KR20090073255A - 질병, 악성 종양 및 장애를 치료하기 위한 표적화 분열 생체 분자성 접합체, 및 그의 생성 방법 - Google Patents

질병, 악성 종양 및 장애를 치료하기 위한 표적화 분열 생체 분자성 접합체, 및 그의 생성 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20090073255A
KR20090073255A KR1020097010746A KR20097010746A KR20090073255A KR 20090073255 A KR20090073255 A KR 20090073255A KR 1020097010746 A KR1020097010746 A KR 1020097010746A KR 20097010746 A KR20097010746 A KR 20097010746A KR 20090073255 A KR20090073255 A KR 20090073255A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cleavage
polypeptide
nucleic acid
effector
disease
Prior art date
Application number
KR1020097010746A
Other languages
English (en)
Inventor
바딤 데미도브
나탈리아 브로우드
찰스 캔터
윌리엄 에반스
Original Assignee
트르스티스 오브 보스톤 유니버시티
세인트 쥬드 칠드런즈 리써치 호스피탈
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 트르스티스 오브 보스톤 유니버시티, 세인트 쥬드 칠드런즈 리써치 호스피탈 filed Critical 트르스티스 오브 보스톤 유니버시티
Publication of KR20090073255A publication Critical patent/KR20090073255A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/642—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a cytokine, e.g. IL2, chemokine, growth factors or interferons being the inactive part of the conjugate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A61K47/6819—Plant toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A61K47/6819—Plant toxins
    • A61K47/6821—Plant heterodimeric toxins, e.g. abrin or modeccin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A61K47/6819—Plant toxins
    • A61K47/6821—Plant heterodimeric toxins, e.g. abrin or modeccin
    • A61K47/6823—Double chain ricin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A61K47/6819—Plant toxins
    • A61K47/6825—Ribosomal inhibitory proteins, i.e. RIP-I or RIP-II, e.g. Pap, gelonin or dianthin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A61K47/6819—Plant toxins
    • A61K47/6825—Ribosomal inhibitory proteins, i.e. RIP-I or RIP-II, e.g. Pap, gelonin or dianthin
    • A61K47/6827—Ricin A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A61K47/6829—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxins or Pseudomonas exotoxin A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0045—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent agent being a peptide or protein used for imaging or diagnosis in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 핵산 및 폴리펩티드를 지정 표적화하기 위한 분열-생체 분자성 접합체의 생성 방법 및 이를 위한 조성물에 관한 것이다. 보다 바람직하게, 이러한 조성물 및 방법은 상기 분열 생체 분자성 접합체를 질병, 악성 종양 및 장애를 치료하고 스크리닝하는 데에 사용할 수 있게 해준다. 몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체는 프로브와 접합된 분열 효과인자 단백질 단편을 포함하고, 양 프로브를 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드, 예를 들어 병원성 핵산 서열 또는 병원성 단백질과 상호 작용시키면 분열-효과인자 단편들이 함께 결합하여, 효과인자 분자의 리어셈블리가 촉진된다. 효과인자 분자에 따라서, 단백질 상보성으로 인해, 특히 질병, 악성 종양 및 장애를 치료하기 위한 세포성 효과가 발생한다.
분열-생체 분자성 접합체, 단백질 상보성, 분열 효과인자 단편, 병원성 표적 핵산, 병원성 표적 폴리펩티드

