KR20090047209A - 동백나무 잎 추출물을 유효성분으로 하는 항 알레르기조성물 - Google Patents

동백나무 잎 추출물을 유효성분으로 하는 항 알레르기조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 동백나무 (Camellia japonica L.) 추출물의 항 알레르기 효과에 대한 것으로 국내에서 자생하는 식물인 동백나무의 추출물이 아토피성 피부염, 천식, 알레르기성 비염, 계절성 알레르기 등 다양한 알레르기 질환의 원인인 비만세포의 탈 과립을 억제시키고, 시험관 및 알레르기 동물모델에서 우수한 항 알레르기 효과를 보임으로써 추후, 이 추출물을 이용한 항 알레르기 기능성 식품, 의약품 및 화장품으로의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 기존의 알레르기 치료에서 증상을 완화하는 접근법에서 그 근본 원인인 비만세포를 억제함으로 우수한 항 알레르기 효과를 가질뿐더러 독성과 부작용 없는 기능성 식품, 의약품 및 화장품으로 개발이 될 것으로 사료된다.
동백나무 추출물, 항 알레르기 추출물, 비만세포

Description

동백나무 잎 추출물을 유효성분으로 하는 항 알레르기 조성물{Anti-allergy composition comprising leaves extract of Camellia japonica L.}
본 발명은 동백나무(Camellia japonica L.) 잎 추출물을 유효성분으로 하는 항 알레르기 조성물에 관한 것이다.
일반적으로 비만세포 및 혈중 호염구는 여러 가지 알레르기 질환 즉, 알레르기성 비염, 알레르기성 피부염, 천식, 음식 알레르기, 그리고 아나필락틱 쇼크 등을 유발하는 체내 세포로 알려져 있다. 이들 세포는 세포표면에 알레르기 원인 항체인 IgE에 대한 수용체 (FcεRI)를 가지고 있고, 그것은 알레르기를 유발하는 물질 (항원 혹은 앨러젠으로 불리워짐)에 의해 자극을 받아 자신이 가지고 있는 히스타민 등 다양한 알레르기를 유발시키는 물질을 세포 바깥으로 분비한다.
알레르기를 치료하는 다양한 방법들이 존재하며 이를 간단히 소개하고자 한다. 현재 대부분의 알레르기 치료는 그 원인을 없애기보다는 증상을 완화하는 방향으로 연구가 진행되어지고 있다. 대표적으로 앨러젠에 의해 비만세포 등에서 분비된 히스타민이나 류코트리엔 등의 수용체에 대한 길항제들이 주를 이루고 이러한 약물들이 거대한 시장을 이루고 있다. 그러나 이러한 약물은 환자에게서 투여 후 단기간 내에 내성을 보이기 때문에 환자들의 증상호전을 위한 경우가 대부분이다. 따라서 본 발명에서는 비만세포 등에서 알레르기 물질분비를 원천적으로 차단함으로서 환자에게서 일어나는 항히스타민제 등의 부작용이 없는 알레르기 치료제를 개발하고자 하였다.
다른 치료 방법으로 알레르기환자가 앓고 있는 알레르기에 대한 알레르겐을 규명한 후 이를 소량씩 수년간 투여하여 그 알레르기를 점차 감소시키는 방법이다. 하지만 이 방법은 치료기간이 우선 수년이 걸린다는 단점이 있으며 아나필락틱 쇼크 등을 유발 시킬 수 있다는 단점이 있다. 다음으로 DNA백신을 사용하는 방법, IgE가 비만세포의 수용체에 결합하는 것을 차단하는 치료법, 그리고 알레르기를 유발 하는 사이토카인인 IL-4에 대한 항체 치료법 등의 치료적 접근법이 있으나 이러한 접근법들은 비용이 많이 들거나 아직 완전히 그 치료효과가 규명되지 않았다는 단점이 있다.
