KR20090089874A

KR20090089874A - Ｅｇｃｇ 및 라이코펜을 함유하는 경구 조성물

Info

Publication number: KR20090089874A
Application number: KR1020097012629A
Authority: KR
Inventors: 레지나 고랄지크; 요셉 슈바저; 캐린 베르츠
Original assignee: 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이.
Priority date: 2006-12-20
Filing date: 2007-12-13
Publication date: 2009-08-24
Also published as: CN101568322A; EP2091506A1; EP1958611A1; WO2008074434A1; CN103082293A; US20090298933A1; JP2010513348A; US20120059051A1

Abstract

본 발명은 100:1 내지 1:1의 범위의 EGCG 대 라이코펜의 비를 가짐을 특징으로 하는 (-)-에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG) 및 라이코펜의 조합을 함유하는 조성물에 관한 것이다.

Description

ＥＧＣＧ 및 라이코펜을 함유하는 경구 조성물{ORAL COMPOSITION CONTAINING EGCG AND LYCOPENE}

본 발명은 피부의 일광 유도된 노화(광노화)를 방지하기 위해 특정한 비의 (-)-에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG) 및 라이코펜을 함유하는 경구 조성물에 관한 것이다.

피부가 UV 조사에 만성적으로 노출된다면, 이는 영향을 받는 피부 영역에서 화학선 또는 일광 각화증을 갖는 광노화된 피부로서 임상적으로 표현되는 표피 및 진피 손상, 예를 들면 각막 비후증, 케라티노사이트 형성 장애 및 진피 탄력섬유증이 야기된다. 피부 광손상 및 광노화의 분자 기작은 광범위한 연구 대상이어왔다. UV 조사는 전체 범위의 세표 표면 성장 인자 및 사이토카인 수용체를 활성화시킨다([Rittie and Fisher 2002]). 이러한 리간드-독립적 수용체 활성화는 전사 인자 AP-1을 흉내내도록 수렴되는 다수의 다운스트림 신호 전달 경로를 유도한다. AP-1에 의해 상승 조절되는 유전자 중에는 여러 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP) 패밀리 부류가 있다.

따라서 MMP는 일광 UV 조사-유도된 피부 손상의 원인이 되어 피부 색조와 탄성에 영향을 미쳐 조기 노화를 야기하는 것들 중 하나이다. MMP는 피부의 세포외 매트릭스에서 콜라겐과 엘라스틴을 분해한다. 증가된 MMP 발현 및 활성은 콜라겐 단백질분해를 증가시키고, 이와 함께 콜라겐 발현을 감소시켜 피부 탄력섬유증과 주름을 생성한다(Berneburg 2003). 이의 증후는 가죽같은 텍스쳐, 주름, 얼룩덜룩한 색소 형성, 이완 및 혈색 나쁨을 포함한다.

MMP는 가장 중요하고 잘 확립된 광경화와 연관된 유전자중 하나이다. 따라서, 광경화에 관한 식이 성분의 보호 능력을 확립하기 위해 UVA-유도된 MMP의 억제에 미치는 이들의 영향을 조사하는 것이 주된 관심사이다. (-)-에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)는 다양한 피부 콜라게나제를 억제하는 식이 화합물중 하나이다(Lee et al., 2005). 또한 프로-비타민 A 카로티노이드인 베타카로텐은 UVA-유도된 콜라게나제를 억제하는 것으로 발견되었다(Wertz et al., 2004).

한편, 비-프로-비타민 A 식이 카로티노이드인 라이코펜은 UVA-유도된 MMP1을 추가로 증가시키는 것으로 개시되어 왔다(Offord et al., 2002). 이러한 증가는 비타민 E와의 조합에서만 방지되었다.

따라서, 본 발명의 목적은, 피부의 일광-유도된 노화(광 노화)를 방지하는 활성 성분을 제공하는 것이다.

놀랍게도, 본 발명의 목적이 EGCG와 라이코펜의 상승적 조합, 특히 100:1 내지 1:1의 범위의 비의 EGCG 및 라이코펜의 조합을 함유하는 경구 조성물에 의해 달성되는 것으로 밝혀졌다.

