KR20090034890A - 스트레스 내성이 향상된 유전자도입 작물 - Google Patents

Abstract

본 명세서에서 강화된 수율 및/또는 강화된 물 부족 스트레스 내성을 갖는 유전자도입 식물을 생산하는데 이용되는 NF-YB 단백질 및 NF-YB 단백질을 발현하기 위한 재조합 DNA의 신규한 조성물이 개시된다.

NF-YB 단백질

Description

스트레스 내성이 향상된 유전자도입 작물{TRANSGENIC CROP PLANTS WITH IMPROVED STRESS TOLERANCE}

관련된 출원에 대한 교차 참조

본 출원은 미국 예비 출원 (2006년 6월23일자 제출된) 60/816,086을 우선권으로 청구하는, 2007년 6월23일자로 출원된 국제 출원 PCT/US2007/014580이며, 우선권은 참고문헌으로 전문 첨부되어 있다.

서열 목록의 통합

컴퓨터 판독 가능한 서열 목록(화일명 “54485B.ST25.txt”- 70KB(MS 운영체계에서), 2007년 6월22일자 생성)을 참고자료로 첨부한다.

본 발명의 기술 분야

스트레스 내성이 향상된 종자 및 식물에 유전자도입 식물 세포와, 이와 같은 세포, 종자, 식물을 만들고 이용하는 방법에 대해 설명한다.

생물에 여러 생물적 또는 무생물적 스트레스로 인하여 작물 수율이 감소된다. 작물업자는 스트레스로부터 오는 부작용을 최소화시키기 위해 다양한 전략들을 이용하여 왔었다. 예를 들면, 잡초로 인한 스트레스는 제초제를 이용하여 줄일 수 있을 것이고, 해충으로 인한 스트레스는 살충제를 이용하여 줄일 수 있을 것이고, 물 부족으로 인한 스트레스는 관주에 의해 감소될 수 있을 것이며, 냉해로 인한 스트레스는 재배 시간을 지연시킴으로써 줄일 수 있을 것이고, 영양 부족으로 인한 스트레스는 비료로 처리함으로써 줄일 수 있을 것이다.

식물의 수율은 물 이용성, 냉기 또는 열에 노출, 인 및 질소와 같은 영양소 이용성 및 식물 밀도 및 기타 환경 인자들에 의해 영향을 받는다. 이와 같은 환경적인 스트레스에 대한 식물의 반응은 내부 유전적 기전에 의해 영향을 받을 수도 있다. 식물 유전 공학의 목적은 다양한 환경적 스트레스에 대해 내성의 강화를 포함하는 작물학적으로, 원예작물학적으로 또는 경제적으로 중요한 형질을 가지는 신규한 식물을 만드는 것이다.

육지 식물에서 물 이용 복합성을 고려하여, 특히 물 부족을 만드는 조건하에서, 이와 같은 생리학과 특별히 연관된 유전자가 상대적으로 적게 확인되어왔다. 미국 2005/0022266 A1에서는 물 부족 내성을 개선시키기 위한 특정 Hap3 CAAT box DNA 결합 전사 인자들을 발현시키는 재조합 DNA의 이용에 대해 설명한다. Hap3 전사 인자들은 식물에서 NF-YA 와 NF-YC 단백질을 가지는 복합체를 형성하는 NF-YB 단백질로도 공지되어 있다. 이들 단백질들을 집합적으로 NFY 단백질이라고 한다. 옥수수 NF-YB 단백질의 아미노산 서열이 SEQ ID NO:28이다.

발명의 요약

본 발명은 물 부족 스트레스 조건에 대항하여 보호를 할 수 있는 NF-Y 단백 질 발현을 위해 제공되는 재조합 폴리뉴클레오티드로 구성된 신규한 식물 염색체 DNA를 제공한다. 이와 같은 식물 염색체 DNA 는 자생 식물 DNA의 측면에 접하고 있다. 자연의 변화에 부응하기 위해, 식물 염색체 DNA의 구체예는 식물이 물 부족 스트레스 조건하에 생장하였을 때와 같은 대조군 작물과 비교하였을 때 향상된 수율과 충분한 물이 있는 조건에서 생장된 대조군 작물과도 비교하였을 때 이에 필적하는 또는 향상된 수율을 가지는 식물을 제공할 수 있다. 본 발명은 본 발명의 신규한 식물 염색체 DNA를 가지는 유전자도입 식물 세포, 식물, 종자 및 작물도 제공한다.

본 발명에 이용된 식물 염색체 DNA 분절의 특징은 낮은 발현을 인코드하는 재조합 폴리뉴클레오티드의 존재인데, 예를 들면 자생 NF-Y 단백질의 배경 수준의 발현에 근접한 수준에서의 구성적 발현(constitutive expression) 즉, 식물 잎 조직 세포에서 전체 단백질 ㎍당 최대 40 피코그람까지의 수준에서 잎 세포에서 NF-Y 단백질이 생산되거나 또는 이보다 적게 예를 들면, 식물 잎 조직 세포에서 전체 단백질 ㎍당 최대 약 30 또는 20 피코그람 수준으로 생산된다. 다른 구체예에서, 재조합 폴리뉴클레오티드로부터 발현되는 NF-Y 단백질은 식물 잎 조직 세포에서 전체 단백질 ㎍당 0.1 내지 11 피코그람이 된다.

본 발명의 일부 구체예에서, 재조합 폴리뉴클레오티드는 최소한 한 개 NF-Y 단백질 및 마커 단백질의 발현을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 재조합 폴리뉴클레오티드는 단일 NF-Y 단백질 발현을 제공한다.

일부 구체예에서, 재조합 폴리뉴클레오티드에 의해 발현되는 NF-Y 단백질은 자생 NF-YA, NF-YB 또는 NF-YC 단백질이다. 또 다른 구체예에서, 재조합 폴리뉴클레오티드에 의해 발현되는 NF-Y 단백질은 외생(exogenous) NF-YA, NF-YB 또는 NF-YC 단백질, 예를 들면, 아라비도프시스 탈리아나(Arabidopsis thaliana)로부터 NF-YB 단백질이다. 여전히 다른 구체예에서, 재조합 폴리뉴클레오티드에 의해 발현되는 NF-Y 단백질은 자생 NF-YA, NF-YB 또는 NF-YC의 변이체 예를 들면, 옥수수 식물 염색체 DNA에서 재조합 폴리뉴클레오티드는 자생 옥수수 DNA 서열로부터 연속 아미노산으로 구성된 다양한 NF-YB 단백질을 발현한다.

본 발명의 식물 염색체 DNA 분절은 NF-Y 단백질의 발현을 위해 매우 낮은 수준의 구성 프로모터 임의 수를 이용하여 제공된다. 이와 같은 프로모터들은 당업자에 의해 바로 확인되고, 분리될 수 있으며, 여기에는 쌀 알파 튜불린 프로모터, 쌀 악틴 프로모터, PPDK 메소필l 조직-강화된 프로모터, 루비스코 액티바제(rubisco activase) 유관속초(bundle sheath) 조직-강화된 프로모터로 구성된 군에서 선택된 프로모터를 포함할 수 있다.

본 발명의 이와 같은 식물 염색체는 물 부족 스트레스 내성을 발휘하는 것이 바람직한 식물의 유전자 도입 식물 세포에 유용하다. 이와 같은 식물 염색체 DNA는 물 부족 스트레스 내성 식물의 유전자도입 작물을 제공하는데 유용한데, 예를 들면, 상기 작물의 수확 수율은 이와 같은 식물 염색체 DNA 분절을 가지지 못하는 대조 식물의 작물 수율보다 강화된 것이다. 강수의 불예측성 및/또는 관개수 이용성 때문에, 본 발명의 식물은 식물이 생존하는 시간에 걸쳐 충분한 물이 있는 조건에서부터 식물의 수명 동안 다양한 물 부족 스트레스 조건까지 광범위한 물 충분성 조건에서 생장될 수 있을 것이다. 물 충분성에 이와 같은 변화에 부응하기 위해, 본 발명의 특정 구체예들은 물 부족 스트레스 조건에서 식물을 생장시키는 대조군 작물과 비교하였을 때 수확 수율이 증가되고 뿐만 아니라 충분한 물 조건에서 생장된 대조군 작물과 비교하였을 때에도 이에 필적하는 또는 증가된 수율을 제공하는 유전자 도입 작물을 제공한다. 이와 같은 작물에는 물 부족-내성 식물, 예를 들면 옥수수, 목화, 콩, 사탕수수, 지팽이풀, 쌀, 밀, 알파파, 또는 캐놀라 식물등이 포함된다. 본 발명의 한 측면에서, 식물 염색체 DNA는 유전자도입 옥수수 작물에 있고, 자생 옥수수 단백질 또는 이의 변이체인 NF-YB 단백질을 발현시키는 재조합 폴리뉴클레오티드로 구성된다.

본 발명의 또 다른 측면은 본 발명의 식물 염색체 DNA 분절을 포함하는 식물 세포의 반수체 유도체로 구성된 유전자도입 화분립을 제공한다. 본 발명의 또 다른 측면은 기원의 징표로서, 본 발명의 이와 같은 염색체 DNA 분절을 가지는 식물 세포가 있는 위조방지 형틀 종자이다.

본 발명의 다른 측면은 작물 품종에서 물 부족 스트레스 내성 및 수율을 개선시키는 방법을 제공하는데, 이는 본 발명의 식물 염색체 DNA 분절을 작물 품종의 게놈에 제공하는 것으로 구성된다.

본 발명의 또 다른 방법은 본 발명의 식물 염색체 DNA 분절로부터 NY-YB 단백질 발현으로 인한 강화된 물 부족 내성을 가진 유전자 도입 식물 작물 생산에 이용할 수 있는 비-자생, 유전자도입 종자 또는 번식체를 제조하기 위한 것이다. 이와 같은 방법은 물 부족 스트레스를 받고 자란 강화된 수율에 대한 이와 같은 식물 염색체 DNA 단편 및 대조 식물을 가지는 또는 물이 충분한 상태에서 자란 강화된 또는 필적할 수준의 수율을 가지는 식물 집단을 스크리닝하고, 물 부족 스트레스를 받은 상태에서의 대조 식물에 비교하였을 때 강화된 수율을 가지는 또는 물이 충분한 상태에서 자랄을 때 대조 식물의 수율과 비교하였을 때 강화된 또는 필적할 수준의 수율을 가지는 하나 또는 그 이상의 식물을 식물 집단에서 선별하고, 이와 같은 식물 염색체 DNA 분절이 선택된 식물에 안정적으로 통합되어 있는 지를 확인하고, 선택된 식물의 잎 조직을 분석하여 잎 조직의 총 단백질 ㎍당 NF-YB 단백질이 최대 40피코그램 수준으로 유전자도입 NF-YB 단백질 생산이 되는 지를 결정하고, 선택된 식물로부터 종자 또는 재생성 번식체를 수거하는 것으로 구성된다.

또 다른 방법은 본 발명의 안정적으로 통합된 염색체 DNA 분절을 가지는 제초제 내성 옥수수 식물로부터 하이브리드 옥수수 종자를 얻고, 교잡된 종자를 만들기 위해 본 발명의 염색체 DNA 분절과 반수체 유도체로 구성된 화분립을 이용하여 두 번째 옥수수 품종에 수분시켜 두 번째 옥수수 품중으로 수득된 하이브리드 옥수수 종자로부터 얻은 염색체 DNA 분절을 유전자이입(introgress)시키고, 교잡된 종자들로부터 식물 개체군을 만들기 위해(이때 수분으로부터 만들어진 종자 분취물은 염색체 DNA 분절에 대해 동형 접합성이며, 분취물은 반접합성((hemizygous)이고, 분취물은 염색체 DNA 분절을 가지고 있지 않음), 제초제로 처리하여 염색체 DNA 분절에 대한 동형접합성 및 반접합성인 옥수수 식물을 선별하고 제초제-처리된 생존 옥수수 식물로부터 종자를 수거하고, 종자를 재배하여 추가 자손 옥수수 식물을 생산하고, 자손 종자로부터 생장된 식물과 두 번째 옥수수 품종을 역교배시켜 근친교 배 옥수수 품종을 생산하는 것으로 구성된다. 이 방법은 하이브리드 종자를 생산하기 위해 근친교배 옥수수 품종과 세 번째 옥수수 품종을 교배하여 추가 이용될 수도 있다.

본 발명의 또 다른 측면은 관개수 없이 옥수수, 목화, 콩, 사탕수수, 지팽이풀, 쌀, 밀, 알파파, 또는 캐놀라 작물을 재배하는 방법을 제공하는데, 본 발명의 식물 염색체 DNA 분절과 식물 세포를 가지는 종자를 재배하는 것으로 구성되는데, 이때 종자는 물 부족 스트레스 내성이 강화된 것에 대해 선택된 식물로부터 생산된다.

도 1은 식물 형질변형 벡터 pMON82754의 플라스미드 지도이다.

도 2는 식물 형질 변형 벡터 pMON63796의 플라스미드 지도이다.

도 3은 물 부족 스트레스 상태하에 식물의 수율 효율을 설명하는데, NF-Y 단백질을 발현시키기 위한 재조합 폴리뉴클레오티드에 상이한 프로모터들이 이용되었다.

도 4는 충분한 물이 공급되는 조건하에 식물의 수율 효율을 설명하는데, NF-Y 단백질을 발현시키기 위한 재조합 폴리뉴클레오티드에 상이한 프로모터들이 이용되었다.

다른 언급이 없는 한, 여기에서 사용되는 모든 기술적 그리고 과학적 용어는 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 가진다. 하기에서 설명하는 유전자도입 식물을 준비하고 선별하는 과정은 당업자에 공지된 것으로 통상적으로 이용되는 것들이다.

여기에서 사용된 바와 같이,“물 부족”은 식물이 소비하는 속도로 식물이 이용할 수 있는 물이 공급되지 않는 기간을 말한다. 물 부족 기간이 길어지는 것을 일상적으로 가뭄이라고 한다. 식물의 생장 속도를 위해 지면수의 이용가능한 저장분이 있는 경우 강우량 부족 또는 관개의 부족이 즉각적인 물 스트레스를 만들지 않을 수도 있다. 충분한 지표수를 가지는 토양에서 생장한 식물은 비 또는 관개없이도 수율에 부작용없이 수일간 생존할 수 있다. 건조한 토양에서 생장하는 식물는 최소한의 물 부족 기간에 부작용을 겪을 수도 있을 것이다. 심각한 물 부족 스트레스는 식물을 시들게 하거나 죽이는 원인이 되며; 어느 정도의 가뭄은 수율감소의 원인이 될 수 있으며, 발육이 저해된 생장 또는 지연 발달의 원인이 될 수 있다.

수율에 심각한 영향없이 식물을 재생시킬 수 있다. 그러나, 수분(pollination)시에 물 부족은 수율이 낮아지는 비가역적인 효과를 가질 수 있다. 따라서, 물 부족 스트레스 내성을 관찰하기 위해 옥수수 라이프 사이클에서 유용한 시기는 옥수수 수염을 뜯기 전(tasseling) 생장의 마지막 발육 단계(late vegetative stage of growth) 가 된다. 물 부족 스트레스 내성은 대조 식물과 비교하여 결정한다. 예를 들면, 본 발명의 식물은 대조 식물보다 더 높은 수율을 가지고 물 부족 스트레스를 견딜 수 있다. 실험실 및 시험용 필드에서 본 발명의 식물 및 대조 식물에 충분하게 수분이 공급되는 대조 식물에 제공되는 것 이하로 물을 공급하여 가뭄 조건을 모방하여, 특징에서 차이를 관찰한다.

여기에서 설명하는 유전자도입 식물을 만들기 위해 이용된 모체 품종의 비-유전자도입 식물이 적절한 대조 식물이 될 수 있을 것이다. 대조 식물은 빈 벡터 또는 마커 유전자를 포함하는 유전자도입 식물 품종이 될 수도 있지만, 평가될 유전자 도입 식물에서 발현되는 본 발명의 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하지 않는다. 다른 경우에 대조 식물은 구성 프로모터를 가지는 유전자를 발현시키는 유전자도입 식물이다. 일반적으로, 대조 식물은 유전자도입 식물을 특징하는 특정 형질을 부여하는 재조합 DNA가 부족한, 테스트되는 유전자도입 식물과 동일한 품종이거나 변종 식물이다. 특정 형질을 부여하는 재조합 DNA가 부족한 이와 같은 원종( progenitor) 식물이 자생, 야생형 식물, 엘리트, 비-유전자도입식물 또는 특정 형질 부여없는 유전자도입 식물이 될 수 있다. 특정 형질을 부여하는 재조합 DNA가 부족한 이와 같은 원종( progenitor) 식물이 특정, 형질을 부여하는 재조합 DNA를 가지는 유전자도입 식물의 형제(sibling)가 될 수 있다. 이와 같은 원종 형제 식물에는 다른 재조합 DNA가 포함될 수도 있다.

여기에서 사용된 바와 같이, 작물의 “수율”은 작물의 생산 예를 들면, 껍질을 벗긴 옥수수 낟알(kernels) 또는 콩 또는 목화 화이버와 같은 작물이 에이크(acre) 당 부셀(bushel) 또는 헥타르당 미터톤(metric ton)과 같은 단위 면적 단위당 생산량을 말하는데, 종종 수분 적용을 기초하여, 예를 들면 옥수수는 15.5% 수분으로 일반적으로 보고된다. 또한, 옥수수 부셀은 아이오와주 법률에 따르면 56파운드(중량)으로, 옥수수 수율의 유용한 전환 인자는 에이크당 100 부셀로 이는 헥타르당 6.272 미터톤에 상응한다. 수율의 다른 측량은 통상적인 것이다.

유전자도입 “식물 세포”는 아그로박테리움(Agrobacterium)-중개된 형질변환 또는 재조합 폴리뉴클레오티드로 피복된 미소입자를 이용한 충격(bombardment)을 이용하여 안정적으로 통합된, 비-자생, 재조합 폴리뉴클레오티드로 형질변형된 식물 세포를 말한다. 본 발명의 식물 세포는 미생물로 존재하는 고유적으로-형질변환된 식물세포이거나 분화된 조직으로 재생된 자손 식물 세포 예를 들면, 자손 유전자도입 식물로부터 유도된 종자 또는 화분, 염색체 DNA에 안정적으로 통합된, 비-자생 재조합 폴리뉴클레오티드를 가지는 유전자 도입 식물로 재생된 자손 식물 세포가 될 수 있다.

“유전자도입” 식물 또는 종자는 재조합 폴리뉴클레오티드가 이의 염색체 DNA에 형질변환에 의해, 종자 또는 번식체로부터 형질변환된 식물로부터 재생에 의해 또는 형질변환된 식물로 교배에 의해 게놈이 변형된 것을 말한다. 따라서, 유전자도입 식물은 야생형 식물 또는 다른 유전자도입 식물로 유전자도입 식물을 교배하는 것을 포함하는 형질변형 과정으로부터 유도된 고유 식물의 자손 식물이 포함된다. 원하는 형질의 강화는 원종 식물에서 형질 수준에 형질을 부여하는 재조합 DNA을 가지는 유전자도입 식물에서 형질 성질을 비교함으로써 측정할 수 있다. 많은 다양한 식물이 물 스트레스 내성 및/또는 강화된 수율을 제공하기 위해 NF-YB 단백질을 발현시키기 위한 재조합 DNA로 유익하게 형질변화될 수 있으나, 물 스트레스 내성과 같은 특히 유용한 유전자도입 식물에는 옥수수 (maize), 콩, 목화, 캐놀라 (rape), 밀, 쌀, 알파파, 사탕수수(sorghum), 지팽이풀과 같은 풀, 야채 및 과일들이 포함된다.