Description

질병, 악성 종양 및 장애를 치료하기 위한 표적화 분열 생체 분자성 접합체, 및 그의 생성 방법 {Targeted split biomolecular conjugates for the treatment of diseases, malignancies and disorders, and methods of their production}
참고 출원
본 출원은 35 U.S.C. 119(e) 하에 미국 가특허원 제60/854,892호 (2006년 10월 27일자로 출원됨) (그의 전문이 본원에 참고로 도입된다)의 이권을 청구하고 있다.
본 발명은 핵산 및 폴리펩티드를 지정 표적화하기 위한 분열-생체 분자성 접합체의 생성 방법 및 이를 위한 조성물에 관한 것이다. 보다 바람직하게, 이러한 조성물 및 방법은 상기 분열 생체 분자성 접합체를 질병, 악성 종양 및 장애를 치료하는 데에 사용할 수 있게 해준다.
많은 유형의 종양/암 (백혈병, 림프종, 육종, 선종 포함), 바이러스성 질환 (HIV/AIDS, 조류 플루, SARS 포함) 및 기타 장애는 병리상태-유발성 단백질 또는 병원성 단백질을 암호화하는 질병 특이적 RNA를 수반하는 세포에 기인한다. 안티센스 올리고뉴클레오티드, 리보솜 및 소형 간섭 RNA (siRNA)에 의해 병원성 RNA를 서열 특이적 억제하거나 분해시키기 위한 몇 가지 치료적 접근 방식이 개발되었다. 그러나, 병리학적 세포를 치료하는 데에 있어서 이러한 기술과 접근 방식을 사용한 경우일지라도, 세포는 여전히 살아 있어 해당 질병의 재발이나 퇴행이 유발될 수 있다.
또 다른 전략은 단백질 독소를 병리학적 세포에 우선적으로 전달하여 이들을 선택적으로 사멸시키는 면역독소를 이용하는 것이다. 그러나, 고 독성과 고 면역원성 둘 다로 인해 면역독소의 임상적 사용이 제한되었다. 이러한 상황 하에서, 고 독성은 완전한 독소를 전달되는 항체와 연결하여 사용하였기 때문이며, 이로써 독소는 덜 효율적이긴 하지만 건강한 세포을 또한 표적으로 할 수 있다. 고 면역원성은 독소에 대항한 항체의 재생 때문인데, 이는 혈류 내에서 보호되지 않은 채로 순환한 후, 전달되는 항체에 의해 표적 세포에 전달된다.
면역독소는 전형적으로, 색다른 효력을 지닌 단백질 독소 또는 항체와 선택적으로 연결된 세포 유형을 갖는 표적화 부분, 예를 들어 리간드, 성장 인자 또는 항체로 구성된다 [참고: Hall et al, 2001; Cancer Res; 81;93-124]. 이러한 표적화 부분은 악성 세포 표면 상의 특이적 수용체에 대한 완전 분자를 인식하고, 이를 수용체에 전달한다. 그 다음, 독소는 (i) 시토졸에 도달하고 생명 유지에 필요한 세포 과정을 촉매적으로 불활성화시키거나 또는 (ii) 종양 세포 막을 변형시킴으로써 세포 사멸을 촉발시킨다. 면역독소에 사용된 독소는, 전형적으로 암 세포 상에 특이적으로 발현된 표면 수용체를 인식하고 이와 결합하는 항체인 표적화 부분에 태그화되거나, 또는 암성 세포의 표면 상에 특이적으로 발현되는 수용체에 대한 리 간드에 태그화된다. 흔히 사용되고 있는 면역독소는 모노클로날 항체 (MAb)와 접합된 리보뉴클레아제를 이용하는데 [참고: Hurset et al, 2002; 43;953-959], 이는 종종 암 세포의 표면 수용체를 표적화하고 단일 분자를 수반하는 세포를 사멸시킬 수 있는 독소를 수반하고 있다 [참고: Yamaizumi et al, 1978; 15:245-250; Eiklid et al, 1980; 126:321-326].
재조합 면역독소를 사용하는 데에는 몇 가지 주요 제한 사항이 있는데, 특히 특이성은 표적화 항원의 분포 국재 및 발현 사건에 의해 결정된다. 몇몇 경우에, 표적 수용체가 종양 세포 뿐만 아니라 정상 세포에도 제시되는 경우에는 비특이적 결합과 부작용이 일어날 수 있다.
요약
본 발명의 발명자들은 질병, 장애 및 악성 종양을 표적화 치료하기 위한 분열-생체 분자성 접합체의 생성 방법 및 용도를 밝혀내었다. 보다 구체적으로 언급하면, 본 발명은 각 효과인자 단편을 프로브에 접합시킨 분열 효과인자 폴리펩티드를 포함하는 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 질병, 장애 및 악성 종양을 치료하는 방법에 관한 것이다. 양 프로브를 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드, 예를 들어 병원성 핵산 서열 또는 병원성 단백질과 상호 작용시키면 효과인자 단편들이 함께 결합되어, 당해 분야에서 효과인자 분자의 "단백질 상보성"으로서 지칭되기도 하는 리어셈블리 (reassembly)가 촉진된다. 효과인자 분자에 따라서, 단백질 상보성으로 인해 세포성 효과가 나타난다. 이러한 본 발명의 방법은 치료적 단백질 상보성 방법에 기초한다.
몇몇 양태에서는, 표적 핵산이 DNA 또는 RNA이고, 몇몇 양태에서는 돌연변이 및/또는 다형성을 포함하는 유전자를 암호화하는 핵산 서열이다. 기타 양태에서, 표적 핵산은 병원성 단백질, 예를 들어 종양형성 유전자, 기능적으로 이상하게 발현된 단백질, 예를 들어 부적당한 단백질 발현 (즉, 정상적인 것과 비교해서 감소되거나 증가된 수준의 단백질 발현), 또는 부정확한 조직 또는 세포 유형에서 발현된 단백질을 암호화하는 핵산이다. 기타 양태에서, 표적 핵산은 병원체 게놈 또는 병원체 핵산, 예를 들어 바이러스성 (예: HIV 또는 조류 플루) 또는 기타 병원체 게놈 또는 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 양태에서, 표적은 폴리펩티드, 예를 들어 돌연변이된 단백질, 폴딩되지 않은 단백질, 병원체로부터의 단백질, 종양형성 유전자 단백질 등이지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체의 효과인자 분자 성분은 독소, 예를 들어, 세균성 또는 식물 독소이다. 기타 양태에서, 효과인자 분자는 뉴클레아제, 예를 들어 DNase 또는 RNase이다. 기타 양태에서, 효과인자 분자는 세포독소, 예를 들어 사이토킨이다. 기타 양태에서, 효과인자 분자는 프로테아제 분자이고, 기타 양태에서, 효과인자 분자는 세포 사멸 경로를 유도시키고, 예를 들어 효과인자 분자는 프로-세포소멸성 분자, 예를 들면 Bad, bax 및 당업자에 통상적으로 공지된 기타 프로-세포소멸성 단백질일 수 있다. 또 다른 양태에서, 효과인자 분자는 세포 사멸을 억제시키거나 또는 세포 생존 경로를 유도시키는데, 예를 들어 bcl-2 계열 및 IAP 단백질 계열 구성원과 같은 항-세포소멸성 분자이다.
또 다른 양태에서, 효과인자 분자는 이차 작용제를 세포독성 분자 내로 촉매 시키는 감작성 분자인데, 예를 들어 프로-드럭 (prodrug) 알로퓨리놀 (allopurinol)을 세포독성 기능을 지닌 분자 내로 촉매시키는 HGPRT와 같은 효과인자 분자이지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 효과인자 분자의 기타 예에는 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드를 변형시키는 분자, 예를 들어 DNA 메틸트랜스퍼라제 및 유비퀴틴화 E3 효소가 포함되는데, 이는 각각 유전자 발현을 억제시키거나 단백질 분해를 유도시킨다.
몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체의 프로브 성분은 핵산, 예를 들어 DNA, RNA, PNA, pcPNA 등이고, 기타 양태에서 프로브는 폴리펩티드이다. 핵산 프로브와 폴리펩티드 프로브 둘 다는 핵산 및 폴리펩티드 표적을 인식하고 이와 결합할 수 있다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열-생체 분자성 접합체는 세포 사멸을 유도시킬 수 있고, 이러한 기능성을 가능케 하는 효과인자 분자를 포함한다. 이러한 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체는 암, 병원체 (예를 들어, 바이러스성 감염증) 및 기타 모든 장애 또는 질병, 예를 들어 표적화 세포 사멸이 목적하는 기능인 면역 장애를 치료하는 데에 사용할 수 있다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 분열-생체 분자성 접합체는 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드를 분해시킬 수 있고, 이러한 기능성을 가능케 하는 효과인자 분자, 예를 들어 프로테아제 또는 DNA/RNA 뉴클레아제 등의 효과인자 분자를 포함한다. 이러한 양태에서, 분열 핵산을 많은 치료적 적용, 예를 들어 암, 병원체 감염증을 치료 및/또는 예방하고, 병원성 핵산 및/또는 병원성 폴리펩티드의 발현으로 인한 장애 및 세포를 치료하는 데에 사용할 수 있다. 몇몇 양태에서, 병원성 핵산 및/또는 병원성 폴리펩티드의 발현은 돌연변이, 단일 핵산 다형성 (SNP) 등에 따른 결과로서 일어날 수 있다. 몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열-생체 분자성 접합체는 특정 단백질의 발현이 전적으로 또는 부분적으로 해당 질병의 한 가지 이상 증상에 일조하는 장애 또는 질병을 치료하는 데에 유용하다. 몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 의해 치료될 수 있는 질병에는, 예를 들어 신경변성 장애, 면역 장애, 암 및 병원성 핵산/폴리펩티드의 존재가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
기타 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열-생체 분자성 접합체는 세포를 제2 작용제에 의해 후속 손상에 감작될 수 있게 하고, 이는 세포독소로서 기능하는 분자 내로 프로-드럭을 촉매할 수 있는 효소 또는 분자인 효과인자 분자를 포함한다. 이러한 양태에서, 감작성 분열-생체 분자성 접합체는 표적화 세포에서 선택적으로 세포 사멸시키는 데에 유용하다. 이러한 고안은, 예를 들어 약물 내성 암 및 바이러스 감염된 세포를 치료하기 위하여 세포를 사멸시키는 데에 다수의 손상이 요구되는 경우에 특히 유용하다.
본 발명의 또 다른 양태는 분열-생체 분자성 접합체를 포함하는 제약 조성물의 생성 방법을 제공한다. 이러한 한 가지 양태에서, 제약은 분열-생체 분자성 접합체를, 예를 들어 예비부하된 중합체성 나노입자 및/또는 양이온성 리포솜을 통하여 투여하기 위한 신규한 전달 방법이다.
본 발명의 한 가지 국면은 분열-효과인자 분자를 포함하는 분열-생체 분자성 접합체에 관한 것인데, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 2개 이상의 프로브 중의 하나와 접합되고, 이러한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드는 질병, 악성 종양 또는 장애로 인해 고통받고 있는 세포에 존재하고, 프로브가 표적 핵산 또는 폴리펩티드와 결합하면 효과인자 분자가 재구성되고, 효과인자 분자는 상기 세포에 치사적이고/이거나 세포를 또 다른 화합물에 감작시키고/시키거나 상기 질병, 악성 종양 또는 장애를 경감시킨다.
몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체는 효과인자 분자의 2개 이상의 폴리펩티드 단편을 포함하는 분열-효과인자 분자를 포함할 수 있는데, 이러한 단편은 (a) 활성화 입체 형태이고; (b) 단독으로는 활성이 아니며; (c) 프로브를 추가로 포함하고; (d) 표적 핵산 또는 폴리펩티드의 존재 하에 실시간으로 활성 효과인자 분자를 재구성하기 위해 보완된다.
본 발명의 또 다른 국면은 각각의 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 질병 또는 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 2개 프로브 중의 하나 이상과 접합되는 분열-효과인자 분자를 포함하는, 본원에 기재된 바와 같은 분열-생체 분자성 접합체의 제약 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계; 및 활성 효과인자 분자를 형성시키는 단계를 포함하는데, 이러한 활성 효과인자 분자의 형성이 질병 또는 장애와 연관되는 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드와 2개 이상의 프로브의 결합에 의해 촉진되는, 대상체에게서 질병 또는 장애를 치료 또는 경감시키는 방법에 관한 것이다.
몇몇 양태에서, 분열 효과인자 분자는 독소 분자 또는 그의 분자, 또는 또 다른 한편, 면역독소 또는 그의 단편이다. 몇몇 양태에서, 독소 또는 면역독소인 분열 효과인자 분자는 단백질 독소, 세균성 독소 및 식물 독소이지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에 기재된 바와 같은 방법에서 효과인자 분자로서 유용한 식물 독소의 예에는 식물 할로-독소 (halotoxin), 부류 II 리보솜 불활성화 단백질, 식물 반독소 (hemitoxin), 부류 I 리보솜 불활성화 단백질이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에 기재된 바와 같은 방법에서 효과인자 분자로서 유용한 식물 독소의 추가 예에는 사포린 (SAP); 억새풀 (pokeweed) 항바이러스성 단백질 (PAP); 브리오딘 (bryodin) 1; 보우가닌 (bouganin) 및 겔로닌 (gelonin), 또는 그의 천연 발생적 변이체, 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체 또는 단편이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
본원에 기재된 바와 같은 방법에서 효과인자 분자로서 유용한 식물 독소의 예에는 탄저병 (anthrax) 독소; 디프테리아 독소 (DT); 슈도모나스성 (pseudomonal) 내독소 (PE); 스트렙토리신 O; 또는 그의 천연 발생적 변이체, 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체 또는 단편이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
본원에 기재된 바와 같은 방법에서 효과인자 분자로서 유용한 식물 독소의 추가 예에는 리신 A 쇄 (RTA); 리신 B (RTB); 아브린 (abrin); 미스트레토에 (mistletoe), 렉틴 및 모데신 (modeccin); 또는 그의 천연 발생적 변이체, 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체 또는 단편이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 식물 독소는 리보톡신, 예를 들어 리신 A 쇄 (RTA)이지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 분열 효과인자 분자는 세포독성 분자 또는 그의 단편, 예를 들어 사이토킨, 예를 들면 IL-1; IL-2; IL-3; IL-4; IL-13; 인터페론-알파; 종양 괴사 인자-알파 (TNFα); IL-6; 과립구 집락 자극 인자 (G-CSF); GM-CSF 또는 그의 천연 변이체 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체이지만, 이에 제한되지 않는다.
추가 양태에서, 식물 독소는 뉴클레아제일 수 있는데, 예를 들어 사르신 (sarcin); 레스트릭토신 (restrictocin)일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 분열 효과인자 분자는 뉴클레아제이거나 또는 엔도-핵산 분해 활성을 지니는데, 예를 들어 DNA 뉴클레아제 또는 DNA 엔도뉴클레아제, 예를 들면 DNA 엔도뉴클레아제 I, 또는 그의 천연 변이체 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체이다. 대체 양태에서, 뉴클레아제는 RNA 뉴클레아제 또는 RNA 엔도뉴클레아제, 예를 들어 RNA 엔도뉴클레아제 I; RNA 엔도뉴클레아제 II; RNA 엔도뉴클레아제 III일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, RNA 뉴클레아제는, 예를 들어 안지오게닌 (angiogenin), 디세르 (Dicer), RNase A, 또는 그의 변이체 또는 단편일 수 있다.
대체 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 효과인자 분자에는 단백질 분해적 효소, 예를 들어 카스파제 효소; 칼파인 효소; 카텝신 효소; 엔도프로테아제 효소; 그란자임; 매트릭스 메탈로프로테아제; 펩신; 프로나제; 프로테아제; 프로테이나제; 레닌; 트립신, 또는 그의 변이체 또는 단편이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 또 다른 국면은 세포에서 세포 사멸 경로를 유도시킬 수 있는 분 열 효과인자 분자를 포함하는 분열 생체 분자성 접합체에 관한 것이다. 이러한 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 효과인자 분자에는 프로-세포소멸성 분자, 예를 들어 Hsp90; TNFα; DIABLO; BAX; Bcl-2의 억제제; Bad; 폴리 ADP 리보스 폴리머라제-1 (PARP-1): 제2 미토콘드리아-유래된 활성인자 또는 카스파제 (SMAC); 세포소멸 유도 인자 (AIF); Fas (Apo-1 또는 CD95로서 공지되기도 함); Fas 리간드 (FasL), 또는 그의 변이체 또는 단편이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 또 다른 국면은 세포에서 세포 사멸 경로를 억제할 수 있거나 또는 세포에서 세포 생존 경로를 유도시킬 수 있는 분열 효과인자 분자를 포함하는 분열 생체 분자성 접합체에 관한 것이다. 이러한 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 효과인자 분자에는 항-세포소멸성 분자, 예를 들어 bcl-2; Bcl-XL; Hsp27; 세포소멸 단백질의 억제제 (IAP)가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 또 다른 국면은 세포를 하나 이상의 이차 작용제에 대해 감작시킬 수 있는 분열 효과인자 분자를 포함하는 분열 생체 분자성 접합체에 관한 것이다. 이러한 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 효과인자 분자에는 β-글럭토니다제; 히포크산틴-구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제; β-락타마제; 카복실에스테라제 HCE1; 퍼옥시다제 효소 및 그의 변이체 또는 단편이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 이차 작용제는 오셀테미비르 (oseltemivir); 알로퓨리놀을 포함하는 군 중에서 선택된 항바이러스제이다.
본 발명의 또 다른 국면은 단백질 분해에 대한 표적 폴리펩티드를 태그화할 수 있는 효과인자 분자를 포함하는 분열 생체 분자성 접합체에 관한 것이다. 이러한 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 효과인자 분자에는 유비퀴틴; 소형 유비퀴틴 관련 조정제 (SUMO); DNA 메틸트랜스퍼라제 (DNA MTase); 히스톤 아세틸화 효소 (HAT) 및 그의 변이체 또는 단편이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열 생체 분자성 접합체는 병리상태 유발성 핵산에 기인한 질병 또는 장애를 치료하는 데에 유용하다. 이러한 질병 또는 장애의 예에는 암; 신경학적 질병; 퇴행성 질병; 염증성 질병; 병원체 감염증이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열 생체 분자성 접합체를 이용하여 치료할 수 있는 암에는, 예를 들어 중간엽 기원 암 (육종); 섬유육종; 점액육종; 지방육종; 연골육종; 골원성 육종; 혈관육종; 내피육종; 림프관육종; 활막육종; 중피육종; 유잉 (Ewing) 종양; 골수성 백혈병; 단구성 백혈병; 악성 백혈병; 림프구성 백혈병; 형질세포종; 평활근육종; 및 횡문근육종; 상피 기원 암 (암종); 편평 세포 또는 표피 암종; 기저 세포 암종; 한선 암종; 피지선 암종; 선암종; 유두상 암종; 유두상 선암종; 낭선 암종; 수질성 암종; 미분화 암종 (단순체 암종); 기관지원성 암종; 기관지 암종; 흑색 암종; 신세포 암종; 간세포 암종; 담관 암종; 이행 세포 암종; 편평 세포 암종; 융모막 암종; 정상피종; 배아 암종; 악성 기형종; 및 기형 암종; 백혈병; 급성 림프구성 백혈병 및 급성 골수성 백혈병 (골수아 구성, 전골수아구성, 골수단구성; 단구성 및 적백혈병); 만성 백혈병; 만성 골수성 (과립구성) 백혈병; 만성 림프구성 백혈병; 진성 적혈구증가증; 림프종; 호지킨병 (Hodgkin's disease); 비호지킨병; 다발성 골수종; 발덴스트롬 (Waldenstrom) 마크로글로불린혈증; 중쇄 질병이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 암은 림프종; 백혈병; 육종; 선종이고, 몇몇 양태에서 암은 급성 림프아구성 백혈병 (ALL)이다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열 생체 분자성 접합체를 이용하여 치료할 수 있는 신경학적 질병 또는 장애에는, 예를 들어 알츠하이머병 (Alzheimer's Disease); 파킨슨병 (Parkinson's disease); 헌팅톤병 (Huntington's disease); 폴리글루타민 병; 근위축성 측삭 경화증 (ALS)이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열 생체 분자성 접합체를 이용하여 치료할 수 있는 병원체에는, 예를 들어 인플루엔자, 바이러스, 세균, 진균, 기생충 또는 효모가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
대체 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열 생체 분자성 접합체를 이용하여 치료할 수 있는 질병은 질병에 대한 유전적 소인이다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열 생체 분자성 접합체를 투여할 대상체는 포유류, 예를 들어 인간이다. 몇몇 양태에서, 분열 생체 분자성 접합체는 세포, 예를 들어 생체내 세포에게 투여한다. 대체 양태에서, 세포는 대상체로부터 수득하고 제약 조성물을 생체외 투여하며, 예를 들어 인간 대상체와 같은 대 상체에게 다시 이식할 수 있다.
몇몇 양태에서, 분열 생체 분자성 접합체는 봉입체에 의해 생성되고, 대체 양태에서 분열 생체 분자성 접합체는 봉입체의 형성을 최소화하는 세균성 발현 시스템 또는 세포 무함유 시스템에 의해 생성된다.
몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체는 펌프; 직접 주사; 국소 적용; 피내, 피하를 통한 대상체에 대한 투여; 정맥내; 림프관내; 림프절내; 점막내 또는 근육내 주사를 포함하는 군에 의해 세포에게 투여한다. 또 다른 한편, 분열-생체 분자성 접합체는 예비부하된 중합체성 나노입자 및/또는 양이온성 리포솜 상의 세포에게 투여할 수 있다.
몇몇 양태에서, 핵산 결합성 모티프와 접합된 분열-효과인자 분자는 상기 세포 중의 발현 벡터로부터 발현되는데, 이러한 벡터는 통상적인 수단에 의해 세포 내로 도입한다. 몇몇 양태에서, 벡터는 또한 효과인자 분자를 포함한다.
몇몇 양태에서, 표적 핵산은 병리상태 유발성 표적 핵산 서열, 예를 들어 DNA, RNA, 예를 들면 병원성 DNA 또는 병원성 RNA를 포함한다. 몇몇 양태에서, 병리학적 DNA는 하나 이상의 돌연변이 및/또는 다형성을 포함한다. 몇몇 양태에서, 표적 핵산 서열은 병원체 DNA 또는 RNA, 예를 들어 바이러스 기원의 병원체 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있다. 몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 의해 표적화될 수 있는 병원체 DNA 또는 RNA의 예에는, 예를 들어 AIDS/HIV; 조류 플루; SARS; A형 간염; B형 간염; C형 간염; 인플루엔지아; 바리셀라; 아데노바이러스, HSV-2; HSV-II; 우역 (rinderpest) 리노바이러스; 에크노바이러스; 로타바이러스; 호흡기 합포체 바이러스; 유두종 바이러스; 파포바 바이러스; 시토메갈로바이러스; 에키노바이러스; 아보바이러스; 한타바이러스; 콕사키 바이러스; 홍역 바이러스; 유행성 이하선염 바이러스; 풍진 바이러스; 폴리오 바이러스; HIV-I, HIV-II; 조류 및/또는 새 (bird) 플루 바이러스; 에볼라 바이러스; 기타 바이러스가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 분열 생체 분자성 접합체에 의해 표적화된 표적 폴리펩티드는 병원성 폴리펩티드, 예를 들어 정상적인 비-병원성 폴리펩티드와 비교해서 이상한 입체 형태를 지닌 병원성 폴리펩티드가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 세포는 시험관내 또는 생체내 세포이다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열 생체 분자성 접합체는 핵산 결합성 모티프, 예를 들어 DNA, RNA, PNA, LNA, pcPNA, DNA-결합성 단백질, RNA-결합성 단백질 또는 그의 유사체 또는 단편인 프로브를 포함한다.
대체 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열 생체 분자성 접합체는 폴리펩티드 탐지인자 단백질인 프로브를 포함한다. 몇몇 양태에서, 폴리펩티드 탐지인자 단백질은 2개 이상의 단편으로 분열될 수 있는데, 각 단편은 효과인자 단백질의 둘 이상의 단편과 접합되고, 탐지인자 폴리펩티드 단편이 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드와 결합하면 탐지인자 단백질과 활성 효과인자 단백질이 재구성된다. 추가의 양태에서, 폴리펩티드 탐지인자 단백질은 다중-도메인 폴리펩티드 탐지인자 단백질인데, 예를 들어 다중-도메인 폴리펩티드 탐지인자 단백질의 각 도메인은 효과인자 단백질의 둘 이상의 단편과 접합되고, 탐지인자 단백질의 도메인이 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드와 결합하면 탐지인자 단백질과 활성 효과인자 단백질이 재구성된다.
본 발명의 또 다른 국면은 분열-효과인자 분자를 포함하는 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체를 제공하는데, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 둘 이상의 프로브와 각각 접합되는 2개 이상의 폴리펩티드 단편을 포함하고, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편을 합하여, 세포에서 세포 사멸 경로를 개시시킬 수 있는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시킨다.
몇몇 양태에서, 본 발명은 종양 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하는데, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 암 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편을 합하여, 종양과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체를 이용하여 암을 치료하는 방법을 제공한다.
몇몇 양태에서, 본 발명은 병원체 감염된 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하는데, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편을 합하여, 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체를 이용하여 병원체 감염증을 치료하는 방법을 제공한다.
몇몇 양태에서, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체는 병리학적 핵산 및/또는 병리학적 폴리펩티드, 예를 들어 병리상태의 영향으로 세포를 변화시키는 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드를 포함하는 세포를 사멸시키는 데에 유용하다. 몇몇 양태에서, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체에 대한 표적 핵산은 종양형성 유전자 또는 전종양형성 유전자 (pro-oncogene), 예를 들어 p63; p73; gp40 (v-fms); p21 (ras); p55 (v-myc); p65 (gag-jun); pp60 (v-src); v-abl; v-erb; v-erba; v-fos 또는 그의 변이체를 암호화한다. 또 다른 한편, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 병원성 단백질 또는 병원성 핵산을 탐지할 수 있는데, 병원체는 예를 들어, 인플루엔자, 바이러스, 세균, 진균, 기생충 또는 효모이지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 바이러스는 AIDS/HIV; 조류 플루; SARS; A형 간염; B형 간염; C형 간염; 인플루엔지아; 바리셀라; 아데노바이러스, HSV-2; HSV-II; 우역 리노바이러스; 에크노바이러스; 로타바이러스; 호흡기 합포체 바이러스; 유두종 바이러스; 파포바 바이러스; 시토메갈로바이러스; 에키노바이러스; 아보바이러스; 한타바이러스; 콕사키 바이러스; 홍역 바이러스; 유행성 이하선염 바이러스; 풍진 바이러스; 폴리오 바이러스; HIV-I, HIV-II; 조류 및/또는 새 플루 바이러스; 에볼라 바이러스; 기타 바이러스를 포함하는 군 중에서 선택된다.
몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체, 예를 들어 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체는 핵산 또는 표적 폴리펩티드, 예를 들어 v-fms; v-myc; v-src; v-abl; v-erb; v-erba; v-fos; M1 단백질; 바이러스 유사 입자 (VPL)를 표적화하는 데에 유용하다.
본 발명의 또 다른 국면에서, 분열-생체 분자성 접합체는 분열-효과인자 분자를 포함하는 분해성 분열-생체 분자성 접합체인데, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 둘 이상의 프로브와 각각 접합되는 2개 이상의 폴리펩티드 단편을 포함하고, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편를 합하여, 세포에서 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드를 분해시킬 수 있거나 또는 이의 분해를 유도시킬 수 있는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시킨다.
몇몇 양태에서, 분해성 분열-생체 분자성 접합체는 암을 치료하는 방법에 유용한데, 예를 들어 이러한 방법은 종양 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하고, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 암 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편을 합하여, 종양과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시킨다.
추가의 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분해성 분열-생체 분자성 접합체는 병원체 감염증을 치료하는 방법에 유용한데, 이러한 방법은 병원체 감염된 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하고, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편을 합하여, 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시킨다.
추가의 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분해성 분열-생체 분자성 접합체는 질병 또는 장애를 치료하는 방법에 유용한데, 이러한 방법은 병원체 감염된 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하고, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편을 합하여, 질병 또는 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시킨다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분해성 분열-생체 분자성 접합체는 표적 핵산, 예를 들어 병리학적 핵산 또는 표적 폴리펩티드, 예를 들면 병리학적 폴리펩티드의 분해를 표적으로 하는데, 이러한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드는 병리상태를 나타내는 핵산 또는 폴리펩티드로서 확인된다. 몇몇 양태에서, 분해성 분열-생체 분자성 접합체에 대한 표적 핵산은 종양형성 유전자 또는 전종양형성 유전자, 예를 들어 p63; p73; gp40 (v-fms); p21 (ras); p55 (v-myc); p65 (gag-jun); pp60 (v-src); v-abl; v-erb; v-erba; v-fos 또는 그의 변이체를 암호화한다. 또 다른 한편, 분해성 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 병원성 단백질 또는 병원성 핵산을 탐지할 수 있는데, 병원체는 예를 들어, 인플루엔자, 바이러스, 세균, 진균, 기생충 또는 효모이지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 바이러스는 AIDS/HIV; 조류 플루; SARS; A형 간염; B형 간염; C형 간염; 인플루엔지아; 바리셀라; 아데노바이러스, HSV-2; HSV-II; 우역 리노바이러스; 에크노바이러스; 로타바이러스; 호흡기 합포체 바이러스; 유두종 바이 러스; 파포바 바이러스; 시토메갈로바이러스; 에키노바이러스; 아보바이러스; 한타바이러스; 콕사키 바이러스; 홍역 바이러스; 유행성 이하선염 바이러스; 풍진 바이러스; 폴리오 바이러스; HIV-I, HIV-II; 조류 및/또는 새 플루 바이러스; 에볼라 바이러스; 기타 바이러스를 포함하는 군 중에서 선택된다.
몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체, 예를 들어 분해성 분열-생체 분자성 접합체는 핵산 또는 표적 폴리펩티드, 예를 들어 v-fms; v-myc; v-src; v-abl; v-erb; v-erba; v-fos; M1 단백질; 바이러스 유사 입자 (VPL)를 표적화하는 데에 유용하다.
몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체, 예를 들어 분해성 분열-생체 분자성 접합체는 병리학적 폴리펩티드, 예를 들어 돌연변이되고/되거나 부정확하게 폴딩된 폴리펩티드의 발현과 연관된 질병 또는 장애를 치료하는 데에 유용하다. 이러한 질병에는 신경학적 질병; 신장 질병; 심혈관계 질병; 간 질병; 염증성 질병; 낭포성 섬유증; 신경변성 질병; 염증성 질병; 면역 장애 등이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 분해성 분열-생체 분자성 접합체는 신경학적 질병, 예를 들어 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 척수 손상을 치료하는 데에 유용하다.
본 발명의 또 다른 국면에서, 분열-생체 분자성 접합체는 분열-효과인자 분자를 포함하는 감작성 분열-생체 분자성 접합체인데, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 둘 이상의 프로브와 각각 접합되는 2개 이상의 폴리펩티드 단편을 포함하고, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편를 합하여, 세포를 기타 이차 작용제에 대해 감작시 킬 수 있는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시킨다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 감작성 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 암을 치료할 수 있는데, 이 방법은 종양 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하고, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 암 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편을 합하여, 종양과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시킨다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 감작성 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 병원체 감염증을 치료할 수 있는데, 이 방법은 병원체 감염된 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하고, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편을 합하여, 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시킨다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 감작성 분열-생체 분자성 접합체는 표적 핵산, 예를 들어 병리학적 핵산 또는 표적 폴리펩티드, 예를 들어 병리학적 폴리펩티드의 분해를 표적으로 하는데, 이러한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드는 병리상태를 나타내는 핵산 또는 폴리펩티드로서 확인된다. 몇몇 양태에서, 감작성 분열-생체 분자성 접합체에 대한 표적 핵산은 종양형성 유전자 또는 전종양형성 유 전자, 예를 들어 p63; p73; gp40 (v-fms); p21 (ras); p55 (v-myc); p65 (gag-jun); pp60 (v-src); v-abl; v-erb; v-erba; v-fos 또는 그의 변이체를 암호화한다. 또 다른 한편, 감작성 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 병원성 단백질 또는 병원성 핵산을 탐지할 수 있는데, 병원체는 예를 들어, 인플루엔자, 바이러스, 세균, 진균, 기생충 또는 효모이지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 바이러스는 AIDS/HIV; 조류 플루; SARS; A형 간염; B형 간염; C형 간염; 인플루엔지아; 바리셀라; 아데노바이러스, HSV-2; HSV-II; 우역 리노바이러스; 에크노바이러스; 로타바이러스; 호흡기 합포체 바이러스; 유두종 바이러스; 파포바 바이러스; 시토메갈로바이러스; 에키노바이러스; 아보바이러스; 한타바이러스; 콕사키 바이러스; 홍역 바이러스; 유행성 이하선염 바이러스; 풍진 바이러스; 폴리오 바이러스; HIV-I, HIV-II; 조류 및/또는 새 플루 바이러스; 에볼라 바이러스; 기타 바이러스를 포함하는 군 중에서 선택된다.
몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체, 예를 들어 감작성 분열-생체 분자성 접합체는 핵산 또는 표적 폴리펩티드, 예를 들어 v-fms; v-myc; v-src; v-abl; v-erb; v-erba; v-fos; M1 단백질; 바이러스 유사 입자 (VPL)를 표적화하는 데에 유용하다.
몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체, 예를 들어 감작성 분열-생체 분자성 접합체는 β-글럭토니다제; 히포크산틴-구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제; β-락타마제; 카복실에스테라제 HCE1; 퍼옥시다제 효소 또는 그의 변이체 또는 단편이 포함되지만, 그에 제한되지 않는 효과인자 단백질을 포함한다.
본 발명의 또 다른 국면에서, 분열-생체 분자성 접합체는 분열-효과인자 분자를 포함하는 생존 분열-생체 분자성 접합체인데, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 둘 이상의 프로브와 각각 접합되는 2개 이상의 폴리펩티드 단편을 포함하고, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편를 합하여, 세포 생존 경로를 개시시킬 수 있거나 또는 세포에서 세포 사멸을 억제할 수 있는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시킨다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 생존 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 질병 또는 장애를 치료할 수 있는데, 이 방법은 종양 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하고, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 암 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편을 합하여, 질병 또는 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시킨다. 몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 생존 분열-생체 분자성 접합체의 용도는 병리상태의 일부로서의 세포 상실과 연관되는 질병 또는 장애, 또는 병리학적 폴리펩티드, 예를 들어 돌연변이되고/되거나 부정확하게 폴딩된 폴리펩티드의 발현과 연관되거나 병리학적 핵산의 발현에 기인한 질병 또는 장애를 치료하는 데에 유용하다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 생존 분열-생체 분자성 접합체 신경학적 질병; 신장 질병; 심혈관계 질병; 간 질병; 염증성 질병; 낭포성 섬유증; 신경변성 질병; 염증성 질병; 면역 장애 등의 질병; 및 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 척수 손상 등의 신경학적 질병을 치료하는 데에 유용하다.
본 발명의 또 다른 국면에서, 분열-생체 분자성 접합체는 분열-효과인자 분자를 포함하는 프록시 분열-생체 분자성 접합체인데, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 둘 이상의 프로브와 각각 접합되는 2개 이상의 폴리펩티드 단편을 포함하고, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편를 합하여, 세포에서 기능이상하거나 상실된 폴리펩티드를 대체할 수 있는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시킨다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 프록시 분열-생체 분자성 접합체는 질병 또는 장애를 치료하는 방법에 유용한데, 이러한 방법은 종양 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하고, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 암 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편을 합하여, 질병 또는 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키며, 예를 들어 질병 또는 장애는 세포 내에서 폴리펩티드의 기능이상적 발현이나 발현 상실 또는 저하와 연관된다.
