MX2008008240A - Procedimiento para irradiar concentrados de trombocitos en recipientes flexibles con luz ultravioleta. - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a un procedimiento para la inactivación de patógenos como bacterias y virus y/o de leucocitos en concentrados de trombocitos por irradiación con luz ultravioleta en recipientes de exposición flexibles bajo agitación. El producto sanguíneo se empaca en una bolsa flexible para permitir el intermezclado del fluido por agitación (basculación, rotación, translación). Esto también se promueve por un llenado máximo del 30% de la capacidad total.

Description

PROCEDIMIENTO PARA IRRADIAR CONCENTRADOS DE TROMBOCITOS EN RECIPIENTES FLEXIBLES CON LUZ ULTRAVIOLETA CAMPO DE LA INVENCIÓN La materia objeto de la invención es un procedimiento para inactivar patógenos, como bacterias y virus, ylo de leucocitos en concentrados de trombocitos (TKs) a través de la irradiación con luz ultravioleta.

ANTECEDENTE DE LA INVENCIÓN Se conoce que la aplicación terapéutica de los preparados sanguíneos encierra del riesgo que el receptor de los preparados sanguíneos se infecten con virus o bacterias. A saber, por ejemplo, los virus de hepatitis B (HBV) y la hepatitis C (HCV) así como el agente patógeno del SIDA HIV-1 y HIV-2. El riesgo consiste en que durante la preparación del preparado no se encuentran ninguna etapa para la inactivación o eliminación de los llamados patógenos . La luz ultravioleta (UV) se puede diferenciar según las longitudes de onda. En el marco de esta solicitud se realizan las siguientes definiciones: UVA: menos de 400 a 320 nm, UVB: menos de 320 a 280 nm y UVC menos de 280 a 200 nm. Se sabe que por medio de la irradiación con luz ultravioleta de onda corta, es decir, en la región de ondas por debajo de aproximadamente 320 nm (UVB y UVC9 tanto virus como bacterias se puede inactivar, aproximadamente en el plasma sanguíneo o en los preparados sanguíneos celulares. Por arriba de 320 nm la energía de la irradiación es tan débil para inactivar los microorganismos y virus. Por el contrario los métodos químicos, fotoquímicos y fotodinámicos para la inactivación de patógenos la irradiación sola con luz UV fundamentalmente presenta la ventaja que es efectivo por sí solo y no requiere la adición de químicos reactivos o sustancias fotoactivas . La adición tal o sus productos de escisión o fotoproductos necesitan frecuentemente la eliminación posterior, pues son tóxicos o mutágenos. Además pueden ocasionar la expresión de estructuras de neoantigenos en el preparado que se maneja, cuando se unen a la proteína del plasma y a la superficie celular. Por lo regular, tales adiciones no se pueden eliminar completamente, cuando menos su eliminación requiere un costo adicional. Las etapas de trabajo adicionales pueden perjudicar además la calidad del preparado esterilizado. Lo más efectivo para inactivar los patógenos directamente es la UVC. Por lo demás presenta la desventaja que las soluciones que contienen proteínas como el plasma sanguíneo o las suspensiones turbias (por ejemplo, TKs) las pueden penetrar sólo mínimamente.