“단백질을 발현하는”의미는 재조합 DNA가 mRNA로 전사되고, mRNA가 단백질로 해독되는 세포의 기능을 의미한다. 발현을 위해, 재조합 DNA에는 통상적으로 프로모터, 인헨서와 같은 5’조절 요소 및 인트론이 포함되고; 다른 요소들에는 폴리아데닐화 부위, 트랜지트(transit) 펩티드 DNA, 마커 및 당업자에 통상적으로 이용되는 다른 요소들이 포함될 수 있다. 프로모터는 전사 요소와 같은 단백질에 의해 그리고 프로모터에 연결된 인트론 또는 인헨서 요소에 의해 조절될 수 있다. 재조합 폴리뉴클레오티드에서 프로모터는 부근 프로모터에 의해 조절될 수 있다. 예를 들면, 본 발명에서 이용된 것과 같은 낮은 구성 프로모터의 활성은 재조합 폴리뉴클레오티드에 있는 두 번째로 많이 발현되는 프로모터에 의해 비정상적으로 높은 수준까지 상당히 증가될 수 있다. 예를 들면, US 2005/0022266 A1에서는 재조합 폴리뉴클레오티드 구조체를 설명하는데, 이는 NF-YB 단백질을 코드하는 DNA에 작용가능하도록 연결된 낮은 수준으로 발현하는 쌀 악틴 프로모터로 구성된 전사 유닛과 npt II 마커를 코딩하는 DNA에 작용가능하도록 연결된 CaMV35S로 구성된 전사 유닛으로 구성된다. 염색체 DNA에 이와 같은 재조합 폴리뉴클레오티드도 물 부족 스트레스 내성을 보이지만, CaMV 35S 프로모터는 부근 쌀 악틴 프로모터의 낮은 발현을 충분한 물 조건하에서 생장한 식물에 수율 감소의 원인이 되는 높은 수준으로 발현 수준을 강화시킬 수 있다. 본 발명의 측면은 충분한 물 조건하에 식물이 생장할 때 수율 감소를 피하기 위해 낮은 수준에서 NF-Y 단백질을 발현시키기 위한 프로모터를 가지는 재조합 폴리뉴클레오티드의 이용에 관계한다.

“재조합 폴리뉴클레오티드”는 두 개의 분리된 DNA 분절의 복합 예를 들면, 화학적 합성 또는 유전공학 기술에 의해 분리된 핵산 분절 조작에 의해 만든 DNA 구초제를 의미한다. 재조합 DNA에는 외생 DNA 또는 단순하게 조작된 자생 DNA를 포함할 수 있다. 식물에서 단백질 발현을 위한 재조합 DNA는 식물세포에서 일반적으로 폴리아데닐부위 및 시그날을 제공하기 위한 3’ DNA 요소에 연결된 NF-YB 단백질과 같은 단백질을 인코드하는 DNA에 작용 가능하도록 연결된 활성을 가지는 발현 카세트로 제공된다. 유용한 재조합 DNA에는 제초제 내성 및/또는 곤충 저항성을 부여하는 하나이상의 단백질을 발현시키기 위한 발현 카세트를 포함할 수도 있다. 서열 리스트를 참고하면, 표 1에는 다양한 프로모터의 DNA를 밝혔고, NF-YB 단백질의 다양한 구체예를 인코드하는 DNA를 표 2에서 밝혔다. 자생 NF-YB 서브유닛을 인코드하는 특정 유전자는 “Gnnnn” 명명법을 이용하여 확인한다, 가령, Arabidopsis thaliana G481 유전자. 표 1에서는 다양한 구체예에서 이용된 인헨서, 리더 및 인트론 요소를 포함하는 프로모터 요소에 대한 서열 리스트에서 DNA에 대해 유용한 프로모터 세트를 설명한다. 식물 세포에서 기능을 하는 이들 및 다수의 다른 프로모터는 당업자에 공지되어 있고, 이들은 유전자도입 식물 세포에서 NF-Y 단백질 발현을 제공하기 위해 본원 발명의 또 다른 구체예에도 이용할 수 있다.

재조합 DNA 구조체에는 일반적으로 폴리아데닐화 시그날 및 부위를 포함하는 3' 요소를 포함한다. 잘 알려진 3’ 요소에는 아그로박테리움 튜머페이션스 (Agrobacterium tumefaciens ) 유전자 가령, nos 3’, tml 3’, tmr 3’, tms 3’, ocs 3’, tr7 3’이 포함된다(U.S. 6,090,627에서 공지된 것과 같은). 밀 (Triticum aestivum) 열 쇼크 단백질 17 (Hsp17 3’), 밀 유비퀴틴(ubiquitin) 유전자, 밀 푸락토즈-1,6-비포스파타제 유전자, 쌀 글루테린 유전자, 쌀 락테이트 디하이드로게나제 유전자, 그리고 쌀 베타-튜불린 유전자와 같은 식물 유전자에서 3’요소들이 미국 공개 특허 출원 2002/0192813 A1에 공지되어 있다.

구조체 및 벡터에는 식물 세포 기관 특히, 엽록체(chloroplast), 백색체(leucoplast) 또는 다른 색소체 세포 기관에 유전자 타겟을 표적화시키는 트랜지트(transit) 펩티드를 포함할 수도 있다. 엽록체 트랜지트 펩티드의 용도는 미국 특허 5,188,642 및 5,728,925에 공개되어 있다.

본 발명의 식물은 추가적으로 많은 형질에 의해 추가 강화될 수 있는데 예를 들면, 제초제 및/또는 해충 저항성 형질과 복합하여 여기에서 설명하는 DNA발현으로 인한 강화된 농경학적 형질을 가지는 작물이 될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 유전자는 농격학적으로 관심이 가는 형질 예를 들면, 제초제 저항성을 제공하는 형질 또는 해충 저항성 예를 들면, 인시류(lepidopteran), 딱정벌레(coleopteran), 동시류(homopteran), 반시목(hemiopteran), 및 다른 해충에 대한 저항성을 제공하기 위해 바실러스 튜링기네시스(Bacillus thuringiensis)에 유전자를 이용하는 것과 같은 다른 형질로 구성될 수 있다. 식물에 유용한 저항성 제초제에는 글리포세이트(glyphosate) 제초제, 디캄바(dicamba) 제초제, 포스피노트리신(phosphinothricin) 제초제, 옥시닐(oxynil) 제초제, 이미다졸리논(imidazolinone) 제초제, 디니트로아닐린(dinitroaniline) 제초제, 피리딘(pyridine) 제초제, 설포닐우레아(sulfonylurea) 제초제, 바이알아포스(bialaphos) 제초제, 술폰아미드(sulfonamide) 제초제 및 글루포시네이트(glufosinate)가 포함된다. 당업자는 미국 특허 5,250,515; 5,880,275; 6,506,599; 5,986,175; U.S. 2003/0150017 A1을 참고하여 해충/선충/바이러스 저항성에 대해 U.S. 2003/0106096A1; 2002/0112260A1; 미국 특허 5,034,322; 5,776,760; 6,107,549; 6,376,754을 참고하여 스택(stacked) 형질을 제공할 수 있을 것이다.

식물 세포 형질변환 방법들

재조합 DNA로 식물 세포를 형질변환시키는 수 많은 방법들이 당분야에 공지되어 있고, 본 발명에서 이용할 수 있을 것이다. 식물 형질변환을 위해 두 가지 흔히 사용되는 방법이 아그로박테리움-중재된 형질변환과 마이크로프로젝션 충격(bombardment)이다. 마이크로프로젝션 충격법은 U.S. 특허 5,015,580 (콩); 5,550,318 (옥수수); 5,538,880 (옥수수); 5,914,451 (콩); 6,160,208 (옥수수); 6,399,861 (옥수수); 6,153,812 (밀)에 공개되어 있고, 아그로박테리움-중개된 형질변환 방법은 U.S. 특허 5,159,135 (목화); 5,824,877 (콩); 5,591,616 (옥수수); 6,384,301 (콩)에 공개되어 있으며, 이들 모두를 참고문헌으로 첨부한다. 아그로박테리움 튜메페이션스(Agrobacterium tumefaciens) 계 식물 형질변환 시스템을 위해 형질변환 구조체상에 존재하는 추가 요소들에는 식물 게놈으로 재조합 폴리뉴클레오티드가 결합할 수 있도록 T-DNA 좌우 보더(border) 서열이 포함될 것이다.

일반적으로, 표적 식물 품종의 게놈에서 비-특정 위치에 무작위로 재조합 DNA를 도입시키는 것이 유용하다. 특정 경우에, 부위-특이적인 삽입(integration)이 일어나기 위해서는 재조합 DNA 삽입을 표적화시키는 것이 유용할 수 있는데, 예를 들면, 유전자 발현에 대해 활성이 있는 미리 정해진 위치에 재조합 폴리뉴클레오티드를 삽입시키거나 식물 게놈에 기존 프로모터를 이용하여 재조합 DNA를 게놈에 기존 유전자와 대체시키는 것이다. 임플란트(implant)로 기능을 하는 것으로 공지된 몇 가지 부위 특이적인 재조합 시스템에는 미국 특허 4,959,317에 공개된 cre-lox 및 미국 특허 5,527,695에 공개된 FLP-FRT가 포함된다.

본 발명의 형질변환 방법은 배지상에 조직 배양물과 제어된 환경에서 실시하는 것이 바람직하다. “배지(Media)”는 고유의 생존 유기체의 외부 즉, in vitro에서 세포를 생장시키는데 이용되는 다수의 영양 혼합물을 말한다. 수령(recipient) 세포 표적에는 분열조직(meristem) 세포, 유합조직(callus), 미숙배(immature embryos) 및 배우자(gametic) 세포 가령, 소포자(microspore), 화분(pollen), 정액(sperm) 및 난(egg) 세포가 포함된다. 수정(fertile) 식물로부터 생성되는 임의 세포가 수령 세포로 유용하다. 유합조직은 조직 소스 예를 들면,미숙배, 실생(seedling) 정단분열조직(apical meristems), 소포자 및 이와 유사한 것들이 포함되나 이에 국한시키지는 않는다. 유합조직으로써 증식할 수 있는 세포 또한 유전자 형질변형의 수령 세포가 된다. 본 발명의 유전자도입 식물을 만들기 위한 실제적인 형질변환 방법 및 재료, 예를 들면, 다양한 배지 및 수령 표적 세포, 미숙배 세포의 형질변환 및 연속한 수정 유전자도입 식물의 재생은 미국 특허6,194,636 및 6,232,526에 설명되어 있고, 참고문헌으로 첨부한다.

유전자도입 식물의 종자는 수정 유전자도입 식물로부터 수확할 수 있고 이를 이용하여 강화된 형질을 가지는 식물 선택을 위한 하이브리드 식물 품종을 포함하는 본 발명의 형질변환된 식물의 자손 세대를 기를 수 있다. 재조합 DNA로 식물을 형질변환시키는 것에 추가하여, 유전자도입 식물은 재조합 DNA를 가지는 제1식물을 이 DNA가 부족한 두 번째 식물과 교배하여 준비할 수도 있다. 예를 들면, 재조합 DNA를 유전자도입 식물을 만들기 위해 형질변환될 수 있는 제 1 식물 품종으로 도입시키고, 식물은 두 번째 식물 품종과 교잡하여 재조합 DNA가 두 번째 식물 품종으로 유전자이입(introgress) 된다. 강화된 수율과 같은 강화된 형질을 제공하는 재조합 DNA를 가진 유전자도입 식물을 또 다른 형질 예를 들면, 제조체 저항성 또는 해충 저항성과 같은 형질을 가지는 유전자도입 식물 품종과 교잡하여, 두 가지 형질을 모두 가지는 재조합 DNA를 가지는 자손 식물을 만들 수도 있다. 일반적으로, 형질을 복합하기 위한 이와 같은 품종 개량에서, 추가적인 형질을 제공하는 유전자 도입 식물이 수(male) 품종이고, 기초적인 형질을 가지는 유전자도입 식물을 암(female) 품종이 된다. 식물의 일부는 부모계 형질 모두를 가지고 있을 것이고, 일부는 하나의 모계 형질에 대한 DNA를 가지는 것으로 이와 같은 교배 자손이 분리될 것이고, 이와 같은 식물은 모계 재조합 DNA와 연관된 마커, 예를 들면, 재조합 DNA를 분석하기 위한 마커 확인 또는 선택성 마커가 재조합에 연결되면, 제초제 내성 마커의 이용에 대해 제초제와 같은 선택 물질을 이용하거나 강화된 형질에 대한 선별을 통하여 확인할 수 있다. 부모계 형질에 대한 DNA를 모두 가지는 자손 식물은 예를 들어 6 내지 8 세대와 같은 암(female) 모계 품종으로 여러 차례 역 교잡시켜 원래 유전자도입 모계 품종과 실질적으로 동일한 유전자형(genotype)이나 다른 유전자 도입 모계 품종의 재조합 DNA를 가지는 자손 식물을 생산할 수 있다.

형질변환 실시에서, DNA는 임의 형질 변환 실험에서 표적 식물 세포의 단지 작은 비율로 도입되는 것이 일반적이다. 마커 유전자들을 이용하여 유전자 도입 DNA 구조체를 수용하여 게놈으로 통합시켜 안정적으로 형질변환된 이들 세포를 동정하는 효과적인 시스템을 제공한다. 바람직한 마커 유전자들은 항생제 또는 제초제와 같은 선택성 물질에 저항성을 부여하는 선택성 마커를 제공한다. 본 발명의 식물이 저항성을 가지는 임의 제초제들이 선택성 마커에 대해 유용한 물질이다. 잠재적으로 형질변환된 세포를 선택성 물질에 노출시킨다. 생존 세포의 개체군에서 일반적으로 저항성-부여 유전자가 통합되어, 적절한 수준으로 발현되어 세포 생존을 허용하는 세포들이 된다. 세포는 외생 DNA의 안정적인 통합(integration)을 확인하기 위한 추가 테스트를 받을 수 있다. 선택성 마커 유전자에 통상적으로 이용되는 것에는 카나마이신 및 파로모마이신 (nptII), 하이그로마이신 B (aph IV) 그리고 젠타마이신(aac3 및 aacC4)과 같은 항생체 저항성 또는 글루포세이트(bar 또는 pat) 및 글리포세이트(aroA 또는 EPSPS)와 같은 제조체에 저항성을 부여하는 것들이 포함된다. 이와 같은 선택성의 예는 미국 특허 5,550,318; 5,633,435; 5,780,708; 6,118,047에서 설명하고 있다. 외관상으로 형질변환체를 확인하는 능력을 제공하는 선택성 마커를 이용할 수 있는데, 예를 들면, 루시페라제와 같은 발색 또는 형광 단백질을 발현시키는 유전자 또는 다양한 발색 물질로 공지된 베타글루쿠로니다제 또는 uidA 유전자 (GUS)를 발현시키는 유전자를 이용할 수도 있다.

선택성 물질의 노출에 생존하는 식물 세포 또는 스크리닝 검사에서 포지티브로 기록된 식물 세포를 재생 배지에서 배양시키고 식물로 성숙하도록 할 수 있다. 형질변환된 식물 세포에서 재생된 발생 묘목을 식물 생장 믹스로 옮기고, 그린하우스 또는 성숙을 위한 생장 실로 이동하기 전에 환경적으로 조절된 쳄버 예를 들면, 약 85% 상대 습도, 600ppm CO₂, 25-250 microeinsteins m² s^-1 광에서 강하게 묘목을 키운다. 초기 조직에 따라 형질변환체가 확인된 후 6주 내지 10개월에 식물이 재생된다. 생산된 종자와 당업자에 공지된 통상적의 식물 번식 방법을 이용하여 식물을 수분(pollinate)시킬 수 있는데, 예를 들면, 유전자도입 옥수수로 자가-수분이 흔히 이용된다. 재생된 형질변환된 식물 또는 이의 자손 종자 또는 식물은 재조합 DNA 발현에 대해 테스트하고, 강화된 농경학적 형질 존재에 대해 선택될 수 있다.

유전자도입 식물 및 종자

본 발명의 식물 세포에서 유도된 유전자도입 식물을 생장시켜, 대조 식물과 비교하였을 때 강화된 형질을 가지는 유전자도입 식물을 생성시키고, 본 발명의 유전자 도입 종자와 반수체 화분을 생산한다. 강화된 형질을 가지는 이와 같은 식물은 강화된 형질에 대해 형질변환된 식물 또는 자손 종자의 선별을 통하여 동정된다. 효과를 위해, 선별 방법은 2 내지 20 또는 그 이상의 유전자도입 과정과 같이 다중 식물을 포함한 재조합 DNA를 포함하는 다중 유전자도입 식물(과정)을 평가하도록 고안한다. 여기에서 제공하는 유전자도입 종자로부터 생장된 유전자도입 식물은 증가된 수율 또는 물 부족 내성이 강화된 또는 이들 두가지 형질에 기여하는 향상된 영농 형질을 증명한다.

모든 유전자 도입 과정이 재조합 DNA의 삽입 및 위치, 복제수, 다른 DNA의 원치 않은 삽입 등과 같은 요인들에 따라 강화된 또는 원하는 형질을 가진 식물 및 종자를 제공하는 유전자도입 식물 세포에 있는 것이 아닐 것이다. 그 결과로, 본 발명의 유전자도입 식물 세포는 물 부족 스트레스 내성 및 수율의 강화에 대한 형질변환된 자손 식물을 스크리닝하여 동정된다. 효율을 위해 스크리닝 프로그램은 2 또는 그이상의 유전자 도입 과정으로부터 재조합 DNA의 단일 복사체를 가지는 다중 유전자도입 식물을 평가하도록 고안한다.

다음의 실시예는 본 발명의 구체예들을 설명하기 위해 포함된다. 당업자는 실시예에 설명된 기술이 본 발명의 실시예서 잘 기능을 하도록 본 발명자에 의해 발견된 다음의 대표 기술이라는 것을 인지해야 한다. 그러나, 당업자는 본 명세서에 근거하여 설명된 특정 구체예에 많은 변화가 있을 수 있으며, 이와 같은 변화도 본 발명의 범위를 벗어나지 않고도 본 발명의 영역과 유사한 또는 이와 같은 결과를 얻을 수 있다는 것을 인지해야 하고, 상기 제시한 요지 및 첨부된 도면 및 실시예는 설명을 위한 것이며, 이에 한정하고자 함이 아니라는 것을 인지해야 한다.

실시예 1

본 실시예는 본 발명의 다양한 측면에 유용한 식물 세포를 형질변환시키는데 유용한 식물 발현 벡터의 작제를 설명한다. 이와 같은 DNA 구조체의 플라스미드 지도는 도 1과 2에서 설명하고, 이때 도 1의 플라스미드는 옥수수와 같은 단자엽(monocot) 식물의 형질변환에 이용되며, 도 2의 플라스미드는 콩과 같은 쌍떡잎 식물의 형질변환에 이용된다. 각 플라스미드에는 LB와 RB로 각각 확인된 아그로박테리움 튜메페이션스(Agrobacterium tumefaciens) T-DNA 보더내에 NF-YB 발현 카세트와 글리포세이트 제초제 저항성 발현 카세트를 포함한다. 각 플라스미드에는 또한 복제 원점 및 세포에서 복제를 위한 리프레스(repressor) 요소(oriV, rop 그리고 oriColE) 및 스펙티노마이신/스트렙토마이신 세균 선택성 마커(SPC/STR)도 포함한다.