몇몇 양태에서, 효과인자 폴리펩티드 또는 프록시 분열-생체 분자성 접합체는, 예를 들어 신경학적 질병; 신장 질병; 심혈관계 질병; 간 질병; 염증성 질병; 낭포성 섬유증; 신경변성 질병; 염증성 질병; 면역 장애 등의 질병과 연관된 상실되거나 기능이상한 폴리펩티드, 또는 그의 단편을 포함한다. 상기 질병의 예에는, 예를 들어 근육퇴행 위축, 낭포성 섬유증 등이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 또 다른 국면은 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 분열 생체 분자성 접합체와, 하나 이상의 생체 분자성 접합체를 예비부하시킨 중합체성 나노입자를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
도 1은 분열 독소를 이용하여 병리학적 세포를 표적화 사멸시키는 것과, ALL 세포를 표적화 사멸시키기 위한 핵산에 의거한 독소의 리어셈블리를 도식적으로 나타낸 것이다. 병원성 RNA와 결합하는, RNA-인식 암 (arm)과 연결된 독소 절반을 수반한 2개의 단백질-올리고뉴클레오티드 구조물을 비-면역원성 약물 부하된 비히클 (중합체성 나노입자, 양이온성 리포솜 등)에 의해 혈류로부터 세포 내로 전달한다. 병원성 RNA (내인성 종양형성성 RNA 또는 바이러스 기원의 RNA)는 병든 세포에만 존재하므로; 이들 비정상 세포의 마커이고 분열 독소의 선택적 자살 리어셈블리에 대한 스캐폴드 (scaffold)로서 제공된다. 세포내 핵산 분해 효소에 의한 가능한 분해를 피하기 위해, 생체 안정성 올리고뉴클레오티드 유사체를 사용할 수 있다.
도 2는 리신 A 구조물의 리본 제시를 도시한 것이다. 리신 A 독소 (RTA) 내의 2개의 주요 서브도메인이 본 도면에서 명확하게 인식될 수 있다: 여러 개의 β-시트에 의해 형성된 도메인 I (화살표) 및 α-나선형 도메인 II.
도 3은 TEL-AML1 유전자 융합물의 구조를 도시한 것이다. (a) (12;21)(pl3;q22)에 관여한 TEL 및 AML1 유전자의 엑손/인트론 구조의 구조적 다이 아그램. 중심절 (cen) 및 종말체 (tel) 배향, 엑손 넘버링, 및 관련 절단점 영역이 표시된다. (b) TEL-AML1 융합 전사체의 도식적 다이아그램. 융합 유전자 전사체 아래의 수는 상류 유전자의 마지막 (39) 뉴클레오티드가 표시된 경우를 제외하고는, 관련된 엑손의 처음 (59) 뉴클레오티드를 지칭한다. 대부분의 t(12;21)-양성 환자는 AML1 인트론 1에서의 절단점 때문에 보다 큰 전사체를 갖고 있긴 하지만, 대체 스플라이싱은 AML1 엑손 2의 스킵핑 (skipping)을 야기시켜, 몇몇 환자에게서 2개의 PCR 생성물을 유발시킬 수 있다. 소수의 환자에게서는 AML1 절단점이 인트론 2에 위치하여, AML1 엑손 2을 수반하지 않는 보다 짧은 전사체가 생성된다. 화살표는 5개 프라이머의 상대적 위치를 표시하고; 수는 각 프라이머의 59 뉴클레오티드 위치를 지칭한다 [참고: Van Dongen et al., 1999].
도 4는 리신의 A 쇄에 대한 이차 구조 예측 (예측 단백질, H-나선, E-fl-시트, L-루프) 및 단백질 분열을 위해 제안된 부위 (화살표)를 도시한 것이다.
도 5는 표적-특이적 올리고뉴클레오티드 [문헌 (참고: burbulis et al, 2005)로부터 변형됨]와의 단백질 커플링 및 리신 단편 클로닝을 도식적으로 나타낸 것이다. 패널 5A는 인테인과의 융합물로서 클로닝된 리신 A 단편을 도식하여 나타낸 것이고, 패널 5B는 5' 말단에 가성-시스테인을 수반한 변형된 올리고뉴클레오티드의 화학적 구조를 도시한 것이다. 패널 5C는 리신 단편과 변형된 올리고뉴클레오티드의 커플링 화학을 도시한 것이다. 별표는 리신 단편, CBD-키틴 결합성 도메인의 C-말단에서의 기능적 시스테인을 나타낸다.
도 6은 ALL에 대한 절단점 서열의 구조를 도시한 것이다.
도 7은 완전한 길이의 RTA의 아미노산 서열 (268개 아미노산) 및 개시 분열점 부위를 도식적으로 나타낸 것이다. 패널 7A는 시험된 RNA의 3개 분열점 (↓로서 도시됨)을 도시한 것이다. RTA 분열점을 결정하기 위해서는 다음 사항을 고려해야만 한다: (i) 분열점은 2개의 단백질 절반 사이에 있는 별개의 활성-중요한 아미노산이어야 하고; (ii) 분열점은 비구조 영역 내에 위치해야 하며 (분열 단백질 절반에 최소한의 구조적 장애를 도입하기 위함); (iii) 분열 단백질 절반은 완전한 크기의 RTA 내의 조밀한 폴딩 단위에 상응한다. 진한 이탤리체 의 문자: 활성 부위 (Y81, V82, G122, Y124, E178, R181, E209, N210, W212); 진하게 밑줄친 문자: RTA 활성에 결정적인 아미노산 (R49, N79, N123, R214, R259); 진한 문자: 중요한 구조적 역할을 하는 아미노산 (D76, R135). 패널 7B는 RTA 구조의 리본 표시를 나타낸 것이다. 리신 A 독소 (RTA)의 2개 주요 서브도메인이 제시된다: 여러 개의 β-시트에 의해 형성된 도메인 I (화살표) (패널 7B) 및 α-나선형 도메인 II (도메인 7C).
도 8은 인테인1과의 분열-RTA 단백질의 N-말단 융합물을 제조하기 위해 PCR에 의해 수득되고 PCR-클린 과정에 의해 정제된 RTA 유전자의 상보성 단편을 도시한 것이다 (아래첨자 n은 N-말단 융합물에 대한 것이다). 이들 단편을 겔 전기영동 크기로써 평가하면, 이는 예상된 것과 상응하였다: N1n 189 bp, N2n 396 bp, N3n 510 bp, C1n 681 bp, C2n 474bp, C3n 360 bp (필요에 따라, 후속 클로닝을 위한 제한 부위, 정지 코돈, 말단 시스템에 대한 코돈을 수반하는 프라이머를 포함함). 이. 콜라이 (E. coli) XL1O 세포 (클로닝 숙주)에서 클로닝한 후, 모든 PCR- 증폭된 DNA 단편의 실체를 서열 분석에 의해 부가적으로 확인 및 검증하였다.
도 9는 인테인1과 융합된 중간-분열 RTA 유전자로 형질전환시킨 이. 콜라이 BL21/DE3 발현 숙주의 조-세포 제제에서의 SDS/PAGE 단백질 발현 패턴을 도시한 것이다. 세포는 상이한 온도 하에 2시간 (37℃), 3시간 (30℃) 및 14시간 (25℃) 동안 1 mM IPTG를 이용하여 유도되었거나 (+) 유도되지 않았다 (-). 모든 온도에서, 유도된 세포는 N2n-RTA 및 C2n-RTA 분열 RTA 단백질의 상당한 과발현을 나타낸다. 후속 실험 동안, 본 발명자들은 30℃에서의 유도가 단백질 발현을 추가로 최적화하는 데에 가장 적당하다는 사실을 밝혀내었다.
도 10은 가용성 및 불용성 분획에서 과발현된 분열-RTA 융합 단백질의 평가를 도시한 것이다. IPTG 유도는 낮은, 0.05 및 0.1 mM 농도의 유도제 (N1n 및 C1n은 0.1 mM IPTG를 이용한 경우만 제시된다) 하에 30℃에서 3시간 동안 수행하였다. 모든 패널에서, 레인 1 및 2는 가용성 및 불용성 세포성 단백질 분획에 상응한다. 융합 단백질의 예상 크기: N1n 약 30 kDa; C1n 약 50 kDa; N2n 약 38 kDa; C2n 약 40 kDa. 데이터는 분열 RNA 단편이 종종 봉입체를 형성한다는 것을 입증하고 있다. 본 발명자들은 봉입체를 형성하지 않는 분열 단백질의 2개의 상보적 절반을 수득하기 위해 다수의 상이한 분열 부위를 평가하는 것이 필요하다는 사실을 밝혀내었다. 특히, 단백질이 함께 상보적인 경우에 활성이고 이들이 단독인 경우에 불활성인 2개의 상보적 절반을 발견하기 위해 단백질 내의 4개 초과, 또는 5개 초과, 또는 6개 초과, 또는 7개 초과, 또는 8개 초과, 또는 9개 초과, 또는 10개 초과의 상이한 분열점을 시험하는 것이 필요할 수 있다.
도 11은 인테인1과의 N1n-RTA 융합물의 봉입체로부터 재폴딩하고 키틴 칼럼-결합된 인테인을 후속 자가 분열시킴으로써 수득된 N1n-RTA를 도시한 것이다. 예상 단백질 크기 약 5.5 kDa의 단일 밴드가 첫 번째 레인에 제시되는데, 농축시키기 전의 N1n-RTA의 총 양은 대략 1 mg이다. 인테인2와 C-말단적으로 융합된 N1c-RTA를 또한 수득하였다 (데이터는 제시되지 않음).
도 12는 시험관 내에서 분열 RTA의 기능적 리어셈블리를 시험하기 위한 리신 분열 가능한 줄기 루프된 RNA 올리고뉴클레오티를 도시한 것이다. 시험관내 시험 시스템은 분열/리어셈블리된 RTA 단백질의 활성을 분석하기 위해 개발하였다. 패널 12B는 아닐린 처리에 의해 후속 RNA 절단을 이용하여 다음 특이적 뉴클레오염기를 퓨린제거함으로써 RTA 작용을 가속화시키는, 루프 영역, 5'-r(GGAAUCCUGCUCAGUACG)-dA-r(GAGGAACCGCAGGUU) (서열 1) 내의 dA를 이용하여 설계된 RTA-분열 가능한 줄기-루프 RNA를 도시한 것이다. 패널 12B는 RNA가 PAGE 분석과 SYBR 염색을 위한 정확한 길이라는 것을 나타낸다.
도 13은 분열 독소를 이용하여 병리학적 세포를 표적화 사멸시키는 것을 도식적으로 나타낸 것인데, 여기서 각 분열-효과인자 단편 단백질은 핵산 프로브, 예를 들어 앱타머 (aptamer)와 연합될 수 있는 분열-폴리펩티드 프로브와 접합된다. 2개의 앱타머는 세포 중의 병원성 RNA와 결합하여, 분열-효과인자 단편과 접합되는 분열-폴리펩티드 프로브를 결합시킬 수 있고, 병원성 RNA와 같은 병원성 표적 핵산의 존재 하에 활성 효과인자 단백질의 형성과 효과인자 단백질 리어셈블리를 허용해준다. 세포내 핵산 분해 효소에 의한 가능한 분해를 피하기 위해, 생체 안정한 올리고뉴클레오티드 유사체를 사용할 수 있다.
도 14는 분열-폴리펩티드 프로브와 융합된 분열-효과인자 단편을 도식적으로 나타낸 것이다. 분열-효과인자 단편은 CBD-인테인과 융합된 N-말단 RTA 단편이거나 또는 CBD-인테인과 융합된 C-말단 RTA 단편이다.
본 발명자들은 질병, 장애 및 악성 종양을 표적화 치료하고 스크리닝하기 위한 분열-생체 분자성 접합체의 생성 방법과 그의 용도를 밝혀내었다. 보다 구체적으로 언급하면, 본 발명은 각 효과인자 단편을 프로브에 접합시킨 분열 효과인자 폴리펩티드를 포함하는 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 질병, 장애 및 악성 종양을 치료하는 방법에 관한 것이다. 양 프로브를 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드, 예를 들어 병원성 핵산 서열 또는 병원성 단백질과 상호 작용시키면 효과인자 단편들이 함께 결합하여, 당해 분야에서 효과인자 분자의 "단백질 상보성"으로서 지칭되기도 하는 리어셈블리가 촉진된다. 효과인자 분자에 따라서, 단백질 상보성인 인해 세포성 효과가 나타난다. 이러한 본 발명의 방법은 치료적 단백질 상보성 방법에 기초한다. 한 양태에서, 표적을 표지시킬 수 있고 치료, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 분열-생체 분자성 접합체를 이용하여 대상체를 치료하는 것의 필요성과 유효성을 모니터링할 수 있다.
정의
본원에서 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 분야에서 통상적인 기술을 가진 자가 흔히 이해하고 있는 바와 동일한 의미를 갖고 있다. 문헌 [참고: Singleton, et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 2D ED., John Wiley and Sons, New York (1994), and Hale & Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, N. Y. (1991)]은 당업자에게 본 발명에 사용된 수 많은 용어들의 일반적 사전을 제공해준다. 본원에 기재된 바와 유사하거나 등가의 모든 방법 및 물질이 본 발명을 실시하거나 시험하기 위해 사용될 수 있긴 하지만, 바람직한 방법 및 물질이 기재된다. 수치 범위는 해당 범위를 규정하는 수를 포함한다. 달리 표시되지 않는 한, 핵산은 5'에서 3' 배향으로 좌측에서 우측으로 기재되고; 아미노산 서열은 아미노에서 카복시 배향으로 좌측에서 우측으로 기재된다. 본원에 제공된 표제는 총괄적으로 본 명세서를 참고로 하여 나타낼 수 있는 본 발명의 각종 국면 또는 양태를 제한하지 않는다. 따라서, 바로 다음에 정의된 용어는 총괄적으로 본 명세서를 참고로 하여 보다 상세히 정의된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "분열 생체 분자성 접합체"는 프로브와 접합된 효과인자 분자를 포함하는 폴리펩티드를 지칭하는데, 효과인자 분자는 단편으로서 불활성이고, 부착된 프로브가 그의 특이적 표적, 전형적으로 핵산 또는 폴리펩티드 표적과 상호 작용하는 경우에 기능적 활성 효과인자 분자를 형성하기 위해 단백질 상보성 또는 리어셈블리할 수 있는 단편을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "접합체"는 2개 이상의 단백질을 함께 연결하여 부착시켜 하나의 실체를 형성시키는 것을 지칭한다. 단백질은 링커, 화학적 변형, 펩티드 링커, 화학적 링커, 공유적 또는 비공유적 결합 또는 단백질 융합, 또는 당업자에게 공지된 모든 수단에 의해 함께 부착시킬 수 있다. 연결시키는 것은 영구적이거나 가역적일 수 있다. 몇몇 양태에서, 접합체 내의 각 단백질 및 각 링커의 목적하는 특성을 활용하기 위해 여러 개의 링커가 포함될 수도 있다. 가요성 링커 및 접합체의 용해도를 증가시키는 링커가 단독으로 사용되거나 본원에 혼입된 바와 같은 기타 링커가 함께 사용하는 것이 고려된다. 펩티드 링커는 DNA 암호화 링커를 발현시킴으로써 접합체 내의 하나 이상의 단백질에 연결될 수 있다. 링커는 산 절단 가능한 링커, 광 절단 가능한 링커 및 열 민감성 링커일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "융합 단백질"은 둘 이상의 단백질의 재조합 단백질을 지칭한다. 융합 단백질은, 예를 들어 하나의 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 또 다른 단백질을 암호화하는 핵산과 연결시켜 이들이 세포 내에서 의도한 모든 단백질을 정착시킨 단일 폴리펩티드로 해독될 수 있는 단일 개방 판독 프레임을 구성하도록 함으로써 생성시킬 수 있다. 단백질의 배열 순서는 다양할 수 있다. 비제한적 예로서, 분열 생체 분자성 접합체 단백질의 하나의 단편을 암호화하는 핵산 서열은 분열 폴리펩티드 프로브를 암호화하는 유전자의 5' 또는 3' 말단과 동일 프레임 내에서 융합된 효과인자 단편 중의 하나를 암호화하는 뉴클레오티드 서열로부터 유래된다. 이러한 방식으로 상기 유전자를 발현하면, 효과인자 단편은 기능적으로 발현되고 폴리펩티드 프로브의 N-말단 또는 C-말단과 융합된다. 특정 양태에서는, 폴리펩티드 프로브의 기능성이 효과인자 단백질과의 융합에 의해 실질적으로 영향을 받지 않도록 폴리펩티드 프로브를 변형시킨다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "링커"는 융합 단백질을 생성시키는 수단 이외의 수단에 의해 둘 이상의 단백질을 연결시켜 주는 모든 수단을 지칭한다. 링커는 공유적 링커 또는 비공유적 링커일 수 있다. 공유적 링커의 예에는 연결될 하나 이상의 단백질에 공유적으로 부착된 링커 부분 또는 공유적 결합이 포함된다. 링커는 비공유적 결합, 예를 들어 백금 원자와 같은 금속 중심을 통한 유기 금속성 결합일 수도 있다. 공유적 연쇄을 위해, 각종 관능기, 예를 들어 아미드기, 예를 들면 카본산 유도체, 에테르, 에스테르, 예를 들면 유기 및 무기 에스테르, 아미노, 우레탄, 우레아 등을 사용할 수 있다. 연결을 제공하기 위해, 효과인자 분자 및/또는 프로브를 산화, 히드록시화, 치환, 환원 등에 의해 변형시켜 커플링하기 위한 부위를 제공할 수 있다. 효과인자 단백질 및/또는 프로브의 기능을 상당히 저하시키지 않는 변형이 바람직하다는 것을 인지해야 할 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "효과인자 분자"는 효과인자 분자의 2개 단편을 합한 경우에 기능적이고 목적하는 기능적 효과를 나타낼 능력을 지닌 폴리펩티드 또는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산을 지칭한다. 비제한적 예로서, 효과인자 분자의 기능적 효과는 세포 사멸을 유도시킬 수 있거나, 세포독성 효과를 유도시킬 수 있거나, 세포를 감작시킬 수 있거나, 핵산 또는 폴리펩티드를 분해시킬 수 있거나, 세포 생존을 증진시킬 수 있거나, 또는 상실되고/되거나 기능이상한 폴리펩티드를 대체시킬 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "프로브"는 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드를 인식하고 이와 결합하며, 결합의 결과로서 접합된 분열-효과인자 분자의 단백질 상보성 또는 리어셈블리를 촉진시켜 주는 분열-생체 분자성 접합체의 효과인자 분자의 단편과 접합된 성분을 지칭한다. 몇몇 양태에서, 프로브는 핵산 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "올리고뉴클레오티드"는 본 발명의 프라이머 및 프로브를 지칭하고, 이는 2개 이상, 바람직하게는 3개 이상의 리보- 또는 데옥시리보뉴클레오티드로 구성된 핵산 분자로서 정의된다. 올리고뉴클레오티드의 정확한 크기는 각종 인자에 좌우되고 올리고뉴클레오티드의 특별한 적용과 용도에 좌우될 것이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "프로브"는 해당 프로브와 상보적인 서열 또는 폴리펩티드를 수반한 핵산과 어닐링할 수 있거나 이와 특이적으로 혼성화할 수 있는, 정제된 제한 효소 분해물에서와 같이 천연 발생적이든지 아니면 합성적으로 생성되든지 간에, 핵산 유사체 또는 폴리펩티드 또는 프로브, 또는 RNA 또는 DNA의 올리고뉴클레오티드, 폴리뉴클레오티드, 핵산을 지칭한다. 핵산 프로브는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있고, 이러한 프로브의 정확한 길이는 온도, 프로브의 공급원 및 사용된 방법을 포함한 많은 요인들에 의해 좌우된다. 예를 들어, 진단 적용하는 경우에는 표적 서열의 복잡성에 따라서, 올리고뉴클레오티드 프로브는 전형적으로 15 내지 25개 이상의 뉴클레오티드를 함유하지만, 보다 적은 수의 뉴클레오티드를 함유할 수도 있다. 본원에서의 프로브는 표적 핵산 서열 또는 표적 폴리펩티드와 실질적으로 상보적이 되도록 선택한다. 이는 프로브가 그들 각각의 표적과 "특이적으로 혼성화"하거나 어닐링할 수 있도록 충분히 상보적이어야만 한다는 것을 의미한다. 따라서, 프로브가 표적 핵산 또는 폴리펩티드의 정확한 상보적 서열 또는 입체 형태를 반드시 반영할 필요는 없다. 예를 들어, 핵산 프로브의 경우에는 비-상보적 뉴클레오티드 단편을 프로브의 5' 또는 3' 말단에 부착시킬 수 있는데, 나머지 프로브 서열은 표적 가닥에 상보적이다. 또 다른 한편, 비-상보적 염기 또는 보다 긴 서열이 프로브 내로 산재될 수 있는데, 단 프로브 서열은 표적 핵산 서열과 충분히 상보성이어서 그와 특이적으로 어닐링되어야 한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "특이적으로 혼성화하는"이란 당해 분야에서 일반적으로 사용되고 있는 예정된 조건 하에 혼성화를 허용해주기에 충분히 상보적인 (종종 "실질적으로 상보적인"으로 지칭됨) 서열의 2개 단일 가닥 핵산 분자 간의 연합을 지칭한다. 몇몇 양태에서, 상기 용어는 본 발명의 단일 가닥 DNA 또는 RNA 프로브 내에 함유된 실질적으로 상보적인 서열과 올리고뉴클레오티드의 혼성화를 지칭하는데, 비-상보적 서열의 단일 가닥 핵산과 올리고뉴클레오티드의 혼성화는 실재적으로 배제시킨다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "핵산"은 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태의 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드 및 그의 중합체를 지칭한다. 달리 구체적으로 제한되지 않는 한, 상기 용어는 기준 핵산과 유사한 결합 특성을 지니고 있고 천연 발생적 뉴클레오티드와 유사한 방식으로 대사되는, 천연 뉴클레오티드의 공지된 유사체를 함유하는 핵산을 포괄한다. 달리 표시되지 않는 한, 특별한 핵산 서열은 또한, 명쾌하게 표시된 서열 뿐만 아니라 그의 보존적으로 변형된 변이체 (예: 변성 코돈 치환) 및 상보성 서열을 암시적으로 포괄한다. 구체적으로 언급하면, 변성 코돈 치환은 1개 이상의 선별된 (또는 모든) 코돈의 세 번째 위치를 혼합-염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환시킨 서열을 생성시킴으로써 달성할 수 있다 [참고: Batzer, et al., Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991); Ohtsuka, et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985), and Rossolini, et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994)]. 용어 핵산은 유전자, cDNA, 및 유전자에 의해 암호화된 mRNA와 상호 교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "올리고뉴클레오티드" 및 "프라이머"는 표준 핵산 과정에서 이와 연관된 통상적인 의미를 갖는데, 즉 폴리뉴클레오티드 주형과 혼성화할 수 있고 주형 가닥과 상보적인 프라이머 연장 생성물의 합성을 위한 개시점으로서 작용할 수 있는 올리고뉴클레오티드이다. 본원에 기재된 많은 올리고뉴클레오티드는 기타 올리고뉴클레오티드 또는 핵산의 특정 부분과 상보적이 되도록 설계하여, 이들 사이에 안정한 하이브리드가 형성될 수 있도록 한다. 이들 하이브리드의 안정성은 공지된 방법, 예를 들어 다음 문헌에 기재된 방법을 사용하여 계산할 수 있다 [참고: Lesnick and Freier, Biochemistry 34: 10807-10815 (1995), McGraw et al., Biotechniques 8:674-678 (1990), and Rychlik et al., Nucleic Acids Res. 18:6409-6412 (1990)].
본원에 사용된 바와 같은 용어 "접합체" 또는 "접합된"은 2가지 이상의 실체를 연결하는 것을 지칭한다. 이러한 연결은 이들 실체의 융합, 예를 들어 폴리펩티드의 융합일 수 있다. 접합은 또한, 당해 분야에 공지된 기타 수단, 예를 들어 공유, 이온 또는 소수성 상호 작용에 의해 수행할 수 있는데, 이로써 특정 분자의 부분을 묶어 놓고 근접하게 보존시킨다.
용어 "부분" 또는 "모티프"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 이는 특별한 기능을 수행할 수 있는 분자, 핵산 또는 단백질 또는 폴리펩티드 등을 지칭한다. 용어 "핵산 결합성 부분" 또는 "핵산 결합성 모티프"는 핵산과 특이적 방식으로 결합할 수 있는 분자를 지칭한다.
용어 "병원성 핵산" 또는 "병원성 DNA"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 이는 전적으로 또는 부분적으로, 질병, 장애 또는 악성 종양에 일조하는 증상, 예를 들어 세포, 조직 및 기관 상의 구조적 및 기능적 변화에 기여하는 핵산 서열을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "돌연변이" 또는 "다형성"은 핵산 서열의 발현에 영향을 미칠 수 있거나 미치지 않을 수 있는, 핵산의 핵산 서열 상의 변화를 지칭한다. 용어 다형성은 결실, 치환, 삽입, 단일 핵산 다형성 (SNP) 등을 포함한 모든 다형성을 포함한다. 예를 들어, 돌연변이 및 다형성은 질병, 장애 또는 악성 종양에 일조할 수 있거나, 또는 또 다른 한편으론, 특별한 제약 작용제를 이용한 요법에 대한 대상체 또는 세포의 반응성에 일조할 수 있다 (이는 종종 "약리게놈학"으로 명명된다). 유사하게, 돌연변이 및/또는 다형성은 세포에 대해 독성인 기능이상 단백질의 발현으로 인해 정확하게 기능할 수 없는 대상체 및 세포를 확인할 수 있으므로, 질병 또는 장애가 발생할 가능성이 증가한 대상체 또는 세포, 또는 특정 치료에 대해 반응성이거나 반응성이 아닌 세포 또는 대상체를 확인할 수 있다. 몇몇 양태에서, 약리게놈학은 또한, 약물 개발과 선별 과정을 도와주기 위한 제약 조사에 사용할 수 있다 [참고: Linder et al. (1997), Clinical Chemistry, 43, 254; Marshall (1997), Nature Biotechnology, 15, 1249; 국제특허출원 WO 97/40462, Spectra Biomedical; and Schafer et al. (1998), Nature Biotechnology, 16, 3].
용어 "조절성 서열" 및 "조절성 요소"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 이는 이와 작동적으로 연결되는 핵산 서열의 전사를 조정하므로 전사 조정제로서 작용하는, 전형적으로 DNA 또는 RNA 또는 그의 유사체 등인, 핵산의 절편에 대한 요소를 지칭한다. 조절성 서열은 이와 작동적으로 연결되는 핵산 서열 및/또는 유전자의 발현을 조정한다. 조절성 서열은 전사 결합성 도메인이고 전사 단백질 및/또는 전사 인자, 억제인자 또는 증강인자 등의 핵산-결합성 도메인에 의해 인식되는 핵산 서열인 "조절성 요소"를 포함할 수 있다. 전형적인 조절성 서열에는 전사 프로모터, 전사를 제어하기 위한 임의의 작동인자 서열, 적합한 mRNA 리보솜성 결합 부위를 암호화하는 서열, 및 전사 및/또는 해독의 종결을 제어하기 위한 서열이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 조절성 서열은 발현하고자 하는 세포 유형에서 분열 생체 분자성 접합체의 발현을 제어하기 위한 검정을 위해 선별될 수 있다. 조절성 서열은 단일 조절성 서열 또는 다중 조절성 서열, 또는 그의 변형된 조절성 서열 또는 단편일 수 있다. 몇몇 양태에서, 핵산 서열을 몇몇 수단, 예를 들어 돌연변이, 메틸화 등에 의해 변화 또는 변형시킨 조절성 서열인 변형된 조절성 서열이 유용하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "프로모터", "프로모터 영역" 또는 "프로모터 요소"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 그와 작동적으로 연결되는 핵산 서열의 전사를 제어하는 핵산 서열의 절편, 전형적으로 DNA 또는 RNA 또는 그의 유사체를 지칭한다. 프로모터 영역은 RNA 폴리머라제 인식, 결합 및 전사 개시를 위해 충분한 특이적 서열을 포함할 수 있고, 이러한 프로모터 영역의 일부가 프로모터로서 지칭된다. 또한, 프로모터 영역은 상기 RNA 폴리머라제의 인식, 결합 및 전사 개시 활성을 조정하는 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 양태에서, 이들 서열은 시스-작용성이거나 또는 트랜스-작용성 인자에 대해 반응성일 수 있다. 몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용하고 조절 특성에 따라서 유용한 프로모터는 구성성 또는 조절성 또는 유도성 프로모터일 수 있다.
용어 "작동적으로 연결된" 또는 "작동적으로 연합된"은 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 핵산 서열과 뉴클레오티드의 조절성 서열, 예를 들어 프로모터, 증강인자, 전사 및 해독 정지 부위, 및 기타 신호 서열과의 기능적 상관 관계를 지칭한다. 예를 들어, 조절성 서열 또는 프로모터 영역과 작동적으로 연결된 핵산 서열, 전형적으로 DNA는 이러한 DNA와 조절성 서열 또는 프로모터 간의 물리적 및 기능적 상관 관계를 지칭하므로, 연결된 DNA의 전사는 조절성 서열을 특이적으로 인식, 결합 및 전사하는 RNA 폴리머라제에 의해 조절성 서열 또는 프로모터로부터 개시된다. 몇몇 양태에서, 발현 및/또는 시험관내 전사를 최적화하기 위해, 핵산을 발현하는 경우에는 조절성 서열을 변형시키거나 또는 발현되는 세포 유형을 발현하는 경우에는 DNA를 변형시키는 것이 필요할 수 있다. 이러한 변형의 바람직함 또는 필요성은 실험적으로 결정할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "핵산 결합성 모티프"는 핵산 서열과 선택적으로 결합할 수 있는 프로브, 핵산 또는 폴리펩티드의 영역을 지칭한다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 아미노산 잔기의 중합체를 지칭한다. 상기 용어는 천연 발생적 아미노산 중합체 뿐만 아니라 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 천연 발생적 아미노산의 인공 화학적 유사체인 아미노산 중합체에 적용된다.
용어 "병원성 폴리펩티드" 또는 "병원성 펩티드" 또는 "병원성 단백질"은 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 전적으로 또는 부분적으로, 질병, 장애 또는 악성 종양의 증상에 일조하는 폴리펩티드를 지칭한다.
본원에서 사용된 "질병, 장애 또는 악성 종양"의 맥락에서 "실질적으로 일조하는"이란 단독으로 또는 기타 핵산 및/또는 기타 폴리펩티드와 함께 질병, 장애 또는 악성 종양에 일조하는 병리학적 핵산 및/또는 병리학적 폴리펩티드를 지칭하는 것을 의미한다.
용어 "장애" 또는 "질병"은 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 기관 기능 성능을 방해 또는 교란 (즉, 기관 기능이상을 유발시킴)시키고/시키거나 불안감, 기능이상, 곤란, 또는 심지어 해당 질병을 앓고 있는 대상체 사망을 유발시키는, 신체 상태 또는 그의 기관 중의 하나에 있어서의 모든 변경을 지칭한다. 몇몇 양태에서, 불안감, 기능이상, 곤란 또는 심지어 사망과 같은 증상은 질병에 걸린 대상체와 접촉하는 대상체에게 일어날 수 있다. 질병 또는 장애는 또한, 디스템퍼 (Distemper), 병든, 가벼운 병, 만성병, 장애, 병, 질병, 호소 증상, 가벼운 병, 정서 장애에 관한 것일 수 있다.
용어 "악성 종양" 및 "암"은 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 세포의 제어되지 않는 비정상적인 성장을 특징으로 하는 질병을 지칭한다. 암 세포는 국소적으로 확산되거나 또는 혈류와 림프계를 통하여 신체의 다른 부위로 확산될 수 있다. 정의의 범위 내에 있는 암 질병은 양성 신생물, 형성이상, 과형성 뿐만 아니라 예를 들어, 암의 급속한 만연 보다 종종 먼저 진행되는 백색판증 (leukoplakia)과 같은 기타 모든 형질전환 또는 전이성 성장을 나타내는 신생물을 포함한다.
본원에 지칭된 바와 같은 용어 "독소"는 세포에 대해 독성인 세포독성일 수 있는 모든 실체, 전형적으로 폴리펩티드를 포괄한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "세포독소"는 표적화되는 세포에 대해 특이적으로 독성인 독성 실체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "면역독소"는 특이적 세포를 표적화하는 표적화 실체와 접합되는 독성 실체를 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 몇몇 양태에서, 표적화 실체는 분열-생체 분자성 접합체의 프로브 성분이다.
용어 "뉴클레아제" 또는 "엔도뉴클레아제" 또는 "엑소뉴클레아제"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 핵산 서열을 소형 핵산 서열 또는 단일 뉴클레오티드로 분해할 수 있는 분자를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "종양형성 유전자"는 성장에 대한 정상적 구속으로부터 세포를 우성적으로 방출시킬 수 있는 정상 유전자의 돌연변이되고/되거나 과발현된 버전을 암호화하는 핵산 서열, 또는 이러한 버전의 폴리펩티드를 지칭한다. 종양형성 유전자는 단독으로 또는 기타 변화 또는 유전자와 협력하여 세포 종양원성에 기여한다. 종양형성 유전자의 예에는 gp40 (v-fms); p21 (ras); p55 (v-myc); p65 (gag-jun); pp60 (v-src); v-abl; v-erb; v-erba; v-fos 등이 포함된다. "원종양형성 유전자 (proto-oncogene)" 또는 "전종양형성 유전자"는 종양형성 유전자의 정상적인 세포성 등가물을 발현하는 핵산의 정상적 발현을 지칭하고, 전형적으로 이들 유전자는 세포 성장의 조절 또는 신호 전달에 관여하는 유전자이다.
용어 "감작시키는"이란 세포를 기타 이차 작용제, 예를 들어 기타 프로-드럭 또는 기타 환경적 영향 (예: 자외선 등)에 대해 민감하거나 감수성이 되도록 하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "세포"는 식물, 효모, 벌레, 곤충 및 포유류를 포함한 모든 원핵성 또는 진핵성 세포를 지칭한다. 포유류 세포에는 영장류 세포, 인간 세포 및 관심있는 모든 동물로부터의 세포, 예를 들어 마우스, 햄스터, 토끼, 개, 고양이, 가축, 예를 들면 말, 소, 뮤린, 양, 개, 고양이 및 트랜스제닉 (transgenic) 동물 등으로부터의 세포가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 세포는 각종 조직 유형일 수 있는데, 예를 들어 조혈, 중성, 중간엽, 피부, 점막, 간질, 근육 비장, 세망내피, 상피, 내피, 간, 신장, 위장, 폐, T-세포 등일 수 있으지만, 이에 제한되지 않는다. 줄기 세포, 배아 줄기 (ES) 세포, ES-유래 세포 및 줄기 세포 전구세포가 또한 포함되는데, 이에는 조혈, 중성, 간질, 근육, 심혈관, 간, 폐, 위장 줄기 세포 등이 포함되지만, 그에 제한되지 않는다. 효모 세포를 본 발명에서 세포로서 사용할 수도 있다. 세포는 또한, 특별한 대상체 세포 뿐만 아니라 이러한 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 지칭하는데, 이는 특정의 변형 또는 환경적 영향, 예를 들어 분화 때문이므로, 자손은 실제적으로 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 본 발명의 범위 내에 여전히 포함된다.
본 발명에 사용된 세포는, 예를 들어 시험관내 또는 생체 외에서 배양된 세포일 수도 있다. 예를 들어, 세포는 배양 배지에서 시험관내 배양하였다. 또 다른 한편, 생체외 배양된 세포의 경우에는, 세포를 대상체, 예를 들어 건강한 대상체 및/또는 질병에 걸린 대상체로부터 수득할 수 있다. 세포는 비제한적 예로서, 생검 또는 당업자에게 공지된 기타 외과적 수단에 의해 수득할 수 있다. 본 발명에 사용된 세포는 대상체 내에 존재할 수 있는데, 즉 생체내이다. 생체내 세포를 사용하는 본 발명의 경우, 세포는 대상체에게서 발견될 수 있고 해당 질병, 장애 또는 악성 종양 병리상태의 특징을 나타낼 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "대상체"에는 인간 및 비-인간 동물이 포함된다. 용어 "비-인간 동물"에는 모든 척추동물, 예를 들어 포유류, 비-포유류, 예를 들면 비-인간 영장류, 양, 개, 암소, 치킨, 양서류, 파충류, 설치류 등이 포함된다. 특정 양태에서, 대상체는 포유류, 예를 들어 영장류, 예를 들면 인간이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "병원체"는 대상체에게서 질병 또는 장애를 유발시키는 유기체 또는 분자를 지칭하고, 병원체에는, 예를 들어 바이러스, 진균, 세균, 기생충 및 기타 감염 유기체 또는 그로부터의 분자가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 바이러스는 단순 포진 바이러스 유형-1, 단순 포진 바이러스 유형-2, 시토메갈로바이러스, 엡슈타인-바르 (Epstein-Barr) 바이러스, 수두 대상포진 (Varicella-zoster) 바이러스, 인간 포진 바이러스 6, 인간 포진 바이러스 7, 인간 포진 바이러스 8, 바리올라 (Variola) 바이러스, 수포성 구내염 바이러스, A형 간염 바이러스, B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, D형 간염 바이러스, E형 간염 바이러스, 리노바이러스, 코로나바이러스, 인플루엔자 바이러스 A, 인플루엔자 바이러스 B, 홍역 바이러스, 폴리오마바이러스, 인간 유두종 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스, 아데노바이러스, 콕사키 바이러스, 뎅그 바이러스, 유행성 이하선염 바이러스, 폴리오바이러스, 광견병 바이러스, 라우스 (Rous) 육종 바이러스, 황열 바이러스, 에볼라 바이러스, 마르부르그 (Marburg) 바이러스, 라사 (Lassa) 열 바이러스, 북미동부말 뇌염 바이러스, 일본 뇌염 바이러스, 성 루이스 (St. Louis) 뇌염 바이러스, 머레이 계곡 (Murray Valley) 열 바이러스, 서부 나일강 (West Nile) 바이러스, 리프트 (Rift) 계곡 열 바이러스, 로타바이러스 A, 로타바이러스 B, 로타바이러스 C, 신드비스 (Sindbis) 바이러스, 원숭이 면역결핍증 바이러스, 인간 T-세포 백혈병 바이러스 유형-1, 한타바이러스, 풍진 바이러스, 원숭이 면역결핍증 바이러스, 인간 면역결핍증 바이러스 유형-1 및 인간 면역결핍증 바이러스 유형-2를 포함하는 바이러스 군 중에서 선택될 수 있다.
용어 "포유류"는 단수 "포유류"와 복수 "포유류"를 포괄하고, 이에는 인간; 영장류, 예를 들어 유인원, 원숭이, 오랑우탄, 및 침팬지; 개과 동물 (canid), 예를 들어 개 및 늑대; 고양이과 동물 (felid), 예를 들어 고양이, 사자 및 호랑이; 말과 동물 (equid), 예를 들어 말, 당나귀 및 제브라; 식용 동물, 예를 들어 암소, 돼지 및 양; 유제 동물 (ungulate), 예를 들어 사슴 및 기린; 설치류, 예를 들어 마우스, 랫트, 햄스터 및 기니아 피그; 및 곰이 포함되지만, 그에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 포유류는 인간이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "유전적 소인"은 대상체 또는 세포가 특별한 질병, 장애 또는 악성 종양에 대해 감수성이 될 수 있도록 예정시켜 주거나 또는 질병, 장애 또는 악성 종양에 대한 치료에 대해 반응성이 될 수 있도록 예정시켜 주는, 대상체 또는 세포의 유전적 구성을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "세포 사멸 경로"는 당업자에게 널리 공지되어 있는, 세포소멸로서 공지되기도 한 세포 자살 경로 또는 프로그램된 세포 사멸 프로그램 (PCD)을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은 '항-세포소멸' 및 '프로-세포소멸'은 세포 사멸 경로를 각각 예방하거나 유도시키는 분자 또는 실체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "인간화"는 포유류 세포에서 발현 및 기능을 위해 최적화시킨 핵산 또는 폴리펩티드를 형성시키기 위해 유전적 변형시켰거나 또는 전사 후에 변형시킨 핵산 서열 또는 폴리펩티드를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "증폭" 프라이머는 선택된 핵산 서열의 증폭을 위한 기준으로서 제공될 수 있는 천연 또는 유사체 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 지칭한다. 이에는, 예를 들어 폴리머라제 연쇄 반응 프라이머 및 리가제 연쇄 반응 올리고뉴클레오티드가 포함된다.
예를 들어, 세포, 또는 핵산, 또는 벡터와 관련하여 사용되는 경우의 용어 "재조합"은 이러한 세포, 또는 핵산, 또는 벡터가 이종 핵산의 도입에 의해 또는 천연 핵산의 변경에 의해 변형되었거나 또는 세포가 상기와 같이 변형된 세포로부터 유래된다는 것을 표시한다. 따라서 예를 들어, 재조합 세포는 천연 (비-재조합) 형태의 세포 내에서는 발견되지 않는 유전자를 발현하거나, 또는 달리 비정상적으로 발현되거나, 불충분하게 발현되거나 또는 전혀 발현되지 않는 천연 유전자를 발현한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "접촉"은 직접적인 물리적 연합 하에 놓여지는 것을 지칭한다. 본 발명과 관련하여, 상기 용어는 항체-항원 결합을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "세포독성"은 전형적으로, 선별되거나 표적화된 세포의 정상적인 세포 기능의 지정 억제를 지칭하는데, 예를 들어 몇몇 경우에는, 세포독성이 단백질 합성의 억제를 지칭한다. 이러한 단백질 합성의 억제는 문헌 [참고: Rybak, et al., JNCI 88:747-753 (1996)]에 기재된 프로토콜을 사용하여 인간 종양 세포, 예를 들어 HS578T (ATCC No. HTB 126)에서 검정할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "세포독성 시약"은 등몰량의 폴리펩티드의 50% 이상을 억제시킬 수 있는 상대적 50% 억제 농도 (IC50)를 가질 수 있다. 몇몇 경우에, 상대적 IC50은 폴리펩티드의 60% 또는 70% 이상, 또는 100% 이상일 것이다.
몇몇 양태에서, 특별한 세포가 핵산 서열에 의해 암호화된 단백질을 발현하기 위해서는, 당업자에게 통상적으로 공지된 모든 방법을 사용하여 핵산을 세포 내로 도입할 수 있다. DNA를 세포 내로 도입하기 위한 방법에는 적당한 벡터에 의한 형질전환이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "형질전환"은 이종 폴리뉴클레오티드 또는 핵산 서열 또는 그의 단편을 당해 분야에 공지된 모든 방법, 예를 들어 직접적인 흡수, 형질감염 또는 형질도입을 이용하여 숙주 세포 내로 도입하는 것을 지칭한다. 몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열-생체 분자성 접합체를 생성하기 위해, 세포를 하나 이상의 핵산 구조물로 형질전환시킬 수 있는데, 하나의 구조물은 본원에 기재된 바와 같은 분열-생체 분자성 접합체의 하나 이상의 단편에 대한 서열을 포함하고, 이때 세포는 분열-생체 분자성 접합체를 암호화하는 핵산을 발현하여 분열-생체 분자성 접합체 단백질을 생성시킨다. 상기 구조물은 당업자에게 공지된 여러 가지 수단, 예를 들어 벡터, 바이러스성 벡터, 및 비-바이러스성 수단, 예를 들면 융합, 전기천공, 바이오리스틱 (biolistic), 형질감염, 리포펙션 (lipofection), 원형질체 융합, 인산칼슘 형질감염, 미소주사, 압력-강제 유입, 있는 그대로의 DNA 등, 또는 당업자에게 공지된 기타 모든 수단에 의해 세포 내로 도입할 수 있다.
용어 "벡터"와 "플라스미드"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 그와 연결된 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 그들과 작동적으로 연결되는 유전자 및/또는 핵산 서열의 발현을 지시할 수 있는 벡터가 본원에서 "발현 벡터"로서 지칭된다. 일반적으로, 본원에 기재된 바와 같은 용도의 발현 벡터에는 그들의 벡터 형태에서는 염색체와 결합되지 않는 환상 이중 가닥 DNA 루프를 지칭하는 "플라스미드"를 사용하는 재조합 DNA 기술이 포함된다. 기타 발현 벡터, 예를 들어 플라스미드, 에피솜, 박테리오파아지 또는 바이러스성 벡터를 상이한 양태에 사용할 수 있고, 이러한 벡터는 숙주의 게놈 내로 통합될 수 있거나 또는 특별한 세포에서 자기 복제할 수 있다. 등가의 기능을 제공하는 것으로 당업자에게 공지된 기타 형태의 발현 벡터를 사용할 수도 있다. 발현 벡터는 DNA를 암호화하는 안정적 또는 일시적 발현을 위한 발현 벡터를 포함한다.
