KR20080020768A

KR20080020768A - 항균 효과를 갖는 목단피의 추출물로부터 분리된 신규구조의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린 화합물을유효성분으로 함유하는 조성물.

Info

Publication number: KR20080020768A
Application number: KR1020060084045A
Authority: KR
Inventors: 김윤철; 박현; 손동환
Original assignee: 원광대학교산학협력단
Priority date: 2006-09-01
Filing date: 2006-09-01
Publication date: 2008-03-06
Also published as: KR100822781B1

Abstract

본 발명은 모란(Paeonia suffruticosa)의 뿌리껍질인 목단피(Moutan Cortex Radicis)의 추출물 및 이로부터 분리된 신규 구조의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린 (6'-O-vanillyloxypaeoniflorin) 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로 본 발명의 목단피 추출물로부터 분리된 신규 구조의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 인수 공통 전염병 균주에 대한 뛰어난 항균력을 나타냄으로써 항균조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

목단피, 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린, 항균

Description

항균 효과를 갖는 목단피의 추출물로부터 분리된 신규 구조의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물.{A composition comprising novel 6'-O-vanillyloxypaeoniflorin isolated from an extract of Moutan Cortex Radicis having Antibacterial effect}

현재 의약품의 점유율 15%, 1조 5000억 원의 항생제시장 규모에 대응하기 위하여 신종의 항균제제의 개발은 시급하다. 또한, 한국에서도 경제적 그리고 문화적으로 국제교류가 활발해지고 더불어 외국의 병원성 세균들의 유입 가능성이 더욱 많고 축산물 수입이 증가 됨에 따라 이를 통한 신종세균의 국내 확산이 가속화될 전망이다. 현재 우리나라 축산에 상재하는 세균들은 대부분 기존 항생제에 내성을 나타내고 있어 그 치료가 점차 어려워지고 있다. 이들 치료 문제점은 이들 세균에 감염된 축산물을 통한 인체에 전파가 심각할 것이다. 최근 보고에 의하면 인체의 전염성 질병 중 50% 이상이 인수공통전염병으로 나타나고 있어 안전한 축산물 공급은 공중보건상 가장 신중하게 해결해야될 선결 문제이다. 세균들의 항생제 내성 발현은 일부 국한된 항생제에 나타나지 않고 현재 사용되고 있는 거의 모든 약제에 발현되고 있어, 세균의 생리적 그리고 유전학적 성상 분석 결과 어떤 약제도 저항 할 수 있는 능력을 가질 것으로 예상하고 있다. 항생제 내성을 가지는 여러 가지 세균들 중 대표적으로 메티실린-저항 S.아우레우스(methicillin-resistant S. aureus ; MRSA), 반코마이신-저항 엔테로코시( vancomycin-resistant enterococci; VRE), 반코마이신-매개 S. 아우레우스( vancomycin intermediate S. aureus ; VISA), 그리고 최소 6종 이상의 항생제 내성을 가진 대장균(E. coli ) O157:H7 등이다. 우리나라에서만도 MRSA는 병원의 감염 병원체(nosocomial infection agent)로 대형 종합병원에서 80%가까이 상재하고 있다. VRE와 VISA의 경우도 1990년대부터 만연하기 시작하여 전국적으로 확산하여 있는 상태이다. 대장균 O157:H7 경우에도 다수의 병원체 저항(multiple agent resistant)으로 이미 여러 종류의 항생제에 내성을 가지며 아직까지 완벽한 치료항생제가 없는 상태이다. 이 대장균의 경우 이미 미국, 유럽 그리고 가까운 일본에서 빈번히 발생하여 사회적 문제가 되어 있고, 우리나라에서 산발적으로 사람과 가축에서 발생하였다. 그리고 2001년부터 소의 수입이 자유화되면서 이 대장균 상제지역으로부터 축산물이나 생우 수입 시 우리나라에 이 대장균이 만연할 것은 확실하다. 이들 내성균들은 우리나라의 경우 특별한 항생제 선택체계가 없고, 급격한 내성증가 요인은 다른 나라보다 훨씬 크다. 항생제 내성증가는 새로운 고가 항생제 사용증가, 치료기간 증가, 사망률 등을 증가시켜, 결국 경제적 그리고 사회적 문제를 증가시키는 악순환이 되고 있다. 따라서 이러한 문제를 해결하기 위해서는 현재 발생 되고 있는 내성기전을 이해하고 내성을 일으키지 않는 구조의 신종항생제의 개발이 절실히 요구된다.

현재 급격히 증가하는 세균의 약제 내성에 대처하고 다양한 세균을 효과적으 로 치료하기 위해서는 기존의 항생제와는 다른(분자구조, 약제의 효능 등) 신약 개발이 절실히 요구된다. 특히 최근에는 항생제에 대해 내성을 갖는 슈퍼 박테리아들의 출현으로 인하여 새로운 항생제의 개발이 시급히 요청되고 있는 실정이다. 또한 이 신약의 구비해야 할 조건은 살균의 효과뿐만 아니라 사람과 동물의 세포에 부작용이 없는 안전한 약물이어야 한다. 항생제는 아무리 효능이 우수하다 하더라도 시간이 지나면 내성이 생기는데, 천연약물을 이용한다면 충분히 이런 문제를 해결할 수 있으리라 예상된다. 그 이유는 천연물은 현재까지 알려지지 않은 새로운 성분이며, 개개의 작용이 다양한 단일성분의 혼합물이므로, 복합물 상호간의 약리 작용으로 내성 등의 부작용을 감소할 것이라고 사료된다.

현재 축산에 사용되는 많은 항생제의 경우 내성률 심각한 수준에 있으며 일부의 항생제의 경우 100% 근접해 있다. 현재 축산에서 항생제는 주로 사료 첨가제로 또는 육계의 경우 7일에서 10일 사이에 정기적으로 클리닝(Cleaning) 목적으로 사용된다. 보고에 의하면 전국 도축장에 온 소, 돼지, 닭에서 분리한 살모넬라, 장내구균 따위의 식중독균의 항생제 내성률을 조사한 결과 닭 분변에서 나온 대장균은 퀴놀론계 항생제에 57%를 웃도는 내성률을 보였다. 이와 같이 현재 축산에 사용되고 항생제는 대부분 세균들이 내성을 지니고 있어, 축산에 효과적으로 사용할 수 있는 새로운 항생제 개발이 시급하다.

최근 의약품의 연구동향은 여러 가지 부작용이나 독성 및 내성 등이 심각해지고 있으므로 세계적으로 천연물로부터의 의약품 개발에 관한 연구가 활발히 추진되고 있다. 한편, 우리나라를 위시한 동양에서는 장구한 시일을 통하여 천연약물의 하나인 전통약물의 꾸준한 발전을 도모해 온 배경을 갖고있다. 항생물질은 1941년 페니실린(penicillin)이 임상적으로 사용된 후 현재까지 5500여 종이 발견되었고, 이중 100여 종만이 발효 생산되고 있으며, 대부분은 화학적으로 합성된다. 이것들이 질병치료에 효과적으로 이용되기 위해서는 치료용량이 숙주에 대해서는 독성을 주지 않고 감염원에 대해서는 항균효과가 매우 커야 하나 독작용이나 특이한 부작용을 가지고 있으며, 임상적으로 사용된 후 오래지 않아 내성 균주가 증가하는 현상이다. 따라서 독성이 적으며 내성균에 유효한 새로운 항생물질을 연구개발하고, 병용투여와 같은 방법으로 내성균의 출현 및 독성을 감소시키기 위한 연구가 요구되고 있다.