본 발명에 따른 동백나무는 일본으로부터 중국남부에 걸쳐서 아시아 원산으로 약 200여종이 분포하고 있으며, 이 중에서 약 70여종이 동백아속(亞屬), 즉 동백(C. japonica)과 애기동백(C. sasanqua)의 근연종이다. 그 중 한국에 자생하는 동백나무는 1종(Camellia japonica L.)으로 동백나무과(Theaceae), 동백속(Camelliae)의 교목이다. 잎은 건선(乾癬), 인후통증(咽喉痛症), 화상(火傷)에 효능이 있고, 가지와 열매는 머리비듬, 보혈(補血), 비출혈(鼻出血), 어혈(瘀血), 연골증(軟骨症), 월경이상(月經異常), 이뇨(利尿), 인후통증(咽喉痛症), 장출혈(腸出血), 종독(腫毒), 타박상(打撲傷), 토혈(吐血)과 각혈(血), 행혈(行血), 화상(火 傷)에 효과가 있다고 알려져 있으나 동백나무 추출물에 대한 항 알레르기효과에 관한 연구는 알려진 바가 없다.
이에 본 발명자들은 한국에 자생하는 자생식물 추출물들을 선택하여 실험해 오던 중 그 중 동백나무 추출물이 저 농도에서 비만세포로부터 알레르기 유발물질의 분비를 억제한다는 것을 발명하였으며 또한 알레르기 동물모델에서도 우수한 항 알레르기 효과가 있음을 발명하여 추후 이 물질을 임상에 적용시키기 위해 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 아토피성 피부염, 알레르기성 비염, 천식 등 인간에게 불편함을 주거나 치명적인 다양한 알레르기를 유발하는 비만세포로부터 분비된 알레르기 유발물질의 분비를 차단함으로서 그 질환을 치료할 수 있는 소재를 오래전부터 민간요법으로 사용하고 있는 자생식물들부터 확보하여 부작용은 극소화하고 효과는 극대화시킨 항 알레르기 소재를 제공하는 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 유효량의 동백나무(Camellia japonica L.) 잎 추출물을 유효성분을 포함하는 항 알레르기 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 유효량은 환자의 체중, 건강상태, 나이 등에 따라 다르겠으나 효과 및 투여 용량을 고려할 때 ㎏ 체중 당 1 ㎎에서 ㎏ 체중 당 500 ㎎인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 추출물은 열탕 또는 용매 추출에 의하여 추출된 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 열탕 추출은 100 - 120℃의 열탕에서 2 - 3시간 동안 가열하는 조건에서 수행되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 용매 추출에서 용매는 저급 알코올인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 용매 추출에서 용매는 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 추출물은 비만세포의 탈과립을 억제하는 것을 특징으로 하나 이에 한정되는 것은 아니다.
이하 본 발명을 설명한다.
본 발명은 동백나무(Camellia japonica L.) 추출물의 항 알레르기 효과에 대한 것으로 자생식물인 동백나무의 잎, 줄기, 열매의 추출물은 알레르기 유발원인 비만세포의 탈과립을 억제하였으며 특히 잎 추출물은 각종 알레르기 질환의 원인인 비만세포의 탈과립을 가장 강력하게 억제시키고, 시험관 및 동물모델에서 우수한 항 알레르기 효과를 보임으로써 추후 이 추출물을 이용한 항 알레르기 기능성 화장품, 식품이나 의약품에 대한 것이다.
상기 목적을 달성하기위해 본 발명은 항 알레르기 효과를 가지는 동백나무 추출물 및/또는 그 추출물이 함유된 조성물로 한다.
또한, 본 발명은 상기 동백나무로부터 항 알레르기 효과를 가지는 동백나무 추출물의 제조 방법으로 제공한다.
아울러, 본 발명은 상기 동백나무 추출물을 유효성분으로 함유한 항 알레르기 효과가 있는 조성물로 한다.
이하 본 발명을 자세히 설명한다.