도 1을 참고하면, 플라스미드 pMON82754에는 좌우 아그로박테리움 T-DNA 보더(LB와 RB)사이에 NF-YB 단백질 발현 카세트와 글리포세이트 저항성 발현 카세트를 포함하는 재조합 DNA 구조체를 포함한다. NF-YB 발현 카세트에는 프로모터 요소 (SEQ ID NO:8)가 있는데, 이는 옥수수 유관속초(bundle sheath) 강화된 프로모터와 옥수수 열 쇼크 단백질 70 유전자에서 기인된 전사 강화 인트론, 이어서 옥수수 NF-YB 단백질 (SEQ ID NO:44)을 인코드하는 DNA 및 아그로박테리움 튜메페이션스(Agrobacterium tumefaciens) 전사체 7의 3’요소로 구성된다. 글리포세이트 저항성 발현 카세트는 쌀 악틴 1 프로모터, 리더 및 아라비도프시스 탈리아나(Arabidopsis thaliana) EPSPS 유전자의 엽록체 트랜지트 펩티드를 인코드하는 DNA에 연결된 인트론, 아그로박테리움 튜메페이션스(Agrobacterium tumefaciens)(CP4)의 EPSPS를 인코드하는 DNA, 아그로박테리움 튜메페이션스(Agrobacterium tumefaciens) nopaline 합성 유전자의 3’로 구성된다. 다른 플라스미드도 준비하는데, NF-YB 요소를 인코드하는 프로모터 요소와 DNA는 표 1에 확인된 프로모터 각 요소와 표 2에 확인된 NF-YB 단백질을 인코드하는 각 DNA로 대 체된다. 따라서, 단자엽 식물 세포를 형질변환시키기 위한 별도 플라스미드는 NF-YB 단백지을 발현시키는 재조합 DNA 구조체를 가지고, 이때 표 1에서 확인된 각 프로모터는 표 2에서 확인된 NF-YB 단백질을 인코드하는 각 DNA에 작용가능하도록 연결된다. 옥수수, 지팽이풀, 쌀, 그리고 사탕수수의 단자엽 식물 세포를 각 재조합 DNA 구조체의 다중 유전자도입 사건을 만들 수 있는 각 플라스미드로 형질변환하고; 그리고 유전자도입 식물을 만들고 생장시켜 각 유전자도입 사건에서 유전자도입 종자 또는 번식체 (사탕수수의 경우)를 생산한다.

도 2를 참고하면, 플라스미드 pMON63796에는 G481(SEQ ID NO:53)로 확인된 자생 아라비도프시스 탈리아나 NF-YB 단백질을 인코드하는 DNA에 작용가능하도록 연결된, 강화된 CaMV35S 프로모터 (SEQ ID NO:1)를 가지는, NF-YB 단백질을 발현시키는 재조합 DNA 구조체를 포함한다. 플라스미드를 이용하여 유전자도입 쌍떡잎 세포를 만드는데, 이때 아라비도프시스 NF-YB 단백질이 프로모터에 의해 어디에서나 발현된다. 다른 플라스미드도 준비하는데, 이때 프로모터 요소는 표 1에서 확인된 각 프로모터 요소로 대체되고, NF-YB 요소를 인코드하는 DNA는 표 2에서 확인된 NF-YB 단백질을 인코드하는 각 DNA로 대체된다. 따라서, 쌍떡잎 식물 세포를 형질변환시키는 별도 플라스미드는 NF-YB 단백질을 발현시키기 위한 재조합 DNA 구조체를 가지는데 이때 표 1에서 확인된 각 프로모터는 표 2에서 확인된 NF-YB 단백질을 인코드하는 각 DNA에 작용가능하도록 연결된다. 캐놀라, 알파파, 목화 및 콩 식물 세포는 각 재조합 DNA 구조체의 다중 유전자 도입 사건을 만드는 각 플라스미드로 형질변환되고; 유전자도입 식물이 재생되어 생장되면 각 유전자도입 과정을 위한 유전자도입 종자가 만들어진다.

종자와 자손 식물을 생산하는 번식력이 있는 유전자도입 식물을 생존시키는 많은 유전자도입 과정이 물 부족 스트레스 내성 및 강화된 수율을 가지는 형질을 나타내지는 않을 것이다. 본 발명의 유전자도입 식물 세포를 동정하기 위한 자손 유전자도입 식물의 스크리닝이 필요하다. 강화된 물 부족 내성을 가지는 유전자도입 식물은 다양한 물 부족 검사에서 형질을 평가함으로써 여기에서 설명하는 형질변환된 개체군으로부터 동정된다. 좀더 특이적으로는, 형질변환 후에, 유전자도입 식물이 증식하여 종자 또는 번식체를 만들고, 동형접합성 자손 식물은 본 발명의 종자를 만드는 식물을 동정하기 위해 물 부족 내성에 대해 동정 및 스크리닝한다(하기에서 설명하는 방법을 이용하여).

본 발명의 식물은 대조식물과 비교하여(근친교배 또는 하이브리드로 테스트됨) 소위 “가뭄 처리”로 불리는 수분 억제후에 그린하우스의 고처리방법(high-throughput method)으로 물 부족 내성에 대해 스크린한다. 예를 들면, 물 이용 효과에 대해 유전자도입 옥수수 식물에 대한 그린하우스 스크린은 식물 생장률의 변화 예를 들면, 유전자도입 옥수수 식물 생장 가뭄 처리 동안에 높이 및 바이오매스가 대조 식물과 비교하였을 때 최소한 10% 개선된 변화를 측정한다. 가뭄후에 싹(shoot) 조직의 수화 상태도 측정한다. 싹 초기 높이(SIH)는 최적 조건하에 3주 생장 후에 식물 높이다. 싹 시듬 높이(Shoot Wilt Height (SWH))는 6일 가뭄이 끝날 시점에 식물 높이다. 시간 경과 실험에서 가뭄 처리 약 3일에 야생형 옥수수 식물이 기본적으로 생장을 멈추고 시들기 시작한다는 것을 보여준다. 따라서, 물 이 용이 향상된 유전자 도입 옥수수 식물은 계속 자랄 것이고(아마도 물이 있는 경우보다는 정도가 덜하겠지만), 결국 가뭄 실험 끝에 상당히 자란 식물이 될 것이다. 싹 시듬 양(Shoot Wilt Mass (SWM))은 가뭄 종료시에 싹(토양 품종에서 근분(root ball)로부터 분리된 식물)에서 젖은 그리고 마른 물질의 양을 말한다; SDM은 건조 챔버에서 2 내지 3주후에 측정이다. 싹 팽창 양(Shoot Turgid mass (STM))은 암(暗 )상태에서 섭씨 40 물에 3일간 담근 경우 식물 조직으로 이동된 물의 양과 SWM을 합친 양이다. 실험에서 대부분의 물이 24시간내에 빨려 오지만 추가적인 증가가 미미하기 전까지 2일이상이 소요된다. STM-SWM 은 식물에서 물 이용 효과의 지표인데, 이때 스트레스로부터 회복이 스트레스 내성 자체보다 더 중요하다. 상대적 물 함량(Relative water content (RWC))은 수확시에 식물에서 물이 얼마나 되는지(%)의 양이다. RWC = (SWM-SDM)/(STM-SDM)*100. 충분히 물이 제공된 옥수수 식물이 약 98% RWC이다. 일반적으로, 시듬(wilt) 스크린에서 식물은 약 60% RWC이다. 가뭄의 종료 시점에서 더 큰 RWC를 가지는 식물은 더 건강한 식물로 간주하고 가뭄후 회복 및 생장에 더 적합한 것으로 간주한다. 각 싹에서 상대적 생장 속도 (RGR)는 다음의 식으로 계산한다; RGR = (SWH-SIH)/((SWH+SIH)/2)*100. 가뭄 처리후 유사 스크리닝을 유전자도입 캐놀라, 목화 및 콩 식물에서 실시한다.

SEQ ID NO:29-43의 DNA로부터 변형된 NF-YB 단백질을 발현하는 유전자도입 옥수수 식물 경우에 야생형 대조 식물과 자생 NF-YB 단백질을 발현하는 유전자 도입 대조 식물과 비교하였을 때, 물 부족 스트레스 내성이 향상됨을 보여준다.

SEQ ID NO: 1-27에서 선택된 프로모터에 작용가능하도록 연결된 SEQ ID NO: 44 또는 45의 DNA로부터 자생 NF-YB 단백질을 발현하는 유전자도입 옥수수 식물의 경우 야생형 대조 식물과 비교하였을 때 물 부족 스트레스 내성이 향상됨을 보여준다.

실시예 2

이 실시예에서는 US 2005/0022266 A1에서 설명하는 유전자도입 식물에 대한 수율 분석 결과를 설명한다. 설명된 식물은 재조합 전사 유닛으로 구성되는데, 이 유닛은 NF-YB (SEQ ID NO:28) 단백질을 인코드하는 DNA에 작용가능하도록 연결된 낮은 수준으로 발현되는 쌀 악틴 프로모터와 nptII 마커를 인코드하는 DNA(pMON73605)에 작용가능하도록 연결된 CaMV 35S 프로모터로 구성된 전사 단위를 포함한다.

표 3A에서는 이들 식물이 연속 2년간의 테스트로 증명된 것과 같이 물 부족 스트레스하에 강화된 수율 (bu/acre)을 보인다는 것을 설명한다.

표 3B에서는 충분한 물 조건하에 수율 결과(bu/acre)를 나타내는데, 충분한 물 조건하에 pMON73605의 수율이 상당히 감소되었다는 것을 설명한다.

하기 표 3C에서는 이들 유전자 도입 경우에 대해 측정된 NF YB 단백질 수준을 제공한다.

이 구조체에서 CaMV 35S 프로모터는 거의 쌀 악틴 프로모터의 낮은 발현을 강화시켜 식물 잎 조직에서 전체 단백질 ㎍당 40피코그램 이상으로 생산되게 할 수 있다. 유전자 도입 식물에서 단백질의 높은 수준은 식물이 충분한 물 조건하에 생장할 때 수율 감소를 결과한다. 대조적으로, 하기에서 설명하는 enhancerless 쌀 악틴/NFYB 발현 구조체 (pMON82452 및 pMON82453)는 전체 잎 단백질 ㎍당 20pg 미만의 NF-YB2를 생산하고, 물 부족 스트레스 조건 및 충분한 물 조건 모두에 강화된 수율을 가지는 유전자도입 식물을 설명한다.

실시예 3

표 4에서 보여주는 프로모터의 조절하에 NF-YB 단백질을 발현하고 염색체에 안정적으로 삽입된 DNA 구조체로 구성된, 실시예 1에서 설명한 것과 같이 준비된 유전자도입 옥수수 식물을 물 부족 스트레스 조건 및 물 충분 조건에서 수율을 평가하였다.

이들 유전자도입 옥수수 식물을 물-결핍 스트레스 조건에서의 수율과, 물이 충분한 조건하에서의 수율 그리고 잎 조직에서 발현된 NF-YB 단백질의 양에 대해 분석하였다.

실시예 1에서 설명한 것과 같이 재조합 DNA를 가지는 동형접합성 근친교배 옥수수 식물을 필적할만한 테스터 품종들과 교잡시켜 하이브리드 종자를 만들었다. 생성된 종자는 옥수수가 통상적으로 재배하는 예를 들면 아이오와주, 칸사스 및 캘리포니아주와 같은 지형적인 지역에 반복된 수율 시도에 제시되었다. 일부 시도에서 토지의 물 함량은 관개로 조절되었고, 한편 일부 시도는 자연 강우에만 의존하였다. 이 연구에 제시된 유전자도입 케이스는 도입유전자(transgnen)와 연관된 선택성 마커에 대해 단일 복사체를 가지는 것으로 미리 선별되었다. 대조군 및 유전자도입 케이스를 동일한 식물 밀도 및 모사(replication)로 심었다. 식물 해충, 잡초, 경작, 및 수정에 대한 경작지 관리는 지역 특정 관례와 일치시켰다.

관개된 경작지에서, 유전자도입 식물과 대조 식물은 V10 옥수수 잎 단계까지 경작지내 물-홀딩 능력내로 관개되었다. 관개수는 드립 관개(drip irrigation) 또는 오버헤드 리니어(overhead linear) 관개를 통하여 운반되었다. 물 부족 스트레스 조건을 제공하기 위해, 옥수수 식물이 V10 잎 단계에 일단 다다르면 식물에서 2일 연속 상당한 AM 잎 롤링이 나타날 때까지 물을 제한시켰다. 이 물 섭생 기간을 R2 재생 단계를 통하여 V10 잎 단계로 연결하였다. 일단 작물이 R2 발생 단계에 도달하면 에서 R2 재생 단계로 나머지 생장기를 통하여 물 공급을 재개하여 완전히 회복되도록 한다.

일단 옥수수 작물이 생리학적으로 성숙되면, 가령 10-25% 낟알 수분에 도달하면, 수확하였다. 생성된 낟알 수율을 15.5% 수분으로 표준화시키고 이를 에이크당 부셀로 나타내었다.

수율 데이터 분석은 물 부족 스트레스 조건과 물이 충분한 조건에 대해서 실시하였다. 몇 가지 방법으로 수율을 분석하였다. 한 가지 방법은 가뭄이 가지는 유사한 환경적 특징을 가지는 지역군을 선택하기 위해 통계학적 클러스터(cluster) 분석을 이용하는 것이었다. 유사한 지역의 클러스터를 만드는데 이용된 세가지 변수들은 다음과 같다: 개화전 30일 그리고 개화후 30일 동안에 매일 평균 최고 온도: 동일한 60일 기간동안 누적 강우량과 제공된 물에 대한 증발산 사이에 평균 차이, 중량을 특징짓기 위해 표준 정상 분포를 이용하여 개화에 근접하에 중량을 잰다; 그리고 지역에서 대조군 혈통의 평균 수율. 가변 모델의 또 다른 분석을 이용하여 클러스트에 대한 고정된 효과와 이에 상응하는 클러스트내에 있는 지역들에 대한 랜덤 효과를 가지고 수율을 분석하였다.

수율 데이터 분석은 이에 상응하는 대조군 구역과 비교하여 단일 구조체의 모든 경우의 수율을 비교하였다. 경우들은 경우 수준 분석을 위해 이에 상응하는 대조군과도 비교하였다. 표 5A 내지 5M은 수율 분석 결과(수율 델타 : bu/ac)로 나타낸다.

물이 부족한 조건과 최적의 물이 공급되는 조건하에 물-결핍 내성과 수율이 NF-YB 단백질의 발현을 관련짓기 위해, 토끼에서 생성시킨 다클론 항체를 이용하여 표준 ELISA 기술을 이용하여 유전자도입 식물에서 NF-YB 단백질을 측정하였다. NF-YB2 단백질 수준은 전체 단백질 ㎍당 NF-YB 단백질 피코그람(pg)으로 나타내었고, 자생 단백질과 외생 NF-YB2 단백질이 모두 포함된다. 전체 단백질은 Bradford 단백질 검사 (Bio-Rad, Hercules, CA)를 이용하여 측정하였다. 각 조직에서의 측정된 NF-YB2 단백질 (NF-YB2 pg / 총 단백질 ㎍)의 배경 수준은 다음과 같다:

V3 잎 3.5

V12 잎 6

뿌리 2.5

수염(silk) 5

수염(Tassel) 3.2

낟알 9.1

미숙 옥수수속 22.6

다양한 조직과 다양한 발생 단계에서 단백질 수준의 분석 결과는 표 6A와 6B에 나타내었는데, 이는 각 구조체에 다중 경우의 평균이다.

각 경우에 물 부족 스트레스 조건에서의 수율, 물이 충분한 조건에서의 수율과 잎 조직에서 발현된 NF-YB 단백질의 양(자생 DNA로부터 생산된 NF-YB 단백질의 배경 수준을 뺀 것으로 수정된)에 대한 데이터 분석 결과를 표 7(도 6A와 6B에서 제시한 응집된 구조체 수준과 비교하여)에 나타낸다. 데이터는 물-부족 스트레스 조건과 충분한 물 조건하에 발현된 NF-YB 단백질과 강화된 수율사이에 역관계를 설명한다. 수율(bu/acre)을 NF-YB 수준에 대해 플롯하면, 물-결핍 스트레스 조건하에 강화된 수율을 보이는 경우들에는 낮은 수준의 NF-YB (식물 잎 조직에서 전체 단백질 ㎍ 당 NF-YB2 단백질 최대 40 피코그람)이 포함된다(도 3). 유사하게, 충분한 물 조건하에서 강화된 수율 (수율 델타 bu/acre)을 보이는 경우에도 낮은 수준의 NF-YB (식물 잎 조직에서 전체 단백질 ㎍ 당 NF-YB2 단백질 최대 40 피코그람)이 포함된다(도 4). 광범위의 이용할 수 있는 물 조건하에 강화된 수율에 대한 특히 유용한 구체예는 전체 단백질 ㎍당 0.1 내지 11 pg의 NFB2를 제공한다. 특정 실시예는 ZM_M87949 (8.0 pg의 NFB2/전체 단백질㎍; +6.6 bu/acre 수율은 물-결핍 스트레스하에서 증가되고; +5.2 bu/acre 수율은 물이 충분한 조건에서 증가) 및 ZM_M88595 (7.5 pg의 NFB2/전체 단백질 ㎍; +6.6 bu/acre 수율은 물-결핍 스트레스 하에서 증가; +6.3 bu/acre 수율은 물이 충분한 조건하에서 증가).

실시예 4

표 8에서 나타낸 프로모터의 제어하에 NF-YB 단백질을 발현시키고, 염색체에 안정적으로 삽입된 DNA 구조체로 구성된 실시예 1에서 설명하는 것과 같이 준비된 유전자도입 목화 식물을 물 부족 스트레스 및 물이 충분한 조건하에 수율을 평가하였다.

아라비도프시스 NF-YB 단백질을 발현시키고, 상기 구조체를 포함하는 유전자 도입 목화 식물의 여러 경우를 물 부족 스트레스 조건과 충분한 물 조건하에 생장시키고, 물 부족 스트레스 조건에서 생장한 야생형 대조 식물과 비교하였을 때 개선된 수율(lbs/acre)을 제공하는 그리고 충분한 물 조건하에 재배된 야생형 대조식물과 비교하였을 때 필적하는 또는 향상된 수율을 제공하는 것은 잎 단백질 수준이 낮은 것으로 확인된다.

실시예 5

염색체에 안정적으로 삽입된 DNA 구조와 표 9에서 나타낸 프로모터의 제어하에 NF-YB 단백질을 발현시키는, 실시예 1에서 설명한 것과 같이 준비된 유전자도입 콩 식물을 물 부족 스트레스 및 충분한 조건에서 수율을 평가한다.

아라비도프시스 또는 대두 G481 NF-YB 단백질을 발현시키고, 상기 구조체를 포함하는 유전자 도입 대두 식물의 여러 경우를 물 부족 스트레스 조건과 충분한 물 조건하에 생장시키고, 물 부족 스트레스 조건에서 생장한 야생형 대조 식물과 비교하였을 때 개선된 수율(lbs/acre)을 제공하는 그리고 충분한 물 조건하에 재배된 야생형 대조식물과 비교하였을 때 필적하는 또는 향상된 수율을 제공하는 것은 잎 단백질 수준이 낮은 것으로 확인된다.

실시예 6

염색체에 안정적으로 삽입된 DNA 구조와 표 9에서 나타낸 프로모터의 제어하에 NF-YB 단백질을 발현시키는, 실시예 1에서 설명한 것과 같이 준비된 유전자도입 알파파, 캐놀라, 지팽이풀, 사탕수수 및 쌀 식물을 물 부족 스트레스 및 충분한 조건에서 수율을 평가한다. 유전자 도입 식물의 여러 경우를 물 부족 스트레스 조건과 충분한 물 조건하에 생장시키고, 물 부족 스트레스 조건에서 생장한 야생형 대조 식물과 비교하였을 때 개선된 수율(lbs/acre)을 제공하는 그리고 충분한 물 조건하에 재배된 야생형 대조식물과 비교하였을 때 필적하는 또는 향상된 수율을 제공하는 것은 잎 단백질 수준이 낮은 것으로 확인된다.

실시예 7

유전자도입 기장, 보리, 땅콩, 완두콩(pigeon pea), 사탕수수, 야채(브로콜리, 콜리플라워, 캐비지, 무, 배추, 멜론, 수박, 오이, 조롱박, 호박, 덩굴호박(Squash), 후추, 토마토, 가지, 양파, 당근, 채소용 콩(Garden Bean), 스위트 옥수수, 완두콩(Pea), 드라이 빈, 오크라, 시금치, 부추, 양상추, 회향을 포함하나 이에 한정되지 않음), 포도, 베리(블루, 블랙, 랍스베리, 멀베리, 보이센베리 등을 포함) 체리 및 관련 과일나무(플럼, 복숭아, 아프리코트, 키위, 석류, 망고, 무화가 등을 포함), 과일 나무(오렌지, 레몬, 라임, 블러드 오렌지, 포도 등을 포함하나 이에 한정시키지 않음), 그리고 너트 나무(코코넛, 호두(잉글리쉬 및 블랙), 피칸, 아몬드, 헤이즐넛트, 브라질 너트, 히코리 너트, 옥수수 및 이와 유사물을 포함하나 이에 한정시키지 않음), 해바라기 및 실시예 1에서 설명하는 것과 같이 준비된 다른 지방종자를 생산하는 식물로써, 염색체에 안정적으로 삽입된 DNA 구조와 표 1에 나타낸 프로모터의 제어하에 NF-YB 단백질을 발현시키는 식물에서 물 부족 스트레스 조건 및 충분한 물 조건에서 수율을 평가하였다. 유전자 도입 식물의 여러 경우를 물 부족 스트레스 조건과 충분한 물 조건하에 생장시키고, 물 부족 스트레스 조건에서 생장한 야생형 대조 식물과 비교하였을 때 개선된 수율(lbs/acre)을 제공하는 그리고 충분한 물 조건하에 재배된 야생형 대조식물과 비교하였을 때 필적하는 또는 향상된 수율을 제공하는 것은 잎 단백질 수준이 낮은 것으로 확인된다.

여기에서 설명하고 청구하는 모든 재료와 방법들은 상기 명세서에서 지시한 것과 같이 과도한 실험없이 만들고 이용할 수 있을 것이다. 본 발명의 재료 및 방법을 적저한 구체예와 실시예를 통하여 설명하고 있지만, 본원 발명의 개념을 벗어나지 않고 여기에서 설명된 방법 및 재료에 다양한 변화를 적용시킬 수 있다는 것이 당업자에게 명백할 것이다. 당업자에 명백한 모든 유사한 치환 및 수정은 본 발명의 청구범위내에 있는 것으로 간주한다.

<110> Nelson, Donald E. Heard, Jacqueline <120> TRANSGENIC CROP PLANTS WITH IMPROVED STRESS TOLERANCE <130> 38-15(54485)B <150> 60/816,086 <151> 2006-06-23 <160> 61 <210> 1 <211> 613 <212> DNA <213> Cauliflower mosaic virus <400> 1 ggtccgatgt gagacttttc aacaaagggt aatatccgga aacctcctcg gattccattg 60 cccagctatc tgtcacttta ttgtgaagat agtggaaaag gaaggtggct cctacaaatg 120 ccatcattgc gataaaggaa aggccatcgt tgaagatgcc tctgccgaca gtggtcccaa 180 agatggaccc ccacccacga ggagcatcgt ggaaaaagaa gacgttccaa ccacgtcttc 240 aaagcaagtg gattgatgtg atggtccgat tgagactttt caacaaaggg taatatccgg 300 aaacctcctc ggattccatt gcccagctat ctgtcacttt attgtgaaga tagtggaaaa 360 ggaaggtggc tcctacaaat gccatcattg cgataaagga aaggccatcg ttgaagatgc 420 ctctgccgac agtggtccca aagatggacc cccacccacg aggagcatcg tggaaaaaga 480 agacgttcca accacgtctt caaagcaagt ggattgatgt gatatctcca ctgacgtaag 540 ggatgacgca caatcccact atccttcgca agacccttcc tctatataag gaagttcatt 600 tcatttggag agg 613 <210> 2 <211> 612 <212> DNA <213> Cauliflower mosaic virus <400> 2 ggtccgattg agacttttca acaaagggta atatccggaa acctcctcgg attccattgc 60 ccagctatct gtcactttat tgtgaagata gtggaaaagg aaggtggctc ctacaaatgc 120 catcattgcg ataaaggaaa ggccatcgtt gaagatgcct ctgccgacag tggtcccaaa 180 gatggacccc cacccacgag gagcatcgtg gaaaaagaag acgttccaac cacgtcttca 240 aagcaagtgg attgatgtga tggtccgatt gagacttttc aacaaagggt aatatccgga 300 aacctcctcg gattccattg cccagctatc tgtcacttta ttgtgaagat agtggaaaag 360 gaaggtggct cctacaaatg ccatcattgc gataaaggaa aggccatcgt tgaagatgcc 420 tctgccgaca gtggtcccaa agatggaccc ccacccacga ggagcatcgt ggaaaaagaa 480 gacgttccaa ccacgtcttc aaagcaagtg gattgatgtg atatctccac tgacgtaagg 540 gatgacgcac aatcccacta tccttcgcaa gacccttcct ctatataagg aagttcattt 600 catttggaga gg 612 <210> 3 <211> 293 <212> DNA <213> Cauliflower mosaic virus <400> 3 ccgatcctac ctgtcacttc atcaaaagga cagtagaaaa ggaaggtggc atctacaaat 60 gccatcattg cgataaagga aaggctatca ttcaagattc ctctgccgac agtggtccca 120 aagatggacc cccacccact aggagcatcg tggaaaaaga agacgttcca accacgtctt 180 caaagcaagt ggattgatgt gatacttcca ctgacgtaag ggatgacgca caatcccact 240 atccttcgca agacccttcc tctatataag gaagttcatt tcatttggag agg 293 <210> 4 <211> 1696 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 4 tattctgtca tcagctatca ctgctctgcc tgaacttgtc tgagctatta ctactgtagt 60 atatgaattt atgaagtgga gtctcgtaac aaaaatacga gtatactccg tactgtacta 120 cccttatcag gattcaagga tactaggagt atagcattac cagatcaggc acttagatgt 180 ggccatccaa agagtaatgg taatagccta ataggagtac catctactat tgatctttca 240 aaaaaaaaag tactagtata gaagtagtat ccagctagag ctgcttaaca gggtcagaat 300 ttgtccaaac agagcttgta atgcacactg acgaagtcga tccgatcgaa tcagagtcaa 360 catttaaaga gtactatttc gaagtaaaac tgttcagttc ttacaagatt acatgtgaat 420 ttgcaagact tggacatgag tgttcatctc gtagtttaat gatgggtacc caacctgcaa 480 caacagtgct ttaaattgta caagcagagg gtaccaacag agtaatttgc acatgcagtc 540 ctgaacctga tgccattgcg aaacacacaa ccctatacgg tgcagatgca agggagccca 600 attcagtccc agccattatc tgtattgccg tacttccgca gggaaagtta ccctctcatc 660 tgatctacca ttgcatacat ctcaaaagga agtgagtaaa aaagaaaaca ggaccaatct 720 tcagagataa gtttttgaaa cctatcttca gagataagtt cactcggcga taggagagga 780 cctgatttgg actcaaatca ggtgttgacg aatagagtag caagagtttt ttcgacgggt 840 caagacctca agggtcttaa cagttgaact aactcggtta tgatttggac acttggtgat 900 taactactga taatagtact acttattgtt attggcttgt tacatcattc ggtgctcaaa 960 aatcagatgc aaatttagat gggacagaca gcagctacta gcaacataag agaattatgt 1020 tcagtgtatc atgcatgact aaactctgaa cgtactcacc tggatccaga tgcgagcagt 1080 acagtacctg tgcacattgc ttgtgtatta ctccacttaa ttacgaactc tattattttc 1140 ctccgataat gcccgcagaa caaggttgtc actgaaaaat ggtcctctcc agagtccagg 1200 agctatagga ggagtatgat actccttagc aatcatatac tcatatgaca tatccaaatt 1260 gacaccgggg ttaagccgtt aaccgtcact acgagttgca cttgtataaa caaaaaacaa 1320 gggagaaaac cttgtgtccc ccccatgatg cagaaatcta ataagagcag cccaacgctt 1380 ccggttggtg gcggtagacc ggcctcttta aactacccca tccgccccag atttatcaat 1440 tactcctcgt catctcgtct cgtctccgcc accgtgcgcg cgtcccctat attagacccc 1500 ccaaccgggc accggacaca ccatcaccaa cacaccactg caaacccatc cgcctccgca 1560 ccgcatcgca cctacaaatt gtgcacgctg caccgctcaa aaaaaagaag aaactaaagt 1620 cgtacgtagg acgcggcgtg cgagcgttgg tgcggtgcgc ggcggcgcgc ggggaagtag 1680 tgagagcatc gatcat 1696 <210> 5 <211> 1406 <212> DNA <213> Zea mays <400> 5 gattggtaga atccgacggg ttgatacccc tgcaatcgta gcgtgatgag ggtgtgaatg 60 ttgccgatgt gtggacttcg aggaaatgat agcccctgga tgccgagata gccgaagtcg 120 aggtggtcgt ggtcgggaga cacgcagcag tagcctattc tttggtaggg gtcgatgttc 180 aagcgtcaac gatcggctgg gcgacataaa aattagcacc agggtgacct tcttgcttct 240 tcgatcgtct ggacgtcgag gagccccgcg gcagcgcacg cgtctgcacc gttatggtgg 300 ccgcgctcgc gatggaatag aaggggtaat gatggatccg gccaggaagg ccacgacatc 360 gacggatcca accggcaaga cggcgatccg gttaaataga cgacggatct agctgggaag 420 gtagactcta tattaaatga ggttgtacat gccctaataa ctttataaat ctaatttatt 480 cagaggcaag gtagtagtat tatctttccc aacggatagt tatctgatct gccgttcagc 540 ttgatcgata actttataaa tctaatttat tcagaggccg gcggcagcgc acacgtctgc 600 accagtaatg ttagccgcgc ctgtggcgta atagaagggg taacgatgga tccgaccaga 660 aaggcctcga catcgacgga tccagacggc gatccggtca aagagacgac gaatctagcc 720 gagaaggtag atctctcgag agagttcata ttaaatgatg ttgtacatgc cataataact 780 ctataaatct aatttattca taggcgaagg tagtagtatt atctttccca gcggatcgtt 840 atctgatctg ccgttcagct tgatcgatcc acgtcgtttg atctcggcga gcagcacatg 900 gcggctcttc ttgtgtacag gtctcactct ctgctacttc agtgcaaggc ggagtgaacg 960 cacacaataa cgtgagtatt gtgggaacta ccttgtagat gcaaacgatg taaatccacc 1020 tgctccacca agtgcccgcc cggctctatc cattccattc gtcaacatgc aggttcaaga 1080 ctggcccgtg ctggaccagt gagcggtgcc ggtggacccc aatgcaagcg aagcgagtga 1140 ccatcgggga agcctcccgt gctgccccca catggcttgc ctgaatgcct ctctctcgcc 1200 gcagtgccct ctctctctcc tcctcctctc cgtcgaaggg cgtcacgaga gcccagaggg 1260 catccgaggc ccccacccca ccccttcctc ccgtgtatat aagcagtggc agggtgagcg 1320 tctctcctca gaccaccact gcgccatggc cagctagagc caaccagaag agcttgcagt 1380 tactgagagt gtgtgagaga gagagg 1406 <210> 6 <211> 763 <212> DNA <213> Sorghum sp. <400> 6 ccggccgcca tggcggccgc gggaaattcg attccacgga gttctagatt tggtttttgc 60 ggtgaactaa acaaggccat atattagtgt gctgtgtttc cccctacgaa gcattgtgga 120 gtcgtgcttg atccacgtcg tttgatctgg gcgaggtgca caaacgtcac atggctcttc 180 ttgctacttc agtgcaaagg gagtgtatgc atgcacacaa taatgcggcc tgcgtctgtg 240 tacggtagaa aaatacttta tacaggatat gcaacgacgt gaatgctgca cctgccccct 300 gcccctgccc ctgcccgccc tagtagctat tcacggctct atccattcca ttgccgtgcg 360 tcaacaggtc cagactggcc cgggtccaag cgagtgacca acgcgggaag cctcccgtcc 420 ctccctcccc cacatgggac atggctgcct gatgaatgcc tctcgccgca ctgcccctgc 480 ccctgcccct gcccctgccc tcactccatc ggagggcggc ggcttcacga gagccgagca 540 ggacccagac ccagcgggca tccgaggccc ccacccccac ccccacccct tcctccgtgt 600 ataaaagcgg tgccagggtg agcgtctctc ctcacactga ctgcaccaga acaagagctt 660 gagagtgaga gtgaggctgc agggaagtgt aatcactagt gaattcgcgg ccgcctgcag 720 gtcgaccata tgggagagct cccaacgcgt tggatgaagc tgg 763 <210> 7 <211> 1031 <212> DNA <213> Zea mays <400> 7 gatcgtgatt taaccgcaag tcacatttag cacttaaatc cttccaccac cagctcaata 60 atctttataa aaaaacccct aacaaatcat ggttgtatct gtggttggat cgtaatctaa 120 tgaatcaaat agtttgcttg cacgcttaca cagaaacact gcttgcatag cagtcgttgc 180 ctatgtctta catgcaaatt tcatgagtca tgggctcata accaatgcca ctggtacact 240 gttataagga atattcgtcc tagcgtaaag aacttaagta tattaatata atttacctta 300 cacatctaaa gaagcacaaa tccattgaaa atgataaatt tcagttctta ccttgtcctc 360 gatctcatct gttttgattg ctggtaaata cattcgatcc tttttttaaa aaaaaactga 420 agatattttt gccacttcaa tctattttga cgtgatcata cggaccgcca ggcatttttt 480 ttcgcctttc tttaacctca tctcatcggc aattaaagac cagggaaata gtaattgcga 540 caggcttctc tggtcctatt ggcgatcagg acaacccacc taaaacacat gccaaaaagg 600 gctttctctc cctgctgaac accaactacc ctgcgccggg tccagggtgc gccgggttct 660 ccctctcgct cccacgcggc aaaccccacg acgtgctata aatattccac gaacggcccg 720 gatacctcca gccccgcatc gcaccctccc tggccgcctt ctcttctcca gcgtccgatc 780 tctcccactc gccttcctca ccgcagctct cccggctcgg tcgcttcgcc acctccgtcc 840 tccccccgcg ctcggtcgct cgccacctgc tctcccctcc ctccacgttg ctcgcgcccg 900 cgcttatata aggtacgccg cctcgactct ccaaacccct ccgcgtggac ctaaggtccg 960 gcgcgccgag atggagctga tggatctagg gtttcggttg cggcggcggt cctgtagtgc 1020 aggaggagct c 1031 <210> 8 <211> 1603 <212> DNA <213> Zea mays <400> 8 ctgcgtgtac aactaatata attgtccaaa caatttctgt ggcacgtact taagtttgag 60 ccaggataca aactttggcc gctaatggtt gctgtcgccg gtcaagaggg cgttggctac 120 ttgagttaga ttttggttgt gtttcatccc cacgtacgtc cagcaaagaa aaattgaagc 180 tagtgcatgc atggttcgtc atcaaatgca tggccggccg gatacaaatt tgaactgtag 240 ctatcgacgt acgcatgtat taatttatat cagagaagac aaggaacaca gatacataca 300 tgtcgaaaca atcattttct atggcacttg agctagctag catacaattt tgttttaaat 360 gaaatgaaac tgaagacgat cgatcgaatt gaaggttgtg gttcgtgagc aatgcaatgc 420 agtttcacag aacgttgcca atgcaacaag ccaccaagaa aagagaagtc tactcgatct 480 tgcaatgatt aggcttggat gatgcgtggg gccacgtacg tatggacatc gaagaacccc 540 atcctcagcg tgtggcctga gggtgatggc aaagctgatc cacacattgc ggcccccttt 600 cccccctcag agaccctgac ctcccgagca cagccagcca ccgcgcaacg ccggccacca 660 ccaccaccac catacctgct agcgctagct ctctttattt aacgccgccg tgtgcgtgcc 720 tcgacgacct cactactttg agctgcaagg tccgaactaa aaagcacaag aaagatctac 780 cgtcttcggt acgcgctcac tccgccctct gcctttgtta ctgccacgtt tctctgaatg 840 ctctcttgtg tggtgattgc tgagagtggt ttagctggat ctagaattac actctgaaat 900 cgtgttctgc ctgtgctgat tacttgccgt cctttgtagc agcaaaatat agggacatgg 960 tagtacgaaa cgaagataga acctacacag caatacgaga aatgtgtaat ttggtgctta 1020 gcggtattta tttaagcaca tgttggtgtt atagggcact tggattcaga agtttgctgt 1080 taatttaggc acaggcttca tactacatgg gtcaatagta tagggattca tattataggc 1140 gatactataa taatttgttc gtctgcagag cttattattt gccaaaatta gatattccta 1200 ttctgttttt gtttgtgtgc tgttaaattg ttaacgcctg aaggaataaa tataaatgac 1260 gaaattttga tgtttatctc tgctccttta ttgtgaccat aagtcaagat cagatgcact 1320 tgttttaaat attgttgtct gaagaaataa gtactgacag tattttgatg cattgatctg 1380 cttgtttgtt gtaacaaaat ttaaaaataa agagtttcct ttttgttgct ctccttacct 1440 cctgatggta tctagtatct accaactgac actatattgc ttctctttac atacgtatct 1500 tgctcgatgc cttctcccta gtgttgacca gtgttactca catagtcttt gctcatttca 1560 ttgtaatgca gataccaagc ggcctctaga ggccctacgg gcc 1603 <210> 9 <211> 582 <212> DNA <213> Zea mays <400> 9 ggtactcctg agatactata ccctcctgtt ttaaaatagt tggcattatc gaattatcat 60 tttacttttt aatgttttct cttcttttaa tatattttat gaattttaat gtattttaaa 120 atgttatgca gttcgctctg gacttttctg ctgcgcctac acttgggtgt actgggccta 180 aattcagcct gaccgaccgc ctgcattgaa taatggatga gcaccggtaa aatccgcgta 240 cccaactttc gagaagaacc gagacgtggc gggccgggcc accgacgcac ggcaccagcg 300 actgcacacg tcccgccggc gtacgtgtac gtgctgttcc ctcactggcc gcccaatcca 360 ctcatgcatg cccacgtaca cccctgccgt ggcgcgccca gatcctaatc ctttcgccgt 420 tctgcacttc tgctgcctat aaatggcggc atcgaccgtc acctgcttca ccaccggcga 480 gccacatcga gaacacgatc gagcacacaa gcacgaagac tcgtttagga gaaaccacaa 540 accaccaagc cgtgcaagca ccctgcaggg gccctacggg cc 582 <210> 10 <211> 1790 <212> DNA <213> Zea mays <400> 10 gacatggagg tggaaggcct gacgtagata gagaagatgc tcttagcttt cattgtcttt 60 cttttgtagt catctgattt acctctctcg tttatacaac tggtttttta aacactcctt 120 aacttttcaa attgtctctt tctttaccct agactagata attttaatgg tgattttgct 180 aatgtggcgc catgttagat agaggtaaaa tgaactagtt aaaagctcag agtgataaat 240 caggctctca aaaattcata aactgttttt taaatatcca aatattttta catggaaaat 300 aataaaattt agtttagtat taaaaaattc agttgaatat agttttgtct tcaaaaatta 360 tgaaactgat cttaattatt tttccttaaa accgtgctct atctttgatg tctagtttga 420 gacgattata taattttttt tgtgcttaac tacgacgagc tgaagtacgt agaaatacta 480 gtggagtcgt gccgcgtgtg cctgtagcca ctcgtacgct acagcccaag cgctagagcc 540 caagaggccg gaggtggaag gcgtcgcggc actatagcca ctcgccgcaa gagcccaaga 600 gaccggagct ggaaggatga gggtctgggt gttcacgaat tgcctggagg caggaggctc 660 gtcgtccgga gccacaggcg tggagacgtc cgggataagg tgagcagccg ctgcgatagg 720 ggcgcgtgtg aaccccgtcg cgccccacgg atggtataag aataaaggca ttccgcgtgc 780 aggattcacc cgttcgcctc tcaccttttc gctgtactca ctcgccacac acaccccctc 840 tccagctccg ttggagctcc ggacagcagc aggcgcgggg cggtcacgta gtaagcagct 900 ctcggctccc tctccccttg ctccatttga tagtgcaacc catcgagcta caggcctaat 960 ctagcctcgg actagtcgag agatctaccg tcttcggtac gcgctcactc cgccctctgc 1020 ctttgttact gccacgtttc tctgaatgct ctcttgtgtg gtgattgctg agagtggttt 1080 agctggatct agaattacac tctgaaatcg tgttctgcct gtgctgatta cttgccgtcc 1140 tttgtagcag caaaatatag ggacatggta gtacgaaacg aagatagaac ctacacagca 1200 atacgagaaa tgtgtaattt ggtgcttagc ggtatttatt taagcacatg ttggtgttat 1260 agggcacttg gattcagaag tttgctgtta atttaggcac aggcttcata ctacatgggt 1320 caatagtata gggattcata ttataggcga tactataata atttgttcgt ctgcagagct 1380 tattatttgc caaaattaga tattcctatt ctgtttttgt ttgtgtgctg ttaaattgtt 1440 aacgcctgaa ggaataaata taaatgacga aattttgatg tttatctctg ctcctttatt 1500 gtgaccataa gtcaagatca gatgcacttg ttttaaatat tgttgtctga agaaataagt 1560 actgacagta ttttgatgca ttgatctgct tgtttgttgt aacaaaattt aaaaataaag 1620 agtttccttt ttgttgctct ccttacctcc tgatggtatc tagtatctac caactgacac 1680 tatattgctt ctctttacat acgtatcttg ctcgatgcct tctccctagt gttgaccagt 1740 gttactcaca tagtctttgc tcatttcatt gtaatgcaga taccaagcgg 1790 <210> 11 <211> 1263 <212> DNA <213> Zea mays <400> 11 acttaaaaat caacaatatc ttcacatgac ttaattataa tgtcttgctt gagacgttgt 60 ttttgctact acataagata aagttcaaat aaatgcatgg tggagttcag cctaggcaaa 120 gtgatggtcc gaatgattaa caccccaagc aagacattat aagtcatgtg aagatctgca 180 agacgtgcta agagtctctg acacaccaac aagtggaagc ccgaacaaac aaaaacgaag 240 ccatcaaagt tgagataaag aggtggataa attgaaaatt gtctcatgat tttggatata 300 ctcaaatcga catgacttca tctctaaact atagaacttt tgatttgctt ttcaaaaagt 360 ccaagatcaa caaaacgtgt tggtgggtgc gggtttggtt cttaacccaa taggtttttt 420 ctcgtgtgta tgaaaaggtt gtacccatgt gtgaccgagc cagacagggg tacgggcaaa 480 ccgaagggaa accacttagg tggatccctt ggctagcctg agactgacac accataagtg 540 atcggccgct tttaactacg cctggtgccg agccacaata gagatgtcgg tctgtctccc 600 acttatgacc tacgaacccc tcgtactatg gctcatctat gggtcgtgtg ccccttggct 660 tactgcgcac tcatgcccta tcaaggctag gccagagtgc gtaggccgct ttcagagatc 720 actcggtgaa aaaatcactc ggtgatgaaa ccggcgaact gtcgttgggt gggtgggtct 780 tactatcaaa gaaaacgtat tccagcaaac gtattccact ctccacaaaa taaacatttc 840 tgttcggtta cctaggtgag gcatcctgta agaacttggc tgtgtttagt cacagcaaac 900 gtataccact ctccacaaaa taaaataaaa aacgggtcag tgaagctgca attaatccct 960 tctcttgctt gctggttgct gccagggaaa tggcattagt gtttgttccc gttccgaaga 1020 ccgcagcaac ccccggaatc ggaaacgcct gccccctgca gcaccaaaga ccgtaccaac 1080 ccccgcaatc gcagttcgca aaccaaacta atttgtgtac acaaaccggc cccgtctcgg 1140 ttctattcta taaaaccccc gccagaccgc tggcttgttc cgtcgcctcc gctgtccgct 1200 gcacagactg tagtaccggg gcaggggcag gggcaggggc acaaacagag ccacaccaca 1260 cac 1263 <210> 12 <211> 925 <212> DNA <213> Pisum sativum <400> 12 tatgaaccaa gtttcttgtt cttcaaactt tttctaattc tccatcttag agtttctttt 60 cataattaat gtaggaattg accctagtaa gaaagtcact catacccttt ccttcttcta 120 gccctaaatt tccgtgaaac atatagtctt cccttaaccc tttttggaac atccaacatt 180 gcagcttatc atatattgat cctactttgg tgaagcgttc catgtactcc cggaggattt 240 ccattttcat ctattggatt cctatgaaga caactatagt cttggatttc aaattttggg 300 aagtaaacta ggaagtgaag gagtagcaga attccttcca agaatctatg caaccatcag 360 gtaagatttt aaaccatgtc atggcagctc cattgtgggt cagggcgtat agtttacatt 420 tcacaacgct ctatcccgtg acattattaa ataccatttt gaaataaaaa gtttctacaa 480 aaaaagtcct tcgtcgttat ccatcatttt tattaaagta tattttatta tttattcaaa 540 caagtaatca tccattagcg gagaaataga ggagtgaagc atttaacttt tccaaacgaa 600 agcgacgtaa tcaacctaca tttgacttag attggattaa gcatgcaaca aattaaaatt 660 taatcgccgt tgcaatttgc acaccacaat aagacgtgtg atgaaaacga tatctacgtg 720 gaaataatcc aagggtggcc ttgtggaccc atgcaacaca ggatgacaac acgtggacgg 780 tcaagatttc accaattatt ctctcccacc ttataaaatg gggcacgcaa catcattaaa 840 agacatcaat tgtagtgaag ataacagcaa ccaagcaatt aatatcaatt gttgtttgca 900 aaaaatctta ggttctgaaa atacc 925 <210> 13 <211> 2192 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 13 gacaacaaca tgcttctcat caacatggag ggaagaggga gggagaaagt gtcgcctggt 60 cacctccatt gtcacactag ccactggcca gctctcccac accaccaatg ccaggggcga 120 gctttagcac agccaccgct tcacctccac caccgcacta ccctagcttc gcccaacagc 180 caccgtcaac gcctcctctc cgtcaacata agagagagag agaagaggag agtagccatg 240 tggggaggag gaatagtaca tggggcctac cgtttggcaa gttattttgg gttgccaagt 300 taggccaata aggggaggga tttggccatc cggttggaaa ggttattggg gtagtatctt 360 tttactagaa ttgtcaaaaa aaaatagttt gagagccatt tggagaggat gttgcctgtt 420 agaggtgctc ttaggacatc aaattccata aaaacatcag aaaaattctc tcgatgaaga 480 tttataacca ctaaaactgc cctcaattcg aagggagttc aaaacaatta aaatcatgtt 540 cgaattgagt ttcaatttca ctttaacccc tttgaaatct caatggtaaa acatcaaccc 600 gtcaggtagc atggttcttt ttattccttt caaaaagagt taattacaaa cagaatcaaa 660 actaacagtt aggcccaagg cccatccgag caaacaatag atcatgggcc aggcctgcca 720 ccaccctccc cctcctggct cccgctcttg aatttcaaaa tccaaaaata tcggcacgac 780 tggccgccga cggagcgggc ggaaaatgac ggaacaaccc ctcgaattct accccaacta 840 cgcccaccaa cccacacgcc actgacaatc cggtcccacc cttgtgggcc cacctacaag 900 cgagacgtca gtcgctcgca gcaaccagtg ggcccacctc ccagtgagcg gcgggtagat 960 ctggactctt acccacccac actaaacaaa acggcatgaa tattttgcac taaaaccctc 1020 agaaaaattc cgatattcca aaccagtaca gttcctgacc gttggaggag ccaaagtgga 1080 gcggagtgta aaattgggaa acttaatcga gggggttaaa cgcaaaaacg ccgaggcgcc 1140 tcccgctcta tagaaagggg aggagtggga ggtggaaacc ctaccacacc gcagagaaag 1200 gcgtcttcgt actcgcctct ctccgcgccc tcctccgccg ccgctcgccg ccgttcgtct 1260 ccgccgccac cggctagcca tccaggtaaa acaaacaaaa acggatctga tgcttccatt 1320 cctccgtttc tcgtagtagc gcgcttcgat ctgtgggtgg atctgggtga tcctggggtg 1380 tggttcgttc tgtttgatag atctgtcggt ggatctggcc ttctgtggtt gtcgatgtcc 1440 ggatctgcgt tttgatcagt ggtagttcgt ggatctggcg aaatgttttg gatctggcag 1500 tgagacgcta agaatcggga aatgatgcaa tattaggggg gtttcggatg gggatccact 1560 gaattagtct gtctccctgc tgataatctg ttcctttttg gtagatctgg ttagtgtatg 1620 tttgtttcgg atagatctga tcaatgcttg tttgtttttt caaattttct acctaggttg 1680 tataggaatg gcatgcggat ctggttggat tgccatgatc cgtgctgaaa tgcccctttg 1740 gttgatggat cttgatattt tactgctgtt cacctagatt tgtactcccg tttatactta 1800 atttgttgct tattatgaat agatctgtaa cttaggcaca tgtatggacg gagtatgtgg 1860 atctgtagta tgtacattgc tgcgagctaa gaactatttc agagcaagca cagaaaaaaa 1920 tatttagaca gattgggcaa ctatttgatg gtctttggta tcatgctttg tagtgctcgt 1980 ttctgcgtag taatcttttg atctgatctg aagataggtg ctattatatt cttaaaggtc 2040 attagaacgc tatctgaaag gctgtattat gtggattggt tcacctgtga ctccctgttc 2100 gtcttgtctt gataaatcct gtgataaaaa aaattcttaa ggcgtaattt gttgaaatct 2160 tgttttgtcc tatgcagcct gatccttaat ta 2192 <210> 14 <211> 1400 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 14 ctcgaggtca ttcatatgct tgagaagaga gtcgggatag tccaaaataa aacaaaggta 60 agattacctg gtcaaaagtg aaaacatcag ttaaaaggtg gtataaagta aaatatcggt 120 aataaaaggt ggcccaaagt gaaatttact cttttctact attataaaaa ttgaggatgt 180 ttttgtcggt actttgatac gtcatttttg tatgaattgg tttttaagtt tattcgcttt 240 tggaaatgca tatctgtatt tgagtcgggt tttaagttcg tttgcttttg taaatacaga 300 gggatttgta taagaaatat ctttaaaaaa acccatatgc taatttgaca taatttttga 360 gaaaaatata tattcaggcg aattctcaca atgaacaata ataagattaa aatagctttc 420 ccccgttgca gcgcatgggt attttttcta gtaaaaataa aagataaact tagactcaaa 480 acatttacaa aaacaacccc taaagtccta aagcccaaag tgctatccac gatccatagc 540 aagcccagcc caacccaacc caacccaacc caccccagtc cagccaactg gacaatagtc 600 tccacacccc cccactatca ccgtgagttg tccgcacgca ccgcacgtct cgcagccaaa 660 aaaaaaaaaa gaaagaaaaa aaagaaaaag aaaaaacagc aggtgggtcc gggtcgtggg 720 ggccggaaac gcgaggagga tcgcgagcca gcgacgaggc cggccctccc tccgcttcca 780 aagaaacgcc ccccatcgcc actatataca tacccccccc tctcctccca tccccccaac 840 cctaccacca ccaccaccac cacctccacc tcctcccccc tcgctgccgg acgacgagct 900 cctcccccct ccccctccgc cgccgccgcg ccggtaacca ccccgcccct ctcctctttc 960 tttctccgtt ttttttttcc gtctcggtct cgatctttgg ccttggtagt ttgggtgggc 1020 gagaggcggc ttcgtgcgcg cccagatcgg tgcgcgggag gggcgggatc tcgcggctgg 1080 ggctctcgcc ggcgtggatc cggcccggat ctcgcgggga atggggctct cggatgtaga 1140 tctgcgatcc gccgttgttg ggggagatga tggggggttt aaaatttccg ccatgctaaa 1200 caagatcagg aagaggggaa aagggcacta tggtttatat ttttatatat ttctgctgct 1260 tcgtcaggct tagatgtgct agatctttct ttcttctttt tgtgggtaga atttgaatcc 1320 ctcagcattg ttcatcggta gtttttcttt tcatgatttg tgacaaatgc agcctcgtgc 1380 ggagcttttt tgtaggtaga 1400 <210> 15 <211> 1403 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 15 ctcgaggtca ttcatatgct tgagaagaga gtcgggatag tccaaaataa aacaaaggta 60 agattacctg gtcaaaagtg aaaacatcag ttaaaaggtg gtataaagta aaatatcggt 120 aataaaaggt ggcccaaagt gaaatttact cttttctact attataaaaa ttgaggatgt 180 ttttgtcggt actttgatac gtcatttttg tatgaattgg tttttaagtt tattcgcttt 240 tggaaatgca tatctgtatt tgagtcgggt tttaagttcg tttgcttttg taaatacaga 300 gggatttgta taagaaatat ctttaaaaaa acccatatgc taatttgaca taatttttga 360 gaaaaatata tattcaggcg aattctcaca atgaacaata ataagattaa aatagctttc 420 ccccgttgca gcgcatgggt attttttcta gtaaaaataa aagataaact tagactcaaa 480 acatttacaa aaacaacccc taaagttcct aaagcccaaa gtgctatcca cgatccatag 540 caagcccagc ccaacccaac ccaacccaac ccaccccagt ccagccaact ggacaatagt 600 ctccacaccc ccccactatc accgtgagtt gtccgcacgc accgcacgtc tcgcagccaa 660 aaaaaaaaaa agaaagaaaa aaaagaaaaa gaaaaaacag caggtgggtc cgggtcgtgg 720 gggccggaaa cgcgaggagg atcgcgagcc agcgacgagg ccggccctcc ctccgcttcc 780 aaagaaacgc cccccatcgc cactatatac ataccccccc ctctcctccc atccccccaa 840 ccctaccacc accaccacca ccacctccac ctcctccccc ctcgctgccg gacgacgagc 900 tcctcccccc tccccctccg ccgccgccgc gccggtaacc accccgcccc tctcctcttt 960 ctttctccgt tttttttttc cgtctcggtc tcgatctttg gccttggtag tttgggtggg 1020 cgagaggcgg cttcgtgcgc gcccagatcg gtgcgcggga ggggcgggat ctcgcggctg 1080 gggctctcgc cggcgtggat ccggcccgga tctcgcgggg aatggggctc tcggatgtag 1140 atctgcgatc cgccgttgtt gggggagatg atggggggtt taaaatttcc gccatgctaa 1200 acaagatcag gaagagggga aaagggcact atggtttata tttttatata tttctgctgc 1260 ttcgtcaggc ttagatgtgc tagatctttc tttcttcttt ttgtgggtag aatttgaatc 1320 cctcagcatt gttcatcggt agtttttctt ttcatgattt gtgacaaatg cagcctcgtg 1380 cggagctttt ttgtaggtag acc 1403 <210> 16 <211> 1189 <212> DNA <213> Zea mays <400> 16 atcggaatat tagcatgtca acttgcactc tctaaggctc ctttggaaag caggatttta 60 gaaaaaaaaa tcatataaat tttttacatg aatcagttta ttttcggatt atgaaatatt 120 ttctcataac agtataacac atattttgta tataagttat tatgttatta tatataaccg 180 ttgcaacgta cgggcattca cctagtaaag aaagaagatt aattattctc tggtggagat 240 tgtgcccgag cccgaaggtc atgatatgga cgttgcaaac ccacttcacg aggggacaaa 300 aaagaaatag ggttaccact ttcatcagtt aaagggcgtg acatggacgt gttgaagatc 360 cggcacattc cctgcgaaat atacacgtca tggtactaac gaggcatgaa actggccaca 420 tggccgtgga cgcgtgaagc gtgccatgca ttggacatgc ggcatccgaa cttctgaaga 480 tcatatcaga gagacactga tgtacgaact gccgtaacat tctattctat atataccctc 540 agtccctgtt ccagttctcg ttaagctagc agcaccaagt tgtcgaacac ttgcctgctc 600 ttgagctcga tcaagctatc atcagctgcg tcttgcgcac agcaacagct tcccaactgc 660 aaccgtagca gccagatcca agggaggcct ccgccgccgc cggtaaccac cccgcccctc 720 tcctctttct ttctccgttt ttttttccgt ctcggtctcg atctttggcc ttggtagttt 780 gggtgggcga gaggcggctt cgtgcgcgcc cagatcggtg cgcgggaggg gcgggatctc 840 gcggctgggg ctctcgccgg cgtggatccg gcccggatct cgcggggaat ggggctctcg 900 gatgtagatc tgcgatccgc cgttgttggg ggagatgatg gggggtttaa aatttccgcc 960 gtgctaaaca agatcaggaa gaggggaaaa gggcactatg gtttatattt ttatatattt 1020 ctgctgcttc gtcaggctta gatgtgctag atctttcttt cttctttttg tgggtagaat 1080 ttgaatccct cagcattgtt catcggtagt ttttcttttc atgatttgtg acaaatgcag 1140 cctcgtgcgg agcttttttg taggtagaag tgatcaggcc ctacgggcc 1189 <210> 17 <211> 1809 <212> DNA <213> Hordeum vulgare <400> 17 catcgatttt aaaaaaaagt tcataccttt caaaaacgtt catcaatttt tttaaaaagt 60 tcactaaaaa tgaaaaaaag ttcatccaat ttaaaaaaag ttcattaatt ttttataaat 120 ttcaataaat ttgaaaaaac ttcataaaat tcaacaaaag ttcattgaag tgaaaaaagc 180 tcataaatct ttaaaaagtg catccatttt caaaaagatg ttcatcaaaa ttcaatatag 240 ttcaccaata ttcaaaaaag ttcattaatc ttaaaaaata ttcgctaaaa tttaaaaaat 300 gtttatcaat atttaaacgg cgtctagatg agccggtcta tttacaaaca ccataggcgc 360 caattaacaa aaatgcacgt tagatcacgt ctacggcgtc aaataggaaa tgcccatcgg 420 ccttactatt aagagttgtt ttggttatcc tttaggattt atgctgtggg ctggacttaa 480 cacaaaaccc acagccatgg taggccggaa tctattattc agctcacaaa cgatgttcta 540 ctcaaaagaa gaaaaaaatc tgttgtcaga aaaagagaac aaaaaaggct cacgaacatg 600 ccgcggctcg cacaggtggc cgtgagcttc tgaatgactt ggccacccgg catgtccact 660 gcccccctag acggtgtggg tgggtggaca ggtcaagcgc attgaacaag gtcaccctgc 720 gttctgccac gaggccaact gcgtggccct catgcaacgc gccttgctgc cacttctaca 780 cacgccctcg ccggccgacc gctgctataa aagcagctcc ccgttgcgtc ctcgacggca 840 tccatcgaga gacgttcgca gcagcaaaga gcacgcagca actagctttc agttgtttca 900 accatcccgg gacctgcagg accaggtggg cccaccgtct tcggtacgcg ctcactccgc 960 cctctgcctt tgttactgcc acgtttctct gaatgctctc ttgtgtggtg attgctgaga 1020 gtggtttagc tggatctaga attacactct gaaatcgtgt tctgcctgtg ctgattactt 1080 gccgtccttt gtagcagcaa aatataggga catggtagta cgaaacgaag atagaaccta 1140 cacagcaata cgagaaatgt gtaatttggt gcttagcggt atttatttaa gcacatgttg 1200 gtgttatagg gcacttggat tcagaagttt gctgttaatt taggcacagg cttcatacta 1260 catgggtcaa tagtataggg attcatatta taggcgatac tataataatt tgttcgtctg 1320 cagagcttat tatttgccaa aattagatat tcctattctg tttttgtttg tgtgctgtta 1380 aattgttaac gcctgaagga ataaatataa atgacgaaat tttgatgttt atctctgctc 1440 ctttattgtg accataagtc aagatcagat gcacttgttt taaatattgt tgtctgaaga 1500 aataagtact gacagtattt tgatgcattg atctgcttgt ttgttgtaac aaaatttaaa 1560 aataaagagt ttcctttttg ttgctctcct tacctcctga tggtatctag tatctaccaa 1620 ctgacactat attgcttctc tttacatacg tatcttgctc gatgccttct ccctagtgtt 1680 gaccagtgtt actcacatag tctttgctca tttcattgta atgcagatac caagcgggag 1740 ctcgacgtcc ctcagcagtc gctgtgcgat cgccagcggt actcgctgag gcctaggcgc 1800 ggatccccc 1809 <210> 18 <211> 973 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 18 actaaatcta gccttttcag accggacatg aacttcgcat attggcgtaa ctgtgcagtt 60 ttaccttttt cggatcagac aagatcagat ttagaccacc caacaatagt cagtcatatt 120 tgacaaccta agctagccga cactactaaa aagcaaacaa aagaagaatt ctatgttgtc 180 attttaccgg tggcaagtgg acccttctat aaaagagtaa agagacagcc tgtgtgtgta 240 taatctctaa ttatgttcac cgacacaatc acacaaaccc ttctctaatc acacaacttc 300 ttcatgattt acgacattaa ttatcattaa ctctttaaat tcactttaca tgctcaaaaa 360 tatctaattt gcagcattaa tttgagtacc gataactatt attataatcg tcgtgattcg 420 caatcttctt cattagatgc tgtcaagttg tactcgcacg cggtggtcca gtgaagcaaa 480 tccaacggtt taaaaccttc ttacatttct agatctaatc tgaaccgtca gatatctaga 540 tctcattgtc tgaacacagt tagataaaac tgggaataaa tctggacgaa attacgatct 600 tacaccaacc ccctcgacga gctcgtatat ataaagctta tacgctcctc cttcaccttc 660 gtactactac taccaccaca tttctttagc tcaaccttca ttactaatct ccttttaagg 720 taagttcact tttcttcgat tcatactttc tcaagattcc tgcatttctt tagaatttga 780 accaagtgtc gatttttgtt tgagagaagt gttgatttat agatctggtt attgaatcta 840 gattccaatt tttaattgat tcgagtttgt taagtgcgtt tatactactt ctcattgatc 900 ttgtttgatt tctctgctct gtattaggtt tctttcgtga atcagatcgg aacctgcagg 960 ggccctacgg gcc 973 <210> 19 <211> 506 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 19 attttacgta taaaataaaa gatcatacct attagaacga ttaaggagaa atacaattcg 60 aatgagaagg atgtgccgtt tgttataata aacagccaca cgacgtaaac gtaaaatgac 120 cacatgatgg gccaatagac atggaccgac tactaataat agtaagttac attttaggat 180 ggaataaata tcataccgac atcagtttga aagaaaaggg aaaaaaagaa aaaataaata 240 aaagatatac taccgacatg agttccaaaa agcaaaaaaa aagatcaagc cgacacagac 300 acgcgtagag agcaaaatga ctttgacgtc acaccacgaa aacagacgct tcatacgtgt 360 ccctttatct ctctcagtct ctctataaac ttagtgagac cctcctctgt tttactcaca 420 aatatgcaaa ctagaaaaca atcatcagga ataaagggtt tgattacttc tattggaaag 480 aaaaaaatct ttggaaaaga tctacc 506 <210> 20 <211> 1727 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 20 caaatttatt atgtgttttt tttccgtggt cgagattgtg tattattctt tagttattac 60 aagactttta gctaaaattt gaaagaattt actttaagaa aatcttaaca tctgagataa 120 tttcagcaat agattatatt tttcattact ctagcagtat ttttgcagat caatcgcaac 180 atatatggtt gttagaaaaa atgcactata tatatatata ttattttttc aattaaaagt 240 gcatgatata taatatatat atatatatat atatgtgtgt gtgtatatgg tcaaagaaat 300 tcttatacaa atatacacga acacatatat ttgacaaaat caaagtatta cactaaacaa 360 tgagttggtg catggccaaa acaaatatgt agattaaaaa ttccagcctc caaaaaaaaa 420 tccaagtgtt gtaaagcatt atatatatat agtagatccc aaatttttgt acaattccac 480 actgatcgaa tttttaaagt tgaatatctg acgtaggatt tttttaatgt cttacctgac 540 catttactaa taacattcat acgttttcat ttgaaatatc ctctataatt atattgaatt 600 tggcacataa taagaaacct aattggtgat ttattttact agtaaatttc tggtgatggg 660 ctttctacta gaaagctctc ggaaaatctt ggaccaaatc catattccat gacttcgatt 720 gttaacccta ttagttttca caaacatact atcaatatca ttgcaacgga aaaggtacaa 780 gtaaaacatt caatccgata gggaagtgat gtaggaggtt gggaagacag gcccagaaag 840 agatttatct gacttgtttt gtgtatagtt ttcaatgttc ataaaggaag atggagactt 900 gagaagtttt ttttggactt tgtttagctt tgttgggcgt tttttttttt gatcaataac 960 tttgttgggc ttatgatttg taatattttc gtggactctt tagtttattt agacgtgcta 1020 actttgttgg gcttatgact tgttgtaaca tattgtaaca gatgacttga tgtgcgacta 1080 atctttacac attaaacata gttctgtttt ttgaaagttc ttattttcat ttttatttga 1140 atgttatata tttttctata tttataattc tagtaaaagg caaattttgc ttttaaatga 1200 aaaaaatata tattccacag tttcacctaa tcttatgcat ttagcagtac aaattcaaaa 1260 atttcccatt tttattcatg aatcatacca ttatatatta actaaatcca aggtaaaaaa 1320 aaggtatgaa agctctatag taagtaaaat ataaattccc cataaggaaa gggccaagtc 1380 caccaggcaa gtaaaatgag caagcaccac tccaccatca cacaatttca ctcatagata 1440 acgataagat tcatggaatt atcttccacg tggcattatt ccagcggttc aagccgataa 1500 gggtctcaac acctctcctt aggcctttgt ggccgttacc aagtaaaatt aacctcacac 1560 atatccacac tcaaaatcca acggtgtaga tcctagtcca cttgaatctc atgtatccta 1620 gaccctccga tcactccaaa gcttgttctc attgttgtta tcattatata tagatgacca 1680 aagcactaga ccaaacctca gtcacacaaa gagtaaagaa gatctcc 1727 <210> 21 <211> 780 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 21 agatacgaat cgagaatgcc ttttttcctt gtttccgaca attatcgatt gacgtgtgac 60 cactttaaaa gtttaaacag ctcgactttc caatatgggt ttatttcttg ttttatccac 120 accattaaag aatggttttt gggattttta tttatgtgat aattaatcat ttttccaaat 180 tttattttgt atataataaa tgaagcaaat gttggaaaac tatccaatgg atgtggtggg 240 ttaatatcac cagattcgca tagctggttt ttgacttgtc ttcttaatta tttgtccaga 300 aaaagagaag aactcttcac atcatcattg tcaactttag cattattgta ttagcttttt 360 atttctttac gtctacaaag ctattggtac aacgttctaa aatcaaattc gtcatcagta 420 gattttgtaa actaattaag taaagttcag tgattaaaga agctagatga agaacgtgtg 480 caacgactcc tctgagatct acacggaata atgtcgtcag tgagcaaaca actcccatca 540 cgtcgtccct ccacctgtcc tctcttctcc ttccttgctt gtctttctct ctcaaatcat 600 ttcacctaaa aataataaat atctttcgtt ttctaaagaa aaaaaaaaaa aaacttttca 660 aattcatctt tggtttctgc agcagcaaca acaaccgagc cctgttcgtt agggttttcg 720 gtttttgtta gcttttcttc ttcttcttct tcgtttcctt ccacctgaat tgttgtaacc 780 <210> 22 <211> 1364 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 22 gtatttttga tattttaaaa taataaatta tcctcgtgta gacgtatgag tctttgaatt 60 gatccccaag aaaacgaaat cataggttac tttcaacact ctcacaacat gattgataaa 120 aagatcacac cagtttctta caaattggaa cttgtaaact gtcttatttt aattctaatt 180 cgcattttcg tataaaggaa taaacatgaa ccctctaagg ctttaatggc ccattagcgg 240 aaaagagttc aaatccaact gctcaacaaa atttgtcatt tgatggaatt ggtttatcaa 300 ttttttttta accgttgaaa cgtaactaac gatatttttc tacggtctta gtatttcaat 360 ataattccag caaatttttg acaactttat ttccttttga cagataaaaa atcatcagta 420 atccatgtgt aacagtcata ttgattgatc ctcattaaaa ataattatat gtattgctat 480 aatggcaaaa ggtcaatata ggttaatcta taatatttta actatttatg gaatatatgt 540 aaaagatttg tgaaatattt aacgaatata atatttaaaa tgttattgta tatgttaaac 600 taataatgaa tgtattaaat gtaaactttc taaaatagag atcatatttt tttaattaat 660 atatagataa tttttacttt tatttattta tccttgctaa aatgtatatt gtttttgata 720 agaggatatt ttattgtttg gataaaactg atttaaagac aagacaagat aagactgatt 780 aagaggatat attaattaat atatttttat aaaaagattg atattgcaat attgaattga 840 aatagtatca tagatcatag ttgtccatgt aaataataat tgatacattt atacttgtat 900 acttgttagt atttagatac ttgacaagtt tacactgttt tatgaattaa tgataaatat 960 caagaaagca tgaaaaatca caataaagag aatctcaccg acatctggct ttcattggcc 1020 ggtgacatgt cggatacgct caagttagaa tctgatactc tttgtctctt acagccgacg 1080 tgtccggtat actcatggac actaaacaaa cgacaaaccg atcgttaaac cggactaagt 1140 ataatgatta gttgattact caagaagaga acaactaatt tcatcggttt ggtttgtaaa 1200 tttataaaac cattcgtcct ggttcgaact agaaccaaat cgtgcaaaac cgtttaaagt 1260 gtccaagaga gttaatataa ataagaagat ctctctaatc gtgttgtttc agaaaacaag 1320 agcgtccttt gattggtttt ggattttgtt gtgttcctct caaa 1364 <210> 23 <211> 820 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 23 agctctacta tagcaattga cgggacagga ctcataagta acaacaaagt acacttcgaa 60 acaaatttca catgtaatac ttgttttttt ttcccgttta aattcacatg taataattta 120 attcacgtaa atactaaagt gattcaccca tcacgaagta ttttttgaat taaatacatc 180 aactaatcga gtttttgata gggacttttg cttttttgaa tattgcttat caaatcaaaa 240 ttttcaaatt cttgtccata tacgcctatc aaatatcttc ttttaaagaa agtctcctaa 300 agagttgaaa acttgaaata tatacttttc taaaatataa ttttatttgg gcgttacgtt 360 ctagaaaatg gaacccgtct actaaaatgg gccgctcgtg aactcgtggc agtcaaacac 420 tggtcggcgc ataaaagcat atccaaatac gctgcgtttc atgcttaccc gacccgtctt 480 aaatatttaa agaatattcc agattagcgc gtgagatgca gttgccatgt ctcgcctcag 540 gaatgacgac atttgccaaa ataacagagc tacaacggta aataaggaaa atgattaagg 600 gcaatttggt cttttaggtt aagaaaagta ttgaatcaga tctgactttt tggccaagaa 660 aaactctcag ccactagatc attccgaccc ctcctccacg ttcttctctc ttttaaataa 720 cctcttcacg gaacccttct cactcaccta tctcactcta aaatctctct ctgccaatct 780 catcttcaac ctctctctaa ctctcgtttt cgatcctaca 820 <210> 24 <211> 1396 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 24 gaattcatca acaaattact cctcaatcac actcctatag aaaacggttt aagctatcat 60 tacatgtcta gttggtttta ctcagcccta gaagtgttgt ttattgcatc actttccacg 120 aagcacaatt tttctttttt acaatcacca gacctcacag gctcacacat atgctttaga 180 gcacattcta aactttgaac tataaaagct gttaacacta atacactatg cgttcttttt 240 tgctccaaac acttttgatc cattattagg agacactcca cttagaaaga ttttctaatc 300 ctttggtcaa ctaggaagtt caaggttttt ctaaacagaa attcatttca caagtaattt 360 aatttataag gaaatgaata gagaaatcaa atcattgaag aactacaaaa tatagattca 420 aggtcaggtc taagaaaata ttcctgaagc tcaaaaaaga gttttcctct cacattatag 480 aattggcctt tacttcaaca ttttcccacc tattccacat ttggtcagaa catttttaat 540 tacttgtgga tcaatttccg gttgaaatgg gtttggtgaa tatccggttc agttatatgg 600 tggccgttgg aattggctta ttagttgtgg ccgttgttga agccgttggt attggtaagg 660 gagaagcaga cttgtggcta tgagtctatg accatgactc gtgattatgg agctgtctta 720 tgaccctgac catcaccttg atctggtgga ttccaatgtt ttcttcttct tctaataaaa 780 tattatggtc aatacaggtg ctaattaaga tggtaataat ttcttatgtt tctgtggtaa 840 agtttgattc aattccgtag ttttagataa tcttatttcc atacataaat tttatagttt 900 tatctacttt gttcttatgt tttatctcta gccaagagtt attattatta tcagaagaag 960 aaaaaaaaaa gaagcatata tacaaaaggt ttaataaaat gtattataca aggcaattat 1020 ccaaattttt tttgttttgg tttacattga tgctctcagg atttcataag gatagagaga 1080 tctattcgta tacgtgtcac gtcatgagtg ggtgtttcgc caatccatga aacgcaccta 1140 gatatctaaa acacatatca attgcgaatc tgcgaagtgc gagccattaa ccacgtaagc 1200 aaacaaacaa tctaaacccc aaaaaaaatc tatgactagc caatagcaac ctcagagatt 1260 gatatttcaa gataagacag tatttagatt tctgtattat atatagcgaa aatcgcatca 1320 ataccaaacc acccatttct tggcttacaa caacaaatct taaacgtttt actttgtgct 1380 gcactactca acctta 1396 <210> 25 <211> 2365 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 25 ggcgagtgat ggtatattta ttggttgggc ttaaatatat ttcagatgca aaaccatatt 60 gaatcaataa attataaata catagcttcc ctaaccactt aaaccaccag ctacaaaacc 120 aataaacccg atcaatcatt atgttttcat aggatttcct gaacatacat taaattattt 180 ttcattttct tggtgctctt ttctgtctta ttcacgtttt aatggacata atcggtttca 240 tattgtaaat ctctttaacc taacgaacaa tttaatgacc ctagtaatag gataagaagg 300 tcgtgaaaaa tgaacgagaa aaaacccacc aaaacactat ataagaaaga ccgaaaaagt 360 aaaaagggtg agccataaac caaaaacctt accagatgtt gtcaaagaac aaaaatcatc 420 atccatgatt aacctacgct tcactactaa gacaaggcga ttgtgtcccg gttgaaaagg 480 ttgtaaaaca gtttgaggat gctacaaaag tggatgttaa gtatgaagcg gctaaggttt 540 tggatttggt ctaggagcac attggttaag caatatcttc ggtggagatt gagtttttag 600 agatagtaga tactaattca tctatggaga catgcaaatt catcaaaatg cttggatgaa 660 ttagaaaaac taggtggaga atacagtaaa aaaattcaaa aagtgcatat tgtttggaca 720 acattaatat gtacaaatag tttacattta aatgtattat tttactaatt aagtacatat 780 aaagttgcta aactaaacta atataatttt tgcataagta aatttatcgt taaaagtttt 840 ctttctagcc actaaacaac aatacaaaat cgcccaagtc acccattaat taatttagaa 900 gtgaaaaaca aaatcttaat tatatggacg atcttgtcta ccatatttca agggctacag 960 gcctacagcc gccgaataaa tcttaccagc cttaaaccag aacaacggca aataagttca 1020 tgtggcggct ggtgatgatt cacaatttcc ccgacagttc tatgataatg aaactatata 1080 attattgtac gtacatacat gcatgcgacg aacaacactt caatttaatt gttagtatta 1140 aattacattt atagtgaagt atgttgggac gattagacgg atacaatgca cttatgttct 1200 ccggaaaatg aatcatttgt gttcagagca tgactccaag agtcaaaaaa gttattaaat 1260 ttatttgaat ttaaaactta aaaatagtgt aatttttaac cacccgctgc cgcaaacgtt 1320 ggcggaagaa tacgcggtgt taaacaattt ttgtgatcgt tgtcaaacat ttgtaaccgc 1380 aatctctact gcacaatctg ttacgtttac aatttacaag ttagtataga agaacgttcg 1440 tacctgaaga ccaaccgacc tttagttatt gaataaatga ttatttagtt aagagtaaca 1500 aaatcaatgg ttcaaatttg tttctcttcc ttacttctta aattttaatc atggaagaaa 1560 caaagtcaac ggacatccaa ttatggccta atcatctcat tctcctttca acaaggcgaa 1620 tcaaatcttc tttatacgta atatttattt gccagcctga aatgtatacc aaatcatttt 1680 taaattaatt gcctaaatta ttagaacaaa aactattagt aaataactaa ttagtcttat 1740 gaaactagaa atcgagatag tggaatatag agagacacca ttaaattcac aaaatcattt 1800 ttaaattacc taaattatta caacaaaaac tattagacag aactaagtct ataatgaaac 1860 gagagatcgt atttggaatg tagagcgaga gacaattttc aattcattga atatataagc 1920 aaaattatat agcccgtaga ctttggtgag atgaagtcta agtacaaaca actgaatgaa 1980 tttataatca ataatattga ttatattgtg attagaaaaa gaaaacaact tgcgttattt 2040 ttcaatatta ttgtgaggat taatgtgaac atggaatcgt gtttctcctg aaaaaaatat 2100 cagcatagag cttagaacaa tataaatata tccaccaaaa ataacttcaa catttttata 2160 caactaatac aaaaaaaaaa aagcaaactt tttgtatata taaataaatt tgaaaactca 2220 aaggtcggtc agtacgaata agacacaaca actactataa attagaggac tttgaagaca 2280 agtaggttaa ctagaacatc cttaatttct aaacctacgc actctacaaa agattcatca 2340 aaaggagtaa aagactaact ttctc 2365 <210> 26 <211> 2244 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 26 aactaggggt gcataatgat ggaacaaagc acaaatcttt taacgcaaac taactacaac 60 cttcttttgg ggtccccatc cccgacccta atgttttgga attaataaaa ctacaatcac 120 ttaccaaaaa ataaaagttc aaggccacta taatttctca tatgaaccta catttataaa 180 taaaatctgg tttcatatta atttcacaca ccaagttact ttctattatt aactgttata 240 atggaccatg aaatcatttg catatgaact gcaatgatac ataatccact ttgttttgtg 300 ggagacattt accagatttc ggtaaattgg tattccccct tttatgtgat tggtcattga 360 tcattgttag tggccagaca tttgaactcc cgtttttttg tctataagaa ttcggaaaca 420 tatagtatcc tttgaaaacg gagaaacaaa taacaatgtg gacaaactag atataatttc 480 aacacaagac tatgggaatg attttaccca ctaattataa tccgatcaca aggtttcaac 540 gaactagttt tccagatatc aaccaaattt actttggaat taaactaact taaaactaat 600 tggttgttcg taaatggtgc tttttttttt tgcggatgtt agtaaagggt tttatgtatt 660 ttatattatt agttatctgt tttcagtgtt atgttgtctc atccataaag tttatatgtt 720 ttttctttgc tctataactt atatatatat atgagtttac agttatattt atacatttca 780 gatacttgat cggcattttt tttggtaaaa aatatatgca tgaaaaactc aagtgtttct 840 tttttaagga atttttaaat ggtgattata tgaatataat catatgtata tccgtatata 900 tatgtagcca gatagttaat tatttggggg atatttgaat tattaatgtt ataatattct 960 ttcttttgac tcgtctggtt aaattaaaga acaaaaaaaa cacatacttt tactgtttta 1020 aaaggttaaa ttaacataat ttattgatta caagtgtcaa gtccatgaca ttgcatgtag 1080 gttcgagact tcagagataa cggaagagat cgataattgt gatcgtaaca tccagatatg 1140 tatgtttaat tttcatttag atgtggatca gagaagataa gtcaaactgt cttcataatt 1200 taagacaacc tcttttaata ttttcccaaa acatgtttta tgtaactact ttgcttatgt 1260 gattgcctga ggatactatt attctctgtc tttattctct tcacaccaca tttaaatagt 1320 ttaagagcat agaaattaat tattttcaaa aaggtgatta tatgcatgca aaatagcaca 1380 ccatttatgt ttatattttc aaattattta atacatttca atatttcata agtgtgattt 1440 tttttttttt tgtcaatttc ataagtgtga tttgtcattt gtattaaaca attgtatcgc 1500 gcagtacaaa taaacagtgg gagaggtgaa aatgcagtta taaaactgtc caataattta 1560 ctaacacatt taaatatcta aaaagagtgt ttcaaaaaaa attcttttga aataagaaaa 1620 gtgatagata tttttacgct ttcgtctgaa aataaaacaa taatagttta ttagaaaaat 1680 gttatcaccg aaaattattc tagtgccact cgctcggatc gaaattcgaa agttatattc 1740 tttctcttta cctaatataa aaatcacaag aaaaatcaat ccgaatatat ctatcaacat 1800 agtatatgcc cttacatatt gtttctgact tttctctatc cgaatttctc gcttcatggt 1860 ttttttttaa catattctca tttaattttc attactatta tataactaaa agatggaaat 1920 aaaataaagt gtctttgaga atcgaacgtc catatcagta agatagtttg tgtgaaggta 1980 aaatctaaaa gatttaagtt ccaaaaacag aaaataatat attacgctaa aaaagaagaa 2040 aataattaaa tacaaaacag aaaaaaataa tatacgacag acacgtgtca cgaagatacc 2100 ctacgctata gacacagctc tgttttctct tttctatgcc tcaaggctct cttaacttca 2160 ctgtctcctc ttcggataat cctatccttc tcttcctata aatacctctc cactcttcct 2220 cttcctccac cactacaacc acca 2244 <210> 27 <211> 2946 <212> DNA <213> Zea mays <400> 27 atgtgctggt gccccataag gtaggcacct aggtctgtgt ttgaagcatc gacagatttg 60 taaacatgtt cctatgaacc tatttctgat tgataatttg tcaaaactca tcatttgtct 120 tcatccttgc ctgcttgcgt tcacgtgaca aagtacgtgt atgtcttcgg cctttgctgt 180 gtatgtttcg cattgcttag atgtggtgaa agaacatcag aagatgcatt gatggcgtgc 240 ttaaaccagt gatgtgctcc aggtgttcct gcagtctgca gagatattta ctcttgtagt 300 cttgttgaca gcacagttgt atgtgatttc ttggatgtaa tgtaaaccaa atgaaagata 360 ggaacagttc gtcctcttcc gtatacgaag gtcactgtat catttgtcgt ggcacaagat 420 gatctgcagg caggactgca acatggtttc ttggactgtc ctgaatgccc gttcttgttc 480 tttagttgag ccagagcagc agcctggtgt cggtgcctga gacctgacga agcacacggc 540 aaacaaacaa gtcgcagcag ctagcagggg cgttgccatc gccacaagcc cccaagagac 600 ccgccgagga aaagaaaaaa aaactacggc cgccgttgcc aagccgagcg tgcgaaccga 660 tccacggatg ggagatcaga gatcacccac cgcaggcggg cggcagtggc tggcgaggtg 720 cgtccacaga acctgctgca ggtccctgtc cgtcccggcg accccttttc taggcgagca 780 actccccatg gcagagctgc acgcagcagg gcccgtcgtt ggttgcagct ttaacccttt 840 ttgttttaac catacaatgc agagtcgcag aggtgaaaca ggacggaaat tacagaaaag 900 atggtggtgt gccagcagcc ccagcatgaa gaagatcagg acaaaagaaa agcttgtgat 960 tggtgacagc aacaggattg gattggagcc aagctaggca gtgagaggca ggcagcaaga 1020 cgcgtcagcc actgaaatcc agagggcaac ctcggcctca caactcatat ccccttgtgc 1080 tgttgcgcgc cgtggttagc