은 여기에서 제공되 는 하나 또는 그 이상의 활성 화합물의 양과 동일한 양으로 제공되는 양이 된다.

또한, 본 발명의 조성물에는 여기에서 설명하는 하나 또는 그 이상의 유익한 효과를 제공하기 위해 고추냉이로부터 얻을 수 있는 하나 또는 그 이상의 성분을 안전한 유효량으로 포함할 수도 있다.

고추냉이로부터 수득할 수 있는 선택 성분에는 Cochlearia Armoracia로부터 추출한 추출물이 포함될 수 있다. 고추냉이로부터 수득할 수 있는 성분은 고추냉이 추출물의 형태, 예를 들면, 고추냉이 분말 추출물, 고추냉이 유체 추출물 및 고추냉이 뿌리 추출물, 예를 들면 고추냉이 오일이 될 수 있다. 고추냉이에는 겨자에서 볼 수 있는 것과 유사한 휘발성 오일이 포함된다. 여기에는 글루코시놀레이트(겨자 오일 글리코시드), 글루코나스튜르틴, 그리고 위에서 분해되면 알릴 이소티오시아네이트를 만드는 시니그린이 포함된다. 본 발명의 조성물에는 고추냉이 오일과 같은 고추냉이에서 얻을 수 있는 성분이 조성물 g 당 약 0.0001 mg 내지 10 mg포함되고, 보다 적절하게는 본 발명의 조성물에는 조성물 g당 고추냉이 오일과 같은 고추냉이에서 얻을 수 있는 성분이 약 0.001 mg 내지 5 mg 포함된다.

에탄올, 프로필렌 글리콜, 글리세린 및 이의 여러 복합물이 본 발명의 조성물에 선택 성분으로써 전체 중량의 최대 약 10%wt까지 선택적으로 포함될 수 있다. 적절하게는 선택 성분으로 에탄올이 총 중량의 최대 약 10중량%까지 첨가된다. 더욱 바람직하게는 2.5 내지 7% 에탄올이 첨가된다.

적절하게는 심황, 녹차 그리고 선택적으로 생강 및/또는 고추냉이로부터 유도될 수 있는 상기에서 설명된 성분들은 전체 조성물의 중량에 약 0.001 내지 약 90%가 된다. 적절하게는 주요 성분들은 전체 조성물의 약 1 내지 약 10%wt를 이룬다.

상기에서 설명된 것과 같이, 심황, 생강, 녹차로부터 수득할 수 있는 성분들을 포함한 조성물의 비-캐리어 성분들은 사용하고자 하는 조성물의 효과에 실질적인 영향이 없이, 조성물에 이용되는 캐리어의 양에 따라 본 발명의 조성물에서 비율적으로 증가 또는 감소될 수 있다.

식물 추출물들, 예를 들면, 본 발명의 조성물에 이용될 수도 있는 심황 추출물, 생강 추출물, 녹차 추출물 및 고추냉이 추출물은 통상의 추출 과정을 이용하여 만들 수 있다. 또는, Kalsec, Inc. of Kalamazoo, Mich와 같은 시판되는 소스로부터 추출물들을 구입할 수도 있다.

상기 언급된 식물중 임의의 것으로부터 통상의 투여가능한 복용량으로 약리학적으로 또는 생물학적으로 활성이 있는 식물 추출물들을 준비하는 공정은 당분야에 공지되어 있다.

본 발명의 조성물은 조류에서 전염성 기관지염 바이러스의 여러 균주의 감염성 및 전염성을 예방하여 조류에서 감염 발병률을 감소시키는데 이용될 수 있다. 조성물은 전염성 기관지염을 치료하는 치료요법적 조성물로 이용하여 전염성 기관지염과 연관된 증후를 경감시킬 수 있다.

본 발명의 조성물의 안전한 유효량을 전염성 기관지염에 노출된 또는 노출될 수 있는 조류에 투여하여 전염성 기관지염 바이러스에 노출된 또는 노출될 조류에서 상기 질병에 걸리는 경우를 줄일 수 있다.

적절하게는, 본 발명의 조성물은 조류 사료, 분말, 분무, 비강 분무, 비강 드롭, 현탁액, 용액, 주사액 또는 대량 접종을 위한 임의 표준형과 같은 동물 사료를 포함하나 이에 한정되지 않은 임의 허용 가능한 복용량으로 조제될 수 있다. 본 발명의 조성물은 영양 보충제의 형태로도 투여될 수 있는데, 조성물은 영양 보조제로 또는 추가 성분을 포함하는 영양 보조제의 일부로 만들어질 수도 있다.

본 발명에서 정제는 크기, 모양 및 제조 기술에 따라 달라질 수 있다. 경구 사용을 위한 정제의 경우에는 허용 가능한 캐리어에 락토즈 및 옥수수 전분을 추가 포함할 수 있다. 윤활성 물질이 정제에 추가될 수도 있는데, 예를 들면, 스테아레이트 마그네슘, 라우릴 설페이트 나트륨, 활석 등이 포함된다. 정제에는 또한 구연산 나트륨, 탄산칼슘 및 인산칼슘과 같은 부형제도 포함될 수 있다. 전분, 알긴산 및 복합 실리케이트와 같은 붕해제도 이용될 수 있다. 정제에는 예를 들면, 폴리비닐피롤리돈, 젤라틴, PEG-8000 및 아카시아 검과 같은 결합제가 포함될 수도 있다.