효과인자 분자
세포독성 효과인자 분자
몇몇 양태에서, 효과인자 분자는 세포독소, 예를 들어 세균성 독소 또는 세균성 세포독소일 수 있다. 세균성 독소 또는 세포독소는 당업자에게 널리 공지되어 있고, 예를 들어 탄저병 독소; 디프테리아 독소 (DT); 리신 A 독소 (RTA); 슈도모나스성 내독소 (PE); 스트렙토리신 O; 사포린; 겔라닌; 또는 그의 천연 발생적 변이체, 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체 또는 단편이지만, 이에 제한되지 않는다. 세균성 독소는 전형적으로 글리코실화되지 않지만, 글리코실화된 세균성 독소 또한, 본 발명에 사용하는 것으로 포괄된다. 예를 들어, DT는 정상 세포와의 비특이적 결합과 특이성을 개선시키기 위해 유전적으로 변형시켰는데, 예를 들어 DT는 leu390 및 Ser525 각각을 페닐알라닌으로 전환시켜 CRM107을 생성시킴으로써 돌연변이되거나 [참고: Greenfield et al; Sci, 1987; 238:536-539], 또는 DT 및 PE (PE40 포함)을 절단시켰다 [참고: Francisco et al; 1997;272:24165-24169; Kondo et al, 1988;263:9470; Williams et al, 1987; 1:493-498]. 사용된 세균성 독소의 특성을 변형시키기 위한 다양한 돌연변이 및 변형에 관해서는 다음 문헌을 참고할 수 있다 [참고: Immunotoxins for Targeted Cancer Therapy; Kreitman R.J, 2006; APPS Journal; 8(3);E532-E551; 그의 전문이 본원에 참고로 도입된다].
또 다른 양태에서, 효과인자 분자는 식물 독소일 수 있다. 식물 독소는 당업자에게 널리 공지되어 있고, 식물 할로-독소 또는 부류 II 리보솜 불활성화 단백질, 또는 반독소 또는 부류 I 리보솜 불활성화 단백질일 수 있다. 식물 독소는, 예를 들어 사포린 (SAP); 억새풀 항바이러스성 단백질 (PAP); 브리오딘 1; 보우가닌 및 겔로닌, 또는 그의 천연 발생적 변이체, 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체 또는 단편일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 식물 반독소는, 예를 들어 리신 A 쇄 (RTA); 리신 B (RTB); 아브린; 미스트레토에, 렉틴 및 모데신; 또는 그의 천연 발생적 변이체, 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체 또는 단편일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 식물 독소는 전형적으로 글리코실화되지만, 글리코실화되지 않은 식물 독소 또한, 본 발명에 사용하는 것으로 포괄된다.
대체 양태에서, 식물 독소는 뉴클레아제로서 기능할 수 있는데, 예를 들면 사르신; 레스트릭토신이지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 대체 양태에서, 효과인자 분자는 세포독성 분자 또는 단백질의 폴리펩티드 또는 단편을 포함할 수 있다. 세포독성 분자의 한 예는 사이토킨이다. 암에 대한 독소로서 사용되어 온 사이토킨의 비제한적 예에는 IL-1; IL-2 (CD25); IL-3; IL-4; IL-13; 인터페론-알파; 종양 괴사 인자-알파 (TNFα); IL-6; 과립구-대식 세포 집락 자극 인자 (GM-CSF); G-CSF가 포함된다. 사이토킨은 사이토킨의 천연 발생적 변이체일 수 있거나 또는 또 다른 한편으론, 그의 유전 공학적으로 처리시킨 변이체, 또는 재조합 사이토킨의 이종 서열을 포함하는 사이토킨일 수 있다.
대체 양태에서, 효과인자 분자는 인간 또는 포유류 독소, 예를 들어 RNase, 프로타민/DNA, 및 Bax를 포함하는 인간화 면역독소를 포함할 수 있다. 인간화 독소의 예에 관해서는 다음 문헌을 참고할 수 있다 [참고: Frankel, A., Clinical Cancer Res, 2004; 10:13-15; 그의 전문이 본원에 참고로 도입된다].
뉴클레아제 효과인자 분자
또 다른 양태에서, 효과인자 분자는 뉴클레아제 또는 엔도핵산 분해 활성을 지닐 수 있다. 몇몇 양태에서, 뉴클레아제는 DNA 뉴클레아제, DNA 엔도뉴클레아제, 또는 DNA 엑소뉴클레아제이다. 뉴클레아제는 천연 변이체, 상동체, 또는 그의 유전적으로 변형된 변이체일 수 있다. 공지된 DNA 엔도뉴클레아제의 예는 당업자에게 널리 공지되어 있고, 면역독소에 대한 접합체에 사용되어 왔고 [참고: WO0174905; 그의 전문이 본원에 참고로 도입된다], 이에는 예를 들어 소의 DNaseI [참고: Worrall and Conolly, 1990; J. Biol. Chem. 265;21889-21895]; 췌장 DNaseI [참고: Shak et al, 1990; Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 87;9188-9192 and Hubbard et al, 1992; New Eng. J. Med., 326:812-815]이 포함된다. 몇몇 양태에서, DNase 뉴클레아제는 포유류 데옥시리보뉴클레아제 I이고, 기타 양태에서는 인간 데옥시리보뉴클레아제 I이다.
본 발명의 대체 양태에서, 뉴클레아제는 RNA 뉴클레아제, RNA 엔도뉴클레아제 또는 RNA 엑소뉴클레아제이다. RNA 뉴클레아제는 당업자에게 널리 공지되어 있고, 모두 본 발명에 사용하기 위해 포괄된다. RNA 뉴클레아제의 비제한적 예에는 RNA 엔도뉴클레아제 I; RNA 엔도뉴클레아제 II; RNA 엔도뉴클레아제 III이 포함된다. 본 발명의 몇몇 경우에, RNase는 리보뉴클레아제 A (RNase A)일 수 있고, 이러한 한 가지 예는 최초에는 P-30으로 명명되었고 문헌 [참고: Darzynkiewicz et al, Cell Tissue Kinet, 21; 169 (1998)]에 처음 보고된, 라나 피피엔스 (Rana pipiens) 난모세포로부터 유래된 온코나제 (Onconase®) (입수처: Alfacell Corporation, Bloomingfield, NJ)이란 상표명으로 지칭된다. 당업자는 당업자에게 공지된 수 많은 방법을 사용하여 어떠한 RNase 또는 RNase A 분자도 변형시킬 수 있고, 이러한 변형되거나 재조합 RNase 및/또는 RNase A 분자, 또는 그의 천연 발생적 변이체를 효과인자 분자로서 사용하는 것이 본원에 기재된 바와 같은 방법에 사용하기 위해 포괄된다는 것을 인지할 것이다. 몇몇 양태에서, 라나 피피엔스로부터 유래된 리보뉴클레아제를 이용하는, 유럽 특허출원 EP975671; US 특허출원 US6,869,604 (이들 각각이 본원에 참고로 도입된다)에서 면역독소로서 사용하는 데에 있어서 기재된 바 있는 효과인자 분자로서 RNase A를 사용할 수 있다. 기타 양태에서, 라나 카테스베이아나 (Rana catesbeiana) 난모세포로부터 유래된 리보뉴클레아제를 효과인자 분자로서 사용할 수 있다. 라나 카테스베이아나 난모세포 RNAse (RaCOR1)의 아미노산 서열이 1989년 이래로 공지되어 왔지만 [참고: Nitta, R., et al., J. Biochem. 106:729 (1989); Okabe, Y., et al., J. Biochem. 109:786 (1991); Liao, Y, Nucl, Acids Res. 20:1371 (1992); Nitta, K., et al., Glycobiology 3:37 (1993); Liao, Y. & Wang, J., Eur. J. Biochem. 222:215 (1994); Wang, J., et al., Cell Tissue Res. 280:259 (1995); Liao, Y., et al., Protein Expr. Purif. 7:194 (1996); and Inokuchi, N., et al., Biol. Pharm. Bull. 20:471 (1997)], 난모세포 RNAse 및 그의 유전적으로 변형된 변이체를 암호화하는 게놈 DNA 또는 mRNA가 또한 포괄된다.
또 다른 관련 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 RNase는 인간 췌장 RNase의 초분자군, 예를 들어 인간 안지오게닌 또는 그의 단편, 또는 리보뉴클레아제 활성을 지닌 재조합 또는 유전 공학적으로 처리시킨 그의 변이체일 수 있다 [참고: Kurachi et al, 1985; Biochemistry, 24;5494-5499]. 안지오게닌은 또한, 세포 무함유 추출물에서 제노푸스 (Xenopus) 난모세포 내로의 주사시 강력한 단백질 합성 억제제이다. 세포외 안지오게닌은 광범위한 배양 세포에 대해 세포독성이 아니고, 정상적으로 인간 혈장에 존재하므로, 이것이 세포 내에서 재구성하는 것이 분열-생체 분자성 접합체 내의 효과인자 분자로서 이상적인 후보이다. 추가로, 인간 안지오게닌은 IL2와 접합함으로써 면역요법에 사용되어 왔고 [참고: 유럽 특허출원 EP 1217070; 그의 전문이 본원에 참고로 도입된다], 2개의 인간 단백질 또는 그의 단편의 2개 부분으로서 발현되는 것으로 또한 밝혀졌다 [참고: 유럽 특허출원 EP 1217070].
본 발명의 또 다른 양태에서, RNase는 디세르일 수 있다. 디세르 또는 Dcr-1 동족체 [드로소필라 (Drosophila)]는 이중 가닥 RNA (dsRNA) 및 프리-마이크로RNA (miRNA)를, 통상적으로 3' 말단 상에 2개 염기 오버행을 수반하는 약 20 내지 25개 뉴클레오티드 길이의 소형 이중 가닥 RNA 단편 [종종 소형 간섭 RNA (siRNA)로 지칭됨]으로 절단시키는 RNase III 뉴클레아제이다. 디세르는 2개의 RNase 도메인과 1개의 PAZ 도메인을 함유하기 때문에, 효과인자 분자는 디세르의 각 도메인을 포함할 수 있었다. 디세르는 RNA 간섭 경로에서의 제1 단계를 촉매하고 RNA-유도된 억제 복합체 (RISC)의 형성을 개시하는데, 그의 촉매적 성분 아르고나우트 (argonaute)는 메신저 RNA (mRNA) (그의 서열은 siRNA 유도 가닥의 것과 상보적이다)를 분해할 수 있는 엔도뉴클레아제이다.
기타 양태에서, 뉴클레아제는 제한 엔도뉴클레아제, 예를 들어 미생물 유형 II 제한 엔도뉴클레아제이다. 유형 II 제한 엔도뉴클레아제의 예시되는 비제한적 예에는 BamHI; HindIII; MspI; Sau3AI; HinfI; NotI; 및 EcoRI이 포함된다.
기타 효과인자 분자
추가의 양태에서, 효과인자 분자는 단백질 분해적 절단으로 불리우고 효소를 활성화 또는 비활성화시키는 통상적인 기전인 특정 과정에 의해 단백질의 아미노산 간의 펩티드 결합을 붕괴시키는 단백질 분해적 효소, 또는 프로테아제 분자 (프로테이나제, 펩티다제, 또는 단백질 분해적 효소로서 공지되기도 함)일 수 있다. 몇몇 프로테아제는 단백질 분해적 절단을 위해 물 분자를 이용하고 있고, 이는 히드롤라제로서 분류되기도 한다. 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 프로테아제는 당업자에게 널리 공지되어 있고, 이에는 세린 프로테아제; 트레오닌 프로테아제; 시스테인 프로테아제; 아스파르트산 프로테아제 (예: 플라스멥신); 메탈로프로테아제; 글루탐산 프로테아제; 엔도펩티다제 (프로테이나제) 및 엑소펩티다제가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 통상적인 프로테아제는, 예를 들어 카스파제 효소; 칼파인 효소; 카텝신 효소; 엔도프로테아제 효소; 그란자임; 매트릭스 메탈로프로테아제; 펩신; 프로나제; 프로테아제; 프로테이나제; 레닌; 트립신이고, 그의 용도, 또는 그의 천연 발생적 상동체 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체가 본 발명에 사용하기 위해 포괄된다.
또 다른 양태에서, 효과인자 분자는 세포에서 세포 사멸 경로를 유도시킬 수 있는 모든 분자일 수 있다. 이러한 효과인자 분자의 예에는 당해 분야에 널리 공지되어 있는 프로-세포소멸성 분자가 포함되지만, 이에 제한되지 않고, 예를 들어 Hsp90; TNFα; DIABLO; BAX; BID; BIM; Bcl-2의 억제제; Bad; 폴리 ADP 리보스 폴리머라제-1 (PARP-1): 제2 미토콘드리아-유래된 활성인자 또는 카스파제 (SMAC); 세포소멸 유도 인자 (AIF); Fas (Apo-1 또는 CD95로서 공지되기도 함); Fas 리간드 (FasL) 뿐만 아니라 이러한 프로-세포소멸성 분자의 천연 변이체 또는 재조합 또는 유전적으로 변형된 변이체가 본원에 기재된 바와 같은 방법에 의해 효과인자 분자로서 사용하기 위해 포괄된다.
대체 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 효과인자 분자는 세포에서 세포 사멸 경로를 억제할 수 있거나 또는 세포에서 세포 생존 경로를 유도시킬 수 있다. 이러한 분자의 예에는 당업자에게 널리 공지되어 있는 수 많은 항-세포소멸성 분자, 예를 들어 Bcl-2; Bcl-XL; Hsp27; 세포소멸 단백질의 억제제 (IAP)가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 효과인자 분자는 세포를 하나 이상의 이차 작용제에 대해 감작시키는 분자 또는 폴리펩티드일 수 있다. 예를 들어, 효과인자 분자는 티로신 키나제, 예를 들어 β-글루쿠로니다제 활성일 수 있다. β-글루쿠로니다제는 저독성 프로-드럭, 예를 들어 9-아미노캄프토테신을 활성화시키고, p-히드록시 아닐린 머스타드, 또는 유사체, 예를 들어 N-[4-독소루비신-N-카보닐 (옥시메틸) 페닐] O-β-글루쿠로닐 카바메이트 (DOX-GA3)가 독소루비신 (DOX)의 항종양 효과를 개선시키기 위해 개발되었다. 프로-드럭 D0X-GA3은 초기에는, 인간 β-글루쿠로니다제 (GUS)에 의해 활성 분자 또는 약물이 되도록 활성화시켜 종양 부위에 특이적으로 고도의 세포독성 효과를 가져다 주는 것으로 설계되었다. 이러한 프로-드럭의 효력은 항암 전략의 병용 화학요법 및 방사선 요법 (CCRTC)에 적당한 방사성 핵종을 혼입하면 상당히 증강될 수도 있다. 몇몇 양태에서, 상기 프로-드럭은 항암 약물을 효율적으로 전달하기 위하여 리포솜을 변형시키기 위해 활용될 수도 있다 [참고: Chen et al, current medicinal chemistry; 2003 3; 139-150; Chen et al, cancer Gene Ther, 2006].
또 다른 양태에서, 세포를 또 다른 작용제에 감작시키는 효과인자 분자는, 예를 들어 퓨린 유사체인 알로퓨리놀을 그의 인간 상동체 보다 더 큰 효율을 나타내는 상응하는 뉴클레오티드로 전환시킬 수 있으므로, 프로-드럭 알로퓨리놀을 세포독성 대사물이 되도록 활성화시킬 수 있는, 기생충 트리파노소마 브루세이 (Trypanosoma brucei) (Tb)로부터 유래된 히포크산틴-구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제 (HGPRT)이다 [참고: Trudeau et al, 2001; Human Gene Ther; 12:1673-1680]. 또 다른 양태에서, 효과인자 분자는 디니트로벤즈아미드 암 프로-드럭 CB1954 및 프로-항생제 니트로푸라존을 활성화시키는, 슈도모나스 슈도알칼리게네스 (Pseudomonas pseudoalcaligenes) JS45로부터 유래된 세균성 니트로벤젠 니트로리덕타제 (NbzA)일 수 있다 [참고: Berne et al, 2006; Biomacromolecules, 7;2631-6].
또 다른 양태에서, 효과인자 분자는 프로-드럭 데스아세틸빈블라스틴-3-카복실산 히드라지드 (DAVLBHYD) 또는 기타 유사체로부터 활성 작용제 또는 약물을 생성시키는 β-락타마제이다. 이러한 양태에서, 효과인자 단백질로서의 엔테로박터 클로아캐 (Enterobacter cloacae) 베타-락타마제 (bL)는 페닐렌디아민 머스타드 (PDM)의 세팔로스포린 프로-드럭인 항암 프로-드럭 7-(4-카복시부탄아미도)세팔로스포린 머스타드 (CCM)를 활성화시킬 수 있다 [참고: Svensson et al, 1999; J Med Chem., 41:1507-12]. 당해 분야에 공지된 기타 프로-드럭/효소 복합물을 효과인자 분자로서 사용할 수 있고, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 사용하기 위해 포괄되며, 이에는 광선 역학요법시 독성 라디칼을 생성시키는 효소 [참고: wardman et al, 2001; scientific yearbook, 2001-2002]이 포함되고, 예를 들어 퍼옥시다제 유전자를 효과인자 분자로서 사용할 수 있다.
관련 양태에서, 효과인자 분자는 항바이러스 약물, 예를 들어 효과인자 분자로서 카복실에스테라제 HCE1에 대한 이차 작용제로서 작용할 수 있는 항바이러스 약물로서 흔히 사용되고 있는 오셀타미비르 (Oseltamivir)를 촉매하는 분자일 수 있다 [참고: Shi et al, 2006; J Pharmacol Exp Ther].
본 발명의 몇몇 양태에서, 효과인자 분자는 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드 분자의 부가 또는 변형을 개시시킬 수 있다. 비제한적 예로서, 표적이 표적 폴리펩티드인 경우에 유용한 효과인자 분자는 공유적 부착에 의해 하나 이상의 유비퀴틴 단량체를 부가시켜 주고 프로테아솜을 통하여 분해될 표적 폴리펩티드를 태그화시켜 주는 유비퀴틴일 수 있다. 표적이 폴리펩티드인 또 다른 양태의 예에서, 효과인자 분자는 표적 폴리펩티드를 수 많은 효과, 예를 들어 증가된 폴리펩티드 안정성, 세포성 국재 등을 위해 태그화시키는 소형 유비퀴틴 관련 조정제 (SUMO)일 수 있다. 기타 전사 후 사건이 당업자에게 공지되어 있고, 이에는 예를 들어, ISG화; 아세틸화, 알킬화, 메틸화, 바이오티닐화, 글루타밀화, 글리실화; 글리코실화, 이소프레닐화, 리포일화, 포스포판테테이닐화, 시트룰린화; 탈아미드화, 인산화등이 포함되고, 이들 사건을 매개하거나 이에 영향을 미치는 분자가 본원에 기재된 바와 같은 방법에서 효과인자 분자로서 사용될 수 있다.
또 다른 양태에서, 표적인 표적 핵산인 경우에 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 효과인자 분자는 핵산을 변형시킬 수 있고, 예를 들어 화학적 변형에는 메틸화 또는 구조적 변형, 예를 들어 유전자를 억제하고/하거나 표적 핵산의 전사를 방지하기 위한 히스톤의 부가 또는 아세틸화가 포함된다. 한 양태에서, 효과인자 분자는 단백질 상보성에 대한 표적 핵산을 메틸화시킬 DNA 메틸트랜스퍼라제 (DNA MTase), 예를 들어 DNMT1, DNMT2, DNMT3A, DNMT3B 또는 드 노보 (de novo) 메틸트랜스퍼라제 또는 그의 단편일 수 있다. 또 다른 양태에서, 효과인자 분자는 히스톤 아세틸트랜스퍼라제 효소 (HAT), 예를 들어 CREB-결합성 단백질, 또는 그의 변형된 버전 또는 변이체이다.
프로브
몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체의 프로브는 표적 핵산과 결합할 수 있는 모든 분자일 수 있다. 표적 핵산과 결합하는 프로브의 영역은 핵산 결합성 모티프로 지칭된다. 이러한 몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 프로브에는 핵산, 핵산 유사체, 및 폴리펩티드가 포함된다. 한 양태에서, 프로브는 올리고뉴클레오티드이다. 몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체의 한 쌍의 프로브는 동일한 종류의 분자일 수 있는데, 예를 들어 양 프로브는 올리고뉴클레오티드일 수 있거나, 이들 프로브는 상이할 수 있는데, 예를 들어 분열-생체 분자성 폴리펩티드 쌍의 하나의 프로브는 올리고뉴클레오티드 프로브일 수 있고, 상응하는 분열-생체 분자성 폴리펩티드 쌍의 다른 프로브는 폴리펩티드 프로브일 수 있다.
몇몇 양태에서, 프로브는 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드와 아주 근접하여 결합할 수 있는, 또 다른 분자와 커플링할 수 있는 모든 분자일 수 있다. 몇몇 양태에서, 프로브는 핵산 또는 핵산 유사체, 예를 들어 올리고뉴클레오티드일 수 있다. 또 다른 양태에서, 프로브는 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드와 고 친화도로 상호 작용하는 핵산 결합성 폴리펩티드 또는 단백질일 수 있다. 핵산 유사체인 프로브에는, 예를 들어 펩티드 핵산 (PNA), 가성-상보적 PNA (pcPNA), 고정 핵산 (LNA), 모르폴린 DNA, 포스포르티오에이트 DNA, 및 2'-O-메톡시메틸-RNA가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 프로브는 단일 가닥 표적 상의 동일한 혼성화 부위와 결합하여, 표적 핵산을 포함하는 혼성화 부위에서 삼중체를 창출시킬 수 있는데, 2개 프로브가 동일한 부위에서 혼성화된다. 또 다른 한편, 프로브는 단일 가닥 또는 이중 가닥 표적 핵산 상의 아주 인접한 혼성화 부위와 결합하여, 각 혼성화 부위에서 이중체 또는 삼중체를 각각 창출시킬 수 있다.
몇몇 양태에서, 프로브가 핵산인 경우에 핵산 결합성 모티프의 길이는 핵산 표적 또는 폴리펩티드 표적과 상보적 결합을 허용하고, 분열-생체 분자성 접합체 단편 중의 하나가, 양 프로브 부분이 동일한 표적 핵산 또는 표적 폴리핵산과 결합하는 경우에 그의 상응하는 분열-생체 분자성 접합체 단편(들)과 상호 작용하기에 충분한 길이일 수 있다. 예를 들어, 핵산 결합성 부분 프로브는 5 내지 30개 염기 길이이거나 또는 기타 양태에서, 핵산 프로브는 5 내지 15개 염기 길이일 수 있다. 예를 들어, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30 염기일 수 있다. 특정의 대체 양태에서, 프로브는 30개 염기를 초과하는 길이일 수 있다.
삼중체 형성을 제공하는 몇몇 양태에서는, 프로브가 삼중체 형성을 허용해 주는 모든 핵산일 수 있다. 몇몇 양태에서, 삼중체-형성성 올리고뉴클레오티드는 GC-풍부한, 예를 들어 피리미딘-퓨린-퓨린으로 이루어진 퓨린 삼중체이다.
몇몇 양태에서, 핵산 프로브는, 예를 들어 올리고뉴클레오티드; 단일 가닥 RNA 분자; 및 펩티드 핵산 (PNA), 예를 들면 가성-상보적 PNA (pcPNA) 등일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 프로브는 올리고뉴클레오티드이다. 올리고뉴클레오티드를 설계하고 합성하는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 올리고뉴클레오티드는 종종 올리고뉴클레오티드 프라이머로서 지칭된다. 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 올리고뉴클레오티드는 당업자에게 널리 공지되어 있는 확립된 올리고뉴클레오티드 합성 방법을 이용하여 합성할 수 있다. 이러한 방법은 표준 효소적 분해에 이은 뉴클레오티드 단편 분리 [참고: 예를 들어, Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989), Wu et al, Methods in Gene Biotechnology (CRC Press, New York, N. Y., 1997), and Recombinant Gene Expression Protocols, in Methods in Molecular Biology, Vol. 62, (Tuan, ed., Humana Press, Totowa, N. J., 1997); 그의 전문이 본원에 참고로 도입된다]에서부터 순수한 합성 방법, 예를 들어 밀리겐 (Milligen) 또는 베크만 (Beckman) 시스템 1플러스 DNA 합성기 (예를 들어, 모델 8700 자동화 합성기: 공급처: Milligen-Biosearch, Burlington, Mass. 또는 ABI 모델 380B)를 사용하는 시아노에틸 포스포르아미다이트 방법까지 다양할 수 있다. 올리고뉴클레오티드를 제조하는 데에 유용한 합성 방법은 또한, 문헌 [참고: Ikuta et al., Ann. Rev. Biochem. 53:323-356 (1984), (포스포트리에스테르 및 포스파이트-트리에스테르 방법), 및 Narang et al., Methods Enzymol., 65:610-620 (1980), (포스포트리에스테르 방법)]에 기재되어 있다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 올리고뉴클레오티드 프로브 또는 핵산 프로브는 기타 올리고뉴클레오티드 또는 핵산의 특정한 부분과 상보적이 되도록 설계하여 이들 사이에 안정한 하이브리드가 형성될 수 있도록 한다. 이들 하이브리드의 안정성은, 예를 들어 문헌 [참고: Lesnick and Freier, Biochemistry 34:10807-10815 (1995), McGraw et al., Biotechniques 8:674-678 (1990), and Rychlik et al., Nucleic Acids Res. 18:6409-6412 (1990)]에 기재된 바와 같은 공지된 방법을 사용하여 계산할 수 있다.
몇몇 양태에서, 프로브는 단일 가닥 RNA 분자일 수 있고, 이는 당업자에게 널리 공지되어 있는 단일 가닥 RNA 분자 생성 방법을 사용하여 설계 및 합성할 수 있다.
대체 양태에서, 프로브는 핵산 결합성 부분, 예를 들어 펩티드 핵산 (PNA), 예를 들면 가성-상보적 PNA (pcPNA)일 수 있다. PNA 및 pcPNA를 설계하고 합성하는 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 펩티드 핵산 (PNA)은 주쇄가 당이 아니라 가성펩티드인 DNA의 유사체이다. 따라서, 그들의 거동은 DNA를 모방하고 상보적 핵산 가닥과 결합한다. 펩티드 핵산에서, 올리고뉴클레오티드의 데옥시리보스 포스페이트 주쇄를 당 포스포디에스테르 보다 펩티드와 더 유사한 주쇄로 대체시켰다. 각 소단위체는 이러한 주쇄에 부착된 천연 발생적 또는 비천연 발생적 염기를 갖고 있는데, 예를 들어 주쇄는 아미드 결합을 통하여 연결된 N-(2-아미노에틸)글리신의 반복 단위로 구축될 수 있다.
PNA는 DNA와 RNA 둘 다와 결합하여 PNA/DNA 또는 PNA/RNA 이중체를 형성하고, 이는 상응하는 DNA/DNA 또는 DNA/RNA 이중체 보다 더 큰 친화도 및 더 증가된 특이성으로 결합한다. 또한, PNA의 폴리아미드 주쇄 (적당한 뉴클레오염기 또는 기타 측쇄기가 부착되어 있다)는 뉴클레아제 또는 프로테아제에 의해 인식되지 않으므로, PNA는 DNA 및 펩티드와는 달리, 효소에 의한 분해에 대해 저항성이다. PNA 가닥이 DNA 또는 RNA 가닥과 결합하는 것은 평행 배향 또는 역평행 배향으로 일어날 수 있다. PNA는 단일 가닥 DNA와 이중 가닥 DNA 둘 다와 결합한다.
몇몇 양태에서, PNA 분자의 변이물인 가성-상보적 PNA (pcPNA)를 사용할 수 있는데, 이에는 구아닌 및 시토신 이외에도, 아데닌 및 티민 대신 2,6-디아미노퓨린 (D) 및 2-티오우라실을 각각 수반하는 pcPNA가 포함된다. pcPNA는 가성-상보성의 개념이 보충된 왓슨-크릭 (Watson-Crick) 인식 원리를 근거로 한, 별개의 결합 방식, 이중체-이중체 침입을 나타낸다. pcPNA는 그의 천연 A, T, (U), 또는 G, C 대응물을 인식하고 이와 결합한다. pcPNA는 당해 분야에 공지된 모든 방법에 따라서 만들 수 있다. 예를 들어, PNA를 화학적으로 어셈블리하는 방법이 널리 공지되어 있다 [참고: 미국 특허 제5,539,082호, 제5,527,675호, 제5,623,049호, 제5,714,331호, 제5,736,336호, 제5,773,571호 또는 제5,786,571호; 그들 각각의 전문이 본원에 참고로 도입된다].
몇몇 양태에서, 프로브는 본원에서 "폴리펩티드 탐지인자 단백질"로서 지칭되는 폴리펩티드일 수 있다. 몇몇 양태에서, 폴리펩티드 탐지인자 단백질은 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대한 고 친화도를 나타내는 모든 폴리펩티드일 수 있다. 몇몇 양태에서, 표적 핵산은 이중 가닥, 삼중 가닥, 또는 단일 가닥 DNA 또는 RNA일 수 있다. 몇몇 양태에서, 폴리펩티드 프로브는 100개 아미노산 미만의 펩티드, 또는 완전한 길이의 단백질 또는 단백질 단편이다. 몇몇 양태에서, 표적 핵산에 대한 폴리펩티드의 친화도는 저 나노몰 내지 고 피코몰 범위일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 폴리펩티드에는 천연이거나 합리적 또는 스크리닝 접근 방식에 의해 설계된 아연 핑거를 함유하는 폴리펩티드가 포함된다. 아연 핑커의 예에는 Zif 2g8, Sp1, Gfi-1의 핑거 5, YY1의 핑거 3, CF2II의 핑거 4 및 6, 및 TTK의 핑거 2가 포함된다 [참고: PNAS (2000) 97: 1495-1500; J Biol Chem (20010 276 (21): 29466-78; Nucl Acids Res (2001) 29 (24):4920-9; Nucl Acid Res (2001) 29(11): 2427-36]. 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 기타 폴리펩티드에는 특이적 핵산 서열과 결합하는, 시험관내 선별에 의해 수득된 폴리펩티드, 예를 들어 앱타머, 예를 들면 혈소판 유래 성장 인자 (PDGF) [참고: Nat Biotech (2002) 20:473-77] 및 트롬빈 [참고: Nature(1992) 355: 564-6]의 앱타머가 포함된다. 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 기타 폴리펩티드에는 시험관 내에서 DNA 삼중체와 결합하는 폴리펩티드, 예를 들어 이종-핵 리보핵산 입자 (hnRNP) 단백질의 구성원, 예를 들면 hnRNP K, L, E1, A2/B1 및 I가 포함된다 [참고: Nucl Acids Res (2001) 29(11): 2427-36].
몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체 단편이 프로브로서 폴리펩티드를 포함하는 경우, 전체 분열-폴리펩티드 단편 및 프로브는 폴리펩티드 효과인자 단백질 단편을 암호화하는 핵산, 링커 서열 및 핵산 결합성 부분 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 탐지인자 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 단일 핵산 구조물에 의해 암호화될 수 있다. 몇몇 양태에서, 폴리펩티드 탐지인자 단백질은 세포 중에 있거나 세포 내로 미소주사된다. 몇몇 양태에서, 상기 구조물은 관심있는 핵산을 시험관내 탐지하기 위해 사용할 수도 있다.
프로브가 폴리펩티드 탐지인자 단백질인 몇몇 양태에서, 이러한 폴리펩티드 탐지인자 단백질은 2개 이상의 단편으로 분열될 수 있는데, 각 단편은 효과인자 단백질의 2개 이상의 단편과 접합되고, 탐지인자 폴리펩티드 단편을 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드와 결합시키면 탐지인자 단백질과 활성 효과인자 단백질이 재구성된다. 예를 들어, 폴리펩티드 프로브는 2개의 별개의 성분, 예를 들어 eIF-4A로 분열시킨 핵산 결합성 분자 또는 다수의 도메인 (예를 들어, 아연 핑거 모티프)을 함유하는 탐지인자 단백질일 수 있었다 [참고: 특허출원 제60/730,746호; 그의 전문이 본원에 참고로 도입된다]. 탐지인자 폴리펩티드 프로브가 다중-도메인 폴리펩티드 탐지인자 단백질인 몇몇 양태에서, 각 도메인은 효과인자 단백질의 2개 이상의 단편과 접합될 수 있고, 탐지인자 단백질의 도메인이 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드와 결합하면, 탐지인자 단백질과 활성 효과인자 단백질이 재구성된다.
표적 핵산 및 표적 폴리펩티드
본 발명의 한 국면은 각 단편이 프로브와 접합되는 분열 효과인자 분자를 포함하는, 본원에 기재된 바와 같은 분열-생체 분자성 접합체에 의한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 인식이다. 한 양태에서, 프로브는 표적 핵산을 인식하고, 또 다른 양태에서는, 프로브가 표적 폴리펩티드를 인식한다.
몇몇 양태에서, 표적 핵산은 DNA 또는 RNA이다. 몇몇 양태에서, 표적 핵산은 병리학적 핵산 (DNA 또는 RNA) 또는 병리상태 유발성 핵산이고, 예를 들어 병리학적 핵산은 질병, 장애 또는 악성 종양에 실질적으로 일조하는 핵산이다. 이에는 예를 들어, 유전자에서의 돌연변이 및/또는 다형성을 암호화하는 핵산 서열; 유전자와 작동적으로 연결된 조절성 서열; 또는 유전자의 5' 또는 3' 비해독 영역 (UTR)이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 병리학적 핵산은 부분적 또는 전적으로, 질병, 장애 또는 악성 종양에 일조하는 유전자 생성물, 예를 들어 구성적으로 (즉, 영구적으로) 발현되는 유전자, 예를 들어 표피 성장 인자 수용체 (EGFR), 혈소판 유래 성장 인자 수용체 (PDGFR), 및 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR) 및 HER2/neu와 같은 활성물을 발현하는 핵산 서열이다. 유전자 생성물은 돌연변이체 또는 정상 폴리펩티드일 수 있다.
몇몇 양태에서, 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드는 악성 세포에서 발현되는 유전자 또는 유전자 생성물이다. 예시 예로서, 표적 핵산은 몇 가지 체 조직 내의 세포 및 뇨에서 발현되고 상피암 세포, 특히 난소, 위, 결장직장 및 췌장암 세포에서 발현되는 것으로 공지되어 있는 인간 유지방구의 성분인 다형성 상피 점액소 (PEM)를 암호화하는 핵산이다. 이러한 양태에서, 표적 핵산은 다형성 상피 점액소 (PEM)를 암호화하는 핵산 서열이고/이거나 표적 폴리펩티드는 PEM의 항원 또는 PEM의 세포독성 부분이다. 몇몇 양태에서, 프로브는 WO0174905 (본원에 참고로 도입된다)에 기재된 바와 같이, 면역독소에 의해 표적화되는 것과 유사한 PEM을 표적으로 한다. 몇몇 양태에서, 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드는 종양형성 유전자 또는 종양형성성 분자 또는 종양형성 유전자 또는 수용체 키나제 신호 전달 분자일 수 있다. 몇몇 양태에서, 표적 핵산은 혈관형성 (angiogenesis) 단백질, 예를 들어 혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 또는 VEGF-1 또는 그의 상동체를 암호화한다.
몇몇 양태에서, 병리학적 핵산은 병원성 DNA 또는 RNA, 예를 들어 바이러스성 게놈 서열, 예를 들면 A형 간염, B형 간염, C형 간염, 인플루엔지아, 바리셀라, 아데노바이러스, HSV-1, HSV-II, 우역 리노바이러스, 에크노바이러스, 레트로바이러스, 로타바이러스, 호흡기 합포체 바이러스, 유두종 바이러스, 파포바 바이러스, 시토메갈로바이러스, 에키노바이러스, 아보바이러스, 한타바이러스, 콕사키 바이러스, 유행성 이하선염 바이러스, 홍역 바이러스, 풍진 바이러스, 폴리오 바이러스, HIV-I, HIV-II, SARS, 조류 및/또는 새 플루 바이러스 및 기타 바이러스로부터 유래된 바이러스성 게놈 서열, 또는 그의 변이체이지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 병리학적 폴리펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 분열-생체 분자성 접합체에 대한 표적인데, 이러한 폴리펩티드는 부분적 또는 전적으로, 질병, 장애 또는 악성 종양의 증상에 일조한다. 몇몇 양태에서, 병리학적 폴리펩티드는 기능이상 또는 비정상적 발현으로 인한 질병의 증상에 일조하는 모든 단백질이다. 예를 들어, 병원성 폴리펩티드는 돌연변이되고/되거나 폴딩되지 않고/않거나 비정상적인 입체 형태이고/이거나, 부정확한 세포하 국제이고/이거나 부적당한 세포 및 조직 유형에서 발현되거나 기타 단백질과의 연합이 부적절하거나 결여된 단백질일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 단지 예시 예로서, 병원성 폴리펩티드는 암과 같은 질병의 증상에 일조하는 단백질일 수 있고, 예를 들어 이러한 병원성 폴리펩티드는 EGF 및 VEGF와 같은 혈관형성 단백질일 수 있거나, 또는 신경변성 질병에 일조하는 단백질, 예를 들어 알츠하이머병에서의 β-아밀로이드; 근위축성 측삭 경화증에서의 돌연변이체 SOD1 등일 수 있다.
몇몇 양태에서, 병리학적 폴리펩티드는 병원체의 표면 상에 발현된 폴리펩티드, 예를 들어 비제한적 예로서, 바이러스 입자의 캡시드 또는 외피 단백질의 일부를 형성하는 폴리펩티드, HIV 바이러스 입자 상에 발현된 gp40, 또는 암 세포, 바이러스 또는 감염성 입자 상에 발현된 기타 표면 마커일 수 있다.
생체 분자성 접합체의 용도
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 생체 분자성 접합체를 사용하여 세포 사멸을 촉발시킬 수 있다. 이러한 양태에서, 분열 생체 분자성 접합체는 "세포 사멸 분열 생체 분자성 접합체"로서 지칭되고, 활성이 되도록 보완되는 경우에 세포 사멸을 활성화시킬 수 있는 분열 효과인자 분자를 포함한다. 예를 들어, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편은 둘 이상의 프로브와 각각 접합되는 2개 이상의 폴리펩티드 단편을 포함하고, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편을 합하여, 세포에서 세포 사멸 경로를 개시시킬 수 있는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시킨다. 이러한 양태에서, 효과인자 분자는 독소, 세포독성 분자, 뉴클레아제, 단백질 분해적 효소, 프로-세포소멸성 분자, 또는 상기 언급된 바와 같이, 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드를 변형시키는 모든 분자일 수 있다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 세포 사멸 분열 생체 분자성 접합체의 용도는 암을 치료하는 데에 유용한데, 세포 사멸 분열 생체 분자성 접합체의 프로브는 암과 같은 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 서열 또는 표적 폴리펩티드를 인식한다. 예를 들어, 세포 사멸 분열 생체 분자성 접합체의 프로브는 상기 논의된 바와 같이, HER2/Her-2, BRAC1 및 BRAC2, Rb, p53 등을 인식할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 암, 또는 질병 또는 장애 또는 악성 종양은 전체로서 신체에 대한 그의 효과 및 해당 조직 중의 정상적 또는 비정상적 세포를 불충분하게 제어하거나 제어하지 못한 조작을 특징으로 하는 포유류 내의 기관 또는 조직의 모든 질병일 수 있다. 몇몇 양태에서, 암은 양성 신생물, 형성이상, 과형성 뿐만 아니라 예를 들어, 암의 급속한 만연 보다 종종 먼저 진행되는 백색판증과 같은 기타 모든 형질전환 또는 전이성 성장을 나타내는 신생물을 포함한다. 세포 및 조직은 이들이 정상 세포 보다 더 신속하게 성장하여 주변의 건강한 조직 또는 신체의 기타 조직으로 전위 또는 확산되며 (이는 전이성 성장으로서 기재됨), 비정상적인 외형과 크기를 나타내는 것으로 추정되며, 그들의 핵-세포질 비, 핵 다염성 상의 변화를 나타내며, 최종적으로 멈출 수 있는 경우에 암성이다. 암성 세포 및 조직은 종양연관성 증후군을 유발시키는 경우 또는 암이 생명 유지에 필요한 기관 또는 조직 내에서 발생하고, 정상적인 기능이 손상되거나 중단되어 가능한 치명적 결과를 가져다 주는 경우에 전체로서 신체에 영향을 미칠 수 있다. 몇몇 경우에, 생명 유지에 필요한 기관의 기능이 암 또는 암 세포에 의해 손상되는 경우, 원발성 또는 전이성 암은 이러한 영향을 받은 대상체 또는 포유류를 사망시킬 수 있다. 악성 암은 확산되는 경향이 있고 치료하지 않을 경우에는 사망을 초래할 수 있는 암이다. 양성 종양은 통상적으로 사망에 이르게 하지는 않지만, 그의 국재, 크기 또는 종양연관성 부작용을 통하여 정상적신 신체 기능을 방해하는 경우에는 사망시킬 수도 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "암"은 단순 양성 신생물을 지칭할 뿐만 아니라 1) 암종, 2) 육종, 3) 암육종, 4) 혈액-형성성 조직의 암, 5) 뇌를 포함한 신경 조직의 종양, 6) 피부 세포의 암과 같은 기타 모든 양성 및 악성 신생물을 포함한다. 암종에 따르는 암은 외체 (피부) 및 선 점막 및 기관 (예: 유방, 폐, 호흡기 및 위장관)의 내부 공동 구조, 및 내분비선 및 비뇨 생식계를 포괄하는 상피 조직에서 발생한다. 관상 또는 선상 요소는, 예를 들어 갑상선 선암종, 위 선암종, 자궁 선암종 등의 선암종에서와 같이, 상피 종양에 존속할 수 있다. 피부 및 특정 점막의 포장 (pavement)-세포 상피 암, 예를 들어 혀, 입술, 후두, 뇨 방광, 자궁경부 또는 페니스의 암은 각각의 조직의 표피양 또는 편평 세포 암종으로 명명될 수 있고, 또한 암의 정의 범위 내에 있다. 육종인 암은 섬유 조직, 지방 조직, 근육, 혈관, 뼈 및 연골을 포함한 결합 조직에서 발생하는데, 예를 들면 골원성 육종; 지방육종, 섬유육종, 활막 육종이다. 암육종인 암은 상피 조직과 결합 조직 둘 다에서 발생하는 암이다. 본 정의의 범위 내에 있는 암 질병은 원발성 또는 이차일 수 있는데, 원발성은 전이를 통하여 또 다른 병변으로부터의 이차 부위로서 확립된 것이 아니라, 암이 발견된 조직에서 암이 시작되었다는 것을 나타낸다.
본 정의의 범위 내에 있는 암 및 종양 질병은 양성 또는 악성일 수 있고, 포유류 신체의 모든 해부학적 구조물에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들자면, 암은 (I) 골수 및 골수 유래 세포의 암 및 종양 질병 (백혈병), (II) 내분비 및 외분비선, 예를 들어 갑상선, 부갑상선, 뇌하수체, 부신, 타액선, 췌장의 암 및 종양 질병, (III) 유방의 암 및 종양 질병, 예를 들어 숫컷 또는 암컷의 유선 내의 양성 또는 악성 종양, 유관 선암종, 수질성 암종, 면포 암종, 유두의 파제트병 (Paget's disease), 젊은 여성의 염증성 암종, (IV) 폐의 암 및 종양 질병, (V) 위의 암 및 종양 질병, (VI) 간 및 비장의 암 및 종양 질병, (VII) 소장의 암 및 종양 질병, (VIII) 결장의 암 및 종양 질병, (IX) 뼈 및 그의 지지 및 결합 조직의 암 및 종양 질병, 예를 들어 악성 또는 양성 골 종양, 예를 들면 악성 골원성 육종, 양성 골종, 연골 종양; 예를 들어, 악성 연골육종 또는 양성 연골종; 골수 종양, 예를 들어 악성 골수종 또는 양성 호산구 육아종 뿐만 아니라 신체의 기타 부위에 있는 뼈 조직으로부터의 전이성 종양; X) 입, 인후, 후두 및 식도의 암 및 종양 질병, XI) 뇨 방광 및 숫컷 및 암컷의 비뇨 생식계의 내부 및 외부 기관 및 구조물, 예를 들어 난소, 자궁, 자궁경부, 고환 및 전립선의 암 및 종양 질병, XII) 전립선의 암 및 종양 질병, XIII) 췌장의 암 및 종양 질병, 예를 들어 췌장의 관상 암종; XIV) 림프계 조직의 암 및 종양 질병, 예를 들어 림프종 및 림프계 기관의 기타 종양, XV) 피부의 암 및 종양 질병, XVI) 흉곽 근육 및 내층을 포함한 호흡기 및 호흡계에 속하는 모든 해부학적 구조물의 암 및 종양 질병, XVII) 림프정의 원발성 또는 이차 암, XVIII) 혀, 및 경구개 (단단한 입천장) 또는 동의 골 조직의 암 및 종양 질병, XVIV) 입, 볼, 목 및 타액선의 암 및 종양 질병, XX) 심장 및 그의 내층을 포함한 혈관의 암 및 종양 질병, XXI) 평활근 또는 골격근 및 그의 인대 및 내층의 암 및 종양 질병, XXII) 말초, 자가, 중추 신경계 (소뇌 포함)의 암 및 종양 질병, XXIII) 지방세포 조직의 암 및 종양 질병을 포함할 수 있다.
