KR20090028848A - 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에의해 제조된 녹용 추출물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 녹용 추출물에 관한 것으로, 녹용이 가지고 있는 항산화 효과를 지닌 유효 미세 성분의 추출을 제조 공정에 의한 손실을 최소화하는 것을 특징으로 하며 이로 인해 ATP 합성 능력 향상에 의해 세포 성장 효과를 제공하는 것을 특징으로 하는 항산화효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 녹용 추출물에 관한 것이다.

항산화제, 녹용, 초음파 추출, ATP 합성

Description

항산화 효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 녹용 추출물 { The Manufacturing Process of extraction of the deer velvet and the deer velvet extract manufactured by the same method }

도 1은 본 발명에 의해 제조된 녹용 추출물의 농도에 따른 ATP 합성 능력을 나타내는 그래프

본 발명은 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 녹용 추출물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 녹용이 가지고 있는 항산화 효과를 지닌 유효 미세 성분의 추출을 제조 공정에 의한 손실을 최소화하는 것을 특징으로 하며 이로 인해 ATP 합성 능력 향상에 의해 세포 성장 효과를 제공하는 것을 특징으로 하는 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물을 제조함에 있어서, 녹용을 추출하는 단계에서 특정 항산화제가 처리되어 기존 녹용을 추출하는 단계보다 항산화 효과가 우수한 영양 성분의 활성을 유지하고 안정화시키는 기능을 보강하였을 뿐만 아니라, 녹용 추출물의 고유취를 마스킹하는 효과를 제공하는 것을 특징으로 하는 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 녹용 추출물에 관한 것이다.

일반적으로 녹용은 한방에서 그 성질이 따뜻하고 맛이 달며 독이 없다. 이러한 녹용을 삶아서 섭취하면 전신이 쇠약하여 근력 및 뼈의 기능이 약해져 발생하는 일체의 질병을 치료할 수 있다고 알려져 있다.

녹용이란 수사슴의 뿔이 딱딱하게 각질화되기 전 잘라서 약으로 사용하는 것을 말하며 사슴의 뿔은 사슴의 종류와 년생에 따라 자르는 시기가 조금씩 차이는 있으나 평균 5월 내지 8월 사이에 자르는데 이것을 절각(折角)이라고 한다. 뿔을 절각한 후 머리에 남는 부위는 딱딱하게 굳어지게 되고 이듬해 2월 내지 3월경에 저절로 떨어지게 되는데 이것을 낙각(落角)이라고 한다. 낙각된 후에 그 자리에 새로운 뿔이 돋아나기 시작하며 낙각한 시기를 기준으로 절각을 하기도 하는데 꽃사슴의 경우는 낙각후 65일, 엘크의 경우는 80일, 레드 디어의 경우는 70일 후에 절각해 녹용으로 사용한다. 뿔을 자르지 않고 그대로 놔두면 뿔은 점점 골질(骨質)로 변화되는데 이것을 녹각이라고 하며 시간이 흐르면 흐를수록 뼈처럼 단단하게 굳어져 저절로 떨어지게 된다.

사슴 뿔은 여름을 전후해서 새로 돋아나는데 이때 새로 돋아난 연한 뿔을 채취하여 건조한 것이 녹용이다. 녹용의 기질은 부드러우며 연약하다. 그 속에는 피가 많이 들어 있고 표면에는 부드러운 털이 많이 있다. 녹용은 특히 기질이 허약한 사람, 기력이 부족한 사람, 정력이 부족한 사람들에게 대단히 좋은 보약이다.

<본처비요>에서 언급되어진 녹용에 대한 설명은 정기를 발생시키는 혈액의 영양이 되면 현기증에 특효가 있고 양기를 보하여 성욕을 왕성하게 하며 뼈와 힘줄 을 곧게 하고 신기허약과 냉한 것을 다스리며 관절이 아프거나 기운이 없을 때 효과가 좋고 냉대하를 고치는 작용을 하며 모든 허손과 노상을 회복시킨다고 기록되어 있다.