La UVC se empleó durante la segunda guerra mundial y poco después, para la esterilización de plasma sanguíneo y soluciones de albúmina, sobre todo para inactivar los virus de hepatitis. Se propone entonces que la solución se conduzca a través de un aparato de flujo transversal como una película delgada a una fuente de luz UVC. Los métodos se muestran como no suficientemente seguros y fueron abandonados (Kallenbach NR, Corneluis PA, Negus D, et al. Inactivation of viruses by ultraviolet light. Curr Stud Hematol Blood Tranfus 1989, 56, 70-82). En el presente se han establecido según en mismo principio métodos de trabajo para esterilizar preparaciones de proteína de plasma terapéutica. En todos los casos se trata de manejar grandes volúmenes, es decir recopilación de plasma o soluciones de proteína hasta unos cientos de litros y aún más (Hart H, Reid K, Hart W. Inactivation of viruses during ultraviolet light treatment of human intravenous immunoglobulin and albumin. Vox Sang 1993; 64 (2) : 82-8 y Chin S, Williams B, Gottlieb P, et al, Virucidal short wavelength ultraviolet light treatment of plasma and factor VIII concéntrate: protection of proteins by antioxidants; Blood 1995; 86 ( 11) : 4331-6) . Para la esterilización de una multiplicidad de unidades individuales de TKs, que se obtienen de donaciones de sangre o a través de aféresis mecánica - con volumen desde si es preciso hasta unos cientos de mi - no son adecuados los llamados aparatos de flujo transversal. Precisamente esto es algo obligado en la práctica diaria de un banco de sangre. La UVB es igualmente microbicida y virucida, pero no en la misma medida que la UVC. Penetra las soluciones que contienen proteina y las suspensiones turbias algo mejor que UVC, sin embargo se puede constatar su profundidad de penetración, por ejemplo en el plasmo u otros TKs, tampoco en la región de unos pocos milímetros. Se probó la irradiación con UVB, para inactivar los linfocitos T en los TKs, que son sensibles considerablemente a la UV como virus o bacterias. Con esto se puede evitar una alo-inmunización frente a los antígenos HLA exógenos a los receptores de los preparados, que pueden originar, que los receptores se vuelven refractarios frente a transfusiones adicionales de TKs (Andreu G, Boccaccio C, Lecrubier C, et al. Ultraviolet irradiation of platelet concentrates ; feasibility in transfusión practice, Transfusión 1990; 30 (5) ; 401-6 und Pamphilon DH. The rationale and use of platelet concentrates irradiated with ultraviolet-B light. Tranfus Med Rev 1999 ; 13 ( 4 ): 323-33 ) . Sin embargo los métodos no afirman que la filtración de leucocitos desarrollada casi simultáneamente representa una alternativa favorable en una eficiencia semejante pero con dispendio en costos y trabajo (Leucocyte reduction and ultraviolet B irradiation of platelets to prevent alloimmunization to Platelets Study Group ? Engl J Med 1997; 337 (26) .1861-9;) ¦ Se describió igualmente que los virus y las suspensiones de trombocitos se pueden inactivar a través de la irradiación con luz UVB monocromática (longitudes de onda de 308 nm) . Con esto se utilizó un láser excimer; el volumen de la sonda o prueba ascendió a unos mi (Prodouz KN, Fratantoni JC, Boone EJ, Bonner RF. Use of laser-UV for inactivation of virus in blood products. Blood 1987 ; 70 (2 ): 589-92 ) . Sobre estas reglas no se logró publicar nada. En efecto no hay ningún procedimiento a partir de la literatura conocida, con el cual se pudiera descontaminar de virus o bacterias los TKs completos exclusivamente a través de la irradiación con luz UV (es decir UVB o UVC) . Los TKs se obtienen de donantes individuales a través de tromboaféresis mecánica o también se aisla de donaciones de sangre, en donde los trombocitos se conjuntan de múltiples donaciones de sangre (en general 4-6) . El volumen del TK obtenido asi se encuentra en general entre aproximadamente 200 y 350 mi. Pero también se producen los TKs a partir de donaciones individuales de sangre, cuyo volumen correspondiente es más pequeño (entre aproximadamente 40 y 80 mi). Tanto los TKs conjuntados como en aféresis se suspenden los trombocitos ya sea en plasma sanguíneo o en medios de almacenamiento especiales con un contenido de plasma del residuo de aproximadamente 30 a 40%. Los TKs se almacenan en recipientes de plástico impermeables al gas, planos a 20-24°C. Sería deseable esterilizar los TKs en recipientes de este tipo con luz UV. Sin embargo, el mencionado problema consiste en que los preparados sean casi impermeables a la luz UV. Esto se deberá explicar con el siguiente ejemplo: se diseña para la esterilización con UVB y toma un volumen de aproximadamente 300 mi de K, además de una profundidad de penetración de radiación UVB de 1 mm así como la exposición de ambas secciones de la bolsa o recipiente, un recipiente de exposición adecuado debe tener una superficie superior de cuando menos 1500 cm2. Parece difícil, si no excluyente, procesar grandes números de piezas de recipientes dimensionados de este tipo. El problema se volverá aún más grande, cuando en lugar de UVB, se esterilizarán los TKs con UVC, pues su profundidad de penetración aún es bastante menor. De manera sorprendente se ha encontrado que el problema anterior se puede resolver por medio de un procedimiento según la reivindicación 1. Preferentemente las formas de realización son la materia objeto de las reivindicaciones dependientes o se exponen a continuación.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Según la presente invención, los TKs se mueven o agitan en sus recipientes de exposición en forma conveniente. La agitación se realiza de manera intensa que dentro de los TKs se forman capas en forma zonificada, que son tan delgadas que se pueden penetrar por la radiación UV. La agitación debe ser al mismo tiempo tal que las suspensiones de TK se mezclen activamente en el recipiente o bolsa. Ambas cosas se realizan si se dan las siguientes condiciones : 1. Los recipientes de exposición son altamente flexibles, y no se fijan durante la exposición, por ejemplo sujetados entre placas de cuarzo. Se acomodan entonces a cada una de las modificaciones de configuración de la suspensión de TK, que se producen cuando el recipiente se mueve o agita. 2. La agitación del recipiente se realiza ya sea de manera horizontal (lineal en la dirección hacia delante y atrás o en forma circular o elipsoidal) o aún de manera vertical (basculación) . 3. Los recipientes de exposición se llenan cuando máximo al 30%, especialmente cuando máximo el 20% de su volumen de llenado máximo. En todos los casos la inversión de la dirección de movimiento deberá ser tan abrupta que la parte más grande de la suspensión de TK se moverá a consecuencia de su inercia en la dirección original y entonces el resto que se retrasa puede formar una capa delgada, que puede ser penetrada por la radiación UV. En conexión con el mezclado permanente a consecuencia del movimiento del recipiente o bolsa durante la exposición finalmente el TK completo (y los virus y/o bacterias contenidos en el mismo) se expondrá a la radiación UV. Entonces los TKs se esterilizan . Los recipientes o bolsas de exposición se fabrican de material plástico transparentes a los UV. Los materiales convenientes son, por ejemplo acetato de etilenvinilo y poliolefina con reforzamientos de hojas de 1 mm y menores, especialmente reforzamientos de hojas menores de 0.5 mm. Los recipientes de exposición se forman planos y muestran preferentemente ninguna absorción máxima en la región de 200 hasta 320 nm. Los recipientes de exposición son de sólo unos mm de espesor en su estado lleno, por ejemplo son menores de 10 mm y especialmente 5 mm, preferentemente hasta menor de 3 mm, los volúmenes de prueba se toman por ejemplo hasta de 200 o hasta 300 mi. La capacidad máxima (volumen) del recipiente de exposición es cuando menos de aproximadamente un factor de 3, para aproximadamente cuando menos 5 veces más grande, preferentemente cuando menos 10 o aún cuando menos 20 veces más grande que lo usual en su contenido respecto al volumen de prueba que se trate.