몇몇 특정 양태에서, 암은 림프종; 백혈병; 육종; 선종이다. 몇몇 양태에서, 암은 급성 림프아구성 백혈병 (ALL)이다.
본 발명의 또 다른 국면은 병원체 감염증을 치료하기 위한 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도에 관한 것이다. 몇몇 양태에서, 방법은 병원체 감염된 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하는데, 이러한 세포 사멸 분열-효과인자 분자의 프로브는 특정 병원체로 감염된 세포 내에 존재하는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드를 특이적으로 인식하고, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편을 합하면, 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자가 형성된다.
몇몇 양태에서, 병원체 감염증을 치료하는 데에 유용한 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체는 이러한 병원체에 대해 특이적인 표적 핵산 서열 및/또는 표적 폴리펩티드, 예를 들어 바이러스 외피 단백질 또는 바이러스 게놈 DNA를 인식하는 프로브를 포함한다.
몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체는 병원체, 예를 들어 잠재적으로 감염증 및 감염성 질병을 유발시키는 병원체를 치료하는 데에 유용하다. 피부 및 하부 조직의 감염증은 병원체로 인한 것이고, 이에는 예를 들어, 연조직염, 괴사성 근막염, 피부 괴저, 림프절병, 급성 림프관염, 농가진, 피부 농양, 모낭염, 부스럼 (종기), 얕은 연조직염, 큰 종기 (종기 및 피부 농양의 군집), 스타필로코쿠스성 (staphylococcal) 열상 피부 증후군, 홍색음성 또는 손발톱주위염 (이는 많은 세균 및 진균에 의해 유발될 수 있다)이 포함된다. 이들 대부분은 세균성 감염증이다. 대부분의 세균성 피부 감염증은 스타필로코쿠스 (Staphylococcus) 및 스트렙토코쿠스 (Streptococcus)에 의해 유발된다. 진균에 의해 유발된 피부 감염증은 몇 가지 상이한 진균에 의해 유발되고 신체 상에서의 그의 위치에 의해 일반적으로 분류되는 진균성 피부 감염증인 버짐 (ringworm)이다. 그의 예는 무좀 (Athlete's foot) [트리코피톤 (Trichophyton) 또는 에피더모피톤 (Epidermophyton)에 의해 야기된 발 버짐], 기수소양증 (jock itch) (각종 진균 및 효모에 의해 유발될 수 있는 서혜부 버짐), 두피 버짐 [트리코피톤 또는 마이크로스포룸 (Microsporum)에 의해 유발됨], 발톱 버짐 및 체부 버짐 (트리코키톤에 의해 유발됨)이다. 칸디다증 (Candidiasis) [효모 감염증, 모닐리아증 (moniliasis)]은 효모 칸디다 (Candida)에 의한 감염증이다. 다음 유형의 칸디다 감염증이 두드러질 수 있다: 피부주름 상의 감염증 [간찰성 (intertriginous) 감염증], 질 및 음경 칸디다 감염증 (외음부질염), 아구창, 구각미란증 (Perleche) (입의 오목한 곳에서의 칸디다 감염증), 칸디다성 손발톱주위염 (손발톱 바닥에서 성장하여, 고통스러운 종창과 고름을 생성시키는 칸디다). 칸디다는 특히 면역기능저하 숙주에게서 전신성 감염증을 유발시킬 수도 있다. 전풍 (Tinea versicolor)은 피부 상에 백색 내지 연갈색 패치를 유발시키는 진균성 감염증이다. 피부는 기생충, 주로 작은 곤충이나 벌레에 의해 영향을 받을 수도 있다. 그 예는 옴 (scabies) (진드기 감염증), 이 (lice) 침습 [이감염증, 머릿니 및 모슬 (pubic lice)은 두 가지 상이한 종이다), 또는 이행 발진 (피부 유충 이행증, 구충 감염증)이다. 많은 유형의 바이러스가 피부를 공격한다. 그 예는 유두종바이러스 (사마귀를 유발시킨다), 단순 포진 바이러스 (예를 들어, 단순 포진을 유발시킨다), 또는 폭스바이러스 계열의 구성원 [전염 물렁증 (피부 착색된 매끄러운 왁스상 범프를 유발시키는 피부 감염증)을 유발시킨다]이다.
몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체는 세균과 같은 병원체를 치료하는 데에 유용하다. 세균혈증은 세균이 혈류에 존재하는 것을 지칭하고, 제거하기에 너무 많은 세균이 존재하면 쉽게 패혈증이 발생하여 심각한 증상을 초래한다. 몇몇 경우에, 패혈증은 패혈성 쇽으로 지칭되는 생명을 위협하는 상태를 유발시킨다. 바실루스 (Bacillus)는 그들의 독특한 간상 외형에 따라서 분류되는 세균 유형이다. 세균은 외형이 구상 (구균), 간상 (세균성), 또는 나선 (스피로헤타: spirochetal)이다. 그램-양성 또는 그램-음성 바실루스가 두드러진다. 그램-양성 세균성 감염증의 예는 에리시펠로트리코시스 (erysipelothricosis) [돼지 단독균 (Erysipelothrix rhusiopathiae)에 의해 유발됨], 리스테리아증 (listeriosis) [리스테리아 모노시토게네스 (Listeria monocytogenes)에 의해 유발됨], 및 탄저병 (anthrax) [바실루스 안트라시스 (Bacillus anthracis)에 의해 유발됨]이다. 탄저병 중에서, 폐 탄저병, 위장 탄저병 및 탄저병 피부 포진이 두드러질 수 있다. 그램-음성 세균성 감염증의 예는 헤모필루스 (Hemophilus) 감염증, 헤모필루스 인플루엔자 감염증, 헤모필루스 두크레이이 (Hemophilus ducreyi) (무른 궤양을 유발시킨다), 브루셀라증 (Brucellosis) [브루셀라 세균에 의해 유발된, 파상열, 말타 (Malta) 열, 지중해 열 또는 지브롤터 (Gibraltar) 열], 야토병 [프란시셀라 툴라렌시스 (Francisella tularensis)에 의해 유발된, 토끼열, 야토병 열], 페스트 [예르시니아 페스티스 (Yersinia pestis)에 의해 유발된 흑사병, 림프절형 페스트, 폐렴형 페스트, 패혈성 페스트 및 양성 페스트 (pestis minor)가 두드러진다], 고양이 찰상병 [세균 바르토넬라 헨셀래 (Bartonella henselae)에 의해 유발됨], 슈도모나스 (Pseudomonas) 감염증 [특히, 슈도모나스 애루기노사 (Pseudomonas aeruginosa) 감염증], 캄필로박터 (Campylobacter) 세균 (예를 들어, 캄필로박터 로리 (Campylobacter wlori) [헬리코박터 피롤리: Helicobacter pylori])에 의해 유발된 위장관 또는 혈액 감염증, 콜레라 [비브리오 콜레래 (Vibrio cholerae)에 의해 유발된 소장 감염증], 기타 비브리오종에 의한 감염증, 엔테로박테리아세애 (Enterobacteriaceae) 감염증 [예를 들어, 위장관 감염증을 유발시키고, 해당 군의 구성원은 살모넬라 (Salmonella), 시겔라 (Shigella), 에스케리챠 (Escherichia), 클렙시엘라 (Klebsiella), 엔테로박터 (Enterobacter), 세라티아 (Serratia), 프로테우스 (Proteus), 모르가넬라 (Morganella), 프로비덴시아 (Providencia), 및 에르시니아 (Yersinia)이다], 클렙셀라 폐렴 감염증 (중증의 폐 감염증), 장티푸스 [살모넬라 티피 (Salmonella typhi)에 의해 유발됨], 비-장티푸스성 살모넬라 감염증, 또는 이질 (시겔라 세균에 의해 유발된 장관 감염증인 세균성 이질)이다. 구상 외형을 지닌 세균은 구균 (coccus)으로 불리운다. 인간에게서 감염증을 유발시킬 수 있는 구균에는 스타필로코쿠스, 스트렙토코쿠스 (A군 스트렙토코쿠스, B군 스트렙토코쿠스, C 및 G군 스트렙토코쿠스, D군 스트렙토코쿠스 및 엔테로코쿠스), 폐렴구균 (pneumococcus) [예를 들어, 폐렴, 흉부 농양, 세균성 수막염, 세균혈증, 폐렴구균성 심내막염, 복막염, 폐렴구균성 관절염 또는 중이염을 유발시킨다], 및 수막구균 (meningococcus)이 포함된다. 독성 쇽 증후군은 통상적으로 스타필로코쿠스에 의해 유발된 감염증으로, 이는 신속하게 악화되어 중증의 난치성 쇽을 유발시킬 수 있다.
몇몇 양태에서, 병원체 수막구균 [네이세리아 메닝기티디스 (Neisseria meningitidis)]은 뇌와 척수를 덮고 있는 층의 감염증 (수막염)을 유발시킬 수 있다. 네이세리아 고노로에애 (Neisseria gonorrhoeae)는 성행위 전염병인 임질을 유발시킨다. 스피로헤타 감염증은 스피로헤타, 코르크따개 모양 세균에 의한 감염증이다. 그의 예에는 트레포네마 (Treponema), 보렐리아 (Borrelia), 렙토스피라 (Leptospira), 및 스피릴룸 (Spirillum)에 의한 감염증이 포함된다. 트레포네마병 (Treponematosis) [예: 매종, 열대 백반성 피부염 (pinta)]은 트레포네마 팔리둠 (Treponema pallidum) (매독을 유발시킨다)과 구별할 수 없는 스피로헤타에 의해 유발된다. 재발성 열 (진드기열, 회귀열 또는 기근열)은 보렐리아 세균의 몇 가지 균주에 의해 유발된 질병이다.
또 다른 양태에서, 병원체는 라임병일 수 있고 (이는 사슴 진드기에 의해 전파됨), 스피로헤타 보렐리아 부르그도르페리 (Borrelia burgdorferi)에 의해 유발된다. 스피로헤타에 의해 감염증의 기타 예는 렙토스피라병 (Leptospirosis) [웨일 (Weil) 증후군, 감염성 (스피로헤타) 황달 및 카니콜라열 (canicola fever), 또는 쥐벼룩 열을 포함한 일군의 감염증]이다.
질병을 유발시키는 혐기성 세균에는 클로스트리디아 (Clostridia), 펩토코쿠스 (peptococcus), 및 펩토스트렙토코쿠스 (peptostreptococcus)가 포함된다. 기타 예는 박테로이데스 프라길리스 (Bacteroides fragilis), 프레보텔라 멜라니노게니카 (Prevotella melaninogenica) 및 푸소박테륨 (Fusobacterium)이다. 혐기성 세균에 의한 감염증에는 치아 농양, 턱뼈 감염증, 치주 질환, 만성 부비동염 및 중이 감염증, 및 뇌, 척수, 폐, 복강, 간, 자궁, 생식기, 피부 및 혈관 내의 농양이 포함된다. 클로스트리아성 감염증의 예는 파상풍 [세균 클로스트리듐 테타니 (Clostridium tetani)에 의해 유발된 게구불능 (lockjaw)], 또는 방선균증 (Actinomycosis) [주로 악티노마이세스 이스라엘리 (Actinomyces israelii)에 의해 유발된 만성 감염증]이다.
또 다른 양태에서, 병원체는 특히 공기 중의 부유 병원체 미코박테륨 투베르쿨로시스 (Mycobacterium tuberculosis), 엠. 보비스 (M. bovis), 또는 엠. 아프리카눔 (M. africanum)에 의해 결핵 및 나병을 유발시키는 미코박테리아일 수 있다. 나병 (한센병)은 세균 미코박테륨 레프래 (Mycobacterium leprae)에 의해 유발된다. 리케치아 (Rickettsial) 감염증이 또한 공지되어 있다. 리케치애 (Rickettsiae) 또는 에를리히에애 (Ehrlichieae)에 의해 유발된 질병의 예는 발진열 [리케치아 티피 (Rickettsia typhi)에 의해 유발됨], 록키산 홍반열 [리케치아 리케치이 (Rickettsia rickettsii)에 의해 유발됨], 발진티푸스 [리케치아 프로와제키이 (Rickettsia prowazekii)에 의해 유발됨], 쓰쓰가무시병 (scrub typhus) [리케치아 쓰쓰가무시 (Rickettsia tsutsugamushi)에 의해 유발됨], 에를리히병 (Ehrlichiosis) [에를리히아 칸트스 (Ehrlichia cants) 또는 밀접하게 관련된 종에 의해 유발됨], 리케치아-폭스 (Rickettsial-pox) [리케치아 아카리 (Rickettsia akari)에 의해 유발됨], Q 발열 [콕시엘라 부르네티이 (Coxiella burnetii)에 의해 유발됨], 또는 참호열 [바르토넬라 퀸타나 (Bartonella quintana)에 의해 유발됨]이다.
기타 양태에서, 병원체는 통상적으로 훨씬 더 큰 또 다른 유기체 내부에서 생활함으로써 생존하는 기생충, 예를 들어 단세포 동물 (원생동물) 또는 벌레일 수 있다. 기생충 감염증의 예는 아메바증 [엔타모에바 히스토리티카 (Entamoeba histolytica)에 의해 유발됨], 편모충증 [기아르디아 람블리아 (Giardia lamblia)에 의해 유발됨], 말라리아 [플라스모듐 (Plasmodium)에 의해 유발됨], 독성 플라시모시스 (Toxoplasmosis) [톡소플라스마 곤디이 (Toxoplasma gondii)에 의해 유발됨], 바베스열원충증 (Babesiosis) [바베시아 (Babesia) 기생충에 의해 유발됨], 편충증 [장관 회충인 트리쿠리스 트리키우라 (Trichuris trichiura)에 의해 유발됨], 회충증 [아스카리스 룸브리코이데스 (Ascaris lumbricoides)에 의해 유발됨], 구충 감염증 [안실로스토마 두오데날레 (Ancylostoma duodenale) 또는 네카토르 아메리카누스 (Necator americanus)에 의해 유발됨], 선모충증 [트리키넬라 스피랄리스 (Trichinella spiralis)에 의해 유발됨], 개회충증 [회충 유충, 예를 들면 톡소카라 칸츠 (Toxocara cants) 및 톡소카라 캣 (Toxocara cat)에 의한 기관 침입에 의해 유발된 내장 유충 이행증], 유구조충 (Pork tapeworm) 감염증 [태니아 솔륨 (Taenia solium)에 의해 유발됨], 또는 어조충 (Fish tapeworm) 감염증 [디필로보트륨 라툼 (Diphyllobothrium latum)에 의해 유발됨]이다.
또 다른 양태에서, 병원체는 진균일 수 있다. 진균은 기능저하된 면역계를 지닌 사람에게서 감염증을 유발시키는 경향이 있다. 진균 감염증의 예는 히스토플라스마증 (Histoplasmosis) [히스토플라스마 캅술라툼 (Histoplasma capsulatum)에 의해 유발됨], 콕시디오이데스진균증 (Coccidioidomycosis) [콕시디오이데스 임미티스 (Coccidioides immitis)에 의해 유발됨], 블라스토마이세스병 (Blastomycosis) [블라스토마이세스 데르마티티디스 (Blastomyces dermatitidis)에 의해 유발됨], 칸디다증 [칸디다 균주, 특히 칸디다 알비칸스 (Candida albicans)에 의해 유발됨] 또는 스포로트리쿰증 (Sporotrichosis) [스포로트릭스 쉔키이 (Sporothrix schenckii)에 의해 유발됨]이다.
또 다른 양태에서, 병원체는 바이러스일 수 있다. 바이러스 감염증의 비제한적 예는 다음과 같다: 호흡기 바이러스 감염증, 예를 들어 감기 [피코르나바이러스 (예: 리노바이러스), 인플루엔자 바이러스 또는 호흡기 합포체 바이러스에 의해 유발됨], 인플루엔자 (인플루엔자 A 또는 인플루엔자 B 바이러스에 의해 유발됨), 포진바이러스 감염증 [단순 포진, 대상 포진, 엡슈타인-바르 바이러스, 시토메갈로바이러스, 포진바이러스 6, 인간 포진바이러스 7, 또는 포진바이러스 8 (AIDS에 걸린 사람에게서 카포시 (Kaposi) 육종을 유발시킨다)에 의해 유발됨], 중추 신경계 바이러스 감염증 [예: 광견병, 크로이츠펠트-야코브병 (Creutzfeldt- Jakob disease) (아급성 해면상 뇌병증), 진행성 다초첨성 백질뇌증 (JC 바이러스에 의해 유발된 뇌에서의 폴리오마바이러스 감염증의 드문 증상), 열대성 경직성 하반신부전마비 (HTLV-I), 아르보바이러스 감염증 (예: 아르보바이러스 뇌염, 황열 또는 뎅그열), 아레나바이러스 감염증 (예: 림프구성 맥락수막염), 출혈성 열 (예: 볼리비아 및 아르헨티나 출혈성 열 및 라사 열, 한타바이러스 감염증, 에볼라 및 마르부르크 바이러스].
통상적인 바이러스의 한 가지 예는 인간 면역결핍증 바이러스 (HIV) 감염증인데, 이는 HIV-I 또는 HIV-II 바이러스에 의해 유발되어, 진행성 림프구 파괴를 가져다 주는 감염증이다. 이로써, 후천성 면역결핍증 (AIDS)이 유발된다. 기타 바이러스에는, 예를 들어 A형 간염, B형 간염, C형 간염, SARS, 조류 플루 등이 포함된다.
기타 병원체 바이러스에는 성행위 전염병 (성병), 예를 들어 매독 (트레포네마 팔리둠에 의해 유발됨), 임질 (네이세리아 고노로에애에 의해 유발됨), 에하네로이드 (ehaneroid) (헤모필루스 두크레이이에 의해 유발됨), 성병성 림프육아종 [클라미디아 트라코마티스 (Chlamydia trachomatis)에 의해 유발됨], 서혜부 육아종 [칼리마토박테륨 그라눌로마티스 (Calymmatobaeterium granulomatis)에 의해 유발됨], 비임균성 요도염 및 클라미디아성 자궁경부염 [클라미디아 트라코마티스, 우레아플라스마 우레아리티쿰 (Ureaplasma urealyticum), 트리코모나스 바기날리스 (Trichomonas vaginalis) 또는 단순 포진 바이러스에 의해 유발됨], 트리코모나스증 (trichomoniasis) (트리코모나스 바기날리스에 의해 유발됨), 생식기 칸디다증, 생식기 포진, 생식기 사마귀 (유두종바이러스에 의해 유발됨), 또는 HIV 감염증이 포함된다.
또 다른 양태에서, 병원체는 종종 면역계 손상된 사람을 감염시키는 기회성 병원체에 의한 감염증일 수 있는데, 예를 들어 노카르디아증 [노카르디아 아스테로이데스 (Nocardia asteroides)에 의해 유발됨], 아스페르길루스증 (aspergillosis), 털곰팡이증, 및 시토메갈로바이러스 감염증이지만, 이에 제한되지 않는다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 세포 사멸 분열 생체 분자성 접합체는 종양 세포 또는 바이러스 감염된 세포 이외의 세포를 치료하는 데에 사용할 수 있다. 예를 들어 몇몇 양태에서, 세포독성 효과인자 분자를 수반하는 분열-생체 분자성 접합체는, 그 자신에 대항하여 유도된 항체를 분비하는 세포 (예: B 세포)를 특이적으로 표적으로 할 수 있다. 몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 생체 분자성 접합체는 자가면역 질환 또는 자가면역 관련 질환, 예를 들어 하시모토 (Hashimoto) 갑상선염; 악성 빈혈; 애디송병 (Addison's disease); 유형 I 당뇨병; 류마티스성 관절염; 전신성 홍반성 루푸스; 피부근염; 쇼그렌 (Sjogren) 증후군; 홍반성 루프스; 다발성 경화증; 중증 근무력증; 라이터 (Reiter) 증후군; 및 그레이브스병 (Grave's disease) 등을 치료하는 데에 유용하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "자가면역 질환" 또는 자가면역 관련 질환은 신체 조직이 자신의 면역계에 의해 공격당하는 경우에 발생하는 질병을 지칭한다. 면역계는 정상적으로, 감염체를 포함한 신체 침입자를 "탐색하여 붕괴시키"도록 설계되는 체내의 복잡한 구성이다. 자가면역 질환 환자는 종종, 자신의 체 조직을 표적으로 하여 자신의 혈액 내에서 순환하고 있는 이상한 항체를 갖고 있다. 자가면역 질환의 예에는 전신성 홍반성 루푸스, 쇼그렌 증후군, 하시모토 갑상선염, 류마티스성 관절염, 유년성 (유형 1) 당뇨병, 다발성근염, 피부 경화증, 애디송병, 백반증, 악성 빈혈, 사구체신염, 다발성 경화증, 및 폐 섬유증이 포함된다.
또 다른 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 세포가 이차 작용제에 감작될 수 있게 하여, 이차 작용제가 감작되는 세포에만 특이적으로 영향을 미치도록 할 수 있다. 전형적으로, 이차 작용제는 표적화된 세포의 세포 사멸을 촉발시키는 화학적 또는 물리적 실체 또는 작용제이다. 이러한 양태에서, "감작성 분열-생체 분자성 접합체"는 세포를 기타 이차 작용제에 감작시킬 수 있는 표적 핵산 서열 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성하기 위해 리어셈블리되는 분열-효과인자 분자를 포함한다. 몇몇 양태에서, 효과인자 분자의 예에는, 예를 들어 상기 논의된 바와 같은 β-글루쿠로니다제 효소; 히포크산틴-구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제, β-락타마제 효소 및 카복실에스테라제 HCE1이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 이러한 분열-생체 분자성 접합체는 본원에서 "감작성 분열-생체 분자성 접합체"로서 지칭되고, 몇몇 양태에서 이는 표적 핵산 서열 또는 표적 폴리펩티드가 암 또는 병원체 감염증의 증상에 각각 일조하는 암 및/또는 병원체 감염증을 치료하는 데에 유용하다.
또 다른 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 생체 분자성 접합체를 사용하여 표적 핵산 서열 및/또는 표적 폴리펩티드의 분해 또는 파괴를 촉발시킴으로써, 세포를 사멸시키거나 또는 병원성 표적 핵산 및/또는 폴리펩티드를 세포로부터 제거할 수 있다. 이러한 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체는 "분해성 분열-생체 분자성 접합체"로서 지칭되고, 표적 핵산 또는 폴리펩티드의 존재 하의 활성 효과인자 입체 배치 하에서, 뉴클레아제 또는 프로테아제로서 기능하거나 또는 세포 중의 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 핵산 분해 또는 단백질 분해를 촉발시키는 분열-효과인자 분자를 포함한다. 이러한 양태에서, 효과인자 분자는, 예를 들어 뉴클레아제; 프로테아제 및 유비퀴티나제일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 분해성 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 암 (본원에 기재된 바와 같음) 및 병원체 감염증 (본원에 기재된 바와 같음) 및 병원성 핵산 또는 병원성 펩티드의 존재로 인한 기타 질병 및 장애를 치료할 수 있다.
몇몇 양태에서, 질병, 장애 또는 악성 종양은 특정 증상이 부분적 또는 전적으로, 병리학적 핵산 서열 또는 병리학적 폴리펩티드에 의해 유발되는 모든 질병, 장애 또는 악성 종양을 지칭한다. 예를 들어, 신경계에 영향을 미치는 신경 질병, 호흡기 질병, 심혈관계 장애, 간 장애; 염증성 질병; 췌장 질병, 소화 기관 질병, 신 질병, 피부 질병, 폐 질병 등이 있다.
몇몇 양태에서, 신경 질병 및 신경변성 질병은, 예를 들어 뇌경색, 뇌혈관 사고, 파킨슨병, 알츠하이머병, 헌팅톤 무도병, 척수 손상, 우울증, 조울 정신증, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 및 기타 신경변성 질병 등이지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 호흡 기관계 질병에는 만성 폐쇄성 폐 질환, 폐기종, 기관지염, 천식, 간질성 폐렴, 폐 섬유증 등이 포함된다.
몇몇 양태에서, 심혈관 장애는, 예를 들어 폐쇄성 혈관 질병, 심근 경색, 심부전증, 관상 동맥 질병 등이지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에 사용된 바와 같은 "심혈관계 질환, 질병 또는 장애"는 불충분하거나, 바람직하지 못하거나 또는 비정상적인 심장 기능을 특징으로 하는 모든 장애를 포함하는데, 예를 들어 허혈성 심장 질병, 고혈압성 심장 질병 및 폐 고혈압성 심장 질병, 판막 질병, 선천성 심장 질병 및 대상체, 특히 인간 대상체에게서 선천성 심부전증을 유발시키는 모든 질환이다. 불충분하거나 비정상적인 심장 기능은 질병, 손상 및/또는 노화의 결과일 수 있다. 몇몇 양태에서, 간 질병에는 B형 간염, C형 간염, 알코올성 간염, 간경변, 간부전증 등이 포함되고, 췌장 질병에는 당뇨병, 췌장염 등이 포함된다. 소화 기관계 질병에는 크론병 (Crohn disease), 궤양성 결장염 등이 포함된다. 신 질병에는 IgA 사구체신염, 사구체신염, 신부전증 등이 포함되고, 피부 질병에는 욕창, 화상, 봉합 상처, 열상, 절개 상처, 물린 상처, 피부염, 켈로이드성 흉터, 켈로이드, 당뇨병성 궤양, 동맥성 궤양, 정맥성 궤양 등이 포함된다. 폐 질병에는 폐기종, 만성 기관지염, 만성 폐쇄성 폐 질병, 낭포성 섬유증, 특발성 간질성 폐렴 (폐 섬유증), 확산성 폐 섬유증, 결핵, 천식 등이 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 염증성 질병은 체 조직의 염증을 유발시키고 연속해서 급성 또는 만성 염증성 질환을 유발시키는 면역계 또는 조직의 세포성 또는 비-세포성 매개인자에 의해 촉발된 질병을 지칭한다. 이러한 염증성 질병의 예에는 유형 I 내지 IV의 과민 반응, 예를 들어 천식을 포함한 폐의 과민증, 아토피성 질병, 알레르기성 비염 또는 결막염, 입술의 혈관부종, 유전성 혈관부종, 항수용체 과민 반응 및 자가면역 질환, 하시모토 갑상선염, 전신성 홍반성 루푸스, 구드패스츄어 (Goodpasture) 증후군, 천포창, 중증 근무력증, 그레이브스 및 레이노이드 (Reynaud) 병, 유형 B 인슐린-저항성 당뇨병, 류마티스성 관절염, 건선, 크론병, 피부 경화증, 혼합 결체 조직 질병, 다발성 근염, 사르코이드증 (sarcoidosis), 사구체신염, 급성 또는 만성 숙주 대 이식편 반응이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
또 다른 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 세포의 생존을 촉발시켜, 예를 들어 세포 사멸 경로를 억제시키고/시키거나 세포 생존 경로를 활성화시킬 수 있다. 이러한 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체는 "생존 분열-생체 분자성 접합체"로서 지칭되고, 세포에서 세포 생존 경로를 개시시키거나 또는 세포 사멸을 억제할 수 있는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 분열-효과인자 분자를 포함할 수 있다. 몇몇 양태에서, 효과인자 분자는, 예를 들어 항세포소멸성 분자, 예를 들면 bcl-2, hsp70, hsp27, IAP 단백질 등일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 이러한 양태에서, 생존 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여, 병원성 핵산 또는 병원성 펩티드의 존재로 인해서와 같이 세포의 선택적 상실을 가져다 주는 병원체 감염증을 포함한 질병 및 장애를 치료할 수 있다. 예를 들어, 이러한 질병에는 모든 퇴행성 질병, 예를 들어 신경변성 질병, 예를 들어 파킨슨병, 알츠하이머병, 헌팅톤 무도병, 척수 손상, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 및 근육 장애, 예를 들어 근육퇴행 위축 등이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
또 다른 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 세포에서 기능이상 폴리펩티드 또는 발현 상실 또는 저하를 선택적으로 대체시킬 수 있는데, 효과인자 분자가 대체 폴리펩티드로서 기능한다. 이러한 양태에서, 이러한 분열-생체 분자성 접합체는 "프록시 분열-생체 분자성 접합체"로서 지칭되고, 세포에서 기능이상 또는 상실된 폴리펩티드를 대체시킬 수 있는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 대체 폴리펩티드를 형성하기 위해 리어셈블리되는 분열-효과인자 분자를 포함할 수 있다. 몇몇 양태에서, 프록시 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여, 질병 증상이 해당 질병 또는 장애의 발병 기전에 일조하는 기능이상 또는 돌연변이된 폴리펩티드의 발현, 또는 폴리펩티드의 상실 또는 발현 저하에 기인하는 모든 질병 또는 장애를 치료할 수 있다. 이러한 질병의 예에는 기능 상실 질병, 예를 들어 단백질 다이스페를린 (dysferlin)이 상실된 근육퇴행 위축, 낭포성 섬유증 등이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 몇몇 양태에서, 질병은, 예를 들어 질병에 대한 유전적 소인의 결과일 수 있거나 또는 후천성 질병일 수 있다.
몇몇 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 선택적 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 표적 핵산 또는 폴리펩티드를 분해시키는 효과 또는 신규 폴리펩티드의 특징을 평가하거나, 또는 세포를 선택적으로 사멸시키거나 세포를 생존시키는 방법에 관한 것이다. 몇몇 양태에서, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체 및/또는 생존 분열-생체 분자성 접합체를 사용하여 각각, 선택적 세포를 사멸시키거나 이러한 세포의 생존을 증진시킬 수 있다. 몇몇 양태에서, 상기 방법은 원하지 않는 유형의 세포를 선택적으로 사멸시킴으로써, 예를 들어 방사선에 의한 골수 절제가 진행되고 있는 환자에게 골수를 이식하기에 앞서 선택된 세포를 선택적으로 사멸시키거나 세포 집단에서 생존시킴으로써 시험관 내에서 세포 분리를 위해 사용할 수 있다.
상기 모든 양태에서, 치료하고자 하는 대상체는 포유류, 예를 들어 인간 및 비-인간 포유류 및 일반적인 동물, 예를 들어 포유류, 비-인간 동물, 예를 들면 농장 동물 (이에는 소, 말, 염소, 양, 돼지, 당나귀 등이 포함되지만, 그에 제한되지 않는다), 애완용 동물, 예를 들어 고양이, 개, 설치류 (이에는 토끼, 마우스, 햄스터 등이 포함되지만, 그에 제한되지 않는다); 조류 및 가금류 및 기타 가축 및 가금이다.
분열-생체 분자성 접합체의 생성 방법 및 효과인자 분자의 표적-매개된 단백질 상보성의 평가 방법
본 발명의 또 다른 국면은 본원에 기재된 바와 같은 분열-생체 분자성 접합체의 생성에 관한 것이다. 몇몇 양태에서, 방법은 효과인자 분자의 단백질 구조를 평가하고, 효과인자 분자를 분열시키기에 적당한 부위를 결정하는 것을 포함한다. 방법은 단백질 단편을 발현시키고, 접합된 프로브의 존재 및 부재하에, 추가로 표적 폴리펩티드 또는 표적 핵산 서열의 존재 및 부재 하에 그들의 상보성 능력을 평가하는 것을 추가로 포함한다.
(i) 효과인자 폴리펩티드 내의 분열 부위의 위치 설계
최적의 분열은 구조적 입체 형태를 평가하고 대체 분열점을 평가함으로써 결정할 수 있다. 몇몇 양태에서, 자발적 리어셈블리를 발생시키지 않는 상보적 분열-효과인자 단편을 달성시키거나, 또는 특히 표적 핵산 서열 또는 표적 폴리펩티드를 인식하는 부착된 프로브에 의해 매개되는 경우에 활성 효과인자 단백질을 형성하기 위해 효율적으로 리어셈블리될 수 있는 2개의 분열-효과인자 단편을 수득하기 위해서는 몇 가지 클로닝 시도가 요구될 수 있다.
특히, 효과인자 폴리펩티드 내의 분열 부위를 설계하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 방법을 또한 사용하여, 폴리펩티드 프로브 단백질 내의 분열 부위를 확인하여 분열-폴리펩티드 프로브의 상보적 파트너로서 사용될 수 있는 단편을 생성시킬 수 있다.
몇몇 양태에서, 효과인자 단백질을 2개 이상의 분열-효과인자 단백질 단편으로 분열시키는 것을 초기에 시험하기 위한 3개의 분열점을 선택하는 데에 있어서 다음 기준을 따를 수 있다: 1) 분열점은 2개의 단백질 절반 간의 활성-중요한 아미노산을 분리시켜야 하고; 2) 분열점은 (분열 단백질 절반에 최소한의 구조적 장애를 도입하기 위해) 비구조적 영역 내에 위치해야 하며; 3) 분열 단백질 절반은 완전한 길이의 효과인자 분자 (예: RTA) 내의 조밀한 폴딩 단위에 상응한다.
몇몇 양태에서, 추가의 기준을 적용할 수 있는데, 예를 들면 분열 효과인자 단백질의 단편은 단백질이 응집되기 쉽도록 만드는 큰 소수성 표면을 가지지 말아야 한다. 단백질의 표면 소수성을 확인하기 위한 방법은 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들어 단백질 용해도 예측 소프트웨어 (예: http://www.biotech.ou.edu)를 사용한다.
특히, 봉입체를 형성하는 상보적 분열-효과인자 단백질 단편의 가능성으로 인해, 효과인자 분자 내의 다수의 상이한 분열 부위, 예를 들어 단일 효과인자 분자 내의 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 이상 또는 10개 초과의 상이한 분열 부위를 시험하는 것이 중요하다. 상보적 분열-효과인자 단백질 단편의 각 조합물을 대상으로 하여 봉입체의 최소한의 형성을 수반하는 발현 효율에 관하여 시험한 다음, 본원에 기재된 바와 같은 표적의 존재 또는 부재 하에 단백질 상보성 효율에 관하여 시험해야 한다.
(ii) 봉입체의 형성을 최소화하면서 분열-효과인자 단백질 단편을 발현시킴
분열-생체 분자성 접합체, 또는 분열-효과인자 단편의 생성은 당업자에게 흔히 공지된 시험관내 발현 시스템을 사용하여 수행할 수 있다. 발현된 효과인자 단편의 적당한 단백질 리폴딩은 이들이 기능적 활성 효과인자 단백질을 형성하기 위해 리어셈블리할 수 있게 하는 데에 중요하다. 몇몇 양태에서, 이러한 발현 시스템에는 봉입체의 생성을 제한하는 시스템, 예를 들어 EP1516928 및 US20050130259, 및 WO0039310 (이들 각각이 본원에 참고로 도입된다)에 기재된 바와 같은 방법이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 세포 무함유 유전자/단백질 발현
분열-효과인자 단백질 단편의 세포 무함유 발현
몇몇 양태에서, 세포 무함유 유전자 발현은 분열-효과인자 생체 분자성 접합체를 발현시키는 데에 유용하다. 몇몇 양태에서, 분열-효과인자 단백질을 암호화하는 핵산은 RNA 폴리머라제, 예를 들어 T7 RNA 폴리머라제에 의해 시험관 내에서 전사시킨 다음, 예를 들어 이. 콜라이로부터 수득된 세포성 용해물을 사용하여 RNA를 후속 해독시킨다. 세포 무함유 단백질 발현 시스템, 예를 들어 신속한 해독 시스템 (RTS)이 당업자에게 흔히 공지되어 있고, 예를 들어 다음 공급처 (Roche Applied Science1 또는 Novagen2)로부터 커플링된 전사/해독 키트로서 시판중이다. 몇몇 양태에서, 이러한 키트를 사용하면 모든 필수적 조절성 요소 (프로모터, 종결인자 등) 및 후속 정제를 위한 태그 서열을 함유하는 PCR-생성된 선형 DNA 주형으로부터 수 시간 내에 마이크로그램 내지 밀리그램의 목적 단백질을 생성시킬 수 있다.
이러한 방법을 사용하여, 분열-효과인자 단백질 단편, 예를 들어 분열-RTA 단편을 최소한의 생체내 클로닝으로 신속하고도 재빠르게 수득할 수 있으므로, 각종 분열점에 상응하는 일정 범위의 RTA 단편을 보다 용이하게 수득할 수 있다.
또 다른 한편, 몇몇 양태에서 세포 무함유 유전자 발현 시스템은 본원에 기재된 바와 같은 분열-효과인자 단백질 단편을 생성시켜 가용성 형태의 단백질을 생성시키는 데에 유용하다. 이러한 시스템은 RTS 반응 챔버 내부의 감소된 거대분자 무리가 유익하고 정확한 단백질 폴딩을 증진시키므로, 부정확하게 폴딩된 불용성 봉입체의 형성이 감소되기 때문에 유용하다.
몇몇 양태에서, 세포 무함유 발현된 분열-효과인자 단백질 단편의 용해도가 여전히 낮은 경우에는, 용해도를 증강시키는 첨가제를 용이하게 포함시킬 수 있고/있거나 특정의 용해도-증진성 융합 태그, 예를 들어 MBP, Trx 또는 Nus 서열을 중복 연장 PCR에 의해 발현된 불용성 단백질에 가하여 상기 단백질(들)을 가용성으로 만들 수 있다. 몇몇 양태에서, 시험관내 발현 효율을 저하시키는 치밀한 mRNA 구조 가능성 뿐만 아니라 용해도 태그가 분열 단백질 독소의 적당한 리어셈블리를 간섭할 수 있기 때문에, 세포 무함유 발현을 이용하는 경우에 몇 가지 잠재적 문제점이 발생할 수 있었다. 따라서, 분열-효과인자 단백질 단편을 효과적으로 발현시키기 위해, 다수의 세포 무함유 발현 시스템 뿐만 아니라 세균성 및 곤충 발현 시스템을 활용할 수 있다.
2) 분열-효과인자 단백질 단편의 세포에 의거한 유전자 발현
몇몇 양태에서, 효과인자 단편을 시험관내 발현 시스템에서 발현시킬 수 있고, 이를 세포의 가용성 세포 분획 내로 분비시키고 세포를 둘러싸고 있는 배지 또는 상등액으로부터 수거할 수 있다.
몇몇 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 방법에 유용한 분열-효과인자 단백질 단편을 발현시키기 위한 한 가지 방법은 세포로부터 과발현된 단백질을 배출시킴으로써 세포내 봉입체의 형성을 최소화시키는 특이적 세균성 숙주 균주, 예를 들어 이. 콜라이 균주를 사용하는 것이다. 몇몇 양태에서, 숙주 세균성 세포, 예를 들어 이. 콜라이 세포는 세포내 단백질을 배양 배지 내로 분비시켜 정확한 단백질 폴딩이 진행되는 것을 촉진시켜 주는 박테리오신 방출 단백질 (BRP)3을 생성시킨다. 따라서, 이러한 발현 시스템을 사용하는 것이 부정확하게 폴딩된 불용성 봉입체의 형성 가능성을 최소화하면서 분열-효과인자 단백질 단편을 발현시키는 데에 유용하다.
추가의 양태에서, 본 발명은 분열-효과인자 단편의 단백질 상보성에 의해 활성 효과인자 단백질의 형성을 평가하는 것에 관한 것이다. 예를 들어, 발현된 분열-효과인자 단백질 단편을 프로브와 접합시킬 수 있고, 표적의 부재 하에 자발적으로 단백질 보완시키는 단편을 확인하기 위해 효과인자 단백질의 기능을 평가한다. 접합된 프로브에 대한 표적의 부재 하에 자발적으로 보완되는 상기 분열-효과인자 단편는 버릴 수 있는데, 이는 이것이 표적의 부재 하에서 분열-생체 분자성 접합체의 비특이적 단백질 상보성을 나타내기 때문이다.
상보성 분열-효과인자 단편의 리어셈블리가 자발적으로 발생하는 경우, 즉 표적 핵산 서열 또는 표적 폴리펩티드의 부재 하에서도 발생하는 경우에는, 자가-어셈블리를 방지시키기는 하지만 2개의 단편이 단백질 상보성에 의해 연합될 때 효과인자 단백질의 기능이나 활성을 변경시키지 않는 돌연변이를 도입하도록 효과인자 단편을 변형시킬 수 있다. 효과인자 단백질 활성에 대한 도입된 변형 또는 돌연변이의 효과를 본래의 효과인자 분자 (즉, 2개의 상보성 단편으로 분열되지 않은 효과인자 분자)의 활성과 비교할 수 있다.
표적의 부재 하에서 자발적으로 단백질을 보완시키지 않는 단백질 및 분열-효과인자 단백질 단편을 추가의 분석을 위해 선별할 수 있다. 이러한 분열-효과인자 단백질 단편을 추가로 분석하여 표적 분자, 예를 들어 분열-효과인자 단백질 단편과 접합되는 프로브에 대한 핵산 표적 또는 단백질 표적의 존재 하에서만 보완되는 분열-효과인자 단백질 단편을 확인할 수 있다.
(iii) 분열-효과인자 단백질 단편의 표적-매개된 단백질 상보성의 평가
상기 논의된 바와 같이, 프로브의 존재 및 부재 하에서 2개의 상보적 분열-효과인자 단백질 단편의 단백질 상보성 효율을 평가한다. 몇몇 양태에서, 분열-생체 분자성 단백질 접합체 단편의 형성은 분열-효과인자 단백질 단편을 프로브, 예를 들어 핵산 프로브 또는 폴리펩티드 프로브와 접합시킴으로써 일어날 수 있다.
접합 방법: 각종 접합 방법을 사용할 수 있다
용어 "접합체" 또는 "접합된"이란 2가지 이상의 실체를 연결시키는 것을 지칭한다. 이러한 연결은 둘 이상의 폴리펩티드의 융합, 또는 공유, 이온 또는 소수성 상호 작용이므로, 특정 분자의 부분들이 함께 묶여 서로 근접하게 유지될 수 있다. 실체들의 부착은 링커, 화학적 변형, 펩티드 링커, 화학적 링커, 공유 또는 비공유적 결합 또는 단백질 융합, 또는 당업자에게 공지된 모든 수단에 의해 이루어질 수 있다. 상기 연결은 영구적이거나 가역적일 수 있다. 몇몇 양태에서, 접합체 내의 각 단백질 및 각 링커의 목적하는 특성을 활용하기 위하여 몇 가지 링커가 포함될 수 있다. 가요성 링커 및 접합체의 용해도를 증가시키는 링커가 단독으로 사용되거나 본원에 언급된 바와 같은 기타 링커와 함께 사용되는 것이 고려된다. 펩티드 링커는 접합체 내의 하나 이상의 단백질에 대한 링커를 암호화하는 DNA를 발현시킴으로써 연결시킬 수 있다. 링커는 산 절단성, 광 절단성 및 열 민감성 링커일 수 있다.
부착은 링커, 화학적 변형, 펩티드 링커, 화학적 링커, 공유 또는 비공유적 결합 또는 단백질 융합, 또는 당업자에게 공지된 모든 수단에 의해 이루어질 수 있다. 연결은 영구적이거나 가역적일 수 있다. 몇몇 양태에서, 접합체 내의 각 단백질 및 각 링커의 목적하는 특성을 활용하기 위하여 몇 가지 링커가 포함될 수 있다. 가요성 링커 및 접합체의 용해도를 증가시키는 링커가 단독으로 사용되거나 본원에 기재된 바와 같은 기타 링커와 함께 사용되는 것이 고려된다. 펩티드 링커는 접합체 내의 하나 이상의 단백질에 대한 링커를 암호화하는 DNA를 발현시킴으로써 연결시킬 수 있다. 링커는 산 절단성, 광 절단성 및 열 민감성 링커일 수 있다. 접합 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있고 본 발명에 사용하기 위해 포괄된다.
본 발명에 따르면, 분열-효과인자 단백질 단편은 당해 분야에 공지된 바와 같은 적합한 모든 수단을 통하여 프로브에 연결시킬 수 있다 [참고: 예를 들어, 미국 특허 제4,625,014호, 제5,057,301호 및 제5,514,363호 (그의 전문이 본원에 참고로 도입된다)]. 예를 들어, 분열-효과인자 단백질 단편은 직접적으로 또는 하나 이상의 링커를 통하여 프로브와 공유적으로 접합시킬 수 있다. 한 양태에서, 본 발명의 분열-효과인자 단백질 단편은 프로브와 직접 접합시킨다. 또 다른 양태에서, 본 발명의 분열-효과인자 단백질 단편은 링커, 예를 들어 수송 증강성 링커를 통하여 프로브와 접합시킨다.
분열-효과인자 단백질 단편을 프로브와 접합시키기 위한 광범위한 방법이 당해 분야에 공지되어 있다. 이러한 방법은, 예를 들어 문헌 [참고: Hermanson (1996, Bioconjugate Techniques, Academic Press), 미국 특허 제6,180,084호 및 제6,264,914호; 그의 전문이 본원에 참고로 도입된다]에 기재되어 있고, 이에는 응용 면역학에 통상적으로 사용된 바와 같이 합텐을 캐리어 단백질에 연결시키기 위해 사용되어 온 방법이 포함된다 [참고: Harlow and Lane, 1988, "Antibodies: A laboratory manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY]. 몇몇 경우에는, 예를 들어 활용된 화학기 또는 접합 과정에 따라서 분열-효과인자 단백질 단편이 접합시 효능 또는 기능성을 상실할 수 있다는 것을 인식해야 한다. 그러나, 각종 접합 방법이 제공되면, 당업자는 접합시키고자 하는 실체의 효능이나 기능성에 전혀 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미치는 접합 방법을 발견할 수 있다.
분열-효과인자 단백질 단편을 프로브와 접합시키는 데에 적합한 방법에는, 예를 들어 카보디이미드 접합 방법이 포함된다 [참고: Bauminger and Wilchek, 1980, Meth. Enzymol. 70: 151-159]. 또 다른 한편, 특정 부분을 다음 문헌에 기재된 바와 같이 표적화 작용제와 커플링시킬 수 있다 [참고: Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:7269-7273 (1996), and Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:1794-1799 (1998); 이들 각각의 전문이 본원에 참고로 도입된다]. 또 다른 접합 방법은, 예를 들어 나트륨 퍼요오데이트 산화에 이어 적당한 반응물의 환원적 알킬화 및 글루타르알데히드 가교 결합을 이용할 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 분열-효과인자 단백질 단편을 프로브 (예: 핵산 프로브)와 접합시키기 위한 각종 상이한 링커, 예를 들어 아미노카프로성 서양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP) 또는 이종-이관능성 가교 결합제, 예를 들면 카보닐 반응성 및 설프히드릴-반응성 가교 결합제를 사용할 수 있다. 이종-이관능성 가교 결합성 시약은 통상적으로, 2 또는 3-단계 공정으로 단백질 및 기타 거대분자 상의 2개의 상이한 기능 표적과 커플링할 수 있는 2개의 반응성 기를 함유하는데, 이러한 공정은 동종-이관능성 가교 결합제의 사용과 종종 연관되는 중합도를 제한할 수 있다. 이러한 다단계 프로토콜은 접합체 크기와 성분들의 몰 비를 상당히 제어할 수 있다.