특히 일반인들은 녹용을 보약으로만 아는데 녹용은 보약이자 치료제의 역할을 한다고 여러 문헌에서 보고되어 있다. 녹용의 효과는 고대 한방 문헌으로서 동의보감, 신농본초경, 명의별록, 신수본초, 본초강목 등에 수록되어 현대에 전해지고 있다. 현대에 이르러서는 과학적인 임상실험을 통해 그 효과가 입증되고 있다. 특히 현대 의학의 검증에 따르면 녹용추출물은 백혈병 치료제, 비아그라와 같은 기능성 강장제 등의 원료로 쓰인다 이러한 것으로 보아 녹용은 신이 내린 최고의 영약으로 보약이자 치료제로 활용되고 있다. 녹용 추출물로 임상실험을 통해 골수모세포 증식에 도움을 주는 것으로 밝혀져 백혈병 등 치료법에 이용될 수 있다는 연구가 발표되기도 하였다. 현재 알려져 있는 녹용(鹿茸)의 현대 의학적 약효는 첫째, 조혈 기능을 항진시키고 둘째, 세포성 면역기능을 증강시키며 셋째, 간장 기능의 개선에 작용될 뿐 아니라 넷째, 피로나 쇠약상태에 있는 장기, 혈관운동 조직 및 신경세포 등에 매우 유익한 작용을 하는 것으로 확인되었다. 또한 녹용이나 녹혈에는 아미노산을 비롯한 강글리오사이드와 같은 기능성 물질이 발견됐으며 이와 같은 다양한 녹용 구성 물질은 인류의 건강에 지대한 영향을 끼치고 있음을 확인할 수가 있다. 근대에 이르러 녹용, 녹혈에 관한 현대 의학적 연구가 실험동물을 통하여 많이 이루어지고 있다.

그러나 녹용을 추출하여 농축할 경우 그 특유의 냄새로 인하여 식품 원료로 적용하는데 어려움이 있어 다양한 소재로서 녹용의 활용가치를 높이려면 관능 개선 및 추출 방법에 대한 연구가 더 필요하다.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물을 개발하기 위한 연구의 일환으로 각종 추출 조건법을 검토한 결과, 다양한 항산화제를 초음파 추출 단계에서 동시에 사용시 초음파 추출 방법에 의해 제조된 녹용 추출물이 항산화 효과가 우수하고, 상기 녹용 추출물과 항산화효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법, 그리고 이를 함유하는 식품 및 의약품을 제공하는 것이다.

이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

상기 목적을 달성하기 위해 본 발명은 녹용 추출물의 조성물로서 건조된 녹용의 건조 중량을 기준으로 하여 95.0 ~ 99.99 중량%, 추출 안정화 제제로서 항산화제 0.01 ~ 5.0 중량%로 구성되어 진다. 이때 추출 안정화 제제로서 사용되는 항산화제는 유성비타민A지방산에스테르, dl-α-토코페릴아세테이트, , d-α-토코페릴호박산, d-토코페롤(혼합형), d-α-토코페롤, 비타민 E, 비타민 C, 아스코르빌팔미테이트, L-아스코르빈산나트륨 중의 1종 이상으로 구성되어지는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 녹용 추출물의 제조 방법은 침지에 의한 열수 추출이 가진 한계점인 추출 효율을 개선한 저온의 초음파 추출 방법을 사용한 것으로, 이를 더욱 상세 하게 설명하면 아래와 같다.

본 발명에 사용되어진 초음파 추출 방법은 분쇄, 혼합 및 추출 공정 등에서 빠른 반응 시간에 좋은 효율을 얻기 위하여 적용된 방법으로, 기존의 전통 추출 방법인 열수 추출 방법은 본 발명에 사용된 초음파 추출 방법에 비해 추출 효율이 낮으며 에너지 소비가 많으며 열로 인한 많은 유용성분의 파괴와 산화 및 손실, 단백질의 변이, 열에 대한 불안정한 단점을 가지고 있다. 이에 비해 초음파 추출 방법은 추출 공정의 효율을 높이고 기능성 성분의 추출 원료에 적용시 많은 생리 활성 물질을 안전하게 그리고 효과적으로 얻을 수 있는 장점을 가지고 있다.

