KR20090064826A

KR20090064826A - 암세포의 전이 억제 활성을 갖는 폴리펩타이드 또는 그의융합 단백질

Info

Publication number: KR20090064826A
Application number: KR1020070132173A
Authority: KR
Inventors: 한장희
Original assignee: 강원대학교산학협력단
Priority date: 2007-12-17
Filing date: 2007-12-17
Publication date: 2009-06-22
Also published as: KR100941678B1

Abstract

본 발명은 막횡단 단백질의 일종인 paired immunoglobulin-like receptor α 또는 β (PILRα 또는 PILRβ)에서 유래한 암세포의 전이 억제 활성을 갖는 폴리펩타이드 또는 그의 융합 단백질을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 이를 포함하는 벡터, 및 상기 벡터로 형질전환된 형질전환체를 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 폴리펩타이드 또는 그의 융합 단백질을 포함하는 암세포의 전이 억제용 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 폴리펩타이드 또는 그의 융합 단백질은 암세포의 결합조직에서의 이동과 혈관외 유출을 억제함으로써, 암세포의 전이를 억제할 수 있다.

암 전이, 암세포이동

Description

암세포의 전이 억제 활성을 갖는 폴리펩타이드 또는 그의 융합 단백질{Polypeptides or fusion proteins thereof having an inhibitory activity against metastasis of cancer cells}

본 발명은 막횡단 단백질의 일종인 PILRα 또는 PILRβ에서 유래한 암세포의 전이 억제 활성을 갖는 폴리펩타이드 또는 그의 융합 단백질에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 이를 포함하는 벡터, 및 상기 벡터로 형질전환된 형질전환체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 폴리펩타이드 또는 그의 융합 단백질을 포함하는 암세포의 전이 억제용 약학 조성물에 관한 것이다.

발암원(carcinogen)에 의해 변화된 암세포는 정상세포보다 빠르게 증식을 하며 종양(tumors) 덩어리를 형성하고, 주변의 조직에 침투하며 정상적인 신체 기능을 저해한다. 암세포는 혈관신생을 유도함으로써, 영양분과 산소를 공급받을 뿐 아니라, 혈관신생에 의해 암세포가 전이되게 된다. 암세포는 특정부위에서 무한 성장을 할 뿐만 아니라, 기존의 성장부위를 이탈하여 새로운 부위로 이동하여 성장을 하는데 이러한 과정을 전이(metastasis)라고 한다. 전이과정은 암세포가 이동성이 높은 중간엽성 세포로 변화하여 기존 조직에서 이탈하는 단계, 주위 결합조직과 모세혈관을 침윤하고 이동하는 단계, 혈관 내에서 이동한 후 혈관 밖으로 유출하는 단계, 결합조직 내에서의 이동 및 새로운 부위에서의 성장단계 등으로 구분할 수 있다.

종양세포의 전이과정에서 세포유착분자의 세포표면 발현과 활성화 조절은 매우 중요한 역할을 한다 (Zetter, B. R. (1993). Adhesion molecules in tumor metastasis. Semin Cancer Biol. 4: 219). 종양세포의 전이 과정은 세포유착물질의 세포면 발현 형태나 활성도의 조절을 통하여 이루어지며, 전이현상의 온전한 이해를 위해서는 세포 유착 분자들뿐만 아니라 이들의 발현과 기능을 조절하는 물질에 대한 이해가 필수적이다. (Bailly, M., Yan, L., Whitesides, G. M., Condeelis, J. S., and Segall, J. E. (1998). regulation of Protusion Shape and Adhesion to the sustratum during chemoacic esponses of mammalian carcinoma cells. Exp Cell Res. 241: 285; Frisch, S. M., Vuori, K., Ruoslahti, E., and Chan-Hui., P. (1996). Control of adhesion-dependent cell survival by focal adhesion kinase. J Cell Biol 134: 793; 및 Hannigan, G. E., Leung-Hagesteijn, C. , Fitz-Gibbon, L., Coppolino, M. G., Radeva, G., Filmus, J., Bell, J. C., and Dedhar, S. (1996). Regulation of cell adhesion and anchorage-dependent growth by a new β1-integrin-linked protein kinase. Nature 379: 91).

본 발명자는 CD99 분자가 활성화되면 β₁인테그린(β₁integrin)의 기능을 변화시켜, 암세포가 세포외 기질(extracellular matrix, ECM)에 부착하는 것을 억제함으로써, 암전이 과정에 관여할 수 있음을 개시한 바 있다(Suh JS., 2001. Control of invasiveness of human breast carcinoma cell line MCF-7 by CD99 molecule. Kangwon National University). 또한, 본 발명자는 CD99로부터 유래된 특정 서열을 갖는 펩타이드 단편이 CD99를 효과적으로 활성화시킴으로써, 암세포의 성장 및/또는 전이를 억제할 수 있으며, 또한 혈관신생 및 염증 억제 활성을 갖는다는 것을 개시한 바 있다 (대한민국 특허등록 제10-0758006호; 대한민국 특허출원 제10-2006-0060890호; 대한민국 특허출원 제10-2006-0067440호; 국제특허공개 제WO 2007/037601호).