용어 "링커"는 2가지 이상의 실체를 연결시키기 위한, 예를 들어 펩티드를 또 다른 펩티드, 또는 리포솜과 연결시키기 위한 모든 수단을 지칭한다. 링커는 공유 링커 또는 비공유 링커일 수 있다. 공유 링커의 예에는 공유 결합, 또는 연결될 하나 이상의 단백질에 공유적으로 부착된 링커 부분이 포함된다. 링커는 비공유 결합, 예를 들어 금속 중심 (예: 백금 원자)을 통한 유기 금속성 결합일 수도 있다. 공유 연쇄의 경우, 각종 관능기, 예를 들어 아미드기 (카본산 유도체 포함), 에테르, 에스테르 (유기 및 무기 에스테르 포함), 아미노, 우레탄, 우레아 등을 사용할 수 있다. 연결을 제공하기 위해, 효과인자 분자 및/또는 프로브를 산화, 히드록시화, 치환, 환원 등에 의해 변형시켜 커플링 부위를 제공할 수 있다. 분열-효과인자 단백질 단편 및/또는 프로브의 기능을 상당히 저하시키지 않는 변형이 바람직하다는 것을 인지해야 할 것이다.
대상체에게서 병원성 표적 핵산 또는 폴리펩티드를 스크리닝하는 방법
몇몇 양태에서, 본 발명은 대상체에게, 분열-탐지인자 분자를 포함하는 분열 생체 분자성 접합체의 제약 조성물의 유효량을 투여하는데, 각각의 분열-탐지인자 폴리펩티드 단편은 질병 또는 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 2개의 프로브 중의 하나 이상과 접합되는 단계; 활성 탐지인자 분자를 형성시키는데, 이러한 활성 탐지인자 분자의 형성이 질병 또는 장애와 연관되는 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드와 2개 이상의 프로브와의 결합에 의해 촉진되는 단계; 및 활성 탐지인자 분자의 수준을 측정하는데, 이러한 활성 탐지인자 분자의 수준이 대상체에게서 표적 핵산 또는 병원성 폴리펩티드의 측정치인 단계를 포함하는, 대상체에게서 병원성 표적 핵산 또는 병원성 폴리펩티드의 수준을 측정하는 방법을 제공한다.
몇몇 양태에서, 탐지인자 폴리펩티드는 β-락타마제; DFHR; 루시퍼라제; 형광성 단백질 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함하는 군 중에서 선택된다.
몇몇 양태에서, 활성 탐지인자 분자의 수준을 사용하여, 예를 들어 제1 시점에서 본원에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 병원성 표적 핵산 또는 병원성 폴리펩티드의 수준을 측정하고, 제1 시점으로부터의 수준을, 제2 시점에서의 병원성 표적 핵산 또는 병원성 폴리펩티드의 수준과 비교함으로써, 대상체에게서 병원성 표적 핵산 또는 병원성 폴리펩티드의 수준을 결정할 수 있다. 이러한 양태는 특정 치료, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 방법에 의해 분열-생체 분자성 접합체를 이용하는 대상체 치료의 유효성을 결정하는 데에 유용하다. 따라서, 몇몇 양태에서 대상체에게 효과인자 분자를 포함하는 분열-생체 분자성 접합체와 탐지인자 분자를 포함하는 분열-생체 분자성 접합체 둘 다를 투여할 수 있다. 몇몇 양태에서, 효과인자 분자를 포함하는 분열-생체 분자성 접합체는 탐지인자 분자를 포함하는 분열-생체 분자성 접합체와 동시에 투여할 수 있거나, 또는 대체 양태에서 이들을 어떠한 순서 및 어떠한 횟수로도 순차적으로 투여할 수 있다.
몇몇 양태에서, 탐지인자 분자는 형광성 단백질, 예를 들어 그린 형광성 단백질 (GFP), 증강된 그린 형광성 단백질 (EGFP), 그린-형광성-유사 단백질; 옐로우 형광성 단백질 (YFP), 증강된 옐로우 형광성 단백질 (EYFP), 블루 형광성 단백질 (BFP), 증강된 블루 형광성 단백질 (EBFP), 시안 형광성 단백질 (CFP), 증강된 시안 형광성 단백질 (ECFP) 또는 레드 형광성 단백질 (dsRED)인데, 재구성된 형광성 단백질 내의 단편 중의 하나는 성숙 실행된 발색단을 함유하고 있다. 형광을 발하는 형광성 단백질을 생성시킬 상기 언급된 형광성 단백질 및 그의 단편 모두가 본 발명에 사용하기 위해 포괄된다. 또한, 당업자에게 공지된 형광성 단백질, 및 그의 단편 및 유전 공학적으로 처리시킨 단백질이 포괄된다.
몇몇 양태에서, 활성 탐지인자 단백질, 예를 들어 활성 형광성 단백질의 존재는 유동 세포계수법, 형광 판 판독기, 형광계, 현미경, 형광 공명 에너지 전이 (FRET), 육안으로, 또는 당업자에게 공지된 기타 방법에 의해 탐지 가능하다. 대체 양태에서, 형광은 형광 활성화 세포 분류기 (FACS) 또는 경시적 현미경검사법을 이용하여 유동 세포계수법에 의해 탐지한다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 탐지인자 분자는 분열-탐지인자 단백질 단편이 서로 근접하여 연합되어 어셈블리된 활성 효소를 형성하는 경우에, 효소 활성 검정을 이용하여 탐지할 수 있는 효소이다. 바람직하게, 효소 활성은 발색 또는 형광발생 반응에 의해 탐지된다. 한 가지 바람직한 양태에서, 효소는 디히드로폴레이트 리덕타제 (DHFR) 또는 β-락타마제이다.
또 다른 양태에서, 효소는 디히드로폴레이트 리덕타제 (DHFR)이다. 예를 들어, 마이크닉 (Michnick) 등은 어떠한 효소 활성도 단독으로는 결여되지만, 서로 근접한 경우에는 기능성 효소를 형성하는, DHFR의 N- 및 C-말단 단편으로 이루어진 "단백질 상보성 검정"을 개발하였다 [참고: 미국 특허 제6,428,951호, 제6,294,330호 및 제6,270,964호 (본원에 참고로 도입된다)]. 발색 및 형광발생 방법을 포함한, DHFR 활성의 탐지 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
대체 양태에서, 기타 탐지인자 분자, 예를 들어 기질을 탐지 가능한 생성물로 전환시키는 것을 촉매하는 효소를 사용할 수 있다. 분열-폴리펩티드 리어셈블리를 위한 상기 몇 가지 시스템에는 β-갈락토시다제 [참고: Rossi et al, 1997, PNAS, 94;8405-8410]; 디히드로폴레이트 리덕타제 (DHFR) [참고: Pelletier et al, PNAS, 1998; 95;12141-12146]; TEM-1 β-락타마제 (LAC) [참고: Galarneau at al, Nat. Biotech. 2002; 20;619-622] 및 개똥벌레 루시퍼라제 [참고: Ray et al, PNAS, 2002, 99;3105-3110 and Paulmurugan et al, 2002; PNAS, 99; 15608-15613]의 리어셈블리가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 분열 β-락타마제를 이중 가닥 DNA의 탐지를 위해 사용하였다 [참고: Ooi et al, Biochemistry, 2006; 45;3620-3525]. 실시간 신호 탐지를 위해 활성화 분열 폴리펩티드 단편을 사용하는 것이 본 발명에 사용하기 위해 포괄되는데, 상기 단편은 상보성에 대한 신속한 신호 탐지를 가능케 하는 완전히 폴딩된 성숙한 입체 형태이다.
제약 조성물
본 발명은 또한, 제약상 허용 가능한 담체 중의 본 발명의 분열-생체 분자성 접합체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 치료적 적용에서, 조성물은 질병 및 그의 합병증을 개선시키거나 적어도 부분적으로 억제시키는 데에 충분한 양으로, 질병으로 인해 고통받고 있는 환자에게 투여한다. 이를 수행하기에 적당한 양은 치료적 유효 용량으로서 정의된다. 이러한 사용에 유효한 양은 질병의 중증도 및 환자의 일반적인 건강 상태에 좌우될 것이다.
한 양태에서, 세포를 생체 내에서 분열-생체 분자성 접합체로 처리한다. 또 다른 양태에서, 세포를 생체 외에서 분열-생체 분자성 접합체로 처리하는데, 이러한 세포는 대상체로부터 수득하고 생체 외에서 제약 조성물을 투여하였고, 특정 양태에서는 이를 대상체에게 다시 이식한다.
몇몇 양태에서, 제약 조성물로 처리한 대상체는 포유류, 예를 들어 인간 및 비-인간 포유류 및 일반적인 동물, 예를 들어 포유류, 비-인간 동물, 예를 들면 농장 동물 (이에는 소, 말, 염소, 양, 돼지, 당나귀 등이 포함되지만, 그에 제한되지 않는다), 애완용 동물, 예를 들어 고양이, 개, 설치류 (이에는 토끼, 마우스, 햄스터 등이 포함되지만, 그에 제한되지 않는다); 조류 및 가금류 및 기타 가축 및 가금이다.
유리하게, 제약 조성물은 비경구 투여에 적합하다. 본 발명의 분열-생체 분자성 접합체는 기타 유사한 조성물, 예를 들어 면역독소에 대해 당해 분야에 공지된 방법에 따라서, 상이한 목적, 예를 들어 신체의 각종 부분의 종양을 치료하기에 적당한 각종 수단에 의해 투여할 수 있다 [참고: 예를 들어, Rybak, et al., Human Cancer Immunology, in IMMUNOLOGY AND ALLERGY CLINICS OF AMERICA, W. B. Saunders, 1990, 및 이에 인용된 참고 문헌]. 따라서, 본 발명은 또한, 본 발명의 분열-생체 분자성 접합체와 제약상 허용 가능한 담체를 포함하는 제약 조성물, 특히 상기 투여 수단에 적합한 조성물에 관한 것이다.
조성물의 단일 또는 다수 투여는 환자에게 요구되고 관용되는 바와 같은 투여량 및 횟수에 따라서 투여할 수 있다. 어떠한 경우에도, 조성물은 환자를 유효하게 치료하기에 충분한 양의 본 발명의 단백질을 제공해야 한다.
바람직하게, 투여용 조성물은 제약상 허용 가능한 담체, 바람직하게 수성 담체 중에 분열-생체 분자성 접합체(들)를 포함하는 예비부하된 중합체성 나노입자 및/또는 양이온성 리포솜 [참고: Pattrick et al, 2001; Richardson et al., 2001; Sachdeva, 1998]을 통상 포함할 것이다. 각종 수성 담체, 예를 들어 완충 식염수 등을 사용할 수 있다. 이들 용액은 멸균성이고 일반적으로, 바람직하지 못한 사항이 없다. 이들 조성물은 통상적이고 널리 공지된 멸균 기술에 의해 멸균시킬 수 있다. 조성물은 생리적 조건에 근접하도록 요구되는 바와 같은 제약상 허용 가능한 보조 물질, 예를 들어 pH 조정제 및 완충제, 독성 조정제 등, 예를 들면 나트륨 아세테이트, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 나트륨 락테이트 등을 함유할 수 있다. 이들 제형 중의 융합 단백질의 농도는 광범위할 수 있고, 선택된 특별한 투여 방식 및 환자의 필요에 따라서 주로 유체 용적, 점도, 체중 등에 의거하여 선택될 것이다.
따라서, 정맥내 투여를 위한 전형적인 제약 조성물은 1일 환자당 약 0.01 내지 100 mg일 것이다. 특히 약물을 혈류 내로가 아니라 격리된 부위, 예를 들어 종양 내로 투여하거나 종양이 체류하는 내부 기관 내로 투여하는 경우에, 1일 환자당 0.1 내지 약 1000 mg 이하의 투여량을 사용할 수 있다. 비경구적으로 투여 가능한 조성물을 제조하기 위한 실제 방법은 당업자에게 공지되어 있거나 명백할 것이며, 이는 문헌 [참고: REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE, 15TH ED., Mack Publishing Co., Easton, PA, (1980)]에 보다 상세히 기재되어 있다.
제약 조성물은 당업자에게 공지된 모든 수단에 의해 투여할 수 있다. 예를 들어, 몇몇 방법에는 펌프, 직접 주사, 국소 적용, 또는 피내, 피하, 정맥내, 림프관내, 림프절내, 점막내 또는 근육내 투여를 통한 대상체에 대한 투여가 포함된다.
본 발명은 또한, 암 또는 바이러스성 질병 또는 당업자에 의해 확인됨으로써 본 발명의 방법을 사용할 수 있는 기타 모든 질병을 치료하는 데에 유용한 약물을 제조하는 데에 있어서의, 본 발명의 분열-생체 분자성 접합체의 제약 조성물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 한 양태에서, 분열-생체 분자성 접합체는 봉입체를 통하여 발현된다. 본원에 사용된 바와 같은 "봉입체" (IB)는 미생물/원핵생물에게서 암호화 핵산의 과발현 후에 재조합적으로 생성된 불용성 형태의 폴리펩티드를 지칭한다. 수 많은 문헌에는 봉입체 경로를 통하여 미생물/원핵생물에게서 단백질을 재조합 생성시키는 것에 관해 기재되어 있고, 이러한 방법은 당업자가 분열-생체 분자성 접합체를 생성시키기 위해 사용될 수 있다. 이러한 문헌의 예는 다음과 같다 [참고: Misawa, S., et al., Biopolymers 51 (1999) 297-307; Lilie, H., Curr. Opin. Biotechnol. 9 (1998) 497-501; Hockney, R. C, Trends Biotechnol. 12 (1994) 456-463].
또 다른 양태에서, 생체 분자성 접합체는 발현 벡터로부터의 발현에 의해 세포 내에서 생성된다. 벡터를 세포 내로 도입시키는 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있고, 본 발명에 사용하기 위해 포괄되며, 이에는 바이러스 매개된 기전, 있는 그대로의 DNA 기전, 직접 DNA 주사 등이 포함된다.
본 발명에 따르는 제약 조성물은 기타 치료와 연계해서 사용할 수 있는데, 예를 들어 분열-생체 분자성 접합체를 암 치료에 사용하는 경우, 제약 조성물은 예를 들어, 기타 모든 항암 요법, 화학요법 및/또는 항혈관형성 치료와 함께 투여할 수 있다. 분열-생체 분자성 접합체를 병원체 치료를 위해 사용하는 경우, 제약 조성물은 예를 들어, 한 가지 이상의 기타 항바이러스제 등과 함께 투여할 수 있다.
본 발명의 실시에 유용한 일반적 기술에 관한 추가의 상세 설명을 위해, 실시자는 세포 생물학, 조직 배양의 표준 교과서 및 고찰을 참고할 수 있다. 분자 및 세포 생화학에서의 일반적 방법은 다음 표준 교과서를 참고할 수 있다 [참고: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed. (Sambrook et al., Harbor Laboratory Press 2001); Short Protocols in Molecular Biology, 4th Ed. (Ausubel et al. eds., John Wiley & Sons 1999); Protein Methods (Bollag et al., John Wiley & Sons 1996); Nonviral Vectors for Gene Therapy (Wagner et al. eds., Academic Press 1999); Viral Vectors (Kaplift & Loewy eds., Academic Press 1995); Immunology Methods Manual (I. Lefkovits ed., Academic Press 1997); and Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures in Biotechnology (Doyle & Griffiths, John Wiley & Sons 1998)]. 본 명세서에 지칭된 유전자 조작을 위한 시약, 클로닝 벡터 및 키트는 다음 공급처 (예: BioRad, Stratagene, Invitrogen, Sigma-Aldrich, and ClonTech)로부터 입수 가능하다.
다음 실시예는 당업자에게 본 발명의 제조 및 사용 방법에 관한 완전한 설명과 기재 사항을 제공하고자 제시된 것이고, 본 발명자들이 의도한 발명의 범위를 제한하지 않으며, 다음 실험이 수행된 모든 또는 유일한 실험을 나타낸다는 것을 의도하지도 않는다. 사용된 수치 (예: 양, 온도 등)에 관해 정확성을 기할려고 노력했지만, 일부 실험 오차와 편차가 고려되어야 한다. 달리 표시되지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 중량 평균 분자량이며, 온도는 ℃이고, 압력은 대기압 또는 그 근처이다.
본 명세서에 인용된 모든 공보 및 특허 출원은 각각의 개별 공보 또는 특허 출원이 구체적이고도 개별적으로 본원에 참고로 도입된다고 나타낸 경우처럼 본원에 참고로 도입된다.
본 발명은 본 발명을 실시하기 위한 바람직한 방법을 포함하기 위해 본 발명자에 의해 제안되거나 발견된 특별한 양태 측면에서 기재되었다. 당업자는 본 명세서 측면에서, 수 많은 변형 및 변화가 본 발명의 의도한 범위를 벗어나지 않고서도 예시된 특별한 양태에서 만들어질 수 있다는 것을 인지할 것이다. 예를 들어, 코돈 중복성으로 인해, 단백질 서열에 영향을 미치지 않는 기초 DNA 서열 상의 변화가 이루어질 수 있다. 더우기, 생물학적 기능적 등가를 고려하기 때문에, 종류 또는 양에 있어서 생물학적 작용에 영향을 미치지 않으면서 단백질 구조 상의 변화가 이루어질 수 있다. 이러한 모든 변형이 첨부된 청구의 범위 내에 포함된다.
분열-생체 분자성 접합체의 생성과 기능성을 입증하기 위한 한 예로서, 리신 A를 급성 림프아구성 백혈병 (ALL) 세포, 특히 소아과 급성 림프아구성 백혈병 (ALL) 세포를 선택적으로 표적화하여 사멸시키기 위한 효과인자 분자로서 사용하였다. 이러한 예는 분열-생체 분자성 접합체의 생성 및 방법의 예이고, 본 발명의 범위를 제한하지 않는다.
리신 A-쇄 독소 (RTA)는 리보솜 (리보톡신)을 붕괴시키고 표적화 세포를 신속하게 사멸시키는 고도로 효율적인 세포독성 효소이다 [참고: Hartley & Lord, 2004; Bigalke & Rummel, 2005]. RTA는 267개 아미노산 구형 단백질이고, 3개-도 메인 구조를 갖고 있으며 (도 2), 도메인의 배열은 3층 샌드위치와 유사하다 [참고; Weston et al., 1994; Bigalke & Rummel, 2005]. 도메인 I (약 120개 아미노산)은 몇 개의 β-시트에 의해 형성된다. 이는 수 개의 a-나선에 의해 형성된 도메인 II와 루프에 의해 연결되어 있고, 뉴클레아제 활성 부위는 이들 두 도메인에 의해 RTA 구의 중앙에 있는 갈라진 틈으로서 형성된다. 도메인 III은 독성을 위해 필요하지 않는 리신 B-쇄 (RTB)에 대한 계면 역할을 한다. 따라서, 기능성 RTA는 도메인 I 및 II [또는 도메인 I 및 (II 및 III)]에 상응하는 2개의 불활성 단백질 단편으로부터 리어셈블리될 수 있는 것으로 예상된다. 중요하게, RTA는 이. 콜라이에서 재조합 단백질로서 수득될 수 있다 [참고: Weston et al, 1994]. 또한, RTA 리어셈블리가 리보솜에 의해 지지되는 것이 중요하고 [참고: Argent et al, 1994]; 생체 내에서 RTA는 부분적으로 폴딩되지 않은 단백질로서 시토졸 내로 유입된 다음, 리보솜에 의해 재폴딩된다.
RTA 독소는 치료적 연구에 이미 사용되었다 [참고: Lord et al, 1994, and www.ansci.cornell.edu/plants/toxicagents/ricin/ricin.html＃ricmech]. RTA 쇄를 불필요한 세포와 우선적으로 결합하는 항체 또는 성장 인자와 접합시킴으로써, 특이적 암 세포를 표적화할 수 있다. 이들 면역독소는 시험관내 적용, 예를 들어 골수 이식에 매우 잘 작용하였다. 이들이 많은 생체내 상황 하에서는 매우 잘 작용하지 못하였지만, 이러한 조사 부분에 있어서의 진보는 미래에 대한 가능성을 보여준다. 중요하게, RTA는 단독으로는 세포에 유입될 수 없기 때문에 (리신 B 쇄를 수반하지 않음), 본 발명자들은 암 세포를 붕괴시킨 후 혈류 내로 재유입될 수 있 는 경우에 RTA의 상당한 독성 효과를 예상하지 못한다. 완전히 안전하게 하기 위해, 상응하는 항체를 주사함으로써 자유 세포외 RTA를 본 발명자들의 접근 방식에서 차단시킬 수 있다 [참고: Mantis et al, 2006; Wang et al, 2006]. 골수 이식 과정에서는, RTA-면역독소를 성공적으로 사용하여 조직화합성 공여자로부터 취한 골수에서 T 림프구를 붕괴시킬 수 있었다. 이로써, 소위 "이식편 대 숙주 질병" (GVHD)으로 불리우는 문제점인 공여자 골수 거부 반응이 감소된다. 스테로이드-내성 급성 GVHD 상황 하에서는, RTA-면역독소가 해당 질환의 완화를 도와주었다. 또한, 자기 유래의 골수 이식에서는, 환자 자신의 골수 샘플을 항-T 세포 면역독소로 처리하여 T 세포 백혈병 및 림프종에서 악성 T 세포를 붕괴시켰다. 따라서, 리신을 단백질 상보성 접근 방식의 치료적 적용을 위해 사용할 수 있다. 분열 리신 A 단편의 자발적 리어셈블리가 존재하지 않는다는 것을 나타내는 시험관내 실험을 수행한 후, 핵산 의존성 리신-A 리어셈블리가 암 세포의 표적화 사멸을 위해 적응될 수 있다는 가능성이 크다.
급성 림프아구성 백혈병. 소아과 급성 림프아구성 백혈병 (ALL)은 종양형성 유전자의 발현을 가져다 주는 이상한 유전자 융합물을 수반한 염색체 전위에 의해 유발된 각종 유전적 아유형 및 상이한 면역표현형을 포함하는 이질적 질병이다. 어린이 ALL에 대해 책임이 있는 대부분의 전위 중의 하나가 t(12;21)이다.
TEL-AML1 융합 유전자. t(12;21) 전위로 인해, 전사 인자 유전자의 ETS 계열 구성원인 TEL의 5' 부분, 및 확정적 조혈 줄기 세포 형성의 주요 조절인자인 코어 결합성 인자의 α 소단위체를 암호화하는 또 다른 전사 인자 유전자 AML1의 거 의 전체 암호화 영역을 포함하는 유전자 융합물이 창출된다 (도 3). 키메라 TEL-AML1 전사 인자는 TEL의 필수 단백질-단백질 상호 작용 도메인과 AML1의 DNA-결합성 도메인 및 해독 조절성 서열을 보유하고 있다. TEL-AML1 융합 단백질의 현저한 효과는 AML1이 코어 증강인자 서열로 명명된 DNA 영역과 결합되는 경우에 정상적으로 개시되는 전사 활성의 억제이다. 비정상적인 TEL-AML1 융합 단백질은 코어 증강인자 서열과 결합할 수 있지만, 전사를 활성화시키는 것 대신, 이는 염색질 구조의 폐쇄를 유도시키는 히스톤 데아세틸라제를 동원하므로, 전사를 억제시킨다.
본 실시예에서, 본 발명자들은 리신 A 리어셈블리에 대한 스캐폴드로서 제공되는, TEL-AML1에 대한 RNA를 표적으로 한다 (도 1). 이러한 RNA가 종양형성성 염색체 전위의 결과로서 ALL 세포에만 존재할 것이란 사실을 인식해야 한다. 또한, ALL RNA가 발현되지 않는 세포 주기 상의 시기가 있으므로, 소수의 암 세포가 독소의 사멸 작용을 피해갈 수 있다. 반복하여 처리하면 이러한 문제점이 경감될 수 있다. 또 다른 대안은 TEL-AML1 유전자를 스캐폴드로서 사용하여 독소를 리어셈블리하는 것이다.
본 실시예에서, 본 발명자들은 그의 핵 전달과 비교하여, 약물의 세포질성 전달의 용이성을 고려하여 독소의 RNA에 의거한 리어셈블리 뿐만 아니라 상보적 올리고뉴클레오티드에 의한 RNA 표적화의 간단성에 초점을 맞추었다. 그러나, 이러한 전략의 유전자-표적화 도식이 또한 예상되긴 하지만, 이는 특별한 이중체 DNA-침입성 올리고머 [가성-상보성 PNA5; 참고: Demidov et al,, 2002]를 요구하고, 이러한 경우에 특수 핵 전달 비히클이 필요할 것이다.
실시예 1
리신의 A 쇄를 2개의 단편으로 유전적으로 해부하고 이들을 인테인과의 융합물로서 세균에서 클로닝한다. 실험의 제1 부는 리신 A의 2개 단편을 클로닝하는 것을 포함한다. 리신 A 서열은 pKK223-3 (Dr. Vitetta, Univ of Texas로부터의 증정물) 내의 클론으로서 입수 가능하다. 이는 단지 리신의 A 쇄이고 B 쇄를 수반하지 않기 때문에, 상당한 독성이 없거나 이러한 플라스미드 또는 단백질 생성물로 작업할 위험이 없다. 상기 플라스미드로부터, 본 발명자들은 PCR을 사용하여 리신 A 단편을 증폭시켰다. 이러한 PCR 생성물을 인테인과의 C-말단 융합물로서 트윈 (Twin) 벡터 (공급처: NE Biolabs) 내로 클로닝하였다. 상응하는 단백질 단편이 C- 또는 N-말단 시스테인을 수반하여 올리고뉴클레오티드에 대한 그들의 화학적 부착을 촉진시키도록 분열 RTA 유전자를 설계하였다. 재조합 플라스미드의 정확한 구축은 필요한 모든 단백질 발현 요소 (프로모터, 개시/정지 코돈 및 단백질-암호화 유전자)가 서로 정확한 프레임 내에 있는 적절한 서열을 갖고 있는지를 검사하기 위해 서열 분석함으로써 검증해야 한다.
리신 A 분자의 해부에 관한 데이터가 입수 가능하지 않기 때문에, 본 발명자들은 단독으로는 재연합되지 않는 2개의 상보성 단백질 단편을 생성시키는 분열 부위를 찾기 위해 몇 가지 해부 변이체를 시험하였다. 3D RTA 구조 (도 2)에 기초하면, 제안된 분열 부위 중의 하나는 도메인간 I-II 루프 (중앙 위치 약 120-aa)에 존재할 것이다. RTA 이차 구조가 도 4에 도식적으로 제시되어 있다. 이러한 구조에 근거하면, 2개의 기타 RTA 분열점이 실행가능한데; 단백질의 N-말단부 내의 큰 루프 중의 위치 52-aa 및 단백질의 나선형 C-말단부 내에 위치한 위치 159-aa. 이들 대체 분열점 둘 다는 비구조화 영역에 위치하고, 분열로 인해 단백질의 1/3 및 2/3을 구성하는 2개의 단편이 생성된다. 모든 분열 도식을 대상으로 하여, 자가-리어셈블리의 결여와, 부착된 ALL-특이적 올리고뉴클레오티드 및 대조군 비특이적 핵산의 존재 하에 배경 활성에 관하여 시험할 것이다.
리신 A의 최적의 분열은 구조적 입체 형태를 평가하고 대체 분열점을 평가함으로써 결정할 수 있고, 이는 자발적으로 리어셈블리되지는 않지만 상보적 핵산 상호 작용에 의해 촉진된 리어셈블리에 효율적인 리신 A 단편을 달성하기 위한 전반적인 목표를 가지고 몇 가지 클로닝 시도를 요구할 수 있다. 부가적으로, 리신 A 자가-리어셈블리를 감소시키기 위한 돌연변이의 도입을 요구할 수 있다.
완전한 길이의 RTA를 암호화하는 플라스미드 pRTA (공급처: Univ. of Texas SW Medical Center)를 6개 모든 RTA 유전자 단편을 수득하기 위한 PCR 주형으로서 사용하였다 (도 2). 이로써 수득된 RTA 유전자 단편을 인테인과의 융합물로서 pTWIN 벡터에 삽입하고, 상응하는 플라스미드를 먼저, 이. 콜라이 XL1O 클로닝 숙주 세포에서 증식시킨 다음, IPTG-유도성 이. 콜라이 BL21-DE3 발현 숙주 세포에 전이시켰다.
실시예 2
프로브 (본 실시예에서 프로브는 올리고뉴클레오티드이다)를 말단 시스테인을 통하여 RTA 단백질 단편에 부착시키고, 인테인을 동시에 분열시키며 단백질-올리고뉴클레오티드 접합체를 정제한다. 본 발명자들은 이. 콜라이에서 단백질 융합 물을 발현하였고, 키틴 비드를 수반한 칼럼 상에 부하함으로써 그리고 인테인으로부터 칼럼 상에 분열시킴으로써 가용성 세포 분획으로부터 단리시켰다. 분열은 5' 말단에 가성-시스테인을 수반한 올리고뉴클레오티드의 존재 하에 수행하였다 [참고: Burbulis et al., 2005]. 변형된 올리고뉴클레오티드의 존재 하에서의 인테인-리신 키메라 분열 도식이 도 5에 제시된다. 이는 단백질-올리고뉴클레오티드 접합을 위한 흥미로운 화학인데, 이는 단백질 정제와 접합 둘 다를 동시에 달성할 수 있게 해주기 때문이다. 또한, 이는 오히려, 단지 두서너 개의 기에 의해서만 시험된 신규의 접합 접근 방식이며, 문제를 유발시킬 수 있는 단백질 재폴딩을 요구한다. 따라서, 대체 접합 화학을 수행할 수 있다.
조-세포 단백질 제제를 분석한 결과, 상이한 분열 RTA-인테인 융합물을 암호화하는 플라스미드로 형질전환시킨 모든 이. 콜라이 BL21-DE3 클론을 IPTG 유도시키면, 도 2에 도시된 바와 같이 상이한 온도에서 유도시킨 경우에 상응하는 단백질의 과발현이 발생한 것으로 밝혀졌는데, 이는 N2n 및 C2n 발현의 예를 보여준다.
그러나, 몇몇 단백질은 불용성 분획으로 과발현되고 불활성 봉입체를 형성하는 것으로 밝혀졌다. 발현된 분열-효과인자 단백질 단편이 봉입체를 형성하는 경우, 이러한 분열-효과인자 단백질 단편은 발현된 단백질을 본원에 기재된 바와 같은 배양 배지 내로 분비시키는 이. 콜라이 균주를 수반하는 세균성 발현 시스템 및/또는 세포 무함유 시스템에서 발현될 수 있다.
분열-효과인자 단백질 단편이 불용성 분획에 제시된 바와 같은 봉입체를 형성하는 경우 (도 9), 본 발명자들은 우레아 용액을 사용하여 가용화를 수행하여, 분열-효과인자 단백질 단편의 성공적인 재폴딩을 위해 본원에 미리 이용된 바와 같은 한방울 한방울 희석 방법을 이용하여 불용성 분획으로부터 봉입체로서 수거한 분열-효과인자 단백질 단편을 재폴딩하였다. 이러한 방법을 사용하여, 본 발명자들은 봉입체로부터 분열 EGPP-인테인1 융합 단백질 단편을 가용화시켰다. 본 발명자들은 또한, 이러한 가용화 방법이 도 11에 도시된 바와 같이, N1n-RTA 분열-효과인자 단백질 단편의 봉입체 및 키틴 칼럼 상에서의 후속 단리/정제에 유효하였다는 것을 입증하였다.
표적 RNA 부위는 도 6에 도시된 바와 같이, ALL 질병의 주요 TEL-ALM1의 대상이다. 2개의 15 내지 20 nt 길이 올리고뉴클레오티드가 절단점으로부터의 양측에서 선택되고, 5' 가성-시스틴 변형을 이용하여 합성하였다. 이러한 변형은 올리고뉴클레오티드를 단백질 단편과 연결시켜 주는 관능기를 제공해 준다 [참고: Burbulis et al, 2005]. 올리고뉴클레오티드는 모든 공급처 (예를 들어, Dalton Chem Lab Inc. Ontario, Canada)로부터 구입할 수 있다. TEL-AML1 절단점 및 융합 서열 상의 가능한 개별적 차이는 적당한 올리고뉴클레오티드를 선택함으로써 용이하게 조정할 수 있다는 것을 인지해야 한다.
분열 RTA-인테인 융합물의 발현으로 인해, 단백질 재폴딩을 필요로 하는 봉입체가 형성될 수 있다. 단백질 재폴딩은 악명높게 어려운 기술이므로, RTA 단편의 정확한 폴딩을 최적화하는 것이 필요할 수 있다.
실시예 3
분열 리어셈블리된 리신 A의 시험관내 기능적 활성. 리신 활성으로 인해, 모델 줄기-루프 올리고뉴클레오티드 또는 28S rRNA 중의 특이적 아데닌의 퓨린제거가 발생하였다. 퓨린제거된 올리고 또는 RNA는 2개의 단편으로 화학적으로 분열될 수 있는데, 그의 상대적 양은 리신 활성을 정량적으로 측정할 수 있다. 리신 뉴클레아제 활성을 시험하기 위한 편리한 기질로서 세척된 리보솜 및/또는 리신 분열 가능한 줄기-루프 RNA 올리고뉴클레오티드를 사용하였다 [참고: Argent et al, 2000; Garcia-Mayoral et al, 2005]. 시험 샘플은 ALL-마커 RNA와 결합된 올리고뉴클레오티드가 부가된 독소 단편으로 이루어진다. 본래의 RTA는 양성 대조군으로서 제공되는 반면, 올리고뉴클레오티드가 부가되지 않은 독소 단편, 및 올리고뉴클레오티드는 부가되지만 ALL-마커 RNA가 수반되지 않은 독소 단편은 음성 대조군으로서 제공되었다. 부가의 음성 대조군에는 상보성 복합체 + 비특이적 RNA의 모든 성분이 포함된다. RTA 함유 시험 및 대조군 샘플로 처리한 후, 퓨린제거된 올리고뉴클레오티드 또는 28S rRNA를 아닐린으로 절단하여 2개의 특징적 RNA 단편으로 만들었는데, 이는 폴리아크릴아미드 또는 아가로스 겔-전기영동에 의해 분할할 수 있다 [참고: Argent et al, 2000].
음성 대조군 중의 몇몇이 높은 배경 리신 활성을 나타내는 경우에는, 배경을 가능한 한 낮은 수준으로 감소시키기 위한 시도에서, 리신 단편에 부착된 올리고뉴클레오티드의 대체 변이체를 시험할 수 있다. 제1 선택으로서, 올리고뉴클레오티드를 N-말단 단편의 C-말단 및 C-말단 단편의 N-말단에 부착시켰다. 이로써 높은 배경이 생성되면, 양 올리고뉴클레오티드를 양 펩티드의 C-말단에 부착시킬 수 있다. 분열 EGFP의 재구축을 이용한 본 발명자들의 경험에 의거하면, 이러한 대체 도식으로 인해 단백질 리어셈블리의 보다 낮은 배경이 산출될 수 있다.
이들 시험관내 연구를 통하여, 분열 재구성된 RTA의 예상 작용 기전을 검증할 수 있을 뿐만 아니라 최적의 구조물 (분열점, RTA 단편 배열, 접합 화학)을 선택할 수 있다.
세포 내의 올리고뉴클레오티드의 생체 안정성이 문제가 되는 경우에는, 변형된 뉴클레아제-저항성 올리고뉴클레오티드 또는 PNA 또는 pcPNA [참고: Demidov et al, 1994]를 사용할 수 있다 (Cys-반응성 SMCC PNA가 시판되고 있다).
28S rRNA 내의 공지된 RTA-분열 가능한 서열에 기초하여, RTA 표적 부위를 수반한 짧은 34-nt 줄기-루프 RNA가 보다 신속한 RTA-생성된 절단을 위해 루프 영역 내에 rA 대신 dA를 수반하도록 설계하였다 (이러한 대체는 RTA 작용을 상당히 가속시키는 것으로 공지되어 있다). 도 12는 겔 전기영동에 의거하여 RTA 활성 복원을 신속히 시험하기 위하여 상기 RNA를 사용할 수 있다는 것을 나타내며; 특정 시간 동안 분열-리어셈블리된 독소 처리에 의해 생성된 2개의 RNA 단편의 상대적 양은 본래의 리신 A와 비교한 경우에, 시험관내 리신 A 활성의 정량적 측정치일 것이다.
RTA를 분열시키기 위해 본 발명자들이 선택된 분열 부위로 인해 활성이 발생하지 않았는데, 즉 N-말단 N1n-RTA에 대한 RNA-절단 활성이 발생하지 않았는데, 이는 이러한 분열-효과인자 단백질 단편이 RTA 활성 부위를 포함하는 아미노산을 갖고 있지 않기 때문이다. 또한, N1n-RTA와 C1n-RTA가 함께 단순히 혼합되는 경우에 RTA 활성, 즉 RNA-절단 활성이 발생하지 않으므로, 이는 이러한 RTA 분열-효과인자 단백질 단편이 기능적 리어셈블리와 활성 효과인자 RTA 단백질의 형성을 위해 표적 매개된 단백질 상보성을 요구한다는 것을 나타낸다.
RTA 절반-단백질과 접합될 화학적 및 생물학적으로 안정한 뉴클레오염기 올리고머로서 Cys-말단 펩티드 핵산 (PNA) 올리고머를 사용하여, 본 발명자들은 PNA 올리고머를 접합시키는 것으로 널리 공지된 Cu2+-페난트롤린 (Cu/Phe)에 의거한 단백질 커플링 화학의 적합성을 평가하였다. Cu/Phe-처리된 Cys-PNA를 사용하여, 본 발명자들은 어떠한 분해도 수반하지 않으면서 이들 올리고머의 신속한 정량적 이량체화를 관찰한 반면, 공통의 올리고뉴클레오티드는 Cu/Phe 시약에 의해 분해되었다. 이러한 결과는 Cu/Phe 커플링 화학이 Cys-말단 분열-RTA 단백질에 대한 Cys-PNA 접합에 적용될 수 있다는 것을 입증해준다. 본 발명자들은 제1 지점에서 RTA 분열의 리어셈블리 효율을 평가하기 위하여, N1n-RTA를 C1n-RTA과 접합시키기 위한 상기 화학을 사용하였다 (도 7). 또 다른 한편, MESNA에 의거한 화학 및 인테인2와의 C-말단 단백질 융합물을 사용하여 칼럼 상 인테인 절단 동안 Cys-PNA를 말단적으로 활성화된 분열-RTA 단백질과 접합시킬 수 있다.
본 발명자들은 또한, 접합 화학을 사용하여 몇몇 분열 RTA 단백질의 분석에 의해 입증된 바와 같이, 분열-효과인자 단백질 단편의 기능적 리어셈블리를 확인하기 위한 시험관내 검정을 개발하였다. 이러한 검정은 또한, 프로브, 예를 들어 핵산 프로브 (예: 올리고뉴클레오티드 프로브 또는 폴리펩티드 프로브)와 접합된 분열-효과인자 단백질 단편의 기능적 리어셈블리를 위해 활용할 수 있다.
실시예 4
세포성 수준에 대하여 기능적으로 시험하기 위해, 2개의 상보성 단백질-올리고뉴클레오티드를 표적 세포 (예; ALL 인간 세포) 내로 주사할 수 있다. 건강한 세포와 플라시보-주사된 ALL 세포가 대조군으로서 제공되었다. 생존률 평가는 통계상 유의적인 세포수 및 독립적인 실험을 제공해준다. 구체적으로 언급하면, 2개의 인간 ALL 세포주를 본 연구에 사용하였다: t(12;21) 전위 및 TEL/AML1 융합물을 함유하는 B-계통 ALL인 REH (ATTC Cat No. CRL-8286), 및 t(12;21) 또는 TEL/AML1 융합물을 갖지 않는 NALM6 B-계통 ALL (DSMZ Cat No. ACC 128). 부가적으로, 기존에 보고된 바와 같은 [참고: Holleman et al, 2004; Lugthart et al, 2005] MTT 검정 및 원발성 ALL 세포를 사용하여 생육도를 결정하였는데, 초기 및 후기 세포소멸은 FACS 분석에 의해 결정하였다. 융합물-독소의 최적의 노출 시간 및 농도는 TEL/AML1 융합물을 수반한 및 수반하지 않은 원발성 ALL 세포, 및 인간 ALL 세포주를 사용하여 세포성 검정에서 시험할 수 있다.
레트로바이러스에 의해 대조군 벡터 또는 TEL/AML1 융합물 유전자를 함유하는 벡터로 형질도입시킨 골수 이식된 마우스를 사용함으로써 생체내 독성/효능을 평가할 수 있다 [참고: Fisher et al, 2005].
생체 분자성 접합체에 관한 성공적인 시험관내 및 생체내 평가를 수행한 후, 분열 RTA-올리고뉴클레오티드 접합체의 피막화 제형을 신규 약물의 후보 형태 (약물 대 세포질 전달 비히클로서의 약물-부하된 중합체성 나노입자 또는 양이온성 리포솜)로서 개발하였다. 혈청에서의 그들의 안정성을 평가한 후, 세포에서 시험하 고, 최종적으로 관심있는 질병의 동물 모델, 예를 들어 ALL 질병 모델 상에서 시험할 수 있다.
이러한 전략의 유전자-표적화 도식을 미래의 강력한 대안으로서 또한 개발할 수 있다. 이러한 앞으로의 개발에 기초하여, 신생아에게서 전암 세포를 근절시키기 위한 예방적 접근 방식을 확립할 수 있었다.
본 발명자들은 N1n-RTA/C1n-RTA 분열-효과인자 단백질 단편 쌍을 분석하였는데, 특히 표적 RNA의 존재 하에 접합되지 않은 단백질 및 접합된 단백질의 시험관내 및 생체내 활성/리어셈블리 시험이 포함된다. 본 발명자들은 또한, 가용성 발현을 증가시키고 봉입체로부터 분열-RTA 단백질을 재폴딩하기 위한 방법을 개발하기 위하여 세포 성장 조건을 다양하게 함으로써 기타 분열 RTA 단백질에 대한 단백질 발현을 최적화하였다.
참고 문헌
본원 및 명세서 전반에 걸쳐 언급된 참고 문헌은 본원에 참조로 포함된다.
Figure 112009031584048-PCT00001
Figure 112009031584048-PCT00002
Figure 112009031584048-PCT00003
SEQUENCE LISTING <110> TRUSTEES OF BOSTON UNIVERSITY <120> TARGETED SPLIT BIOMOLECULAR CONJUGATES FOR THE TREATMENT OF DISEASES, MALIGNANCIES AND DISORDERS, AND METHODS OF THEIR PRODUCTION <130> 701586-058611-PCT <140> PCT/US07/082665 <141> 2007-10-26 <150> 60/854,892 <151> 2006-10-27 <160> 4 <170> PatentIn Ver. 3.3 <210> 1 <211> 34 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 1 ggaauccugc ucaguacgag aggaaccgca gguu 34 <210> 2 <211> 267 <212> PRT <213> Ricinus communis <400> 2 Met Val Pro Lys Gln Tyr Pro Ile Ile Asn Phe Thr Thr Ala Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Gln Ser Tyr Thr Asn Phe Ile Arg Ala Val Arg Gly Arg Leu 20 25 30 Thr Thr Gly Ala Asp Val Arg His Glu Ile Pro Val Leu Pro Asn Arg 35 40 45 Val Gly Leu Pro Ile Asn Gln Arg Phe Ile Leu Val Glu Leu Ser Asn 50 55 60 His Ala Glu Leu Ser Val Thr Leu Ala Leu Asp Val Thr Asn Ala Tyr 65 70 75 80 Val Val Gly Tyr Arg Ala Gly Asn Ser Ala Tyr Phe Phe His Pro Asp 85 90 95 Asn Gln Glu Asp Ala Glu Ala Ile Thr His Leu Phe Thr Asp Val Gln 100 105 110 Asn Arg Tyr Thr Phe Ala Phe Gly Gly Asn Tyr Asp Arg Leu Glu Gln 115 120 125 Leu Ala Gly Asn Leu Arg Glu Asn Ile Glu Leu Gly Asn Gly Pro Leu 130 135 140 Glu Glu Ala Ile Ser Ala Leu Tyr Tyr Tyr Ser Thr Gly Gly Thr Gln 145 150 155 160 Leu Pro Thr Leu Ala Arg Ser Phe Ile Ile Cys Ile Gln Met Ile Ser 165 170 175 Glu Ala Ala Arg Phe Gln Tyr Ile Glu Gly Glu Met Arg Thr Arg Ile 180 185 190 Arg Tyr Asn Arg Arg Ser Ala Pro Asp Pro Ser Val Ile Thr Leu Glu 195 200 205 Asn Ser Trp Gly Arg Leu Ser Thr Ala Ile Gln Glu Ser Asn Gln Gly 210 215 220 Ala Phe Ala Ser Pro Ile Gln Leu Gln Arg Arg Asn Gly Ser Lys Phe 225 230 235 240 Ser Val Tyr Asp Val Ser Ile Leu Ile Pro Ile Ile Ala Leu Met Val 245 250 255 Tyr Arg Cys Ala Pro Pro Pro Ser Ser Gln Phe 260 265 <210> 3 <211> 268 <212> PRT <213> Ricinus communis <400> 3 Met Ile Phe Pro Lys Gln Tyr Pro Ile Ile Asn Phe Thr Thr Ala Gly 1 5 10 15 Ala Thr Val Gln Ser Tyr Thr Asn Phe Ile Arg Ala Val Arg Gly Arg 20 25 30 Leu Thr Thr Gly Ala Asp Val Arg His Glu Ile Pro Val Leu Pro Asn 35 40 45 Arg Val Gly Leu Pro Ile Asn Gln Arg Phe Ile Leu Val Glu Leu Ser 50 55 60 Asn His Ala Glu Leu Ser Val Thr Leu Ala Leu Asp Val Thr Asn Ala 65 70 75 80 Tyr Val Val Gly Tyr Arg Ala Gly Asn Ser Ala Tyr Phe Phe His Pro 85 90 95 Asp Asn Gln Glu Asp Ala Glu Ala Ile Thr His Leu Phe Thr Asp Val 100 105 110 Gln Asn Arg Tyr Thr Phe Ala Phe Gly Gly Asn Tyr Asp Arg Leu Glu 115 120 125 Gln Leu Ala Gly Asn Leu Arg Glu Asn Ile Glu Leu Gly Asn Gly Pro 130 135 140 Leu Glu Glu Ala Ile Ser Ala Leu Tyr Tyr Tyr Ser Thr Gly Gly Thr 145 150 155 160 Gln Leu Pro Thr Leu Ala Arg Ser Phe Ile Ile Cys Ile Gln Met Ile 165 170 175 Ser Glu Ala Ala Arg Phe Gln Tyr Ile Glu Gly Glu Met Arg Thr Arg 180 185 190 Ile Arg Tyr Asn Arg Arg Ser Ala Pro Asp Pro Ser Val Ile Thr Leu 195 200 205 Glu Asn Ser Trp Gly Arg Leu Ser Thr Ala Ile Gln Glu Ser Asn Gln 210 215 220 Gly Ala Phe Ala Ser Pro Ile Gln Leu Gln Arg Arg Asn Gly Ser Lys 225 230 235 240 Phe Ser Val Tyr Asp Val Ser Ile Leu Ile Pro Ile Ile Ala Leu Met 245 250 255 Val Tyr Arg Cys Ala Pro Pro Pro Ser Ser Gln Phe 260 265 <210> 4 <211> 54 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 attgggagaa tagcagaatg catacttgga atgaatcctt ctagagacgt ccac 54