특히 본 발명은 항산화제를 함유한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 녹용 추출물을 제조함에 있어서, 녹용 추출물에 특정 항산화물질이 함유되도록 하여 기존 녹용 추출물이 가지고 있는 영양 성분의 활성을 유지하고 안정화시키는 기능을 보강하였을 뿐만 아니라, 녹용 추출물의 고유취를 마스킹하는 효과를 제공하는 것을 특징으로 하는 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물의 제조방법 및 이에 의해 제조된 녹용 추출물에 관한 것이다.

본 발명에 사용된 초음파 추출 방법에서 초음파란 소리(음파)이면서 인간의 귀로는 들을 수 없는 높은 진동수의 소리를 말하며, 여기서 저온이라 함은 70℃ 이하를 나타내며, 또한 이 때 녹용은 일반적으로 고온 또는 극저온 수준의 추출 온도를 회피 설계하여 불필요한 성분의 선택적 제거 및 유효 성분의 선택적 강화를 목적으로 하였으며, 용매의 부적절한 선택성에 따른 단점을 초음파 추출 방법으로 극복하였다. 즉, 추출 중에 발생할 수 있는 녹용 추출물의 조성 변화에 영향을 최소 화하도록 추출 전단계에서 항산화제를 배합하였으며, 이러한 초음파 추출 방법은 각종 유용성분의 불안정한 구조를 안정화시키며 다양한 범위의 초음파에 의하여 동물 및 식물 유래 원료에 깊게 침투하여 천연물의 유효성분을 효과적으로 추출할 수 있는 기존의 초음파 추출 방법보다 우수한 생리활성을 유지하는 추출 장점을 가진다.

본 발명인 녹용 추출물의 제조에 사용된 초음파 추출 방법의 장점은 추출하고자 하는 원료에 따라 초음파 에너지 변화의 세기를 조절할 수 있는 특징을 가진다. 그리하여 원료에 따라 추출 효율이 매우 높으며 약리 활성을 나타내는 유효 성분의 변성 및 파괴 가능성을 최소화시키며, 생산 속도가 기존의 전통적 열수 추출 방법보다 빠르므로 추출시간을 단축시키며, 이로 인하여 저비용 저에너지 사용이라는 특징을 가지는 것을 확인하였다.

본 발명에 따른 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물은 통상의 적용을 가질 수 있으며, 예를 들어 한방 음료, 유아용 음료, 주스, 유음료, 캔디류, 제과류, 제빵 류 등의 식품 원료로 사용될 수 있다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다. 또한 본 발명에 따른 항산화 효과를 가지는 녹용 추출물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 건강 및 기호 등 상태에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

이하 본 발명의 실시예를 통하여 본 발명의 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물을 보다 상세히 설명하지만 본 발명이 이들 실시예에만 국한되는 것은 아니다.

실시예 1 : 녹용 추출물의 제조

녹용 추출물은 잘 건조된 녹용을 분말화하여 사용하였다.

본 발명에 따르는 녹용 추출물의 제조 방법으로서는 녹용 추출 용매로서 정제수를 선택하여 녹용 시료에 대한 추출용매 비율을 일정하게 하여 추출 용액의 단위 부피당 초음파 출력과 추출 시간을 공정 및 시스템 변수로 하여 실온에서 추출 실험을 실시하였으며, 초음파 발생기는 20 kHz에서 작동하는 고출력용을 사용하였으며, 고출력용 초음파 발생기를 사용하여 400, 1200, 2400, 4000 W/L의 출력을 가하였다.