Análisis experimentales Los experimentos descritos ilustran la eficiencia del procedimiento, y no se limitan a la inactivación de las bacterias y/o virus mencionados. No existe tampoco ninguna limitante en los TKs de los "donadores aleatorios", que se usan en los ensayos, y el procedimiento según la invención es aplicable también a los preparados de tromboaféresis . Todos los ensayos se realizaron tres a seis veces. Los resultados dados representan cada uno el valor medio + desviación estándar.

Concentrado de trombocitos Los TKs se prepararon a partir de conjuntos de cada vez 5 Buffy Coats, que provienen los mismos de donaciones de sangre regulares. Los TKs tuvieron un volumen de aproximadamente 300 hasta 350 mi; la concentración de trombocitos ascendió a aproximadamente loVml. Los trombocitos se suspendieron en un medio de almacenamiento SSP+ (producto de la compañía MacoPharma) . El contenido de plasma restante ascendió a aproximadamente 30 a 40%.

Análisis bacteriológicos En los ensayos de inactivación se colocaron las siguientes cepas de bacterias Staphylococcus (S.) epidermis Staphylococcus (S) aureus Bacillus (B.) cereus Klebsiella (K.) pneumonía Las concentraciones de bacterias se determinarían por medio de un ensayo de formación de colonias y se expresan como unidades formadoras de colonias (CFU)/ml. En los ensayos para la inactivación de bacterias los TKs completos o alícuotas de TK se irradiaron con 104 hasta 105 CFU/ml presentaron un máximo de las especies dadas y entonces se irradiaron con luz UV.