Claims (157)

  1. 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 2개 이상의 프로브 중의 하나와 접합되고, 이러한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드는 질병, 악성 종양 또는 장애로 인해 고통받고 있는 세포에 존재하고, 프로브가 표적 핵산 또는 폴리펩티드와 결합하면 효과인자 분자가 재구성되고, 효과인자 분자는 상기 세포에 치사적이고/이거나 세포를 또 다른 화합물에 감작시키고/시키거나 상기 질병, 악성 종양 또는 장애를 경감시키는, 분열-효과인자 분자를 포함하는 분열 생체 분자성 접합체.
  2. 제1항에 있어서, 분열-효과인자 분자가 효과인자 분자의 2개 이상의 폴리펩티드 단편을 포함하는데, 이러한 단편이 (a) 활성화 입체 형태이고; (b) 단독으로는 활성이 아니며; (c) 프로브를 추가로 포함하고; (d) 표적 핵산 또는 폴리펩티드의 존재 하에 실시간으로 활성 효과인자 분자를 재구성하도록 보완하는 분열 생체 분자성 접합체.
  3. a. 각각의 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 질병 또는 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 2개 프로브 중의 하나 이상과 접합되는 분열-효과인자 분자를 포함하는 제1항의 분열 생체 분자성 접합체의 제약 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계; 및
    b. 활성 효과인자 분자의 형성이 질병 또는 장애와 연관되는 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드와 2개 이상의 프로브의 결합에 의해 촉진되는, 활성 효과인자 분자를 형성시키는 단계
    를 포함하는, 대상체에게서 질병 또는 장애를 치료 또는 경감시키는 방법.
  4. 제1항 또는 제3항에 있어서, 분열 효과인자 분자가 독소 분자 또는 그의 단편인 방법.
  5. 제4항에 있어서, 독소 분자가 면역독소 또는 그의 단편인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 면역독소가 단백질 독소인 방법.
  7. 제6항에 있어서, 단백질 독소가 세균성 독소인 방법.
  8. 제6항에 있어서, 단백질 독소가 식물 독소인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 식물 독소가 식물 할로-독소 (halotoxin) 또는 부류 II 리보솜 불활성화 단백질인 방법.
  10. 제8항에 있어서, 식물 독소가 식물 반독소 (hemitoxin) 또는 부류 I 리보솜 불활성화 단백질인 방법.
  11. 제7항에 있어서, 세균성 독소가 탄저병 (anthrax) 독소; 디프테리아 독소 (DT); 슈도모나스성 (pseudomonal) 내독소 (PE); 스트렙토리신 O; 또는 그의 천연 발생적 변이체, 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체 또는 단편을 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  12. 제9항에 있어서, 식물 할로-독소가 사포린 (SAP); 억새풀 (pokeweed) 항바이러스성 단백질 (PAP); 브리오딘 (bryodin) 1; 보우가닌 (bouganin) 및 겔로닌 (gelonin), 또는 그의 천연 발생적 변이체, 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체 또는 단편을 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  13. 제10항에 있어서, 식물 반독소가 리신 A 쇄 (RTA); 리신 B (RTB); 아브린 (abrin); 미스트레토에 (mistletoe), 렉틴 및 모데신 (modeccin); 또는 그의 천연 발생적 변이체, 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체 또는 단편을 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  14. 제8항에 있어서, 식물 독소는 리보톡신인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 리보톡신이 리신 A 쇄 (RTA)인 방법.
  16. 제8항에 있어서, 식물 독소가 뉴클레아제인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 뉴클레아제가 사르신 (sarcin); 레스트릭토신 (restrictocin)을 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  18. 제4항에 있어서, 독소 분자가 세포독성 분자인 방법.
  19. 제14항에 있어서, 세포독성 분자가 사이토킨인 방법.
  20. 제15항에 있어서, 사이토킨이 IL-1; IL-2; IL-3; IL-4; IL-13; 인터페론-알파; 종양 괴사 인자-알파 (TNFα); IL-6; 과립구 집락 자극 인자 (G-CSF); GM-CSF 또는 그의 천연 변이체 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체를 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  21. 제1항 또는 제3항에 있어서, 효과인자 분자가 뉴클레아제이거나 또는 엔도-핵산 분해 활성을 지니는 방법.
  22. 제17항에 있어서, 뉴클레아제가 DNA 뉴클레아제 또는 DNA 엔도뉴클레아제인 방법.
  23. 제18항에 있어서, DNA 뉴클레아제가 DNA 엔도뉴클레아제 I; 또는 그의 천연 변이체 또는 유전 공학적으로 처리시킨 변이체를 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  24. 제21항에 있어서, 뉴클레아제가 RNA 뉴클레아제 또는 RNA 엔도뉴클레아제인 방법.
  25. 제24항에 있어서, RNA 뉴클레아제가 RNA 엔도뉴클레아제 I; RNA 엔도뉴클레아제 II; RNA 엔도뉴클레아제 III를 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  26. 제24항에 있어서, RNA 뉴클레아제가 안지오게닌 (angiogenin)인 방법.
  27. 제24항에 있어서, RNA 뉴클레아제가 디세르 (Dicer)인 방법.
  28. 제24항에 있어서, RNA 뉴클레아제가 RNase A인 방법.
  29. 제1항 또는 제3항에 있어서, 분열 효과인자 분자가 단백질 분해적 효소인 방법.
  30. 제29항에 있어서, 단백질 분해적 효소가 카스파제 효소; 칼파인 효소; 카텝신 효소; 엔도프로테아제 효소; 그란자임; 매트릭스 메탈로프로테아제; 펩신; 프로나제; 프로테아제; 프로테이나제; 레닌; 트립신을 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  31. 제1항 또는 제3항에 있어서, 분열 효과인자 분자가 세포에서 세포 사멸 경로를 유도시킬 수 있는 방법.
  32. 제1항 또는 제3항에 있어서, 분열 효과인자 분자가 프로-세포소멸성 분자인 방법.
  33. 제32항에 있어서, 프로-세포소멸성 분자가 Hsp90; TNFα; DIABLO; BAX; Bcl-2의 억제제; Bad; 폴리 ADP 리보스 폴리머라제-1 (PARP-1): 제2 미토콘드리아-유래된 활성인자 또는 카스파제 (SMAC); 세포소멸 유도 인자 (AIF); Fas (Apo-1 또는 CD95로서 공지되기도 함); Fas 리간드 (FasL)를 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  34. 제1항 또는 제3항에 있어서, 분열 효과인자 분자가 세포에서 세포 사멸 경로를 억제할 수 있거나 또는 세포에서 세포 생존 경로를 유도시킬 수 있는 방법.
  35. 제1항 또는 제3항에 있어서, 효과인자 분자가 항-세포소멸성 분자인 방법.
  36. 제35항에 있어서, 항-세포소멸성 분자가 bcl-2; Bcl-XL; Hsp27; 세포소멸 단백질의 억제제 (IAP)를 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  37. 제1항 또는 제3항에 있어서, 효과인자 분자가 세포를 하나 이상의 이차 작용제에 대해 감작시키는 분자 또는 폴리펩티드인 방법.
  38. 제37항에 있어서, 이차 작용제가 오셀테미비르 (oseltemivir); 알로퓨리놀 (allopurinol)을 포함하는 군 중에서 선택된 항바이러스제인 방법.
  39. 제38항에 있어서, 세포를 감작시키는 폴리펩티드가 β-글럭토니다제; 히포크산틴-구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제; β-락타마제; 카복실에스테라제 HCE1; 퍼옥시다제 효소를 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  40. 제1항 또는 제3항에 있어서, 효과인자 분자가 단백질 분해에 대한 표적 폴리펩티드를 태그화하는 분자인 방법.
  41. 제40항에 있어서, 분자가 유비퀴틴; 소형 유비퀴틴 관련 조정제 (SUMO); DNA 메틸트랜스퍼라제 (DNA MTase); 히스톤 아세틸화 효소 (HAT)를 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  42. 제3항에 있어서, 질병 또는 장애가 병리상태 유발성 핵산에 기인하는 방법.
  43. 제3항에 있어서, 질병 또는 장애가 암; 신경학적 질병; 퇴행성 질병; 염증성 질병; 병원체 감염증을 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  44. 제43항에 있어서, 암이 중간엽 기원 암 (육종); 섬유육종; 점액육종; 지방육종; 연골육종; 골원성 육종; 혈관육종; 내피육종; 림프관육종; 활막육종; 중피육종; 유잉 (Ewing) 종양; 골수성 백혈병; 단구성 백혈병; 악성 백혈병; 림프구성 백혈병; 형질세포종; 평활근육종; 및 횡문근육종; 상피 기원 암 (암종); 편평 세포 또는 표피 암종; 기저 세포 암종; 한선 암종; 피지선 암종; 선암종; 유두상 암종; 유두상 선암종; 낭선 암종; 수질성 암종; 미분화 암종 (단순체 암종); 기관지원성 암종; 기관지 암종; 흑색 암종; 신세포 암종; 간세포 암종; 담관 암종; 이행 세포 암종; 편평 세포 암종; 융모막 암종; 정상피종; 배아 암종; 악성 기형종; 및 기형 암종; 백혈병; 급성 림프구성 백혈병 및 급성 골수성 백혈병 (골수아구성, 전골수아구성, 골수단구성; 단구성 및 적백혈병); 만성 백혈병; 만성 골수성 (과립구성) 백혈병; 만성 림프구성 백혈병; 진성 적혈구증가증; 림프종; 호지킨병 (Hodgkin's disease); 비호지킨병; 다발성 골수종; 발덴스트롬 (Waldenstrom) 마크로글로불린혈증; 중쇄 질병을 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  45. 제44항에 있어서, 암이 림프종; 백혈병; 육종; 선종인 방법.
  46. 제43항에 있어서, 암이 급성 림프아구성 백혈병 (ALL)인 방법.
  47. 제3항에 있어서, 질병이 신경학적 질병 또는 장애인 방법.
  48. 제47항에 있어서, 신경학적 질병이 알츠하이머병 (Alzheimer's Disease); 파킨슨병 (Parkinson's disease); 헌팅톤병 (Huntington's disease); 폴리글루타민 병; 근위축성 측삭 경화증 (ALS)을 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  49. 제3항에 있어서, 질병이 병원체인 방법.
  50. 제49항에 있어서, 병원체가 인플루엔자, 바이러스, 세균, 진균, 기생충 또는 효모를 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  51. 제49항에 있어서, 병원체가 바이러스인 방법.
  52. 제3항에 있어서, 질병이 질병에 대한 유전적 소인인 방법.
  53. 제3항에 있어서, 대상체가 포유류인 방법.
  54. 제53항에 있어서, 포유류가 인간인 방법.
  55. 제1항에 있어서, 세포가 생체내 세포인 방법.
  56. 제3항에 있어서, 세포가 대상체로부터 수득하고 제약 조성물을 생체외 투여하는 방법.
  57. 제56항에 있어서, 세포가 대상체에게 다시 이식되는 방법.
  58. 제1항 또는 제3항에 있어서, 분열 생체 분자성 접합체가 봉입체에 의해 생성되는 방법.
  59. 제1항 또는 제3항에 있어서, 분열-생체 분자성 접합체가 봉입체에 의해 생성되는 방법.
  60. 제3항에 있어서, 분열-생체 분자성 접합체가 펌프; 직접 주사; 국소 적용; 피내, 피하를 통한 대상체에 대한 투여; 정맥내; 림프관내; 림프절내; 점막내 또는 근육내 투여를 포함하는 군에 의해 세포에게 투여되는 방법.
  61. 제3항에 있어서, 분열-생체 분자성 접합체가 예비부하된 중합체성 나노입자 및/또는 양이온성 리포솜 상의 세포에게 투여되는 방법.
  62. 제1항에 있어서, 핵산 결합성 모티프와 접합된 분열-효과인자 분자가 상기 세포 중의 발현 벡터로부터 발현되는 방법.
  63. 제62항에 있어서, 벡터가 통상적인 수단에 의해 세포 내로 도입되는 방법.
  64. 제63항에 있어서, 벡터가 효과인자 분자를 포함하는 방법.
  65. 제1항 또는 제3항에 있어서, 표적 핵산이 병리상태 유발성 표적 핵산 서열을 포함하는 방법.
  66. 제1항 또는 제3항에 있어서, 표적 핵산이 DNA인 방법.
  67. 제1항 또는 제3항에 있어서, 표적 핵산이 RNA인 방법.
  68. 제65항에 있어서, 병리상태 유발성 표적 핵산 서열이 병원성 RNA를 포함하는 방법.
  69. 제65항에 있어서, 병리상태 유발성 표적 핵산 서열이 병원성 DNA를 포함하는 방법.
  70. 제69항에 있어서, 병리학적 DNA가 하나 이상의 돌연변이 및/또는 다형성을 포함하는 방법.
  71. 제65항에 있어서, 병리상태 유발성 표적 핵산 서열이 병원체 DNA 또는 RNA를 포함하는 방법.
  72. 제71항에 있어서, 병원체 DNA 또는 RNA가 바이러스 기원인 방법.
  73. 제72항에 있어서, 바이러스가 AIDS/HIV; 조류 플루; SARS; A형 간염; B형 간염; C형 간염; 인플루엔지아; 바리셀라; 아데노바이러스, HSV-2; HSV-II; 우역 (rinderpest) 리노바이러스; 에크노바이러스; 로타바이러스; 호흡기 합포체 바이러스; 유두종 바이러스; 파포바 바이러스; 시토메갈로바이러스; 에키노바이러스; 아보바이러스; 한타바이러스; 콕사키 바이러스; 홍역 바이러스; 유행성 이하선염 바이러스; 풍진 바이러스; 폴리오 바이러스; HIV-I, HIV-II; 조류 및/또는 새 (bird) 플루 바이러스; 에볼라 바이러스; 기타 바이러스를 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  74. 제1항 또는 제2항에 있어서, 표적 폴리펩티드가 병원성 폴리펩티드를 포함하는 방법.
  75. 제74항에 있어서, 병원성 폴리펩티드가 정상적인 비-병원성 폴리펩티드와 비교해서 비정상적 입체 형태를 갖는 방법.
  76. 제1항에 있어서, 세포가 시험관내 및 생체내 세포인 방법.
  77. 제1항에 있어서, 세포가 생체내 세포인 방법.
  78. 제1항 또는 제3항에 있어서, 프로브가 핵산 결합성 모티프인 방법.
  79. 제78항에 있어서, 핵산 결합성 모티프가 DNA, RNA, PNA, LNA, pcPNA, DNA-결합성 단백질, RNA-결합성 단백질 또는 그의 유사체 또는 단편을 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  80. 제1항 또는 제3항에 있어서, 프로브가 폴리펩티드 탐지인자 단백질인 방법.
  81. 제80항에 있어서, 폴리펩티드 탐지인자 단백질이 2개 이상의 단편으로 분열 되는데, 각 단편이 효과인자 단백질의 둘 이상의 단편과 접합되고, 탐지인자 폴리펩티드 단편이 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드와 결합하면 탐지인자 단백질과 활성 효과인자 단백질이 재구성되는 방법.
  82. 제80항에 있어서, 폴리펩티드 탐지인자 단백질이 다중-도메인 폴리펩티드 탐지인자 단백질인 방법.
  83. 제82항에 있어서, 다중-도메인 폴리펩티드 탐지인자 단백질의 각 도메인이 효과인자 단백질의 둘 이상의 단편과 접합되고, 탐지인자 단백질의 도메인이 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드와 결합하면 탐지인자 단백질과 활성 효과인자 단백질이 재구성되는 방법.
  84. 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 둘 이상의 프로브와 각각 접합되는 2개 이상의 폴리펩티드 단편을 포함하고, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 세포에서 세포 사멸 경로를 개시시킬 수 있는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 분열-효과인자 분자를 포함하는 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체.
  85. 종양 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하는데, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 암 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 종양과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 암을 치료하기 위한 제84항의 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  86. 병원체 감염된 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하는데, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 병원체 감염증을 치료하기 위한 제84항 또는 제85항의 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  87. 제84항 내지 제86항 중의 어느 한 항에 있어서, 표적 핵산이 병리학적 핵산인 핵산으로서 확인되는, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  88. 제84항 내지 제87항 중의 어느 한 항에 있어서, 표적 폴리펩티드가 병리학적 폴리펩티드인 폴리펩티드로서 확인되는, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  89. 제84항 내지 제88항 중의 어느 한 항에 있어서, 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드가 병리상태의 영향으로 세포 상의 변화로서 확인되는, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  90. 제84항 내지 제89항 중의 어느 한 항에 있어서, 표적 핵산이 종양형성 유전자 또는 전종양형성 유전자를 암호화하는, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  91. 제90항에 있어서, 종양형성 유전자가 p63; p73; gp40 (v-fms); p21 (ras); p55 (v-myc); p65 (gag-jun); pp60 (v-src); v-abl; v-erb; v-erba; v-fos를 포함하는 군 중에서 선택되는, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  92. 제86항 내지 제88항 중의 어느 한 항에 있어서, 병원체가 인플루엔자, 바이러스, 세균, 진균, 기생충 또는 효모를 포함하는 군 중에서 선택되는, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  93. 제84항 내지 제93항 중의 어느 한 항에 있어서, 병원체가 바이러스인, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  94. 제84항 내지 제93항 중의 어느 한 항에 있어서, 바이러스가 AIDS/HIV; 조류 플루; SARS; A형 간염; B형 간염; C형 간염; 인플루엔지아; 바리셀라; 아데노바이러스, HSV-2; HSV-II; 우역 리노바이러스; 에크노바이러스; 로타바이러스; 호흡기 합포체 바이러스; 유두종 바이러스; 파포바 바이러스; 시토메갈로바이러스; 에키노바이러스; 아보바이러스; 한타바이러스; 콕사키 바이러스; 홍역 바이러스; 유행성 이하선염 바이러스; 풍진 바이러스; 폴리오 바이러스; HIV-I, HIV-II; 조류 및/또는 새 플루 바이러스; 에볼라 바이러스; 기타 바이러스를 포함하는 군 중에서 선택되는, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  95. 제84항 내지 제93항 중의 어느 한 항에 있어서, 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드가 v-fms; v-myc; v-src; v-abl; v-erb; v-erba; v-fos; M1 단백질; 바이러스 유사 입자 (VPL)를 포함하는 군 중에서 선택되는, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  96. 제84항 내지 제95항 중의 어느 한 항에 있어서, 효과인자 분자가 제4항 내지 제33항 및 제39항 내지 제41항 중의 어느 한 항에 제시된 효과인자 분자 중에서 선택되는, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  97. 제84항 내지 제95항 중의 어느 한 항에 있어서, 프로브가 제79항 내지 제84항 중의 어느 한 항에 제시된 프로브 중에서 선택되는, 세포 사멸 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  98. 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 둘 이상의 프로브와 각각 접합되는 2개 이상의 폴리펩티드 단편을 포함하고, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 세포에서 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드를 분해시킬 수 있거나 또는 이의 분해를 유도시킬 수 있는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 분열-효과인자 분자를 포함하는 분해성 분열-생체 분자성 접합체.
  99. 종양 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하는데, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 암 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 종양과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 암을 치료하기 위한 제98항의 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  100. 병원체 감염된 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하는데, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 병원체 감염증을 치료하기 위한 제98항의 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  101. 병원체 감염된 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하는데, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 질병 또는 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 질병 또는 장애를 치료하기 위한 제98항의 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  102. 제98항 내지 제101항 중의 어느 한 항에 있어서, 표적 핵산이 병리학적 핵산인 핵산으로서 확인되는, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  103. 제98항 내지 제101항 중의 어느 한 항에 있어서, 표적 폴리펩티드가 병리학적 폴리펩티드인 폴리펩티드로서 확인되는, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  104. 제98항 내지 제101항 중의 어느 한 항에 있어서, 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드가 병리상태의 영향으로 세포 상의 변화로서 확인되는, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  105. 제99항에 있어서, 표적 핵산이 종양형성 유전자 또는 전종양형성 유전자를 암호화하는, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  106. 제105항에 있어서, 종양형성 유전자가 p63; p73; gp40 (v-fms); p21 (ras); p55 (v-myc); p65 (gag-jun); pp60 (v-src); v-abl; v-erb; v-erba; v-fos를 포함하는 군 중에서 선택되는, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  107. 제100항에 있어서, 병원체가 인플루엔자, 바이러스, 세균, 진균, 기생충 또는 효모를 포함하는 군 중에서 선택되는, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  108. 제100항에 있어서, 병원체가 바이러스인, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  109. 제108항에 있어서, 바이러스가 AIDS/HIV; 조류 플루; SARS; A형 간염; B형 간염; C형 간염; 인플루엔지아; 바리셀라; 아데노바이러스, HSV-2; HSV-II; 우역 리노바이러스; 에크노바이러스; 로타바이러스; 호흡기 합포체 바이러스; 유두종 바이러스; 파포바 바이러스; 시토메갈로바이러스; 에키노바이러스; 아보바이러스; 한타바이러스; 콕사키 바이러스; 홍역 바이러스; 유행성 이하선염 바이러스; 풍진 바이러스; 폴리오 바이러스; HIV-I, HIV-II; 조류 및/또는 새 플루 바이러스; 에볼라 바이러스; 기타 바이러스를 포함하는 군 중에서 선택되는, 분해성 분열-생체 분자 성 접합체의 용도.
  110. 제100항에 있어서, 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드가 v-fms; v-myc; v-src; v-abl; v-erb; v-erba; v-fos; M1 단백질; 바이러스 유사 입자 (VPL)를 포함하는 군 중에서 선택되는, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  111. 제101항에 있어서, 질병 또는 장애가 병리학적 폴리펩티드의 발현과 연관되는, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  112. 제113항에 있어서, 병리학적 폴리펩티드가 돌연변이되고/되거나 부정확하게 폴딩된 폴리펩티드인, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  113. 제112항에 있어서, 질병이 신경학적 질병; 신장 질병; 심혈관계 질병; 간 질병; 염증성 질병; 낭포성 섬유증; 신경변성 질병; 염증성 질병; 면역 장애를 포함하는 군 중에서 선택되는, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  114. 제113항에 있어서, 신경학적 질병이 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 척수 손상을 포함하는 군 중에서 선택되는, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  115. 제98항 내지 제101항 중의 어느 한 항에 있어서, 효과인자 분자가 제21항 내지 제28항 및 제40항 내지 제41항 중의 어느 한 항에 제시된 효과인자 분자 중에서 선택되는, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  116. 제98항 내지 제101항 중의 어느 한 항에 있어서, 프로브가 제79항 내지 제84항 중의 어느 한 항에 제시된 프로브 중에서 선택되는, 분해성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  117. 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 둘 이상의 프로브와 각각 접합되는 2개 이상의 폴리펩티드 단편을 포함하고, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 세포를 기타 이차 작용제에 대해 감작시킬 수 있는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 분열-효과인자 분자를 포함하는 감작성 분열-생체 분자성 접합체.
  118. 종양 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하는데, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 암 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 종양과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 암을 치료하기 위한 제117항의 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  119. 병원체 감염된 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하는데, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 병원체 감염증과 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 병원체 감염증을 치료하기 위한 제117항의 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  120. 제117항 내지 제119항 중의 어느 한 항에 있어서, 표적 핵산이 병리학적 핵산인 핵산으로서 확인되는, 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  121. 제117항 내지 제119항 중의 어느 한 항에 있어서, 표적 폴리펩티드가 병리학적 폴리펩티드인 폴리펩티드로서 확인되는, 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  122. 제117항 내지 제119항 중의 어느 한 항에 있어서, 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드가 병리상태의 영향으로 세포 상의 변화로서 확인되는, 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  123. 제116항에 있어서, 표적 핵산이 종양형성 유전자 또는 전종양형성 유전자를 암호화하는, 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  124. 제123항에 있어서, 종양형성 유전자가 p63; p73; gp40 (v-fms); p21 (ras); p55 (v-myc); p65 (gag-jun); pp60 (v-src); v-abl; v-erb; v-erba; v-fos를 포함하는 군 중에서 선택되는, 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  125. 제119항에 있어서, 병원체가 인플루엔자, 바이러스, 세균, 진균, 기생충 또는 효모를 포함하는 군 중에서 선택되는, 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  126. 제119항에 있어서, 병원체가 바이러스인, 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  127. 제126항에 있어서, 바이러스가 AIDS/HIV; 조류 플루; SARS; A형 간염; B형 간염; C형 간염; 인플루엔지아; 바리셀라; 아데노바이러스, HSV-2; HSV-II; 우역 리노바이러스; 에크노바이러스; 로타바이러스; 호흡기 합포체 바이러스; 유두종 바이러스; 파포바 바이러스; 시토메갈로바이러스; 에키노바이러스; 아보바이러스; 한타바이러스; 콕사키 바이러스; 홍역 바이러스; 유행성 이하선염 바이러스; 풍진 바이러스; 폴리오 바이러스; HIV-I, HIV-II; 조류 및/또는 새 플루 바이러스; 에볼라 바이러스; 기타 바이러스를 포함하는 군 중에서 선택되는, 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  128. 제128항에 있어서, 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드가 v-fms; v-myc; v-src; v-abl; v-erb; v-erba; v-fos; M1 단백질; 바이러스 유사 입자 (VPL)를 포함하는 군 중에서 선택되는, 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  129. 제117항 내지 제119항 중의 어느 한 항에 있어서, 효과인자 단백질이 β-글럭토니다제; 히포크산틴-구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제; β-락타마제; 카복실에스테라제 HCE1; 퍼옥시다제 효소 중에서 선택되는, 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  130. 제117항 내지 제119항 중의 어느 한 항에 있어서, 효과인자 분자가 제37항 또는 제38항에 제시된 효과인자 분자 중에서 선택되는, 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  131. 제117항 내지 제119항 중의 어느 한 항에 있어서, 프로브가 제79항 내지 제84항 중의 어느 한 항에 제시된 프로브 중에서 선택되는, 감작성 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  132. 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 둘 이상의 프로브와 각각 접합되는 2개 이상의 폴리펩티드 단편을 포함하고, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 세 포 생존 경로를 개시시킬 수 있거나 또는 세포에서 세포 사멸을 억제할 수 있는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 분열-효과인자 분자를 포함하는 생존 분열-생체 분자성 접합체.
  133. 종양 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하는데, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 암 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 질병 또는 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 질병 또는 장애를 치료하기 위한 제132항의 생존 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  134. 제132항 또는 제133항에 있어서, 질병 또는 장애가 병리상태의 일부로서의 세포 상실과 연관되는, 생존 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  135. 제132항 또는 제133항에 있어서, 질병 또는 장애가 병리학적 폴리펩티드의 발현과 연관되는, 생존 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  136. 제133항에 있어서, 병리학적 폴리펩티드가 돌연변이되고/되거나 부정확하게 폴딩된 폴리펩티드인, 생존 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  137. 제132항 또는 제133항에 있어서, 표적 핵산이 병리학적 핵산인 핵산으로서 확인되는, 생존 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  138. 제132항 또는 제133항에 있어서, 표적 폴리펩티드가 병리학적 폴리펩티드인 폴리펩티드로서 확인되는, 생존 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  139. 제132항 또는 제133항에 있어서, 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드가 병리상태의 영향으로 세포 상의 변화로서 확인되는, 생존 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  140. 제133항에 있어서, 질병이 신경학적 질병; 신장 질병; 심혈관계 질병; 간 질병; 염증성 질병; 낭포성 섬유증; 신경변성 질병; 염증성 질병; 면역 장애를 포함하는 군 중에서 선택되는, 생존 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  141. 제140항에 있어서, 신경학적 질병이 알츠하이머병, 헌팅톤병, 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 척수 손상을 포함하는 군 중에서 선택되는, 생존 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  142. 제82항 내지 제84항 중의 어느 한 항에 있어서, 효과인자 분자가 제34항 내지 제36항 중의 어느 한 항에 제시된 효과인자 분자 중에서 선택되는, 생존 분열- 생체 분자성 접합체의 용도.
  143. 제82항 내지 제84항 중의 어느 한 항에 있어서, 프로브가 제79항 내지 제84항 중의 어느 한 항에 제시된 프로브 중에서 선택되는, 생존 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  144. 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 둘 이상의 프로브와 각각 접합되는 2개 이상의 폴리펩티드 단편을 포함하고, 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 세포에서 기능이상하거나 상실된 폴리펩티드를 대체할 수 있는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 분열-효과인자 분자를 포함하는 프록시 분열-생체 분자성 접합체.
  145. 종양 세포를 세포 사멸 분열-효과인자 분자와 접촉시키는 것을 포함하는데, (i) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편이 암 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 프로브와 접합되고; (ii) 분열-효과인자 폴리펩티드 단편들이 합하여, 질병 또는 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드의 존재 하에 활성 효과인자 분자를 형성시키는, 질병 또는 장애를 치료하기 위한 제144항의 프록시 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  146. 제144항 또는 제145항에 있어서, 질병 또는 장애가 세포 내에서 폴리펩티드 의 기능이상적 발현이나 발현 상실 또는 저하와 연관되는, 프록시 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  147. 제144항 또는 제145항에 있어서, 효과인자 폴리펩티드가 질병과 연관된 상실되거나 기능이상한 폴리펩티드, 또는 그의 단편을 포함하는, 프록시 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  148. 제146항에 있어서, 질병이 근육퇴행 위축; 낭포성 섬유증 중에서 선택되는, 프록시 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  149. 제144항 또는 제145항에 있어서, 표적 핵산이 병리학적 핵산인 핵산으로서 확인되는, 프록시 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  150. 제144항 또는 제145항에 있어서, 표적 폴리펩티드가 병리학적 폴리펩티드인 폴리펩티드로서 확인되는, 프록시 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  151. 제144항 또는 제145항에 있어서, 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드가 병리상태의 영향으로 세포 상의 변화로서 확인되는, 프록시 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  152. 제133항에 있어서, 질병이 신경학적 질병; 신장 질병; 심혈관계 질병; 간 질병; 염증성 질병; 낭포성 섬유증; 신경변성 질병; 염증성 질병; 면역 장애를 포함하는 군 중에서 선택되는, 프록시 분열-생체 분자성 접합체의 용도.
  153. 제1항, 제85항, 제99항, 제116항 또는 제131항 중의 어느 한 항에 제시된 하나 이상의 생체 분자성 접합체를 포함하며, 하나 이상의 생체 분자성 접합체를 예비부하시킨 중합체성 나노입자를 포함하는 제약 조성물.
  154. a. 대상체에게, 분열-탐지인자 분자를 포함하는 분열 생체 분자성 접합체의 제약 조성물의 유효량을 투여하는데, 각각의 분열-탐지인자 폴리펩티드 단편이 질병 또는 장애와 연관되는 특별한 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드에 대해 특이적인 2개의 프로브 중의 하나 이상과 접합되는 단계;
    b. 활성 탐지인자 분자를 형성시키는데, 이러한 활성 탐지인자 분자의 형성이 질병 또는 장애와 연관되는 표적 핵산 또는 표적 폴리펩티드와 2개 이상의 프로브와의 결합에 의해 촉진되는 단계; 및
    c. 활성 탐지인자 분자의 수준을 측정하는데, 이러한 활성 탐지인자 분자의 수준이 대상체에게서 표적 핵산 또는 병원성 폴리펩티드의 측정치인 단계
    를 포함하는, 대상체에게서 병원성 표적 핵산 또는 병원성 폴리펩티드의 수준을 측정하는 방법.
  155. 제154항에 있어서, 탐지인자 폴리펩티드가 β-락타마제; DFHR; 루시퍼라제; 형광성 단백질 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함하는 군 중에서 선택되는 방법.
  156. 제154항에 있어서, 대상체에게서 제1 시점에서의 병원성 표적 핵산 또는 병원성 폴리펩티드의 수준을, 제2 시점에서의 병원성 표적 핵산 또는 병원성 폴리펩티드의 수준과 비교하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  157. 제154항에 있어서, 제3항의 방법에 따르는 분열-생체 분자성 접합체를 이용하여 대상체의 치료 진행을 측정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
KR1020097010746A 2006-10-27 2007-10-26 질병, 악성 종양 및 장애를 치료하기 위한 표적화 분열 생체 분자성 접합체, 및 그의 생성 방법 KR20090073255A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US85489206P 2006-10-27 2006-10-27
US60/854,892 2006-10-27