한편, CD99의 천연리간드로 밝혀진 PILR family는 PILRα와 PILRβ로 구성되어 있다. (Mousseau, D.D., D. Banville, D. L'Abbe, P. Bouchard, and S.-H. Shen. 2000. PILRα, a novel immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif-bearing protein, recruits SHP-1 upon tyrosine phosphorylation and is paired with the truncated counterpart PILRβ. J. Biol . Chem . 275:4467; Fournier, N., L. Chalus, I. Durand, E. Garcia, J.J. Pin, T. Churakova, S. Patel, C. Zlot, D. Gorman, S. Zurawski, et al. 2000. FDF03, a novel inhibitory receptor of the immunoglobulin superfamily, is expressed by human dendritic and myeloid cells. J. Immunol . 165:1197). PILRα와 PILRβ는 당질화된 세포 밖 부위, 세포막 횡단부위와 세포 내 부위로 구성된 제1형 막횡단 단백질로서, PILRα와 PILRβ의 세포 밖 부위는 매우 유사한 아미노산 서열로 이루어진 데에 반하여, 세포질부위는 매우 상이하다. PILRα의 세포질부위에는 immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs (ITIMs)가 있어 세포의 활성을 억제하는 것으로 알려져 있다. 이에 반하여 자연살해세포(Natural killer cell)나 수지상세포(dendritic cell)에서 발현되는 PILRβ에는 ITIM이 없으며, 리간드가 결합하면 PILRα와는 달리 세포들을 활성화시킨다 (Shiratori I., Ogasawara K., Saito T., Lanier LL., Arase H. (2004). Activation of natural killer cells and dendritic cells upon recognition of a novel CD99-like ligand by paired immunoglobulin-like type 2 receptor. J Exp Med 199: 525).

본 발명자들은 CD99 분자를 활성화시킴으로써 암 전이를 억제할 수 있는 리간드를 개발하고자 다양한 연구를 시도한 결과, CD99의 천연 리간드인 PILRα 또는 PILRβ로부터 유래된 특정 서열을 갖는 폴리펩타이드가 CD99를 효과적으로 활성화시킴으로써, 암세포의 전이를 억제할 수 있음을 발견하였다.

따라서, 본 발명은 PILRα 또는 PILRβ로부터 유래된 폴리펩타이드로서, 암세포의 전이 억제 활성을 갖는 폴리펩타이드 또는 그의 융합 단백질을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 이를 포함하는 벡터를 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 벡터로 숙주세포를 형질전환시킨 형질전환체를 제공하 는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 폴리펩타이드 또는 그의 융합 단백질을 유효성분으로 포함하고, 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 암세포의 전이 억제용 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 일 태양에 따라, 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 구성된 폴리펩타이드로부터 유래되고, 서열번호 1 또는 2의 123 ∼ 129번의 펩타이드를 포함하는 7 내지 200개의 아미노산으로 이루어진 폴리펩타이드로서, 암세포의 전이 억제 활성을 갖는 폴리펩타이드가 제공된다. 상기 폴리펩타이드는 서열번호 3 내지 5 및 7 내지 11의 폴리펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 다른 태양에 따라, 상기 폴리펩타이드와 폴리히스티딘(poly-His) 영역 또는 Fc 영역과의 융합 단백질이 제공되며, 상기 폴리히스티딘 영역 및 Fc 영역은 각각 서열번호 13 및 14의 아미노산 서열을 가질 수 있다.

본 발명의 또 다른 태양에 따라, 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 제공되며, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 15 내지 17 및 19 내지 23의 폴리뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 또 다른 태양에 따라, 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 상기 벡터로 숙주세포, 예를 들어 에스케리치아 속(Escherichia genus) 균주 또는 피키아 속(Pichia genus) 균주를 형질전환시킨 형질전환체가 제공된다.

본 발명의 또 다른 태양에 따라, 상기 폴리펩타이드 또는 융합 단백질을 유효성분으로 포함하고, 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 암세포의 전이 억제용 약학 조성물이 제공된다.