Análisis virológicos Las alícuotas de TK repletas con virus de Herpes Suid (SHV-1, virus de pseudorabia, cepa Aujeszky) o virus de estomatitis vesicular (VSV, cepa Indiana) . La titulación de virus se determinó por medio del ensayo CPE (CPE = efecto citopático) . Se dieron como TCID50 (TCID = dosis infectiva del cultivo de tejido). Como células indicadores sirvieron las Vero-células. La concentración inicial de virus en los ensayos realizados ascendió a aproximadamente 105 hasta 107 TCID50.

Dispositivos de exposición Las instalaciones de exposición usadas estuvieron equipadas con tubos, que emitieron luz UVB. La irradiación se realizó de ambos lados de los recipientes o bolsas de exposición colocadas, es decir desde arriba y desde abajo. La instalación de exposición se proveyó con un dispositivo de vibración que llevó a cabo un movimiento hacia atrás y hacia delante de manera horizontal con una frecuencia de 60 cambios de dirección/min . Una segunda instalación de exposición se equipó igualmente con tubos, que emitieron luz UVB. La irradiación se realizó igualmente en ambos lados. Una tercera instalación (del mismo tipo de construcción que la segunda) se proveyó con tubos, que emitieron luz UVC (longitud de onda: 254 nm) . Ambas instalaciones se proveyeron con 2 diferentes dispositivos de vibración: en un vibrador horizontal, se hizo el movimiento elipsoidal oscilante o hacia atrás y hacia delante, y en uno vibrador basculante.

Recipiente de exposición Los recipientes o bolsas de exposición usados consisten de acetato de etilenvinilo (EVA) , que es permeable a la luz UV. Se usaron dos tamaños de recipiente o bolsa: 1. 14.5 x 18.5 cm (superficie exterior del recipiente aproximadamente 268 cm2) 2. 22.5 x 38 cm (superficie exterior del recipiente aproximadamente 855 cm2) . En los ensayos con los recipientes o bolsas de EVA más pequeños el volumen de la sonda o prueba asciende a 80 mi, en el recipiente más grande asciende a aproximadamente 300-350 mi (se manejo el TKs completo) .

Ejemplo 1 de ensayo: Inactivación de S. epidemidis a través de UVB, con y sin movimiento libre de la suspensión de trombocitos durante la vibración . En el ensayo el volumen de la muestra ascendió a 80 mi. La capacidad de agitación de la suspensión de trombocitos durante la vibración y con eso se evitó la formación de una capa delgada en la muestra, que el recipiente de exposición se fije por sujeción entre dos placas de cuarzo. El espesor de la capa resultante ascendió a aproximadamente 3 mm. En la segunda muestra se agrandó la distancia entre las placas de cuarzo, que la suspensión de trombocitos se pudo agita libremente durante la vibración. Ambas muestras fueron irradiadas con 1 J/cm2. Como se muestra en la Tabla 1, el titulo de bacterias se reduje en las muestras fijadas aproximadamente 2 logio, en que los aislados colocados enfrente más que aproximadamente 4 logio.

Tabla 1 Denominación de la muestra Titulo de bacterias (logio CFU/ml) Control no tratado 4.1 + 0.03 Muestra sujetada fijamente 1.4 + 1.29 Muestra colocada de manera suelta -0.40 + 0.35 Ejemplo 2 de ensayo Inactivación de S. epidemidis a través de UVB en TKs completos , recipiente de exposición suelto contra fijo, con vibración El volumen de TK en este ensayo ascendió a 330 mi, el espesor de capa promedio en recipientes de EVA de aproximadamente fue de 3.9 mra. Los TKs se irradiaron bajo las siguientes condiciones con 3 dosis de UVB (0.8, 1.0 y 1.2 J/cm2) : 1. Sin vibración, colocado suelto entre las placas de cuarzo 2. Con vibración, presionado entre las placas de cuarzo. Como lo muestran los resultados del ensayo (Tabla 2) , en los TKs se sujetaron fijamente durante la vibración, durante el tratamiento con UVB del titulo bacteriano se reduce hasta aproximadamente 2 logi0, en cambio en las muestras colocadas de manera suelta dependiendo de la dosis aproximadamente 3.5 hasta más de 4 logi0.

Tabla 2 Colocación de la muestra Dosis de UVB ÍJ/cm2) Título bacteriano (loqioCFU/ml) Agitado, sujetado firmemente 0 4. 11 + 0.00 Agitado, sujetado firmemente 0.8 2. 14 + 0.48 Agitado, suj etado firmemente 1.0 1. 95 + 0.03 Agitado, sujetado firmemente 1.2 1. 99 + 0.03 Agitado, suelto 0 4. 19 + 0.11 Agitado, suelto 0.8 0. 77 + 0.69 Agitado, suelto 1.0 -0, .14 + 0.05 Agitado, suelto 1.2 -0. .40 + 0.05 Ejemplo 3 de ensayo: Inactivación de bacterias adicionales en alícuotas de TK de agitación libre o fijas con UVB A partir de los dos primeros ejemplos de ensayo sucede que la S. epidermidis en los TKs bajo la suposición que la suspensión de TK se puede agitar durante la irradiación con UV, se inactiva de manera efectiva. En el siguiente ensayo se probaron las cepas de bacterias adicionales: A. aureus , B. cereus y K. pneumoniae. Las condiciones fueron las mismas que las descritas en el ejemplo 1 de ensayo. En todos los tres casos se obtuvieron resultados semejantes como con S. epidermidis: en las muestras de TK colocadas sueltas se inactivaron las bacterias en aproximadamente 3.9 hasta 4.25 logio, mientras que el titulo en las muestras fijas solo se redujeron en aproximadamente 2 hasta 3.4 logio (Tabla 3).

Tabla 3 Cepa bacteriana Designación de la muestra Titulo bacteriano (loqioCFU/ml) s . aureus control no tratado 4. 88 + 0. , 00 s . aureus agitado, sujetado firme 1. 49 + 1. .30 s . aureus agitado, colocado suelto 0. 97 + 0. .86 B. cereus control no tratado 4. 99 + 0. .09 B. cereus agitado, sujetado firme 2. 99 + 0. .13 B. cereus agitado, colocado suelto 0. 74 + 0. .68 K. pneumoniae control no tratado 4. 94 + 0. .08 K. pneumoniae agitado, sujetado firme 2. 34 + 0. .24 K. penumoniae agitado, colocado suelto 1. 00 + 0. .89 Ejemplo 4 de ensayo: Inactivación de S. epidermidis en alícuotas de TK or medio de UVB bajo condiciones de agitación diferentes Se examinó si la inactivación de S. epidermidis en las alícuotas de TK colocadas sueltas aumenta cuando se coloca el vibrador horizontal usado en los ensayos 1 a 3, el que como se mencionó se agita o vibra de atrás hacia delante o de manera oscilante. En los siguientes ensayos se utilizó un vibrador orbital, el cual lleva a cabo un movimiento en forma circular (Radio: 3 cm, número de giros 50/min) , además una báscula con 50 basculaciones de un lado a otro por minuto. De nuevo una de ambas muestras (80 mi) se sujetan firmemente entre placas de cuarzo, la otra se colocó suelta. Como se observa de los resultados mostrados de la Tabla 4, esta vez la proporción de la inactividad bactericida en las muestras de TK colocadas sueltas fue de aproximadamente 3 a 4 logio más alta que en las sujetadas firmemente .

Tabla 4 Vibrador Designación de la muestra Titulo de bacterias (loqioCFU/ml¾ control no tratado 4.94 + 0.16 orbital sujetado firmemente 4.23 + 0.00 Orbital colocado suelto 0.50 + 0.39 Báscula sujetado firmemente 4.02 + 0.17 Báscula colocado suelto 0.87 + 0.78 Ejemplo 5 de ensayo: Inactivación de herpes virus Suid con UVB, alícuotas de TK con agitación libre durante la vibración Para examinar si el aumento de inactivación de patógenos en TKs, que durante la irradiación con luz UV no se fijaron, conciernen no sólo a bacterias sino a virus, se realizó el siguiente ensayo: las alícuotas de TK de 80 mi se llenaron con virus de herpes Suid (SHV-1) y como se describe en el ejemplo 1 de ensayo, se trato con UVB. En las muestras colocadas libremente el título de virus se redujo en aproximadamente 4 logio, en las sujetadas firmemente por el contrario sólo fue de aproximadamente 3 logio. Esto confirma que bajo las condiciones nombradas también se mejora la inactivación de los virus.

Tabla 5 Designación de la muestra Título de virus (logi0TCID5o) Control no tratado 4.4 + 0.2 Muestra sujetada firmemente 1.41 + 0.18 Muestra colocada suelta 0.56 + 0.15 Ejemplo 6 de ensayo: Inactivación de los virus de estomatitis vesicular con UVB, sin o con agitación libre de las alícuotas de TK durante la vibración La realización se llevó a cabo como se describe en el ejemplo 5 de ensayo, solo que las alícuotas de TK en lugar de SHV-1 se llenaron con VSV. De nuevo la proporción de inactivación del virus en las muestras colocadas sueltas con más de 6.46 logio más fuerte que en las muestras de comparación, que lo fueron las que se fijaron expuestas entre placas de cuarzo (Tabla 6) . Por lo demás, llama la atención que también en estos los títulos de virus se redujeron relativamente de manera importante (aproximadamente 5.4 logio) . Se da a conocer que VSV es más sensible a la luz UV que SHV-1.

Tabla 6 Designación de la muestra Título de virus (logipTCIDsp) Control no tratado 6.7 + 1.05 Muestra sujetada firmemente 1.29 + 1.05 Muestra colocada suelta < 0.24 + 0.00 Ejemplo 7 de ensayo: Inactivación de S. epidermidis con UVC, con y sin agitación libre de alícuotas de TK durante la vibración En este ensayo la irradiación se realizó con UVC en lugar de UVB. La dosis de luz UV ascendió a 0.3 J/cm2 (tiempo de exposición: 60 segundos) . En tanto que las condiciones fueron las que se describen en el ejemplo 1 de ensayo. Como resulta de la Tabla 7, el título de bacterias se redujo en las muestras fijadas en sólo aproximadamente 1 logio. Esto refleja la profundidad de penetración mínima de UVC en la suspensión de trombocitos. En las muestras colocadas sueltas por el contrario ninguna bacteria fue demostrable; el factor de inactivación fue más grande de 4 logio- Tabla 7 Designación de la muestra Título de bacterias (loqioTCIDso) Control no tratado 4.08 + 0.04 Muestra sujetada firmemente 2.99 + 0.13 Muestra colocada suelta < 0.24 Ejemplo 8 de ensayo: Inactivación de VSV con UVC, sin o con agitación libre de las alícuotas de TK durante la vibración . Como en el ejemplo 6 de ensayo, se estableció como virus de prueba el VSV. Las condiciones fueron las mismas como en el ejemplo 7 de ensayo. Los resultados mostrados en la Taba 8 muestran que también en este caso la proporción de inactivación patogénica en las muestras colocadas sueltas muchos fueron expresados como en las fijadas: mientras que el titulo de virus en éstas sólo se redujo en aproximadamente 1.5 logio, en la muestra no fijada fue de aproximadamente 6.2 logio.

Tabla 8 Designación de la muestra Titulo de virus (log10TCID5o) Control no tratado 6.92 + 0.22 Muestra sujetada firmemente 5.47 + 0.21 Muestra colocada suelta 0.74 + 0.76

Claims (25)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiéndose descrito la presente se considera como novedad, y por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. Procedimiento para inactivar patógenos y/o leucocitos en concentrados de trombocitos (TKs) , que comprende las etapas: preparación de TKs obtenido de aféresis mecánica y/o sangre de donación, exponer los TKs a una irradiación con luz ultravioleta (UV) , - en donde los TKs consisten de una multiplicidad de unidades manipulables individuales y que se conservan separadas, y - las unidades de TK se encuentran cada una en recipientes o bolsas de exposición planas, permeables a la luz UV, flexibles, caracterizado porque los recipientes o bolsas de exposición se llenan a menos que el 30% del volumen de llenado máximo del recipiente o bolsa de exposición, los recipientes o bolsas de exposición se mueven o agitan durante la irradiación con luz UV, de modo gue el contenido de los recipientes se revuelva y a través del movimiento o agitación se formen espesores de capas que cambian con las zonas.