본 발명은 우수한 항 알레르기 효과를 나타내는 동백나무 추출물 및/또는 약 학적으로 허용되는 그의 염을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 동백나무 잎은 국내에서 자생하는 자원식물로서 보존 및 활용가치가 높은 동백나무(Camellia japonica L.)의 줄기, 열매, 혹은 잎 등을 물이나 유기용매를 이용하여 추출한 혹은 그와 유사한 방법으로 동백나무 추출물을 사용하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에서는 이러한 용도 이외에도 항 알레르기 효과를 발명함으로서 그 용도로 이용하기를 바란다.
본 발명자들은 이러한 동백나무 추출물의 항 알레르기 효과를 검색하여 그 추출물이 우수한 약리효과가 있음을 비만세포 및 실험동물 모델에서 확인하였다.
또한, 본 발명은 우수한 항 알레르기 효과를 나타내는 동백나무 추출물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 제조방법은 열탕 추출 및 유기용매 추출방법으로 나뉠 수 있는데, 열탕 추출방법은
1) 동백나무 줄기, 열매 혹은 잎을 증류수로 세척하여 분쇄기로 잘게 분쇄하는 단계;
2) 상기 잘게 분쇄된 동백나무 줄기, 열매 혹은 잎을 열탕에서 가열하여 동백나무 추출물을 얻는 단계;
3) 상기 동백나무 추출물들을 여과하여 상등액을 얻고 농축하는 단계; 및
4) 상기 동백나무 농축액 들을 냉동시킨 후 -80℃에서 동결건조하여 엑기스 분말을 얻는 단계로 이루어진다.
단계 1에서 동백나무 줄기, 열매 혹은 잎 원료 100g에 대하여 물 1.0 ℓ를 첨가한 후 단계 2에서 동백나무 잎을 100 - 120℃의 열탕에서 2 - 3시간 동안 가열하여 추출하는 것이 바람직하고 이때, 일정한 온도를 유지하고 증기로의 손실을 막기 위하여 냉각기를 설치하였다.
또한, 유기용매 추출방법은
1) 동백나무 잎을 저급 알코올에 침지시켜 초음파 추출기로 추출하여 알콜 추출물을 얻는 단계 ;
2) 이로부터 얻은 동백나무 줄기, 열매 혹은 잎 추출물을 농축하는 단계; 및
3) 상기 동백나무 농축액들을 냉동시킨 후 -80℃에서 동결건조하여 엑기스 분말을 얻는 단계로 이루어진다.
본 발명자들은 동백나무를 저급 알코올에 침지시켜 반복 추출함으로써 항 알레르기 효과를 나타내는 동백나무의 알코올 추출물을 얻었다. 단계 1에서 약 95% 에탄올을 사용하였으며, 초음파 추출기를 2주 - 3주 동안 처리하여 추출물을 얻는다.
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 동백나무 추출물은 알레르기를 유발하는 비만세포의 탈과립작용 및 알레르기의 동물모델에서 알레르기의 유발을 저농도에서 억제하였으며, 예로부터 민간요법으로 많이 사용되어져 온 자생식물임을 생각할 때 알레르기 발병을 억제하는 기능성 화장품, 식품 및 의약품으로의 개발이 용이한 천연 추출물이다. 따라서 기존의 증상 회복 위주의 치료와는 달리 비만세 포에서의 알레르기 유발 물질의 분비를 원천적으로 차단함으로써 다양한 부작용이없는 화장품, 의약품 뿐 아니라 식품 등의 선택적 기능성 첨가제로서 유용하게 사용할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시 예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시 예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시 예에 한정되는 것은 아니다.
(실시예 1) 동백나무 줄기, 열매 혹은 잎 추출물의 제조
본 발명자들은 우수한 항 알레르기 효과를 나타내는 동백나무 추출물을 얻기 위하여 열탕 및 유기용매 추출방법을 이용하여 동백나무 추출물을 제조하였다.