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20090073255A true KR20090073255A (ko) 2009-07-02

Family

ID=39789617

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020097010746A KR20090073255A (ko) 2006-10-27 2007-10-26 질병, 악성 종양 및 장애를 치료하기 위한 표적화 분열 생체 분자성 접합체, 및 그의 생성 방법

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20100047179A1 (ko)
EP (1) EP2097109A2 (ko)
JP (1) JP2010509194A (ko)
KR (1) KR20090073255A (ko)
CN (1) CN101687047A (ko)
AU (1) AU2007352344A1 (ko)
CA (1) CA2667621A1 (ko)
IL (1) IL198358A0 (ko)
MX (1) MX2009004464A (ko)
RU (1) RU2009120007A (ko)
SG (1) SG177995A1 (ko)
WO (1) WO2008133709A2 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101853508B1 (ko) * 2009-12-29 2018-06-20 큐알엔에이, 인크. 종양 단백질 63 (ｐ63)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 ｐ63에 관련된 질환의 치료

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7662554B2 (en) 2002-10-09 2010-02-16 The Trustees Of Boston University Nucleic acid supported protein complementation
US20090220942A1 (en) * 2005-10-27 2009-09-03 Natalia Broude Activated split-polypeptides and methods for their production and use
WO2012003281A2 (en) * 2010-06-30 2012-01-05 Brandeis University Small-molecule-targeted protein degradation
CN102079780B (zh) * 2010-11-19 2013-06-05 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 蓖麻毒素a链突变体的构建及作为候选疫苗抗原
CN105007951B (zh) * 2012-09-26 2020-07-14 科罗拉多大学董事会法人团体 治疗乙型肝炎的组合物和方法
US9012170B2 (en) 2013-01-16 2015-04-21 Massachusetts Institute Of Technology Split peroxidases and methods of use
CN103739714B (zh) * 2013-12-30 2016-06-01 江苏众红生物工程创药研究院有限公司 TNFα与DC-SIGN的融合蛋白及其应用
EP3541415A4 (en) * 2016-11-21 2020-10-14 Tribiotica Llc PROXIMITY ENHANCED REACTIVITY FRAGMENTED PROTEIN MATRIX ASSEMBLY METHODS
WO2018160908A1 (en) * 2017-03-03 2018-09-07 Flagship Pioneering, Inc. Methods and systems for modifying dna
CN112888710B (zh) * 2018-09-30 2023-06-09 美国杰科实验室有限公司 一种多肽组合物
WO2020176553A1 (en) * 2019-02-25 2020-09-03 Sense Therapeutics Inc. Intracellular mutation targeting therapy
JPWO2021010442A1 (ko) * 2019-07-16 2021-01-21
CN111793685B (zh) * 2020-08-26 2021-08-06 河南省生殖健康科学技术研究院(河南省出生缺陷干预工程技术研究中心) 一种与单纯性先天性心脏病相关的snp标志物及其应用
CN112500464A (zh) * 2021-01-04 2021-03-16 吉林大学 一种抗贾第虫作用靶点的锌脂蛋白及医用用途
CN113957031A (zh) * 2021-12-06 2022-01-21 上海市农业科学院 一种完全降解硝基苯的大肠杆菌工程菌的构建方法及其应用

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9113475D0 (en) * 1991-06-21 1991-08-07 Hafslund Nycomed As Chemical compound
CA2075858C (en) * 1991-08-15 1998-05-19 Scott J. Eisenbeis Detection of complementary nucleotide sequences
WO1993017715A1 (en) * 1992-03-05 1993-09-16 Board Of Regents, The University Of Texas System Diagnostic and/or therapeutic agents, targeted to neovascular endothelial cells
EP0642582A1 (en) * 1992-05-22 1995-03-15 Dana Farber Cancer Institute Hybrid siv/hiv-1 viral vectors and monkey model for aids
EP0712444A1 (en) * 1993-07-20 1996-05-22 University Of Massachusetts Medical Center In vivo nucleic acid hybridization method
US5854033A (en) * 1995-11-21 1998-12-29 Yale University Rolling circle replication reporter systems
US6780413B2 (en) * 1996-09-19 2004-08-24 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Immunotoxin (mAB-RICIN) for the treatment of focal movement disorders
CA2196496A1 (en) * 1997-01-31 1998-07-31 Stephen William Watson Michnick Protein fragment complementation assay for the detection of protein-protein interactions
US6294330B1 (en) * 1997-01-31 2001-09-25 Odyssey Pharmaceuticals Inc. Protein fragment complementation assays for the detection of biological or drug interactions
EP0878552A1 (en) * 1997-05-13 1998-11-18 Erasmus Universiteit Rotterdam Molecular detection of chromosome aberrations
US6287772B1 (en) * 1998-04-29 2001-09-11 Boston Probes, Inc. Methods, kits and compositions for detecting and quantitating target sequences
CA2331919A1 (en) * 1998-06-23 1999-12-29 Medical Research Council Structured antisense nucleic acid molecules
US7306904B2 (en) * 2000-02-18 2007-12-11 Olink Ab Methods and kits for proximity probing
EP1269199A2 (en) * 2000-04-04 2003-01-02 Medical Research Council Methods involving induced dimerisation by cellular components
US6951947B2 (en) * 2000-07-13 2005-10-04 The Scripps Research Institute Labeled peptides, proteins and antibodies and processes and intermediates useful for their preparation
GB0226727D0 (en) * 2002-11-15 2002-12-24 Medical Res Council Intrabodies
WO2003093793A2 (en) * 2002-05-01 2003-11-13 Trellis Bioscience, Inc. Binary or polynary targeting and uses thereof
US7662554B2 (en) * 2002-10-09 2010-02-16 The Trustees Of Boston University Nucleic acid supported protein complementation
GB0226729D0 (en) * 2002-11-15 2002-12-24 Medical Res Council Intracellular antibodies
JP2009513141A (ja) * 2005-10-27 2009-04-02 トラスティーズ オブ ボストン ユニバーシティ タンパク質相補によるリアルタイムインビボ核酸検出
US20090220942A1 (en) * 2005-10-27 2009-09-03 Natalia Broude Activated split-polypeptides and methods for their production and use
WO2007062466A1 (en) * 2005-11-29 2007-06-07 The University Of Sydney Demibodies: dimerisation-activated therapeutic agents

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101853508B1 (ko) * 2009-12-29 2018-06-20 큐알엔에이, 인크. 종양 단백질 63 (ｐ63)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 ｐ63에 관련된 질환의 치료

Also Published As

Publication number Publication date
WO2008133709A3 (en) 2010-01-14
US20100047179A1 (en) 2010-02-25
JP2010509194A (ja) 2010-03-25
EP2097109A2 (en) 2009-09-09
CA2667621A1 (en) 2008-11-06
AU2007352344A1 (en) 2008-11-06
SG177995A1 (en) 2012-02-28
CN101687047A (zh) 2010-03-31
RU2009120007A (ru) 2010-12-10
MX2009004464A (es) 2009-11-02
IL198358A0 (en) 2010-02-17
WO2008133709A2 (en) 2008-11-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20090073255A (ko) 질병, 악성 종양 및 장애를 치료하기 위한 표적화 분열 생체 분자성 접합체, 및 그의 생성 방법
US11401305B2 (en) Nucleic acids encoding repetitive amino acid sequences rich in proline and alanine residues that have low repetitive nucleotide sequences
JP7386161B2 (ja) 腫瘍ホーミング及び細胞透過性ペプチド免疫抗がん剤複合体、ならびにそれらの使用方法
US20140065172A1 (en) Delivery system and conjugates for compound delivery via naturally occurring intracellular transport routes
CA2768598A1 (en) Delivery system and conjugates for compound delivery via naturally occurring intracellular transport routes
JP2008505853A (ja) 細胞傷害性薬剤としての非天然のリボヌクレアーゼ複合体
JP2022120155A (ja) 改変された膜型セリンプロテアーゼ１（ｍｔｓｐ－１）ポリペプチドおよび使用方法
CN111225975A (zh) 抗体介导的cas9向哺乳动物细胞的递送
KR20220106222A (ko) N-아세틸갈락토사민 결합 폴리펩티드에 기초한 mRNA 표적 분자 및 이의 제조 방법
WO2020174070A1 (en) Cell membrane penetrating conjugates for gene editing
JP2023551482A (ja) Ｐｄ－ｌ１結合ペプチド及びペプチド複合体及びそれらの使用方法
CZ292689B6 (cs) Rekombinantní lektin z jmelí
Lu et al. Targeting cancer gene dependencies with anthrax-mediated delivery of peptide nucleic acids
Xia et al. Engineering hierarchical recognition‐mediated senolytics for reliable regulation of cellular senescence and anti‐atherosclerosis therapy
US9976131B2 (en) Ribotoxin molecules derived from sarcin and other related fungal ribotoxins
JP5252622B2 (ja) 高いヌクレアーゼ耐性と優れたｒｎａ干渉効果を発現可能な二本鎖ｒｎａ
WO2022095853A1 (zh) 一种溶酶体靶向的核酸嵌合体的制备及应用
Jäger et al. Generation and characterization of iduronidase-cleavable ADCs
US20230116223A1 (en) Nuclease-scaffold composition delivery platform
JP2008167739A (ja) Ｒｎａ干渉効果が高い修飾型二本鎖ｒｎａ
CN1966529A (zh) 含有促性腺激素释放素和绿脓毒素功能片段的重组毒性剂
CN113817071B (zh) 一种egfr靶向的trail融合蛋白及其制备方法和用途
US12006502B2 (en) Therapeutic compounds for red blood cell-mediated delivery of an active pharmaceutical ingredient to a target cell
WO2017053290A1 (en) Ribotoxin molecules derived from sarcin and other related fungal ribotoxins
McNiff et al. Metal-bound cla MP Tag inhibits proteolytic cleavage

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid