KR20080091157A

KR20080091157A - 자외선으로 유연성 용기 내의 혈소판 농축물을 조사하는방법

Info

Publication number: KR20080091157A
Application number: KR1020087018177A
Authority: KR
Inventors: 하랄드 모르; 월프람 하. 왈카
Original assignee: 포르슝스게마인샤프트 데아 데에르카 블루트슈펜데딘스테 에.바우.; 마꼬 파르마
Priority date: 2005-12-23
Filing date: 2006-12-21
Publication date: 2008-10-09
Also published as: HK1121975A1; DE102005062410A1; JP5319298B2; AU2006332293A1; KR101338511B1; ATE555815T1; BRPI0620280B8; JP2009523710A; US8173066B2; CN101340936B; BRPI0620280A2; US20090155121A1; RU2008129481A; EP1968652A1; WO2007076834A8; NZ569429A; CA2634296C; ES2389778T3; EP1968652B1; CA2634296A1

Abstract

본 발명은 이동을 이용하여 자외선 조사에 의해 유연성 용기 안에서 혈소판 농축물 내의 박테리아, 바이러스와 같은 병원체 및/또는 백혈구를 불활성화하는 방법에 관한 것이다. 이동(로킹, 회전, 이행)에 의해 유체의 혼합을 가능하게 하기 위해 혈액제제는 유연성 백 안에 포장된다. 이는 또한 상기 백을 최대 충전 수용능력의 30% 이하로 충전함으로써 촉진된다.

자외선 조사, 혈소판 농축물, 병원체 불활성화, 이동, 최대 충전 수용능력

Description

자외선으로 유연성 용기 내의 혈소판 농축물을 조사하는 방법{METHOD FOR IRRADIATING THROMBOCYTE CONCENTRATES IN FLEXIBLE CONTAINERS WITH ULTRA-VIOLET LIGHT}

본 발명은 자외선 조사에 의해 혈소판 농축물(TKs) 내의 박테리아 및 바이러스와 같은 병원체 및/또는 백혈구를 불활성화하는 방법에 관한 것이다.

혈액제제를 치료적으로 적용하는 경우, 혈액제제의 수혈자가 바이러스 및 박테리아에 감염되는 위험이 수반될 수 있음이 알려져 있다. 예컨대 B형 간염 바이러스(HBV)와 C형 간염 바이러스(HCV) 및 에이즈 병원체 HIV-1과 HIV-2를 들 수 있다. 제제를 제조할 때 상기 언급한 병원체들을 불활성화하거나 또는 제거하는 단계를 거치지 않는다면 상기 감염 위험은 항상 존재한다.

자외선(UV)은 파장에 따라 구별되며, 본 출원에서는 하기와 같이 정의된다: UVA: 400 내지 320 nm, UVB: 320 내지 280 nm, UVC 280 내지 200 nm. 단파장의 자외선(UV) 즉 대략 320 nm 아래의 파장을 갖는 자외선(UVB 및 UVC)을 조사함으로써, 예컨대 혈장 또는 세포 혈액 제제 내의 바이러스 및 박테리아를 불활성화할 수 있음이 알려져 있다. 320 nm 이상의 파장을 갖는 경우, 복사 에너지가 너무 적어 미생물 및 바이러스를 불활성화할 수 없다. 병원체 불활성화를 위해 단지 UV만을 조 사하는 것은 원칙적으로 그 자체만으로 효과적이며, 기타 화학적, 광화학적 및 광역학적 방법에 비해 반응성 화합물 또는 광활성 물질의 첨가를 필요로 하지 않는다는 장점이 있다.

이와 같은 첨가물 또는 이들의 분해 생성물 또는 광 생성물은 유독하거나 또는 돌연변이를 나타내기 때문에 종종 추후 제거를 필요로 한다. 이외에, 이들은 처리되는 제제 내에서 혈장 단백질 및 세포 표면과 결합하여 새로운 항원 구조체를 형성할 수 있다. 일반적으로 이와 같은 첨가물은 완전히 제거될 수 없으며, 최소한 이들의 제거에 추가적인 노력이 요구된다. 또한, 이러한 추가적인 작업단계는 살균 제제의 질을 저하할 수 있다. 병원체의 직접적인 불활성화에 가장 효과적인 것은 UVC이다. 그러나 UVC는 혈장 또는 탁한 현탁액(예컨대 혈소판 농축물(TKs))과 같은 단백질 함유 용액을 매우 적은 깊이까지 밖에 투과하지 못하는 단점이 있다.

UVC는 제 2 차 세계대전 동안, 그리고 그 직후 아주 짧은 기간 동안 혈장 및 알부민 용액을 살균하기 위해, 특히 간염 바이러스를 불활성화하기 위해 사용되었다. 그 당시 상기 용액은 관류 장치 내로 도입되어 얇은 필름으로서 UVC 광원을 통과하였다. 그러나 상기 방법은 그 신뢰성이 충분히 입증되지 않아 포기되었다(Kallenbach NR, Cornelius PA, Negus D, et al. Inactivation of viruses by ultraviolet light. Curr Stud Hematol Blood Transfus 1989, 56, 70-82).

오늘날에도 치료적 혈장 단백질 제제의 살균을 위해 상기와 동일한 원리에 따라 작동되는 좀 더 발전한 방법을 사용하고 있다. 모든 경우에서 주관심사는 몇백 리터에 이르는 아니 더 이상의 보다 큰 부피의 혈장 풀(pool) 또는 단백질 용액 을 처리하는 것이다(Hart H, Reid K, Hart W. Inactivation of viruses during ultraviolet light treatment of human intravenous immunoglobulin and albumin. Vox Sang 1993; 64(2):82-8. 및 Chin S, Williams B, Gottlieb P, et al. Virucidal short wavelength ultraviolet light treatment of plasma and factor VIII concentrate: protection of proteins by antioxidants; Blood 1995;86(11):4331-6).

그러나 헌혈 또는 기계적인 분리반출법(apheresis)을 통해 얻어지는 거의 수백 ml에 달하는 부피를 갖는 복수의 개별 유닛 혈소판 농축물을 살균하는데 상기 언급된 관류 장치는 적합하지 않다. 그러나 이는 혈액은행의 일상적인 활동에서 실제 요구되는 것이다.

UVB는 UVC와 동일한 정도는 아닐지라도 마찬가지로 미생물 및 바이러스를 살균할 수 있다. UVB는 UVC 보다는 단백질 함유 용액 및 탁한 현탁액을 약간 더 잘 침투하지만, 그 침투깊이는 예컨대 혈장 또는 혈소판 농축물에서 단지 수 밀리미터 정도에 지나지 않는다. 바이러스 또는 박테리아보다 훨씬 UV에 민감한 혈소판 농축물 내의 T 림프구를 불활성화하기 위하여, UVB 조사가 검사되었다. 이로써 상기 제제의 수혈자는 외원성 HLA 항원에 대한 동종 면역이 저지되어, 추가적인 혈소판 농축물의 수혈에 대해 불응을 나타낸다(Andreu G, Boccaccio C, Lecrubier C, et al. Ultraviolet irradiation of platelet concentrates: feasibility in transfusion practice. Transfusion 1990;30(5):401-6 및 Pamphilon DH. The rationale and use of platelet concentrates irradiated with ultraviolet-B light. Transfus Med Rev 1999;13(4):323-33).

그러나 실제 상기 방법은 자주 사용되지 않았는데, 거의 동시에 개발된 백혈구 여과라는 효력은 유사하나 비용 및 작업노력면에서 훨씬 유리한 대안이 제시되었기 때문이다(Leukocyte reduction and ultraviolet B irradiation of platelets to prevent alloimmunization and refractoriness to platelet transfusions. The Trial to Reduce Alloimmunization to Platelets Study Group. N Engl J Med 1997;337(26):1861-9;).

마찬가지로, 혈소판 현탁액 안의 바이러스가 단색 UVB 조사(파장 308 nm)에 의해 불활성화될 수 있음이 개시되었다. 이 경우, 엑시머 레이저가 이용되었다; 샘플 부피는 단지 몇 ml이었다(Prodouz KN, Fratantoni JC, Boone EJ, Bonner RF. Use of laser-UV for inactivation of virus in blood products. Blood 1987;70(2):589-92). 이 기준을 넘을 수 없음이 명백했다. 실제 상기 문헌에는 완전 혈소판 농축물 내의 바이러스 또는 박테리아가 오로지 UV 조사에 의해(예컨대 UVB 또는 UVC) 해독될 수 있는 방법은 알려지지 않았다.

혈소판 농축물은 개별 제공자들로부터 기계적인 혈소판 분리반출을 통해 얻어지거나 또는 헌혈된 혈액으로부터 분리되며, 이때 여러 헌혈로부터 유래 되는 혈소판들이(일반적으로 4 내지 6) 합쳐져 풀(pool)을 이룬다. 따라서 수득 되는 혈소판 농축물의 부피는 일반적으로 대략 200 내지 350 ml이다. 그러나 혈소판 농축물은 개별 헌혈된 혈액으로부터도 만들어지므로, 이때 부피는 이에 상응하여 보다 작다(대략 40 내지 80 ml). 혈소판 농축물 풀 및 분리반출된 혈소판 농축물 모두의 경우에서, 혈소판은 혈장 또는 특정 보존 매질 내에 대략 30 내지 40 %의 잔여 혈장 함량으로 분산된다. 혈소판 농축물은 평탄한(flat) 가스-투과성 플라스틱 백 안에서 20-24℃에서 저장된다.

이와 같이 백 속에 있는 혈소판 농축물을 UV로 살균하는 것이 요구된다. 그러나 상기 제제가 UV를 거의 투과시키지 못한다는 상기 언급된 문제가 존재한다. 이는 다음의 계산 예로 더욱 명백해진다: 살균을 위해 UVB가 제공되고, 대략 혈소판 농축물의 부피를 300 ml로 가정하며, UVB 복사의 침투깊이가 1mm이고, 노출이 백의 양쪽으로부터 제공되는 경우, 적합한 노출백(exposure bag)은 최소한 1500㎠의 표면을 가져야만 한다.

불가능한 건 아니지만, 상기와 같은 크기를 갖는 백을 더 많은 량으로 일상적으로 처리한다는 것은 매우 어려워 보인다. UVB 대신 UVC로 혈소판 농축물을 살균하고자 할 때 문제가 더욱 커지는데, 왜냐하면 그 침투깊이가 훨씬 더 적기 때문이다.

놀랍게도, 상기 문제는 청구항 제 1 항에 따른 방법에 의해 해결됨이 발견되었다. 바람직한 실시형태는 종속항의 대상이며, 하기에서 설명된다.

본 발명에 따르면, 혈소판 농축물은 노출백(exposure bag) 안에서 적절한 방식으로 이동된다. 이때, 상기 이동은 매우 격렬하게 일어나 혈소판 농축물 내부에 구역(area)을 이루는 층들이 형성되고, 이 층들은 매우 얇아 UV 조사에 의해 투과될 수 있다. 동시에, 상기 이동은 혈소판 농축물 현탁액이 백 안에서 효과적으로 혼합되도록 수행되어야 한다. 둘 다 하기 조건이 주어지는 경우 실현된다.

1. 노출백은 매우 유연하고 또한 조사에 노출되는 동안 고정되지 않는다. 예컨대 석영판 사이에 클램프 되지 않는다(clamped). 그러므로, 상기 백은 상기 백이 움직일 때 발생하는 혈소판 농축물 현탁액의 어떠한 형태 변경에도 적응한다.

2. 상기 백은 수평으로(왕복방향으로 직선으로 또는 원형으로 또는 타원형으로) 또는 수직으로(로킹(rocking)) 이동된다.

3. 노출백은 그 최대 충전부피의 30% 이하, 특히 20% 이하로 충전된다.

모든 경우에서 이동 방향의 전환은 급격하게 이루어져서, 그 관성의 결과로 대부분의 혈소판 농축물 현탁액은 원래 방향으로 더 이동하고, 따라서 뒤에 남은 잔여물은 UV 조사에 의해 관통되는 얇은 층을 형성하게 된다. 조사되는 동안 백의 이동으로 인한 지속적인 혼합에 의해, 결국 전체 혈소판 농축물(및 그 안에 포함된 바이러스 및/또는 박테리아)는 UV 조사에 노출된다. 이로써 혈소판 농축물은 살균된다.

노출백은 UV-투과성 플라스틱 재료로 제조된다. 적합한 플라스틱은 예컨대 1 mm 이하의 필름 두께, 특히 0.5 mm 미만의 필름 두께를 갖는 에틸렌 비닐 아세테이트 및 폴리올레핀이다. 노출백은 평탄하고, 바람직하게는 200 내지 320 nm 범위에서 최대 흡수를 나타내지 않도록 구성된다. 노출백은 수평 충전 상태에서 단지 수 mm의 두께를 가지며, 예컨대 10 mm 미만, 특히 5 mm, 바람직하게는 3 mm 미만이고, 예컨대 200 ml 또는 300 ml에 이르는 샘플 부피를 수용하도록 되어 있다. 그러나, 노출백의 최대 수용능력(부피)은 백 안에 포함되어 처리될 샘플의 실제 부피보다 최소한 3배, 일반적으로 최소한 5배, 바람직하게는 최소한 10배, 또는 심지어 최소한 20배 더 크다.

실험적인 검사

하기 실험들은 본 방법의 효능을 설명하며, 본 발명은 하기 언급된 박테리아 및/또는 바이러스의 불활성화 만에 제한되지 않는다. 또한 하기 실험들에서 사용된 '랜덤 도너' 혈소판 농축물에는 아무런 제한이 없으며, 본 발명에 따른 방법은 혈소판 분리반출 제제에도 적용 가능하다. 모든 실험은 3 번 내지 6 번 실시되었다. 표시된 결과들은 각각 평균치±표준 편차를 나타낸다.

혈소판 농축물

혈소판 농축물은 규칙적인 헌혈에서 유래한 각각 5 버피 코트(Buffy Coats)의 풀(pool)로부터 제조되었다. 혈소판 농축물은 대략 300 내지 350 ml의 부피를 가졌다; 혈소판의 농도는 대략 10⁹/ml이었다. 혈소판은 보존 매질 SSP+(MacoPharma사 제품)내에 분산되었다. 잔여 혈장 함량은 대략 30 내지 40%이었다.

세균학적 검사

불활성화 실험들에서는 하기의 박테리아 균주가 이용되었다:

스타필로코코스 (S) 에피더미스( Staphylococcus (S.) epidermis )

스타필로코코스 (S) 아우레우스( Staphylococcus (S.) aureus )

바실러스 (B) 세레우스( Bacillus (B.) cereus )

클레브시엘라 (K) 뉴모니아 ( Klebsiella (K.) pneumoniae ).

박테리아 농도는 콜로니 형성 에세이 방법으로 측정되었고, 콜로니 형성 단위(CFU)/ml로 표시되었다. 박테리아 불활성화 실험을 위해, 혈소판 농축물 전체 또는 일정 분취량(aliquots)의 혈소판 농축물에 상기 표시 균주들 중 하나의 균주 10⁴내지 10⁵ CFU/ml을 넣고, 이 후 UV 조사하였다.

바이러스학적 검사

일 분취량의 혈소판 농축물에 수이드 헤르페스 바이러스(Suid Herpesvirus; SHV-1, 슈도레이비스바이러스, 아우제스키 균주) 또는 수포성 구내염 바이러스(VSV, 인디아나 균주)를 삽입하였다. 바이러스 역가는 CPE-어세이(CPE = 세포변성 효과)로 측정하였다. 상기 바이러스 역가는 TCID₅₀(TCID = 조직배양 감염량)으로 표시되었다. 지표 세포로는 베로 세포를 사용하였다. 실시된 실험들에서 초기 바이러스 농도는 대략 10⁵ 내지 10⁷ TCID₅₀이었다.

노출 장치

사용된 두 개의 노출 장치 중 하나에 UVB 방출 튜브가 장착되었다. 조사는 위치된 노출백의 양면 즉 위 및 아래로 수행되었다. 상기 노출 장치에는 60 방향 전환/분의 빈도로 수평 왕복 운동을 수행하는 진탕(shaking) 장치가 구비되었다. 제 2 노출 장치에도 마찬가지로 UVB을 방출하는 튜브가 구비되고, 조사는 마찬가지로 양쪽으로부터 수행되었다. 제 3 장치(제 2 장치와 동일한 형태의 구성을 가짐)에는 UVC (파장:254 nm)를 방출하는 튜브가 제공되었다. 양 장치에는 2 개의 상이한 진탕 장치가 제공될 수 있다: 타원형의 왕복운동을 하는 수평 쉐이커, 및 로킹 쉐이커.

노출백

사용된 노출백은 UV 투과성 에틸렌비닐아세테이트(EVA)로 구성되었다. 2가지 크기의 노출백이 사용되었다:

1. 14.5 x 18.5 cm (외부 백표면 대략 268 ㎠)

2. 22.5 x 38 cm (외부 백표면 대략 855 ㎠)

작은 EVA 백을 사용한 실험에서 샘플 부피는 80 ml이었고, 큰 백을 사용한 실험에서는 대략 300-350 ml이었다(전체 혈소판 농축물이 처리되었다).

제 1 실험예 :

진탕 되는 동안 자유롭게 움직이거나 움직이지 않는 혈소판 농축물 현탁액에 대한 S. 에피더미스의 UVB 에 의한 불활성화

본 실험에서 샘플 부피는 80 ml이었다. 2 개의 석영판 사이에 단단히 클램프된 노출백 내의 샘플은 진탕되는 동안 혈소판 현탁액의 자유로운 운동성이 제한되고, 따라서 얇은 층의 형성도 저지되었다. 생성되는 층의 두께는 대략 3 mm이었다. 두 번째 샘플은 석영판들 사이의 간격이 확대되어 진탕 되는 동안 혈소판 현탁액이 자유롭게 움직일 수 있었다. 양 샘플은 1 J/㎠로 조사되었다.

표 1이 보여주는 바와 같이, 고정된 샘플내 박테리아 역가는 대략 2 log₁₀만큼 감소하였고, 이에 반해 고정되지 않고 느슨하게 배치된 샘플들에서는 4 log₁₀ 이상 감소하였다.

[표 1]

샘플 표시	박테리아 역가(log₁₀CFU/ml)
비처리된 대조	4.1±0.03
단단히 클램프된 샘플	1.4±1.29
미고정 배치 샘플	-0.40±0.35

제 2 실험예 :

진탕 하면서, 고정되지 않거나 또는 단단히 클램프된 노출백 내 전체 혈소판 농축물 안의 S. epidermidis 의 UVB 에 의한 불활성화

이 실험에서는 혈소판 농축물의 부피는 330 ml이고, 따라서 큰 EVA 백 안의 평균 층 두께는 대략 3.9 mm이었다. 혈소판 농축물들은 하기 조건하에서 3 UVB 조사량(0.8, 1.0 및 1.2 J/㎠)으로 조사되었다:

1. 진탕하지 않고, 석영판들 사이에 고정되지 않고 느슨하게 배치됨

2. 진탕하면서, 석영판들 사이에 압착됨.

실험 결과, 표 2에 나타낸 바와 같이, 진탕 되는 동안 단단히 클램프 된 혈 소판 농축물들은 UVB 조사에 의해 박테리아 역가가 대략 2 log₁₀ 만큼 감소하였고, 이에 반해 고정되지 않고 배치된 샘플들에서는 조사량에 따라 대략 3.4 내지 4 log₁₀이상 감소하였다.

[표 2]

샘플 배치	UVB 조사량(J/㎠)	박테리아 역가(log₁₀CFU/ml)
진탕되며,단단히 클램프됨	0	4.11±0.00
진탕되며,단단히 클램프됨	0.8	2.14±0.48
진탕되며,단단히 클램프됨	1.0	1.95±0.03
진탕되며,단단히 클램프됨	1.2	1.99±0.03
진탕되며, 미고정배치	0	4.19±0.11
진탕되며, 미고정배치	0.8	0.77±0.69
진탕되며, 미고정배치	1.0	-0.14±0.05
진탕되며, 미고정배치	1.2	-0.40±0.05

제 3 실험예 :

자유롭게 움직이거나 또는 고정된 혈소판 농축물 분취량 내의 그 밖의 박테리아에 대한 UVB 에 의한 불활성화

앞의 두 실험으로부터 혈소판 농축물 내의 S. 에피더미스는 UV가 조사되는 동안 혈소판 농축물 현탁액들이 자유롭게 움직일 수 있는 조건하에서 효과적으로 불활성화될 수 있음을 명확히 알 수 있었다. 다음의 실험에서는 하기의 추가 박테리아 균주가 테스트되었다: S. 아우레우스 , B. 세레우스 및 K. 뉴모니아 .

실험 조건은 제 1 실험예와 동일했다. 모든 3 가지 경우에서, S. 에피더미스와 유사한 결과를 보였다: 고정되지 않고 배치된 혈소판 농축물 샘플들에서 박테리 아는 대략 3.9 내지 4.25 log₁₀ 만큼 불활성화된 반면, 고정된 샘플들에서는 역가가 단지 대략 2 내지 3.4 log₁₀ 감소하였다(표 3).

[표 3]

박테리아 균주	샘플 표시	박테리아 역가(log₁₀CFU/ml)
S. 아우레우스	미처리 대조	4.88±0.00
S. 아우레우스	단단히 클램프됨, 진탕됨	1.49±1.30
S. 아우레우스	미고정 배치됨, 진탕됨	0.97±0.86
B. 세레우스	미처리 대조	4.99±0.09
B. 세레우스	단단히 클램프됨, 진탕됨	2.99±0.13
B. 세레우스	미고정 배치됨, 진탕됨	0.74±0.68
K. 뉴모니아	미처리 대조	4.94±0.08
K. 뉴모니아	단단히 클램프됨, 진탕됨	2.34±0.24
K. 뉴모니아	미고정 배치됨, 진탕됨	1.00±0.89

제 4 실험예 :

혈소판 농축물 분취량 내 S. 에피더미스에 대한 상이한 진탕 조건하에서의 UVB에 의한 불활성화

전술한 제 1 내지 제 3 실험에서 사용된 것과 왕복운동 하는 수평 쉐이커와 다른 장치를 사용하는 경우에도, 고정되지 않고 위치된 혈소판 농축물 분취량내 S. 에피더미스의 불활성화가 향상되는지 여부를 조사하였다. 하기 실험에서는 원형운동을 실시하는(반경: 3 cm, 회전속도: 50/min) 오비탈 쉐이커(orbital shaker)를 사용하였고, 또한 분당 50 번의 상하운동을 하는 로커(rocker)를 사용하였다. 또다시, 두 샘플 중 하나는(80ml) 석영판들 사이에 단단히 클램프 되었고 다른 하나는 고정되지 않고 느슨하게 배치되었다. 표 4에 나타내 결과에서 알 수 있는 바와 같 이, 고정되지 않고 배치된 혈소판 농축물 샘플들에서의 박테리아 비활성화의 정도는 단단히 클램프된 혈소판 농축물 샘플들보다 3 내지 4 log₁₀만큼 더 높았다.

[표 4]

쉐이커	샘플 표시	박테리아 역가(log₁₀CFU/ml)
-	미처리 대조	4.94±0.16
오비탈	단단히 클램프됨	4.23±0.00
오비탈	미고정 배치 샘플	0.50±0.39
로커	단단히 클램프됨	4.02±0.17
로커	미고정 배치	0.87±0.78

제 5 실험예 :

진탕 되는 동안 자유롭게 움직이거나 움직이지 않는 혈소판 농축물 분취량 내 수이드 헤르페스 바이러스( SHV -1)에 대한 UVB 에 의한 불 활성화

박테리아뿐만 아니라 바이러스와 관련하여 UV 조사 동안 고정되지 않은 혈소판 농축물 내의 병원체의 불활성화의 향상이 있는 지의 여부를 조사하기 위해 다음의 실험이 실시되었다: 수이드 헤르페스 바이러스(SHV-1)를 80 ml의 혈소판 농축물 분취량에 삽입하고, 상기 제 1 실험예에서 기술한 대로 UVB 처리하였다. 자유로이 배치된 샘플들에서 바이러스 역가는 거의 4 log₁₀만큼 감소했고, 이에 반해 단단히 클램프된 샘플들에서는 단지 대략 3 log₁₀만큼 감소했다. 이는, 상기 조건하에서 바이러스들의 불활성화도 현저히 개선됨을 입증한다.

[표 5]

샘플 표시	바이러스 역가(Log₁₀TCID₅₀)
미처리 대조	4.4±0.2
단단히 클램프된 샘플	1.41±0.18
미고정 배치 샘플	0.56±0.15

제 6 실험예 :

진탕 되는 동안 자유롭게 움직이거나 움직이지 않는 혈소판 농축물 분취량 내 수포성 구내염 바이러스(VSV)에 대한 UVB 에 의한 불활성화

상기 제5 실험예에서, 혈소판 농축물 분취량에 SHV-1 대신 VSV이 삽입되는 점을 제외하고는 동일한 방식으로 실시되었다. 역시 고정되지 않고 배치된 샘플들에서의 바이러스 불활성화의 정도는, 노출되는 동안 석영판들 사이에 고정되었던 비교 샘플들에서보다 6.46 log₁₀ 만큼 더 높았다(표 6). 특히 본 실험에서는 바이러스 역가가 상당히 많이 감소한 것이 눈에 띈다(대략 5.4 log₁₀). 이로부터 VSV가 SHV-1보다 UV에 감수성이 높은 것을 명백히 알 수 있다.

샘플 표시	바이러스 역가(Log₁₀TCID₅₀)
미처리 대조	6.7±1.05
단단히 클램프된 샘플	1.29±1.05
미고정 배치 샘플	≤0.24±0.00

제 7 실험예 :

진탕 되는 동안 자유롭게 움직이거나 움직이지 않는 혈소판 농축물 분취량 내 S. 에피더미스에 대한 UVC 에 의한 불활성화

본 실험에서는 UVB 대신 UVC가 조사되었다. UV 조사량은 0.3 J/㎠이었다(노출 시간: 60 초). 그밖에 조건은 제 1 실험예에서 기술된 바와 같았다. 표 7에서 알 수 있듯이, 고정된 샘플들 안의 박테리아 역가는 단지 대략 1 log₁₀만큼 감소했다. 이는 명백히 UVC의 혈소판 현탁액으로의 적은 침투깊이를 반영한다. 이에 반해, 고정되지 않고 배치된 샘플들에서는 더 이상 박테리아가 발견되지 않았다; 불활성화 계수는 4 log₁₀보다 더 컸다.

[표 7]

샘플 표시	(log₁₀CFU/ml)
미처리 대조	4.08±0.04
단단히 클램프된 샘플	2.99±0.13
미고정 배치 샘플	≤0.24

제 8 실시예 :

진탕 되는 동안 자유롭게 움직이거나 움직이지 않는 혈소판 농축액 분취량 내 VSV 에 대한 UVC 에 의한 불활성화

상기 제 6 실험예에서와 같이 시험 바이러스로서 VSV가 사용되었다. 조건은 상기 제 7 실험예와 동일했다. 표 8에 나타낸 바와 같이, 이 경우에도 고정된 샘플들에서보다 고정되지 않고 배치된 샘플들에서 병원체에 대한 불활성화의 정도가 훨씬 뚜렷함을 보여준다: 고정된 샘플에서의 바이러스 역가는 단지 대략 1.5 log₁₀만큼 감소했지만, 고정되지 않은 샘플에서는 거의 6.2 log₁₀나 감소하였다.

[표 8]

샘플 표시	바이러스 역가(Log₁₀TCID₅₀)
미처리 대조	6.92±0.22
단단히 클램프된 샘플	5.47±0.21
미고정 배치 샘플	0.74±0.76

Claims

- 헌혈자의 혈액으로부터 및/또는 기계적인 분리반출법(apheresis)을 통해 얻어진 혈소판 농축물을 제공하는 단계,

- 상기 혈소판 농축물을 자외선(UV) 조사에 노출하는 단계를 포함하며,

- 이때, 상기 혈소판 농축물은 개별적으로 조작 가능하며 분리 보존되는 복수의 유닛(unit)으로 구성되고, 및

- 상기 혈소판 농축물 유닛들은 각각 유연하고 UV-투과성인 평탄 노출백 안에 위치되는, 혈소판 농축물(TKs) 내의 병원체 및/또는 백혈구의 불활성화 방법에 있어서,

- 상기 노출백은 상기 노출백의 최대 충전부피의 30부피% 이하로 충전되고,

- 상기 노출백은 UV가 조사되는 동안 이동됨으로써 상기 노출백의 내용물이 순환되고, 이동에 의해 층 두께가 변경되는 구역들이 형성되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 병원체는 바이러스 및/또는 박테리아인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 이동에 의해 상기 구역들은 규칙적으로 1 mm 미만의 층 두께를 갖는 조사 영역(irradiated region)들을 갖는 것을 특징 으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이동, 특히 상기 이동의 진폭은, 혈소판 농축물의 내부에 규칙적으로 0.5 mm 이하의 층 두께를 갖는 조사 영역이 형성되도록 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출백은 상면과 하면을 구비하며, 상기 백의 내용물과 접촉할 수 있는 상기 상면과 하면의 면적의 합은 상기 백 내용물의 내부 전체 표면의 90 표면 퍼센트 이상(surface percent), 바람직하게는 99 표면 퍼센트 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조사는 320 nm 내지 280 nm의 UVB 조사 및/또는 280 nm 내지 200 nm의 UVC 조사, 특히 280 nm 내지 200 nm의 UVC 조사이거나 또는 이들을 포함하며, 바람직하게는 오로지 상기 범위들의 파장을 갖는 조사로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 각 유닛은 최대 8 명까지의 헌혈자, 바람직하게는 최대 6 명까지의 헌혈자의 샘플들로부터 제조되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 각 유닛은 1 명의 헌혈자에서 유래하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈소판 농축물은 1 ml당 1x10⁸이상의혈소판, 바람직하게는 1 ml당 5x10⁸이상의혈소판을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 UVB 조사는 0.3 내지 5 J/㎠, 바람직하게는 0.5 내지 2.5 J/㎠의 빛 에너지로 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 UVC 조사는 0.01 내지 2 J/㎠, 바람직하게는 0.1 내지 1 J/㎠의 빛 에너지로 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈소판 농축물은 혈장 및 경우에 따라 적절한 보존 매질을 포함하며, 이때 혈장 함량은 바람직하게 20 중량% 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈소판 농축물은 수성 완충 보존 매질을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 바이러스, 박테리아 및/또는 백혈구는 불활성화되고, 혈소판의 기능은 변경되지 않고 그대로 남아있는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출백은 5000 ml 이하의 부피를 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출백은, 상기 노출백이 이동되고 조사되는 장치 내에서, 움직일 수 있도록 고정되고, 특히 두 표면 사이가 클램프 되지 않은, 예컨대 UV 통과 유리판들 또는 플라스틱판들 사이에 클램프되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 전체 노출시간의 적어도 4분의 3 동안 상기 노출백이 이동되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출백은 진탕에 의해 이동되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출백은 로킹(rocking)에 의해 이동되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출백은 회전에 의해 이동되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이동은 오비탈 쉐이커, 플랫폼 쉐이커, 로커 쉐이커 또는 텀블러 쉐이커로 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출백의 내용물과 접촉하고 있는 상기 노출백의 전체 상면에 걸쳐서, 상기 노출백이 놓여 있는 표면과 상기 노출백의 상면과의 교차점 사이의 법선을 따라가는 거리와 관련하여 보았을 때, 상기 노출백의 높이가 이동 또는 진탕되는 동안 및 이동 또는 진탕에 의해 지속적으로 변하도록 상기 노출백이 한쪽으로 치우쳐 위치되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출백은 10 mm의 평균 충전높이, 바람직하게는 5 mm 이하의 평균 충전높이를 가지며, 이동에 의해 지 속적으로 파동 골(wave trough)이 발생 되며, 이 파동 골은 상기 평균 충전 높이의 절반이하, 바람직하게는 1 mm 이하, 더욱 바람직하게는 0.1 mm 이하의 층두께를 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노출백은 노출되는 동안 최소한 x 방향으로 지속적으로 0.2 내지 8 cm의 진폭으로 이동되고, 가능하다면 y 방향에서도(x 방향에 대해 직각인 y 방향) 동일하게 이동되며, 이와 독립적으로 진탕 이동 방향의 변경 주파수가 0.5 내지 10 Hz인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조사 동안 노출백은 최대 충전부피의 20% 이하로 충전되는 것을 특징으로 하는 방법.