본 발명의 폴리펩타이드 또는 그의 융합 단백질은 암세포의 결합조직에서의 이동과 혈관외 유출을 억제함으로써, 암세포의 전이를 억제할 수 있다. 따라서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 융합 단백질은 전이암 치료제로서 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명자들은 CD99 분자를 활성화시킬 수 있는 리간드에 대하여 다양한 검색을 실시하였다. 막횡단 단백질의 일종인 PILRα 또는 PILRβ이 CD99 분자의 천연리간드로 작용할 수 있다는 점에 착안하여, PILRα 또는 PILRβ로부터 다양한 길이의 리간드를 제조하여 검색을 실시하였다. 놀랍게도, PILRα 또는 PILRβ로부터 유래된 특정 서열을 포함하는 폴리펩타이드가 암세포의 표면에 높은 친화성으로 결합하여 이들의 이동을 억제함으로써, 전이암 치료제로서의 활성을 갖는다는 것을 발견하였다.

본 발명은 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 구성된 폴리펩타이드로부터 유래되고, 서열번호 1 또는 2의 123 ∼ 129번의 펩타이드를 포함하는 7 내지 200개, 바람직하게는 7 내지 160개, 더욱 바람직하게는 7 내지 151개의 아미노산으로 이루어진 폴리펩타이드로서, 암세포의 전이 억제 활성을 갖는 폴리펩타이드를 포함 한다. 상기 본 발명에 따른 폴리펩타이드는 서열번호 3 내지 5 및 7 내지 11의 폴리펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명은 또한 상기 폴리펩타이드와 폴리히스티딘(poly-His) 영역 또는 Fc 영역과의 융합 단백질을 포함한다. 상기 폴리히스티딘(poly-His) 영역은 표지 펩타이드 중 하나로서, 히스티딘 결합 수지와 결합하여 본 발명의 폴리펩타이드를 분리 및 정제하는 데 사용될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 융합 단백질에 있어서, 상기 폴리히스티딘(poly-His) 영역은 서열번호 13의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 상기 Fc 영역은 폴리펩타이드의 혈액내 안정성을 증가시키는데 사용될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 융합 단백질에 있어서, 상기 Fc 영역은 서열번호 14의 아미노산 서열을 가질 수 있다.

본 발명은 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 상기 폴리뉴클레오티드는 PILRα 또는 PILRβ를 코딩하는 공지의 핵산 서열로부터 통상의 방법에 따라 제조할 수 있다. 바람직하게는 상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 15 내지 17 및 19 내지 23의 염기서열을 가질 수 있다.

본 발명은 또한, 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함한다. 상기 벡터의 클로닝 벡터로 사용가능한 벡터로는 공지된 다양한 벡터를 사용할 수 있으며, 예를 들면, pPICZα A, B, C (Invitrogen사, 미국) 등을 사용할 수 있다. 또한, 상기 클로닝 벡터는 폴리히스티딘(poly-His) 영역을 코딩하는 DNA가 삽입되어 있는 벡터, 예를 들면 pET28a(+) 벡터(Novagene사, 미국)또는 Fc 영역을 코딩하는 DNA(예를 들어, 서열번호 25의 염기서열로 구성된 cDNA) 를 통상의 벡터, 예를 들면 pET28a(+) 벡터(Novagene사, 미국)에 삽입시켜 제조한 벡터를 사용할 있다. 상기 벡터는 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 유전자를 적절한 제한효소로 절단한 클로닝 벡터에 통상의 방법으로 삽입시켜 제조할 수 있다. 상기 본 발명에 따른 벡터는 유전자 치료의 목적으로 유전자 치료용 조성물에 직접 함유되거나, 형질전환체 제조를 위해 사용될 수도 있다.

본 발명은 또한, 상기 벡터로 숙주세포를 형질전환시킨 형질전환체를 포함한다. 상기 숙주세포로는 상기한 폴리펩타이드가 효과적으로 발현될 수 있다면, 특별히 제한되는 것은 아니며, 에스케리치아 속(Escherichia genus) 균주(예를 들어, 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli)), 피키아 속(Pichia genus) 균주(예를 들어, X-33 Pichia; Invitrogen사, 미국) 등을 바람직한 숙주 세포로 사용할 수 있다.

본 발명은 상기 폴리펩타이드 또는 그의 융합 단백질을 유효성분으로 포함하고, 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 암세포의 전이 억제용 약학 조성물을 포함한다.

본 발명의 약학 조성물은 락토즈, 옥수수전분 등의 부형제, 마그네슘 스테아레이트 등의 윤활제, 공지되어 사용가능한 유화제, 현탁제, 완충제, 등장화제 등을 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구 투여 형태, 바람직하게는 비경구 투여형태로 제제화될 수 있다. 근육내, 복강내, 피하 및 정맥내 투여 형태의 경우, 통상 활성 성분의 멸균 용액을 제조하고, 용액의 pH를 적합하게 조절할 수 있는 완충제를 포함할 수 있으며, 정맥내 투여의 경우 제제에 등장성이 부여되도록 등장화제를 포함 할 수 있다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 pH가 7.4인 염수와 같은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 수용액제의 형태가 될 수 있으며, 용액제의 형태로 국소적으로 환자의 근육내 혈류에 도입할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 암세포의 전이를 효과적으로 억제함으로써, 유방암, 위암, 대장암, 결장암, 직장암, 췌장암을 비롯한 다양한 고형암 또는 골수성 백혈병 등의 암환자에게 투여될 수 있으며, 그 투여용량은 통상 각 환자의 연령, 체중 및 환자의 증상에 따라 일반적으로 변화시킬 수 있는 용량, 예를 들어 1일 약 0.01 내지 10 mg/kg의 용량으로 투여될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명이 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 폴리펩타이드의 합성