또는, 본 발명의 조성물을 지속적으로 경구 및 구강인두 점막으로 반복 운반을 위해 물, 또는 다른 액체와 같은 용매 또는 분산제와 함께, 선택적으로 약학적으로 허용 가능한 캐리어내에 시럽, 용액, 액상 제형, 연무 또는 분무와 같은 액상형으로 조제될 수도 있다. 바람직하게는 입, 비인두(nasopharnyx) 및 목구멍 조직에 조성물이 오래 접촉할 수 있도록 하기 위해 처리 시간은 약 5 내지 60분이며, 보다 적절하게는 약 20 내지 30분이 된다. 또는, 이와 같은 제형은 사용하기 전에 물 또는 다른 물질과 희석하기에 적절한 농축된 형태를 가질 수도 있다.

본 발명의 조성물은 허용 가능한 캐리어와 함께 조제될 수도 있다. 허용 가 능한 캐리어에는 (a) 글리세린; (b) 에탄올; (c) 포스포리피드; (d) MCT 오일; (e) 물; 그리고 (f) 전분, 셀룰로오즈, 사이클로덱스트린, 실리카 및 지질/지방을 포함하나 이에 한정시키지는 않는다.

조성물을 동물 사료의 성분과 같은 씹을 수 있는 형태로 조제하거나 음식 첨가제로 조제할 수도 있다. 본 발명의 조성물은 희석제 존부하에 캡슐 형태로도 조제될 수 있다. 캡슐의 경우에, 유용한 희석제에는 락토즈 및 건조된 옥수수 전분이 포함된다. 현탁액이 이용되는 경우에, 에멀젼화 및/또는 현탁제를 현탁액에 이용할 수도 있다. 또한, 상기에서 설명된 로젠지(lozenge)의 하나 또는 그 이상의 성분들을 포함하는 고형 조성물을 연질 및 경질 젤라틴 캡슐에 이용할 수도 있다.

본 발명의 조성물을 에어로졸 또는 흡입 조성물로 조제할 수도 있다. 이와 같은 조성물들은 공지의 기술을 이용하여 만들 수 있다. 제형의 타입에 따라 적절한 캐리어에는 다음의 성분들이 포함될 수도 있다: 하나 또는 그 이상의 보존제와 염, 생체 이용성을 증가시키기 위한 흡착 프로모터, 플로오르카본 및/또는 통상의 용해제 및 분산제.

공지의 임의 표준 운반 수단을 이용하여 조성물을 투여할 수도 있다. 조성물은 물 또는 용액 첨가제로 조제될 수도 있다. 또한, 제형을 난내(in ovo) 투여할 수도 있다.

본 발명의 조성물에 선택적으로 포함될 수도 있는 다른 물질들에는 레스베라트롤(트리하이드록시스틸벤), 이노시톨 및 다른 B-복합체 비타민 및 추가 항염증제 등이 포함된다. 또한, 감미제, 풍미제, 발색제, 염료, 보존제, 에멀젼화제, 현탁 제, 용융제, 부형제, 점활제 및 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 글리세린과 같은 용매 또는 희석제 및 이들의 여러 복합물 등이 본 발명의 조성물에 포함된다.

전염의 감소 또는 예방은 한 조류(감염된)에서 다른 조류(비-감염된)로 미생물의 전파를 방지 또는 감소시키는 것이다. 일부 조류들은 감염 캐리어로 간주할 수도 있다. 캐리어는 전염성 기관지염 미생물을 활발하게 방출시키지만 급성 감염을 겪지 않은 개체들이다. 이들 캐리어들은 전염성 기관지염의 균주에 지속적으로(만성적으로) 감염되어 있다고 말할 수 있다. 지속적으로 감염된 쉐더(shedder)에 추가하여, 다른 감염성 조류는 활성적으로 감염된 것들, 그리고 급성 감염의 초기 또는 후기 단계의 것들이 될 수도 있다. 본 발명의 한 측면은 전염성 기관지염의 균주에 감염된 조류에 본 발명의 조성물을 투여하여 질병이 다른 조류로 번지는 것을 방지하는 것에 관한 것이다.

예방차원의 처치는 활성 감염을 줄이기 위한 목적으로 전염성 기관지염 바이러스에 최근에 노출된 또는 전염성 기관지염 바이러스에 노출될 수 있는 조류를 대상으로 한다. 이와 같은 예방적 처치를 단독으로 또는 백신 접종에 추가하여도 효과가 있을 수 있다. 본 발명의 예방차원의 처치는 아직 백신을 이용할 수 없는 전염성 기관지염의 바이러스 균주에 대응하여 이용할 수도 있다.

본 발명은, 질병의 지속 기간, 치사율 또는 부작용을 감소시켜 질병을 치료하기 위해 전염성 기관지염에 감염된 조류를 치료하는 방법에도 관한 것이다. 본 발명은 바이러스 감염의 부작용 또는 최소 한 가지 증후를 감소, 치료, 경감 또는 부분적으로 예방할 수 있다. 이와 같은 증후에는 에너지 감소, 알 생산 감소, 연질 성 난각, 공동 팽창, 비루(nasal discharge), 기침, 재채기, 짹짹거림, 설사, 기관지 덜걱거림, 눈물어린 눈 및 복강에 유체 축적 등이 포함된다.

조성물은 통상의 상업적인 가금류를 포함하는 조류 종의 임의 멤버에 투여될 수도 있는데: 닭, 칠면조, 오리, 거위 및 흔하지 않지만, 거위뿐만 아니라 카나리아 및 앵무새와 같은 가정의 애완동물로 흔히 이용되는 다른 조류 종에도 투여될 수 있다.

