KR20080096570A - 이미다졸계 화합물, 그를 포함하는 조성물 및 그의 사용 방법 - Google Patents

이미다졸계 화합물, 그를 포함하는 조성물 및 그의 사용 방법 Download PDF

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KR20080096570A
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데이비드 제이. 어게리
제프리 백대노프
레이크멀 더블유. 보테쥬
케네쓰 지. 카슨
씨어도어 씨. 제소프
데이비드 에스. 킴볼
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렉시컨 파마슈티컬스 인코퍼레이티드
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Abstract

이미다졸계 화합물, 그를 포함하는 조성물, 및 염증성 및 자가면역 질병 및 장애의 치료, 예방 및 관리를 위한 그의 사용 방법이 개시된다. 구체적인 화합물은 화학식 (I)의 것이다.
<화학식 I>
Figure 112008059928937-PCT00031
Figure P1020087020596
자가면역, 관절염, 이미다졸, THI, S1P, 리아제

Description

이미다졸계 화합물, 그를 포함하는 조성물 및 그의 사용 방법{IMIDAZOLE-BASED COMPOUNDS, COMPOSITIONS COMPRISING THEM AND METHODS OF THEIR USE}
본 출원은 2007년 1월 25일에 출원된 U.S. 특허 출원 11/698,253호, 및 2006년 2월 24일에 출원된 U.S. 가출원 제60/776,473호, 그리고 2006년 6월 20일에 출원된 U.S. 가출원 제60/815,221호의 우선권을 주장하는 바로써, 이들 모두는 여기에 참조로써 개재된다.
본 발명은 이미다졸계 화합물, 및 다양한 질병 및 장애의 치료, 예방 및 관리를 위한 그의 사용 방법에 관한 것이다.
스핑고신-1-포스페이트 (S1P)는 다장기 시스템 상에서 강력한 효과를 가지는 생물활성 분자이다 (문헌 [Saba, J.D. and Hla, T. Circ . Res . 94:724-734 (2004)]). 일부는 이 화합물이 세포내 2차 전령(secondary messenger)인 것으로 믿고 있으나, 그 작용 양식은 여전히 논쟁의 대상이다 (상기 동일 문헌). 실제로는, 그의 대사작용조차 거의 알려져 있지 않다 (문헌 [Hla, T., Science 309:1682-3 (2005)]). 최근의 연구자들은 S1P가 스핑고신의 인산화에 의해 형성되고 탈인산화 또는 절단에 의해 분해되는 것으로 여기고 있다. 그의 에탄올아민 포스페이트 및 긴-사슬 알데하이드로의 절단은 S1P 리아제에 의해 촉매(catalyzed)되는 것으로 알려져 있다 (상기 동일 문헌; 문헌 [Pyne & Pyne, Biochem J. 349:385-402 (2000)]).
스핑고신-1-포스페이트 리아제는 소포체(endoplasmic reticulum)의 막에 위치하는 비타민 B6-의존성 효소이다 (문헌 [Van Veldhoven and Mannaerts, J. Biol. Chem . 266:12502-12507 (1991)]; [Van Veldhoven and Mannaerts, Adv . Lipid. Res . 26:69 (1993)]). 인간 S1P 리아제의 폴리뉴클레오티드 및 아미노산 서열과 그의 유전자 산물에 대해서는 PCT 특허 출원 제WO 99/16888호에 기술되어 있다.
최근, 슈와브(Schwab)와 그의 동료들은 캐러멜 색소 III의 성분인 2-아세틸-4-테트라하이드록시부틸이미다졸 (THI)이 생쥐에 투여되었을 때 S1P 리아제 활성을 억제한다는 결론을 내렸다 (문헌 [Schwab, S. et al., Science 309:1735-1739 (2005)]). 다른 연구자들이 THI가 다른 기작에 의해 그 효과를 발휘한다고 주장한 바도 있지만 (예컨대 문헌 [Pyne, S.G., ACGC Chem . Res . Comm . 11:108-112 (2000)] 참조), 쥐 및 생쥐에 대한 이 화합물의 투여가 림프구감소증을 유발하고 가슴샘에서의 성숙한 T 세포의 축적을 야기한다는 것은 분명하다. 예컨대 상기 문헌 [Schwab]; 문헌 [Pyne, S. G., ACGC Chem . Res . Comm . 11:108-112 (2000)]; [Gugsyan, R., et al, Immunology 93(3):398-404 (1998)]; [Halweg, K.M. and Buchi, G., J. Org . Chem . 50:1134-1136 (1985)]; 및 크뢰플린(Kroeplien)과 로스도르퍼(Rosdorfer)의 U.S. 특허 4,567,194호를 참조하라. 아직까지, 생쥐와 쥐가 아닌 다른 동물에서 면역학적 효과를 가지는 THI에 대한 공지의 보고서는 없다. U.S. 특허 4,567,194호에서 THI 및 일부 관련 화합물들이 면역억제 약제로서 유용할 수 있다고 주장하고 있지만, 인간에서의 이 화합물의 연구에서 면역학적 효과는 발견되지 않았다. 문헌 [Thuvander, A. and Oskarsson, A., Fd . Chem . Toxic . 32(1):7-13 (1994)]; [Houben, G.F., et al, Fd . Chem . Toxic . 30(9):749-757 (1992)]를 참조하라.
<발명의 개요>
본 발명은 부분적으로 하기 화학식 I의 화합물과 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물 (예, 수화물)에 관한 것이며:
Figure 112008059928937-PCT00001
여기서: X는 O 또는 NR3이고; R1은 OR1A, NHOH, 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이며; R2는 OR2A, C(O)OR2A, 수소, 할로겐, 니트릴, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고; R3는 OR3A, N(R3A)2, NHC(O)R3A, NHSO2R3A, 또는 수소이며; R4는 OR4A, OC(O)R4A, 수소, 할로겐, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬 아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고; R5는 N(R5A)2, 수소, 하이드록시, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이며; R1A, R2A, R3A, R4A 및 R5A 각각은 개별적으로 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이다.
본 발명은 또한, 화학식 I의 화합물을 포함하는 약학적 조성물, 및 화학식 I의 화합물을 사용한 염증성 질병 및 장애의 치료 방법을 포괄한다.
<도면의 간단한 설명>
본 발명의 소정 양태는 하기의 도면을 참조하여 이해될 수 있다:
도 1은 가슴샘의 T 세포 조성 (CD4+ 및 CD8+)에 대한 비히클 대조 (VC), 본 발명의 화합물 (화합물 1) 및 THI의 효과, 및 모든 생쥐 (n = 3)에 대한 평균/Sd를 나타내는 유동 세포측정(FACS) 점도표(dot plot)를 표시하여 제공한다.
도 2는 생쥐에서의 CD4+ 세포의 하위군 (최근 가슴샘 이주체(Recent thymic emigrants))에 대한 비히클 대조 (VC), 본 발명의 화합물 (화합물 1) 및 THI의 효과를 나타내는 FACS 점도표를 표시하여 제공한다.
도 3은 생쥐에서의 CD8+ 세포의 하위군 (최근 가슴샘 이주체)에 대한 비히클 대조 (VC), 본 발명의 화합물 (화합물 1) 및 THI의 효과를 나타내는 FACS 점도표를 표시하여 제공한다.
도 4는 생쥐의 전혈 계수에 대한 비히클 대조, THI, 화합물 1, 및 1-(4-메틸-5-((1S,2R,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)티아졸-2-일)에탄온 (화합물 2)의 효과를 나타낸다.
도 5는 생쥐에서의 콜라겐-유도 관절염에 대한 본 발명 화합물 단일 경구 투여의 효과를 나타낸다.
도 6은 키노몰구스 원숭이의 백혈구 및 림프구 계수에 대한 본 발명 화합물 단일 경구 투여의 효과를 나타낸다.
본 발명은 부분적으로 S1P 리아제 유전자-파괴 생쥐의 연구에서 유래한 것으로서, 주로 자가면역 및 염증성 질병과 장애의 치료, 예방 및/또는 관리에 유용한 것으로 여겨지는 화합물에 관한 것이다.
5.1. 정의
다르게 표시되지 않는 한, "알케닐"이라는 용어는 2 내지 20 (예, 2 내지 10 또는 2 내지 6) 탄소 원자를 가지며 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 직쇄형, 분지형 및/또는 고리형 탄화수소를 의미한다. 대표적인 알케닐 요소에는 비닐, 알릴, 1-부테닐, 2-부테닐, 이소부틸레닐, 1-펜테닐, 2-펜테닐, 3-메틸-1-부테닐, 2-메틸-2-부테닐, 2,3-디메틸-2-부테닐, 1-헥세닐, 2-헥세닐, 3-헥세닐, 1-헵테닐, 2-헵테닐, 3-헵테닐, 1-옥테닐, 2-옥테닐, 3-옥테닐, 1-노네닐, 2-노네닐, 3-노네닐, 1-데세닐, 2-데세닐 및 3-데세닐이 포함된다.
다르게 표시되지 않는 한, "알킬"이라는 용어는 1 내지 20 (예, 1 내지 10 또는 1 내지 4) 탄소 원자를 가지는 직쇄형, 분지형 및/또는 고리형 ("싸이클로알킬") 탄화수소를 의미한다. 1 내지 4 탄소를 가지는 알킬 요소는 "저급 알킬"로 지칭된다. 알킬 기의 예에는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, 펜틸, 헥실, 이소헥실, 헵틸, 4,4-디메틸펜틸, 옥틸, 2,2,4-트리메틸펜틸, 노닐, 데실, 운데실 및 도데실이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 싸이클로알킬 요소는 단일고리형 또는 다고리형일 수 있으며, 그 예에는 싸이클로프로필, 싸이클로부틸, 싸이클로펜틸, 싸이클로헥실 및 아다만틸이 포함된다. 알킬 요소의 추가적인 예는 선형, 분지형 및/또는 고리형의 부분들을 가진다 (예, 1-에틸-4-메틸-싸이클로헥실). "알킬"이라는 용어에는 포화 탄화수소는 물론 알케닐 및 알키닐 요소도 포함된다.
다르게 표시되지 않는 한, "알킬아릴" 또는 알킬-아릴"이라는 용어는 아릴 요소에 결합된 알킬 요소를 의미한다.
다르게 표시되지 않는 한, "알킬헤테로아릴" 또는 "알킬-헤테로아릴"이라는 용어는 헤테로아릴 요소에 결합된 알킬 요소를 의미한다.
다르게 표시되지 않는 한, "알킬헤테로싸이클" 또는 "알킬-헤테로싸이클"이라는 용어는 헤테로싸이클 요소에 결합된 알킬 요소를 의미한다.
다르게 표시되지 않는 한, "알키닐"이라는 용어는 2 내지 20 (예, 2 내지 20 또는 2 내지 6) 탄소 원자를 가지며 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 직쇄형, 분지형 또는 고리형 탄화수소를 의미한다. 대표적인 알키닐 요소에는 아세틸레닐, 프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 1-펜티닐, 2-펜티닐, 3-메틸-1-부티닐, 4-펜티닐, 1-헥시닐, 2-헥시닐, 5-헥시닐, 1-헵티닐, 2-헵티닐, 6-헵티닐, 1-옥티닐, 2-옥티닐, 7-옥티닐, 1-노니닐, 2-노니닐, 8-노니닐, 1-데시닐, 2-데시닐 및 9-데시닐이 포함된다.
다르게 표시되지 않는 한, "알콕시"라는 용어는 -O-알킬 기를 의미한다. 알콕시 기의 예에는 -OCH3, -OCH2CH3, -0(CH2)2CH3, -O(CH2)3CH3, -O(CH2)4CH3, 및 -O(CH2)5CH3가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
다르게 표시되지 않는 한, "아릴"이라는 용어는 탄소와 수소 원자로 구성되는 방향족 고리, 또는 방향족 또는 부분적 방향족의 고리 시스템을 의미한다. 아릴 요소는 서로 결합 또는 융합된 다중의 고리들을 포함할 수 있다. 아릴 요소의 예에는 안트라세닐, 아줄레닐, 비페닐, 플루오레닐, 인단, 인데닐, 나프틸, 페난트레닐, 페닐, 1,2,3,4-테트라하이드로-나프탈렌 및 톨릴이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
다르게 표시되지 않는 한, "아릴알킬" 또는 "아릴-알킬"이라는 용어는 알킬 요소에 결합된 아릴 요소를 의미한다.
다르게 표시되지 않는 한, "혈중 림프구 감소제(circulating lymphocyte reduction agent)"라는 용어는 약 20 %를 초과하는 CLRF를 가지는 화합물을 의미한다.
다르게 표시되지 않는 한, "혈중 림프구 감소율(circulating lymphocyte reduction factor)" 또는 "CLRF"라는 용어는 단일 투여분의 화합물을 100 mg/kg으로 경구 투여함으로써 야기되는 생쥐에서의 혈중 림프구 수의 감소 (하기 실시예에 기술된 방법에 의해 측정)를 의미한다.
다르게 표시되지 않는 한, "할로겐" 및 "할로"라는 용어는 불소, 염소, 브롬 및 요오드를 포괄한다.
다르게 표시되지 않는 한, "헤테로알킬"이라는 용어는 그의 탄소 원자들 중 하나 이상이 헤테로원자 (예, N, O 또는 S)로 치환되어 있는 알킬 요소 (예, 선형, 분지형 또는 고리형)를 말한다.
다르게 표시되지 않는 한, "헤테로아릴"이라는 용어는 그의 탄소 원자들 중 하나 이상이 헤테로원자 (예, N, O 또는 S)로 치환되어 있는 아릴 요소를 의미한다. 예에는 아크리디닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조퓨라닐, 벤조이소티아졸릴, 벤조이속사졸릴, 벤조퀴나졸리닐, 벤조티아졸릴, 벤즈옥사졸릴, 퓨릴, 이미다졸릴, 인돌릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴, 옥사졸릴, 프탈라지닐, 피라지닐, 피라졸릴, 피리다지닐, 피리딜, 피리미디닐, 피리미딜, 피롤릴, 퀴나졸리닐, 퀴놀리닐, 테트라졸릴, 티아졸릴, 및 트리아지닐이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
다르게 표시되지 않는 한, "헤테로아릴알킬" 또는 "헤테로아릴-알킬"이라는 용어는 알킬 요소에 결합된 헤테로아릴 요소를 의미한다.
다르게 표시되지 않는 한, "헤테로싸이클"이라는 용어는 탄소, 수소 및 하나 이상의 헤테로원자 (예, N, O 또는 S)로 구성되는 방향족, 부분적 방향족 또는 비-방향족의 단일고리형 또는 다고리형 고리 또는 고리 시스템을 말한다. 헤테로싸이클은 서로 융합 또는 결합된 다중의 (즉, 2 이상의) 고리들을 포함할 수 있다. 헤테로싸이클에는 헤테로아릴이 포함된다. 예에는 벤조[1,3]디옥솔릴, 2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥시닐, 신놀리닐, 퓨라닐, 하이단토이닐, 모르폴리닐, 옥세타닐, 옥시라닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 피롤리디노닐, 피롤리디닐, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로피라닐, 테트라하이드로피리디닐, 테트라하이드로피리미디닐, 테트라하이드로티오페닐, 테트라하이드로티오피라닐 및 발레로락타밀이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
다르게 표시되지 않는 한, "헤테로싸이클알킬" 또는 "헤테로싸이클-알킬"이라는 용어는 알킬 요소에 결합된 헤테로싸이클 요소를 말한다.
다르게 표시되지 않는 한, "헤테로싸이클로알킬"이라는 용어는 비-방향족 헤테로싸이클을 말한다.
다르게 표시되지 않는 한, "헤테로싸이클로알킬알킬" 또는 "헤테로싸이클로알킬-알킬"이라는 용어는 알킬 요소에 결합된 헤테로싸이클로알킬 요소를 말한다.
다르게 표시되지 않는 한, "관리하다", "관리하는" 및 "관리"라는 용어는 이미 질병 또는 장애로 고통받은 바 있는 환자에서 해당 질병 또는 장애의 재발을 예방하는 것, 및/또는 질병 또는 장애로 고통받은 바 있는 환자가 경감된 상태로 유지되는 시간을 연장하는 것을 포괄한다. 이 용어는 질병 또는 장애의 시작, 진행 및/또는 기간을 조절하는 것, 또는 환자가 질병 또는 장애에 반응하는 양식을 변화시키는 것을 포함한다.
다르게 언급되지 않는 한, "약학적으로 허용가능한 염"이라는 용어는 무기 산 및 염기와 유기 산 및 염기를 포함하여 약학적으로 허용가능한 비-독성의 산 또는 염기로부터 제조되는 염을 말한다. 약학적으로 허용가능한 적합한 염기 부가염에는 알루미늄, 칼슘, 리튬, 마그네슘, 칼륨, 나트륨 및 아연으로부터 제조되는 금속염, 또는 라이신, N,N'-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글루민 (N-메틸글루카민) 및 프로카인으로부터 제조되는 유기 염이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 적합한 비-독성의 산에는 아세트산, 알긴산, 안트라닐산, 벤젠술폰산, 벤조산, 캄포르술폰산, 시트르산, 에텐술폰산, 포름산, 푸마르산, 푸로산, 갈락투론산, 글루콘산, 글루쿠론산, 글루탐산, 글리콜산, 하이드로브롬산, 염산, 이센티온산, 락트산, 말레산, 말산, 만델산, 메탄술폰산, 무크산, 질산, 파모산, 판토텐산, 페닐아세트산, 인산, 프로피온산, 살리실산, 스테아르산, 숙신산, 술파닐산, 황산, 타르타르산 및 p-톨루엔술폰산과 같은 무기 및 유기 산이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 구체적인 비-독성 산에는 염산, 하이드로브롬산, 인산, 황산 및 메탄술폰산이 포함된다. 따라서, 구체적인 염의 예에는 염산염 및 메실레이트염이 포함된다. 다른 것들은 업계에 잘 알려져 있다. 예컨대 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed., Mack Publishing, Easton PA: 1990)] 및 [Remington : The Science and Practice of Pharmacy (19th ed., Mack Publishing, Easton PA: 1995)]를 참조하라.
다르게 표시되지 안는 한, "예방하다", "예방하는" 및 "예방"이라는 용어는 환자가 특정 질병 또는 장애로 고통받는 것을 시작하기 전에 행해지는, 질병 또는 장애의 중증도를 억제 또는 감소시키는 활동을 의미한다. 다른 말로, 이 용어는 예방(prophylaxis)를 포괄한다.
다르게 표시되지 않는 한, 화합물의 "예방적 유효량"은 질병 또는 이상, 또는 질병 또는 이상과 관련된 하나 이상의 증상을 예방하기에, 또는 그의 재발을 예방하기에 충분한 양이다. 화합물의 예방적 유효량은 질병의 예방에 예방적 이익을 제공하는, 단독 또는 다른 제제와의 조합으로써의 치료제의 양을 의미한다. "예방적 유효량"이라는 용어는 전체적인 예방효과를 향상시기거나 다른 예방제의 예방 효능을 향상시키는 양을 포괄할 수 있다.
다르게 표시되지 않는 한, "S1P 농도 향상제"라는 용어는 약 10-배 이상의 SLEF를 가지는 화합물을 의미한다.
다르게 표시되지 않는 한, "S1P 농도 향상율" 또는 "SLEF"라는 용어는 단일 투여분의 화합물을 100 mg/kg으로 경구 투여함으로써 야기되는 생쥐 지라에서의 S1P의 증가 (하기 실시예에 기술된 방법에 의해 측정)를 의미한다.
다르게 표시되지 않는 한, "입체이성질 혼합물"이라는 용어는 라세미 혼합물은 물론 입체이성질체가 보강된 혼합물 (예, R/S = 30/70, 35/65, 40/60, 45/55, 55/45, 60/40, 65/35 및 70/30)을 포괄한다.
다르게 표시되지 않는 한, "입체이성질적으로 순수한"이라는 용어는 화합물의 한가지 입체이성질체만을 포함하며 그 화합물의 다른 입체이성질체는 실질적으로 없는 조성물을 의미한다. 예를 들어, 하나의 입체중심(stereocenter)을 가지는 화합물의 입체이성질적으로 순수한 조성물에는 그 화합물의 반대 입체이성질체가 실질적으로 없을 것이다. 2개의 입체중심을 가지는 화합물의 입체이성질적으로 순수한 조성물은 화합물의 다른 부분입체이성질체(diastereomer)가 실질적으로 없을 것이다. 일반적인 입체이성질적으로 순수한 화합물은 약 80 중량%를 초과하는 화합물의 한가지 입체이성질체와 약 20 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성질체, 약 90 중량%를 초과하는 화합물의 한가지 입체이성질체와 약 10 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성질체, 약 95 중량%를 초과하는 화합물의 한가지 입체이성질체와 약 5 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성질체, 약 97 중량%를 초과하는 화합물의 한가지 입체이성질체와 약 3 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성질체, 또는 약 99 중량%를 초과하는 화합물의 한가지 입체이성질체와 약 1 중량% 미만의 화합물의 다른 입체이성질체를 포함한다.
다르게 표시되지 않는 한, 화학적 구조 또는 요소를 기술하기 위하여 사용되는 경우 "치환된"이라는 용어는 그의 수소 원자들 중 하나 이상이, 그에 제한되는 것은 아니나, 알콜, 알데하이드, 알콕시, 알카노일옥시, 알콕시카르보닐, 알케닐, 알킬 (예, 메틸, 에틸, 프로필, t-부틸), 알키닐, 알킬카르보닐옥시 (-OC(O)알킬), 아미드 (-C(O)NH-알킬- 또는 -알킬NHC(O)알킬), 아미디닐 (-C(NH)NH-알킬 또는 -C(NR)NH2), 아민 (1차, 2차 및 3차 예컨대 알킬아미노, 아릴아미노, 아릴알킬아미노), 아로일, 아릴, 아릴옥시, 아조, 카르바모일 (-NHC(O)O-알킬- 또는 -OC(O)NH-알킬), 카르바밀 (예, CONH2는 물론 CONH-알킬, CONH-아릴 및 CONH-아릴알킬), 카르보닐, 카르복실, 카르복실산, 카르복실산 무수물, 카르복실산 염화물, 시아노, 에스테르, 에폭사이드, 에테르 (예, 메톡시, 에톡시), 구아니디노, 할로, 할로알킬 (예, -CCl3, -CF3, -C(CF3)3), 헤테로알킬, 헤미아세탈, 이민 (1차 및 2차), 이소시아네이트, 이소티오시아네이트, 케톤, 니트릴, 니트로, 옥소, 포스포디에스테르, 황화물, 술폰아미도 (예, SO2NH2), 술폰, 술포닐 (알킬술포닐, 아릴술포닐 및 아릴알킬술포닐 포함), 술폭사이드, 티올 (예, 술피드릴, 티오에테르) 및 요소 (-NHCONH-알킬-)와 같은 화학적 요소 또는 관능기로 치환된 그 구조 또는 요소의 유도체를 말한다.
다르게 표시되지 않는 한, "화합물의 치료적 유효량은 질병 또는 이상의 치료 또는 관리에서의 치료적 이익을 제공하기에, 또는 질병 또는 이상과 관련된 하나 이상의 증상을 지연 또는 최소화하기에 충분한 양이다. 화합물의 치료적 유효량은 질병 또는 이상의 치료 또는 관리에 치료적 이익을 제공하는 단독 또는 다른 요법과의 조합으로써의 치료제의 양을 의미한다. "치료적 유효량"이라는 용어는 전체적인 치료효과를 향상시키거나, 질병 또는 이상의 증상 또는 원인을 감소 또는 회피하거나, 또는 다른 치료제의 치료 효능을 향상시키는 양을 포괄할 수 있다.
다르게 표시되지 않는 한, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"라는 용어는 환자가 특정 질병 또는 장애로 고통받는 동안 행해지는, 질병 또는 장애의 중증도를 감소시키거나, 또는 질병 또는 장애의 진행을 지체시키거나 느리게 하는 활동을 의미한다.
다르게 표시되지 않는 한, "포함하다(include)"라는 용어는 "포함하나, 그에 제한되는 것은 아니다"와 동일한 의미를 가지며, "포함하다(includes)"라는 용어는 "포함하나, 그에 제한되는 것은 아니다"와 동일한 의미를 가진다. 이와 유사하게, "와 같은"이라는 용어는 "그에 제한되는 것은 아니나, ~와 같은"이라는 용어와 동일한 의미를 가진다.
다르게 표시되지 않는 한, 일련의 명사들의 바로 앞에 선행하는 하나 이상의 형용사는 명사들 각각에 적용되는 것으로 해석되어야 한다. 예를 들어, "임의로 치환된 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴"이라는 구는 "임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴"과 동일한 의미를 가진다.
여기에서 더 큰 화합물의 일부를 형성하는 화학적 요소는 그것이 단일 분자로서 존재하는 경우에 통상적으로 그에 부여되는 명칭, 또는 그의 라디칼에 통상적으로 부여되는 명칭을 사용하여 기술될 수 있다는 것을 주지해야 한다. 예를 들어, "피리딘" 및 "피리딜"이라는 용어는 다른 화학적 요소에 결합된 요소를 기술하는 데에 사용되는 경우 동일한 의미를 부여받는다. 따라서, "XOH, 여기서 X는 피리딜" 및 "XOH, 여기서 X는 피리딘"이라는 2개의 구는 동일한 의미를 부여받으며, 화합물 피리딘-2-올, 피리딘-3-올 및 피리딘-4-올을 포괄한다.
구조 또는 구조 일부의 입체화학이 예컨대 굵게 또는 대시 선으로 표시되지 않는 경우, 구조 또는 구조의 일부는 그의 모든 입체이성질체를 포함하는 것으로 해석되어야 한다는 것 역시 주지해야 한다. 또한, 충족되지 않은 원자가로 도면에 나타내어진 모든 원자는 원자가를 충족하기에 충분한 수소 원자와 결합하고 있는 것으로 가정된다. 또한, 하나의 대시 선에 평행한 하나의 두꺼운 선으로 묘사된 화학 결합은 원자가가 허용하는 경우 단일 및 이중 결합 모두 (예, 방향족)를 포괄한다.
5.2. 화합물
본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 및 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물 (예, 수화물)을 포함하며:
<화학식 I>
Figure 112008059928937-PCT00002
여기서: X는 O 또는 NR3이고; R1은 OR1A, NHOH, 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이며; R2는 OR2A, C(O)OR2A, 수소, 할로겐, 니트릴, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고; R3는 OR3A, N(R3A)2, NHC(O)R3A, NHSO2R3A, 또는 수소이며; R4는 OR4A, OC(O)R4A, 수소, 할로겐, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고; R5는 N(R5A)2, 수소, 하이드록시, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이며; R1A, R2A, R3A, R4A 및 R5A 각각은 개별적으로 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이다.
구체적인 화학식 I의 화합물은 X가 O이고; R1이 1 내지 4 탄소의 알킬, 페닐, 벤질 또는 페닐에틸이며; R2가 수소이고; R4와 R5 중 하나는 하이드록실이면; R4와 R5 중 다른 것은 1 내지 6 탄소의 알킬, 1 내지 6 탄소의 하이드록시알킬, 탄소 당 하나 이하의 하이드록실을 가지는 1 내지 6 탄소의 폴리하이드록시알킬, 탄소 당 하나 이하의 아세틸을 가지는 1 내지 6 탄소의 폴리아세틸알킬, 페닐, 벤질 또는 페닐에틸이 아닌 것이다.
특정 구현예에서, 화합물은 2-아세틸-4-테트라하이드록시부틸이미다졸, 1-(4-(1,1,2,2,4-펜타하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에탄온, 1-(2-아세틸-1H-이미다졸-4-일)부탄-1,1,2,2-테트라일 테트라아세테이트, 또는 1-(2-아세틸-1H-이미다졸-4-일)부탄-1,1,2,2,4-펜타일 펜타아세테이트가 아니다.
특정 구현예는 하기 화학식 II의 화합물, 및 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물을 포함하며:
Figure 112008059928937-PCT00003
여기서: X는 O 또는 NR3이고; R1은 OR1A, NHOH, 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이며; R2는 OR2A, C(O)OR2A, 수소, 할로겐, 니트릴, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고; R3는 OR3A, N(R3A)2, NHC(O)R3A, NHSO2R3A, 또는 수소이며; R6는 OR6A, OC(O)R6A, N(R6B)2, NHC(O)R6B, 수소 또는 할로겐이고; R7은 OR7A, OC(O)R7A, N(R7B)2, NHC(O)R7B, 수소 또는 할로겐이며; R8은 OR8A, OC(O)R8A, N(R8B)2, NHC(O)R8B, 수소 또는 할로겐이고; R9은 CH2OR9A, CH2OC(O)R9A, N(R9B)2, NHC(O)R9B, 수소 또는 할로겐이며; R1A, R2A, R3A, R6A, R7A, R8A 및 R9A 각각은 개별적으로 수소 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고; R6B, R7B, R8B 및 R9B 각각은 개별적으로 수소, 또는 임의로 하나 이상의 하이드록시 또는 할로겐 기로 치환된 알킬이다.
구체적인 화학식 II의 화합물은: 1) X가 O이고, R1이 1 내지 4 탄소의 알킬, 페닐, 벤질 또는 페닐에틸이며, R2가 수소이면, R6, R7, R8 및 R9 중 2 이상이 하이드록실 또는 아세테이트가 아니거나; 2) X가 O이고, R1이 메틸이며, R2가 수소이고, R6 및 R7이 모두 하이드록실이며, R8과 R9 중 하나는 수소이면, 다른 것은 NHC(O)R9B가 아니거나; 3) X가 O이고, R1이 OR1A이며, R1A는 수소 또는 저급 알킬이고, R2가 수소이면, R6, R7, R8 및 R9는 모두는 아닌 하나 이상이 하이드록실 또는 아세테이트인 것이다.
본 발명의 구체적인 화합물은 하기 화학식 IIa의 것이다:
Figure 112008059928937-PCT00004
다른 것으로는 하기 화학식 III의 것이 있으며:
Figure 112008059928937-PCT00005
여기서: Z는 임의로 치환된 알킬이고; R1은 OR1A, NHOH, 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이며; R2는 OR2A, C(O)OR2A, 수소, 할로겐, 니트릴, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고; R3는 OR3A, N(R3A)2, NHC(O)R3A, NHSO2R3A, 또는 수소이며; R1A, R2A 및 R3A 각각은 개별적으로 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이다.
본 발명의 또 다른 구현예는 하기 화학식 IV의 화합물, 및 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물을 포함하며:
Figure 112008059928937-PCT00006
여기서, R1은 OR1A, NHOH, 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고; R3는 OR3A, N(R3A)2, NHC(O)R3A, NHSO2R3A, 또는 수소이며; R6는 OR6A, OC(O)R6A, N(R6B)2, NHC(O)R6B, 수소 또는 할로겐이고; R7은 OR7A, OC(O)R7A, N(R7B)2, NHC(O)R7B, 수소 또는 할로겐이며; R8은 OR8A, OC(O)R8A, N(R8B)2, NHC(O)R8B, 수소 또는 할로겐이고; R9은 CH2OR9A, CH2OC(O)R9A, N(R9B)2, NHC(O)R9B, 수소 또는 할로겐이며; R1A, R3A, R6A, R7A, R8A 및 R9A 각각은 개별적으로 수소 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이다.
구체적인 화합물은 하기 화학식 IVa의 것이다:
Figure 112008059928937-PCT00007
그 아래에 기술된 요소들을 함유하는, 상기에 나타낸 각각의 화학식에 있어서, 본 발명의 소정 구현예들은 다음과 같다:
일부에서, X는 O이다. 다른 것에서, X는 NR3이다.
일부에서, R1은 수소이다. 다른 것에서, R1은 임의로 치환된 저급 알킬이다. 다른 것에서, R1은 NHOH이다. 다른 것에서, R1은 OR1A이며, R1A는 예컨대 수소 또는 임의로 치환된 저급 알킬이다.
일부에서, R2는 수소이다. 다른 것에서, R2는 수소가 아니다. 다른 것에서, R2는 니트릴이다. 다른 것에서, R2는 임의로 치환된 저급 알킬이다. 다른 것에서, R2는 OR2A이다. 다른 것에서, R2는 C(O)OR2A이다. 일부에서, R2A는 수소 또는 임의로 치환된 저급 알킬이다.
일부에서, R3는 OR3A이다. 다른 것에서, R3는 N(R3A)2 또는 NHC(O)R3A이다. 다른 것에서, R3는 NHSO2R3A이다. 일부에서, R3A는 수소 또는 임의로 치환된 저급 알 킬이다. 다른 것에서, R3A는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로싸이클이다.
일부에서, R4는 OR4A이다. 다른 것에서, R4는 할로겐이다.
일부에서, R5는 N(R5A)2이다. 다른 것에서, R5는 수소이다. 다른 것에서, R5는 하이드록실이다. 다른 것에서, R5는 헤테로알킬 (예, 알콕시)이다. 다른 것에서, R5는 임의로 치환된 알킬이다. 다른 것에서, R5는 임의로 치환된 아릴이다.
일부에서, R6, R7, R8 및 R9 중 하나 이상은 하이드록시 또는 할로겐이다. 일부에서, R6, R7, R8 및 R9 모두는 하이드록실 또는 아세테이트이다.
일부에서, Z는 임의로 하나 이상의 하이드록실, 아세테이트 또는 할로겐 요소로 치환된 알킬이다.
본 발명의 화합물은 하나 이상의 입체중심을 포함할 수 있으며, 거울상이성질체의 라세미 혼합물 또는 부분입체이성질체의 혼합물로서 존재할 수 있다. 본 발명은 해당 화합물의 입체이성질적으로 순수한 형태는 물론 그러한 형태들의 혼합물도 포함한다. 입체이성질체는 키랄 컬럼 또는 키랄 분리제와 같은 표준 기술을 사용하여 비대칭적으로 합성 또는 분리될 수 있다. 예컨대 문헌 [Jacques, J., et al., Enantiomers , Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981)]; [Wilen, S. H., et al, Tetrahedron 33:2725 (1977)]; [Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw Hill, NY, 1962)]; 및 [Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions, p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972)]를 참조하라.
본 발명은 또한, 여기에서 개시되는 화합물들의 입체이성질 혼합물을 포함한다. 또한, 혼합물 형태 또는 순수한 형태 또는 실질적으로 순수한 형태 중 어느 것의, 시스 (Z) 및 트랜스 (E) 알켄 이성질체 그리고 신 및 안티 옥심 이성질체와 같은, 여기에서 개시되는 화합물의 배위 이성질체(configurational isomer)도 포함한다.
바람직한 본 발명의 화합물은 혈중 림프구 감소제이다. 어떤 화합물들은 실시예에서 기술된 방법을 사용하여 측정하였을 때 혈중 림프구의 양을 약 20, 50, 75, 100, 150 또는 200 %가 넘게 억제한다. 이와 관련하여, THI가 생쥐에서 혈중 림프구를 감소시킬 수 있는 반면, 1-(4-메틸-5-((1S,2R,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)티아졸-2-일)에탄온과 같은 많은 THI의 유사체 및 유도체들은, 반대되는 보고도 있으나, 혈중 림프구에 효과가 적거나 없는 것으로 밝혀졌다. WO 97/46543호를 참조하라.
이론에 의해 제한받고자 하는 것은 아니나, 본 발명의 화합물은 S1P의 대사 경로에 영향을 미침으로써 생체 내에서 직접적으로 또는 간접적으로 S1P 리아제를 억제할 수 있는 것으로 여겨진다. 구체적인 화합물은 S1P 농도 향상제이다. 어떤 화합물들은 하기 실시예에서 기술된 방법을 사용하여 측정하였을 때 S1P의 양을 약 10, 15, 20, 25, 또는 30-배 넘게 증가시킨다.
본 발명의 화합물들은 업계에 알려져 있는 방법에 의해 (예, 문헌 [Pyne, S. G., ACGC Chem . Res . Comm . 11:108-112 (2000)]; [Halweg, KM. and Buchi, G., J.Org.Chem. 50:1134-1136 (1985)]에 기술된 접근법에 변화를 주거나 부가함으로써) 제조될 수 있다.
화합물들은 또한, 하기에 개시되는 방법 및 그의 변형물들에 의해서도 제조될 수 있으며, 이는 업계 일반의 숙련자에게 있어 분명할 것이다.
5.3. 사용 방법
본 발명은 본 발명 화합물 (즉, 여기에서 개시되는 화합물)의 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 환자 (예, 생쥐, 쥐, 개, 고양이 또는 인간)에서의 S1P 양의 조절 (예, 증가) 방법을 포함한다.
다른 구현예는 본 발명 화합물의 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자 혈액에서의 T-세포 수의 감소 방법을 포함한다.
또 다른 구현예는 본 발명 화합물의 치료적 또는 예방적 유효량을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, S1P 농도에 의해 영향받는 (또는 그에 의해 영향받는 증상을 가지는) 질병의 치료, 관리 또는 예방 방법을 포함한다.
또 다른 구현예는 본 발명 화합물의 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서의 면역 반응의 억제 방법을 포함한다.
또 다른 구현예는 본 발명 화합물의 치료적 또는 예방적 유효량을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 자가면역 또는 염증성 질병 또는 장애의 치료, 관리 또는 예방 방법을 포함한다. 질병 및 장애의 예에는 강직 척추염, 천식 (예, 기관지 천식), 아토피성 피부염, 베체트병, 이식-대-숙주병(graft-vs-host disease), 가와사키 증후군, 홍반 루푸스, 다발 경화증, 중증 근육무력증, 화 분증, 건선, 건선 관절염, 류마티스 관절염, 공피증, 이식 거부 (예, 장기, 세포 또는 골수), 유형 1 당뇨병, 및 포도막염이 포함된다.
추가적인 질병 및 장애에는 애디슨병, 항-인지질 증후군, 자가면역 위축위염, 자가면역 무위산증, 만성소화장애증(Celiac Disease), 크론병, 쿠싱 증후군, 피부근육염, 굿파스처 증후군, 그레이브병, 하시모토 갑상선염, 특발성 부신 위축증, 특발성 저혈소판증, 람버트-이튼 증후군, 유사천포창, 보통 천포창, 악성 빈혈, 결절성 다발동맥염, 원발성 쓸개관 간경화, 원발성 경화 쓸개관염, 레이노병(Raynauds), 라이터 증후군, 재발성 다발연골염, 쉬미트 증후군, 쇼그렌 증후군, 교감성 안염, 타카야스 동맥염, 측두 동맥염, 갑상샘중독증, 궤양 대장염, 및 베게너 육아종증이 포함된다.
화합물의 양, 투여 경로 및 투여 일정은 치료, 예방 또는 관리되는 구체적인 지침 및 환자의 연령, 성 및 상태와 같은 요인들에 따라 달라질 것이다. 그러한 요인들이 미치는 영향은 업계에 잘 알려져 있어서, 통상의 실험에 의해 조정될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 화합물은 약 0.5, 1, 2.5 또는 5 mpk의 양으로 인간 환자에게 투여된다.
5.4. 약학적 제제
본 발명은 본 발명의 화합물 1종 이상을 포함하는 약학적 조성물을 포함한다. 소정의 약학적 조성물은 환자에 대한 경구, 점막 (예, 비내, 설하, 질내, 협측 또는 직장내), 비경구 (예, 피하, 정맥내, 일시 주사, 근육내 또는 동맥내), 또는 경피 투여에 적합한 단일 단위의 투여 형태이다.
투여 형태의 예에는 정제; 캐플릿; 캡슐, 예컨대 연질 탄성 젤라틴 캡슐; 카셰; 트로키; 로젠지; 현탁액; 좌약; 연고; 습포제 (파프제); 페이스트; 분말; 드레싱; 크림; 고약; 용액; 패치; 에어로졸 (예, 비내 분무 또는 흡입기); 젤; 현탁액 (예, 수성 또는 비-수성 액체 현탁액, 수-중-유 에멀션, 또는 유-중-수 액체 에멀션), 용액 및 엘릭시르를 포함하여 환자에 대한 경구 또는 점막 투여에 적합한 액체 투여 형태; 환자에 대한 비경구 투여에 적합한 액체 투여 형태; 및 재구성되어 환자에 대한 비경구 투여에 적합한 액체 투여 형태를 제공할 수 있는 살균 고체 (예, 결정질 또는 비정질 고체)가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
제제는 투여 양식에 적합해야 한다. 예를 들어, 경구 투여는 위장관 내에서의 분해로부터 본 발명의 화합물을 보호하기 위한 장용 코팅을 필요로 한다. 이와 유사하게, 제제는 작용 부위에 대한 활성 성분(들)의 방출을 촉진하는 성분을 포함할 수 있다. 예를 들면, 화합물은 분해 효소로부터 그것을 보호하고, 순환계에서의 수송을 촉진하며, 세포막을 통한 세포내 부위로의 방출을 수행하기 위하여, 리포좀 제형으로 투여될 수 있다.
이와 유사하게, 용해성이 저조한 화합물은 가용화제, 에멀션화제 및 계면활성제, 예컨대 그에 제한되는 것은 아니나, 싸이클로덱스트린 (예, α-싸이클로덱스트린, β-싸이클로덱스트린, 캅티솔(Captisol)® 및 엔캅신(Encapsin)™ (예컨대 문헌 [Davis and Brewster, 2004, Nat. Rev . Drug Disc . 3:1023-1034]를 참조하라)), 라브라솔(Labrasol)®, 라브라필(Labrafil)®, 라브라팩(Labrafac)®, 크레마포르, 및 비-수성 용매, 예컨대 그에 제한되는 것은 아니나, 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디메틸 포름아미드, 디메틸 술폭사이드 (DMSO), 생체적합 오일 (예, 면실, 땅콩, 옥수수, 배아, 올리브, 피마자, 및 참깨 오일), 글리세롤, 테트라하이드로푸르퓨릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 이들의 혼합물 (예, DMSO:옥수수오일)의 도움으로 액체 투여 형태 (및 재구성에 적합한 투여 형태)에 혼입될 수 있다.
용해성이 저조한 화합물은 또한 업계에 알려져 있는 다른 기술을 사용하여 현탁액으로 혼입될 수도 있다. 예를 들어, 나노입자의 화합물이 액체 중에 현탁됨으로써 나노현탁액을 제공할 수 있다 (예컨대 문헌 [Rabinow, 2004, Nature Rev . Drug Disc . 3:785-796]을 참조하라). 여기에서 기술되는 나노입자 형태의 화합물은 그들 각각의 전체 내용이 여기에 참조로써 개재되는 U.S. 특허 공개 제2004-0164194호, 2004-0195413호, 2004-0251332호, 2005-0042177 Al호, 2005-0031691 Al호, 및 U.S. 특허 제5,145,684호, 5,510,118호, 5,518,187호, 5,534,270호, 5,543,133호, 5,662,883호, 5,665,331호, 5,718,388호, 5,718,919호, 5,834,025호, 5,862,999호, 6,431,478호, 6,742,734호, 6,745,962호에 기술되어 있는 방법들에 의해 제조될 수 있다. 일 구현예에서, 나노입자 형태는 약 2000 nm 미만, 약 1000 nm 미만, 또는 약 500 nm 미만의 평균 입자 크기를 가지는 입자들을 포함한다.
투여 형태의 조성, 형상 및 유형은 그의 용도에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 질병의 단기 치료에 사용되는 투여 형태는 동일한 질병의 장기 치료에 사용 되는 투여 형태보다 더 많은 양의 그것이 포함하는 1종 이상 활성 성분을 함유할 수 있다. 유사하게, 비경구 투여 형태는 동일한 질병 치료에 사용되는 경구 투여 형태보다 더 적은 양의 그것이 포함하는 1종 이상 활성 성분을 함유할 수 있다. 업계 숙련자라면, 본 발명에 포함되는 구체적인 투여 형태가 서로 달라지게 되는 이러한 방식 및 다른 방식들이 용이하게 떠오를 것이다. 예컨대 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing, Easton PA (1990)]을 참조하라.
5.4.1. 경구 투여 형태
경구 투여에 적합한 본 발명의 약학적 조성물은 개별적 투여 형태, 예컨대 그에 제한되는 것은 아니나, 정제 (예, 씹어먹는 정제), 캐플릿, 캡슐 및 액체 (예, 향미부가 시럽)으로서 제공될 수 있다. 이와 같은 투여 형태는 예정된 양의 활성 성분을 함유하며, 업계 숙련자에게 잘 알려져 있는 제약학적 방법에 의해 제조될 수 있다. 예컨대 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing, Easton PA (1990)]을 참조하라.
전형적인 경구 투여 형태는 통상적인 약학적 컴파운딩 기술에 따라 활성 성분(들)을 1종 이상의 부형제와 친밀성 혼합물로 조합함으로써 제조된다. 부형제는 투여에 요구되는 조제약의 형태에 따라 매우 다양한 형태를 취할 수 있다.
그 투여 상의 용이성으로 인하여, 정제와 캡슐이 가장 유리한 경구 투여 단위 형태를 대표한다. 필요에 따라, 정제는 표준의 수성 또는 비수성 기술에 의해 코팅될 수 있다. 그러한 투여 형태는 통상적인 제약학적 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 약학적 조성물 및 투여 형태는 활성 성분을 액체 담체, 미분된 고체 담체 또는 이들 모두와 균일하고 친밀하게 혼합한 다음, 필요에 따라 생성물을 원하는 외양으로 성형함으로써 제조된다. 고체 투여 형태에서는 신속한 용해를 촉진하기 위하여 붕해제가 혼입될 수 있다. 투여 형태 (예, 정제)의 제조를 촉진하기 위하여 윤활제가 혼입될 수도 있다.
5.4.2. 비경구 투여 형태
비경구 투여 형태는, 그에 제한되는 것은 아니나, 피하, 정맥내 (일시 주사 포함), 근육내 및 동맥내를 포함한 다양한 경로에 의해 환자에게 투여될 수 있다. 그 투여가 일반적으로 오염물질에 대한 환자의 선천적 방어기작을 우회하기 때문에, 비경구 투여 형태는 특별히 무균상태이거나 또는 환자에게 투여되기 전에 살균될 수 있다. 비경구 투여 형태의 예에는 주입용 용액, 주입을 위하여 약학적으로 허용가능한 비히클에 용해 또는 현탁될 준비가 되어 있는 건조 생성물, 주입용 현탁액, 및 에멀션이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 비경구 투여 형태를 제공하기 위하여 사용될 수 있는 적합한 비히클은 업계 숙련자에게 잘 알려져 있다. 예에는 하기가 포함되나, 그에 제한되는 것은 아니다: 미국약전 주입수; 수성 비히클, 예컨대 그에 제한되는 것은 아니나, 염화 나트륨 주입액, 링커 주입액, 덱스트로스 주입액, 덱스트로스 및 염화 나트륨 주입액 및 락테이트 첨가 링거 주입액; 수-혼화성 비히클, 예컨대 그에 제한되는 것은 아니나, 에틸 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜; 및 비-수성 비히클, 예컨대 그에 제한되는 것은 아니나, 옥수수 오일, 면실 오일, 땅콩 오일, 참깨 오일, 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트 및 벤질 벤조에이트.
5.4.3. 경피 , 국소 및 점막 투여 형태
경피, 국소 및 점막 투여 형태에는 안과용 용액, 분무액, 에어로졸, 크림, 로션, 연고, 젤, 용액, 에멀션, 현탁액, 또는 업계 숙련자에게 알려져 있는 다른 형태가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 예컨대 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th and 18th eds., Mack Publishing, Easton PA (1980 & 1990)]; 및 [Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4th ed., Lea & Febiger, Philadelphia (1985)]을 참조하라. 경피 투여 형태에는 "저장고 유형" 또는 "매트릭스 유형"의 패치가 포함되는데, 이것은 피부에 적용되어 특정 시간 기간 동안 착용됨으로써 원하는 양의 활성 성분이 침투되도록 할 수 있다.
경피, 국소 및 점막 투여 형태를 제공하기 위하여 사용될 수 있는 적합한 부형제 (예, 담체 및 희석제) 및 다른 물질들은 약학 업계 숙련자에게 잘 알려져 있으며, 주어진 약학적 조성물 또는 투여 형태가 적용될 구체적인 조직에 따라 달라진다.
처리될 구체적인 조직에 따라, 본 발명의 활성 성분을 사용한 치료 전에, 그와 함께 또는 그에 이어서 추가적인 성분들이 사용될 수 있다. 예를 들어, 활성 성분을 조직에 방출하는 것을 돕기 위하여 침투 촉진제가 사용될 수 있다.
약학적 조성물 또는 투여 형태의, 또는 약학적 조성물 또는 투여 형태가 적용되는 조직의 pH는 1종 이상 활성 성분의 방출을 향상시키기 위하여 조정될 수도 있다. 이와 유사하게, 용매 담체의 극성, 그의 이온 강도, 또는 장성도 방출이 향 상되도록 조정될 수 있다. 1종 이상 활성 성분의 친수성 또는 친지질성을 방출이 향상되도록 유리하게 바꾸기 위하여, 스테아레이트와 같은 화합물이 약학적 조성물 또는 투여 형태에 첨가될 수도 있다. 이와 관련하여, 스테아레이트는 제제화를 위한 지질 비히클로서, 에멀션화제 또는 계면활성제로서, 그리고 방출-촉진 또는 침투-촉진제로서 작용할 수 있다. 생성되는 조성물의 특성을 추가적으로 조정하기 위하여, 활성 성분의 다른 염, 수화물 또는 용매화물이 사용될 수 있다.
하기의 실시예로써 본 발명의 양태가 이해될 수 있을 것이나, 이것이 그 영역을 제한하는 것은 아니다.
6.1. S1P 리아제 유전자-파괴 생쥐
유전자 트래핑(gene trapping)은 리포터 또는 선택가능한 마커 유전자를 코딩하는 DNA 단편을 돌연변이원으로서 사용하는 무작위 삽입 돌연변이유발 방법이다. 세포 스플라이싱 기구가 벡터가 코딩된 엑손을 세포 mRNA로 스플라이싱하게 하는 방식으로 인트론 또는 엑손에 통합되도록 유전자 트랩 벡터를 설계하였다. 유전자 트랩 벡터는 일반적으로 강한 스플라이스 수용체 서열이 선행하고 프로모터는 선행하지 않는 선택가능한 마커 서열을 포함한다. 따라서, 그러한 벡터가 유전자에 통합되는 경우, 세포 스플라이싱 기구는 트래핑된 유전자로부터의 엑손을 선택가능 마커 서열의 5' 말단 상으로 스플라이싱한다. 일반적으로, 그러한 선택가능 마커 유전자는 유전자를 코딩하는 벡터가 인트론에 통합된 경우에만 발현될 수 있다. 생성되는 유전자 트랩 작용은 이후에 선택 배양에서 생존할 수 있는 세포를 선택함으로써 식별된다.
유전적으로 조작된 벡터 서열의 일부 이상을 S1P 리아제 유전자로 삽입하는 것을 포함하는 방법에 의해 배아 줄기 세포 (유도 뮤린 균주 A129)를 돌연변이시켰다. 다음에, 돌연변이된 배아 줄기 세포를 포배(blastocyst)에 미세주입하고, 이어서 이것을 가임신 암컷 숙주에 도입한 다음 기존의 방법을 사용하여 출산예정일까지 유지하였다. 이 경우, 바이러스는 엑손 1과 2 사이에 삽입됨으로써, S1P 리아제 유전자를 파괴하였다. 이후, 생성되는 키메라형 동물을 발육시켜 S1P 리아제 유전자에 조작된 돌연변이를 포함하는 대립유전자의 생식선 전이(germline transmission)가 가능한 자손을 생산하였다.
이미 파괴된 유전자를 가지고 있을 수 있는 세포, 특히 ES 세포에서 유전자를 파괴하는 데에 유용한 기술들은 그 각각이 전체적으로 여기에 참조로써 개재되는 U.S. 특허 제6,136,566호; 6,139,833호 및 6,207,371호와 U.S. 특허 출원 제08/728,963호에 개시되어 있다.
6.2. S1P 리아제 유전자 파괴의 혈액학적 효과
후안와 출혈에 의해 전혈을 수집하여 EDTA를 포함하는 모세관 혈액 수지 튜브에 넣었다. 셀-딘(Cell-Dyn) 3500R 분석기 (애보트 다이아그노틱스(Abbott Diagnostics) 사)를 사용하여 혈액을 분석하였다. 분석기는 5-부의 백혈구 (WBC) 미분 감별(differential identification)을 위한 기초를 제공하는 이중의 기술을 사용한다. 다각도 편광 산란 분리(Multi-Angle Polarized Scatter Separation) (M.A.P.S.S.)는 1차적인 백혈구 계수 및 미분 정보를 제공하는 반면, 임피던스는 취약 림프구 및 저장성 내성인 적혈구의 존재에 대한 추가적인 정보를 제공한다.
연동 펌프를 사용하여 대략 135 ㎕의 전혈을 분석기로 흡인하였다. 셀-딘 3500R 시스템 (일리노이 소재의 애보트 사)에 의한 4종의 개별적인 측정 기술을 사용하여 혈액학적 파라미터들을 수득하였다. 광학 유로(optical flow channel)에서 WBC 광학 계수 (WOC) 및 WBC 미분 데이터를 측정함으로써, 5부 WBC 미분을 위한 WBC 하위군 (중성구, 림프구, 단핵구, 호산구, 호염기구)의 감별을 수행하였다. 하나의 전기 임피던스로(electrical impedance channel)에서 WBC 임피던스 계수 (WIC)를 측정하였다. 제2 전기 임피던스로에서 RBC 및 혈소판 데이터를 측정하였다. 분광광도로에서 헤모글로빈을 측정하였다. 샘플을 흡인, 희석, 혼합하고, 각 기기 주기 동안 각 파라미터에 대한 측정치를 수득하였다. 수득된 최종 혈액학적 분석 파라미터들은 백혈구 계수, 중성구, 림프구, 단핵구, 호산구, 호염기구, 적혈구, 헤모글로빈, 적혈구용적율, 혈소판, 적혈구 분포 폭, 평균 적혈구 용적 및 평균 혈소판 용적이었다.
혈액 샘플은 총 16마리의 생쥐로부터 수득하였다. 혈액 샘플의 분석 및 비교는 7마리의 야생-형 생쥐, 6마리의 이형접합 생쥐 및 3마리의 동형접합 생쥐에서 수행되었다. 평균 적혈구 (RBC) 계수, 헤모글로빈 농도, 평균 적혈구 용적, 평균 적혈구 헤모글로빈, 평균 적혈구 헤모글로빈 농도, 혈소판 계수 또는 평균 혈소판 용적에 있어서, 서로 다른 군의 생쥐들 간의 유의성 있는 유전형 관련 차이는 없었다. 적혈구용적율과 적혈구 분포 폭에는 차이가 있었다. 평균 적혈구용적율은 동형접합 (-/-) 생쥐에서 37 ± 2.56 %이었으며, 이형접합 (+/-) 생쥐에서 40.9 ± 4 %, 야생-형 (+/+) 생쥐에서 44.7 ± 2.7 %이었다. 적혈구 분포 폭은 동형접합 (-/-) 생쥐에서 25.2 ± 4.2 %이었으며, 이형접합 (+/-) 생쥐에서 17.6 ± 1.9 %, 야생-형 (+/+) 생쥐에서 17.2 ± 2 %이었다.
유사하게, S1P 리아제 결핍 생쥐는 이형접합 또는 야생-형 생쥐에 비해 총 백혈구 계수에 있어서 유의성 있는 차이가 없었다. 동형접합 (-/-) 생쥐는 7200 ± 700 세포/μl의 총 백혈구 계수를 가지고 있었다. 이형접합 (+/-) 생쥐는 6200 ± 1800 세포/μl의 총 백혈구 계수를 가지고 있었으며, 야생-형 (+/+) 생쥐는 7200 ± 2600 세포/μl의 총 백혈구 계수를 가지고 있었다.
S1P 리아제 파괴에 있어서 동형접합인 생쥐에서, 림프구 계수는 감소한 반면, 중성구, 단핵구, 호산구 및 호염기구의 수는 증가하였다. S1P 리아제 유전자의 파괴에 있어서 동형접합 (-/-)인 생쥐의 혈액 림프구 계수는 크게 감소하였다. 6126 ± 2151 세포/μl이었던 야생-형 (+/+) 생쥐에서의 평균 림프구 계수와는 반대로, 동형접합 (-/-) 생쥐의 평균 림프구 계수는 847 ± 139 세포/μl이었으며, 이형접합 (+/-) 생쥐에서의 평균 림프구 계수는 4582 ± 2364 세포/μl이었다.
이와 달리, 동형접합 (-/-) 생쥐의 평균 중성구 계수는 5020 ± 612 세포/μl이었던 반면, 이형접합 (+/-) 생쥐에서의 평균 중성구 계수는 1380 ± 1140 세포/μl이었으며, 야생-형 (+/+) 생쥐는 겨우 886 ± 479 세포/μl의 평균 중성구 계수를 가지고 있었다. 유사하게, 동형접합 (-/-) 생쥐의 평균 단핵구 계수는 950 ± 218 세포/μl이었던 반면, 이형접합 (+/-) 생쥐에서의 평균 단핵구 계수는 250 ± 108 세포/μl이었으며, 야생-형 (+/+) 생쥐에서의 평균 단핵구 계수는 겨우 146 ± 92 세포/μl이었다. 호산구도 이와 마찬가지여서, 동형접합 (-/-) 생쥐에서의 평균 호산구 계수는 247 ± 297 세포/μl이었던 반면, 이형접합 (+/-) 생쥐에서의 평균 호산구 계수는 8 ± 8 세포/μl이었으며, 야생-형 (+/+) 생쥐에서의 평균 호산구 계수는 겨우 14 ± 21 세포/μl이었다.
호염기구에서도 동일하였다. 동형접합 (-/-) 생쥐의 평균 호염기구 계수는 130 ± 90 세포/μl이었으며, 이형접합 (+/-) 생쥐에서의 평균 호염기구 계수는 7 ± 5 세포/μl이었고, 야생-형 (+/+) 생쥐에서의 평균 호염기구 계수는 겨우 16 ± 11 세포/μl이었다.
유사하게, 동형접합 (-/-) 생쥐의 평균 단핵구 계수는 950 ± 218 세포/μl이었던 반면, 이형접합 (+/-) 생쥐에서의 평균 단핵구 계수는 250 ± 108 세포/μl이었으며, 야생-형 (+/+) 생쥐에서의 평균 단핵구 계수는 겨우 146 ± 92 세포/μl이었다. 호산구도 이와 마찬가지여서, 동형접합 (-/-) 생쥐에서의 평균 호산구 계수는 247 ± 297 세포/μl이었던 반면, 이형접합 (+/-) 생쥐에서의 평균 호산구 계수는 8 ± 8 세포/μl이었으며, 야생-형 (+/+) 생쥐에서의 평균 호산구 계수는 겨우 14 ± 21 세포/μl이었다.
6.3. (Z)-1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일)- 에 탄온 옥심의 합성
Figure 112008059928937-PCT00008
1-[4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시-부틸)-1H-이미다졸-2-일]-에탄온 (문헌 [Halweg, K.M. and Buchi, G., J. Org . Chem . 50:1134-1136 (1985)]에 따라 제조된 THI) (350 mg, 1.52 mmol)을 물 (10 ml)에 현탁시켰다. 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (126.8 mg, 1.82 mmol, 1.2 당량) 및 나트륨 아세테이트 (247.3 mg, 3.04 mmol. 2 당량)를 첨가하고, 현탁액을 50 ℃에서 교반하였다. 대략 4시간 후 반응 혼합물이 투명해졌다. 50 ℃에서 16시간 동안 교반을 계속하였다. LCMS 분석이 생성물의 형성 및 개시 물질의 부재를 표시하였다. 실온이 될 때까지 반응 혼합물을 방치하고, 미세 다공성 필터로 통과시켰다. 이 용액을 직접 생성물을 정제하는 데에 사용하였으며, 하기와 같은 정제용 HPLC를 사용하였다: 아틀란티스(Atlantis) HILIC 실리카 컬럼 30 × 100 mm; 아세토니트릴 중 2 % - 21 %의 물에서 6분 동안; 45 ml/분; 254 nm에서 검출. 생성물 분획을 수집하여 감압 하에서 아세토니트릴을 증발시켰다. 수용액을 동결건조하여 생성물인 대략 3:1 안티:신 이성질체의 혼합물을 백색의 고체로서 산출하였다: 284 mg (77 %).
LCMS: 선파이어(Sunfire) C-18 컬럼, 4.6 × 50 mm; 수 (0.1 % TFA) 중 0 - 17 % MeOH (0.1 % TFA)에서 5분 동안; 유량 = 3 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 0.56분 (신 이성질체, 246.0 (M+l)) 및 0.69분 (안티 이성질체, 246.0 (M+l)). 1H NMR (D2O 및 DCl) δ 2.15 및 2.22 (단일, 3H), 3.5 - 3.72 (m, 4H), 4.76 (br, OH 양성자 및 H2O), 4.95 및 4.97 (단일, 1H), 7.17 및 7.25 (단일, IH). 13C NMR (D2O 및 DCl) δ 10.80, 16.76, 63.06, 64.59, 64.75, 70.86, 72.75, 72.85, 117.22, 117.64, 135.32, 138.39, 141.35, 144.12.
6.4. (E)-1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일)- 에탄온 옥심의 합성
이 화합물은 하기에 나타낸 바와 같은 2개의 단계로 제조되었다.
Figure 112008059928937-PCT00009
먼저, THI (21.20 mmol, 4.88 g)가 충전된 플라스크에 물 (25 ml) 및 1 N 수성 HCl (21.2 ml, 21.2 mmol)을 첨가하였다. 모든 고체가 용해된 후, 디옥산 (55 ml) 중 트리틸 하이드록실아민 (25.44 mmol, 7.00 g) 용액을 첨가하고, 50 ℃에서 4시간 동안 반응을 유지하였다. 완료 후, 반응상(reaction)을 실온으로 냉각하고, 1 N 수성 NaOH를 첨가함으로써 용액을 pH = 7로 조정하였다. 다음에, 중화된 용액을 플라스틱 매스(mass)로 농축하고, 이것을 실리카 겔 [DCM 중 10% MeOH/1% NH4OH (수 중 5 중량% 용액)] 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하여 트리틸-에테르를 투명 플라스틱으로서 제공하였다. 헥산을 사용한 플라스틱 매스의 처리 및 농축으로 백색의 발포체를 제공하고, 이것을 진공 하에서 플래키색(flakey)의 고체로 건조할 수 있었다 (10.00 g, 97 % 수율).
두번째로, 강하게 교반하면서 디옥산 (90 ml) 중 트리틸 옥심에테르 (4.8 g, 10 mmol)의 실온 용액에 디옥산 중 HCl 용액 (4 M, 60 ml)을 첨가하였다. 수분 후, 백색의 침전물이 관찰되었으며, 총 30분 동안 교반을 계속한 후, 프릿화된 유리 필터 상에서 여과하고, 케이크를 디옥산과 에테르로 세정하였다. 케이크를 물 (200 ml)에 용해시키고, 5분 동안 초음파처리한 다음, 0 ℃로 냉각하여 셀라이트 (5 g)로 처리하고, 프릿화된 유리 필터 상체서 여과하였다. 수용액을 건조상태로 농축한 다음, 메탄올 (30 ml)/디에틸 에테르 (60 ml)로 단리하여 분석적으로 순수한 백색의 분말로서 E-옥심을 제공하였다 (3.8 g, 80 % 수율).
6.5. (Z)-1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일) 에탄 온 O- 메틸 옥심의 합성
Figure 112008059928937-PCT00010
하이드록실아민 하이드로클로라이드 대신 메톡실아민 하이드로클로라이드를 사용하는 것에 의해, 상기 실시예 6.3에 기술된 바와 같이 표제 화합물을 74 %의 수율로 제조하였다. 생성물은 백색의 푹신한 고체이었다.
LCMS: 선파이어 C-18 컬럼, 4.6 × 50 mm; 수 (0.1 % TFA) 중 0 - 17 % MeOH (0.1 % TFA)에서 5분 동안; 유량 = 3 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 1.59분 (신 이성질체, 260.1 (M+l)) 및 1.73분 (안티 이성질체, 260.1 (M+l)). 1H NMR (D2O) δ 2.18 및 2.22 (단일, 3H), 3.54 - 3.60 (m, IH), 3.66 - 3.79 (m, 3H), 3.94 및 3.95 (단일, 3H), 4.76 (br, OH 양성자 및 H2O), 4.93 및 4.97 (단일, IH), 7.17 및 7.25 (단일, IH). 13C NMR (D2O) δ 11.55, 17.56, 62.32, 62.38, 62.99, 63.07, 67.09, 71.54, 73.86, 119.09, 138.64, 139.79, 142.95, 144.98, 148.97.
6.6. 1-(5- 메틸 -4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일)에탄온의 합성
하기에 개설한 방법을 사용하여, 7개의 단계로 표제 화합물을 제조하였다.
Figure 112008059928937-PCT00011
4- 메틸이미다졸 -1- 디메틸아미노술폰아미드 (2): 톨루엔 (200 ml) 중 4-메틸 이미다졸 1 (3.00 g, 36.54 mmol)의 실온 용액에 트리에틸아민 (5.6 ml, 40.20 mmol)과 N,N-디메틸아미노술파모일 클로라이드 (3.9 ml, 36.54 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 용기를 5 ℃의 냉장고에서 48시간 동안 저장한 다음, 반응상으로부터 고체를 여과 제거하고, 액상(liquor)을 농축하여 위치이성질체 2와 2a의 2.5:1 혼합물을 수득하였다. 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (80-100 % 에틸 아세테이트:헥산 용리액)에 의해 조생성물을 정제함으로써, 위치이성질체의 5.5:1 혼합물로 2:2a를 수득하였다 (4.31 g, 62 % 수율): M+1 = 190.1.
4- 메틸 -2- 아세틸이미다졸 -1- 디메틸아미노술폰아미드 (3): 테트라하이드로퓨란 (70 ml) 중 이미다졸 2 (1.99 g, 10.54 mmol)의 -78 ℃ 용액에 헥산 중 n-BuLi 용액 (2.5 M, 11.60 ml)을 천천히 첨가하였다. 40분 후, N-메톡시-N-메틸아세트아미드 (1.30 g, 12.65 mmol)을 냉각된 용액에 적가하였다. 반응상을 방치하여 실온으로 가온하고, 2시간 동안 유지하였다. 완료 후, 포화 수성 NH4Cl (20 ml)을 첨가함으로써 반응을 종료한 다음 물 (20 ml)로 희석하였다. 층을 분리하고, 유기 층을 에틸 아세테이트 (2×30 ml)로 세척하였다. 합쳐진 유기물을 염수 (20 ml)로 세척한 다음, MgSO4 상에서 건조하여 농축하였다. 실리카 상에서의 플래시 크로마토그래피 (60-80 % 에틸 아세테이트:헥산 용리액)에 의해 조생성물을 정제함으로써, 3을 오일로서 제공하였다 (1.85 g, 76 % 수율): M+1 = 232.1.
4- 메틸 -2-(1-( 트리이소프로필실릴옥시 )비닐)-1- 디메틸아미노술폰아미드 (4): 디클로로메탄 (45 ml) 중 이미다졸 3 (1.65 g, 7.14 mmol) 용액에 트리에틸아민 (1.00 ml, 14.28 mmol)과 트리이소프로필실릴 트리플루오로메탄술포네이트 (2.12 ml, 7.86 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 반응상을 실온에서 20시간 동안 유지한 다음, 포화 수성 NaHCO3 (20 ml)의 첨가에 의해 종료하였다. 혼합물을 물 (20 ml)로 희석하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 디클로로메탄 (2×20 ml)로 세척하고, 합쳐진 유기물을 염수 용액 (20 ml)로 세척한 다음, MgSO4 상에서 건조하여 농축하 였다. 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (1-2 % 메탄올:디클로로메탄 용리액)에 의해 생성된 오일을 정제함으로써, 실릴 엔올 에테르 4를 오렌지색 오일로서 제공하였다 (2.26 g, 83 % 수율): M+1 = 388.2.
락톨 (5): 테트라하이드로퓨란 (40 ml) 중 이미다졸 4 (2.26 g, 5.84 mmol)의 -78 ℃ 용액에 n-BuLi의 헥산 용액 (2.5 M, 3.27 ml)을 천천히 첨가하였다. 30분 후, 테트라하이드로퓨란 (10 ml) 중 (-)-2,3-O-이소프로필리딘-D-에리트로노락톤 (1.66 g, 10.51 mmol) 용액을 -78 ℃ 용액에 천천히 첨가하였다.
반응상을 -78 ℃에서 2시간 동안 유지한 다음, 방치하여 0 ℃로 가온한 후, 포화 수성 NH4Cl (20 ml)를 첨가함으로써 반응을 종료하였다. 혼합물을 물 (10 ml)로 희석하고, 층을 분리하였다. 유기물을 에틸 아세테이트 (2×20 ml)로 세척하고, 합쳐진 유기물을 염수 (20 ml)로 세척한 다음, MgSO4 상에서 건조하여 농축하였다. 실리카 겔 (30-50 % 에틸 아세테이트:헥산 용리액) 상에서 조생성물을 정제하여 락톨 5를 백색의 발포체로서 제공하였다 (2.69 g, 85 % 수율): M+1 = 546.4.
디올 (6): 에탄올 (70 ml) 중 락톨 5 (2.09 g, 3.83 mmol)의 0 ℃ 용액에 과립형 NaBH4 (1.4 g, 38.32 mmol)를 몇번에 나누어 첨가하였다. 2시간 후, 반응상을 30분 동안 실온으로 가온한 다음, 농축하였다. 잔류물을 물 (40 ml) 및 에틸 아세테이트 (40 ml)에 용해시켰다. 2상 혼합물을 10분 동안 강하게 교반한 다음, 층을 분리하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (2×40 ml)로 세척하고, 합쳐진 유기물을 염수 (30 ml)로 세척한 다음, MgSO4 상에서 건조하여 농축하였다. 실리카 상에서의 플래시 크로마토그래피 (5 % 메탄올:디클로로메탄 용리액)에 의해 조발포체를 정제함으로써, 분리불가능한 벤질 위치에서의 부분입체이성질체 3:1 혼합물로서 디올 6를 제공하였다 (1.88 g, 90 % 수율): M+1 = 547.4.
이미다졸 (7): 에탄올 (10 ml) 중 이미다졸 6 (567 mg, 1.04 mmol) 용액에 세슘 플루오라이드 (315 mg, 2.08 mmol)을 첨가하고, 65 ℃로 가온하였다. 1시간 후, 반응상을 실온으로 냉각하고, 포화 수성 NH4Cl (1 ml)로 처리한 다음, 농축하였다. 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (5 % 메탄올:디클로로메탄 용리액)에 의해 조생성물을 정제함으로써, 이미다졸 7을 백색의 발포체로서 제공하였다 (380 mg, 94 % 수율): M+1 = 392.1.
최종 생성물 (8): 보호된 이미다졸 7 (380 mg, 0.97 mmol)을 아세톤 (6 ml)에 용해시키고, 물 (6 ml) 및 진한 수성 HCl (3 ml)로 순차적으로 처리하였다. 용기를 45분 동안 40 ℃로 가온한 다음, 실온으로 냉각하여 농축하였다. 150 mm × 30 mm 조르박스(Zorbax) C-6 컬럼을 사용하고 버퍼링되지 않은 용매를 사용하는 역상 정제용 크로마토그래피로, 하기의 방법에 의해 조물질을 정제하였다: 5분 (TR = 1.52분) 동안 1 % 아세토니트릴:물 동등(isocratic) 전개. 이어지는 동결건조에 의해 비정질 고체인 디메틸아미노술팜산염으로서 화합물 8을 수득하였다: M+1 = 245.1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 주 δ 5.04 (d, 1H), 3.62 (복합 m, 2H), 3.42 (복합 m, 2H), 2.62 (s, 6H), 2.43 (s, 3H), 2.21 (s, 3H); 부 δ 5.01 (d, 1H), 3.79 (복합 m, 2H), 3.55 (복합 m, 2H), 2.62 (s, 6H), 2.43 (s, 3H), 2.21 (s, 3H).
6.7. (1R,2S,3R)-1-(2-(1- 하이드라조노에틸 )-1H- 이미다졸 -4-일)부탄-1,2,3,4- 테트 라올의 합성
Figure 112008059928937-PCT00012
1-[4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시-부틸)-1H-이미다졸-2-일]-에탄온 (문헌 [Halweg, K.M. and Buchi, G., J. Org . Chem . 50:1134-1136 (1985)]에 따라 제조된 THI) (148 mg, 0.64 mmol)을 메탄올 (3 ml)와 물 (1 ml)에 현탁시켰다. 하이드라진 하이드레이트 (35 mg, 0.7 mmol, 1.2 당량)과 아세트산 (1 액적)을 첨가하고, 현탁액을 50 ℃에서 6시간 동안 교반하였다. LCMS 분석이 생성물의 형성 및 개시 물질의 부재를 표시하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 테트라하이드로퓨란으로 희석하였다. 생성되는 백색의 침전물을 수집하여 테트라하이드로퓨란으로 세척함으로써, 생성물인 대략 3:1 E:Z 이성질체의 혼합물을 백색의 고체로서 산출하였다: 90 mg (58 %).
LCMS: 조르박스 C-8 컬럼, 4.6 × 150 mm; 수 중 10 - 90 % (10 mM 암모늄 아세테이트)에서 6분 동안; 유량 = 2 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 0.576분 (신 이성질체, 245.0 (M+l)) 및 1.08분 (안티 이성질체, 245.0 (M+l)). 1H NMR (DMSO-d6) δ 2.5 (단일, DMSO 하 3H), 3.4 - 3.7 (m, 4H), 4.3 (m, 2H), 4.6 (m, 2H), 4.8 (m, 1H), 4.9 및 5.0 (이중, 1H), 7.04 및 7.21 (단일, 1H).
6.8. N' -(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일) 에틸 리덴) 아세토하이드라지드의 합성
Figure 112008059928937-PCT00013
1-[4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시-부틸)-1H-이미다졸-2-일]-에탄온 (160 mg, 0.70 mmol)을 메탄올 (3 ml)와 물 (1 ml)에 현탁시켰다. 아세트 하이드라지드 (56 mg, 0.75 mmol, 1.2 당량)과 염산 (1 액적, 12 N)을 첨가하고, 현탁액을 50 ℃에서 48시간 동안 교반하였다. LCMS 분석이 생성물의 형성 및 개시 물질의 부재를 표시하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 테트라하이드로퓨란으로 희석하였다. 생성되는 백색의 침전물을 수집하여 테트라하이드로퓨란으로 세척함으로써, 생성물인 대략 3:1 E:Z 이성질체의 혼합물을 백색의 고체로서 산출하였다: 129 mg (65 %).
LCMS: 선파이어 C-18 컬럼, 4.6 × 50 mm; 수 중 2 - 20 % (10 mM 암모늄 아세테이트)에서 2.5분 동안; 유량 = 3.5 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 0.53분 (287.1 (M+l)). 1H NMR (DMSO-d6) δ 2.2 (단일, 3H), 2.5 (단일, DMSO 하 3H), 3.4 - 3.7 (m, 4H), 4.3 (br, 2H), 4.6-5.0 (br, 4H), 7.0 (br, 1H), 10.30 및 10.37 (단일, 1H).
6.9. (E)-4- 메틸 - N' -(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일) 에틸리덴 ) 벤젠술포노하이드라지드의 합성
Figure 112008059928937-PCT00014
1-[4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시-부틸)-1H-이미다졸-2-일]-에탄온 (153 mg, 0.67 mmol)을 메탄올 (3 ml)와 물 (1 ml)에 현탁시켰다. P-톨루엔술포닐 하이드라지드 (140 mg, 0.75 mmol, 1.2 당량)과 염산 (1 액적, 12 N)을 첨가하고, 현탁액을 50 ℃에서 24시간 동안 교반하였다. LCMS 분석이 생성물의 형성 및 개시 물질의 부재를 표시하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 실리카 겔 상에 건조-적재(dry-loaded)하였다. 실리카 겔 상에서의 플래시 크로마토그래피 (10 g SiO2, 4:1 에틸 아세테이트:메탄올)로 생성물인 대략 85:15 E:Z 이성질체의 혼합물을 백색의 고체로서 산출하였다: 142 mg (53 %).
LCMS: 선파이어 C-18 컬럼, 4.6 × 50 mm; 수 중 10 - 90 % (10 mM 암모늄 아세테이트)에서 2.5분 동안; 유량 = 3.5 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 0.50분 (399.2 (M+l)) 및 0.66분 (399.3 (M+1)). 1H NMR (메탄올-d4) δ 2.2 (단일, 3H), 2.41 및 2.45 (단일, 3H), 3.6 - 3.85 (m, 4H), 4.99 및 5.05 (단일, 1H), 7.09 (br s, 1H), 7.39 (d, 2H, j = 8 Hz), 7.77 및 7.87 (d, 2H, j = 8 Hz).
6.10. N' -(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일) 에틸리덴 ) 벤조하이드라지드의 합성
Figure 112008059928937-PCT00015
1-[4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시-부틸)-1H-이미다졸-2-일]-에탄온 (150 mg, 0.65 mmol)을 메탄올 (3 ml)와 물 (1 ml)에 현탁시켰다. 벤조산 하이드라지드 (102 mg, 0.75 mmol, 1.2 당량)과 염산 (1 액적, 12 N)을 첨가하고, 현탁액을 50 ℃에서 18시간 동안 교반하였다. LCMS 분석이 생성물의 형성 및 개시 물질의 부재를 표시하였다. 균일한 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 진공에서 농축하였다. C-18 역상 SPE (10 g 올테크 하이-로드(Alltech Hi-load) C-18, 물에서 20 % 메탄올/물까지 구배)로 생성물인 대략 1:1 E:Z 이성질체의 혼합물을 무색의 고체로서 산출하였다: 193 mg (85 %).
LCMS: 선파이어 C-18 컬럼, 4.6 × 50 mm; 수 중 10 - 90 % (10 mM 암모늄 아세테이트)에서 2.5분 동안; 유량 = 3.5 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 0.49분 (349.2 (M+l)). 1H NMR (메탄올-d4) δ 2.2 (단일, 3H), 2.42 및 2.45 (단일, 3H), 3.6 - 3.85 (m, 4H), 5.11 및 5.14 (단일, 1H), 7.30 (br s, 1H), 7.40 - 7.7 (m, 4H), 7.80 및 7.95 (m, 2H), 8.1 (br s, 1H).
6.11. (E)-에틸 2-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일) 에틸리덴 ) 하이드라진카르복실레이트의 합성
Figure 112008059928937-PCT00016
1-[4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시-부틸)-1H-이미다졸-2-일]-에탄온 (150 mg, 0.65 mmol)을 메탄올 (3 ml)와 물 (1 ml)에 현탁시켰다. 에틸 카르바제이트 (78 mg, 0.75 mmol, 1.2 당량)과 염산 (1 액적, 12 N)을 첨가하고, 현탁액을 50 ℃에서 18시간 동안 교반하였다. LCMS 분석이 생성물의 형성 및 개시 물질의 부재를 표시하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하여 진공에서 농축하고, 아세톤으로 희석하였다. 생성되는 백색 침전물을 수집하여 아세톤으로 세척함으로써, 생성물인 단일 겉보기 이성질체(one apparent isomer)를 백색의 고체로서 산출하였다: 96 mg (47 %).
LCMS: 선파이어 C-18 컬럼, 4.6 × 50 mm; 수 중 2 - 20 % (10 mM 암모늄 아세테이트)에서 2.5분 동안; 유량 = 3.5 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 0.25분 (317.35 (M+l)). 1H NMR (메탄올-d4) δ 1.36 (t, 3H, j = 8 Hz), 2.28 (s, 3H), 2.42 및 2.45 (단일, 3H), 3.60 - 3.85 (m, 4H), 4.34 (dd, 2H, j = 8 Hz), 5.08 (s, 1H), 7.27 (s, 1H).
6.12. (E)- N' -(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일) 에틸리덴 ) 니코티노하이드라지드의 합성
Figure 112008059928937-PCT00017
1-[4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시-부틸)-1H-이미다졸-2-일]-에탄온 (215 mg, 0.93 mmol)을 메탄올 (3 ml)와 물 (1 ml)에 현탁시켰다. 니코틴산 하이드라지드 (137 mg, 1.0 mmol, 1.1 당량)과 염산 (1 액적, 12 N)을 첨가하고, 현탁액을 50 ℃에서 48시간 동안 교반하였다. LCMS 분석이 생성물의 형성 및 개시 물질의 부재를 표시하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 진공에서 부분적으로 농축하였다. 생성되는 백색 침전물을 수집하여 물로 세척함으로써, 생성물인 단일 겉보기 이성질체를 백색의 고체로서 산출하였다: 311 mg (95 %).
LCMS: 선파이어 C-18 컬럼, 4.6 × 50 mm; 수 중 10 - 90 % (10 mM 암모늄 아세테이트)에서 2.5분 동안; 유량 = 3.5 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 0.22분 (350.27 (M+l)). 1H NMR (DMSO-d6) δ 2.37 (s, 3H), 3.60 - 3.85 (m, 4H), 4.40 (m, 2H), 4.71 (m, 1H), 5.01 (m, 2H), 5.16 (m, 1H), 7.25 (br, 1H), 7.64 (br, 1H), 8.35 (br, 1H), 8.80 (br, 1H), 9.14 (br, 1H).
6.13. 3- 클로로 - N' -(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일) 에틸리덴 ) 벤조하이드라지드의 합성
Figure 112008059928937-PCT00018
1-[4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시-부틸)-1H-이미다졸-2-일]-에탄온 (194 mg, 0.84 mmol)을 메탄올 (4 ml)와 물 (1 ml)에 현탁시켰다. 3-클로로벤조산 하이드라지드 (170 mg, 1.0 mmol, 1.2 당량)과 염산 (1 액적, 12 N)을 첨가하고, 현탁액을 50 ℃에서 48시간 동안 교반하였다. LCMS 분석이 생성물의 형성 및 개시 물질의 부재를 표시하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 진공에서 부분적으로 농축하였다. 생성되는 백색 침전물을 수집하여 에탄올로 세척함으로써, ~3:1 E:Z 혼합물로서의 생성물을 백색의 고체로서 산출하였다: 108 mg (33 %).
LCMS: 선파이어 C-18 컬럼, 4.6 × 50 mm; 수 중 10 - 90 % (10 mM 암모늄 아세테이트)에서 2.5분 동안; 유량 = 3.5 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 0.63분 (383.23 (M+l)). 1H NMR (메탄올-d4) δ 2.44 (s, 3H), 3.60 - 3.90 (m, 4H), 5.12 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.65 (m, 2H), 8.04 (m, 2H).
6.14. (E)-4- 플루오로 - N' -(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일) 에틸리덴 ) 벤조하이드라지드의 합성
Figure 112008059928937-PCT00019
1-[4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시-부틸)-1H-이미다졸-2-일]-에탄온 (172 mg, 0.74 mmol)을 메탄올 (4 ml)와 물 (1 ml)에 현탁시켰다. 4-플루오로벤조산 하이드라지드 (131 mg, 0.85 mmol, 1.1 당량)과 염산 (1 액적, 12 N)을 첨가하고, 현탁액을 55 ℃에서 48시간 동안 교반하였다. LCMS 분석이 생성물의 형성 및 개시 물질의 부재를 표시하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 진공에서 부분적으로 농축하였다. 생성되는 백색 침전물을 수집하여 에탄올로 세척함으로써, 단일 겉보기 이성질체로서의 생성물을 백색의 고체로서 산출하였다: 97 mg (35 %).
LCMS: 선파이어 C-18 컬럼, 4.6 × 50 mm; 수 중 10 - 90 % (10 mM 암모늄 아세테이트)에서 2.5분 동안; 유량 = 3.5 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 0.55분 (367.24 (M+l)). 1H NMR (메탄올-d4, 1 액적의 DCl) δ 2.55 (s, 3H), 3.60 - 3.90 (m, 4H), 5.22 (s, 1H), 7.30 (m, 2H), 7.54 (s, 1H), 8.08 (m, 2H).
6.15. (E)-6-아미노- N' -(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일) 에틸리덴 ) 니코티노하이드라지드의 합성
Figure 112008059928937-PCT00020
1-[4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시-부틸)-1H-이미다졸-2-일]-에탄온 (115 mg, 0.50 mmol)을 메탄올 (4 ml)와 물 (1 ml)에 현탁시켰다. 치환 하이드라지드 (91 mg, 0.6 mmol, 1.2 당량)과 염산 (1 액적, 12 N)을 첨가하고, 현탁액을 55 ℃에서 48시간 동안 교반하였다. LCMS 분석이 생성물의 형성 및 개시 물질의 부재를 표시하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 진공에서 부분적으로 농축하였다. 생성되는 백색 침전물을 수집하여 에탄올로 세척함으로써, 단일 겉보기 이성질체로서의 생성물을 백색의 고체로서 산출하였다: 136 mg (75 %).
LCMS: 선파이어 C-18 컬럼, 4.6 × 50 mm; 수 중 10 - 90 % (10 mM 암모늄 아세테이트)에서 2.5분 동안; 유량 = 3.5 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 0.15분 (365.32 (M+l)). 1H NMR (메탄올-d4, 1 액적의 DCl) δ 2.58 (s, 3H), 3.60 - 3.90 (m, 4H), 5.22 (s, 1H), 7.17 (m, 1H), 7.54 (m, 1H), 8.44 (m, 1H), 8.68 (m, 1H).
6.16. (E)- N' -(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일) 에틸리덴 ) 이소니코티노하이드라지드의 합성
Figure 112008059928937-PCT00021
1-[4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시-부틸)-1H-이미다졸-2-일]-에탄온 (168 mg, 0.73 mmol)을 메탄올 (4 ml)와 물 (1 ml)에 현탁시켰다. 이소니코틴 하이드라지드 (110 mg, 0.80 mmol, 1.1 당량)과 염산 (1 액적, 12 N)을 첨가하고, 현탁액을 55 ℃에서 24시간 동안 교반하였다. LCMS 분석이 생성물의 형성 및 개시 물질의 부재를 표시하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 진공에서 부분적으로 농축하였다. 생성되는 백색 침전물을 수집하여 에탄올로 세척함으로써, 단일 겉보기 이성질체로서의 생성물을 백색의 고체로서 산출하였다: 136 mg (75 %).
LCMS: 선파이어 C-18 컬럼, 4.6 × 50 mm; 수 중 10 - 90 % (10 mM 암모늄 아세테이트)에서 2.5분 동안; 유량 = 3.5 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 0.15분 (365.32 (M+l)). 1H NMR (메탄올-d4, 1 액적의 DCl) δ 2.63 (s, 3H), 3.60 - 3.90 (m, 4H), 5.12 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 8.63 (d, 2H, j = 8 Hz), 9.14 (d, 2H, j = 8 Hz).
6.17. (E)- N' -(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-일) 에틸리덴 )비페닐-3- 카르보하이드라지드의 합성
Figure 112008059928937-PCT00022
1-[4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시-부틸)-1H-이미다졸-2-일]-에탄온 (315 mg, 1.36 mmol) 및 비페닐-3-카르보하이드라지드 (360 mg, 1.81 mmol)을 DMSO (2 ml)에 현탁시켰다. 진한 염산 (2 액적)을 첨가하고, 현탁액을 40 ℃에서 5시간 동안 교반하였다. LCMS 분석이 생성물의 형성 및 개시 물질의 부재를 표시하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 메탄올로 희석한 후, 역상 HPLC (10 mM NH4OAc/아세토니트릴)로 정제하였다. 원하는 질량의 2개 분획 (E 및 Z 이성질체)을 별도로 수집하여 동결건조하였다. 분획 1은 95 mg (16 %)의 백색 고체를 산 출하였다. 분획 2는 82 mg (14 %)의 백색 고체이었다.
분획 1: 분석용 HPLC 조르박스 C-8 컬럼, 4.6 × 150 mm; 용매 A = 10 mM 암모늄 아세테이트; 용매 B = MeCN; 0분에 5 % B, 1분에 5 % B, 3분에 90 % B, 4분에 종료; 유량 = 3 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 2.9분 (주의: ~5 %의 다른 이성질체 함유). M+H = 425.28이었다. 1H NMR (2 액적의 D2O를 사용한 DMSO-d6) δ 2.3 (단일, 3H) , 3.3 - 3.7 (m, 4H), 4.9 (m, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.37 (m, 1H) 7.47 (m, 2H), 7.67 (m, 3H), 7.85 - 7.92 (m, 2H) 및 8.15 (s, 1H). 동일한 샘플의 HSQC는 2.3 (CH3)에서의 양성자 신호를 20 ppm에서의 탄소 신호와 연관시켰다.
분획 2: 분석용 HPLC 조르박스 C-8 컬럼, 4.6 × 150 mm; 용매 A = 10 mM 암모늄 아세테이트; 용매 B = MeCN; 0분에 5 % B, 1분에 5 % B, 3분에 90 % B, 4분에 종료; 유량 = 3 ml/분; 검출 220 nm; 체류 시간: 2.963분 (주의: ~6 %의 다른 이성질체 함유). M+H = 425.28이었다. 1H NMR (2 액적의 D2O를 사용한 DMSO-d6) δ 2.4 (단일, 3H), 3.4 - 3.6 (m, 4H), 4.77 및 4.86 (광역 단일, 총합 = 1H), 6.9 및 7.1 (광역 단일, 총합 = 1H), 7.40 (m, 1H) 7.50 (m, 2H), 7.61 (m, 1H), 7.73 (m, 2H), 7.87 (m, 2H) 및 8.10 (s, 1H). 동일한 샘플의 HSQC는 2.4 (CH3)에서의 양성자 신호를 13 ppm에서의 탄소 신호와 연관시켰다.
6.18. N- 하이드록시 -4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4- 테트라하이드록시부틸 )-1H- 이미다졸 -2-카르복스아미드의 합성
Figure 112008059928937-PCT00023
1-[4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시-부틸)-1H-이미다졸-2-일]-에탄온 (18 g, 78.3 mmol)을 디클로로에탄 (160 ml)과 2,2-디메톡시 프로판 (160 ml)에 현탁시켰다. 4-톨루엔술폰산 (3 g)을 첨가하고, 혼합물을 70 ℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응상을 디클로로메탄으로 희석하고, 물, 5 % 비카르보네이트, 염수로 세척한 다음, SiO2 상에 건조 적재하였다. 플래시 크로마토그래피 (헥산/에틸 아세테이트)로 정제하여 1-(4-((4S,4'R,5R)-2,2,2',2'-테트라메틸-4,4'-비(1,3-디옥솔란)-5-일)-1H-이미다졸-2-일)에탄온을 무색의 오일로서 산출하였다 (18.8 g, 60.6 mmol, 77%; M+H 계산치: 311.4, 관측치: 311.3).
상기에서 수득한 생성물 (20 g, 64.5 mmol)을 DMF에 용해시켰다. K2CO3 (12.5 g, 90.3 mmol)를 첨가하고, 이어서 벤질 브로마이드 (10.7 ml, 90.3 mmol)을 첨가하였다. 반응상을 50 ℃로 18시간 동안 가열하였다. LC/MS 분석이 개시 물질이 남아있음을 표시하였다. 추가분의 벤질 브로마이드 (5 ml, 42 mmol)을 첨가하고, 온도를 60 ℃로 상승시켰다. 3시간 후, 냉수를 사용하여 반응을 종료하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 물, 이어서 염수로 세척하고, 황산 나트륨 상에서 건조한 후, 실리카 겔 상에 적재하였다. 플래시 크로마토그래피 (20 내지 40 %의 헥산 중 에틸 아세테이트)로 1-(1-벤질-4-((4S,4'R,5R)-2,2,2',2'-테트라메틸-4,4'-비(1,3-디옥솔란)-5-일)-1H-이미다졸-2-일)에탄온을 산출하였다 (16.1 g, 62 %).
수득된 중간물 (13 g, 32.5 mmol)을 디옥산 (120 ml)에 용해시키고, 시중의 표백제 (200 ml, 6 % NaOCl)에 용해된 NaOH (13.2 g)으로 처리하였다. 2시간 동안 강하게 교반한 후, 반응상을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 염수로 세척한 다음 셀라이트 상에서 건조하였다. 여과 및 증발에 의해 고체를 산출하고, 이를 진공에서 추가적으로 건조하여 1-벤질-4-((4S,4'R,5R)-2,2,2',2'-테트라메틸-4,4'-비(1,3-디옥솔란)-5-일)-1H-이미다졸-2-카르복실산을 산출하였다 (13 g, 양적 수율, M+H 계산치: 403.2, 관측치: 403.2).
상기에서 수득한 생성물 (600 mg, 1.49 mmol), O-트리틸하이드록실아민 (820 mg, 2.98 mmol), EDAC (430 mg, 2.24 mmol) 및 HOBt (305 mg, 2.24 mmol)을 DMF (8 ml) 및 트리에틸아민 (622 μl, 4.47 mmol)과 혼합하였다. 반응상을 주변 온도에서 22시간 동안 교반하고, 농축한 다음, DCM/MeOH를 사용하는 실리카 상에 적재하였다. 플래시 크로마토그래피 (MeOH/DCM)로 1-벤질-4-((4S,4'R,5R)-2,2,2',2'-테트라메틸-4,4'-비(1,3-디옥솔란)-5-일)-N-(트리틸옥시)-1H-이미다졸-2-카르복스아미드를 산출하였다 (480 mg, 0.73 mmol, 49 %, M+H 계산치: 660.3, 관측치: 660.4).
상기에서 수득한 생성물 (480 mg, 0.73 mmol)을 에탄올 (50 ml)에 용해시켰 다. Pd(OH)2 (500 mg, 탄소 상 20 %, 습성)을 첨가하고, 반응상을 H2 (65 psi) 하에서 18시간 동안 교반한 후, 여과하였다. 에탄올을 진공에서 제거하였다. 잔류물을 DCM에 용해시키고, 플래시 크로마토그래피 (MeOH/DCM)로 정제하여 N-하이드록시-4-((4S,4'R,5R)-2,2,2',2'-테트라메틸-4,4'-비(1,3-디옥솔란)-5-일)-1H-이미다졸-2-카르복스아미드를 산출하였다 (150 mg, 0.46 mmol, 63 %, M+H 계산치: 328.1, 관측치: 328.3).
상기에서 수득한 생성물 (150 mg, 0.46 mmol)을 아세톤 (8 ml)와 물 (8 ml)에 용해시켰다. 건조 얼음/아세톤 배스를 사용하여 반응상을 -15 ℃의 내부 온도로 냉각하였다. 내부 온도가 -10 ℃ 미만으로 유지되도록 하는 속도로 진한 HCl (3 ml)을 첨가하였다. 냉각 배스를 제거하고, 반응상을 주변 온도에서 3시간 동안, 4 ℃에서 18시간 동안, 다시 주변 온도에서 7시간 동안 교반하였다. 진공에서 아세톤 및 일부 물을 제거하고 나자 침전이 형성되었다. 디옥산 (20 ml)을 첨가하고, 이어서 THF (10 ml)를 첨가하였다. 여과에 의해 고체를 분리하고, THF/디옥산으로 세척하여 진공에서 건조함으로써, N-하이드록시-4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-카르복스아미드를 염산염으로서 산출하였다 (98 mg, 0.40 mmol, 87 %).
질량 스펙트럼: M+H 계산치: 248.1, 관측치: 248.2. 분석용 HPLC: 루나 페니-헥실(Luna Pheny-Hexyl), 5um, 4.6 × 50 mm, 1 % 아세토니트릴과 동등한 10 mM 암모늄 아세테이트, 유량 = 3 ml/분, 220 nm 검출, 체류 시간 = 0.245분. 1H NMR (DMSO-d6) δ 3.37 - 3.64 (m, 4H), 4.96 (광역 단일, 1H), 7.47 (s, 1H), 11.9 (광역 단일, 1H).
6.19. 생쥐에서의 림프구에 대한 효과의 측정
경구 급식 또는 음용수에 의해 화합물들을 투여하였다. 경구 투여 실험을 위하여, 화합물들을 10 mg/ml로 비히클 (예, 물)에 결정상태로부터 재현탁시켰다. 생쥐 (129/B6 주의 F1 하이브리드)에게 단일 100 mg/kg 투여량의 화합물 (각 화합물의 유리 염기 100 mpk와 등가) 또는 비히클-만의 대조를 급식하고, 다시 그 케이지로 수용하였다. 투여 18시간 후 이소플루오란을 사용하여 생쥐를 마취시키고, 분석을 위하여 하기에 기술된 바와 같이 조직을 수집하였다. 음용수 연구를 위해서는, 화합물을 10 g/L의 글루코스를 함유하는 산성화수 (pH = 2.8)에 50 mg/L로 용해시켰다. 72시간 동안, 화합물-함유수 (또는 대조로서의 글루코스 용액)에 자유롭게 접근하도록 생쥐를 방치하였다. 72시간이 지나고, 분석을 위하여 조직을 수집하였다.
하기와 같이 CBC 측정치를 수득하였다. 이소플루오란을 사용하여 생쥐를 마취하고, 후안와 얼기(retroorbital plexus)로부터 EDTA 혈액 수집 튜브 (매릴랜드 엘크톤 소재 테루모 메디칼 코프.(Terumo Medical Corp.) 사의 카피젝트(Capiject)-MQK)에 혈액을 수집하였다. 셀-딘 3500 (일리노이 애보트 파크 소재의 애보트 다이아그노틱스 사) 또는 헤마베트(HemaVet) 850 (코네티컷 옥스포드 소재의 드류 사이언티픽, 인크.(Drew Scientific, Inc.) 사) 기기를 사용하여 자동화 CBC 분석을 수행하였다.
하기와 같이 유동 세포측정 (FACS) 측정치를 수득하였다. 저장성 쇼크에 의해 25 μl의 전혈을 분리하고, 2 ml의 FACS 세척 버퍼 (FWB: PBS/0.1 % BSA/0.1 % NaN3/2mM EDTA)에서 1회 세척한 후, 50 μl의 FWB에 희석된 형광색소-결합 항체의 조합을 사용하여 암흑 하 4 ℃에서 30분 동안 염색하였다. 염색 후, 세포를 2 ml의 FWB로 1회 세척하고, 수집을 위하여 300 μl의 FWB에 재현탁시켰다.
지라 및 가슴샘의 비-살균 제거를 위한 표준 방법을 하기하였다. 70 ㎛ 세포 여과기 (매사추세스 베드포드 소재 벡톤 디킨슨 랩웨어(Becton Dickinson Labware) 사의 팔콘(Falcon))을 통하여 조직을 가압함으로써 장기를 단일-세포 현탁액으로 분산시켰다. FACS 분석을 위하여, RBC를 저장 분리에 의해 분리하여 세척하고, 10 μl의 항-CD16/CD32 (캘리포니아 샌 디에고 소재 BD-파르밍겐(PharMingen) 사의 Fc 블록(Block)™) (FWB 중 1/10 희석액)을 사용하여 4 ℃에서 15분 동안 1 × 106 세포를 배양하였다. Fc 블록 중의 세포에 직접 첨가된 50 - 100 μl의 FWB에 희석된 형광색소-결합 항체의 조합을 사용하여 암흑 하 4 ℃에서 30분 동안 세포를 염색하였다. 염색 후, 세포를 1 ml의 FWB로 1회 세척하고, 수집을 위하여 300 μl의 FWB에 재현탁시켰다. 다르게 특정되지 않는 한, 모든 항체는 캘리포니아 샌 디에고 소재의 BD-파르밍겐 사에서 구입하였다. FACS칼리부르(Calibur) 유동 세포측정기 및 셀퀘스트 프로(CellQuest Pro) 소프트웨어 (캘리포니아 샌 호세 소재의 벡톤 디킨슨 이뮤노사이토메트리 시스템즈(Becton Dickinson Immunocytometry Systems) 사)를 사용하여 샘플을 분석하였다.
가슴샘에 사용된 항체 혼합물은 하기와 같다: TCRb APC Cy7; CD4 APC; CD8 PerCP; CD69 FITC; 및 CD62L PEl. 지라와 혈액에 사용되는 항체 혼합물은 하기와 같다: B220 PerCP; TCRb APC; CD4 APC Cy7; CD8 PE Cy7; CD69 FITC; 및 CD62L PE.
6.20. 생쥐에서의 S1P 농도에 대한 효과의 측정
문헌 [Murata, N., et al., Anal . Biochem . 282:115-120 (2000)]에 기술된 방사선-수용체 결합 분석의 변형을 사용하여 생쥐 (129/B6 주의 F1 하이브리드) 지라에서의 S1P의 농도를 측정하였다. 이 방법은 S1P 수용체 아형의 일종인 Edg-1을 과발현하는 HEK293F 세포를 이용하였으며, 주어진 샘플에서의 표지된 S1P의 비표지 S1P와의 경쟁에 기초하였다.
HEK293F 세포를 pEFneo S1P 수용체 (Edg-1)-발현 벡터로 핵산전달감염(transfect)시키고, G418-내성 세포 클론을 선택하였다. Edg-1-발현 HEK293F 세포를 가습된 공기:CO2 (19:1) 대기 중에서 5 % (v/v) FBS를 함유하는 DMEM으로 12 다판(multiplate) 상에서 배양하였다. 실험 24시간 전, 배지를 0.1 % (w/v) BSA를 함유하는 신선한 DMEM (혈청 없이)으로 교체하였다.
시험 화합물을 투여하고 18시간 후, 생쥐를 사망시키고, 그의 지라를 제거하여 냉동시켰다. 공지의 방법을 사용하여 냉동된 조직으로부터 S1P를 수득하였다. 예컨대 문헌 [Yatomi, Y., et al, FEBS Lett . 404:173-174 (1997)]를 참조하라. 구체적으로, 1 mM의 EGTA, 1 mM의 DTT 및 로체 전프로테아제(Roche complete protease) 억제제를 함유하는 1 ml 빙냉 50 mM 포스페이트 버퍼 (pH 7.5) 중의 10 마리 생쥐의 지라를 얼음 상에서 1분 간격으로 3회 균질화하였다. 결과물을 4 ℃에서 10분 동안 2500 rpm으로 원심분리하여 세포 잔사물을 제거하였다. 다음에, 70 Ti 로터를 이용하여 상청액을 4 ℃에서 45000 rpm으로 1시간 동안 한외여과함으로써, 막-관련 단백질을 분리하였다. 상청액을 버리고, 펠렛을 로체 전프로테아제 억제제가 존재하며 1 mM의 EGTA, 1 mM의 DTT 및 33 % 글리세롤을 함유하는 최소 부피 (~1 ml)의 빙냉 50 mM 포스페이트 버퍼 (pH 7.5)에 재현탁시켰다. 브래드포드(Bradford) 분석을 사용하여 총 단백질 농도를 측정하였다.
S1P를 클로로포름/KCl/NH4OH (pH ~12)로 추출하여 상위 수성 상을 확보하였다. 다음에, 그것을 클로로포름/메탄올/HCl (pH < 1)로 추출하고, 하위 유기 상을 확보하여 증발시킴으로써 S1P를 제공하고, 이것을 사용할 때까지 냉동장치에 저장하였다. 분석 직전, 건조된 샘플을 초음파처리에 의해 20 mM의 Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM의 NaCl, 15 mM의 NaF 및 0.4 % (w/v)의 BSA로 구성되는 바인더 버퍼 중에 용해시켰다.
Edg-1-발현 세포에 대한 [33P]S1P의 샘플 중 S1P와의 경쟁적 결합에 기초한 방사선수용체-결합 분석에 의해 샘플의 S1P 함량을 측정하였다. 합쳐진 12 다판의 Edg-1-발현 HEK293F 세포를 빙-냉 바인딩 버퍼로 2회 세척한 다음, 1 nM의 [33P]S1P (웰 당 약 18.00 dpm) 및 최종 부피 0.4 ml로 증가하는 양의 원래 S1P 또는 시험 샘플을 함유하는 동일한 버퍼로 배양하였다. 판을 얼음 상에서 30분 동안 유지하고, 동일한 빙-냉 바인딩 버퍼로 세포를 2회 세척하여 미결합 리간드를 제거하였 다. 0.1 % SDS, 0.4 % NaOH 및 2 % Na2CO3를 포함하는 용액으로 세포를 가용화하고, 액체 섬광 계수기로 방사능을 계수하였다. 분석 웰 중의 S1P 함량은 표준 변위 곡선(displacement curve)으로부터의 외삽에 의해 산정되었다. 개시 시험 샘플(들) 중의 S1P의 함량은 표준 곡선으로부터 수득된 값에 S1P 추출의 회수 효율 및 희석 계수를 곱함으로써 계산되었다.
6.21. 생쥐에서의 림프구에 대한 화합물의 효과
상기한 방법들을 사용하여, 다양한 화합물들의 생체내 효과를 측정하였다. 도 1-3에 나타낸 바와 같이, 음용수로써 생쥐 (129/B6 주의 F1 하이브리드)에 투여되었을 때, THI 및 본 발명의 대표 화합물 (화합물 1) 모두가 가슴샘으로부터의 림프구 배출을 감소시켰다.
도 4는 전혈 계수에 대한 비히클 대조 (음용수), THI, 화합물 1, 및 1-(4-메틸-5-((1S,2R,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)티아졸-2-일)에탄온 (화합물 2)의 효과를 나타낸다. 흥미롭게도, 화합물 2에 대하여 파인(Pyne)에 의해 보고되었던 (WO 97/46543호) 생체내 효과는 관찰되지 않았다.
6.22. 콜라겐-유도 관절염 모델
콜라겐-유도 관절염 (CIA)은 자가면역 및 염증성 과정에 의해 야기되는 관절의 질병인 류마티스 관절염 (RA)에서 광범위하게 사용되는 모델이다. 일반적인 것은, 문헌 [Wooley P.H. et al., J. Immunol . 135(4):2443-2451]; [A. Persidis, Nature Biotechnology 17:726-728]; [Current Protocols in Immunology (John Wiley & Son, Inc. 1996)]을 참조하라. 초기의 연구에 의해, 소정의 H-2 일배체형(haplotype)과 관련된 CIA에 대한 반응성의 체계가 확립되었다. 최근에는, 캠벨(Campbell)과 그의 동료들이 C57BL/129sv (H-2b) 생쥐에서 CIA를 재평가하여, C57B6 바탕으로부터 유래된 생쥐에서 CIA가 발생될 수 있다는 것을 밝혀내었다 (문헌 [Campbell I. K, et al. Eur . J. Immunol . 30:1568-1575 (2000)]).
여기에서는, 주입용 콜라겐으로써 2 mg/ml의 닭 콜라겐 유형 II (CII) (시그마(Sigma) 사)를 4 ℃에서 밤새 교반함으로써 10 mM의 아세트산에 용해시켰다. 프로인트 완전 면역보강제(Complete Freund's adjuvant) (CFA)는 기성품 (시그마사)을 구입하였다. 예방접종 직전에, 유리 주사기를 사용하여, CII를 동일한 부피의 CFA에 에멀션화하였다. 생쥐의 예방접종에는 유리 주사기 및 26G 바늘이 사용되었으며, 생쥐의 꼬리 기저부에 CII/CFA 에멀션을 진피내 주사하였다. 각 주입을 위하여, CFA 및 100 ㎍의 닭 CII를 CFA 전체 부피 50 μl로 하여 사용하였다. 1차 예방접종 3주 후, 동일한 경로를 통하여 CFA 중에 에멀션화된 CII 100 ㎍의 추가 예방접종을 수행하였다.
콜라겐의 주입은 생쥐 발바닥 및 관절의 부기를 초래하였다. 2 내지 3일 마다 관절염의 발병에 대하여 생쥐를 검사하였는데, 이것은 뒤 발바닥 두께의 캘리퍼스 측정과 영향받은 뒤 다리 관절의 시각적 평가의 조합에 의해 평가되었다. CIA의 진행은 질병의 최초 발병 후 10 주 동안 계속되었으며, 그 기간 이후에는 관절의 조직학에 의해 질병을 평가하였다. 유형 II 콜라겐 예방접종 150일 내에 CIA를 발생시키지 않을 경우 생쥐는 관절염에 대하여 음성인 것으로 간주되었다.
생쥐에서의 관절염의 존재 또는 부재는 확립된 시각적 채점 시스템에 의해 측정되었다. 생쥐의 CIA에서는, 소정의 또는 4개의 발이 영향을 받을 수 있다. 그 최성기에는 염증이 발목으로부터 발가락까지 전체적으로 연장되며, 극한의 부기 및 홍반에 의해 특징지워진다. 일단 관절염이 나타나면, 주당 2 내지 3회 각 발을 검사하였다. 염증의 중증도를 평가하기 위하여, 0에서 4까지의 광범위하게 사용되는 시각적 채점이 사용되었는데, 여기서: 0 = 정상, 홍반 및 부기의 증거가 없음; 1 = 족중(mid-foot) 또는 발목 관절 또는 개별 발가락으로 제한된 홍반 및 약간의 부기; 2 = 발목과 족중으로 연장된 홍반 및 약간의 부기 또는 발가락 2 이상의 부기; 3 = 발목으로부터 발허리 관절(metatarsal joint)까지 연장된 홍반 및 중간정도의 부기; 4 = 발목, 발 및 발가락을 포괄하는 홍반 및 중증의 부기이다.
6.23. 콜라겐-유도 관절염 모델에서의 효과
상기한 모델의 30 마리의 생쥐 (129/B6 주의 F1 하이브리드)를 사용하여 CIA 모델에서의 본 발명 화합물의 효과를 측정하였다. 생쥐를 2개의 맹검 군으로 무작위 분할하고, 0 mpk (비히클만) 또는 100 mpk의 화합물을 투여하였다. 비히클은 살균된 증류수이었다. 비히클 대조는 10 μl/g체중으로 투여되었다.
투여는 하루에 한번 경구 급식에 의해 수행되었다. 이것은 CIA 실험 개시 3일 전에 시작되었으며, 실험 기간 내내 계속되었다. 도 5는 시간에 따른 CIA에 대한 화합물의 효과를 나타내는데, 여기서 누적 점수는 4-지 및 발목 점수의 합계이다.
6.24. 원숭이에서의 화합물의 효과
20 마리의 비-네이브(non-naive) 수컷 키노몰구스 원숭에서의 본 발명 화합물의 효과가 코반스 리서치 프라덕츠 인크.(Covance Research Products Inc.) (텍사스 앨리스 소재) 사에 의해 조사되었다. 각 동물은 개별적으로 번호가 매겨진 문신으로 식별되었다. 투여분 투여 전에 대략 11일 동안 동물을 순응시켰다. 투여분 투여시 동물은 연령이 젊은 성체/성체인 것으로 간주되었다.
순응 및 시험 기간 동안, 동물은 개별 케이지에 수용되었다. 모든 비히클- 또는 시험물-관련 효과의 모니터링이 가능하도록 하기 위하여, 투여분 투여 후 적어도 48시간 동안은 동물이 뒤섞이지 않도록 하였다. 투여분 투여시 특정되는 것 이외에는, 동물은 비-특정 영장류 먹이에 임의로 접근하였다. 비-금식 기간 동안에는 경우에 따라 과일 및 다른 처리도 제공되었다. 물은 임의로 제공되었다.
시험 화합물은 주변 조건 (대략 실온) 하 건조제 상에서 밀봉된 용기 내에 광으로부터 보호되는 상태로 저장되었다. 증류수는 비히클 대조군의 동물에 대한 경구 투여를 위하여 코반스 사에 의해 공급되었다. 시험을 위한 시험물 투여 제제는 투여일에 제조되었다. 각 군을 위하여, 적당량의 시험물이 칭량되었으며, 적당 부피의 증류수 역시 칭량되었다.
투여전에 밤새, 그리고 투여후 대략 4시간까지 모든 동물을 금식시켰다. 개별 투여량은 투여분 투여일에 측정된 체중에 기초하여 계산되었다.
경구 투여분은 코경유위삽관(nasogastric intubation)을 통하여 투여되었다. 급식 튜브를 제거하기 전에, 대략 5 ml의 물로 튜브를 플러싱하였다. 혈액학 분석을 위하여, 투여전 (-7일차), 투여전 (-3일차), 및 투여후 8, 16, 24, 32 및 48시 간에 각 동물로부터 혈액 (대략 0.5 ml)을 수집하였다. 수집일에 수득한 신선한 샘플을 사용하여 전혈 혈액학 시험을 수행하였다.
도 6에 나타낸 바와 같이, 화합물의 단일 경구 투여는, 투여 32시간 후에 측정하였을 때, 원숭이의 백혈구 및 림프구 계수에 유의성 있는 효과를 가졌다.
모든 인용된 공개, 특허 및 특허 출원은 그 전체가 여기에 참조로써 개재된다.

Claims (119)

  1. 하기 화학식 I 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 (예, 수화물)의 혈중 림프구 감소제:
    <화학식 I>
    Figure 112008059928937-PCT00024
    (여기서:
    X는 O 또는 NR3이고;
    R1은 OR1A, NHOH, 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이며;
    R2는 OR2A, C(O)OR2A, 수소, 할로겐, 니트릴, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고;
    R3는 OR3A, N(R3A)2, NHC(O)R3A, NHSO2R3A, 또는 수소이며;
    R4는 OR4A, OC(O)R4A, 수소, 할로겐, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아 릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고;
    R5는 N(R5A)2, 수소, 하이드록시, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이며;
    R1A, R2A, R3A, R4A 및 R5A 각각은 개별적으로 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고;
    단, X가 O이고; R1이 1 내지 4 탄소의 알킬, 페닐, 벤질 또는 페닐에틸이며; R2가 수소이고; R4와 R5 중 하나는 하이드록실이면; R4와 R5 중 다른 것은 1 내지 6 탄소의 알킬, 1 내지 6 탄소의 하이드록시알킬, 탄소 당 하나 이하의 하이드록실을 가지는 1 내지 6 탄소의 폴리하이드록시알킬, 탄소 당 하나 이하의 아세틸을 가지는 1 내지 6 탄소의 폴리아세틸알킬, 페닐, 벤질 또는 페닐에틸이 아니다).
  2. 제 1항에 있어서, 약 50 %를 초과하는 CLRF를 가지는 혈중 림프구 감소제.
  3. 제 1항에 있어서, X는 O인 혈중 림프구 감소제.
  4. 제 1항에 있어서, X는 NR3인 혈중 림프구 감소제.
  5. 제 1항에 있어서, R1은 수소인 혈중 림프구 감소제.
  6. 제 1항에 있어서, R1은 임의로 치환된 저급 알킬인 혈중 림프구 감소제.
  7. 제 1항에 있어서, R1은 NHOH인 혈중 림프구 감소제.
  8. 제 1항에 있어서, R1은 OR1A인 혈중 림프구 감소제.
  9. 제 7항에 있어서, R1A는 수소 또는 임의로 치환된 저급 알킬인 혈중 림프구 감소제.
  10. 제 1항에 있어서, R2는 수소인 혈중 림프구 감소제.
  11. 제 1항에 있어서, R2는 수소가 아닌 혈중 림프구 감소제.
  12. 제 1항에 있어서, R2는 니트릴인 혈중 림프구 감소제.
  13. 제 1항에 있어서, R2는 임의로 치환된 저급 알킬인 혈중 림프구 감소제.
  14. 제 1항에 있어서, R2는 OR2A인 혈중 림프구 감소제.
  15. 제 1항에 있어서, R2는 C(O)OR2A인 혈중 림프구 감소제.
  16. 제 14항 또는 15항에 있어서, R2A는 수소 또는 임의로 치환된 저급 알킬인 혈중 림프구 감소제.
  17. 제 1항에 있어서, R3는 OR3A인 혈중 림프구 감소제.
  18. 제 1항에 있어서, R3는 N(R3A)2 또는 NHC(O)R3A인 혈중 림프구 감소제.
  19. 제 1항에 있어서, R3는 NHSO2R3A인 혈중 림프구 감소제.
  20. 제 17항 내지 19항 중 어느 한 항에 있어서, R3A는 수소 또는 임의로 치환된 저급 알킬인 혈중 림프구 감소제.
  21. 제 17항 내지 19항 중 어느 한 항에 있어서, R3A는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로싸이클인 혈중 림프구 감소제.
  22. 제 1항에 있어서, R4는 OR4A인 혈중 림프구 감소제.
  23. 제 1항에 있어서, R4는 할로겐인 혈중 림프구 감소제.
  24. 제 1항에 있어서, R5는 N(R5A)2인 혈중 림프구 감소제.
  25. 제 1항에 있어서, R5는 수소인 혈중 림프구 감소제.
  26. 제 1항에 있어서, R5는 하이드록실인 혈중 림프구 감소제.
  27. 제 1항에 있어서, R5는 헤테로알킬 (예, 알콕시)인 혈중 림프구 감소제.
  28. 제 1항에 있어서, R5는 임의로 치환된 알킬인 혈중 림프구 감소제.
  29. 제 1항에 있어서, R5는 임의로 치환된 아릴인 혈중 림프구 감소제.
  30. 하기 화학식 I 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물의 S1P 농도 향상제:
    <화학식 I>
    Figure 112008059928937-PCT00025
    (여기서:
    X는 O 또는 NR3이고;
    R1은 OR1A, NHOH, 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이며;
    R2는 OR2A, C(O)OR2A, 수소, 할로겐, 니트릴, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고;
    R3는 OR3A, N(R3A)2, NHC(O)R3A, NHSO2R3A, 또는 수소이며;
    R4는 OR4A, OC(O)R4A, 수소, 할로겐, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고;
    R5는 N(R5A)2, 수소, 하이드록시, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이며;
    R1A, R2A, R3A, R4A 및 R5A 각각은 개별적으로 수소 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고;
    단, 제제는 2-아세틸-4-테트라하이드록시부틸이미다졸, 1-(4-(1,1,2,2,4-펜타하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에탄온, 1-(2-아세틸-1H-이미다졸-4-일)부탄-1,1,2,2-테트라일 테트라아세테이트, 또는 1-(2-아세틸-1H-이미다졸-4-일)부탄-1,1,2,2,4-펜타일 펜타아세테이트가 아니다).
  31. 제 30항에 있어서, 약 20 배를 초과하는 SLEF를 가지는 S1P 농도 향상제.
  32. 제 30항에 있어서, X는 O인 S1P 농도 향상제.
  33. 제 30항에 있어서, X는 NR3인 S1P 농도 향상제.
  34. 제 30항에 있어서, R1은 수소인 S1P 농도 향상제.
  35. 제 30항에 있어서, R1은 임의로 치환된 저급 알킬인 S1P 농도 향상제.
  36. 제 30항에 있어서, R1은 NHOH인 S1P 농도 향상제.
  37. 제 30항에 있어서, R1은 OR1A인 S1P 농도 향상제.
  38. 제 30항에 있어서, R1A는 수소 또는 임의로 치환된 저급 알킬인 S1P 농도 향상제.
  39. 제 30항에 있어서, R2는 수소인 S1P 농도 향상제.
  40. 제 30항에 있어서, R2는 수소가 아닌 S1P 농도 향상제.
  41. 제 30항에 있어서, R2는 니트릴인 S1P 농도 향상제.
  42. 제 30항에 있어서, R2는 임의로 치환된 저급 알킬인 S1P 농도 향상제.
  43. 제 30항에 있어서, R2는 OR2A인 S1P 농도 향상제.
  44. 제 30항에 있어서, R2는 C(O)OR2A인 S1P 농도 향상제.
  45. 제 43항 또는 44항에 있어서, R2A는 수소 또는 임의로 치환된 저급 알킬인 S1P 농도 향상제.
  46. 제 30항에 있어서, R3는 OR3A인 S1P 농도 향상제.
  47. 제 30항에 있어서, R3는 N(R3A)2 또는 NHC(O)R3A인 S1P 농도 향상제.
  48. 제 30항에 있어서, R3는 NHSO2R3A인 S1P 농도 향상제.
  49. 제 46항 내지 48항 중 어느 한 항에 있어서, R3A는 수소 또는 임의로 치환된 저급 알킬인 S1P 농도 향상제.
  50. 제 46항 내지 48항 중 어느 한 항에 있어서, R3A는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로싸이클인 S1P 농도 향상제.
  51. 제 30항에 있어서, R4는 OR4A인 S1P 농도 향상제.
  52. 제 30항에 있어서, R4는 할로겐인 S1P 농도 향상제.
  53. 제 30항에 있어서, R5는 N(R5A)2인 S1P 농도 향상제.
  54. 제 30항에 있어서, R5는 수소인 S1P 농도 향상제.
  55. 제 30항에 있어서, R5는 하이드록실인 S1P 농도 향상제.
  56. 제 30항에 있어서, R5는 헤테로알킬 (예, 알콕시)인 S1P 농도 향상제.
  57. 제 30항에 있어서, R5는 임의로 치환된 알킬인 S1P 농도 향상제.
  58. 제 30항에 있어서, R5는 임의로 치환된 아릴인 S1P 농도 향상제.
  59. 하기 화학식 II의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물:
    <화학식 II>
    Figure 112008059928937-PCT00026
    (여기서:
    X는 O 또는 NR3이고;
    R1은 OR1A, NHOH, 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이며;
    R2는 OR2A, C(O)OR2A, 수소, 할로겐, 니트릴, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고;
    R3는 OR3A, N(R3A)2, NHC(O)R3A, NHSO2R3A, 또는 수소이며;
    R6는 OR6A, OC(O)R6A, N(R6B)2, NHC(O)R6B, 수소 또는 할로겐이고;
    R7은 OR7A, OC(O)R7A, N(R7B)2, NHC(O)R7B, 수소 또는 할로겐이며;
    R8은 OR8A, OC(O)R8A, N(R8B)2, NHC(O)R8B, 수소 또는 할로겐이고;
    R9은 CH2OR9A, CH2OC(O)R9A, N(R9B)2, NHC(O)R9B, 수소 또는 할로겐이며;
    R1A, R2A, R3A, R6A, R7A, R8A 및 R9A 각각은 개별적으로 수소 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고;
    R6B, R7B, R8B 및 R9B 각각은 개별적으로 수소, 또는 임의로 하나 이상의 하이드록시 또는 할로겐 기로 치환된 알킬이며;
    단, 1) X가 O이고, R1이 1 내지 4 탄소의 알킬, 페닐, 벤질 또는 페닐에틸이며, R2가 수소이면, R6, R7, R8 및 R9 중 2 이상이 하이드록실 또는 아세테이트가 아니거나; 2) X가 O이고, R1이 메틸이며, R2가 수소이고, R6 및 R7이 모두 하이드록실이며, R8과 R9 중 하나는 수소이면, 다른 것은 NHC(O)R9B가 아니거나; 3) X가 O이고, R1이 OR1A이며, R1A는 수소 또는 저급 알킬이고, R2가 수소이면, R6, R7, R8 및 R9는 모두는 아닌 하나 이상이 하이드록실 또는 아세테이트이다).
  60. 제 59항에 있어서, 혈중 림프구 감소제인 화합물.
  61. 제 59항에 있어서, S1P 농도 향상제인 화합물.
  62. 제 59항에 있어서, 하기 화학식 IIa의 것인 화합물:
    <화학식 IIa>
    Figure 112008059928937-PCT00027
  63. 제 62항에 있어서, X는 O인 화합물.
  64. 제 62항에 있어서, X는 NR3인 화합물.
  65. 제 62항에 있어서, R1은 수소인 화합물.
  66. 제 62항에 있어서, R1은 임의로 치환된 저급 알킬인 화합물.
  67. 제 62항에 있어서, R1은 NHOH인 화합물.
  68. 제 62항에 있어서, R1은 OR1A인 화합물.
  69. 제 67항에 있어서, R1A는 수소 또는 임의로 치환된 저급 알킬인 화합물.
  70. 제 62항에 있어서, R2는 수소인 화합물.
  71. 제 62항에 있어서, R2는 수소가 아닌 화합물.
  72. 제 62항에 있어서, R2는 니트릴인 화합물.
  73. 제 62항에 있어서, R2는 임의로 치환된 저급 알킬인 화합물.
  74. 제 62항에 있어서, R2는 OR2A인 화합물.
  75. 제 62항에 있어서, R2는 C(O)OR2A인 화합물.
  76. 제 74항 또는 75항에 있어서, R2A는 수소 또는 임의로 치환된 저급 알킬인 화합물.
  77. 제 62항에 있어서, R3는 OR3A인 화합물.
  78. 제 62항에 있어서, R3는 N(R3A)2 또는 NHC(O)R3A인 화합물.
  79. 제 62항에 있어서, R3는 NHSO2R3A인 화합물.
  80. 제 77항 내지 79항 중 어느 한 항에 있어서, R3A는 수소 또는 임의로 치환된 저급 알킬인 화합물.
  81. 제 77항 내지 79항 중 어느 한 항에 있어서, R3A는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로싸이클인 화합물.
  82. 제 62항에 있어서, X는 O이며, R2는 수소가 아닌 화합물.
  83. 제 82항에 있어서, R2는 임의로 치환된 저급 알킬인 화합물.
  84. 제 62항에 있어서, R6, R7, R8 및 R9 중 하나 이상은 하이드록시 또는 할로겐인 화합물.
  85. 제 62항에 있어서, R6, R7, R8 및 R9 모두는 하이드록실 또는 아세테이트인 화합물.
  86. 하기 화학식 III의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물:
    <화학식 III>
    Figure 112008059928937-PCT00028
    (여기서:
    Z는 임의로 치환된 알킬이고;
    R1은 OR1A, NHOH, 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이며;
    R2는 OR2A, C(O)OR2A, 수소, 할로겐, 니트릴, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고;
    R3는 OR3A, N(R3A)2, NHC(O)R3A, NHSO2R3A, 또는 수소이며;
    R1A, R2A 및 R3A 각각은 개별적으로 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이다).
  87. 제 86항에 있어서, Z는 임의로 하나 이상의 하이드록실, 아세테이트 또는 할로겐 요소로 치환된 알킬인 화합물.
  88. 제 86항에 있어서, R1은 임의로 치환된 저급 알킬인 화합물.
  89. 제 86항에 있어서, R1은 NHOH인 화합물.
  90. 제 86항에 있어서, R2는 수소 또는 할로겐인 화합물.
  91. 제 86항에 있어서, R3는 OR3A인 화합물.
  92. 제 86항에 있어서, R3는 N(R3A)2 또는 NHC(O)R3A인 화합물.
  93. 제 86항에 있어서, R3는 NHSO2R3A인 화합물.
  94. 제 91항 내지 93항 중 어느 한 항에 있어서, R3A는 수소 또는 임의로 치환된 저급 알킬인 화합물.
  95. 제 91항 내지 93항 중 어느 한 항에 있어서, R3A는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로싸이클인 화합물.
  96. 하기 화학식 IV의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물:
    <화학식 IV>
    Figure 112008059928937-PCT00029
    (여기서:
    R1은 OR1A, NHOH, 수소, 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이고;
    R3는 OR3A, N(R3A)2, NHC(O)R3A, NHSO2R3A, 또는 수소이며;
    R6는 OR6A, OC(O)R6A, N(R6B)2, NHC(O)R6B, 수소 또는 할로겐이고;
    R7은 OR7A, OC(O)R7A, N(R7B)2, NHC(O)R7B, 수소 또는 할로겐이며;
    R8은 OR8A, OC(O)R8A, N(R8B)2, NHC(O)R8B, 수소 또는 할로겐이고;
    R9은 CH2OR9A, CH2OC(O)R9A, N(R9B)2, NHC(O)R9B, 수소 또는 할로겐이며;
    R1A, R3A, R6A, R7A, R8A 및 R9A 각각은 개별적으로 수소 또는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알킬아릴, 아릴알킬, 헤테로알킬, 헤테로싸이클, 알킬헤테로싸이클, 또는 헤테로싸이클알킬이다).
  97. 제 96항에 있어서, 하기 화학식 IVa의 것인 화합물:
    <화학식 IVa>
    Figure 112008059928937-PCT00030
  98. 제 96항에 있어서, R6, R7, R8 및 R9 중 하나 이상은 하이드록시 또는 할로겐인 화합물.
  99. 제 96항에 있어서, R6, R7, R8 및 R9 모두는 하이드록실 또는 아세테이트인 화합물.
  100. 제 97항에 있어서, R6, R7, R8 및 R9 모두는 하이드록실 또는 아세테이트인 화합물.
  101. 제 97항에 있어서, R1은 임의로 치환된 저급 알킬인 화합물.
  102. 제 97항에 있어서, R1은 NHOH인 화합물.
  103. 제 97항에 있어서, R3는 OR3A인 화합물.
  104. 제 97항에 있어서, R3는 N(R3A)2 또는 NHC(O)R3A인 화합물.
  105. 제 97항에 있어서, R3는 NHSO2R3A인 화합물.
  106. 제 103항 내지 105항 중 어느 한 항에 있어서, R3A는 수소 또는 임의로 치환된 저급 알킬인 화합물.
  107. 제 103항 내지 105항 중 어느 한 항에 있어서, R3A는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로싸이클인 화합물.
  108. 1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)-에탄온 옥심;
    (E)-1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)-에탄온 옥심;
    (Z)-1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)-에탄온 옥심;
    1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에탄온 O-메틸 옥심;
    (E)-1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에탄온 O-메틸 옥심;
    (Z)-1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에탄온 O-메틸 옥심;
    1-(5-메틸-4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에탄온;
    (1R,2S,3R)-1-(2-(1-하이드라조노에틸)-1H-이미다졸-4-일)부탄-1,2,3,4-테트라올;
    N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)아세토하이드라지드;
    4-메틸-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)벤젠술포노하이드라지드;
    (E)-4-메틸-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)벤젠술포노하이드라지드;
    (Z)-4-메틸-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)벤젠술포노하이드라지드;
    N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)벤조하이드라지드;
    에틸 2-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)하이드라진카르복실레이트;
    (E)-에틸 2-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)하이드라진카르복실레이트;
    (Z)-에틸 2-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)하이드라진카르복실레이트;
    N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)니코티노하이드라지드;
    (E)-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)니코티노하이드라지드;
    (Z)-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)니코티노하이드라지드;
    3-클로로-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)벤조하이드라지드;
    4-플루오로-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)벤조하이드라지드;
    (E)-4-플루오로-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)벤조하이드라지드;
    (Z)-4-플루오로-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)벤조하이드라지드;
    6-아미노-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)니코티노하이드라지드;
    (E)-6-아미노-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)니코티노하이드라지드;
    (Z)-6-아미노-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)니코티노하이드라지드;
    N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)이소니코티노하이드라지드;
    (E)-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)이소니코티노하이드라지드;
    (Z)-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)이소니코티노하이드라지드;
    N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)비페닐-3-카르보하이드라지드;
    (E)-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)비페닐-3-카르보하이드라지드;
    (Z)-N'-(1-(4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-일)에틸리덴)비페닐-3-카르보하이드라지드; 또는
    N-하이드록시-4-((1R,2S,3R)-1,2,3,4-테트라하이드록시부틸)-1H-이미다졸-2-카르복스아미드
    인 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물.
  109. 제 1항의 혈중 림프구 감소제 및 약학적으로 허용가능한 부형제 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물.
  110. 제 30항의 S1P 농도 향상제 및 약학적으로 허용가능한 부형제 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물.
  111. 제 59항, 84항, 96항 및 108항 중 어느 한 항의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 부형제 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물.
  112. 제 1항의 혈중 림프구 감소제 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서의 혈중 림프구 수의 감소 방법.
  113. 제 30항의 S1P 농도 향상제 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서의 S1P 양의 조정 방법.
  114. 제 1항의 혈중 림프구 감소제 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서의 면역 반응의 억제 방법.
  115. 제 30항의 S1P 농도 향상제 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서의 면역 반응의 억제 방법.
  116. 제 59항, 84항, 96항 및 108항 중 어느 한 항의 화합물 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서의 면역 반응의 억제 방법.
  117. 제 1항의 혈중 림프구 감소제의 치료적 또는 예방적 유효량을, 류마티스 관절염, 천식, 아토피성 피부염, 베체트병, 이식-대-숙주병, 홍반 루푸스, 다발 경화증, 화분증, 건선, 이식 거부 또는 포도막염인 질병 또는 장애의 치료, 관리 또는 예방을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 질병 또는 장애의 치료, 관리 또는 예방 방법.
  118. 제 30항의 S1P 농도 향상제의 치료적 또는 예방적 유효량을, 류마티스 관절염, 천식, 아토피성 피부염, 베체트병, 이식-대-숙주병, 홍반 루푸스, 다발 경화증, 화분증, 건선, 이식 거부 또는 포도막염인 질병 또는 장애의 치료, 관리 또는 예방을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 질병 또는 장애의 치료, 관리 또는 예방 방법.
  119. 제 59항, 84항, 96항 또는 108항 중 어느 한 항 화합물의 치료적 또는 예방적 유효량을, 류마티스 관절염, 천식, 아토피성 피부염, 베체트병, 이식-대-숙주병, 홍반 루푸스, 다발 경화증, 화분증, 건선, 이식 거부 또는 포도막염인 질병 또는 장애의 치료, 관리 또는 예방을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 질병 또는 장애의 치료, 관리 또는 예방 방법.
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