caggtgtgct gcagggggta ccatggcatg catcgataga 1140 tctcgaggga tccaaagaca tggaggtgga aggcctgacg tagatagaga agatgctctt 1200 agctttcatt gtctttcttt tgtagtcatc tgatttacct ctctcgttta tacaactggt 1260 tttttaaaca ctccttaact tttcaaattg tctctttctt taccctagac tagataattt 1320 taatggtgat tttgctaatg tggcgccatg ttagatagag gtaaaatgaa ctagttaaaa 1380 gctcagagtg ataaatcagg ctctcaaaaa ttcataaact gttttttaaa tatccaaata 1440 tttttacatg gaaaataata aaatttagtt tagtattaaa aaattcagtt gaatatagtt 1500 ttgtcttcaa aaattatgaa actgatctta attatttttc cttaaaaccg tgctctatct 1560 ttgatgtcta gtttgagacg attatataat tttttttgtg cttaactacg acgagctgaa 1620 gtacgtagaa atactagtgg agtcgtgccg cgtgtgcctg tagccactcg tacgctacag 1680 cccaagcgct agagcccaag aggccggagg tggaaggcgt cgcggcacta tagccactcg 1740 ccgcaagagc ccaagagacc ggagctggaa ggatgagggt ctgggtgttc acgaattgcc 1800 tggaggcagg aggctcgtcg tccggagcca caggcgtgga gacgtccggg ataaggtgag 1860 cagccgctgc gataggggcg cgtgtgaacc ccgtcgcgcc ccacggatgg tataagaata 1920 aaggcattcc gcgtgcagga ttcacccgtt cgcctctcac cttttcgctg tactcactcg 1980 ccacacacac cccctctcca gctccgttgg agctccggac agcagcaggc gcggggcggt 2040 cacgtagtaa gcagctctcg gctccctctc cccttgctcc atttgatagt gcaacccatc 2100 gagctacagg cctaatctag cctcggacta gtcgagagat ctaccgtctt cggtacgcgc 2160 tcactccgcc ctctgccttt gttactgcca cgtttctctg aatgctctct tgtgtggtga 2220 ttgctgagag tggtttagct ggatctagaa ttacactctg aaatcgtgtt ctgcctgtgc 2280 tgattacttg ccgtcctttg tagcagcaaa atatagggac atggtagtac gaaacgaaga 2340 tagaacctac acagcaatac gagaaatgtg taatttggtg cttagcggta tttatttaag 2400 cacatgttgg tgttataggg cacttggatt cagaagtttg ctgttaattt aggcacaggc 2460 ttcatactac atgggtcaat agtataggga ttcatattat aggcgatact ataataattt 2520 gttcgtctgc agagcttatt atttgccaaa attagatatt cctattctgt ttttgtttgt 2580 gtgctgttaa attgttaacg cctgaaggaa taaatataaa tgacgaaatt ttgatgttta 2640 tctctgctcc tttattgtga ccataagtca agatcagatg cacttgtttt aaatattgtt 2700 gtctgaagaa ataagtactg acagtatttt gatgcattga tctgcttgtt tgttgtaaca 2760 aaatttaaaa ataaagagtt tcctttttgt tgctctcctt acctcctgat ggtatctagt 2820 atctaccaac tgacactata ttgcttctct ttacatacgt atcttgctcg atgccttctc 2880 cctagtgttg accagtgtta ctcacatagt ctttgctcat ttcattgtaa tgcagatacc 2940 aagcgg 2946 <210> 28 <211> 185 <212> PRT <213> Zea mays <400> 28 Met Ala Glu Ala Pro Ala Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser His Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ser Pro Arg Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser Val Arg Glu Gln 20 25 30 Asp Arg Phe Leu Pro Ile Ala Asn Ile Ser Arg Ile Met Lys Lys Ala 35 40 45 Ile Pro Ala Asn Gly Lys Thr Ile Pro Ala Asn Gly Lys Ile Ala Lys 50 55 60 Asp Ala Lys Glu Thr Val Gln Glu Cys Val Ser Glu Phe Ile Ser Phe 65 70 75 80 Ile Thr Ser Glu Ala Ser Asp Lys Cys Gln Arg Glu Lys Arg Lys Thr 85 90 95 Ile Asn Gly Asp Asp Leu Leu Trp Ala Met Ala Thr Leu Gly Phe Glu 100 105 110 Asp Tyr Ile Glu Pro Leu Lys Val Tyr Leu Gln Lys Tyr Arg Glu Met 115 120 125 Glu Gly Asp Ser Lys Leu Thr Ala Lys Ser Ser Asp Gly Ser Ile Lys 130 135 140 Lys Asp Ala Leu Gly His Val Gly Ala Ser Ser Ser Ala Ala Gln Gly 145 150 155 160 Met Gly Gln Gln Gly Ala Tyr Asn Gln Gly Met Gly Tyr Met Gln Pro 165 170 175 Gln Tyr His Asn Gly Asp Ile Ser Asn 180 185 <210> 29 <211> 558 <212> DNA <213> Zea mays <400> 29 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccgagtt catctccttc 240 atcactgccg aagcgagtga caagtgccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gatctgctgt gggccatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaactga 558 <210> 30 <211> 324 <212> DNA <213> Zea mays <400> 30 atggtcaggg agcaggacag gttcctgccc atcgccaaca tcagtcgcat catgaagaag 60 gccatcccgg ctaacgggaa gaccatcccg gctaacggga agatcgccaa ggacgctaag 120 gagaccgtgc aggagtgcgt ctccgagttc atctccttca tcactagcga agcgagtgac 180 aagtgccaga gggagaagcg gaagaccatc aatggcgacg atctgctgtg ggccatggcc 240 acgctggggt ttgaagacta cattgaaccc ctcaaggtgt acctgcagaa gtacagagag 300 atggagggtg atagcaagtt atga 324 <210> 31 <211> 207 <212> DNA <213> Zea mays <400> 31 atggagaccg tgcaggagtg cgtctccgag ttcatctcct tcatcactag cgaagcgagt 60 gacaagtgcc agagggagaa gcggaagacc atcaatggcg acgatctgct gtgggccatg 120 gccacgctgg ggtttgaaga ctacattgaa cccctcaagg tgtacctgca gaagtacaga 180 gagatggagg gtgatagcaa gttatga 207 <210> 32 <211> 558 <212> DNA <213> Zea mays <400> 32 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtccg tctccgagtt catctccttc 240 atcactagcg aagcgagtga caagtcccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gatctgctgt gggccatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaactga 558 <210> 33 <211> 558 <212> DNA <213> Zea mays <400> 33 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagaggg tctccgagtt catctccttc 240 atcactagcg aagcgagtga caagtcccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gatctgctgt gggctatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaactga 558 <210> 34 <211> 558 <212> DNA <213> Zea mays <400> 34 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtccg tctccgagtt catctccttc 240 atcactagcg aagcgagtga caagtcccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gataggctgt gggctatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaactga 558 <210> 35 <211> 558 <212> DNA <213> Zea mays <400> 35 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccaggtt catctccttc 240 atcactaggg aagcgagtga caagtgccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gatctgctgt gggccatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaactag 558 <210> 36 <211> 558 <212> DNA <213> Zea mays <400> 36 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccgagtt catctccttc 240 atcactagcg aagcgagtga caagtgccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gatctgctgt gggctatggc cacgctgggg tttgaagact acgctgaacc cctcaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaactga 558 <210> 37 <211> 558 <212> DNA <213> Zea mays <400> 37 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccaggccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagaggg tctccgagtt catctccttc 240 atcactagcg aagcgagtga caagtcccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gataggctgt gggctatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaactga 558 <210> 38 <211> 558 <212> DNA <213> Zea mays <400> 38 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccaggccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtccg tctccgagtt catctccttc 240 atcactagcg aagcgagtga caagtcccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gatctgctgt gggctatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaactga 558 <210> 39 <211> 558 <212> DNA <213> Zea mays <400> 39 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccgagtt catctccttc 240 atcactagcg aagcgagtga caagtgccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gatgcgctgt gggctatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaactga 558 <210> 40 <211> 558 <212> DNA <213> Zea mays <400> 40 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccgagtt catctccttc 240 atcactagcg aagcgagtga caagtgccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gatctggcgt gggctatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaactga 558 <210> 41 <211> 558 <212> DNA <213> Zea mays <400> 41 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccgagtt catctccttc 240 atcactagcg aagcgagtga caagtgccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gatctgctgt gggctatggc cacggcgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaactga 558 <210> 42 <211> 555 <212> DNA <213> Zea mays <400> 42 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccgagtt catctccttc 240 atcactagcg aagcgagtga caagtgccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gatctgctgt gggctatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cgccaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaac 555 <210> 43 <211> 555 <212> DNA <213> Zea mays <400> 43 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccgagtt catctccttc 240 atcactagcg aagcgagtga caagtgccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gatctgctgt gggctatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360 tacgcgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaac 555 <210> 44 <211> 558 <212> DNA <213> Zea mays <400> 44 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccgagtt catctccttc 240 atcactagcg aagcgagtga caagtgccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gatctgctgt gggccatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaactga 558 <210> 45 <211> 537 <212> DNA <213> Zea mays <400> 45 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agatcgccaa ggacgctaag 180 gagaccgtgc aggagtgcgt ctccgagttc atctccttca tcactagcga agcgagtgac 240 aagtgccaga gggagaagcg gaagaccatc aatggcgacg atctgctgtg ggccatggcc 300 acgctggggt ttgaagacta cattgaaccc ctcaaggtgt acctgcagaa gtacagagag 360 atggagggtg atagcaagtt aactgcaaaa tctagcgatg gctcaattaa aaaggatgcc 420 cttggtcatg tgggagcaag tagctcagct gcacaaggga tgggccaaca gggagcatac 480 aaccaaggaa tgggttatat gcaaccccag taccataacg gggatatctc aaactga 537 <210> 46 <211> 558 <212> DNA <213> Zea mays <400> 46 atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60 aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catagccaac 120 atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180 aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccgagtt catctccttc 240 atcactagcg aagcgagtga caagtgccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300 gatctgctgt gggccatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420 ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480 atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540 ggggatatct caaactga 558 <210> 47 <211> 516 <212> DNA <213> Glycine max <400> 47 atggccgacg gtccggctag cccaggcggc ggcagccacg agagcggcga ccacagccct 60 cgctctaacg tgcgcgagca ggacaggtac ctccctatcg ctaacataag ccgcatcatg 120 aagaaggcac ttcctgccaa cggtaaaatc gcaaaggacg ccaaagagac cgttcaggaa 180 tgcgtctccg agttcatcag cttcatcacc agcgaggcct ctgataagtg tcagagagaa 240 aagagaaaga ctattaacgg cgatgatttg ctctgggcga tggccactct cggtttcgag 300 gattatatgg atcctcttaa aatttacctc actagatacc gagagatgga gggtgatacg 360 aagggctctg ccaagggtgg agactcatct gctaagagag atgttcagcc aagtcctaat 420 gctcagcttg ctcatcaagg ttctttctca caaaatgtta cttacccgaa ttctcagggt 480 cgacatatga tggttccaat gcaaggcccg gagtag 516 <210> 48 <211> 516 <212> DNA <213> Glycine max <400> 48 atggctgagt cggacaacga gtccggaggt cacacgggga acgcaagcgg aagcaacgaa 60 ttctccggtt gcagggagca agacaggttc cttccgatag cgaacgtgag caggatcatg 120 aagaaggcgt tgccggcgaa cgcgaagatc tcgaaggagg cgaaggagac ggtgcaggag 180 tgcgtgtcgg agttcatcag cttcataaca ggagaagcgt ccgataagtg ccagaaggag 240 aagaggaaga cgatcaacgg cgatgatctg ctgtgggcca tgaccacgct ggggttcgag 300 gagtacgtgg agcctctcaa ggtttatctg cataagtata gggagctgga aggggagaaa 360 actgctatga tgggaaggcc acatgagagg gatgagggtt atggtcatgc aactcctatg 420 atgatcatga tggggcatca gcagcagcag catcagggac acgtgtatgg atctggaact 480 actactggat cagcatcttc tgcaagaact agataa 516 <210> 49 <211> 522 <212> DNA <213> Glycine max <400> 49 atgtcggatg cgccaccgag cccgactcat gagagtgggg gcgagcagag cccgcgcggt 60 tcgtcgtccg gcgcgaggga gcaggaccgg tacctcccga ttgccaacat cagccgcatt 120 atgaagaagg ctctgcctcc caacggcaag attgcaaagg atgccaaaga caccatgcag 180 gaatgcgttt ctgagttcat cagcttcatt accagcgagg cgagtgagaa atgccagaag 240 gagaagagaa agacaatcaa tggagacgat ttgctatggg ccatggccac tttaggattt 300 gaagactaca tagagccgct taaggtgtac ctggctaggt acagagaggc ggagggtgac 360 actaaaggat ctgctagaag tggtgatgga tctgctacac cagatcaagt tggccttgca 420 ggtcaaaatt ctcagcttgt tcatcagggt tcgctgaact atattggttt gcaggtgcaa 480 ccacaacatc tggttatgcc ttcaatgcaa agccatgaat ag 522 <210> 50 <211> 489 <212> DNA <213> Glycine max <400> 50 atgtccgatg ctccggcgag tccatgcggc ggcggcggcg gaggcagcca cgagagcggc 60 gagcacagtc cccgctccaa tttccgcgag caggaccgct tcctccccat cgccaacatc 120 agccgcatca tgaagaaagc gcttcctccc aacgggaaaa tcgccaagga cgccaaggaa 180 accgtgcagg aatgcgtctc cgagttcatc agcttcgtca ccagcgaagc gagcgataag 240 tgtcagagag agaagaggaa gaccatcaac ggcgacgatt tgctttgggc tatgaccact 300 ttaggtttcg aggagtatat tgatccgctc aaggtttacc tcgccgctta cagagagatt 360 gagggtgatt caaagggttc ggccaagggt ggagatgcat ctgctaagag agatgtttat 420 cagagtccta atggccaggt tgctcatcaa ggttctttct cacaaggtgt taattatacg 480 aattcttag 489 <210> 51 <211> 525 <212> DNA <213> Glycine max <400> 51 atgtcggatg caccggcgag tccgagtcac gagagtggtg gcgagcagag ccctcgcggc 60 tcgttgtccg gcgcggctag agagcaggac cggtaccttc ccattgccaa catcagccgc 120 atcatgaaga aggctctgcc tcccaatggc aagattgcga aggatgcaaa agacacaatg 180 caagaatgcg tttctgaatt catcagcttc attaccagcg aggcgagtga gaaatgccag 240 aaggagaaga gaaagacaat caatggagac gatttactat gggccatggc aactttaggg 300 tttgaagact acattgagcc gcttaaggtg tacctggcta ggtacagaga ggcggagggt 360 gacactaaag gatctgctag aagtggtgat ggatctgcta gaccagatca agttggcctt 420 gcaggtcaaa atgctcagct tgttcatcag ggttcgctga actatattgg tttgcaggtg 480 caaccacaac atctggttat gccttcaatg caaggccatg aatag 525 <210> 52 <211> 690 <212> DNA <213> Glycine max <400> 52 atggagacca acaaccagca acaacaacaa caaggagctc aagcccaatc gggaccctac 60 cccgtcgccg gcgccggcgg cagtgcaggt gcaggtgcag gcgctcctcc ccctttccag 120 caccttctcc agcagcagca gcagcagctc cagatgttct ggtcttacca gcgtcaagaa 180 atcgagcacg tgaacgactt taagaatcac cagctccctc ttgcccgcat caagaagatc 240 atgaaggccg acgaggatgt ccgcatgatc tccgccgagg cccccatcct cttcgccaag 300 gcctgcgagc tcttcatcct cgagctcacc atccgctcct ggctccacgc cgaggagaac 360 aagcgccgca ccctccagaa gaacgacatc gccgccgcca tcacccgcac cgacattttc 420 gacttcctcg ttgatattgt cccccgcgac gagatcaagg acgacgctgc tcttgtgggg 480 gccaccgcca gtggggtgcc ttactactac ccgcccattg gacagcctgc cgggatgatg 540 attggccgcc ccgccgtcga tcccgccacc ggggtttatg tccagccgcc ctcccaggca 600 tggcagtccg tctggcagtc cgctgccgag gacgcttcct atggcaccgg cggggccggt 660 gcccagcgga gccttgatgg ccagagctag 690 <210> 53 <211> 426 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 53 atggcggata cgccttcgag cccagctgga gatggcggag aaagcggcgg ttccgttagg 60 gagcaggatc gataccttcc tatagctaat atcagcagga tcatgaagaa agcgttgcct 120 cctaatggta agattggaaa agatgctaag gatacagttc aggaatgcgt ctctgagttc 180 atcagcttca tcactagcga ggccagtgat aagtgtcaaa aagagaaaag gaaaactgtg 240 aatggtgatg atttgttgtg ggcaatggca acattaggat ttgaggatta cctggaacct 300 ctaaagatat acctagcgag gtacagggag ttggagggtg ataataaggg atcaggaaag 360 agtggagatg gatcaaatag agatgctggt ggcggtgttt ctggtgaaga aatgccgagc 420 tggtag 426 <210> 54 <211> 522 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 54 atggcggagt cgcaggccaa gagtcccgga ggctgtggaa gccatgagag tggtggagat 60 caaagtccca ggtcgttaca tgttcgtgag caagataggt ttcttccgat tgctaacata 120 agccgtatca tgaaaagagg tcttcctgct aatgggaaaa tcgctaaaga tgctaaggag 180 attgtgcagg aatgtgtctc tgaattcatc agtttcgtca ccagcgaagc gagtgataaa 240 tgtcaaagag agaaaaggaa gactattaat ggagatgatt tgctttgggc aatggctact 300 ttaggatttg aagactacat ggaacctctc aaggtttacc tgatgagata tagagagatg 360 gagggtgaca caaagggatc agcaaaaggt ggggatccaa atgcaaagaa agatgggcaa 420 tcaagccaaa atggccagtt ctcgcagctt gctcaccaag gtccttatgg gaactctcaa 480 gctcagcagc atatgatggt tccaatgccg ggaacagact ag 522 <210> 55 <211> 486 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 55 atggcggatt cggacaacga ttcaggagga cacaaagacg gtggaaatgc ttcgacacgt 60 gagcaagata ggtttctacc gatcgctaac gttagcagga tcatgaagaa agcacttcct 120 gcgaacgcaa aaatctctaa ggatgctaaa gaaacggttc aagagtgtgt atcggaattc 180 ataagtttca tcaccggtga ggcttctgac aagtgtcaga gagagaagag gaagacaatc 240 aacggtgacg atcttctttg ggcgatgact acgctagggt ttgaggacta cgtggagcct 300 ctcaaggttt atctgcaaaa gtatagggag gtggaaggag agaagactac tacggcaggg 360 agacaaggcg ataaggaagg tggaggagga ggcggtggag ctggaagtgg aagtggagga 420 gctccgatgt acggtggtgg catggtgact acgatgggac atcaattttc ccatcatttt 480 tcttaa 486 <210> 56 <211> 528 <212> DNA <213> Gossypium hirsutum <400> 56 atgggaggag ggccaactag tccggcagga gggagccatg agagcggagg agagcacagc 60 agtcctcagt caactgtgag ggaacaagat cgttacctcc caattgctaa tataagtaga 120 atcatgaaga aagccttgcc ttctaatggg aaaattgcta aggatgctaa agatactgtt 180 caagaatgtg tttccgagtt catcagcttc atcactagcg aggcaagtga taaatgtcaa 240 aaagagaaaa ggaagacaat taatggagat gacttgttgt gggcaatggc aacattagga 300 ttcgaagact atatcgagcc acttaaaata tatcttgcca gatacaggga gttggagggt 360 gacaccaagg gatcagcccg tggtggtgat ggatctttta aaagagacgc agctggagct 420 cttcctgccc aaaatccaca gttttcaatc caggggtcat tgaactatat taattcccaa 480 gcacaaggac agcatatgat cattccctcc atgcaaggca atgagggc 528 <210> 57 <211> 534 <212> DNA <213> Gossypium hirsutum <400> 57 atggcggatg gtatggcaag ggggccaacg agtccagcag gagggagtca tgagagtgga 60 gagcagtgca gttctcactc aactgtgagg gaacaagacc gttaccttcc aattgccaat 120 ataagcagaa tcatgaagag agcattgcct actaatggca aaattgctaa ggatgctaaa 180 gaaactgttc aagaatgtgt ttctgagttc atcagcttca tcactagcga ggctagcgat 240 aaatgccaga aagagaagag gaagacaatt aatggagatg atttgttgtg ggcaatggca 300 acattaggct ttgaagacta tattgagcca cttaaaatat atctggccag gtacagagag 360 ttggagggtg atgctaaggg atcaatcagg ggtgaagtgc ctcttaaaag agatgcagtt 420 cgagttcttg ctgtccccaa cccacagttt cctatcgaag gatcattgaa ctatattaat 480 tcccaggcac aaggacatca tatgatcgtc ccctccatgc aaggcaacga gtag 534 <210> 58 <211> 516 <212> DNA <213> Glycine max <400> 58 atggccgacg gtccggcgag tccaggcggc ggtagccacg agagcggcga gcacagccct 60 cgctctaacg tgcgcgagca ggacaggtac ctccccatcg ctaacataag ccgcatcatg 120 aagaaggcac tacctgcgaa cggtaaaatc gccaaggacg ccaaagagac cgttcaggaa 180 tgcgtatccg agttcatcag tttcatcacc agcgaggcct ctgataagtg tcagagggaa 240 aagagaaaga ctattaacgg tgatgatttg ctctgggcca tggccactct tggttttgag 300 gattatatcg atcctcttaa aatttacctc actagataca gagagatgga gggtgatacg 360 aagggttcag ccaagggcgg agactcatct tctaagaaag atgttcagcc aagtcctaat 420 gctcagcttg ctcatcaagg ttctttctca caaggtgtta gttacacaat ttctcagggt 480 caacatatga tggttccaat gcaaggcccg gagtag 516 <210> 59 <211> 558 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 59 atggcggatg ggccggggag cccgggggga ggagggggga gccacgagag cgggagcccg 60 agggggggag ggggaggagg gggaggtggg ggtgggggtg gcccacgcgt ccggcaggac 120 aggttcctcc ccatcgccaa catcagccgc atcatgaaga aggccatccc ggccaacggg 180 aagatcgcca aggacgccaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccgagtt catctccttc 240 atcaccagcg aggcgagcga taaatgccag agggagaagc gcaagaccat caacggcgac 300 gacttgctgt gggcgatggc cacgctgggc ttcgaggact acatcgagcc cctcaaggtc 360 tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagtaaat taactgcaaa ggctggtgat 420 ggctctgtga aaaaggatgt acttggttct catggaggaa gcagttcaag tgcccaaggg 480 atgggccaac aagcagcata caatcaagga atgggttata tgcaacctca gtaccataat 540 ggggatgtct caaactga 558 <210> 60 <211> 1148 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 60 ggaagtttct ctcttgaggg aggttgctcg tggaatggga cacatatggt tgttataata 60 aaccatttcc attgtcatga gattttgagg ttaatatata ctttacttgt tcattatttt 120 atttggtgtt tgaataaatg atataaatgg ctcttgataa tctgcattca ttgagatatc 180 aaatatttac tctagagaag agtgtcatat agattgatgg tccacaatca atgaaatttt 240 tgggagacga acatgtataa ccatttgctt gaataacctt aattaaaagg tgtgattaaa 300 tgatgtttgt aacatgtagt actaaacatt cataaaacac aaccaaccca agaggtattg 360 agtattcacg gctaaacagg ggcataatgg taatttaaag aatgatatta ttttatgtta 420 aaccctaaca ttggtttcgg attcaacgct ataaataaaa ccactctcgt tgctgattcc 480 atttatcgtt cttattgacc ctagccgcta cacacttttc tgcgatatct ctgaggtaag 540 cgttaacgta cccttagatc gttctttttc tttttcgtct gctgatcgtt gctcatatta 600 tttcgatgat tgttggattc gatgctcttt gttgattgat cgttctgaaa attctgatct 660 gttgtttaga ttttatcgat tgttaatatc aacgtttcac tgcttctaaa cgataattta 720 ttcatgaaac tattttccca ttctgatcga tcttgttttg agattttaat ttgttcgatt 780 gattgttggt tggtggatct atatacgagt gaacttgttg atttgcgtat ttaagatgta 840 tgtcgatttg aattgtgatt gggtaattct ggagtagcat aacaaatcca gtgttccctt 900 tttctaaggg taattctcgg attgtttgct ttatatctct tgaaattgcc gatttgattg 960 aatttagctc gcttagctca gatgatagag caccacaatt tttgtggtag aaatcggttt 1020 gactccgata gcggcttttt actatgattg ttttgtgtta aagatgattt tcataatggt 1080 tatatatgtc tactgttttt attgattcaa tatttgattg ttcttttttt tgcagatttg 1140 ttgaccag 1148 <210> 61 <211> 828 <212> DNA <213> Glycine max <400> 61 ggcaaaaaca tttaatacgt attatttaag aaaaaaatat gtaataatat atttatattt 60 taatatctat tcttatgtat tttttaaaaa tctattatat attgatcaac taaaatattt 120 ttatatctac acttattttg catttttatc aattttcttg cgttttttgg catatttaat 180 aatgactatt ctttaataat caatcattat tcttacatgg tacatattgt tggaaccata 240 tgaagtgtcc attgcatttg actatgtgga tagtgttttg atccaggcct ccatttgccg 300 cttattaatt aatttggtaa cagtccgtac taatcagtta cttatccttc ctccatcata 360 attaatcttg gtagtctcga atgccacaac actgactagt ctcttggatc ataagaaaaa 420 gccaaggaac aaaagaagac aaaacacaat gagagtatcc tttgcatagc aatgtctaag 480 ttcataaaat tcaaacaaaa acgcaatcac acacagtgga catcacttat ccactagctg 540 atcaggatcg ccgcgtcaag aaaaaaaaac tggaccccaa aagccatgca caacaacacg 600 tactcacaaa ggtgtcaatc gagcagccca aaacattcac caactcaacc catcatgagc 660 ccacacattt gttgtttcta acccaacctc aaactcgtat tctcttccgc cacctcattt 720 ttgtttattt caacacccgt caaactgcat gccaccccgt ggccaaatgt ccatgcatgt 780 taacaagacc tatgactata aatatctgca atctcggccc aggttttc 828

