KR20080107199A - 닭의 마렉병과 백혈병/육종의 감별진단을 위한 탐침,마이크로어레이 및 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 닭의 마렉병(Marek's disease)과 백혈병/육종(Leukosis/Sarcoma)의 감별진단을 위한 탐침(probes), 마이크로어레이(microarrays) 및 방법에 관한 것으로서, 닭의 바이러스성 종양 질병의 신속·정확한 진단을 가능하게 할 뿐만 아니라, 한번에 마렉병 바이러스(MDV) 혈청형 1~3 및 닭 백혈병/육종 바이러스(ALSV) 서브그룹 A, B, C, D, E 및 J까지 동시에 감별진단할 수 있다.
마렉병, 백혈병, 육종, 감별진단, 마이크로어레이, DNA 칩, 탐침
Description
도 1은 본 발명에 따른 DNA 칩에서 각 탐침의 위치를 나타내는 모식도이고;
도 2는 MDV 혈청형 1~3과 ALSV 서브그룹 A, B, C, D, E 및 J에 대한 단일 PCR 산물을 DNA 칩에 적용한 결과를 보여주는 사진이며;
도 3은 MDV 혈청형 1 Md5와 야외 강독주 29-1을 접종한 닭에서 PCR 산물을 DNA 칩에 적용한 결과를 보여주는 사진이다.
본 발명은 마이크로어레이(microarray)를 이용한 닭의 마렉병과 백혈병/육종의 감별진단에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 닭의 마렉병과 백혈병/육종의 감별진단을 위한 탐침(probes), 마이크로어레이 및 방법에 관한 것이다.
닭의 가장 중요한 종양성 질병을 유발하는 주요 원인체는 알파 레트로바이러스에 속하는 백혈병/육종(Leukosis/Sarcoma) 그룹의 바이러스와 알파 허피스바이러 스에 속하는 마렉병(Marek's Disease) 바이러스로 대별된다. 육류의 소비가에서 가축의 질병으로 인한 비용이 선진국에서도 17%이며, 개발도상국의 경우에는 34%에 이른다고 한다. 특히 마렉병과 닭 백혈병/육종 그룹의 바이러스에 의한 종양성 질병은 국내는 물론 전 세계적으로 양계산업을 위협하고 있다.
따라서 이러한 종양성 질병을 진단하는데 여러 가지 방법이 사용되고 있지만, 통상 병리조직학적 방법이 전통적으로 자주 사용되어 왔다. 하지만, 마렉병에 의한 림프종 중에서 말기 감염의 것은 형태학적으로 림프구성 백혈병과 유사한 림프아구의 형태로 구성되어 있다. 따라서, 병리전문가들도 림프구성 백혈병과 감별하지 못하여 오진을 내리는 경우가 종종 있다.
그 외에 이러한 질병의 감별에 사용되는 방법으로 바이러스 분리, 종양병변 내에서 바이러스 항원이나 핵산 검출, 혈중 항체 검출 등 다양한 방법이 보고되어 있다. 그러나, 마렉병 바이러스는 3개의 혈청형(serotypes) 내에서 혈청형 1에 속하는 바이러스 중 강독주만이 종양을 일으키고 백신주로 사용되는 CVI988과 같은 약독주는 종양을 일으키지 않기 때문에, 분리주가 백신주인지 강독주인지를 구별하기 어렵다. 바이러스 항원이나 핵산의 검출에 있어서도 한계가 있는데, 이는 바이러스가 종양세포 내에 극소수로 존재하기 때문에 항원의 검출이 어려울 뿐만 아니라, 핵산의 경우에 있어서도 백혈병/육종 바이러스인 레트로바이러스와 유사한 내인성 레트로바이러스와의 감별이 어렵기 때문이다.
현재 닭의 백혈병/육종의 예방을 위한 백신은 개발되어 있지 않아 예방이 불가능하며, 마렉병 또한 강독형 변이 바이러스가 10년 주기로 출현함에 따라 백신 이용에 대한 문제점이 대두되고 있는 실정이다. 따라서 닭의 바이러스성 종양 질병을 예방하기 위해서는 민감도와 특이도가 높으며 신속·정확한 진단법의 개발이 절실한 실정이다.
최근 바이러스성 질병에 자주 사용되는 분자생물학적 방법으로는 특이 유전자를 증폭하여 증폭산물의 존재 유무를 확인하는 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction; PCR)법, 특정 핵산 물질을 조직 내에서 직접 검출하는 인 시튜 혼성화(In situ hybridization)법, 및 이들의 장점만을 접목시킨 인 시튜 PCR법 등 다양한 방법들이 있다. 최근 활발히 사용되고 있는 PCR 기법 등을 포함한 분자생물학적 방법은 기존의 혈청학적 방법 등에 비해, 진단의 정확성이 향상된 것은 사실이지만 다양한 원인체를 동시에 정확하게 진단하는 데는 여전히 한계가 있다. 즉, 이들은 한 종류 또는 몇 가지 종류의 한정된 병원체만을 검사할 수밖에 없어 수십 개의 바이러스가 있는 백혈병/육종 그룹의 바이러스들과 혈청형 1 내에서도 다양한 바이러스주가 있는 마렉병을 동시에 진단하는 것은 불가능하다. 뿐만 아니라, 이러한 분자생물학적 방법들은 진단하는데 많은 시간이 걸리고 경제적인 부담이 크다는 문제점이 있다.
이에, 본 발명자들은 보다 간단하고 신속하며 정확하게 닭 백혈병/육종과 마렉병을 감별진단할 수 있는 방법을 개발하기 위하여 지속적인 연구를 수행하였다. 그 결과, 닭 백혈병/육종과 마렉병의 각 혈청형별 특이 유전자와 상보적으로 결합할 수 있는 탐침 및 이를 포함하는 마이크로어레이를 제작하고, 이를 이용하여 상 기 목적을 성공적으로 달성할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
따라서 본 발명의 제1목적은 닭의 마렉병과 백혈병/육종의 감별진단을 위한 탐침을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 제2목적은 상기 탐침을 포함하는 닭의 마렉병과 백혈병/육종의 감별진단을 위한 마이크로어레이를 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 제3목적은 상기 마이크로어레이를 이용한 닭의 마렉병과 백혈병/육종의 감별진단 방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 제1면은 서열번호 1 내지 11 중 어느 하나의 염기서열로 구성되는 올리고뉴클레오티드에 관한 것이다.
본 발명의 제2면은 지지체(support) 상에 닭 마렉병 바이러스(MDV) 혈청형 1 내지 3, 및 닭 백혈병/육종 바이러스(ALSV) 서브그룹 A, B, C, D, E 및 J의 특이적 유전자와 각각 상보적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 탐침이 고정화되어 있는, 닭 마렉병과 백혈병/육종의 감별진단을 위한 마이크로어레이에 관한 것이다. 본 발명에 따른 마이크로어레이에 있어서, 올리고뉴클레오티드 탐침은 서열번호 1 내지 11 중 어느 하나의 염기서열로 구성되는 것이 바람직하다. 또한, 지지체는 유리 슬라이드, 실리카, 반도체, 플라스틱, 금, 은, 자성분자, 나일론, 폴리디메틸실록산(Polydimethyl siloxane; PDMS), 셀룰로스 또는 니트로셀룰로스일 수 있으며, 박판, 튜브 또는 비드 형태 등으로 제작될 수 있다.
본 발명의 제3면은
⒜ 상기 마이크로어레이에 닭 마렉병 바이러스(MDV) 유전자, 닭 백혈병/육종 바이러스(ALSV) 유전자 또는 이들의 혼합물을 함유하는 반응 시료를 가하고;
⒝ 올리고뉴클레오티드 탐침과 상기 유전자를 혼성화 반응시키고;
⒞ 상기 탐침과 유전자 간의 하이브리드(hybrids) 형성에 의한 신호를 검출하는:
단계를 포함하는, 닭 마렉병과 백혈병/육종의 감별진단 방법에 관한 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 마이크로어레이를 이용한 닭 마렉병과 닭 백혈병/육종의 감별진단에 관한 것이다. 본 발명에서, 닭 마렉병 바이러스(MDV) 혈청형 1~3 및 닭 백혈병/육종 바이러스(ALSV) 서브그룹 A, B, C, D, E 및 J의 PCR 증폭을 위해 사용된 시발체 쌍(primer pairs)은 아래 표 1에 나타낸 바와 같다.
1 F: 정방향 프라이머, R: 역방향 프라이머.
표 1에 나타낸 바와 같이, ALSVs 중에서 서브그룹 A, B, C, D 및 ev를 증폭하기 위해서 ALSVs의 env 유전자 염기서열에서 시발체 쌍을 제작하였으며, 서브그룹 J 바이러스는 긴 말단 반복체(long terminal repeat; LTR) 부분의 염기서열에서 시발체 쌍을 제작하였다. 또한, MDV 혈청형 1~3을 동시에 증폭하기 위해서 MDV의 중합효소(polymerase) 유전자 염기서열에서 프라이머 쌍을 제작하였다.
상기 PCR 증폭산물에서 MDV 혈청형 1~3 및 ALSV 서브그룹 바이러스들을 검출하기 위한 올리고뉴클레오티드 탐침은 증폭하려는 각각의 바이러스 유전자 내에서 각각의 바이러스에 특이적인 염기서열을 선발하여 아래 표 2에 나타낸 바와 같이 제작하였다(표 2).
상기한 바와 같은 올리고뉴클레오티드 탐침을 지지체 상에 고정하여 마이크로어레이를 제작한다. 마이크로어레이를 제작하기 위해서는 당업계에 알려진 통상의 방법 중 어떠한 방법도 사용할 수 있다. 또한, 지지체로는 당업계에 알려진 통상의 물질, 예를 들어, 유리 슬라이드, 실리카, 반도체, 플라스틱, 금, 은, 자성분자, 나일론, 폴리디메틸실록산(PDMS), 셀룰로스 또는 니트로셀룰로스를 사용할 수 있으나, 이들로 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 마이크로어레이는 다양한 형태로 제작될 수 있는 바, 예를 들어, 박판, 튜브 또는 비드 형태로 제작될 수 있으나, 이들로 제한되는 것은 아니다. 대표적인 일례로, 본 발명에서는 핀 마이크로어레이(pin microarray) 방법을 이용하여 슬라이드 상에 도팅(dotting)함으로써 DNA 칩(chip)을 제작할 수 있다.
본 발명에서는,
⒜ 상기 마이크로어레이에 닭 마렉병 바이러스(MDV) 유전자, 닭 백혈병/육종 바이러스(ALSV) 유전자 또는 이들의 혼합물을 함유하는 반응 시료를 가하고;
⒝ 올리고뉴클레오티드 탐침과 상기 유전자를 혼성화 반응시키고;
⒞ 상기 탐침과 유전자 간의 하이브리드 형성에 의한 신호를 검출하는:
단계를 거침으로써, 닭 마렉병과 백혈병/육종을 감별진단할 수 있다.
본 발명에 따른 마이크로어레이 진단방법의 정확도를 확인하기 위하여, 표준주 및 야외주 혈청형 1~3 마렉병 바이러스, 서브그룹 A~D, 및 J 백혈병/육종 바이러스들을 배양하여 각각의 바이러스에 대하여, 또한 혼합한 바이러스들에 대하여 본 발명의 진단방법을 적용한 결과, 각각의 바이러스 및 혼합된 바이러스들에 특이적인 양성반응을 확인할 수 있었다. 또한 각각의 바이러스를 단독 또는 혼합 감염시킨 닭에 본 발명의 진단방법을 적용한 결과, 각각의 바이러스 또는 혼합 감염된 바이러스들을 검출할 수 있었다. 이러한 재료를 대상으로 기존에 사용되고 있는 PCR 진단기법과 그 민감도를 비교한 결과, 본 발명의 마이크로어레이를 이용한 진단방법이 더욱 우수함을 알 수 있었다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 보다 구체적으로 설명하나, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위를 어떤 식으로든 제한하고자 하는 것은 아니다.
실시예 1: 바이러스 접종 및 DNA 추출
1) 바이러스 접종
마렉병 바이러스 표준주로, 혈청형 1 MDV 강독주로는 Md5주, 혈청형 2 MDV로는 SB-1주와 HPRS-24주, 혈청형 3 MDV로는 허피스바이러스 터키(herpesvirus turkey; HVT)주를 사용하였고, 야외 분리주로는 혈청형 1 MDV인 29-1주를 사용하였다. 또한, ALSVs 표준주로는 RAV-1(서브그룹 A; ATCC VR-335TM), RAV-2(서브그룹 B; ATCC VR-658TM), RAV-49(서브그룹 C; ATCC VR-627TM), RAV-50(서브그룹 D; ATCC VR-660TM) 및 HPRS-103(서브그룹 J; 영국, 버크샤이어, 콤프톤, 인스티튜트 포 애니멀 헬스 제공)을 사용하였다.
MDV 표준주인 혈청형 1 강독주인 Md5와 MDV 야외 분리주인 29-1주를 바이러스 한 주당 1주령 병아리 30마리에 각각 복강으로 1×104 PFU/0.2 ㎖씩 투여하였다. 또한 ALSV 서브그룹 A, B, C, D 바이러스 배양 상층액을 한 주당 1주령 병아리 30마리에 각각 복강으로 0.2 ㎖씩 투여하였다. 각각의 바이러스를 감염시킨 후, 멸균된 음수와 사료를 자유 급여시켰다. 접종 후 10주령까지 임상증상 등을 관찰하였으며, 병변의 발생유무를 확인하기 위하여 매주 3마리씩 경추후두개 탈골법으로 안락사시킨 후, 신장을 채취하여, PCR 및 DNA 칩 진단을 위해 -80 ℃에 보관하였다.
2) DNA 추출
아큐프렙 게놈 DNA 추출 키트(AccuPrep Genomic DNA Extraction Kit)(바이오니아, 한국)를 이용하여 표준주 및 실험 접종 시료에서 DNA를 추출하였다. 추출한 DNA는 DNase가 없는 50 ㎕ 2차 증류수에 녹여 사용할 때까지 -80 ℃에 보관하였다.
실시예 2: 올리고뉴클레오티드 시발체 쌍, 탐침 및 DNA 칩 제작
DNA 칩의 탐침에 사용될 PCR 증폭산물을 제작하기 위한 시발체 쌍은 상기 표 1에 나타낸 바와 같았다. 즉 ALSVs 중에서 서브그룹 A, B, C, D 및 ev를 증폭하기 위해서 ALSVs의 env 유전자 염기서열에서 시발체 쌍을 제작하였으며, 서브그룹 J 바이러스는 LTR 부분의 염기서열에서 시발체 쌍을 제작하였다. MDV 혈청형 1~3을 동시에 증폭하기 위해서 MDV의 중합효소 유전자 염기서열에서 시발체 쌍을 제작하였다.
PCR 증폭산물에서 MDV 혈청형 1~3 및 ALSV 서브그룹 바이러스들을 검출하기 위한 올리고뉴클레오티드 탐침은 증폭하려는 각각의 바이러스 유전자 내에서 각각의 바이러스에 특이적인 염기서열을 선발하여 상기 표 2에 나타낸 바와 같이 제작하였다. 상기한 바와 같이 합성한 올리고뉴클레오티드 탐침은 핀 마이크로어레이 방법을 이용하여 슬라이드 상에 도팅하였다. 도 1에 MDV의 각 혈청형 및 ALSV의 각 서브그룹에 특이적인 탐침의 배열을 나타내었다. 특이도를 증가시키기 위해, 각 바이러스에 대해 3 스팟을 만들었으며, 각 탐침의 정확한 스팟팅을 확인하기 위하여, 슬라이드를 토프로(topro) 염료로 염색하였다.
실시예 3: 단일 PCR 및 다중 PCR
MDV 혈청형 1-3 및 ALSV 서브그룹 바이러스들을 증폭하기 위해서, 상기 MDVs 및 ALSVs 표준주, 야외 및 접종증례들을 이용하여 단일 PCR(single PCR) 또는 다중 PCR(multiplex PCR)을 수행하였다. 단일 PCR은 추출한 DNA 10 ㎕에 5 ㎕ 10× 완충액[100 mM Tris-HCl(pH 8.3), 500 mM KCl, 15 mM MgCl2, 0.01% 젤라틴], 5 ㎕ MgCl2(25 mM), 1 ㎕ 10 mM dNTP, 하류 및 상류 프라이머 쌍 1 ㎕(50 pmol), 0.5 ㎕ Taq 중합효소(5 U/㎕, 프로메가(Promega), USA), 2차 증류수 26.5 ㎕를 넣어 총 50 ㎕가 되도록 제작하였다. 다중 PCR용 PCR 칵테일은 상기한 시발체 쌍의 양만큼 반응 완충액의 2차 증류수 양을 줄여 총 50 ㎕가 되도록 제작하였다. DNA 칩에 사용될 단일 PCR 및 다중 PCR에서는, PCR 칵테일에 25 nmol Cy5-dCTP(진켐, 한국) 1 ㎕를 첨가하여 사용하였다. 이러한 PCR 산물들은 에티디움 브로마이드가 들어있는 1.2% 아가로스 젤에서 전기영동을 실시하여 관찰하였다.
실시예
4:
네스티드
PCR
야외 및 실험접종 증례들에서 MDVs가 PCR로 검출되지 않았을 경우, 네스티드 PCR(nested PCR)을 수행하였다. 단일 PCR과 동일한 방법에 따라 실시하였으며, 시발체 쌍은 정방향 시발체(서열번호 26: 5'-GTACATCGGAGCACGAAAGA-3')와 역방향 시발체(서열번호 27: 5'-CGCAGATGGTATCAGTATCG-3')를 사용하였으며, 최종 산물의 크기는 553 bp였다.
실시예
5:
혼성화
및 검출
단일 PCR 또는 다중 PCR 증폭산물에서 원하는 표적 DNA를 검출하기 위하여, 아래의 방법에 따라 DNA 칩을 사용하였다. 즉 Cy5-dCTP로 표지하면서 단일 또는 다중 PCR에 의해 합성된 표적 DNA 10 ㎕에 혼성화 완충액(50% 포름아미드, 6× SSC, 0.5% SDS, 50 mM Na-포스페이트, pH 8.0, 5× 덴하르츠(Denhardt's) 10 ㎕를 혼합한 후, 튜브를 PCR 기계에서 98 ℃, 3 분간 가열하였다. 그런 다음, 즉시 얼음으로 옮겨 3 분간 정치하였다. 이 반응액을 대해 45 ℃ 습윤 인큐베이터에서 15 시간 동안 혼성화를 실시하였다. 슬라이드를 2× SSC, 0.1% SDS에서 5 분간, 1× SSC에서 5 분간, 0.5× SSC에서 5 분간 80 rpm 정도로 흔들어 주면서 세척한 후, 1500 rpm에서 5 분간 원심분리하면서 건조시켰다. 시그널 검출은 스캔어레이(ScanArray) 4000(팩커드 바이오칩 테크놀로지즈(Packard Biochip Technologies), USA)을 이용하여 수행하였다.
도 2에 MDV 혈청형 1~3과 백혈병/육종 바이러스의 서브그룹 A, B, C, D, E, J에 대한 단일 PCR 산물을 DNA 칩에 적용한 결과를 나타내었다. 또한, 도 3에 MDV 혈청형 1 바이러스인 Md5와 야외 강독주인 29-1을 접종한 닭에서 PCR 산물을 DNA 칩에 적용한 결과를 나타내었다. 도 2 및 3에서, 좌측 패널은 MDV의 각 혈청형 및 ALSV의 각 서브그룹에 특이적인 탐침의 배열을 나타낸다(1: ALSV의 서브그룹 J-2, 2: ALSV의 서브그룹 J-1, 3: ALSV의 서브그룹 E, 4: ALSV의 서브그룹 D, 5: ALSV의 서브그룹 C, 6: ALSV의 서브그룹 B, 7: ALSV의 서브그룹 A-2, 8: ALSV의 서브그룹 A-1, 9: MDV의 혈청형 3, 10: MDV의 혈청형 2, 11: MDV의 혈청형 1). 특이도를 증가시키기 위해, 각 바이러스에 대해 3 스팟을 만들었다. 도 2 및 3에 나타난 바와 같이, 특이적인 양성반응을 확인하였다.
본 발명에 따르면, 닭의 바이러스성 종양 질병의 신속·정확한 진단이 가능하여 예방대책의 확립 및 방역대책의 조기 수립이 가능함으로써 육류의 고급화 및 생산성을 향상시킬 수 있으며, 상기 질환의 치료비 손실 및 인력낭비 등을 절감할 수 있어 막대한 경제적 효과를 거둘 수 있다. 뿐만 아니라, 한번에 마렉병 바이러스 혈청형 1, 2 및 3, 및 닭 백혈병/육종 서브그룹 A, B, C, D, E 및 J까지 동시에 진단할 수 있다.
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<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 13
ggtttagtga aactaccttg 20
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 14
ggtttggtga aactaccttg 20
<210> 15
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 15
gaacgcgatg tgacggg 17
<210> 16
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 16
cataccatga tcatacca 18
<210> 17
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 17
acatttttca acccgtac 18
<210> 18
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 18
acatttttca acccctac 18
<210> 19
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 19
acatttttca atccgtac 18
<210> 20
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 20
acatttttca atccctac 18
<210> 21
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 21
acttttttca acccgtac 18
<210> 22
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 22
acttttttca atccgtac 18
<210> 23
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 23
acttttttca atccgtac 18
<210> 24
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 24
tccaacttgt aactttgca 19
<210> 25
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 25
tctaacttgt aactttgca 19
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 26
gtacatcgga gcacgaaaga 20
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 27
cgcagatggt atcagtatcg 20
Claims (6)
- 서열번호 1 내지 11 중 어느 하나의 염기서열로 구성되는 올리고뉴클레오티드.
- 지지체 상에 닭 마렉병 바이러스(MDV) 혈청형 1 내지 3, 및 닭 백혈병/육종 바이러스(ALSV) 서브그룹 A, B, C, D, E 및 J의 특이적 유전자와 각각 상보적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 탐침이 고정화되어 있는, 닭 마렉병과 백혈병/육종의 감별진단을 위한 마이크로어레이.
- 제2항에 있어서, 올리고뉴클레오티드 탐침이 서열번호 1 내지 11 중 어느 하나의 염기서열로 구성되는 마이크로어레이.
- 제2항에 있어서, 지지체가 유리 슬라이드, 실리카, 반도체, 플라스틱, 금, 은, 자성분자, 나일론, 폴리디메틸실록산(PDMS), 셀룰로스 및 니트로셀룰로스로 구성된 그룹으로부터 선택되는 것인 마이크로어레이.
- 제2항에 있어서, 지지체가 박판, 튜브 또는 비드 형태의 것인 마이크로어레이.
- ⒜ 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 마이크로어레이에 닭 마렉병 바이러스(MDV) 유전자, 닭 백혈병/육종 바이러스(ALSV) 유전자 또는 이들의 혼합물을 함유하는 반응 시료를 가하고;⒝ 올리고뉴클레오티드 탐침과 상기 유전자를 혼성화 반응시키고;⒞ 상기 탐침과 유전자 간의 하이브리드 형성에 의한 신호를 검출하는:단계를 포함하는, 닭 마렉병과 백혈병/육종의 감별진단 방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020070055212A KR100891178B1 (ko) | 2007-06-05 | 2007-06-05 | 닭의 마렉병과 백혈병/육종의 감별진단을 위한 탐침,마이크로어레이 및 방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020070055212A KR100891178B1 (ko) | 2007-06-05 | 2007-06-05 | 닭의 마렉병과 백혈병/육종의 감별진단을 위한 탐침,마이크로어레이 및 방법 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20080107199A true KR20080107199A (ko) | 2008-12-10 |
| KR100891178B1 KR100891178B1 (ko) | 2009-04-06 |
Family
ID=40367612
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020070055212A KR100891178B1 (ko) | 2007-06-05 | 2007-06-05 | 닭의 마렉병과 백혈병/육종의 감별진단을 위한 탐침,마이크로어레이 및 방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR100891178B1 (ko) |
-
2007
- 2007-06-05 KR KR1020070055212A patent/KR100891178B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR100891178B1 (ko) | 2009-04-06 |
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