(1-1) 열탕 추출방법
동백나무 줄기, 열매 혹은 잎의 열탕 추출물을 제조하기 위하여, 동백나무 줄기, 열매 혹은 잎을 증류수로 세척하여 분쇄기로 잘게 분쇄한 후 잘게 분쇄된 동백나무를 열탕에서 가열하여 동백나무 추출물들을 얻었다. 이때, 동백나무 줄기, 열매 혹은 잎 원료 각 100 g에 대하여 물 1.0 ℓ를 첨가한 후 100 - 120℃의 열탕에서 2 - 3시간 동안 가열하여 추출하였고 일정한 온도를 유지하고 증기로의 손실을 막기 위하여 냉각기를 설치하였다. 이로부터 얻은 동백나무 추출물을 여과하여 상등액을 얻고 이를 농축기를 이용하여 농축하였다. 상기 동백나무 농축액을 냉동시켜 -80℃에서 동결건조하여 동백나무 추출물의 엑기스 분말을 제조하였다.
(1-2) 유기용매 추출방법
동백나무 줄기, 열매 혹은 잎의 유기용매 추출물을 제조하기 위하여, 동백나무를 저급 알코올에 침지시켜 초음파 추출기로 2 - 3주 동안 추출하여 알코올 추출물을 얻은 후 상층액 만을 분리하여 이를 거즈에 걸러 이물질을 제거하였다. 알코올로는 95% 에탄올을 사용하였다. 상기공정에 의해 얻은 알코올 추출물을 농축기를 이용하여 농축한 후 냉동시키고 -80℃에서 동결건조하여 동백나무 줄기, 열매 혹은 잎 추출물의 엑기스 분말을 제조하였다.
(실시예 2) 동백나무 추출물의 비만세포에 대한 알레르기 유발물질 분비 억제 효과.
본 발명자들은 상기 실시예 1로부터 추출한 동백나무 줄기, 열매 혹은 잎 추출물이 체내에서 알레르기를 유발하는 비만세포로부터 알레르기 유발 물질의 분비 억제 효과를 검색하였다. RBL-2H3 세포는 글루타민, 항생제와 15% 우혈청이 보충된 최소배지에서 배양되었다. 분비실험을 하기 위해 세포는 트립신에 의해 수거 후 24-well 배양기에 well당 200,000개의 세포를 25 ng/ml DNP-특이성 IgE와 같이 배양하였다. 다음날 세포는 PIPES 완충액 (25 mM PIPES, pH 7.2, 159 mM NaCl, 5 mM KCl, 0.4 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 5.6 mM glucose, 그리고 0.1% BSA) 으로 세척되어지고 항원이 가해지기 전에 30분 동안 전배양을 한다. 전 배양 후 항원이 최종농도 25 ng/ml로 자극하였다. 알레르기 유도물질의 분비정도는 배지중에 분비된 탈과 립의 표식자인 hexosaminidase의 활성을 p-nitrophenyl- acetyl-β-D-glucosaminidedbfo의 p-nitrophenol의 양으로 결정하였다
(2-1) 항원에 의한 비만세포로부터 알레르기 유발물질의 분비에 대한 동백나무 줄기, 열매 혹은 잎 추출물의 억제효과 (표 1)
항원에 의한 RBL-2H3 비만세포로부터 알레르기 유발물질의 분비가 동백나무 줄기, 열매 꽃 및 잎 추출물에 의해 유의성있게 억제되었다. 하지만 잎 추출물의 경우에서 가장 뛰어난 억제효과를 보였다.
(2-2) 항원에 의한 비만세포로부터 알레르기 유발물질의 분비에 대한 동백나무 잎의 억제효과 (도면 1a).
항원에 의한 골수세포 비만세포 혹은 RBL-2H3 비만세포로부터 알레르기 유발물질의 분비가 동백나무 잎의 추출물의 의해 저농도 (IC50: 약 50 ㎍/㎖)에서 유의하게 억제되었으며 100 ㎍/㎖에서 분비가 90% 이상 억제 되었다.
사용부위 탈과립억제율(%, 100 μg/ml)
94.5
줄기 65.8
열매 55.4
10.7
특히 동백나무 꽃 추출물 경우 억제율이 100 ug/ml에서 약 10.7%정도 억제되었으며 IC50는 < 400 ug/ml 이상이어서 동맥나무 잎과는 상당한 차이가 있었음을 볼 수 있었다. 참고로 동백나무잎의 경우 50 ug/ml IC50 (50% 활성 억제 농도)를 보임. 꽃과는 약 8 -10 이상의 차이를 볼수 있음.
(2-3) 동백나무 잎의 비만세포 활성화 억제의 가역적 효과 (도면 1b)
비만세포의 탈 과립에 대한 동백나무 잎의 억제효과는 30분 전배양 후 항원으로 자극하기 전에 배지로 5회 정도 씻어준 후 항원을 처리하였을 때, 도면 1b에서 보는 바와 같이 동백나무 잎에 의한 탈 과립 억제가 회복되는 것을 확인할 수 있었다. 이와 같은 결과를 통해 동백나무 잎의 항원에 의한 비만세포로부터 알레르기 유발물질의 분비억제가 가역적임을 알 수 있었다. 이러한 가역적 비만세포 탈과립 억제는 비가역적인 성질로부터 올 수 있는추출물의 부작용을 예방하는 장점을 가진다.
(실시예 3) 알레르기 동물 모델에서 항 알레르기 효과 검색
ICR mice 한쪽 귀에 면역글로블린 E를 0.5 ㎍씩 피내주사 한 후, 12 시간 감작시킨다. 감작한 후 5% arabic gum에 현탁시킨 동백나무 잎을 용량별로 경구 투여하고 1시간 후 항원 용액 250 ㎕ (1 ㎎ 항원 + 5 ㎎ 에반스블루/㎖ PBS 용액)를 꼬리정맥을 통해 주입한다. 주입 30분 후 mice의 귀를 떼어내어 63℃ 700 ㎕의 포름아마이드 용액에서 12시간 동안 추출시켰다. 추출된 에반스블루를 620 ㎚에서 흡광도를 측정하여 항 알레르기 효과를 확인하였고, 그 결과는 도면 2에 정리하였다.
도면 2에 나타난 바와 같이, 동백나무 잎 추출물은 항원에 의한 알레르기 반응을 ㎏당 300 ㎎ 투여군에서 35.4 %가 억제되었고, ㎏당 1,000 ㎎ 투여군에서 66.1 %가 억제되었다. 이로부터 본 발명의 동백나무 잎 추출물이 항원에 의해 유도된 알레르기 동물 모델에서도 높은 억제하는 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
(실시예 4) 동백나무 잎 추출물의 비만세포에 대한 작용기전에 대한 연구 (도면 3)
본 발명자들은 상기 실시예 1로부터 추출한 동백나무 잎 추출물이 체내에서 알레르기를 유발하는 비만세포 내 알레르기 유발의 원인이 되는 다양한 신호전달경로 중 Syk-LAT에 대한 활성화 억제 효과를 검색하였다. RBL-2H3 세포를 6 well-plate에 well당 1.0 x 106 씩 분주한 후, 20 ng/ml DNP 특이적 면역글로블린 E가 포함되어 있는 MEM 배지에서 12시간 동안 배양하여 세포를 감작시켰다. 그 세포를 동백나무 잎 추출물 로 30분 전 처치 후 항원으로 자극시킨 세포를 ice-cold PBS로 두 번 씻어준 후, Lysis buffer (20 mM HEES, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1% Nonidet p-40, 10% Glycerol, 60 mM octyl-β-glucoside, 10 mM NaF, 1 mM Na3VO4, 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride, 2.5 mM nitrophenylphosphate, 0.7 ㎍/㎖ pepstatin, and a protease-inhibitor tablet)로 용해시켰다. 다음으로, 13,000 rpm으로 5분간 원심분리하여, 상층액을 2x laemmli sample buffer 와 섞어 100℃에서 5분간 단백질변성과정을 진행하였다. 이렇게 얻은 단백질시료를 10% 또는 12%의 poly acrylamide gel (polyacrylamide:bis acrylamide = 29:1)을 사용하여 120V에서 1시간 30분 동안 SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis) 진행한 후, 300 mA로 1시간 30분 동안 nitrocellulose membrane (Schleicher & Schuell, BA85)로 Transfer 시켰다. TBS-T (10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.05% Tween-20)로 5% skim milk나 5% BSA을 만들어 한 시간 동안 Blocking 시킨 다음, 각각의 특이적인 항체와 한 시간 동안 반응시켰다. 그리고, HRP (horseradish peroxidase)가 붙은 단일클론 항체 또는 다클론 항체로 한 시간 동안 반응시킨 다음, 비특이적으로 남아있는 항체를 TBS-T로 씻어 제거해주고 ECL detection kit (Amersham Pharmacia Biotech)를 사용하여 X-ray 필름에 감광시켰다. 그 결과, 동백나무 잎 추출물 10 ㎍/㎖에서 Syk과 LAT의 인산화 정도가 감소하기 시작하여 30과 100 ㎍/㎖에서는 단백질의 인산화가 거의 억제됨을 확인할 수 있었다.
(실시예 5) 동백나무 잎 추출물의 비만세포에 대한 사이토카인 생성억제효과 연구 (도면 4)
알레르기에 관계된 비만세포에서 분비되는 사이토카인으로 잘 알려진 종양괴사인자-α(TNF-α)와 인터루킨-4(IL-4)에 대한 동백나무 잎의 억제효과를 보기위해 각각의 사이토카인에 특이적인 primer를 이용 RT-PCR을 실시하였다. 우선 6 well plate에서 자극시킨 RBL-2H3 세포를 trizol reagent(Invitrogen)로 용해시켰다. 용해된 시료를 1.5 ml E-tube에 옮긴 후, 클로로포름(Chloroform)을 200 ㎕넣어 섞고, 12,000 g에서 20분 동안 원심분리하여 얻은 상층액과 이소프로판올(isopropanol)을 1:1로 섞은 후 -20℃에서 RNA를 한 시간 이상 침전시켰다. 그 후 12,000 g에서 20 분간 원심분리하여 RNA를 완전히 침전시킨 뒤, 에탄올로 한번 씻어주고 DEPC-water 50 ㎕에 녹여서 total RNA를 얻었다. PCR (polymerase chain reaction)은 94℃, 45초, 55℃, 45초, 72℃, 60초를 30회 반복하였다. Primer는 Rat TNF-α는 forward 5’-CAC CAC GCT CTT CTG TCT ACT GAA C-3’(서열번호 1), reverse는 5’-CCG GAC TCC GTG ATG TCT AAG TAC T-3’(서열번호 2), IL-4는 forward 5’-CCG ATT ATG GTGTAA TTT CCT ATG CTG-3’(서열번호 3), reverse는 5’-GGC CAA TCA GCA CCT CTC TTC CAG-3’(서열번호 4)이고 Rat GAPDH forward는 5’-GTG GAG TCT ACT GGCGTC TTC-3’(서열번호 5), reverse는 5’-CCA AGG CTG TGG GCA AGG TCA-3’(서열번호 6)이다.
그 결과, 동백나무 잎 10 ㎍/㎖에서 종양괴사인자(TNF-α)의 발현이 감소하기 시작하여 30 ㎍/㎖ 이하에서 거의 억제되었으며, 인터루킨-4(IL-4)에서는 30 ㎍/㎖에서 발현이 감소하기 시작하여 100 ㎍/㎖에서 거의 감소하여, 동백나무 잎에 의한 사이토카인 생산에 대한 억제정도는 유의적이고 농도 의존적으로 감소됨을 알 수 있었다.