조성물을 조류의 비강 통로에 직접 분무하거나, 조류의 구강으로 분무하여 투여할 수도 있고 또는 조성물을 조류들에 노출되는 연무를 만들어서 투여할 수도 있다. 따라서, 조성물은 살바이러스(virucidal) 또는 바이러스 증식억제 방식으로 작용시켜 예방학적으로 제공될 수도 있다. 또는, 조성물을 이용하여 바이러스의 투과율을 감소시킬 수도 있다.

조성물의 유효량은 처리될 개체, 투여 방식, 이용되는 특정 활성 성분의 활성, 나이, 체중, 전반적인 건강, 조류의 성별, 상용 사료, 투여 시간, 배설률, 이용되는 특정 성분의 복합, 조성물 주요 성분의 전체 함량, 질병 또는 징후의 중증도와 같은 요인들에 따라 다양해질 수 있다. 이들 요인들을 고려하는 것은 당업자가 할 수 있는 범위 내에 있다.

조성물은 필요시, 하루에 약 1 내지 약 15회 필요에 따라 투여될 수 있고, 보다 적절하게는 필요시에 약 2 내지 약 12회 투여될 수 있으며 또는 가장 적절하게는 필요시 하루에 약 6 내지 약 10회 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 상기에서 설명하는 것과 같이 정제, 캡슐, 분말, 구강 분무, 비강 분무, 씹을 수 있는 조성물, 현탁액, 용액 및 난내 투여용을 포함한 임의 허용 가능한 복용량으로 투여될 수 있다.

조성물의 각 복용량에는 본 발명의 조성물의 안전한 유효량이 포함된다. 각 치료요법적 투여를 위한 유효량은 심황 또는 녹차로부터 수득할 수 있는 성분들이 전체적으로 약 0.001㎎ 내지 약 1g이 포함된다. 보다 바람직하게는 각 치료요법적 투여를 위한 유효량은 심황 또는 녹차로부터 수득할 수 있는 성분들이 전체적으로 약 0.01㎎ 내지 약 0.5g이 포함된다.

조성물은 사료 또는 물 첨가제로 투여되는 경우에, 사료 또는 물 첨가제 내에 활성 성분들의 양은 전체 사료 조성물의 약 0.01 내지 50 중량%가 된다. 적절한 실시예에서, 활성 성분들은 전체 사료 조성물의 약 0.1 내지 약 30 중량%로 구성되며, 가장 적절한 실시예에서, 활성 성분은 전체 사료 조성물의 약 1 내지 약 20중량%로 구성된다. 활성 성분들은 심황으로부터 수득할 수 있는 성분, 녹차로부터 수득할 수 있는 성분, 생강으로부터 얻을 수 있는 성분 및/또는 고추냉이로부터 얻을 수 있는 성분들로 구성될 수도 있다.

조성물을 분무로 투여하는 경우, 로젠지 또는 캡슐과 비교하였을 때, 분무 조성물은 이를 필요로 하는 부위에 활성 성분들을 직접 운반하기 때문에 각 활성 성분들의 양이 감소될 수도 있다. 조성물은 물 또는 다른 적절한 희석제를 추가하여 임의 원하는 농도로 희석시킬 수도 있는데; 희석된 조성물에는 약 0.1% 내지 약 99.999%의 물 또는 다른 희석제가 포함될 수 있으며, 보다 적절하게는 약 10% 내지 약 40% 물 또는 다른 희석제가 포함될 수 있으며, 가장 적절하게는 물 또는 다른 희석제 10% 내지 약 30%가 포함될 수 있다.

다음의 적절한 범주는 본 발명에 따라 분무 조성물로 투여하였을 경우에 적절한 본 발명의 조성물을 특징한다.

본 발명에 따라 분무로 투여되는 조성물의 각 그램에는 바람직하게는 가용성 올레오레신 심황과 같은 심황 추출물 약 0.001 mg 내지 약 12 mg를 포함한다. 보다 바람직하게는, 조성물의 각 그램에는 가용성 올레오레신 심황과 같은 심황 추출물 약 0.01 mg 내지 약 9 mg를 포함한다. 본 발명의 방법에 따라 분무로 투여되는 조성물의 각 그램에는 녹차 잎 추출물과 같은 녹차 추출물 약 0.001 mg 내지 약 20 mg을 포함한다. 가장 바람직하게는 조성물의 각 그램에는 녹차 잎 추출물과 같은 녹차 추출물 약 0.01 mg 내지 약 15 mg을 포함한다.

본 발명의 방법에 따라 분무로 투여되는 조성물의 선택적 실시예의 각 그램에는 Aquaresin® 생강과 같은 생강 추출물 약 0.001 mg 내지 약 10 mg을 포함한다. 가장 바람직하게는, 조성물의 각 그램에는 Aquaresin® 생강과 같은 생강 추출물 약 0.01 mg 내지 약 7 mg을 포함한다.

선택적으로, 조성물의 각 그램에는 또한 고추냉이 뿌리 추출물 약 0.0001 mg 내지 약 1 mg을 포함하고, 보다 바람직하게는 약 0.001 mg 내지 약 2 mg을 포함하고, 가장 바람직하게는 약 0.5 mg 내지 약 1 mg의 고추냉이 뿌리 추출물을 포함한다.

또한, 조성물의 유효량을 이용하여 장비에 있는 IBV의 임의 균주 전부 또는 일부를 비활성화시키기 위해 조성물을 조류에 투여하는데 이용되는 임의 장비를 살 균 및/또는 멸균할 수 있다. 장비를 살균하기 위하여 임의 장비 또는 기계 표면에 조성물을 국소적으로 제공할 수도 있다.