본 발명에 따르는 녹용 추출물의 제조 방법에 있어서 저출력용 초음파 발생기를 사용시 초음파 처리 시간에 따른 약리 활성 성분의 추출 효과가 미약하게 나타난 것을 확인하였으며, 본 발명에 따르는 녹용 추출물의 제조방법에 있어서는 상기 고출력용의 2400W/L의 출력을 적용하였다. 그 이유로서는 상기 3시간의 고출력 초음파를 처리하였을 때 녹용 추출물의 수율이 1200 ~ 2400W/L의 출력에서는 순도의 저하가 두드러지게 나타나지 않았으며 녹용 추출물의 수율이 가장 좋게 나타났다. 2400 W/L의 출력 이상에서는 추출 수율이 크게 증가하지 않았다. 그러므로 본 발명에 따른 녹용 추출물의 제조 방법에 있어서 3시간의 고출력 초음파를 처리하여 1200 ~ 2400W/L의 출력에서 가장 좋은 유효 수율을 얻을 수 있었다. 또한 추출 용매로서 정제수의 비율이 증가할수록 유효 수율은 감소하는 것으로 나타났다. 즉 본 발명에 따르는 녹용 추출물의 추출 용매로서 정제수를 사용할 때 적정 범위는 예비 실험의 범위 10, 20, 30, 50, 70, 100g/L (녹용/정제수 비율)에서 50g/L 범위가 넘어가면 유효 수율은 20g/L의 60% 수준으로 낮아짐을 확인하였다. 그러므로 추출 용매로서 정제수를 사용시 유효 범위는 20 ~ 50g/L 가 가장 적당함을 알 수 있었다. 이때 20g/L 미만으로 정제수를 사용시 추출 용매의 단위 부피당 녹용 시료의 양을 너무 과다하게 첨가하는 형태가 되어 녹용 추출물의 농축 효과가 크게 저하되는 것을 확인하였다.

하기 표 1에 나타난 바와 같이 본 발명의 녹용 추출물의 제조에 사용된 녹용의 추출 방법은 원물을 1차로 정제수로 세척한 다음, 잘게 분쇄하고 분쇄물 20 내지 50 중량%를 1시간 동안 20g/L 수준의 정제수에 침지하여 3시간 동안 25℃에서 초음파 추출 방법을 사용하여 녹용 추출물의 유효성분을 추출을 극대화하였다.

본 발명에 따르는 녹용 추출물의 제조 방법으로서는 녹용 추출 용매로서 정제수를 선택하여 녹용 시료에 대한 추출용매 비율을 일정하게 하여 추출 용액의 단위 부피당 초음파 출력과 추출 시간을 공정 및 시스템 변수로 하여 실온에서 추출 실험을 실시하였으며, 초음파 발생기는 20 kHz에서 작동하는 고출력용을 사용하였으며, 고출력용 초음파 발생기를 사용하여 400, 1200, 2400, 4000 W/L의 출력을 가하였다.

본 발명에 따르는 녹용 추출물의 제조 방법에 있어서 저출력용 초음파 발생기를 사용시 초음파 처리 시간에 따른 약리 활성 성분의 추출 효과가 미약하게 나타난 것을 확인하였으며, 본 발명에 따르는 녹용 추출물의 제조방법에 있어서는 상기 고출력용의 2400W/L의 출력을 적용하였다. 그 이유로서는 상기 3시간의 고출력 초음파를 처리하였을 때 녹용 추출물의 수율이 1200 ~ 2400W/L의 출력에서는 순도의 저하가 두드러지게 나타나지 않았으며 녹용 추출물의 수율이 가장 좋게 나타났다. 2400 W/L의 출력 이상에서는 추출 수율이 크게 증가하지 않았다. 그러므로 본 발명에 따른 녹용 추출물의 제조 방법에 있어서 3시간의 고출력 초음파를 처리하여 1200 ~ 2400W/L의 출력에서 가장 좋은 유효 수율을 얻을 수 있었다. 또한 추출 용매로서 정제수의 비율이 증가할수록 유효 수율은 감소하는 것으로 나타났다. 즉 본 발명에 따르는 녹용 추출물의 추출 용매로서 정제수를 사용할 때 적정 범위는 예비 실험의 범위 10, 20, 30, 50, 70, 100g/L (녹용/정제수 비율)에서 50g/L 범위가 넘어가면 유효 수율은 20g/L의 60% 수준으로 낮아짐을 확인하였다. 그러므로 추출 용매로서 정제수를 사용시 유효 범위는 20 ~ 50g/L 가 가장 적당함을 알 수 있었다. 이때 20g/L 미만으로 정제수를 사용시 추출 용매의 단위 부피당 녹용 시료의 양을 너무 과다하게 첨가하는 형태가 되어 녹용 추출물의 농축 효과가 크게 저하되는 것을 확인하였다.

하기 표 1에 나타난 바와 같이 녹용 98g, 비타민 C 1g, d-토코페롤(혼합형) 1g을 원료로하여 추출 중의 산화안정성을 배가시키며, 특히 저온 초음파 추출한 후 여과하고, 감압 농축하여 건조시 20g의 녹용 추출물을 획득하였다.

순번	종류	추출전 무게(g)	추출후 무게(g)
1	녹용	98
2	아스코르브산	1
3	토코페롤	1
합계		100	20

실시예 2 : 본 발명에 따른 녹용 추출물의 안정성 실험

먼저 pH 변화에 따른 영향을 살펴 보았다. 본 발명의 녹용 추출물 10% 용액으로 제조하여 pH 5.0 내지 9.0 pH의 변화에 따른 침전물 형성 유무에 대하여 관찰하여 아래 표 2에 나타내었다. 그 결과 pH 변화에 따른 침전 현상은 없는 것으로 나타났다.

	함량(%)	pH 4.0	pH 7.0	pH 9.0
녹용 추출분말	0.1%	-	-	-
	0.5%	-	-	-
	1.0%	-	-	-

+ : 침전 형성, - : 침전 없음

실시예 3 : 본 발명에 따른 녹용 추출물의 이취 마스킹 효과 테스트

본 발명의 녹용 추출물로서 실시예 1과 종래의 녹용 추출물로서 실시예 1에서 항산화 제제를 제외하여 초음파 추출을 통해 얻은 녹용 추출물에 대하여 10% 용액으로 제조하여 성인 10명에 대하여 이취에 대한 관능 테스트를 실시하였다.

	종래의 녹용 추출물	본 발명의 녹용 추출물
이취가 많이 느껴진다	3	2
이취가 느껴진다	5	3
이취가 거의 느껴지지 않는다	2	5

실험예 1 : 본 발명에 따른 녹용 추출물의 과산화수소를 처리한 세포 사멸의 방어 효과

과산화수소를 처리하여 유도되는 세포 사멸에 대하여 실시예 1에서 얻은 녹용 추출물의 방어 효과를 평가한 것으로 활성산소종에 의한 세포 자극에 대한 보호 효과를 평가하였다. 먼저 NIH3T3 세포를 65mm 페트리디쉬에 1×10⁶/ml 농도로 5ml씩 분주하여 세포의 부착을 유도한 후 실시예 1에서 얻은 녹용 추출물을 세포 사멸이 유도되지 않는 농도로 처리하고, 다시 과산화수소를 0, 1, 2, 5, 10mM로 각각 처리한 후 24시간 배양하여 세포 사멸에 대한 방어 효과를 평가하였다. 이하 세포 생존율 평가는 설퍼로다민 B 정량법으로 수행하였다. 실험 결과를 표 4에 나타난 바와 같이, 실시예 1에서 얻은 녹용 추출물은 1 중량%로 처리하였을 때 가장 우수한 세포사멸 방어 효과를 나타내었다.

그리하여 활성산소종에 대하여 실시예 1에서 얻은 녹용 추출물이 항산화 효과가 우수하였음을 알 수 있었다.

과산화수소(mM)	0	1	2	5	10
대조군	100%	52%	28%	3%	0%
실시예 1	100%	70%	38%	5%	0%

% : 세포 생존율

실험예 2 : 본 발명에 따른 녹용 추출물의 농도에 따른 DPPH 소거능에 의한 항산화 효과

활성 산소에 의한 반응은 거의 대부분 라디칼 반응으로서 자동산화반응 과정이 포함된다. 생체 내에서 자동산화반응을 차단시키는 역할은 항산화제가 담당하고 있다. 전자를 주는 능력으로서 환원력이 클수록 강한 항산화제가 된다. 항산화제의 환원력을 측정하는 시약으로 1,1-diphenyl-2 picrylhydrazyl radical(DPPH)가 있다. DPPH는 화합물 내 질소 중심의 안정화된 구조의 라디칼로 존재한다. 517nm에서 최대 흡수를 나타내며 환원되면 517nm에서 흡수가 없어진다. 본 발명의 한방 식물 추출물의 환원력의 크기는 라디칼 소거활성(Scavenging activity, SC50)으로 표시하며 SC50은 DPPH의 농도가 50% 감소하는데 필요한 농도를 나타낸다. 본 발명의 녹용 추출물에 대하여 농도별 SC50을 측정하여 나타난 결과를 표 5에 나타내었다. 표 4에서 본 녹용 추출물의 농도에 따라 DPPH 소거능력에 따른 항산화 효과가 있음을 확인하였다. 본 발명의 녹용 추출물을 농도에 따라 DPPH 소거 활성(SC 50)이 우수하였으며 7.5 ㎕/㎖을 나타내었다.

	SC 50
녹용 추출물	7.5 ㎕/㎖
Ascorbic acid	2.1 μM

실험예 3 : 본 발명에 따른 녹용 추출물의 농도에 따른 슈퍼록사이드 음이온(superoxide anion) 소거 활성에 의한 항산화 효과

활성산소 가운데 슈퍼록사이드 음이온은 자외선 흡수로 시작되는 광증감반응에 의해 생성되고, 생체내에 존재하는 SOD(Superoxide dismutase) 효소에 의해 과산화수소로 전환된다. 슈퍼록사이드와 과산화수소는 반응성이 약하여 직접적으로 조직세포 손상에 참여하는 경우는 드물지만 보다 위험한 하이드록시라디칼 생성에 참여한다. 즉 슈퍼록사이드는 철과 구리 이온을 환원시킬 수 있고, 환원된 철과 구리 이온은 과산화수소를 환원시키면서 결과적으로 하이드록실 라디칼을 생성시킨다. 또한 생체내에서 슈퍼록사이드는 페리틴으로부터 철 이온(II)을 방출시킬 수 있다. 이러한 현상은 자외선 조사 후에 나타나며 자외선으로 인해 생성된 슈퍼록사이드의 작용으로 간주되고 있다.

본 발명의 녹용 추출물을 농도에 따라 슈퍼록사이드 라디칼의 소거활성(SC 50)은 표 6에서 보여주듯이 우수하였으며 20.1 ㎕/㎖을 나타내었다.

	SC 50
녹용 추출물	20.1 ㎕/㎖
Trolox	63.1 μM

실험예 4 : 본 발명에 따른 녹용 추출물의 농도에 따른 하이드록실 라디칼 (hydroxyl radical) 소거 활성에 의한 항산화 효과

하이드록실 라디칼은 세포에 손상을 주는 가장 강력한 free radical로서 피부 세포막의 지질의 과산화반응을 일으키고 특히 DNA 및 결합조직 기질 손상에 참여하는 주원인 활성 산소종으로 알려져 있다. 특히 자외선 흡수로 시작되는 광증감 반응에 의해 슈퍼록사이드와 과산화수소가 생성되고 이들은 생체내에서 보다 위험한 하이드록실 라디칼 생성에 참여한다. 즉 슈퍼록사이드는 철 이온과 구리 이온을 환원시킬 수 있고 환원된 철과 구리는 과산화수소를 환원시키면서 결과적으로 하이드록실 라디칼을 생성시킨다.

본 발명의 녹용 추출물은 in vitro에서 Fenton 반응에 의해 생성시킨 하이드록실 라디칼을 소거하는 능력을 측정하여 표 7에 나타내었다. 즉 녹용 추출물은 농도에 따라 하이드록실 라디칼을 소거하는 것을 보여주고 있으며 하이드록실 라디칼 소거활성(SC 50)이 우수하였으며 23.1㎕/㎖을 나타내었다.

	SC 50
녹용 추출물	23.1 ㎕/㎖
Trolox	4.3 mM

실험예 5 : ATP 합성 촉진 활성 측정

사람섬유아세포(Human dermal fibroblast, 5계대)를 48well plate에 well당 3×104 cells 접종한 후 페니실린(100 IU/mL), 스트렙토마이신(100 ㎍/㎖), 10% FBS(fetal bovine serum)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지 넣고 37℃를 유지하여 10% 이산화탄소를 포함하는 배양기내에서 배양하였다. 24시간 배양후 FBS가 함유되지 않은 DMEM 배지로 1회 세척한 다음 본 발명의 녹용추출물을 함유한 새로운 DMEM배지(녹용추출물 함유, 0.04~10%(v/v)를 well당 300㎕씩 넣고 24시간 배양한다. 녹용추출물을 함유하지 않은 새로운 DMEM 배지로 배양한 것을 대조군으로 사용한다.

ATP 측정은 PerkinElmer사의 ATPlite를 사용하였다. 300㎕ 배지를 함유하고 있는 well에 lysis buffer를 well당 150㎕씩 넣고 오비탈쉐이커에서 700rpm으로 5분간 흔들어 준다. 기질용액을 well당 150㎕씩 넣고 암조건에서 오비탈 쉐이커에서 700rpm으로 5분간 흔들어 준다. 암조건에서 10분간 방치후 Molecular Devices사의 Spectramax L 루미노메타를 이용하여 RLU값을 측정하여 도 1에 나타내었다.

도 1에서 처럼 대조군 대비 40% 수준의 ATP 합성 능력이 증가함을 알 수 있었으며, 본 발명에 의한 녹용 추출물의 세포 성장 효과를 확인할 수 있었다.

이상 상기 실시예와 실험예를 통하여 본 발명의 녹용 추출물은 천연 항산화 효과를 유지하도록 저온의 초음파 추출 단계에서 항산화 제제를 동시에 처리하여 녹용 추출물에서 유래한 천연 유효 성분을 열에 의한 손실을 최소화시킴으로서 항산화 효과와 세포 생장 효과가 우수한 녹용 추출물을 제공하는 것이다.

Claims (6)

1. 저온의 초음파 추출 방법으로 제조되는 녹용 추출물을 함유함을 특징으로 하는 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물
2. 제 1항에 있어서,

   저온의 초음파 추출 방법으로 녹용을 추출하는 단계에서 항산화제를 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물
3. 제 1항에 있어서,

   건조 중량을 기준으로 하여 95.0 ~ 99.99 중량%의 녹용과 추출 안정화 제제로서 항산화제 0.01 ~ 5.0 중량%로 구성되어지는 것을 특징으로 하는 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물
4. 제 1항에 있어서,

   추출 안정화 제제로서 사용되는 항산화제는 유성비타민A지방산에스테르, dl-α-토코페릴아세테이트, , d-α-토코페릴호박산, d-토코페롤(혼합형), d-α-토코페롤, 비타민 E, 비타민 C, 아스코르빌팔미테이트, L-아스코르빈산나트륨 중의 1종 이상으로 구성되어지는 것을 특징으로하는 항산화 효과가 우수한 녹용 추출물
5. 청구항 1 내지 4항 중 어느 한 항에 의해 제조된 녹용 추출물을 함유한 식품
6. 녹용 및 항산화제를 균일하게 혼합하는 단계, 저온의 초음파 추출하는 단계, 불용성 물질을 제거하는 여과 단계; 및

   상기 여과액을 감압 농축하여 녹용 추출물을 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화제를 함유한 녹용 추출물의 제조 방법

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