CN110664907B - 一种预防囊膜病毒感染的组合物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种预防囊膜病毒感染的组合物,根据囊膜病毒吸附和侵入等动物宿主细胞起始的感染特性,以茶多酚(茶叶提取物)、淡竹叶提取物、迷迭香提取物、辣木提取物、白花蛇舌草提取物等天然植物提取物抗氧化剂为主,同时复配适宜的脂溶性抗氧化剂和辅料,制备一种“绿色、有机、安全、无公害”可用于预防动物或者家畜家禽囊膜病毒感染性疾病的组合物,以填补畜禽养殖实际生产过程中,除疫苗外,对畜禽病毒病无药可预防的被动局面。因此,本专利发明对保障畜禽养殖业正常生产,尤其是对当前尚无疫苗可预防的囊膜病毒病,或者是疫苗保护率低病毒性疾病,或者是畜禽免疫失败的补救措施等等防治,都具有非常重要的实际意义。
Description
技术领域
本发明涉及兽药技术领域,具体是指一种预防囊膜病毒感染的组合物及其制备方法与应用。
背景技术
病毒是一种细胞内寄生物,其复制必须依赖宿主细胞的生物大分子合成机制和能量方可进行。从化学组成上看,病毒主要是由核酸和蛋白质组成,某些复杂的病毒,特别是动物病毒,除核酸和蛋白质外,还含有脂类、碳水化合物和少量的其他成分。
核酸是病毒的遗传物质,蛋白质构成包裹核酸的衣壳。有些病毒衣壳外还包被有来自宿主的脂膜。病毒的结构简单,不具有典型动植物细胞所具有的细胞核、细胞液、细胞器、细胞膜等结构。一个简单的病毒粒子仅由核酸(DNA或RNA)和蛋白质外壳(衣壳)组成。少数病毒粒子只是在复制过程中才同时出现DNA和RNA,但其中之一只是遗传物质复制过程的中间体。
病毒的核酸在病毒粒子的中心折叠或盘旋成为病毒的核心,即病毒的基因组。病毒的蛋白质包围在核心周围,形成所谓的衣壳。衣壳是由许多在电子显微镜下可辨别的形态学亚单位(subunit)——衣壳粒(capsomer)(简称壳粒)所构成。不同的病毒粒子由不同种类和数量的壳粒包围。核心和衣壳合称核衣壳(nuclecapsid),这就是简单、成熟而完整的病毒或者病毒粒子,也是任何病毒所必须具备的基本构造。
除此之外,有些复杂的病毒,在核衣壳之外还有由糖蛋白和脂类构成的囊膜(envelope)。囊膜是某些病毒以出芽方式释放时由宿主细胞膜或核细胞膜获得的,具有保护核衣壳作用,还有决定这类有囊膜病毒粒子感染特异性的结构基础。有些囊膜病毒的囊膜上有纤突等附属物。囊膜主要见于动物病毒,如流感病毒即具有囊膜,同时囊膜上也有纤突,流感病毒囊膜纤突成分是血凝素和神经氨酸酶。
根据病毒有无囊膜,可分为无囊膜病毒和有囊膜病毒两类。1、无囊膜的病毒,是指病毒没有囊膜,不含脂质,对乙醚等有机溶剂不敏感,用乙醚处理后不丧失感染性。这类病毒有腺病毒、细小病毒、呼肠弧病毒、小RNA病毒等等。2、有囊膜的病毒,是指病毒有囊膜。因为脂质是大部分是囊膜的成分,囊膜的重要组成,病毒粒子中的脂质主要是磷脂和胆固醇,分别占50-60%和20-30%。所以这类病毒粒子用脂溶性溶剂,如乙醚、甲醇、氯仿、脱氧胆酸盐、磷脂酶等处理后会丧失感染性。如披膜病毒、正黏病毒、副黏病毒、弹状病毒、疱疹病毒、非洲猪瘟病毒等都含有囊膜脂质,均易被脂溶剂灭活。
病毒感染敏感的宿主细胞,首先是通过病毒粒子表面的吸附蛋白与细胞表面的病毒受体结合,然后以一定的方式进入宿主细胞内,释放出病毒基因组,引起致病变作用。自病毒吸附于细胞表面开始,到产生成熟子代病毒从感染细胞释放到细胞外的复制过程称为病毒的复制周期(virus replication cycle)。一个完整的复制周期包括吸附、侵入、脱壳、病毒大分子的生物生成、装配和释放价段。病毒的复制是一个连续不断的进行性过程,直至把细胞成分耗尽后该过程才终止。最初病毒粒子吸附到细胞表面是由于不同带电粒子间因静电引力而结合。所以,这种结合是可逆的、不稳定的;在病毒被吸引到细胞表面之后,病毒的表面蛋白能与细胞表面的受体形成结构互补的结合,这种相互作用是特异的、不可逆的。当病毒表面蛋白结合到宿主质膜上的适当受体时,就启动了病毒的侵入过程。