본 발명은 다음에서 제공하는 예들에 의해 추가 설명되겠지만 어떠한 방식으로건 본 발명을 이에 제한시키지는 않는다. 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위에 의해서 결정된다.

예 1

제형은 물 또는 임의 다른 적절한 희석제로 1-1300 희석하여, 에어로졸 또는 액상 제형으로서 분무, 연무와 같은 여러 용도에 이용하기 위해 더 희석된 조성물을 제공할 수도 있다.

예 2

여러 복용량 및 투여 경로를 이용하여 닭에게서 전염성 기관지염을 치료하기 위해 예 1에서 설명된 조성물 1의 안정성 및 내성 연구를 실행하였다. 결과에 따르면, 조성물 1은 가금류의 물 공급원에 효과적이고 적절한 액체 첨가물이며, 비강 점액 조성물에 효과적이고 적절한 액체 첨가물 또는 가금류 사료에 효과적이고 적절한 고형 첨가물이라는 것이 설명된다.

약 7일 된 132마리의 White Leghorn 닭을 11군으로 나누어, 표 1(a)-1(c)에 따른 조성물 1의 여러 형태 및 농도로 투여하고, 연속하여 전염성 기관지염 바이러스에 노출시켰다.

[표 1(a)]

[표 1(b)]

[표 1(c)]

각 우리에 닭을 세 마리씩 가둔다. 우리는 약 80℉, 상대습도는 65%로 유지시켰다. 우리에는 매일 16시간 동안 연속하여 백열등을 비추고, 8시간은 어둡게 유지한다.

조성물 1에 대해 닭의 내성 및 독성을 확인하기 위해 닭을 모니터하였다. 각 군에서 소비되는 물과 사료의 양을 측정하고, 개별 닭의 체중을 주기적으로 측정하였다.

비강 드롭의 형태로 조성물 1을 투여한 닭의 경우, 사료와 물과 함께 비강 드롭은 콧구멍 하나당 1방울씩 하루에 4회, 4일간 투여되었다. 드롭은 1시간 간격으로 아침에 2회 그리고 약 1시간 간격으로 오후/저녁에 2회 투여될 수 있다. 각 콧구멍에 총 4회 드롭을 하루에 투여할 수 있도록 이와 같은 비강 투약 과정이 탄 력적이 될 수 있으나 연속적으로 아침 또는 오후에 1시간 이내에 투여하지는 않는다. 비강 드롭은 드롭당 50㎕ 또는 ㎖당 20 드롭이 되는 표준 병 타입의 드롭퍼를 이용하여 투여하였다.

사료 첨가제로 조성물 1을 투여받은 닭의 경우에, 사료 첨가제는 4일간 제공되었다. 24마리 닭으로 구성된 한 그룹에는 높은 약량의 사료 첨가제가 제공되었다. 24마리의 닭으로 구성된 다른 그룹에는 중간 약량이, 그리고 나머지 24마리 닭에는 낮은 약량이 공급되었다. 사료와 물은 일반적인 조건하에 4일간 임의 제공되었다.

물 첨가제로 조성물 1을 투여받은 닭의 경우에, 물 첨가제는 4일간 제공되었다. 24마리 닭으로 구성된 한 그룹에는 높은 약량의 물 첨가제가 제공되었다. 24마리의 닭으로 구성된 다른 그룹에는 중간 약량이, 그리고 나머지 24마리 닭에는 낮은 약량이 공급되었다. 물은 일반적인 조건하에 4일간 임의 제공되었다. 사료도 임의 공급되었다. 이 실험에서 대조군을 4일간 표준 조건에 따라 우리에 가두고 사료를 공급하였다.

최적의 효과적인 약량을 결정하기 위해, 각 그룹의 닭에 1주일에 1-4일간 조성물 1을 투여하였다. 닭에서 깃털이 엉키거나, 낙담한 자세, 비정상적 닭(down birds), 또는 스트레스나 또는 불편함을 나타내는 다른 징후를 포함한 스트레스 일반적인 불안감 또는 비정상적 거동의 임의 징후가 있는지를 매일 관찰하였다. 연구 종료시에 닭을 안락사시키고 부검을 하여 임의 병소를 찾는다. 수집된 샘플들은 조직학적 평가를 위해 10% 포르말린에 두었다.

사료와 물의 무게를 재고 우리당 하루에 양을 측정하였다. 데이터 수집 형태로 그 양을 기록하였다. 1일째에 사료와 음식량을 측정하여 기록하였다. 2-4일째에 추가 사료와 물을 측량하고 사료 및 물 리스트에 추가하였다. 5일째에, 남아있는 사료와 물의 무게를 재고 전체 연구 기간 동안 우리당 소비된 전체 사료 및 물을 계산하였다.

표 2에서는 체중에서 변화를 요약하였다. 적은 사료, 적은 물과 사료, 중간 정도의 사료, 많은 양의 사료를 제공받은 비강 및 대조군 닭에서 처리군들간에 통계학적으로 유의적인 차이는 없었다.

[표 2]

[표 2](계속)

[표 2](계속)

표 3은 물과 사료 소비 데이터를 요약하였다. 이 표에서 데이터는 각 우리에 근거하여 요약하였다. 자연적으로 발생하는 사료 및 물의 손실을 확인하기 위해 분석에는 이용되지 않은 4개 우리가 포함되었다. 적은 사료, 적은 물과 사료, 중간 정도의 사료, 많은 양의 사료를 제공받은 비강 및 대조군 닭에서 처리군들간에 통계학적으로 유의적인 차이는 없었다.

[표 3]

[표 3](계속)

[표 3](계속)

표 4는 사료 소비 데이터에 대한 체중 증가 비율을 요약하였다. 이 표에서 데이터는 한 우리당 기초하여(per pen basis) 요약하였다. 분석에 따르면, 적은 양의 사료, 적은 양의 물과 사료, 중간 정도 양의 사료, 많은 양의 사료를 제공받은 비강 및 대조군 닭에서 처리군들간에 통계학적으로 유의적인 차이는 없었던 것으로 나타났다.

[표 4]

[표 4](계속)

[표 4](계속)

이와 같은 결과들로 가금류에 조성물 1의 적절한 약량을 제공한다. 데이터에 따르면 조성물 1은 안정성 문제 또는 내성 문제없이 여러 농도(낮은, 중간, 높은)의 약물이 혼합된 사료를 가금류 사육에 제공될 수 있다는 것을 설명한다.

예 3

예 1의 희석안된 항바이러스 조성물, 조성물 1과 10배 연속 희석물을 준비하여 VERO E6 세포와 10일령의 부화된 난에 IBV에 대항하여 항바이러스 활성을 테스 트하였다. 추가로, 플라시보를 유사하게 희석하여 테스트하였다.

연속 세포주 VERO E6 (CRL-1586)는 American Type Culture Collection (Rockdale, MD)으로부터 구하여 2mM L-글루타민, 1.5㎎/ℓ 중탄산나트륨, 0.1mM 비필수 아미노산, 10mM 피루베이트 나트륨, 10% 태아 송아지 혈청(Invitrogen Corp [Gibco], Carlsbad, CA)이 보충된 Minimum Essential Medium (Eagle)에서 37℃, 5% CO₂, 증식시켰다. 세포를 T75 플라스크 (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ)에서 생장시키고, 96웰 플레이트로 옮긴 후, 90% 합류되도록 생장시켰다.

조직 배양물 전염성 약량₅₀(ICID₅₀), IBV Beaudett 균주 1×10³ 농도를 세포 배양물 유지 배지(1% 태아 송아지 혈청 포함)상에서 항바이러스 화합물 또는 플라시보의 10배 희석된 7개 희석물(시작은 1×10^-3 으로-세포에 비독성임)과 혼합하였다. 혼합물을 30분간 실온에서 항온처리하였고; 그 다음 세포에 접종하기 위해 각 혼합물의 일련의 10배 희석물 9개를 준비하였다. 세포로부터 세포 배양 배지를 제거하고, 혼합물을 단층상에 접종시켰다. 세포 배양물 유지 배지만을 제공받은 네거티브 대조군 웰도 실험에 포함시켰다. 세포를 7일간 37℃, 5% CO₂상에서 배양시켜 세포변성 효과(CPE)에 대해 매일 2회 검사하였다.

도 1에서는 IBV상에 항바이러스 효과 결과를 나타낸 것이다. 도 3에서는 본 발명의 조성물에 의해 바이러스 감염으로부터 보호된 VERO E6 세포와 조성물이 공급되지 않아 IBV에 감염된 세포를 보여준다. 1×10^-3 희석에서 조성물 1의 항바이러 스 화합물이 평균 1×10³⁰에서 1×10¹⁸ TCID₅₀으로 약 100배 이상 IBV 역가를 감소시켰다. 1×10^-4 희석에서 조성물 1은 IBV 역가를 2배 감소시켰다. 조성물 1의 희석배수가 높은 다른 희석물은 IBV의 역가를 감소시킨 것이 없었다. 비교를 위해, 임의 희석배수에서도 플라시보가 바이러스 역가를 감소시킨 것이 관찰되지 않았는데, 이는 조성물 1의 활성 성분이 항바이러스 효과를 담당한다는 것을 설명한다. 추가로, 네거티브 대조군 웰에서 CPE를 가지는 것은 없었다.

조성물의 효과를 결정하기 위해 IBV에 감염된 닭의 부화란도 테스트하였다. VERO E6 세포와 같은 방법으로 부화란(embryonic chicken egg)을 준비하였다. 실험 방법도 동일한데, 단 조직 배양 세포 대신에 10일 된 부화란에 접종하고, 조성물 1과 플라시보의 시작 농도는 화합물이 배에 독성이 없기 때문에 희석하지 않았다. 특정 병인균이 없는(SPF) 닭 수정란을 Sunrise farms (Catskill, NY)에서 구하여 1-일간 37℃에서 항온처리하였다. 부화란의 융모요막(chorioallantoic sac (CAS))으로 PBS(pH7.4)에서 준비된 조성물 100㎕와 각 10배 희석된 조성물 또는 플라시보에 1×1O⁴ 배 감염성 약량₅₀(EID₅₀) 1×10⁷ EID₅₀ IBV을 혼합하여 접종하였다. PBS만을 제공받은 네가티브 대조군 난도 포함되었다. 난은 37℃에서 항온처리하여 7일간 매일 불빛을 비추어 치사율을 기록하였다. 처음 24시간 내에 발생되는 임의 치사율은 접종과 관련된 외상으로 인한 것으로 간주하여 무시하였다. 7일째에, 남아있는 모든 난을 4℃로 냉각시켜 임상 징후에 대해 배를 검사하기 위해 난을 깼다.

도 2에서는 부화란에 IBV에 대한 조성물 1의 효과를 보여준다. 조성물 1을 1×10^-2으로 희석하면 역가를 100배 감소시켜 IBV의 역가에 측정가능할 정도의 효과를 가졌다. 그에 비하여, 1×10^-3 내지 1×10^-7으로 희석의 경우나 또는 임의 희석농도의 플라시보에서는 효과가 관찰되지 않았고, 이는 조성물 1에서 활성성분이 항바이러스 효과를 맡고 있다는 것을 나타낸다.

예 4 - 닭에서 전염성 기관지염 바이러스에 대항 테스트

처리 시간은 챌린지(challenge) 6시간 전, 2시간 전 그리고 2시간 후다. 챌린지후 5일째에 실시간 RT-PCR을 이용하여 전염성 기관지염 바이러스에 대해 조류를 검사하고, 질병의 임상적 징후들 및 병소 특징을 기록함으로써 항바이러스 활성을 평가하였다.

2주령의 특정 병인균 없는 레그혼종(leghorn) 닭을 본 연구에 이용하였다. 조류는 HEPA 여과된 포지티브 압력 홀스팔(horsefal) 분리 유닛에 넣고, 사료와 물을 임의로 제공하였다.

조성물을 투여하는데 세 가지 다른 경로들을 테스트하였다. 예 1의 조성물 200㎕는 비강 경로를 통하여 각 조류의 콧구멍으로 직접 투여하였다.

조류당 예 1의 조성물 약 1㎖을 분무기를 이용하여 분무하였다. 분리기로 신선한 공기가 운반되는 것을 일시적으로 차단시키고 조류에 분무한 후 약 10분 후에 신선한 공기의 공급을 재개하였다.

조류는 구개파열(cleft pallet)을 가지고 있기 때문에 음용수에 조성물을 제공하여 약물이 구강 공동 및 누(sinuse)에 노출되도록 해야만 한다. 음용수에 예 1의 조성물을 제공하기 전 1시간 동안 물을 못 마시게 하였다. 조류당 예 1의 조성물 약 1㎖를 동량의 재구성된 탈지분유와 혼합하였다. 조류가 30분 이내 모든 유체를 마시지 못하였을 때 동일 용적의 남아있는 물질을 경구로 투여하였다. 항바이러스 화합물이 소비된 후에 새로운 물을 제공하였다.

[표 5]

각 그룹에서 조류의 수

처리된 모든 조류와 처리안된 군들 중 하나에 조류당 Mass 41 병인균주 IBV 1×10⁴ 배아 감염성 약량₅₀으로 챌린지시켰다. 챌린지 바이러스를 비강내로 투여하였고 질병의 임상 징후에 대해 매일 2회씩 조류를 검사하였다. 실시간 RT-PCR을 이용하여 기관 내에서 바이러스 감지로 결정된 바와 같이 챌린지 바이러스는 조류의 90%를 감염시키는데 충분하였다.

임상 징후를 매일 기록하였고, 거의 죽어가는 조류들을 꺼내어 죽이고, 부검 하였다. 챌린지 5일 후(이는 IBV 백신 효과 테스트에서 일반적임), 조류들을 죽이고 부검하였다. 부검시, 누 및 호흡기관 스왑(swab)을 수거하여 얼음 냉각된 PBS(pH7.4)에 두었다. 누 및 호흡기관 스왑으로부터 정량적인 실시간 RT-PCR을 함으로써 바이러스의 존재를 결정하였다. 효과는 챌린지 바이러스에 포지티브인 비-처리 대조군의 최소 90% 및 바이러스에 네거티브인 처리된 조류의 최소 90%에 근거하였다. 효과는 임상적 징후 및 병소에도 근거하였다. 병소를 기록하였고, 조직병리학을 위해 기관을 수거하였다. 기관을 10% 중화 완충된 포르말린에 모으고, 조직병리학을 위해 제공되었다. 조직들을 파라핀으로 통상적으로 처리하여 5㎛ 단편을 절단하여 페마토실린 및 에오신 착색시켰다. 상피 과형성, 림프구 침윤 및 상피 탈섬모화(deciliation)의 중증도를 기록하였다.

처리된/챌린지를 받은 군 모두를 대조군(챌린지를 받은 그리고 받지 않은)과 비교하였다.

챌린지 2시간 전 또는 2시간 후 비강 접종 및 챌린지 6시간 전, 2시간 전 그리고 2시간 후에 분무하였을 때 최상의 결과를 제공하였다. 데이터 요약은 하기 표 6에 제공한다.

[표 6]

전염성 기관지염 바이러스(IBV) 챌린지^a 전후 예 1의 조성물로 처리하고 난 뒤 2주령 닭의 임상 징후와 바이러스 검출

a 조류에 3.1×10⁴ 배아 감염성 약량₅₀/병인균 IBV, 균주 Mass41의 조류로 챌린지시켰다.

b 임상징후는 챌린지후 5일에 기록하는데, 호흡관 수포음, 눈물 흘림, 일부 경우(챌린지 대조군만) 콧구멍에 분비물로 구성된다.

c 챌린지후 5일에 호흡관 스왑으로 직접 실시간 RT-PCR를 통하여 바이러스를 감지하였다.

d 실시간 RT-PCT에 평균 사이클의 증폭시 시작되는 시점(Ct) 값이 호흡관에서 감지되는 상대적인 양을 나타낸다.

예 5 - 투여량 반응 실험

분무 접종을 이용하여 활성 조성물이 닭에서 IBV에 대항하는 항바이러스 효 과를 유도할 수 있는 최소의 양을 확인하였다.

예 4에서 이용된 동일한 종류, 동일한 나이의 조류, 우리(cage)가 이 예에서도 이용되었다.

예 1의 제형은 다음의 농도로 이용되었다. 희석안된 것, 그리고 다음 비율로 제형에 물을 희석하였다: 1:5, 1 :10, 1 :20, 1 :40, 1 :80, 1:160, 1:320, 1:640, 1:1280. 처리된 조류와 처리안된 조류 군중 하나에 예 4에서 설명된 것과 같이 챌린지시켰다. 처리안된 군을 네가티브 대조군으로 사용하였다.

[표 7]

각 그룹^a에 대한 조류의 수, 희석, 처리를 나타내는 실험적인 프로토콜

표에 포함되지 않은 추가 대조군들은 다음과 같다;

1. 예 1의 희석안된 제형로 비강 경로를 통하여 처리를 받았고, 챌린지를 받지 않은 10마리 조류,

2. 예 1의 희석안된 제형로 분무 접종을 통하여 처리를 받았고, 챌린지를 받지 않은 10마리 조류,

3. 처리를 받지 않고 챌린지만 받은 10마리 조류,

4. 처리안된, 챌린지를 받지 않은 네가티브 대조군으로 사용되는 10마리 조 류.

예 4의 과정을 데이터 수집 및 분석을 위해 실시하나 단 조직병리학적 분석은 실시하지 않았다. 그 결과를 표 8에 제공한다.

챌린지 전 2시간에 처리하면 감지가능한 바이러스를 로그눈금 3정도로 낮춘 반면, 챌린지후 2시간에 처리하면 감지가능한 바이러스 수준이 로그눈금 2.5정도로 낮아진다. 이는 2주령의 특정 병인균이 없는 민감한 닭에 병인성 IBV 1×10³ EID₅₀미만으로 챌린지시키면 대부분의 조류에서 질병이 나타나지 않는 것으로 알려져 있기 때문에 상당한 의미가 있다. 낮은 희석비율로 처리된 군에서는 임상적 징후를 보이는 조류가 거의 없다는 하기 데이터와 일치한다. 따라서, 챌린지전 2시간에 1:40 또는 이보다 낮은 희석비율로 본 발명의 조성물로 처리하면 질병을 감소시키거나 예방할 수 있을 것이다. 감염 후 2시간에 처리하면 1:40 희석 또는 이보다 낮은 비율로 희석하여 제공하였을 때 질병의 개선을 결과와 일치된 약량 반응을 보여주었다.

[표 8]

병원성 IBV로 챌린지하기 2시간 전후 특정 병원균이 없는 2주된 닭에서 분무 처리의 투여량 적정

- 처리 = 1×10⁴⁵ EID₅₀/병인균 IBV, 균주 Mass41의 조류로 챌린지시킨 후, 예 1의 제형을 조류당 1㎖의 약량으로 희석안된 또는 희석된 상태로 분무하였다.

- 여러 다른 위첨자들이 있는 컬럼에 수치는 p< 0.1 (Tukey-Kramer HSD)에서 통계학적으로 상이하다.

- 평균 Ct는 그룹당 10마리에서 취한 호흡관 스왑을 나타내고, 다른 언급이 없는 한, 챌린지 후 5일째에 취한 스왑이다.

- 대략적인 게놈 카피 수 = 공지된 바이러스 게놈 카피 수에 근거하여 호흡관 스왑에서 감지되는 바이러스 게놈의 수

* 이 그룹에서 3마리 조류가 죽었기 때문에 이값은 정확하지 않을 것이다. 치사율이 챌린지 때문이라면 결정하지 않아야 한다.

-ND = 실시하지 않음

본 발명의 구조와 기능의 상세한 설명과 함께 본 발명의 여러 가지 특징 및 장점이 상기 설명을 통하여 제시되었지만, 이는 설명을 위함이며, 본 발명의 원리내에서 모양, 크기 및 배열 등에 변화가 첨부된 청구범위에서 표현된 넓은 범위의 의미가 가지는 수준으로 만들어질 수 있을 것이다.

상술한 바와 같이, 본 발명은, 전염성 기관지염(INFECTIOUS BRONCHITIS) 발병을 치료 또는 감소시키는 방법과. 보다 구체적으로, 조류에서 전염성 기관지염을 치료 또는 감소시키는 방법 뿐만 아니라, 전염성 기관지염의 전염성을 감소시키는 방법을 제공하는데 사용된다.

Claims

전염성 기관지염에 걸린 조류에게 안전한 유효량의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 전염성 기관지염 바이러스성 균주를 갖는 조류를 치료하는 방법으로서,

상기 조성물은,

심황 분말 추출물(turmeric powder extract), 심황 유체 추출물(turmeric fluid extract), 심황 추출물, 심황 분말, 심황 전체 식물의 적어도 일부분, 심황 팅크제(turmeric tincture), 및 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제 1 성분과,

녹차 분말, 녹차 분말 추출물, 녹차 유체 추출물, 녹차 전체 식물의 적어도 일부분, 녹차 팅크제, 및 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제 2 성분과,

생강 분말 추출물(ginger powder extract), 생강 유체 추출물(ginger fluid extract), 생강 분말, 생강 전체 식물의 적어도 일부분, 생강 팅크제(ginger tincture), 및 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제 3 성분과,

허용 가능한 담체(carrier)를

포함하고,

상기 양은, 투여시, 전염성 기관지염에 걸린 다른 조류의 발병을 감소시키는데 효과적인, 전염성 기관지염 바이러스성 균주를 갖는 조류의 치료 방법.
전염성 기관지염에 노출되었거나 노출될 조류에게 안전한 유효량의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 전염성 기관지염의 발병 또는 전염을 감소시키기 위한 조성물의 예방적 사용 방법으로서,

상기 조성물은,

심황 분말 추출물, 심황 유체 추출물, 심황 추출물, 심황 분말, 심황 전체 식물의 적어도 일부분, 심황 팅크제, 및 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제 1 성분과,

녹차 분말, 녹차 분말 추출물, 녹차 유체 추출물, 녹차 전체 식물의 적어도 일부분, 녹차 팅크제, 및 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제 2 성분과,

생강 분말 추출물, 생강 유체 추출물, 생강 분말, 생강 전체 식물의 적어도 일부분, 생강 팅크제, 및 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제 3 성분과,

허용 가능한 담체를

포함하고,

상기 양은, 투여시, 상기 처리된 조류에 노출된 다른 조류의 발병을 감소시키는데 효과적인, 전염성 기관지염의 발병 또는 전염을 감소시키기 위한 조성물의 예방적 사용 방법.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 조성물은, 무수 제형, 액체 제형, 정제, 캡슐제, 사료 첨가제(feed additive) 및 물 첨가제(water additive)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 형태로 투여되는, 방법.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 조성물은 에어로졸(aerosol), 분무(spray) 또는 연무(mist)로서 투여되는, 방법.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 조성물은 난 내(in ovo) 투여되는, 방법.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 조성물을 투여하는 단계는, 장비 상에 위치한 적어도 일부의 전염성 기관지염 바이러스를 불활성이 되게 하도록, 장비의 아이템을 소독하기 위해 유효량의 조성물을 사용하는 단계를 더 포함하는, 방법.
제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 성분은 심황 추출물을 포함하고, 상기 제 2 성분은 녹차 추출물을 포함하는, 방법.
제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물의 각각의 그램은, 녹차 추출물 약 0.001mg 내지 약 20mg과, 심황 추출물 분말 약 0.0011mg 내지 약 30mg을 함유하는, 방법.
제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 3 성분은 생강 추출물을 포함하는, 방법.
제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 심황 분말 추출물 약 0.001mg 내지 약 30mg을 함유하는, 방법.
제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은, 고추냉이 뿌리, 고추냉이 오일, 고추냉이 분말 추출물, 고추냉이 유체 추출물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제 4 성분을 더 포함하는, 방법.
제 1항 내지 제 11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 인지질, 중간 사슬 트리글리세리드 오일 및 물로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 더 포함하는, 방법.
제 11항에 있어서, 상기 제 4 성분은 고추냉이 뿌리 추출물을 포함하는, 방법.
조류 사료(bird feed)로서,

조류 먹이 성분과,

안전한 유효량의 조성물을

포함하고,

상기 조성물은,

심황 분말 추출물, 심황 유체 추출물, 심황 추출물, 심황 분말, 심황 전체 식물의 적어도 일부분, 심황 팅크제, 및 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제 1 성분과,

녹차 분말, 녹차 분말 추출물, 녹차 유체 추출물, 녹차 전체 식물의 적어도 일부분, 녹차 팅크제, 및 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제 2 성분과,

생강 분말 추출물, 생강 유체 추출물, 생강 분말, 생강 전체 식물의 적어도 일부분, 생강 팅크제, 및 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제 3 성분을

포함하고,

상기 양은, 조류에게 사료로 투여시, 전염성 기관지염을 치료하거나, 상기 조류에서 전염성 기관지염의 발병을 감소시키거나, 상기 처리된 조류에 노출된 다른 조류에서 전염성 기관지염의 발병을 감소시키는데 효과적인, 조류 사료.
제 14항에 있어서, 상기 제 1 성분은 심황 추출물을 포함하고, 상기 제 2 성분은 녹차 추출물을 포함하는, 조류 사료.
제 14항 또는 제 15항에 있어서, 상기 조성물의 각각의 그램은, 녹차 추출물 약 0.001mg 내지 약 20mg과, 심황 분말 추출물 약 0.001mg 내지 약 30mg을 함유하는, 조류 사료.
제 14항 내지 제 16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 3 성분은 생강 추출물을 포함하는, 조류 사료.
제 14항 내지 제 17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 생강 추출물 약 0.001mg 내지 약 30mg을 함유하는, 조류 사료.
제 14항 내지 제 18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은, 고추냉이 오일, 고추냉이 뿌리, 고추냉이 분말 추출물, 고추냉이 유체 추출물 및 고추냉이 뿌리 추출물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 제 4 성분을 더 포함하는, 조류 사료.
제 14항 내지 제 19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 인지질, 중간 사슬 트리글리세리드 오일 및 물로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 더 포함하는, 조류 사료.
제 14항 내지 제 20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조류 사료는, 상기 조 류 사료 총 중량을 기준으로, 상기 조성물 약 0.001 내지 약 50 중량%를 함유하는, 조류 사료.
제 14항 내지 제 20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조류 사료는, 상기 조류 사료 총 중량을 기준으로, 상기 조성물 약 0.01 내지 약 30 중량%를 함유하는, 조류 사료.
제 14항 내지 제 20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조류 사료는, 상기 조류 사료 총 중량을 기준으로, 상기 조성물 약 0.1 내지 약 20 중량%를 함유하는, 조류 사료.
제 19항에 있어서, 상기 제 4 성분은 고추냉이 오일을 포함하는, 조류 사료.