Claims (20)

1. 자생 식물(native plant) DNA가 측면에 접하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 식물 염색체 DNA 분절(segment)에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 최소한 NF-YB 단백질과 마커 단백질(marker protein)의 발현을 제공하고, 상기 NF-YB 단백질은 식물 잎 조직 세포 내에 전체 단백질 ㎍당 최대 40 피코그람(picogram) 수준에서 식물의 잎 세포 내에 생산되는 것을 특징으로 하는 식물 염색체 DNA 분절.
2. 자생 식물 DNA가 측면에 접하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 식물 염색체 DNA 분절에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 단일 단백질의 발현을 제공하고, 상기 단백질은 NF-YB 단백질이고, 상기 NF-YB 단백질은 식물 잎 조직 세포 내에 전체 단백질 ㎍당 최대 40 피코그람 수준에서 식물의 잎 세포 내에 생산되는 것을 특징으로 하는 식물 염색체 DNA 분절.
3. SEQ ID NO:28로부터 연속 아미노산(contiguous amino acid)을 포함하는 NF-YB 단백질을 발현하기 위한 재조합 DNA 구조체(construct)를 포함하는 식물 염색체 DNA 분절에 있어서, 상기 아미노산은

   (a) 위치 번호 49, 73, 76, 83, 89, 102, 103, 109, 115, 118 또는 122에서 하나이상의 아미노산이 상이한, SEQ ID NO:28의 위치 49 내지 122에서 아미노산;

   (b) 위치 번호 49, 73, 76, 83, 89, 102, 103, 109, 115, 118 또는 122에서 하나이상의 아미노산이 상이하고 위치 55 내지 61에서 하나이상의 아미노산이 결실된, SEQ ID NO: 28의 위치 49 내지 122에서 아미노산;

   (c) 위치 2 내지 28에서 하나이상의 아미노산이 결실된, SEQ ID NO: 28의 위치 29 내지 134에서 아미노산; 또는

   (d) 위치 2 내지 67에서 하나이상의 아미노산이 결실된, SEQ ID NO: 28의 위치 68 내지 134에서 아미노산을 보유하는 것을 특징으로 하는 식물 염색체 DNA 분절.
4. 청구항 1 내지 3중 어느 한 항에 있어서, 재조합 폴리뉴클레오티드는 쌀 알파 튜불린 프로모터, 쌀 악틴 프로모터, PPDK 메소필 조직 강화된 프로모터, 또는 루비스코 액티바제(rubisco activase) 유관속초(bundle sheath) 강화된 프로모터에서 선택되는 프로모터(promoter)를 포함하는 것을 특징으로 하는 식물 염색체 DNA 분절.
5. 청구항 1 내지 3중 어느 한 항에 있어서, NF-YB 단백질은 식물 잎 조직 세포 내에 전체 단백질 ㎍당 0.1 내지 11 피코그람 수준에서 식물의 잎 세포 내에 생산되는 것을 특징으로 하는 식물 염색체 DNA 분절.
6. 청구항 1 내지 3중 어느 한 항의 식물 염색체 DNA 분절을 포함하는 유전자도 입 식물 세포.
7. 청구항 6의 세포를 포함하는 물 부족 스트레스 내성 식물의 유전자도입 작물에 있어서, 유전자도입 작물의 수확 수율(yield)은 상기 작물이 충분한 물 조건에서 재배될 때, 식물 염색체 DNA 분절을 보유하지 않는 대조 식물(control plant)의 작물의 수율에 필적하거나 이보다 강화되는 것을 특징으로 하는 유전자도입 작물.
8. 청구항 7에 있어서, 물 부족 스트레스 내성 식물은 옥수수, 목화, 콩, 사탕수수, 지팽이풀, 쌀, 밀, 알파파, 또는 캐놀라 식물인 것을 특징으로 하는 유전자도입 작물.
9. 청구항 1 내지 3중 어느 한 항의 식물 염색체 DNA 분절을 포함하는 유전자도입 옥수수 식물 종자에 있어서, NF-YB 단백질은 자생 옥수수 단백질인 것을 특징으로 하는 유전자도입 옥수수 식물 종자.
10. 작물 품종(crop plant line)에서 물 스트레스 내성과 수율을 개선하는 방법에 있어서, 청구항 1 내지 3중 어느 한 항의 식물 염색체 DNA 분절을 작물 품종의 게놈에 제공하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
11. 청구항 1 내지 3중 어느 한 항의 식물 염색체 DNA 분절을 보유하는 식물 세 포의 반수체 유도체(haploid derivative)를 포함하는 유전자도입 화분립(pollen grain).
12. 청구항 1 내지 3중 어느 한 항의 식물 염색체 DNA 분절로부터 NF-YB 단백질의 발현에 기인하는 강화된 물 부족 스트레스 내성을 갖는 유전자도입 식물의 작물을 생산하는데 이용될 수 있는 비-자생, 유전자도입 종자를 제조하는 방법에 있어서, 아래의 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:

    (a) 물 부족 스트레스 하에서 재배될 때 강화된 수율, 또는 충분한 물 조건 하에 재배될 때 대조 식물에 대한 수율과 비교하여 강화된 또는 필적하는 수율에 대하여, 상기 식물 염색체 DNA 분절을 보유하는 식물과 대조 식물의 개체군을 조사하는 단계,

    (b) 상기 개체군으로부터, 물 부족 스트레스 하에서 대조 식물에 대한 수율과 비교하여 강화된 수율, 또는 충분한 물 조건 하에 재배될 때 대조 식물에 대한 수율과 비교하여 강화된 또는 필적하는 수율을 보이는 하나이상의 식물을 선별하는 단계.
13. 청구항 12에 있어서, 식물 염색체 DNA 분절이 선택된 식물 내에 안정적으로 통합되는 지를 검증하는 단계가 더욱 포함되는 것을 특징으로 하는 방법.
14. 청구항 12에 있어서, 선택된 식물의 잎 조직을 분석하여 상기 잎 조직 내에 전체 단백질 ㎍당 최대 40 피코그람의 NF-YB 단백질 수준에서 유전자도입 NF-YB 단백질의 생산을 결정하는 단계가 더욱 포함되는 것을 특징으로 하는 방법.
15. 청구항 12에 있어서, 선택된 식물로부터 종자 또는 재생성 번식체(regenerative propagule)를 수집하는 단계가 더욱 포함되는 것을 특징으로 하는 방법.
16. 청구항 12에 있어서, 종자는 옥수수, 목화, 콩, 사탕수수, 지팽이풀(switchgrass), 쌀, 밀, 알파파, 또는 캐놀라 종자인 것을 특징으로 하는 방법.
17. 근친교배 옥수수 종자를 생산하는 방법에 있어서, 아래의 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:

    (a) 청구항 1 내지 3중 어느 한 항의 안정적으로 통합된, 염색체 DNA 분절을 보유하는 제초제 내성 옥수수 식물로부터 하이브리드 옥수수 종자를 획득하는 단계;

    (b) 반수체 유도체와 상기 염색체 DNA 분절을 포함하는 화분립이 상기 두 번째 옥수수 품종을 수분시키도록 함으로써 상기 획득된 하이브리드 옥수수 종자로부터 염색체 DNA 분절을 두 번째 옥수수 품종 내로 유전자이입(introgression)하여 교잡된 종자를 생산하는 단계,

    (c) 교잡된 종자로부터 식물 개체군을 생산하는 단계, 여기서 상기 수분으로 부터 생산된 종자의 일부는 상기 염색체 DNA 분절에 동형접합성(homozygous)이고, 상기 하이브리드 옥수수 종자로부터 생산된 식물의 일부는 상기 염색체 DNA 분절에 반접합성(hemizygous)이고, 상기 하이브리드 옥수수 종자로부터 생산된 식물의 일부는 상기 염색체 DNA 분절을 보유하지 않고;

    (d) 제초제로 처리함으로써 상기 염색체 DNA 분절에 대하여 동형접합성이고 반접합성인 옥수수 식물을 선별하는 단계;

    (e) 제초제-처리된-생존 옥수수 식물로부터 종자를 수집하고, 상기 종자를 재배하여 자손 옥수수 식물을 더욱 생산하는 단계;

    (f) 상기 자손 종자로부터 재배된 식물을 상기 두 번째 옥수수 품종과 역교잡(backcrossing)하여 근친교배 옥수수 품종을 생산하는 단계.
18. 청구항 17에 있어서, 근친교배 옥수수 품종과 세 번째 옥수수 품종을 교잡(crossing)하여 하이브리드 종자(hybrid seed)를 생산하는 단계가 더욱 포함되는 것을 특징으로 하는 방법.
19. 기원의 징표로서, 청구항 1 내지 3중 어느 한 항의 염색체 DNA 분절을 포함하는 식물 세포를 보유하는 위조방지 형틀(milled) 종자.
20. 관개수(irrigation water) 없이 옥수수, 목화, 콩, 사탕수수, 지팽이풀, 쌀, 밀, 알파파, 또는 캐놀라 작물을 재배하는 방법에 있어서, 강화된 물 부족 내성에 대하여 선택된 청구항 1 내지 3중 어느 한 항의 식물 염색체 DNA 분절을 포함하는 식물 세포를 보유하는 종자를 재배하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

Images