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 동백나무 추출물은 우수한 항 알레르기 효과가 있는 소재임이 증명되었다.
도 1a은 본 발명의 동백나무 잎 추출물이 사람에게 알레르기를 유발 하는 비 만세포의 실험 모델인 골수유래의 비만세포 (BMMC)와 RBL-2H3 비만세포에 대한 동백나무 잎 추출물의 농도 의존적 억제효과에 대한 도면이다. 도 1b는 본 추출물의 약효의 가역성에 대한 실험결과이다.
도 2는 동백나무의 다양한 부위의 추출물에 대한 비만세포의 탈과립 (히스타민 분비)에 대한 약효실험 결과이다.
도 3은 국소성 알레르기 동물모델에 대한 본 발명에 따른 동백나무 잎 추출물의 억제효과를 나타낸 도면이다.
도 4는 동백나무 잎 추출물의 작용기전에 대한 웨스턴 블롯팅(Western Blotting)의 결과이다.
도 5는 활성화된 비만세포에서 염증성 사이토카인인 종양괴사인자 (TNF-α), 인터루킨-4 (IL-4) 발현에 대한 동백나무 잎 추출물의 억제효과를 나타낸 결과이다.
<110> Konkuk University Industrial Cooperation Corp. <120> Anti-allergy composition comprising leaves extract of Camellia japonica L. <160> 6 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rat TNF-alpha forward <400> 1 caccacgctc ttctgtctac tgaac 25 <210> 2 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rat TNF-alpha reverse <400> 2 ccggactccg tgatgtctaa gtact 25 <210> 3 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-4 forward <400> 3 ccgattatgg tgtaatttcc tatgctg 27 <210> 4 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-4 reverse <400> 4 ggccaatcag cacctctctt ccag 24 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rat GAPDH forward <400> 5 gtggagtcta ctggcgtctt c 21 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Rat GAPDH reverse <400> 6 ccaaggctgt gggcaaggtc a 21

Claims (11)

  1. 유효량의 동백나무(Camellia japonica L.) 잎 추출물을 유효성분을 포함하는 항 알레르기 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 유효량은 ㎏ 체중 당 1 ㎎에서 ㎏ 체중 당 500 ㎎인 것을 특징으로 하는 항 알레르기 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 열탕 또는 용매 추출에 의하여 추출된 것을 특징으로 하는 항 알레르기 조성물.
  4. 제 3항에 있어서, 상기 열탕 추출은 100 - 120℃의 열탕에서 2 - 3시간 동안 가열하는 조건에서 수행되는 것을 특징으로 하는 항 알레르기 조성물.
  5. 제 3항에 있어서, 상기 용매 추출에서 용매는 저급 알코올인 것을 특징으로 하는 항 알레르기 조성물.
  6. 제 5항에 있어서, 상기 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 항 알레르기 조성물.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 비만세포의 탈과립을 억제하는 것을 특징으로 하는 항 알레르기 조성물.
  8. a) 동백나무 줄기, 열매 혹은 잎을 열탕 또는 용매 추출하여 추출물을 얻는 단계;
    b) 상기 동백나무 추출물들을 여과하여 상등액을 얻고 농축하는 단계; 및
    c) 상기 동백나무 농축액을 냉동시킨 후 동결건조하여 엑기스 분말을 얻는 단계를 포함하는 항 알레르기 조성물의 제조방법.
  9. 제 8항에 있어서, 상기 열탕 추출은 100 - 120℃의 열탕에서 2 - 3시간 동안 가열하는 조건에서 수행되는 것을 특징으로 하는 항 알레르기 조성물의 제조방법.
  10. 제 8항에 있어서, 상기 상기 용매 추출에서 용매는 저급 알코올인 것을 특징으로 하는 항 알레르기 조성물의 제조방법.
  11. 제 10항에 있어서, 상기 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 항 알레르기 조성물의 제조방법.
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