从病毒侵入细胞的方式看,目前发现有3种类型:一是病毒囊膜和质膜融合;二是细胞胞呑病毒;三是病毒直接进入胞浆。囊膜病毒多以囊膜和质膜融合的方式侵入细胞,紧接着病毒的囊膜、衣壳脱落去除,病毒核酸释放出来,完成病毒侵入细胞内的全过程,下一步则开始利用宿主细胞内合成核酸和蛋白质的原料、场所、机制和能量,完成病毒自身大分子的生物合成。
据文献资料不完全统计,畜禽常见由囊膜病毒感染引起的病毒病是:1、鸡有禽流感、新城疫、禽传染性支气管炎、鸡传染性喉气管炎、鸡马立克氏病、禽白血病等多种囊膜病毒感染性疾病;2、鸭有鸭禽流感、鸭瘟、水禽副粘病毒病、鸭坦布苏病毒病等囊膜病毒感染性疾病;3、鹅有鹅禽流感、水禽副粘病毒病、禽白血病等囊膜病毒感染性疾病;4、猪有非洲猪瘟、猪瘟、猪蓝耳病、猪伪狂犬病、猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪乙型脑炎等囊膜病毒感染性疾病;5、牛、羊有牛病毒性腹泻、牛暂时热、牛传染性鼻气管炎、小反刍兽疫等囊膜病毒感染性疾病;6、犬、猫有犬瘟热、犬传染性胃肠炎、猫传染性腹膜炎等囊膜病毒感染性疾病。除此之外,在兽医实际临床诊疗过程中经常会因病毒容易变异,给临床疾病防治带来一定程度的困难。因此,目前迫切需要研发一种“绿色、有机、安全、无公害”的广谱抗病毒药物,用于畜禽病毒性疾病防治和治疗,克服疫苗临床应用的缺点和不足,显得尤其重要。
发明内容
本发明根据囊膜病毒吸附和侵入等动物宿主细胞起始的感染特性,以茶多酚(茶叶提取物)、淡竹叶提取物、迷迭香提取物、辣木提取物、白花蛇舌草提取物等天然植物提取物抗氧化剂为主,同时复配适宜的脂溶性抗氧化剂和辅料,制备一种“绿色、有机、安全、无公害”可用于预防动物或者家畜家禽囊膜病毒感染性疾病的组合物,以填补畜禽养殖实际生产过程中,除疫苗外,对畜禽病毒病无药可防治的被动局面。
本发明的适用的家养禽包括:各种产肉、蛋的家禽,包括鸡、鸭、鹅、鸽;适用的家畜主要是各种品种的猪、牛、羊。
本发明适用上述家养禽畜的各个生长阶段,包括幼龄阶段、生长阶段、种用阶段。
本发明通过下述技术方案实现:一种预防囊膜病毒感染的组合物,按重量份计,包括100~800份A组分,100~500份B组分,50~200份C组分,1000~9000份D组分;
所述A组分为天然植物抗氧化提取物,具体包括茶多酚;
所述B组分为脂溶性抗氧化剂,具体包括二丁基羟基甲苯;
所述C组分为抗氧化增效剂,具体包括柠檬酸;
所述D组分为辅料,具体包括:腐植酸钠、木质素磺酸盐、玉米粉、无水葡萄糖、预糊化淀粉、羧甲基纤维素钠中的至少一种;
为了更好地实现本发明,进一步地,按重量份计,所述A组分的天然植物抗氧化提取物还包含有淡竹叶提取物、迷迭香提取物、辣木叶提取物、白花蛇舌草提取物。
为了更好地实现本发明,进一步地,按重量份计,所述B组分的脂溶性抗氧化剂还包含有丁基羟基茴香醚、乙氧基喹啉、特丁基对苯二酚、没食子酸丙酯、抗坏血酸棕榈酸酯。
为了更好地实现本发明,进一步地,按重量份计,所述C组分的抗氧化增效剂还包含有山梨酸和苹果酸。
为了更好地实现本发明,进一步地,按重量份计,具体包括500份A组分,400份B组分,100份C组分,8500份D组分;
A组分由100份茶多酚、100份淡竹叶提取物、100份迷迭香提取物、100份辣木叶提取物、100份白花蛇舌草提取物构成;
B组分由200份二丁基羟基甲苯、200份丁基羟基茴香醚构成;
C组分由100份柠檬酸构成;
D组分由7500份腐殖酸钠、1000份木质素磺酸盐构成。
本技术方案中,各组分具体质量要求如下:
一、植物抗氧化提取物的质量要求
1、茶多酚