당분야의 숙련자는 EGCG와 라이코펜의 조합이 UVA-유도된 MMP1을 억제하고, 따라서 노화방지/주름방지 효과를 제공하는데 있어 탁월한 상승적 활성을 나타낼 것이라는 점을 예상하지 못하였다. 또한 실제로 일광/UV-광 노출되기 며칠전 내지 몇주 전부터 투여될 경우 라이코펜과 EGCG의 상승적 조합은 또한 광노화를 방지한다. 강렬한 햇빛에 노출(즉, 일광욕)되기 직전, 노출되는 동안, 또는 노출된 후에 섭취된 경우 또한 보호한다.

본원에서 사용되는 용어 "EGCG"는 (-)-에피갈로카테킨 갈레이트 및/또는 이의 하나 이상의 유도체(예를 들면 에스터화된 형태, 글라이코사이드, 설페이트)를 의미한다. (-)-에피갈로카테킨 갈레이트 그 자체가 특히 바람직하다.

본 발명의 바람직한 양태에서, 사용된 EGCG는 80% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 보다 더 바람직하게는 92% 이상, 가장 바람직하게는 94% 이상의 순도를 갖는다.

추출물의 총 양을 기준으로 80% 이상(바람직하게는 85% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 보다 더 바람직하게는 92% 이상, 가장 바람직하게는 94% 이상)의 양의 EGCG를 함유하며, 바람직하게는 미국 특허 제6,383,392호, 유럽 특허 제1 103 550호, 미국 특허 출원 제10/246 112호 및 유럽 특허 제1 077 211호에 개시된 임의의 방법에 의해 수득된 수성 녹차 추출물이 특히 바람직하다. 바람직하게는 다른 폴리페놀 및 카테킨, 예를 들면 갈로카테킨 갈레이트, 카테킨 갈레이트, 에피카테킨 갈레이트, 에피갈로카테킨, 갈로카테킨 및 에피카테킨의 총 양은 녹차 추출물의 총 중량을 기준으로 5중량% 이하이다. 보다 바람직하게는, 갈로카테킨 갈레이트의 양은 2.5중량% 이하이고/이거나, 에피카테킨 갈레이트의 양은 5중량% 이하(바람직하게는 3중량% 이하)이다.

본 발명에 따르면, 녹차 추출물중의 카페인의 양이 2.5중량% 이하, 바람직하게는 0.1중량% 이하이고/이거나, 갈산의 양이 0.1중량% 이하(각각은 녹차 추출물의 총 중량에 근거한다)이면 유리하다.

본원에서 사용되는 용어 "라이코펜"은 모든 E 및 Z 입체이성질체를 포함한다. 다르게는 많은 양의 라이코펜을 함유하는 토마토 추출물을 또한 사용할 수 있다.

본 발명에 따르면, EGCG 대 라이코펜의 비가 100:1 내지 1:1의 범위, 바람직하게는 50:1 내지 3:1의 범위인 것이 유리하고, 25:1 내지 5:1의 범위가 가장 바람직하다.

본 발명에 따르면 효과적인 1일 양("1일 투여량")이 하기 개시된 범위인 방식으로 활성 성분을 투여하는 것이 유리하다. 1일 투여량이 한번에 모두(단일 투여에 의해) 적용되는지 여러번의 투여량으로 투여되는지는 무관하다.

EGCG: 약 70kg의 체중을 갖는 인간에 대한 1일 투여량은 50 내지 600mg이고, 약 70kg의 체중을 갖는 인간에 대한 바람직한 1일 투여량은 150 내지 300mg이다.

라이코펜: 약 70kg의 체중을 갖는 인간에 대한 1일 투여량은 40mg을 초과하지 않고, 바람직하게는 25mg을 초과하지 않고, 약 70kg의 체중을 갖는 인간에 대한 바람직한 1일 투여량은 0.1 내지 40mg, 보다 바람직하게는 0.5 내지 25mg이다.

