KR20090093545A

KR20090093545A - 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스, 상기 바실러스푸밀루스가 함유된 분말제제 및 상기 바실러스 푸밀루스가함유되어 배양된 느타리버섯 재배용 발효 폐면배지의제조방법

Info

Publication number: KR20090093545A
Application number: KR1020080019112A
Authority: KR
Inventors: 하태문; 주영철
Original assignee: 경기도농업기술원
Priority date: 2008-02-29
Filing date: 2008-02-29
Publication date: 2009-09-02

Abstract

본 발명은 푸른곰팡이에 대해 길항력을 가지며, 폐면 발효배지로부터 분리 · 동정된 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002)에 관한 것이다. 본 발명의 다른 발명은 상기 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002, KACC 91268)를 NB배지 또는 농산부산물을 이용한 액체배지에서 배양한 배양액 또는 고형물에서 함께 배양하여 생산된 배양물을 동결건조하여 제조하는 것을 특징으로 하는 항 푸른곰팡이 분말제제에 관한 것이며, 발명의 또 따른 발명은 느타리버섯 균사생장에 영향을 주지 않는 상기 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus) 미생물 또는 분말제제에 항 푸른곰팡이 신규 패니바실루스 에스피(Paenibacillus sp., KACC 91269), 항 푸른곰팡이 신규 슈도산도모나스 에스피(Pseudoxandomonas sp., KACC 91270) 중 선택되는 적어도 1종의 미생물을 추가하여 생산한 배양액을 폐면배지 발효과정에서 첨가하여 제조하는 것을 특징으로 느타리버섯 재배용 항 푸른곰팡이 폐면배지의 제조방법에 관한 것이다.

Description

항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스, 상기 바실러스 푸밀루스가 함유된 분말제제 및 상기 바실러스 푸밀루스가 함유되어 배양된 느타리버섯 재배용 발효 폐면배지의 제조방법{BACILLUS PUMILUS KME9002 HAVING ANTI-ACTIVITY OF PENICILLIUM, POWDER COMPRISING THE SAME STRAIN AND PROCESS FOR PRODUCING FERMENTING MEDIUM OF WASTE COTTON USING THE SAME}

본 발명은 푸른곰팡이에 대해 길항력을 가지며, 폐면 발효배지로부터 분리 · 동정된 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002)에 관한 것이다. 본 발명의 다른 발명은 상기 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002, KACC 91269P)를 NB배지 또는 농산부산물을 이용한 액체배지에서 배양한 배양액 또는 고형물에서 함께 배양하여 생산된 배양물을 동결건조하여 제조하는 것을 특징으로 하는 항 푸른곰팡이 분말제제에 관한 것이며, 본 발명의 또 다른 발명은 느타리버섯 균사생장에 영향을 주지 않는 상기 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002) 또는 분말제제에 항 푸른곰팡이 신규 패니바실루스 에스피(Paenibacillus sp. KME9003), 항 푸른곰팡이 신규 슈도산도모나스 에스피(Pseudoxandomonas sp. KME9001) 중 선택되는 적어도 1종의 미생물을 추가하여 생산한 배양액을 폐면배지 발효과정에서 첨가하여 제조하는 것을 특징으로 느타리버섯 재배용 항 푸른곰팡이 폐면배지의 제조방법에 관한 것이다.

느타리버섯 폐면재배법은 현재 우리나라에서 가장 많이 재배되고 있는 형태이며, 전국 농가수는 약 3,000호로 전체 버섯재배농가수의 약 46%정도를 차지하고 있다. 균상재배에 사용되는 폐면은 목화로부터 면을 가공할 때 부수적으로 발생되는 것으로 중국, 파키스탄 등 동남아 지역에서 전량 수입되고 있다. 폐면은 솜함량이 70∼90%, 씨껍질 함량이 10∼30%, 기타 목화대 잔사 등이 포함되어 있고, 이들을 구성하고 있는 성분은 셀룰로오스, 헤미셀룰로오스, 리그닌 등이다. 이들은 쉽게 분해되기 어려운 물질이며, 셀룰라아제, 헤미셀룰라아제, 리그니나아제 등을 분비하는 미생물에 의해 분해된다.

폐면을 이용한 균상재배시 발효과정을 거치게 되는데 이 과정에서 매우 다양한 미생물들의 활동과 증식으로 발열이 일어나고 발열에 의해 폐면이 물리적으로 연화된다. 미생물들의 활동으로 폐면배지내 양분이 재조합됨에 따라 양분이 다양해지며, 미생물자체가 버섯의 영양원으로서의 역할도 한다.

따라서 느타리버섯 폐면균상재배과정에서 배지의 발효과정은 필수적이며, 매우 중요한 과정임에도 불구하고 재배농가에서는 그 중요성을 잘 인식하지 못하고 있다. 심지어는 발효과정을 생략하고 인위적인 가온을 통한 전발효, 살균 및 후발효를 실시하고 있고 그 기간을 7∼10일 동안 실시하는 경우가 많아 여기에 소요되는 유류비의 부담이 가중된다. 느타리버섯 폐면재배과정은 일반적으로 약 10일 정도의 야외발효, 65℃에서 12시간 이상의 배지살균과 50∼55℃에서 3∼4일 후발효과정을 거쳐야 하고, 인위적인 가온에 의한 전발효과정은 차치하더라도 살균 및 후발효과정에서 소비되는 유류량은 농가당 300∼500(30평)ℓ이며, 전국적으로 배지살균과 후발효에만 년간 약 1백8십만∼3백만ℓ가 소모되는 것으로 추정된다.

느타리버섯 균상재배과정에서 균사배양을 완성시키는데 세심한 주의와 관리가 요구되며, 균배양의 실패나 배양 중 곰팡이에 의한 오염이 발생되는 원인은 배지발효상태가 불량하거나, 살균미숙, 배양 중 가스장해로 인한 버섯균사의 활력약화 등에 있다. 버섯과 푸른곰팡이는 생태적으로 비슷한 지위에 있고 세포벽의 구조, 생육환경 등이 매우 유사하여, 곰팡이에 의한 오염발생시 선택적으로 곰팡이만 방제할 수 있는 약제가 개발되어 있지 않아 화학적인 방제는 매우 어렵다. 더욱이 청정무공해 농산물로서의 이미지를 유지하고 동시에 안정된 균사배양과 버섯수확을 보장받기 위해서는 화학적인 방제보다는 재배방식의 개선과 유용 미생물을 이용한 재배기술의 실용화와 보급이 필요하며, 이와 관련된 더 많은 연구가 수행되어야 할 것이다.

상술한 푸른곰팡이는 버섯과 생태적으로 비슷한데, 특히 상호 세포벽의 구조 및 생육환경 등이 매우 유사하고, 특히 느타리버섯 균상재배과정에서는 특히 푸른곰팡이 오염이 심하여 느타리버섯의 수확감소에 많은 영향을 미치고 있다. 그래서 본 발명에서는 푸른곰팡이에 의한 오염발생시 선택적으로 곰팡이만 방제할 수 있는 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002)를 제공하는 것으로, 더욱 상세하게는 느타리버섯 균사생장에 영향을 주지 않는 상기 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002, KACC 91269P) 또는 분말제제에 항 푸른곰팡이 신규 패니바실루스 에스피(Paenibacillus sp. KME9003, KACC 91270P), 항 푸른곰팡이 신규 슈도산도모나스 에스피 (Pseudoxandomonas sp. KME9001, KACC 91268P) 중 선택되는 적어도 1종의 미생물을 추가하여 생산한 배양액을 폐면배지 발효과정에서 첨가하여 제조하는 것을 특징으로 하는 느타리버섯 재배용 항 푸른곰팡이 폐면배지의 제조방법을 제공하고자 한다.

상기한 목적을 달성하기 위해서 본 발명은,

푸른곰팡에 대해 길항력을 가지며, 폐면 발효배지로부터 분리 · 동정된 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002)를 제공하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 다른 발명은, 상기 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002)를 NB배지 또는 농산부산물을 이용한 액체배지에서 배양한 배양액 또는 고형물에서 함께 배양하여 생산된 배양물을 동결건조하여 제조하는 것을 특징으로 하는 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002)가 함유된 항 푸른곰팡이 분말제제를 제공하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 따른 발명은, 느타리버섯 균사생장에 영향을 주지 않는 상기 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002) 또는 분말제제에 항 푸른곰팡이 신규 패니바실루스 에스피(Paenibacillus sp. KME9003), 항 푸른곰팡이 신규 슈도산도모나스 에스피(Pseudoxandomonas sp. KME9001) 중 선택되는 적어도 1종의 미생물을 추가하여 생산한 배양액을 폐면배지 발효과정에서 첨가하여 제조하는 것을 특징으로 하는 느타리버섯 재배용 항 푸른곰팡이 폐면배지의 제조방법을 제공하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 의하면 느타리버섯 재배를 위한 폐면배지의 발효 과정에서 증식되는 푸른 곰팡이균에 대하여는 길항력을 가지고, 느타리버섯 균사 생장에는 영향을 주지 않는 신규한 미생물 제제를 얻고, 이를 폐면배지의 야외발효과정에 첨가하여 푸른곰팡이에 의한 오염 걱정이 없는 느타리버섯배지용 폐면배지를 제공할 수 있다.

도 1은 야외발효기간중 배지 온도변화 그래프이다. [① 대조구1, ② 처리구1, ③ 대조구2, ④ 처리구2, ⑤ 대조구3]

도 2는 야외발효기간중 배지 pH변화 그래프이다. [① 대조구1, ② 처리구1, ③ 대조구2, ④ 처리구2, ⑤ 대조구3]

도 3은 야외발효기간중 배지성분 중 전탄소 변화 그래프이다. [① 대조구1, ② 처리구1, ③ 대조구2, ④ 처리구2, ⑤ 대조구3]

도 4는 야외발효기간중 배지성분 중 전질소 변화 그래프이다. [① 대조구1, ② 처리구1, ③ 대조구2, ④ 처리구2, ⑤ 대조구3]

하기 실시예 및 도면을 참조하여 본 발명의 내용을 보다 상세하게 설명하면 다음과 같다.

본 발명에 따른 미생물은 바실러스 푸밀루스 미생물의 유효량을 포함하며, 기타 미생물의 배양과정 중 포함되어지는 배양액의 조성 내지는 통상적으로 미생물 제제를 제형화하기 위해 사용되고 있는 각종 부형제 등이 포함되어질 수 있다.

본 발명에 따른 상기 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002)는 경기도 수원시 권선구 서둔동 225에 소재하는 한국 농업미생물 자원센터(KACC)에 기탁번호 KACC 91269P로서, 패니바실루스 에스피(Paenibacillus sp. KME9003)는 기탁번호 KACC 91270P로서, 슈도산도모나스 에스피(Pseudoxandomonas sp. KME9001)는 기탁번호 KACC 91268P로서 2006년 8월 31일자로 각각 기탁되었다. 상기한 신규한 미생물, 바실러스 푸밀루스, 패니바실루스 에스피 및 슈도산도모나스 에스피의 유전자서열은 서열목록 1 내지 3에 상세히 기재하였다.

상기 본 발명에 따른 미생물은 푸른곰팡이 병원균에 대하여는 항균활성을 가지며, 동시에 느타리버섯의 균사 생장에는 영향을 주지 않는다. 상기 미생물은 NB배지 또는 농산부산물을 이용한 액체배지에서 배양한 배양액이나 고형물과 같이 배양하여 동결건조하여 만든 분말제제는 느타리버섯 재배를 위해 사용되는 폐면배지의 야외발효과정에 첨가되어질 수 있으며, 균배양과정에서 발생할 수 있는 푸른곰팡이병균에 대한 항균력을 발휘한다.

이들 미생물들은 바실러스 푸밀루스, 패니바실루스 에스피, 및 슈도산도모나스 에스피에서 선택되는 적어도 1종의 미생물을 포함하며, NA 배지 내지는 PDA (Potato Dextrose Agar) 배지에서도 배양이 가능하며, 최적배양온도는 30~40℃, 최적배양 pH는 7 내지 10 정도이다. 이들 미생물들은 80℃에서 9~10시간, 90℃에서 4~5 시간 처리하여도 사멸되지 않는 등 열에 대한 내성이 강한 특징이 있다. 이들 미생물들을 NB배지에서 일정기간 배양 후 고형분에 혼합하여 다시 일정기간 배양하여 3∼4일간 동결건조하여 만든 분말제 또한 푸른곰팡이병균에 대한 길항력을 보이며 액체상태의 배양액보다 편리하게 사용할 수 있다.

상기 미생물 중 적어도 1종 이상을 함유하는 배양액 또는 미생물 제제는 느타리버섯 균사생장을 위한 폐면배지의 야외발효과정에 첨가되어져 느타리버섯의 균사 생장에 매우 유용한 폐면배지를 제공한다. 폐면배지의 야외발효과정에 첨가되어지는 상기 미생물들의 첨가량은 특별한 한정을 요하지는 않으며, 유용미생물이 10⁷/ml이상의 밀도로 배양된 배양액을 (폐면중량의) 0.1∼10% 또는 유용미생물 분말제로 폐면중량의 0.01∼1% 정도로 첨가되어져도 좋다. 이러한 폐면배지의 야외발효과정은 약 7~9일 정도 실시할 수 있으며, 종래 요구되어 오던 저온살균과정을 생략할 수 있으며, 후발효 과정을 실시하는 것에 의해 균사의 배양율을 더욱 높일 수 있다.

이와 같은 과정에 의해 느타리버섯 균사의 생장에 가장 문제가 되고 있는 푸른곰팡이병균에 의한 폐면배지 오염을 차단할 수 있으며, 기타 종래 배지에서 나타나는 배지내 온도변화, 배지 수분함량, pH, 배양일수, 배양율, 초발이 소요일수 및 수량에 있어서 이들과 동등수준이거나 우수하여 느타리버섯의 재배에 매우 유용한 것을 확인할 수 있다.

이하 본 발명의 내용을 실시 예를 통해 상세히 설명하기로 한다. 다만 하기 실시예는 본 발명의 내용을 설명하기 위한 것으로서 본 발명의 권리범위가 이에 한정되지는 아니한다.

<실시예 1> 미생물의 분리 · 동정

가. 시험버섯 및 역가검정 균주

분리된 미생물의 역가검정에 사용된 푸른곰팡이병균은 트리코더마 비렌스(Trichoderma virens), 트리코더마 하지아넘(T. harzianum), 트리코더마 아트로비리데(T. atroviride), 트리코더마 코닝기(T. koningii) 이며 이들은 모두 농촌진흥청 농업 미생물 자원센타(KACC)로부터 분양 받았고, 느타리버섯균은 경기도농업기술원 버섯연구소에 보존되어 있는 춘추느타리2호를 사용하였다.

나. 미생물 분리 배지

푸른곰팡이 균사생장을 억제하고 느타리버섯 균사생장에 영향을 주지 않은 미생물은 폐면 발효배지로부터 분리하였고, 분리용 배지로 세균과 방선균은 NA배지(meat ext. 3g, pepton 5g, agar 15g, D.W 1ℓ - Merck社), 곰팡이는 MEA(malt ext. 3g, pepton 3g, agar 15g), PDA(potato infusion 4g, glucose 20g, agar 15g, D.W 1ℓ-Merck사) 배지를 사용하였다.

다. 미생물분리 및 역가검정

미생물의 분리는 멸균된 시험관에 멸균수를 10ml씩 분주하여 준비하고, 폐면배지의 부위별로 일정한 량을 무균적으로 채취한 후 1g을 평량하여 시험관에 넣고 1분간 보텍스 혼합(vortex mixing) 하였다. 폐면 현탁액을 10⁷배까지 희석하여 10⁵∼10⁷까지의 희석액 0.1ml를 각각의 분리용 배지에 도말한 후 30℃와 45℃에서 3∼7일간 배양하였다. 각각의 배지에서 형성된 콜로니는 색깔, 모양 등이 다른 것으로 분리하여 푸른곰팡이병균 4균주 및 춘추느타리2호와 대치배양하여 형성된 저지환의 크기를 측정하였다.

라. 선발 미생물 특성검정 및 동정

푸른곰팡이 균사생장을 억제하고 춘추느타리2호 균사생장에 영향을 주지 않는 미생물을 선발하여 생장적정온도, pH, 사멸온도 등을 조사하였고, 선발된 미생물을 영양 브로스(Nutrient broth)에 액체배양 후 16s rDNA를 분리하여 시퀀싱(sequencing) 후 나타난 염기서열을 유전자은행에 등록된 미생물균주들과 비교하여 동정하였다. 폐면발효배지에서 분리된 미생물은 총 188종으로 이중 세균 171종, 곰팡이 10종, 방선균 7종이었다. 분리된 188종의 미생물중 PDA배지에서 모두 42종이 푸른곰팡이에 항균활성을 보였으며 그중 11종이 트리코더마 비렌스 등 푸른곰팡이 4종 모두에 대하여 높은 항균활성을 나타내었다. NA배지에서는 52종, MEA배지에서 23종이 푸른곰팡이균에 대한 항균력이 있었고 7종이 트리코더마 비렌스 등 푸른곰팡이 4종 모두에 대하여 항균활성을 나타내었다. 또한, NA배지에서는 14균주가 푸른곰팡이 4종 모두에 대하여 항균활성을 나타내었으나, 이들 대부분은 느타리버섯 균사생장도 동시에 억제하였다.

푸른곰팡이균에 대한 항균활성을 가진 미생물들 중 느타리버섯 균사생장에 영향을 미치지 않는 미생물은 11균주였고, 그중에서도 NA배지와 PDA배지 상에서 2종류 이상의 푸른곰팡이 균사생장을 강하게 억제하면서 느타리버섯 균사생장에 영향을 주지 않았던 3종류의 균주를 최종 선발하였다.

이들 3종류의 균주를 대상으로 16S rDNA 시퀀싱을 이용하여 동정한 결과, 각각 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus), 슈도산도모나스 에스피 (Pseudoxandomonas sp.), 패니바실루스 에스피(Paenibacillus sp.)로 동정되었고, 99%이상의 상동성을 나타내었다 (각각 서열번호 1 내지 3 참조).

상기 각 균주에 대한 최적 배양온도를 측정한 결과 바실러스 푸밀루스는 30℃, 슈도산도모나스 에스피, 패니바실루스 에스피는 40℃에서 균사생장이 양호하였다.

배양온도(℃)	흡 광 도
배양온도(℃)	바실러스 푸밀루스	수도산도모나스 에스피	패니바실러스 에스피
대조(무접종)	0.2912		0.5488
203040506070	0.30660.31580.31480.29180.29320.2900	0.30500.30340.31250.29150.29050.2901	0.98071.01261.32730.57380.61040.5584

상기 각 균주에 대한 최적 배양을 위한 배지의 pH는 바실러스 푸밀루스의 경우 pH 6∼10, 슈도산도모나스 에스피는 pH 8∼9, 패니바실루스 에스피는 pH 7∼10으로 전체적으로 산성보다는 중성이나 염기성에 가까웠다.

pH	흡 광 도
pH	바실러스 푸밀루스	수도산도모나스 에스피	패니바실러스 에스피
대조(무접종)	0.2881		0.0112
345678910	0.30930.31170.31870.37750.38790.38070.38150.3748	0.31010.31430.34580.34390.34900.35340.35750.3380	-0.01170.01740.70700.75750.78980.77460.7685

상기 폐면배지가 호기성 조건에서 발효될 때 배지의 pH는 약염기성으로, 혐기성 조건에서 발효될 때 약산성으로 변화된다는 전 등(전창성, 장갑열, 조수묵, 오세종, 박정식, 원항연. 2004. 느타리버섯 재배용 폐면발효중의 화학성 및 미생물상의 변화. 한국균학회지 32(2): 105∼111.)의 연구결과와 비교해 볼 때, 선발된 미생물이 염기성의 조건에서 배양이 잘된다는 것은 폐면배지를 호기적인 조건으로 발효시킬 때 배양에 유리한 조건으로 작용할 것으로 생각된다. 그리고 선발된 세균의 열에 대한 내성은 표 3에서와 같이 70℃까지는 10시간 이상, 80℃에서 9∼10시간, 90℃에서도 4∼5시간 견딜 수 있는 고온성균으로 확인되었다

선발균주	온도(℃)	열처리 시간 (hour)
선발균주	온도(℃)	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
바실러스 푸밀루스수도산도모나스에스피	50	○	○	○	○	○	○	○	○	○	○
	60	○	○	○	○	○	○	○	○	○	○
	70	○	○	○	○	○	○	○	○	○	○
	80	○	○	○	○	○	○	○	○	○	×
	90	○	○	○	○	○	×	×	×	×	×
	100	×	×	×	×	×	×	×	×	×	×

선발균주	온도(℃)	열처리 시간 (hour)
선발균주	온도(℃)	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
패니바실루스에스피
	70	○	○	○	○	○	○	○	○	○	○
	80	○	○	○	○	○	○	○	○	○	×
	90	○	○	○	○	○	×	×	×	×	×
	100	×	×	×	×	×	×	×	×	×	×

※ ○ : 생존, X : 사멸

일반적으로 호기적인 조건에서 폐면배지가 발효될 때 배지품온은 약 75℃까지 상승하게 되는데, 90℃의 고온에서도 일정시간 생존이 가능할 정도로 고온에 대한 내성이 강하다면 야외발효는 물론, 저온살균 후에도 배지내에서 생존하여 느타리버섯 균배양의 기간 동안 푸른곰팡이 균사생장을 억제할 수 있을 것으로 판단된다.

< 실시예 2> 유용미생물 분말제

가. 유용미생물 분말제의 제조

상기 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002)를 NB배지 또는 농산부산물을 이용한 액체배지에서 배양한 배양액 또는 고형물에서 함께 배양하여 생산된 배양물을 동결건조하여 제조하는 것을 특징으로 하는 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002)가 함유된 항 푸른곰팡이 분말제제를 제조하기 위해서 아래 시험과 같이 먼저 분말제 제조를 위한 재료를 선발한 후, 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002) 함유 분말제 첨가량을 규명하였다.

<시험 1> 분말제 제조를 위한 재료선발

상술한 바와 같이 본 발명에서는 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스 (Bacillus pumilus KME9002) 미생물 등 3종을 분리, 동정한 후 Nutrient broth의 배양배지를 이용하여 배양액 내 10⁷/ml 미생물밀도로 옥수수분말, 미강, 밀기울의 분말제 종류와 함께 아래와 같이 처리하였다.

분말제 종류별 화학성

분 말 제	pH	총탄소(%)	총질소(%)	조지방(%)	산가(%)
옥수수분말밀 기 울미 강	5.96.46.5	56.954.953.0	1.42.42.5	5.34.117.2	0.31.05.5

분말제 종류별 물리성

분 말 제	가비중(g/cm³)	공극율(%)	보수량(㎖/100g)	투수속도(min./100g)
옥수수분말밀 기 울미 강	0.620.370.40	57.566.768.3	52.165.023.3	1,440.025.00.1

유용미생물 첨가 후 미생물 밀도변화

분 말 제	미생물 밀도 (개/g)
분 말 제	0일	2일	4일	6일	8일	10일
옥수수분말	15×10⁶	2×10⁷	17×10⁷	10×10⁷	1×10⁷	-
밀기울	15×10⁶	84×10⁷	29×10⁷	20×10⁷	16×10⁷	18×10⁷
미 강	15×10⁶	82×10⁷	41×10⁷	37×10⁷	16×10⁷	4×10⁷

* 유용미생물 배양액 첨가량 : 100ml/300g

유용미생물 배양 후 분말제 종류별 동결건조정도

분 말 제	수분함량(%)
분 말 제	3일	5일	7일
옥수수분말밀 기 울미 강	20.221.422.6	8.910.510.8	7.58.68.3

동결건조 후 건조분말제의 유용미생물 증식정도

분 말 제	흡광도(파장 610nm)	미생물 밀도(colony/㎖)
옥수수 분말	0.6155	12 X 10⁶
밀 기 울	0.7133	74 X 10⁷
미 강	0.7169	80 X 10⁷

* 배양조건 : 30℃, 48시간 배양

유용미생물 분말제의 보존기간에 따른 균사생장정도 (컬럼테스트 - 단위: mm/7일)

분 말 제	0일		30일		60일
분 말 제	느타리버섯	푸른곰팡이	느타리버섯	푸른곰팡이	느타리버섯	푸른곰팡이
대 조옥수수분말밀 기 울미 강	7.16.37.47.2	2.5000	7.37.17.57.6	9.53.600	6.87.27.17.5	6.42.900

*느타리버섯 : 춘추2호, 푸른곰팡이 : Trichoderma virens + T. harzianum

유용미생물 분말제 보존기간별 푸른곰팡이 항균 활성정도 (단위 : mm)

보존기간	0일	30일	60일
저지환의 크기(반지름)	2.2	2.0	2.1

<시험 2> 유용미생물 분말제 첨가량 규명

상술한 바와 같이 본 발명에서는 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스 (Bacillus pumilus KME9002) 미생물 등 3종을 분리, 동정한 후 Nutrient broth의 배양배지을 이용하여 배양액 내 10⁷/ml의 미생물밀도로 옥수수분말, 미강, 밀기울의 분말제 종류와 함께 아래와 같이 10g/1톤 등 3 수준으로 처리하였다.

[표 11]

분말제 첨가량별 배지발효특성

<11-1> 온도변화

분말제첨가량(g/ton)	배지온도(℃)
분말제첨가량(g/ton)	발효1일	2	3	4	5	6	7	8	9
0(대조)	19.0	40.5	58.0	73.0	73.5	69.5	66.0	66.0	63.0
1	19.0	42.0	62.0	75.0	74.0	69.0	66.5	66.0	64.0
10	19.5	42.5	63.0	75.5	76.0	75.0	71.5	68.0	64.5
50	19.5	45.0	67.0	76.0	76.5	74.5	71.0	69.0	64.0
100	19.0	49.5	67.0	76.0	76.5	75.0	71.5	68.5	65.0

<11-2> pH 변화

분말제첨가량(g/ton)	배 지 pH
분말제첨가량(g/ton)	발효1일	2	3	4	5	6	7	8	9
0(대조)	7.2	7.4	7.8	8	8.1	8.5	8.6	8.7	8.8
1	7.1	7.5	7.9	8.2	8.3	8.4	8.7	8.8	8.7
10	6.9	7.2	8	8.1	8.3	8.4	8.7	8.6	8.8
50	6.8	7.3	7.8	8.1	8.2	8.3	8.5	8.7	8.6
100	6.8	7.2	7.7	8.3	8.3	8.4	8.6	8.6	8.7

<11-3> 수분함량변화

분말제첨가량(g/ton)	수 분 함 량(%)
분말제첨가량(g/ton)	발효1일	3	5	7	9
0(대조)	70.4	68.2	66.6	64.7	63.0
1	70.8	69.0	67.2	65.3	62.5
10	69.7	68.7	66.0	64.2	63.8
50	70.1	67.9	67.1	66.1	64.3
100	69.4	67.6	65.9	64.4	62.7

<11-4> C/N 변화

분말제첨가량(g/ton)	C/N
분말제첨가량(g/ton)	발효1일	3	5	7	9
0(대조)	38.3	38.3	37.3	35.5	35.0
1	38.3	38.3	36.5	35.7	35.0
10	38.0	37.8	36.0	35.1	34.7
50	38.0	37.3	35.1	35.0	34.5
100	37.7	37.3	34.7	34.7	34.4

분말제 첨가량별 균배양 특성

분말제첨가량9(g/ton)	균사생장속도(cm/7일)	배양기간(일)	배양율(%)	오염율(%)	푸른곰팡이균사생장정도^♩(cm/7일)
0(대조)	7.7	12	85.7	14.6	11.4
1	7.7	12	92.9	7.1	6.9
10	7.2	12	100	0	0
50	7.6	12	100	0	0
100	7.5	12	100	0	0

※ 살균 및 후발효방법 : 55℃ 24시간 후발효

배양방법 : 상자(45 X 45 cm), ♩균사생장정도 : 컬럼테스트

분말제 첨가량별 버섯발생 및 생육 특성

분말제첨가량	초발이소요일수(일)	생육일수(일)	자실체 특성				수 량(g/상자)
분말제첨가량	초발이소요일수(일)	생육일수(일)	갓크기(mm)	대굵기(mm)	대길이(mm)	유효경수(개)
0/ton(대조)	24	3	48.9	23.5	71.3	4.1	433.0 c
1g/ton	24	3	49.3	21.3	72.9	4.6	470.6 b
10g/ton	24	3	49.7	23.0	73.5	4.0	500.6 ab
50g/ton	24	3	50.5	22.2	73.1	3.8	500.2 ab
100g/ton	24	3	50.6	21.7	70.4	4.8	532.3 a

※ 수량: 1 주기

<시험 3> 시험결과

상기 시험 1의 분말제 제조를 위한 재료 선발과 관련하여,

분말제 종류별 수분흡수량은 미강이 23.3㎖/100g으로 낮아 분말제 제조시 미생물배양액의 첨가량을 최소화 할 수 있으며, 동결건조시 건조시간을 단축시킬 수 있을 것으로 판단되었고, 아울러 분말제 종류별 Bacillus pumillus 복합미생물을 첨가하여 배양기간 경과에 따른 미생물밀도는 밀기울과 미강을 사용하였을 때 배양 2일째 82∼84개/g로 높아졌음을 확인하였고, 또한 분말제 종류별 동결건조속도는 처리간 대등하였고, 동결건조 후 건조분말제의 Bacillus pumillus 복합미생물 증식속도는 미강에서 높았고, 아울러 Bacillus pumillus 복합미생물 분말제 보존기간별 느타리버섯 및 푸른곰팡이 균사생장 억제정도는 밀기울 및 미강에서 2개월 보존 후에도 푸른곰팡이버섯 균사생장을 억제하였고 느타리버섯 균사생장에는 영향을 주지 않았음을 확인하였다.

상기 시험 2의 유용미생물 분말제 첨가량 규명과 관련하여,

분말제 첨가량별 발효배지의 온도변화는 분말제 첨가량이 많은 처리구에서 배지온도가 높은 경향이었으며 배지 pH는 처리간 차이가 대등하였다. 또한, 분말제 첨가량별 발효배지의 C/N변화는 분말제 첨가량이 많은 처리구에서 발효가 진행됨에 따라 낮았으나, 발효후기에 처리간의 차이가 대등하였고, 또한 분말제 첨가량별 균사생장속도와 배양기간은 처리간 차이가 대등하였고, 배양율은 대조구(0 g/ton) 85.7% 대비 10 g/ton 이상의 첨가구에서 100 %였고, 분말제 첨가량별 초발이 소요일수 24일, 생육일수는 3일, 10 g/ton 이상의 첨가구에서 1주기 수량이 500.2 ∼ 532.3 g/상자로 대등하였음을 확인하였다.

<실시예 3> 폐면배지의 발효

가. 실험균주 및 종균제조

본 실험에 사용된 균주는 경기도농업기술원 버섯연구소에서 보유하고 있는 춘추느타리2호를 PDA 평판배지에 7일간 배양하고 톱밥과 미강이 80:20 비율로 혼합된 배지가 담긴 삼각플라스크에 이식하여 15일간 배양시킨 후 850 ㎖병으로 30일간 배양하여 종균으로 사용하였다.

나. 유용미생물 배양액 또는 분말제 준비

푸른곰팡이병균 4종에 길항력을 가지고 있고 느타리버섯 균사생장에 영향을 주지않는 선발 미생물 3종(Bacillus pumilus KME9002, Paenibacillus sp. KME9003, Pseudoxandomonas sp. KME9001)을 영양 브로스(Nutrient broth)가 들어있는 250 ml 삼각프라스크에 접종하여 120rpm으로 30℃에서 2일간에 종배양을 실시하였다. 본 배양은 80ℓ 스텐레스 액체배양용기에 영양 브로스를 넣고 121℃에서 60분간 살균 및 냉각 후 종배양된 본 발명에 따른 미생물을 접종하여 통기를 실시하면서 3일간 배양하였으며 접종직전의 유용미생물 밀도는 18ㅧ10⁷ml였다. 접종량은 폐면중량의 0.1∼10%로 하였다. 분말제는 NB배지에서 배양된 유용미생물배양액과 미강을 약 1∼2 : 1의 비율로 혼합하고 3일간 배양하여 3-4일간 동결건조한 후 물축이기 작업이 완료된성된 폐면에 접종하게 되는데, 접종직전에 100∼200ℓ의 물에 분말제 0.1∼1% 혼합하여 폐면에 골고루 뿌리면서 접종하였다.

다. 실험구 처리 및 배지야외발효

미생물의 살균기간 단축과 배양율 향상효과를 검토하기 위해 대조구1(야외발효+ 65℃ 12시간 저온살균 + 55℃ 3일간 후발효)와 야외발효직전 본 발명에 따른 미생물배양액 또는 분말제를 첨가하고, 저온살균을 생략하여 55℃에서 12시간 후발효를 실시하는 처리구1, 야외발효 후 저온살균을 생략하고 후발효(55℃ 3일간)를 실시하는 대조구2, 야외발효직전 본 발명에 따른 미생물배양액을 첨가한 후 저온살균과 후발효를 생략하는 처리구2, 야외발효 후 저온살균과 후발효를 생략하는 대조구3 등 5가지 처리구를 두어 실험을 실시하였다. 각각의 처리별로 빠렛트 위에 망사를 깔고 폐면을 폐면털이기계로 털어 높이 1∼1.2m, 폭 1∼1.2m로 쌓고 폐면내부로 충분히 물이 스며들도록 급수를 실시한 후, 본 발명에 따른 미생물배양액을 첨가하는 처리구에 폐면 20kg당 20ℓ를 접종하고 통기가 잘되는 얇은 부직포를 피복하여 8일간 야외발효를 실시하였다.

라. 배지발효특성 조사

2일 간격으로 배지내 온도, pH, 수분함량, 가스(O₂, CO₂, NH₃)농도, T-C 및 T-N, 미생물의 밀도, 균배양 및 생육특성 등을 조사하였다. 배지내 온도와 외기온도는 막대온도계와 함께 데이터로그(HOBO)로 조사하였고, 수분함량은 105℃ 건조중량법으로, pH는 배지재료와 증류수를 1:10의 무게비로 혼합하여 1시간 동안 정치한 후 pH 미터 (Orion-720)로 분석하였다. 배지 내 O₂, CO₂ 농도는 검지관으로 분석하였으며, 수집된 배지재료들에 대한 성분분석을 위해 시료를 음건하여 두었다가 전탄소, 전질소 함량을 분석하였고 전탄소는 회화법, 전질소는 켈달법으로 정량분석하였다. 미생물밀도조사를 위해 세균은 NA평판배지, 곰팡이는 YMPD평판배지를 이용하여 멸균수 10 ml에 폐면 1 g을 넣고 30분간 진탕시킨 후 10⁷까지 희석하였고, 배지에 0.1 ml를 도말한 다음 생성된 균총의 수를 조사하였다.

실험결과 배지내 온도변화는 본 발명에 따른 미생물 배양액 첨가구에서 초기 온도상승이 빨랐고, 발효 6일 이후부터 처리간 차이가 적었다(도 1). 또한, 배지수분함량은 발효기간이 경과함에 따라 감소하는 경향을 보였으며 처리간의 차이는 대등하였다(표 14).

처 리 내 용	발효기간별 수분함량(%)
처 리 내 용	0일	2	4	6	8
① 대조구1	73.2	69.6	68.5	67.8	66.1
② 처리구1	72.2	69.6	67.9	67.4	66.5
③ 대조구2	72.9	69.7	68.9	68.4	65.9
④ 처리구2	72.2	71.4	68.7	67.3	66.0
⑤ 대조구3	72.2	70.4	68.6	69.7	67.0

배지 pH는 발효기간이 경과함에 따라 높아졌으며, 미생물 배양액을 첨가한 처리구에서 초기 pH 값이 다소 높았으나 후기에는 처리간 차이가 적었다 (도 2). 초기 배지내 미생물 밀도는 미생물 배양액 첨가구에서 높았으나 배양 6일 이후부터 처리간 차이가 적었다.