茶多酚(pyrocatechin)亦称维多酚,是以绿茶为原料经过萃取法或沉淀法制取的一类多酚化合物的总称。主要包括儿茶素、黄酮、花青素、酚酸等化合物,其中儿茶素约占茶多酚总量的60%-80%。
茶多酚为浅黄色或浅绿色的粉末,有茶叶味,易溶于水、乙醇、醋酸乙酯;在酸性和中性条件下稳定,最适宜pH值范围4-8。茶多酚类物质是一些含有2个以上羟基的多元酚,具有很强的供氢能力,能与脂质自由基结合,使自由基转化为情性化合物,终止自由基的链锁反应。茶多酚抗氧化作用的主要成分是儿茶素(表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯以及儿茶素)。茶多酚无毒,对人体和畜禽无害。
2、淡竹叶提取物
淡竹叶为禾本科植物淡竹叶(Lophatherum gracile Brong)淡竹叶提取物以其茎叶提取而制得的,其主要成分为黄酮类、多茶酚等。淡竹叶中所含的多种黄酮类化合物,包括木犀草素、牡荆素、苜蓿素、异荭苷等,具有抗氧化、抗病毒、保肝、利尿、平喘等药理作用。淡竹叶抗氧化物的作用特点:是具有阻断脂质自动氧化的功能,能螯合过渡态金属离子,并且还是一种天然的功能性保健品。动物试验证明,可以显著抑制脂质过氧化,具有降低甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白的作用。
3、迷迭香提取物
迷迭香提取物(rosemary extract)是从迷迭香的叶和嫩茎中提取分离出的一种天然植物抗氧剂。迷迭香提取物含有多种有效的抗氧化成分,主要为:迷迭香酚、鼠尾草酚、迷迭香双醛、熊果酸和黄酮等化合物。具有高效无毒,结构稳定,耐高温。迷迭香提取物小鼠经口LD50为12g/kg。
4、辣木叶提取物
辣木叶提取物是以辣木(Moringa oleifera Lam)的叶提取分离出的一种天然植物抗氧剂。主要是黄酮类等化合物。提取方法是:取辣木叶粉,加入3倍量的石油醚,70℃脱脂6小时,共2次,所得滤渣干燥后,按料液比1:30加入70%乙醇,70℃浸提2次,每次1小时,合并提液,经真空冷冻干燥,得到黄酮粗提物。当总黄酮浓度为0.02mg/ml时,其对DPPH自由基的清除率可达15.6%。
5、白花蛇舌草提取物
白花蛇舌草(Hedytis diffusa Willd)又名白花十字草,为茜草科耳草属的一年生披散草本植物,可全草入药。主要分布广东、广西、海南等地。性寒,味甘、微苦,具有清热解毒,活血止痛,利尿消肿的功能。白花蛇舌草提取物的提取方法是:采集白花蛇舌草后去除杂质、泥土,冼净凉干,然后置于60℃烘干箱烘干4-6小时,待水份含量低于12%,即可取出粉碎,过80目筛,制得白花蛇舌草粉末,备用。取白花蛇舌草粉末,加8倍量75%乙醇,浸泡后加热提取2次,每次1.5小时,过滤,合并2次滤液,真空冷冻干燥,得到白花蛇舌草醇提物。
二、脂溶性抗氧化剂的质量要求
1、二丁基羟基甲苯
二丁基羟基甲苯(dibutyl hydroxy toluene,BHT)亦称2,6二丁基对甲酚,分子式C15H24O,相对分子质量220.36。结构式为:
性状及性能:二丁基羟基甲苯为无色晶体或白色结晶粉末,无臭、无味,熔点69,5-70.5℃(纯品为69.7℃),沸点265℃,它不溶于水与甘油,溶于乙酸和各种油脂,其溶解度为:乙醇25%(120℃)、棉籽油20%(25℃)大豆油30%(25℃)、猪油40%(25℃)。二丁基羟基甲苯化学稳定性好,对热相当稳定,抗氧化效果好,与金属反应不着色,具有单酚型特征的升华性,加热时有与水蒸气一起挥发的性质。它与其他抗氧化剂相比,稳定性较高,抗氧化作用较强,并且价格低廉。
毒性;大鼠经口LD50为1.7-1.97g/kg。小鼠经口LD50为1.39g/kg。BHT的急性毒性比BHA稍大,但无致癌性。
2、丁基羟基茴香醚
丁基羟基茴香醚(butyl hydroxy anisol,butylated hydroxyanisole,BHA),亦称叔丁基-4-羟基茴香醚、丁基大茴香醚。分子式C11H16O2,有2种同分异构体:3-叔丁基-4-羟基茴香醚、2-叔丁基-4-羟基茴香醚,通常的BHA是以3-BHA为主(占95%-98%)与少量2-BHA(占5%-2%)的混合物。
3-BHA分子结构式:
2-BHA分子结构式:
性状及性能:丁基羟基茴香醚为无色至微黄色蜡样结晶粉末;具有酚类的特异臭和刺激性味道;熔点57-65℃,随3-BHA、2-BHA混合比不同而异。BHA不溶于水,可溶于油脂和有机剂,在几种溶剂和油脂中的溶解度(25℃)为:乙醇25%、丙二醇50%、丙酮60%,猪油30%、花生油40%、棉籽油42%。BHA对热稳定性高,在弱碱性条件下不容易破坏。
毒性:BHA比较安全,大鼠经口LD50为2.2-5g/kg。
3、乙氧基喹啉
乙氧基喹啉(Ethoxyquin,6-Ethoxy-1,2-dinydro-2,2,4-trimethylquindine),亦称抗氧喹,乙氧喹,6-乙氧基-1,2-二氢化-2,2,4-三甲基喹啉。分子式C14H19NO,相对分子量217.31,结构式:
乙氧基喹啉为黄色或黄褐色黏稠液体,稍有特殊的气味。易溶于丙酮、异丙酮、乙醚、三氯甲烷、石油醚和正己烷,溶于动植物油脂,几乎不溶于水。本品遇空气或光,颜色会逐渐加深,成暗褐色,黏度增加,但不会影响使用效果。
4、特丁基对苯二酚
特丁基对苯二酚(tertiary butyl hydroquinone,TBHQ)亦称叔丁基对苯二酚,分子式C10H14O2,相对分子质量166.2,结构式为:
性状及性能:特丁基对苯二酚为白色结晶粉末,有极轻微的特异臭。溶于乙醇、乙酸、乙酯、异丙醇、乙醚及植物油、猪油等,几乎不溶于水(25℃,<1%;95℃,5%)。沸点300℃,熔点126.5-128.5℃。具有良好的热稳定性。遇铁,铜不变色,但如有碱存在可转为粉红色。
毒性:大鼠经口LD50为0.7-1.0g/kg。一般认为TBHQ无致突变性,在5000mg/kg剂量下对大、小白鼠无致癌作用,TBHQ与其他抗氧剂相比,具有更高的安全性。
5、没食子酸丙酯
没食子酸丙酯(propyl gallate,PG)亦称棓酸丙酯,分子式C10H12O5,相对分子质量212.21,结构式为:
性状及性能:没食子酸丙酯为白色至浅黄褐色晶体粉末,或乳白色针状结晶,无臭、微有苦味,水溶液无味。由水或含水乙醇可得到带一分子结晶水的盐,在105℃失去结品水成为无水物。熔点146-150℃,它易溶于乙醇等有机溶剂,微溶于油脂和水,其溶解度(25℃)为:乙醇103g/100mL、丙二醇67.5g/100mL、甘油25g/100ml、水0.35g/100m1。PG0.25%的水溶液的pH值为5.5左右。PG对热比较稳定,抗氧化效果好。与增效剂柠檬酸或与BHA、BHT复配使用抗氧化能力更强。
毒性:大鼠经口LD50为3.8g/kg按FAO/WHO(1985)规定,ADI为0-0.2mg/kg
PG在体内可被水解,大部分聚成4-O-甲基没食子酸或内聚葡萄糖醛酸,由尿液出。
6、抗坏血酸棕榈酸酯
抗坏血酸棕榈酸酯(ascorbyl palmitate,AP)是由抗坏血酸和脂肪酸或脂肪酸酯通过化学合成的方法制取的。抗坏血酸棕榈酸酯为白色至微黄色粉来,几乎无臭,难溶于水,易溶于乙醇,可溶于油脂。保存时应该避光、热、潮湿、隔绝氧气。抗坏血酸棕榈酸酯与自由基反应能阻止脂质中过氧化物形成;与O2反应能保证抗氧活性;与维生素E配合使用具有增效抗氧化作用,抗氧化效果更加显著。
化学名称:3-{1-[(3,5-二甲基-1,2-噁唑-4-基)甲基]-1H-吡唑-4-基}-1-(3-羟基苄基)咪唑啉-2,4-二酮。分子式C19H19N5O4;相对分子质量354.42。结构式:
毒性:抗坏血酸棕榈酸酯的水解产物为L-抗坏血酸及脂防酸都是天然产物,毒性很小。
本发明的另一个目的在于提供上述可用于防治动物或者家畜家禽囊膜病毒感染性疾病的组合物的具体制备方法。
上述的一种预防囊膜病毒感染的组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)按组方重量份配比,分别称取A组分、B组分、C组分、D组分,并使各组分均混合均匀,备用;
(2)向混合均匀的D组分中加入乙二胺四乙酸二钠,加入量为5~25g/kg搅拌混合均匀后,制得预混合物E;
(3)在制备得到的预混合物E中加入表面活性剂,加入量为5~25g/kg,搅拌混合均匀后,制得预混合物F;
(4)向制备得到预混合物F中加入维生素E和维生素C,维生素E加入量为5~50g/kg,维生素C加入量为5~50g/kg,搅拌混合均匀后,制得预混合物G;
(5)依次,将组分A、组分B、组分C加入到制得的与混合物G中,搅拌混合均匀后,即得成品。
为了更好地制备所述的的一种预防囊膜病毒感染的组合物,进一步地,所述步骤(3)中加入的表面活性剂包括氨基酸型两性离子表面活性剂、甜菜碱型两性离子表面活性剂、咪唑啉型两性离子表面活性剂;所述氨基酸型两性离子表面活性剂为N-烷基甘氨酸系,甜菜碱型两性离子表面活性剂为N-烷基二甲基甜菜碱,咪唑啉型两性离子表面活性剂为2-烷基-1-(2-羟乙基)-2-咪唑啉醋酸盐。
为了更好地制备所述的的一种预防囊膜病毒感染的组合物,进一步地,所述步骤(3)中加入的表面活性剂还包括吐温类和司盘类。
本发明的另一个目的在于提供上述可用于防治动物或者家畜家禽囊膜病毒感染性疾病的组合物的具体应用。
上述预防囊膜病毒感染的组合物,在用于预防畜禽病毒感染时,以禽畜体重为基准,具体用量为0.05g-0.25g/kg。
其中,所述预防畜禽囊膜病毒感染包括黄病毒、正粘病毒、副粘病毒、疱疹病毒、冠状病毒、非洲猪瘟等囊膜病毒感染性疾病。
本发明与现有技术组分比,具有以下优点及有益效果:
(1)本发明专利将根据囊膜病毒吸附和侵入等动物宿主细胞起始的感染特性,以茶多酚(茶叶提取物)、淡竹叶提取物、迷迭香提取物、辣木提取物、白花蛇舌草提取物等天然植物提取物抗氧化剂为主,同时复配适宜的脂溶性抗氧化剂和辅料,制备一种“绿色、有机、安全、无公害”可用于防治动物或者家畜家禽囊膜病毒感染性疾病的组合物,以填补畜禽养殖实际生产过程中,除疫苗外,对畜禽病毒病无药可防治的被动局面;
(2)本发明所述组合物可代替抗病毒化药,用于畜禽常见病毒性疾病的防治,其抗病毒作用范围广,包括畜禽临诊常见的黄病毒、正粘病毒、副粘病毒、疱疹病毒、冠状病毒、非洲猪瘟等有囊膜病毒,克服了一种疫苗只能防治一种疫病的缺点,取得了抗病毒药生产技术上的重大突破;
(3)本发明所述组合物对畜禽常见的各种囊膜病毒除具有阻止感染作用外,对某些致病菌如大肠杆菌等,还有较强的抑杀作用;同时还可增加机体的免疫功能,提高机体抗病力。当群体发病时,可用于畜禽防治保健,防止囊膜病毒在畜禽群体中个体之间的相互感染;
(4)本发明所述的组合物对保障畜禽养殖业正常生产,尤其是对当前尚无疫苗可预防的囊膜病毒病,或者是疫苗保护率低的病毒性疾病,或者是畜禽免疫失败的补救措施等等防治,都具有非常重要的实际意义,适宜广泛推广应用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明,但本发明的实施方式不限于此,在不脱离本发明上述技术思想情况下,根据本领域普通技术知识和惯用手段,做出各种替换和变更,均应包括在本发明的范围内。
为使本发明的目的、工艺条件及优点作用更加清楚明白,结合以下实施实例,对本发明作进一步详细说明,此处所描述的具体实施实例仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例1~5:
实施例1~5中组分组成重量比的具体数据如表一所示:
表一 实施例1~5中组分组成表
具体制备过程:
(1)按组方重量份配比,分别称取A组分、B组分、C组分、D组分,并使各组分均混合均匀,备用;
(2)向混合均匀的D组分中加入乙二胺四乙酸二钠,加入量为5~25g/kg搅拌混合均匀后,制得预混合物E;
(3)在制备得到的预混合物E中加入表面活性剂,加入量为5~25g/kg,搅拌混合均匀后,制得预混合物F;
(4)向制备得到预混合物F中加入维生素E和维生素C,维生素E加入量为5~50g/kg,维生素C加入量为5~50g/kg,搅拌混合均匀后,制得预混合物G;
(5)依次,将组分A、组分B、组分C加入到制得的与混合物G中,搅拌混合均匀后,即得成品。
其中,步骤(3)中加入的表面活性剂包括氨基酸型两性离子表面活性剂、甜菜碱型两性离子表面活性剂、咪唑啉型两性离子表面活性剂;所述氨基酸型两性离子表面活性剂为N-烷基甘氨酸系,甜菜碱型两性离子表面活性剂为N-烷基二甲基甜菜碱,咪唑啉型两性离子表面活性剂为2-烷基-1-(2-羟乙基)-2-咪唑啉醋酸盐;还可以是吐温类或司盘类。
实施例6:
该预防囊膜病毒感染的组合物的毒理学试验,具体如下:
急性毒性试验:
试验观察,因无法测出LD50,故进行了最大给药量的测定。将实施例1~5制备的预防囊膜病毒感染的组合物使用生理盐水或葡萄糖配置成口服液,直接灌胃小鼠,结果显示,以药物最大给药浓度11.84生药/ml,最大给药体积50ml/kg于24小时内给小鼠灌胃给药两次,小鼠最大给药量为400g生药/kg,动物未出现不良反应及死亡,解剖观察各脏器未见异常。
长期毒性试验:
本试验应用SD大鼠200只,将实施例1~5制备的预防囊膜病毒感染的组合物使用生理盐水或葡萄糖配置成口服液直接灌胃,设对照组及10g、33.3g、100g生药/kg剂量组,连续灌胃给药12周,观察本发明的家禽用抗生素替代品对动物各项指标的影响。试验结果表明,连续给药12周,本发明的预防囊膜病毒感染的组合物制备得到的口服液对大鼠的体重、摄食量、外周血象、凝血时间、心电图、脏器指数等均无明显影响;血液生化十二项指标测定结果,给药12周低剂量组BiLi值高于对照组(P<0.05);低剂量组、中剂量组TP值高于对照组(P<0.05),但均在正常生理范围之内,其它指标与对照组比较无明显差异。恢复期各给药组各项指标测定值与对照组比较均无明显差异。各组各脏器大体观察未见异常。
实施例7:
本实施例为了验证本发明所述预防囊膜病毒感染的组合物的对禽畜病毒性疾病的预防效果,以实施例1~5提供的组分为基础,进行如下实验:
一、预防鸡新城疫感染
1、实验动物选取:25日龄的雏鸡300羽。
2、实验药品及器材:
新城疫病毒,体重计,科学计算器。
3、实验分组及处理:
随机分成6组,每组50羽,各组分类处理情况如下:
五组试验组:
制备实施例1~5所提供的预防囊膜病毒感染的组合物,将其加入日粮饲料中,喂食鸡群,自由饮水15天;
一组对照组:
使用普通日粮饲料喂食鸡群,自由饮水15天。
对每羽雏鸡分别滴鼻和注射新城疫病毒0.1ml,每天停止鸡舍保暖,并打开门窗3小时,连续十五天。各组保育措施和饲养管理完全相同,自由采食和饮水,整个试验的每天定时进行彻底清扫消毒,给药后第一天起每天观察并记录试验期间每组雏鸡的临床症变化,主要包括精神状态、食欲、呼吸啰音、死亡等情况。所有死亡雏鸡进行剖检,确定死因。连续观察十五天,统计临床疗效及平均体重增重。
平均体重增重计算方法:实验前称取每只雏鸡的体重,取平均值,此平均值为实验前平均体重,实验结束后分别再次称取每只存活雏鸡的体重,取平均值,以此平均值为试验结束后的平均体重,试验前后的平均体重差值,即为平均体重增重。称重时间:早晨喂食前半小时。
临床疗效判定标准临床疗效判定标准:
显效:鸡只精神活泼,无任何影响;
无效:雏鸡出现明显患病症状(精神沉郁,羽毛粗乱,两翅下垂,食欲减少或废绝,鸡冠暗紫,鼻液增多,呼吸发出咕咕声音或张口呼吸,下痢,排黄色或黄绿色稀粪,鸡只死亡,剖检呈现典型败血症病变。
有效率=显效数/50×100%
试验结果如表二所示:
表二 各组雏鸡的试验情况
4、实验结论
由表二内容可知,本发明制备得到的预防囊膜病毒感染的组合物,能够显著对鸡新城疫病毒的有显著的预防效果,其中实施例3提供的预防鸡新城疫囊膜病毒感染的组合物的预防效果尤为显著。
二、猪瘟攻病毒试验
1、实验动物选取:没有进行过猪瘟疫苗免疫的健康中猪
2、实验药品及器材:
实施例1~5提供的预防囊膜病毒感染的组合物,清水,科学计算器、猪瘟病毒。
3、实验分组及处理
选择没有进行过猪瘟疫苗免疫的健康中猪600头,随机分为五个实验组和一个空白对照组,每组各100头。
实验组1~5组:在日粮中连续分别添加对应实施例提供的防治囊膜病毒感染的组合物饲喂,自由饮水。
对照组:饲喂相同日粮未自由饮水。
两组同时进行猪瘟攻病毒试验,15天后进行猪病病毒检测。
试验结果如表三所示:
表三 各组猪病病毒检测情况
由表二内容可知,本发明制备得到的预防囊膜病毒感染的组合物,能够显著对猪瘟病毒有显著的预防效果,其中实施例3提供的预防囊膜病毒感染的组合物的预防效果尤为显著。
三、防止鸭低致禽流感、副粘病毒病和黄病毒病等多种病原混合感染
1、实验动物选取:发生鸭低致禽流感、副粘病毒病和黄病毒病以及大肠杆菌和浆膜炎等混合感染的放养鸭群。
2、实验药品及器材:
实施例1~5提供的预防囊膜病毒感染的组合物,清水,科学计算器。
3、实验分组及处理
分成六组,包括5组实验组,1组对照组。每组提供相同的生活环境。
实验组1~5组,每组从30日龄开始在日粮饲料中每天分别添加对应实施例提供的预防囊膜病毒感染的组合物,自由饮水,至48日龄出栏时,测试商品鸭的成活率。
对照组,只是使用与实验组相同饲料进行饲喂,自由饮水,至48日龄出栏时,测试商品鸭的成活率。
试验结果如表四所示:
表四 各组商品鸭的存活情况
4、实验结论
由表四内容可知,本发明制备得到的预防囊膜病毒感染的组合物,能够显著对鸭低致禽流感、副粘病毒病和黄病毒病等多种病原混合感染进行有效防止,极大程度提高了商品鸭的成活率。其中实施例3提供的预防囊膜病毒感染的组合物的防止效果尤为显著。
四、防止鹅副粘病毒病和禽传染性支气管炎感染
1、实验动物选取:发生鹅副粘病毒病和禽传染性支气管炎等混合感染引起的小鹅痛风的发病小鹅群
2、实验药品及器材:
实施例1~5提供的预防囊膜病毒感染的组合物,清水,科学计算器。
3、实验分组及处理
分成六组,包括5组实验组,1组对照组。每组提供相同的生活环境。
实验组1~5组,每组在日粮饲料中每天分别添加对应实施例提供的预防囊膜病毒感染的组合物,自由饮水,连续十五天后,测试鹅群的成活率。
对照组,只是使用与实验组相同饲料进行饲喂,自由饮水,连续十五天后,测试鹅群的成活率。
试验结果如表五所示:
表五 各组鹅的存活情况
4、实验结论
由表五三内容可知,本发明制备得到的预防囊膜病毒感染的组合物,能够显著对鹅副粘病毒病和禽传染性支气管炎感染能够进行有效防止,极大程度提高了商品鸭的成活率。其中实施例3提供的预防囊膜病毒感染的组合物的防止效果尤为显著。
五、防止猪蓝耳病
1、实验动物选取:发生蓝耳病的经产母猪。
2、实验药品及器材:
实施例1~5提供的预防囊膜病毒感染的组合物,清水,科学计算器。
3、实验分组及处理
分成六组,包括5组实验组,1组对照组。每组提供相同的生活环境。
实验组1~5组,每组在日粮饲料中每天分别添加对应实施例提供的预防囊膜病毒感染的组合物,自由饮水,30日后,测试母猪的流产率。
对照组,只是使用与实验组相同饲料进行饲喂,自由饮水,30日后,测试母猪的流产率。
试验结果如表六所示:
表六 各组母猪的流产情况
4、实验结论
由表六内容可知,本发明制备得到的预防囊膜病毒感染的组合物,能够显著降低猪蓝耳病对母猪流产的影响。其中实施例3提供的预防囊膜病毒感染的组合物的防止效果尤为显著。
六、防止猪流行性腹泻和传染性胃肠炎感染
1、实验动物选取:每年11月阴雨连绵季节的育成猪。
2、实验药品及器材:
实施例1~5提供的预防囊膜病毒感染的组合物,清水,科学计算器。
3、实验分组及处理
分成六组,包括5组实验组,1组对照组。每组提供相同的生活环境。
实验组1~5组,每组在日粮饲料中每天分别添加对应实施例提供的预防囊膜病毒感染的组合物,自由饮水,30日后,测试猪群的腹泻发病率。
对照组,只是使用与实验组相同饲料进行饲喂,自由饮水,30日后,测试母猪的流产率。
试验结果如表六所示:
表七 各组猪的腹泻发病情况
4、实验结论
由表七内容可知,本发明制备得到的预防囊膜病毒感染的组合物,能够显著降低猪流行性腹泻和传染性胃肠炎感。其中实施例3提供的预防囊膜病毒感染的组合物的防止效果尤为显著。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,本领域的普通技术人员可以理解:在不脱离本发明的原理和宗旨下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
Claims (6)
1.一种预防囊膜病毒感染的组合物,其特征在于,按重量份计,具体包括500份A组分,400份B组分,100份C组分,8500份D 组分;
A组分由100份茶多酚、100份淡竹叶提取物、100份迷迭香提取物、100份辣木叶提取物、100份白花蛇舌草提取物构成;
B组分由200份二丁基羟基甲苯、200份丁基羟基茴香醚构成;
C组分由100份柠檬酸构成;
D组分由7500份腐殖酸钠、1000份木质素磺酸盐构成。
2.根据权利要求1所述的一种预防囊膜病毒感染的组合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)按组方重量份配比,分别称取A组分、B组分、C组分、D组分,并使各组分均混合均匀,备用;
(2)向混合均匀的D组分中加入乙二胺四乙酸二钠,加入量为5~25g/kg搅拌混合均匀后,制得预混合物E;
(3)在制备得到的预混合物E中加入表面活性剂,加入量为5~25g/kg,搅拌混合均匀后,制得预混合物F;
(4)向制备得到预混合物F中加入维生素E和维生素C,维生素E加入量为5~50g/kg,维生素C加入量为5~50g/kg,搅拌混合均匀后,制得预混合物G;
(5)依次,将组分A、组分B、组分C加入到制得的预混合物G中,搅拌混合均匀后,即得成品。
3.根据权利要求2所述的一种预防囊膜病毒感染的组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中加入的表面活性剂包括氨基酸型两性离子表面活性剂、甜菜碱型两性离子表面活性剂、咪唑啉型两性离子表面活性剂;所述氨基酸型两性离子表面活性剂为N-烷基甘氨酸系,甜菜碱型两性离子表面活性剂为N-烷基二甲基甜菜碱,咪唑啉型两性离子表面活性剂为2-烷基-1-(2-羟乙基)-2-咪唑啉醋酸盐。
4.根据权利要求3所述的一种预防囊膜病毒感染的组合物的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中加入的表面活性剂还包括吐温类和司盘类。
5.根据权利要求1所述预防囊膜病毒感染的组合物在制备预防和治疗畜禽囊膜病毒感染的药物或饲料添加剂中的用途,以禽畜体重为基准,具体用量为0.05g-0.25g/kg。
6.根据权利要求5所述预防囊膜病毒感染的组合物的用途,其特征在于,所述畜禽囊膜病毒感染为黄病毒、副粘病毒、疱疹病毒、非洲猪瘟囊膜病毒感染性疾病中一种或多种。
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