서열번호 3 내지 12의 폴리펩타이드를 각각 코딩하는 서열번호 15 내지 24의 cDNA 단편을 pET28a(+) 벡터에 삽입하여, pET28a-hPILRα 또는 pET28a-hPILRβ 벡터를 각각 6종류씩 제조하였다. 즉, PCR을 통해 서열번호 15 내지 24의 cDNA 단편을 얻은 뒤 말단부위를 EcoRI으로 절단한 후, 결합효소를 이용하여 cDNA 단편들을 동일한 제한효소로 절단된 pET28a(+) 벡터에 결합함으로써 6종류의 pET28a-hPILRα 및 pET28a-hPILRβ 벡터를 각각 제조하였다. 또한 서열번호 8의 경우 인간의 면역글로불린 Fc 영역을 코딩하는 cDNA(즉, 서열번호 25의 염기서열로 구성된 cDNA)를 pET28a(+) 벡터에 삽입시켜 제조한 pET28a(+)-Fc 벡터에 삽입하여, pET28a-hPILRα VI-Fc (또는 pET28a-hPILRβ VI-Fc) 벡터를 제조하였다.

얻어진 발현 벡터를 BL21(DE3) 세포에 형질전환시켜 얻은 콜로니를 LB배지에서 약 4 내지 6시간 배양한 후, 흡광도(A600)가 0.4-0.6이 되었을 때 7 내지 9시간 동안 이소프로필 β-D-1-티오갈락토피라노사이드 (isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG) (1.4 mM)를 첨가하여 발현을 유도하였다. 세포를 원심분리를 통하여 침전시킨 후, 인산 완충 식염수(phosphate buffered saline, PBS)로 세척한 후 다시 침전시켜 배지에 있는 불순물을 제거하였다. SDS-PAGE 겔을 통해서 발현이 유도되었는지 여부를 확인하였다.

발현된 단백질의 분리를 위해 8M 우레아 완충액 (8M urea, 0.01M Tris-Cl , 0.1M NaH₂PO₄)을 사용했으며, 분리 단계에 따라 pH 농도를 8.0 , 6.3 , 4.5 등으로 제조하여 사용하였다. 단백질분해효소 억제제들 (1mM PMSF, 10 ㎍/㎖ leupeptin, 1 ㎍/㎖, pepstatin, 1 ㎍/㎖ aprotinin)이 첨가된 pH 8.0 완충액으로 세포를 용해한 후에 4℃, 13000 rpm의 조건에서 20분간 원심분리하였다. 얻어진 상층액을 히스티딘 결합 수지(His binding resin)인 Ni-NTA His Bind Resin(Novagen사, 미국)과 1 ㎖ 에펜도르프 튜브 상에서 혼합한 후에 4℃에서 16 시간 동안 반응시켜, 발현된 단백질의 히스티딘과 수지의 결합을 유도하였다. 얻어진 반응 혼합물을 원심분리하고, 상층액을 버리고, pH 6.3 완충액으로 세척하였다. PBS로 투석한 후, 정량하여 냉장 보관하였다.

상기와 같이 제조된 폴리펩타이드 및 이를 코딩하는 cDNA 서열을 요약하면 하기 표 1 및 도 1과 같다. 서열번호 1 및 2에서 알 수 있는 바와 같이, PILRα V 및 VI는 PILRβ V 및 VI의 서열과 동일한 아미노산 서열 및 염기서열을 갖는다.

	단편	폴리펩타이드	cDNA
PILR α I	1-151	서열번호 3	서열번호 15
PILR α II	67-151	서열번호 4	서열번호 16
PILR α III	120-151	서열번호 5	서열번호 17
PILR α IV	67-119	서열번호 6	서열번호 18
PILR α V	120-129	서열번호 7	서열번호 19
PILR α VI	123-129	서열번호 8	서열번호 20
PILR β I	1-151	서열번호 9	서열번호 21
PILR β II	67-151	서열번호 10	서열번호 22
PILR β III	120-151	서열번호 11	서열번호 23
PILR β IV	67-119	서열번호 12	서열번호 24
PILR β V	120-129	서열번호 7	서열번호 19
PILR β VI	123-129	서열번호 8	서열번호 20

실시예 2. 폴리펩타이드를 포함하는 조성물의 제조

서열번호 3 내지 12의 폴리펩타이드를 PBS에 용해시켜, 부피 100 ㎕ 중 3 ㎍ 의 농도가 되도록 제조하였다. 얻어진 단백질 용액을 하기 시험예에서 사용하였다.