조성물이 경구 투여용 정제, 캡슐, 과립 또는 분말 형태로 제조된다면, 담체로서 락토즈, 슈크로즈, 염화 나트륨, 글루코스, 유레아, 전분, 덱스트린 및/또는 말토덱스트린, 탄산칼슘, 인산칼슘 및/또는 인산수소칼슘, 카올린, 결정성 및/또는 미세결정성 셀룰로즈 및/또는 규산과 같은 부형제; 결합제, 예를 들면 물, 에탄올, 프로판올, 단순 시럽, 글루코스 용액, 전분 및/또는 가수분해된 전분 용액, 젤라틴 용액, 카복시메틸셀룰로즈, 하이드록시프로필셀룰로즈, 하이드록시프로필전분, 셸락(shellac), 메틸셀룰로즈, 에틸셀룰로즈, 인산칼슘 및/또는 폴리비닐 피롤리돈; 붕해제, 예를 들면 건조 전분, 크로스카멜로즈, 크로스포비돈, 나트륨 알기네이트, 아가 분말, 라미나란 분말, 탄산수소 나트륨, 탄산칼슘, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스터, 나트륨 라우릴 설페이트, 스테아르산 모노글리세라이드, 전분 및/또는 락토즈; 분해-방지제, 예를 들면 스테아르산, 카카오 버터 및/또는 수소화된 오일; 흡수촉진제, 예를 들면 4차 암모늄 염기 및/또는 나트륨 라우릴 설페이트; 습윤제, 예를 들면 글리세롤 및/또는 전분; 흡착제, 예를 들면 전분, 락토즈, 카올린, 벤토나이트 및/또는 콜로이드성 실리카; 윤활제, 예를 들면 정제된 활석, 스테아르산 염, 붕산 분말 및/또는 폴리에틸렌 글리콜; 맛 교정약, 예를 들면 슈크로즈, 오렌지 껍질, 시트르산 및/또는 숙신산 등과 같은 부형제가 사용될 수 있다.

조성물이 정제 형태로 제조되면, 이들은 일반적인 코팅, 예를 들면 당 코팅된 정제, 젤라틴 코팅된 정제, 장내 코팅된 정제, 필름 코팅된 정제, 이중 코팅된 정제, 다층 코팅된 정제 등으로 제공될 수 있다. 캡슐은 본 발명에 따른 화합물을 상기 예시되거나 당 분야의 현재 기술 상태에 따른 다양한 담체와 혼합하고, 혼합물을 경질 젤라틴 캡슐, 연질 젤라틴 캡슐 등에 충진함으로써 제조된다.

예를 들면 우수한 균형잡힌 영양을 유지하거나 일부 식사에서 빠진 적절한 양의 필수 영양분을 수득하기 위해, 멀티-비타민 및 무기물 보충제를 본 발명에 따른 조성물에 첨가할 수 있다. 멀티-비타민 및 무기물 보충제는 또한 생활양식 및 당뇨병에서 흔히 관찰되는 흔한 부적절한 식사 패턴으로 인한 영양 손실 및 결핍에 대해 질병을 방지하고 보호하는데 이용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 식품 또는 음료 조성물일 수 있다. 음료는 예를 들면 스포츠 음료, 에너지 음료 또는 다른 소프트 드링크, 또는 임의의 다른 적합한 음료 제제일 수 있다.

스포츠 드링크는 전해질, 당 및 다른 영향분을 회복시킬 뿐 아니라, 운동선수를 다시 수화시키는 것을 지원하는 음료이다. 스포츠 드링크는 일반적으로 등장성이고, 이는 이들이 인체에서 발견되는 것과 동일한 비율의 영양분을 함유함을 의미한다.

에너지 드링크는 사용자에게 많은 에너지를 주고자 하는, (적법한) 흥분제, 비타민(특히, 비타민 B) 및/또는 무기물을 함유하는 음료이다. 흔한 성분은 카페인, 구아라나(guarana)(구아라나 식물에서 얻은 카페인) 및/또는 타우린, 다양한 형태의 인삼, 말토덱스트린, 이노시톨, 카르니틴, 크레아틴, 글루쿠로노락톤, 조효소 Q10 및/또는 징코 빌로바(ginkgo biloba)를 포함한다. 일부는 높은 수준의 당 또는 글루코즈를 함유할 수 있는 반면, 다른 것들은 당 알콜 및/또는 인공 감미료, 예를 들면 Ca-사이클라메이트 또는 아스파탐으로 부분적으로 또는 완전히 감미된다. 이들 음료는 대부분 가향되고/되거나 착색된다.

소프트 드링크는 알콜을 함유하지 않는 음료이다. 일반적으로, 용어는 찬 음료에만 적용된다. 뜨거운 초콜렛, 차 및 커피는 소프트 드링크로서 간주되지 않는다. 용어는 원래 탄산 음료만을 언급하였고, 여전히 이런 방식으로 흔히 사용된다.

조성물이 하기 식품 제품중 하나의 형태로 제조되는 경우, 본 발명에 따르면 조성물 중의 EGCG의 양과 라이코펜의 양이 하기 표에 주어진 범위에서 선택되는 것이 유리하다:

음식 카테고리	전형적인 한끼분 크기	음료(L) 또는 음식 (kg) 당 EGCG(mg)	음료(L) 또는 음식 (kg) 당 라이코펜(mg)	비 (EGCG:라이코펜)
음료(최종 제품)(예를 들면 소프트 드링크, 쥬스, 차, 스프)	250ml	100 내지 600, 바람직하게는 200 내지 400	4 내지 20	10:1 내지 50:1
유제품(예를 들면 밀크 쉐이크, 요구르트, 아이스크림)	150g	170 내지 1000	4 내지 20	10:1 내지 50:1
단 것(예를 들면 초콜렛, 캔디, 민트, 젤리)	매일 5g 짜리 1 내지 5 조각 = 5 내지 25g	500 내지 10,000, 바람직하게는 500 내지 1000	50 내지 200	10:1 내지 100:1
기타 식품(예를 들면 쿠키, 뮤슬리 바)	25g	400 내지 4,000, 바람직하게는 400 내지 1400	40 내지 200	10:1 내지 50:1

조성물이 정제 또는 캡슐의 형태로 제조되는 경우, 본 발명에 따르면 조성물 중의 EGCG의 양과 라이코펜의 양이 하기 표에 주어진 범위에서 선택되는 것이 유리하다:

카테고리	전형적인 투여량	정제/캡슐당 EGCG mg	정제/캡슐당 라이코펜 mg	비(EGCG:라이코펜)
정제	매일 1 내지 2개	50 내지 150	1 내지 10	5:1 내지 100:1
캡슐	매일 1 내지 2개	50 내지 150	1 내지 10	5:1 내지 100:1

실시예 1

매트릭스 메탈로프로테이나제-1의 UV-A 유도된 발현의 억제에 대한 상승 효과

1차 인간 진피 섬유아세포를 항생제/항진균제, 2mM L-글루타민 및 7.5% 소의 태아 혈청이 보충된 글루타민이 없는 EMEM(Earle's Minimum Essential Medium)중에서 37℃/5% CO₂에서 배양하고, 100% 컨플루언시가 될 때까지 성장시켰다. 조사하기 48시간 전에, 세포를 EMEM(AB/AM, L-글루타민 및 2% FCS가 있는) 중의 바람직한 물질과 함께 예비배양하였다. 24시간 후에, 배지를 물질이 있는 신선한 배지(신선하게 제조된)로 교체하였다. 조사를 위해, 배지를 제거하고, 인산염-완충된 염수(PBS)로 6회 세척 단계 후에 인산염-완충 염수(PBS)로 대체하였다. 그런 다음 플레이트를 30J/cm² UVA1에 노출시켰다. UV1 아웃풋은 약 150mW/cm²였다. 조사한 후에, 세포 마이크로플레이트 중의 인산염-완충된 염수를 (막 제조된) 물질이 있는 배양 배지 (+7.5% FCS)로 교환하고, 세포를 CO₂-배양기에서 추가 24시간동안 배양하였다(MMP-1 측정). 배양 배지를 제거하고, 세포를 인산염-완충된 염수로 세정하고, 전체 플레이트를 액체 질소 중에서 냉동시켰다. 알엔이지(RNeasy) 총 RNA 키트(퀴아겐(Qiagen), 독일 힐덴 소재)를 이용하여 총 RNA를 단리하였다. 260/280에 서의 광도계 측정을 통해 RNA 농도를 측정하였다. RT-PCR을 위해 총 RNA(75ng)의 분획을 슈퍼스크립트(Superscript: 상표명) III 퍼스트-스트랜드(First-Strnad) 합성 시스템을 이용하여 cDAN-합성에 적용하였다. 각각의 화합물에 대해 2개의 시료를 분석하였다. PCR 반응은 옵티콘(Opticon) 1(MJ Research(엠제이 리서치), 미국 매사추세츠주 왈탐 소재)에서 SYBR 그린(Green, 등록상표) PCR 마스터 믹스(Master Mix)(어플라이드 바이오시스템스(Applied Biosystems), 독일 다름스타트 소재)를 이용하여 수행되었다. 실시간 OCR 대조군 세포와 처리된 세포의 상대적 발현을 비교하기 위해 2^{(-델타델타C(T))} 방법을 이용하였다.

결과는 표 1에 요약되어 있다.

UV-A 처리는 조사되지 않은 세포에서 검출된 수준에 비해 MMP-1 RNA를 약 10배 증가되도록 유도하였다(도시되지 않음). EGCG 및 라이코펜은 이 발현을 각각 13% 및 65% 감소시켰다. 이와는 대조적으로, 물질이 조합되면, UV-A 유도된 MMP-1 발현은 완전히 없어졌다. 관찰된 억제와 예상된 억제(단일 화합물 각각의 값의 합) 사이에 양의 값(즉 22%)이 수득되었기 때문에, 이는 EGCG 및 라이코펜이 MMP-1의 조절에 대해 상승적 효과를 발휘함을 의미한다.

피부 섬유아세포에서 MMP-1의 발현

처리	화합물	UV-A만으로 처리된 세포에 대한 MMP-1 발현	억제율, %	△(관찰된 억제값 - 예상된 억제값)
UV-A		(100%)	-	-
UV-A	EGCG	87	13	-
UV-A	라이코펜	35	65	-
UV-A	EGCG + 라이코펜	0	100	22

실시예 2

장기간 노화방지용 정제

조성:

	효능/정제	양/정제
EGCG(테아비고(TEAVIGO: 상표명) TG로서)	300mg	333mg
라이코펜(레디비보(redivivo: 상표명) 10% CWS/S-TG로서)	10mg	100mg
응집된 락토즈(타블레토즈(Tablettose: 상표명) 80)		125mg
미세결정성 셀룰로즈(타블레토즈 80)		312mg
이산화규소(에어로실(Aerosil: 상표명) 200)		5mg
크로스포비돈 NF(폴리플라스돈(Polyplasdone: 상표명) XL 10으로)		20mg
마그네슘 스테아레이트		5mg
정제 중량		900mg

제조:

레디비보(라이코펜) 10% CWS/S-TG, 테아비고 TG, 응집된 락토즈, 미세결정성 셀룰로즈, 이산화규소 및 크로스포비돈을 적절한 용기에 넣고 텀블 혼합기로 20분간 혼합한다. 마그네슘 스테아레이트를 1mm 체를 통해 체질하고, 첨가하고, 조성물을 2분동안 다시 혼합한다.

코쉬(Korsch) XP1 정제 프레스, 펀치 사이즈 17x7.87mm 타원형을 이용하여 분말을 정제로 압축한다.

봄, 즉 일광 노출이 증가되기 최소한 2달 전부터 시작하여 하루에 정제 1개씩을 섭취하고, 계절동안 계속 유지한다.

실시예 3

노화방지 보호를 부스팅하기 위한 인스탄트 음료

조성

	부
자일리톨	663.4
시트르산, 무수물	220.0
카복시메틸 셀룰로즈	30.0
트라이-나트륨 시트레이트	22.0
트라이-칼슘 포스페이트	20.0
오렌지 향	20.0
레디비보^TM 10% CWS/S-TG	6.0
아스코브산	8.0
감미료 트윈스위트	4.0
테아비고^TM으로서 EGCG	6.6
분말 혼합 총	1000.0

제조:

모든 성분을 500㎛ 체를 통해 체질한다.

적절한 용기에 분말을 넣고, 텀블러 블렌더에서 20분 이상 혼합한다.

물을 첨가함으로써 1리터 음료당 35g 분말을 이용한다.

인스탄트 음료는 240ml의 준비된 음료의 1회 섭취량 당 50mg의 EGCG 및 5mg의 라이코펜을 함유한다.

광범위한 일광욕 동안 및 일광욕 후에 하루에 3개까지 섭취할 것이 권고된다.

실시예 4

연속적인 기본 노화방지 보호용 민트

조성

	효능/민트	양/민트
EGCG(테아비고^TMTG으로서)	10mg	11.1mg
라이코펜(레디비보^TM 10% CWS/S-TG로서)	0.5mg	5mg
아스코브산 미세 과립으로서 비타민 C		10.5mg
네오소브 60W로서 소르비톨		163.6mg
이산화규소(에어로실^TM 200)		1mg
아로마 프레스코포르테 퍼마실(Permaseal) 60470-31 (지보당)		10mg
아로마 아이스주커 퍼마실 60153-73 (지보당)		6.0mg
트윈스위트로서 감미료		1.6mg
PEG 6000		20.0mg
마그네슘 스테아레이트		1.2mg
총 중량		230.0mg

제조:

테아비고^TM TG, 레디비보^TM 10% CWS/S-TG, 아스코브산 미세 과립, 소르비톨, 아로마, 감미료 및 PEG 6000을 드럼에서 혼합하고, 텀블러 혼합기를 이용하여 10분간 혼합하였다. 소르비톨 및 이산화규소를 1mm 체를 이용하여 체질하고, 이를 별개의 드럼에서 10분간 혼합하였다. 2개의 분말 혼합물을 조합하고, 10분동안 다시 혼합하였다. 마그네슘 스테아레이트를 1mm 체를 통해 체질한 후, 첨가하고, 2분간 혼합하였다.

코쉬(Korsch) XP1 정제 프레스, 펀치 사이즈 8mm 원형을 이용하여 분말을 정제로 압축한다.

하루에 5개 이하의 민트가 권장된다.

테아비고^TM, 테아비고^TM TG 및 레디비보^TM 10% CWS/S-TG: DSM 뉴트리셔날 프로덕츠의 제품 상표명.

타블레토즈^TM 80: 브렌타그 엔.브이.(Brenntag N.V.)의 제품 상표명.

에어로실^TM 200: 데구사(Degussa)의 제품 상표명

폴리플라스돈^TM XL 10: ISP의 제품 상표명

Claims

100:1 내지 1:1의 범위의 (-)-에피갈로카테킨(EGCG) 대 라이코펜의 비를 특징으로 하는 EGCG와 라이코펜의 조합을 함유하는 조성물.

제 1 항에 있어서,

EGCG 대 라이코펜의 비가 50:1 내지 3:1의 범위임을 특징으로 하는 조성물.

제 1 항에 있어서,

EGCG 대 라이코펜의 비가 25:1 내지 5:1의 범위임을 특징으로 하는 조성물.

제 1 항 내지 제 3 항중 어느 한 항에 있어서,

경구 섭취에 적합한 조성물.

제 4 항에 있어서,

음료임을 특징으로 하는 조성물.

제 4 항에 있어서,

유제품임을 특징으로 하는 조성물.

제 4 항에 있어서,

단 것임을 특징으로 하는 조성물.

일광 유도된 콜라게나제를 억제하기 위한 제 1 항 내지 제 7 항중 어느 한 항의 조성물의 용도.

일광 유도된 콜라겐 및 엘라스틴 분해를 감소시키기 위한, 제 1 항 내지 제 7 항중 어느 한 항의 조성물의 용도.

일광 유도된 주름 및 피부 노화의 예방 및/또는 감소를 위한 제 1 항 내지 제 7 항중 어느 한 항의 조성물의 용도.