처 리 내 용	발효기간별 미생물밀도(colony/g)
처 리 내 용	0일	2	4	6	8
① 대조구1	111×10⁵	211×10⁶	309×10⁶	712×10⁷	394×10⁷
② 처리구1	415×10⁵	641×10⁶	141×10⁷	803×10⁷	432×10⁷
③ 대조구2	157×10⁵	107×10⁶	289×10⁶	934×10⁷	466×10⁷
④ 처리구2	396×10⁵	714×10⁶	109×10⁷	793×10⁷	509×10⁷
⑤ 대조구3	87×10⁵	244×10⁶	422×10⁶	838×10⁷	429×10⁷

배지 전탄소 함량은 발효기간이 경과함에 따라 감소하였고, 전질소는 증가하는 경향을 보였으며 처리간 차이는 적었다(도 3, 4).

< 실시예 4> 느타리 버섯 균사의 생장

가. 종균접종, 배양관리 및 배양특성 조사

종균접종량은 850 ㎖ 종균병을 평당 12병씩 접종하였고, 0.03 mm 유공비닐을 피복하여 배양온도 22∼23℃, 습도 65∼70% 조건에서 배양완료 후 약 5일간 후배양을 실시하면서 각 처리별로 배양기간, 배양율, 이병율 등을 조사하였다. 배양일수는 종균접종 후 균활착이 완료될 때까지의 소요일수, 이병율은 전체 배양면적중 이병된 면적에 대한 백분율로 나타내었다.

배양일수는 처리구1, 대조구2에서 12일로 대조구1과 같았고, 처리구2 및 대조구3에서 18일로 길었다. 배양율은 처리구1, 대조구2에서 100%로 대조구와 같았고, 처리구2에서 60%, 대조구3에서 30%로 낮았다.

나. 발아유도, 생육관리 및 생육특성 조사

배양완료 후 버섯발생을 유도하기 위하여 온도를 15∼16℃, 습도를 95% 내외로 조절하였고, 버섯발생 후 습도는 85%, 환기는 버섯의 형태를 관찰하면서 적절히 조절하였다. 발아유도 및 생육관리를 실시하면서 초발이소요일수, 생육일수, 유효경수, 갓크기, 대굵기, 대길이 등의 자실체 특성과 수량, 회수율 등을 조사하였으며, 초발이소요일수는 종균접종후 원기가 형성될 때까지의 소요일수로, 회수율은 건배지중량에 대한 생버섯중량을 백분율로 나타내었다. 초발이 소요일수는 처리구1, 대조구2에서 20일로 대조구1과 같았다. 수량은 처리구1에서 48.1kg/평(평당건배지 54kg)으로 대조구1의 44.3 kg보다 높았다.

처 리 내 용	균사생장정도(mm/7일)
① 대조구 1	69
② 처리구 1	76
③ 대조구 2	72
④ 처리구 2	0
⑤ 대조구 3	0

처 리 내 용	배양일수(일)	배양율(%)	초발이일수(일)	자실체특성				수 량(kg/평)	회수율(%)
처 리 내 용	배양일수(일)	배양율(%)	초발이일수(일)	유효경수/다발(개)	갓크기(mm)	대굵기(mm)	대길이(mm)	수 량(kg/평)	회수율(%)
① 대조구1	12	100	20	14.3	37.0	13.3	61.3	44.3 ab	82.0
② 처리구1	12	100	20	13.6	34.5	12.3	70.2	48.1 a^♩	89.0
③ 대조구2	12	100	20	12.2	36.1	12.4	68.3	45.5 ab	84.3
④ 처리구2	18	60	-	-	-	-	-	-	-
⑤ 대조구3	18	30	-	-	-	-	-	-	-

<110> GYEONGGIDO AGRICULTURAL RESEARCH AND EXTENSION SERVICE <120> BACILLUS PUMILUS KME9002 HAVING ANTI-ACTIVITY OF PENICILLIUM, POWDER COMPRISING THE SAME STRAIN AND PROCESS FOR PRODUCING FERMENTING MEDIUM OF WASTE COTTON USING THE SAMEO <160> 3 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1422 <212> DNA <213> Bacillus pumilus <220> <221> gene <222> (1)..(1422) <223> 16s rDNA <400> 1 tgcaagtcga gcggacagaa gggagcttgc tcccggatgt tagcggcgga cgggtgagta 60 acacgtgggt aacctgcctg taagactggg ataactccgg gaaaccggag ctaataccgg 120 atagttcctt gaaccgcatg gttcaaggat gaaagacggt ttcggctgtc acttacagat 180 ggacccgcgg cgcattagct agttggtggg gtaatggctc accaaggcga cgatgcgtag 240 ccgacctgag agggtgatcg gccacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga 300 ggcagcagta gggaatcttc cgcaatggac gaaagtctga cggagcaacg ccgcgtgagt 360 gatgaaggtt ttcggatcgt aaagctctgt tgttagggaa gaacaagtgc gagagtaact 420 gctcgcacct tgacggtacc taaccagaaa gccacggcta actacgtgcc agcagccgcg 480 gtaatacgta ggtggcaagc gttgtccgga attattgggc gtaaagggct cgcaggcggt 540 ttcttaagtc tgatgtgaaa gcccccggct caaccgggga gggtcattgg aaactgggaa 600 acttgagtgc agaagaggag agtggaattc cacgtgtagc ggtgaaatgc gtagagatgt 660 ggaggaacac cagtggcgaa ggcgactctc tggtctgtaa ctgacgctga ggagcgaaag 720 cgtggggagc gaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgagtgctaa 780 gtgttagggg gtttccgccc cttagtgctg cagctaacgc attaagcact ccgcctgggg 840 agtacggtcg caagactgaa actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc 900 atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg tcttgacatc ctctgacaac 960 cctagagata gggctttccc ttcggggaca gagtgacagg tggtgcatgg ttgtcgtcag 1020 ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccttga tcttagttgc 1080 cagcattcag ttgggcactc taaggtgact gccggtgaca aaccggagga aggtggggat 1140 gacgtcaaat catcatgccc cttatgacct gggctacaca cgtgctacaa tggacagaac 1200 aaagggctgc ragaccgcaa ggtttagcca atcccataaa tctgttctca gttcggatcg 1260 cagtctgcaa ctcgactgcg tgaagctgga atcgctagta atcgcggatc agcatgccgc 1320 ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac cgcccgtcac accacgagag tttgcaacac 1380 ccgaagtcgg tgaggtaacc tttatggagc cagccgccga ag 1422 <210> 2 <211> 1417 <212> DNA <213> Pseudoxandomonas sp. <220> <221> gene <222> (1)..(1417) <223> 16s rDNA <400> 2 catgcaagtc gaacggcagc gggtaggaag cttgcttcct atgccggcga gtggcggacg 60 ggtgaggaac acatcggaat ctactccgtc gtgggggata acgtagggaa acttacgcta 120 ataccgcata cgacctaagg gtgaaagtgg gggaccgcaa ggcctcacgc gatggaatga 180 gccgatgtcc gattagctag ttggcggggt aaaggcccac caaggcgacg atcggtagct 240 ggtctgagag gatgatcagc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg 300 cagcagtggg gaatattgga caatgggcga aagcctgatc cagccatgcc gcgtgggtga 360 agaaggcctt cgggttgtaa agcccttttg ttggggaaga aatcctgctg gctaataccy 420 ggcggggatg acggtaccca aagaataagc accggctaac ttcgtgccag cagccgcggt 480 aatacgaagg gtgcaagcgt tactcggaat tactgggcgt aaagcgtgcg taggtggtgg 540 cttaagtccg ttgtgaaagc cctgggctca acctgggaat tgcagtggat actgggtcac 600 tagagtgtgg tagagggtgg cggaattccc ggtgtagcag tgaaatgcgt agagatcggg 660 aggaacaccc gtggcgaagg cggccacctg ggccaacact gacactgagg cacgaaagcg 720 tggggagcaa acaggattag ataccctggt agtccacgcc ctaaacgatg cgaactggat 780 gttgggttca atttgggact cagtatcgaa gctaacgcgt taagttcgcc gcctggggag 840 tacggtcgca agactgaaac tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagtat 900 gtggtttaat tcgatgcaac gcgaagaacc ttacctggtc ttgacatccg cggaactgcc 960 cagagatggg cgggtgcctt cgggagccgc gagacaggtg ctgcatggct gtcgtcagct 1020 cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca acccttgtcc ttagttgcca 1080 gcacgtaatg gtgggaactc taaggagacc gccggtgaca aaccggagga aggtggggat 1140 gacgtcaagt catcatggcc cttacgacca gggctacaca cgtactacaa tggtggggac 1200 agagggctgc gaacccgcga gggggagcca atcccagaaa ccccatctca gtccggattg 1260 gagtctgcaa ctcgactcca tgaagtcgga atcgctagta atcgcagatc agcattgctg 1320 cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca caccatggga gttggttgca 1380 ccagaagcag gtagcttaac cgcaaggagg gcgctgc 1417 <210> 3 <211> 1421 <212> DNA <213> Paenibacillus sp. <220> <221> gene <222> (1)..(1421) <223> 16s rDNA <400> 3 tgcaagtcga gcggagctta tccttcggga taagcttagc ggcggacggg tgagtaacac 60 gtaggcaacc tgccccttag cctgggataa ctaccggaaa cggtagctaa taccggataa 120 tccctttcct cgcctgaggr aaggataaaa ggcggagcaa tctgctgata agggatgggc 180 ctgcggcgca ttagctagtt ggtggggtaa cggctcacca aggcgacgat gcgtagccga 240 cctgagaggg tgaacggcca cactgggact gagacacggc ccagactcct acgggaggca 300 gcagtaggga atcttccgca atgggcgaaa gcctgacgga gcaacgccgc gtgagtgatg 360 aaggttttcg gatcgtaaag ctctgttgcc agggaagaac gtccggtaga gtaactgctr 420 ccggagtgac ggtacctgag aagaaagccc cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa 480 tacgtagggg gcaagcgttg tccggaatta ttgggcgtaa agcgcgcgca ggcggctatt 540 taagtctggt gtttaaacct tgggctcaac ctgaggtcgc actggaaact gggtggcttg 600 agtacagaag aggaaagtgg aattccacgt gtagcggtga aatgcgtaga gatgtggagg 660 aacaccagtg gcgaaggcga ctttctgggc tgtaactgac gctgaggcgc gaaagcgtgg 720 ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccacgccgta aacgatgagt gctaggtgtt 780 aggggtttcg atacccttgg tgccgaagtt aacacagtaa gcactccgcc tggggagtac 840 ggtcgcaaga ctgaaactca aaggaattga cggggacccg cacaagcagt ggagtatgtg 900 gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta ccaggtcttg acatccctct gaatcctcta 960 gagatagagg cggccttcgg gacagaggag acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt 1020 gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttgacttta gttgccagca 1080 ggttaagctg ggcactctag agtgactgcc ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac 1140 gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt actacaatgg ccggtacaac 1200 gggaagcgaa gccgcgaggt ggagccaatc ccagcaaagc cggtctcagt tcggattgca 1260 ggctgcaact cgcctgcatg aagtcggaat tgctagtaat cgcggatcag catgccgcgg 1320 tgaatacgtt cccgggtctt gtacacaccg cccgtcacac cacgagagtt tacaacaccc 1380 gaagtcggtg gggtaacccg caagggggcc agccgccgaa g 1421

Claims

푸른곰팡이에 대해 길항력을 가지며, 폐면 발효배지로부터 분리·동정된 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002).
제1항의 상기 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002, KACC 91269P)를 NB배지 또는 농산부산물을 이용한 액체배지에서 배양한 배양액 또는 고형물에서 함께 배양하여 생산된 배양물을 동결건조하여 제조하는 것을 특징으로 하는 느타리버섯 재배용 항 푸른곰팡이 분말제제.
느타리버섯 균사생장에 영향을 주지 않는 상기 항 푸른곰팡이 신규 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus KME9002, KACC 91269P) 또는 분말제제에 항 푸른곰팡이 신규 패니바실루스 에스피(Paenibacillus sp. KME9003, KACC 91270P), 항 푸른곰팡이 신규 슈도산도모나스 에스피(Pseudoxandomonas sp. KME9001, KACC 91268P) 중 선택되는 적어도 1종의 미생물을 추가하여 생산한 배양액을 폐면배지 발효과정에서 첨가하여 제조하는 것을 특징으로 하는 느타리버섯 재배용 항 푸른곰팡이 폐면배지의 제조방법.