시험예 1. 사람 유방암세포와 세포외기질 간의 부착 억제 시험

서열번호 3 내지 6 및 9 내지 12의 폴리펩타이드가 사람 유방암세포 MCF-7 (human breast cancer cell)의 파이브로넥틴(fibronectin)에 대한 부착에 미치는 영향을 측정하였다.

세포외 기질 성분의 하나인 파이브로넥틴을 96 웰(well) 세포배양판에 도말하여 자외선 하에서 건조하였다. MCF-7 세포를 웰당 5 x 10⁴이 되도록 준비한 다음, 실시예 2에서 제조한 서열번호 3 내지 6 또는 9 내지 12의 펩타이드 용액을 3 ㎍의 농도로 세포에 처리한 후 1시간 동안 배양하였다. PBS로 3회 세척한 후, 트립신-EDTA(Trypsin-EDTA)를 이용하여 세포외 기질에 유착되어있는 세포를 걷어낸 다음 트리판-블루(Trypan-blue)용액으로 염색하고, 혈구계산기(hemacytometer)를 사용하여 유착한 세포수를 측정하였다. 그 결과는 도 2a 및 2b와 같다.

도 2a 및 2b에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 폴리펩타이드를 처리한 경우, 파이브로넥틴에 유착한 내피 세포의 갯수가 대조군에 비해서 약 10 ∼ 40% 정도 감소된다. 그러나, 서열번호 1 및 2의 123 ∼ 129번째 아미노산을 포함하지 아니한 서열번호 6 또는 12의 폴리펩타이드의 경우는 대조군과 유사한 유착도를 나타내었다.

시험예 2. 암세포의 침윤 억제능 시험

인테그린(integrin)의 리간드인 파이브로넥틴(fibronectin)을 트랜스웰에 미리 도말한 후, 5 x 10⁵개의 인간 유방암 세포주 MCF-7을 트랜스웰의 상단부에 넣고 배양하였다. 24시간 경과 후, 세포가 80% 이상 자라면 서열번호 3 내지 8의 펩타이드를 3 ㎍의 농도로 처리하여 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 1 시간 동안 배양하였다. 0.1% BSA를 가하고, 트랜스웰 하단부에는 침윤유도배지(NIH 3T3 세포를 0.005% 비타민 C, 1% BSA, DMEM 혈청제거 배양액에서 24시간 동안 배양하여 얻은 배양상층액)를 넣어준 후 24시간 주기로 트랜스웰의 하단부에 떨어진 세포 수를 3회에 걸쳐 측정하였다. 각각의 시험은 3회씩 수행하여 그 결과를 통계처리 하였다. 대조군으로서 Fc 펩타이드를 상기 펩타이드 대신 처리하였다. 그 결과는 도 3과 같다.

도 3에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 서열번호 3 내지 5 및 7 내지 8의 펩타이드를 처리한 경우 Fc의 펩타이드를 처리한 대조군에 비해서 인간 유방암 세포의 세포외 물질을 침윤하는 정도가 약 20% 수준으로 억제된다. 혈관 밖으로 빠져나온 암세포는 바닥막이나 주위 결합조직을 침윤하는 과정을 거쳐 새로운 부위로 전이하는 것을 감안할 때, 본 발명의 폴리펩타이드는 효과적인 암세포 전이 억제 활성을 가짐을 알 수 있다.

시험예 3. 암세포의 시험관 내( in vitro ) 혈관외 유출 억제능 시험

세공의 지름이 8 ㎛인 트랜스웰에 침윤 유도 배지(생쥐 섬유모세포인 NIH/3T3를 0.005% 비타민C와 0.1% 소혈청알부민이 첨가된 DMEM 무혈청배지에서 16시간 배양한 후 원심분리하여 얻은 상등액)를 가한 후, 이를 3군으로 나누었다. 첫 번째 군은 5 X 10⁵인간 유방암 세포주 MCF-7을 Fc로 구성된 대조군 펩타이드 3 ㎍로 처리하고(대조군), 두 번째 군은 동수의 MCF-7 세포들을 서열번호 7의 펩타이드 3 ㎍로 처리하고, 세 번째 군은 동수의 MCF-7 세포들을 서열번호 8의 펩타이드 3 ㎍로 처리하였다. 각 웰을 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 1시간 동안 배양한 후, 0.1% BSA를 가하고 6시간 이후에, 침윤 유도 배지가 담겨 있는 트랜스웰의 하단으로 빠져나온 세포의 수를 측정하였다. 그 결과는 도 4와 같다.

도 4에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 폴리펩타이드를 처리한 경우, 인간 유방암 세포의 혈관외 유출이 약 80% 수준으로 억제된다. 혈관 내로 침윤한 암세포가 혈관을 따라 이동하다가 장기로 전이되기 위해서는 혈관 밖으로 유출되는 과정이 수반됨을 감안할 때, 본 발명의 폴리펩타이드는 효과적인 암세포 전이 억제 활성을 가질 것으로 기대된다.

도 1은 서열번호 3 내지 12의 폴리펩타이드의 구조를 나타낸다.

도 2a 및 도 2b는 본 발명의 폴리펩타이드가 사람유방암세포주 MCF-7의 파이브로넥틴(fibronectin)에 대한 부착에 미치는 영향을 측정한 결과를 나타낸다.

도 3은 본 발명의 펩타이드를 처리하였을 때, 파이브로넥틴을 침윤한 인간 유방암 세포의 갯수를 측정한 결과를 나타낸다.

도 4는 사람 유방암 세포주 MCF-7에 본 발명의 폴리펩타이드를 처리하였을 때, 혈관 외로 유출된 사람 유방암 세포의 갯수를 측정한 결과를 나타낸다.

<110> KNU-Industry Cooperation Foundation <120> Polypeptides or fusion proteins thereof having an inhibitory activity against metastasis of cancer cells <130> PN0154 <160> 25 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 303 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Pro Leu Leu Leu Pro Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Gln Pro Ser Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser Tyr Leu 20 25 30 Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met Gly Gly Ser 35 40 45 Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala Thr Ala 50 55 60 Pro Asp Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Arg Gln Ser 65 70 75 80 Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg 85 90 95 Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Lys Ser Gly Phe Leu Arg Ile 100 105 110 Ser Asn Leu Gln Lys Gln Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu 115 120 125 Leu Asp Thr Arg Ser Ser Gly Arg Gln Gln Trp Gln Ser Ile Glu Gly 130 135 140 Thr Lys Leu Ser Ile Thr Gln Ala Val Thr Thr Thr Thr Gln Arg Pro 145 150 155 160 Ser Ser Met Thr Thr Thr Trp Arg Leu Ser Ser Thr Thr Thr Thr Thr 165 170 175 Gly Leu Arg Val Thr Gln Gly Lys Arg Arg Ser Asp Ser Trp His Ile 180 185 190 Ser Leu Glu Thr Ala Val Gly Val Ala Val Ala Val Thr Val Leu Gly 195 200 205 Ile Met Ile Leu Gly Leu Ile Cys Leu Leu Arg Trp Arg Arg Arg Lys 210 215 220 Gly Gln Gln Arg Thr Lys Ala Thr Thr Pro Ala Arg Glu Pro Phe Gln 225 230 235 240 Asn Thr Glu Glu Pro Tyr Glu Asn Ile Arg Asn Glu Gly Gln Asn Thr 245 250 255 Asp Pro Lys Leu Asn Pro Lys Asp Asp Gly Ile Val Tyr Ala Ser Leu 260 265 270 Ala Leu Ser Ser Ser Thr Ser Pro Arg Ala Pro Pro Ser His Arg Pro 275 280 285 Leu Lys Ser Pro Gln Asn Glu Thr Leu Tyr Ser Val Leu Lys Ala 290 295 300 <210> 2 <211> 227 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu Gln Pro Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Gln Pro Gly Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser Tyr Leu 20 25 30 Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met Gly Gly Ser 35 40 45 Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala Ile Val 50 55 60 Pro Asn Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly Gln Ser 65 70 75 80 Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg 85 90 95 Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Glu Ser Gly Phe Leu Arg Ile 100 105 110 Ser Asn Leu Arg Lys Glu Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu 115 120 125 Leu Asp Thr Arg Arg Ser Gly Arg Gln Gln Leu Gln Ser Ile Lys Gly 130 135 140 Thr Lys Leu Thr Ile Thr Gln Ala Val Thr Thr Thr Thr Thr Trp Arg 145 150 155 160 Pro Ser Ser Thr Thr Thr Ile Ala Gly Leu Arg Val Thr Glu Ser Lys 165 170 175 Gly His Ser Glu Ser Trp His Leu Ser Leu Asp Thr Ala Ile Arg Val 180 185 190 Ala Leu Ala Val Ala Val Leu Lys Thr Val Ile Leu Gly Leu Leu Cys 195 200 205 Leu Leu Leu Leu Trp Trp Arg Arg Arg Lys Gly Ser Arg Ala Pro Ser 210 215 220 Ser Asp Phe 225 <210> 3 <211> 151 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment <400> 3 Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Pro Leu Leu Leu Pro Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Gln Pro Ser Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser Tyr Leu 20 25 30 Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met Gly Gly Ser 35 40 45 Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala Thr Ala 50 55 60 Pro Asp Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly Gln Ser 65 70 75 80 Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg 85 90 95 Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Lys Ser Gly Phe Leu Arg Ile 100 105 110 Ser Asn Leu Gln Lys Gln Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu 115 120 125 Leu Asp Thr Arg Ser Ser Gly Arg Gln Gln Trp Gln Ser Ile Glu Gly 130 135 140 Thr Lys Leu Ser Ile Thr Gln 145 150 <210> 4 <211> 85 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment <400> 4 Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly Gln Ser Phe Tyr 1 5 10 15 Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg Leu Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Lys Ser Gly Phe Leu Arg Ile Ser Asn 35 40 45 Leu Gln Lys Gln Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu Leu Asp 50 55 60 Thr Arg Ser Ser Gly Arg Gln Gln Trp Gln Ser Ile Glu Gly Thr Lys 65 70 75 80 Leu Ser Ile Thr Gln 85 <210> 5 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment <400> 5 Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu Leu Asp Thr Arg Ser Ser Gly 1 5 10 15 Arg Gln Gln Trp Gln Ser Ile Glu Gly Thr Lys Leu Ser Ile Thr Gln 20 25 30 <210> 6 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment <400> 6 Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly Gln Ser Phe Tyr 1 5 10 15 Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg Leu Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Lys Ser Gly Phe Leu Arg Ile Ser Asn 35 40 45 Leu Gln Lys Gln Asp 50 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment <400> 7 Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu Leu 1 5 10 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment <400> 8 Tyr Phe Cys Arg Val Glu Leu 1 5 <210> 9 <211> 151 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment <400> 9 Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu Gln Pro Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Gln Pro Gly Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser Tyr Leu 20 25 30 Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met Gly Gly Ser 35 40 45 Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala Ile Val 50 55 60 Pro Asn Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly Gln Ser 65 70 75 80 Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg 85 90 95 Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Glu Ser Gly Phe Leu Arg Ile 100 105 110 Ser Asn Leu Arg Lys Glu Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu 115 120 125 Leu Asp Thr Arg Arg Ser Gly Arg Gln Gln Leu Gln Ser Ile Lys Gly 130 135 140 Thr Lys Leu Thr Ile Thr Gln 145 150 <210> 10 <211> 85 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment <400> 10 Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly Gln Ser Phe Tyr 1 5 10 15 Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg Leu Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Glu Ser Gly Phe Leu Arg Ile Ser Asn 35 40 45 Leu Arg Lys Glu Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu Leu Asp 50 55 60 Thr Arg Arg Ser Gly Arg Gln Gln Leu Gln Ser Ile Lys Gly Thr Lys 65 70 75 80 Leu Thr Ile Thr Gln 85 <210> 11 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment <400> 11 Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu Leu Asp Thr Arg Arg Ser Gly 1 5 10 15 Arg Gln Gln Leu Gln Ser Ile Lys Gly Thr Lys Leu Thr Ile Thr Gln 20 25 30 <210> 12 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment <400> 12 Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly Gln Ser Phe Tyr 1 5 10 15 Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg Leu Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Glu Ser Gly Phe Leu Arg Ile Ser Asn 35 40 45 Leu Arg Lys Glu Asp 50 <210> 13 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> poly-His fragment <400> 13 His His His His His His 1 5 <210> 14 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fc fragment <400> 14 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 15 <211> 453 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide fragment <400> 15 atgggtcggc ccctgctgct gcccctactg cccttgctgc tgccgccagc atttctgcag 60 cctagtggct ccacaggatc tggtccaagc tacctttatg gggtcactca accaaaacac 120 ctctcagcct ccatgggtgg ctctgtggaa atccccttct ccttctatta cccctgggag 180 ttagccacag ctcccgacgt gagaatatcc tggagacggg gccacttcca caggcagtcc 240 ttctacagca caaggccgcc ttccattcac aaggattatg tgaaccggct ctttctgaac 300 tggacagagg gtcagaagag cggcttcctc aggatctcca acctgcagaa gcaggaccag 360 tctgtgtatt tctgccgagt tgagctggac acacggagct cagggaggca gcagtggcag 420 tccatcgagg ggaccaaact ctccatcacc cag 453 <210> 16 <211> 255 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide fragment <400> 16 gtgagaatat cctggagacg gggccacttc cacaggcagt ccttctacag cacaaggccg 60 ccttccattc acaaggatta tgtgaaccgg ctctttctga actggacaga gggtcagaag 120 agcggcttcc tcaggatctc caacctgcag aagcaggacc agtctgtgta tttctgccga 180 gttgagctgg acacacggag ctcagggagg cagcagtggc agtccatcga ggggaccaaa 240 ctctccatca cccag 255 <210> 17 <211> 96 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide fragment <400> 17 cagtctgtgt atttctgccg agttgagctg gacacacgga gctcagggag gcagcagtgg 60 cagtccatcg aggggaccaa actctccatc acccag 96 <210> 18 <211> 159 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide fragment <400> 18 gtgagaatat cctggagacg gggccacttc cacaggcagt ccttctacag cacaaggccg 60 ccttccattc acaaggatta tgtgaaccgg ctctttctga actggacaga gggtcagaag 120 agcggcttcc tcaggatctc caacctgcag aagcaggac 159 <210> 19 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide fragment <400> 19 cagtctgtgt atttctgccg agttgagctg 30 <210> 20 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide fragment <400> 20 tatttctgcc gagttgagct g 21 <210> 21 <211> 453 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide fragment <400> 21 atgggtcggc ccctgctgct gcccctgctg ctcctgctgc agccgccagc atttctgcag 60 cctggtggct ccacaggatc tggtccaagc tacctttatg gggtcactca accaaaacac 120 ctctcagcct ccatgggtgg ctctgtggaa atccccttct ccttctatta cccctgggag 180 ttagccatag ttcccaacgt gagaatatcc tggagacggg gccacttcca cgggcagtcc 240 ttctacagca caaggccgcc ttccattcac aaggattatg tgaaccggct ctttctgaac 300 tggacagagg gtcaggagag cggcttcctc aggatctcaa acctgcggaa ggaggaccag 360 tctgtgtatt tctgccgagt cgagctggac acccggagat cagggaggca gcagttgcag 420 tccatcaagg ggaccaaact caccatcacc cag 453 <210> 22 <211> 255 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide fragment <400> 22 gtgagaatat cctggagacg gggccacttc cacgggcagt ccttctacag cacaaggccg 60 ccttccattc acaaggatta tgtgaaccgg ctctttctga actggacaga gggtcaggag 120 agcggcttcc tcaggatctc aaacctgcgg aaggaggacc agtctgtgta tttctgccga 180 gtcgagctgg acacccggag atcagggagg cagcagttgc agtccatcaa ggggaccaaa 240 ctcaccatca cccag 255 <210> 23 <211> 96 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide fragment <400> 23 cagtctgtgt atttctgccg agtcgagctg gacacccgga gatcagggag gcagcagttg 60 cagtccatca aggggaccaa actcaccatc acccag 96 <210> 24 <211> 159 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide fragment <400> 24 gtgagaatat cctggagacg gggccacttc cacgggcagt ccttctacag cacaaggccg 60 ccttccattc acaaggatta tgtgaaccgg ctctttctga actggacaga gggtcaggag 120 agcggcttcc tcaggatctc aaacctgcgg aaggaggac 159 <210> 25 <211> 993 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Fc fragment sequence <400> 25 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 300 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa tga 993

Claims

서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열로 구성된 폴리펩타이드로부터 유래되고, 서열번호 1 또는 2의 123 ∼ 129번의 펩타이드를 포함하는 7 내지 200개의 아미노산으로 이루어진 폴리펩타이드로서, 암세포의 전이 억제 활성을 갖는 폴리펩타이드.
제1항에 있어서, 상기 폴리펩타이드가 서열번호 3 내지 5 및 7 내지 11의 폴리펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 폴리펩타이드.
제1항 또는 제2항의 폴리펩타이드와 폴리히스티딘(poly-His) 영역과의 융합 단백질.
제3항에 있어서, 상기 폴리히스티딘 영역이 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 융합 단백질.
제1항 또는 제2항의 폴리펩타이드와 Fc 영역과의 융합 단백질.
제5항에 있어서, 상기 Fc 영역이 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 융합 단백질.
제1항 또는 제2항의 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
제7항에 있어서, 서열번호 15 내지 17 및 19 내지 23의 폴리뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드.
제1항 또는 제2항의 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
제9항에 있어서, 상기 벡터가 폴리히스티딘(poly-His) 영역 또는 Fc 영역을 코딩하는 cDNA가 삽입되어 있는 것을 특징으로 하는 벡터.
제9항의 벡터로 숙주세포를 형질전환시킨 형질전환체.
제11항에 있어서, 상기 숙주세포가 에스케리치아 속(Escherichia genus) 균주 또는 피키아 속(Pichia genus) 균주인 것을 특징으로 하는 형질전환체.
제1항 또는 제2항의 폴리펩타이드를 유효성분으로 포함하고, 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 암세포의 전이 억제용 약학 조성물.
제1항 또는 제2항의 폴리펩타이드와 폴리히스티딘(poly-His) 영역과의 융합 단백질을 유효성분으로 포함하고, 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 암세포의 전이 억제용 약학 조성물.
제1항 또는 제2항의 폴리펩타이드와 Fc 영역과의 융합 단백질을 유효성분으로 포함하고, 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 암세포의 전이 억제용 약학 조성물.