2. Procedimiento de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue los patógenos son virus y/o bacterias .

3. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque a través del movimiento o las zonas presentan regiones irradiadas para las cuales se dan espesores de capas momentáneos, periódico, por debajo de 1 mm.

4. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el movimiento o agitación, especialmente la amplitud del movimiento, se realiza tal que dentro de los TKs se forman regiones irradiadas, en las gue el espesor de capa momentáneo, periódico, es menor que 0.5 mm.

5. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los recipientes de exposición presentan un lado inferior y un lado superior y la suma de las superficies del lado inferior y del lado superior, las cuales están o pueden estar en contacto con el contenido de los recipientes, ascienden a más del 90 por ciento de las superficies, preferentemente más del 99 por ciento de las superficies de las superficies totales interiores del contenido de los recipientes .

6. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la irradiación con UVB es de menos de 320 nm hasta 280 nm y/o con UVC es menor de 280 nm hasta 200 nm, especialmente con UVC es o comprende menor de 280 nm hasta 200 nm y preferentemente de manera exclusiva compuesto como irradiación con longitudes de onda por arriba de la región nombrada .

7. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque cada unidad se prepara a partir de muestras de hasta máximo 8 donadores, preferentemente de hasta máximo 6 donadores.

8. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque cada unidad proviene de un donador.

9. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los TK contienen cuando menos 1 x 108 trombocitos por mi, preferentemente cuando menos 5 x 108 trombocitos por mi.

10. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la irradiación con ÜVB se produce con una energía de luz de 0.3 hasta 5 J/cm2, preferentemente desde 0.5 hasta 2.5 J/cm2.

11. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque la irradiación con UVC se produce con una energía de luz de 0.01 hasta 2 J/cm2, preferentemente desde 0.1 hasta 1 J/cm2.

12. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los TKs contienen plasma o dado el caso un medio de almacenamiento conveniente, en donde el contenido de plasma preferentemente asciende a más del 20% en peso.

13. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los TKs contienen un medio de almacenamiento acuoso, amortiguado.

14. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque se inactivan los virus, bacterias y/o leucocitos y la función de los trombocitos permanece esencialmente sin modificación .

15. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los recipientes o bolsas de exposición tienen un volumen de hasta 5000 mi.

16. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los recipientes o bolsas de exposición en el aparato, en el que se agitan e irradian, se sujetan para agitación y especialmente no se sujetan entre dos superficies, por ejemplo placas de plástico o vidrio permeables a la luz UV.

17. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque durante cuando menos tres cuartos de la duración total de la exposición los recipientes o bolsas de exposición de agitan .

18. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los recipientes de exposición se agitan por medio de vibradores .

19. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizado porque los recipientes de exposición se agitan por basculacion.

20. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizado porque los recipientes o bolsas de exposición se agitan por rotación.

21. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque las vibraciones se realizan con un vibrador orbital, vibrador de plataforma, vibrador oscilante o vibrador tambaleante.

22. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los recipientes o bolsas de exposición se colocan por un lado, de modo que durante y a través de la agitación o vibración se modifica continuamente la altura de los recipientes de exposición, con respecto a la distancia a lo largo de la normal de la superficie entre las superficies, se exponga del recipiente de exposición y el punto de intersección se considera con la superficie superior del recipiente de exposición sobre la superficie superior completa del recipiente de exposición, que se pone en contacto con el contenido para exposición.

23. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los recipientes de exposición presentan una altura total media de 10, preferentemente de menos de 5 mm y por el movimiento o agitación se producen valles continuos de las ondas, los cuales espesores de las capas son más pequeños que la mitad de la altura total media, preferentemente los espesores de las capas son menores de 1 mm o aún menores de 0.1 mm.

24. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los recipientes de exposición se agitan continuamente durante la exposición con una amplitud de 0.2 a 8 cm cuando menos en la dirección x y dado el caso también en la dirección y (la dirección y hace un ángulo recto con la dirección x) e independientemente de la misma la frecuencia de la modificación de la dirección de la agitación de vibración asciende a 0.5 hasta 10 Hz.

25. Procedimiento de conformidad con una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los recipientes de exposición se llenan como máximo al 20% de su volumen de llenado máximo durante la exposición.