우리나라의 세균성 질병 중 가장 많은 발병률을 보이는 것으로 특히 사람에게는 식품에 매개가 많은 것이 살모넬라증이다. 2,300여 종이 넘는 혈청형이 보고되어 있으며 이들의 증상 또한 거의 비슷하다. 살모넬라(Salmonella )는 균체 내 독소, 세포 독소, 장독소 등 다양한 독소가 존재하고 있어 여러 가지의 임상 증상을 유발할 수 있다. 특히 이 병원균은 장내 상피세포를 투과하여 숙주세포에 침입할 수 있으며 거의 모든 포유동물에 감염되고 사람의 식중독을 일으키는 병원균 중 가장 흔한 균으로 인수 공통전염병을 일으키는 대표적인 균은 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium )이다. 주로 오염된 식육을 통해 사람에 전파되고 대개 급성장염, 고열, 패혈증 등으로 증상이 나타난다(Chart H, The pathogenicity of strains of Salmonella paratyphi B and Salmonella java. Journal of Applied Microbiology. 94, pp.340-348, 2003).

균의 조절을 위해 항생제가 도처에 지속적으로 사용되어 왔으며, 이러한 항생제나 항균 물질 등의 오, 남용으로 인해 최근 항생제 내성균들이 등장하여 사회적으로 큰 문제가 되고 있다. 이러한 문제 인식이 확산 됨에 따라 항생제나 항균 물질의 사용을 자제하는 사회적 분위기가 조성되고 있으며, 이와 더불어 항생제를 대체할 수 있는 물질에 대한 연구 또한 활발하여 오래전부터 민간요법으로 사용되어 오던 식물이나 생균제(probiotics) 등을 이용하여 항균 효과나 면역 증진 효과 등을 얻고자 하는 연구가 활발히 진행되고 있다.

목단피(Moutan Cortex Radicis)는 모란(Paeonia suffruticosa)의 뿌리껍질로 뿌리에는 파에오놀(paeonol), 파에오노사이드(paeonoside), 파에오노라이드(paeonolide), 파에오니플로린(paeoniflorin)이 함유되어 있다. (향약대사전, 신민교, 정보섭, pp. 526, 1989)

이에 본 발명자들은 천연약품자원으로부터 항균효과를 갖는 물질을 확인하던 중 본 발명의 목단피 추출물 및 이로부터 분리된 신규 구조의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린 화합물이 항균 효과가 뛰어남을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 인수 공통 전염병 균주에 대한 항균 효과를 갖는 목단피 추출물 및 이로부터 분리된 신규 구조의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린 화합물을 유효성분으로 함유하는 항균조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 인수 공통 전염병 균주에 대한 항균 효과를 갖는 목단피 추출물 및 이로부터 분리된 신규 구조의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항균조성물을 제공한다.

구체적으로는, 본 발명은 하기 구조식 (1)로 표기되는 신규 구조의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린 및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:

(1)

상기 목단피 추출물로부터 분리된 화합물은 모란(Paeonia suffruticosa)의 뿌리껍질인 목단피로부터 분리됨을 특징으로 한다.

또한, 상기 추출물은 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성 용매 가용 추출물로써, 조추출물은 물, 탄소 수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매, 바람직하게는 에탄올로 추출한 것을 포함하고, 극성용매 가용 추출물은 물, 에탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택되어진 용매, 바람직하게는 부탄올에 가용된 추출물이고, 비극성용매 가용추출물은 헥산, 클로로포름, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트로부터 선택되어진 용매, 바람직하게는 클로로포름 및 에틸아세테이트에 가용된 추출물을 의미한다.

본원에서 정의되는 인수 공통 전염병의 대상 동물은 돼지, 소, 염소 등의 포유류; 잉어, 금붕어 등의 어류; 및 꿩, 닭, 오리, 칠면조 등의 가금류를 포함한다.

또한 본원에서 정의되는 인수 공통 전염병 균주는 인형균(Mycobacterium tuberculosis), 우형균(Mycobacterium bovis), 바실러스 안테라시스(Bacillus anthracis), 브루셀라 속 균주(Brucella abortus , B. melitensis , B. suis , B. canis), 렙토스피라병 균주(Leptospira canicola , L. pomona , L. icterohaemorrhagiae, L. ballum), 비저 균주(Pseudomonas mallei), 유비저 균주(Pseudomonas Pseudomallei), 에리시페로트릭스 류시오파티에(Erysipelothrix rhusiopathiae(E. insidiosa), 시겔라 디센테리에(Shigella disenteriae), 시겔라 프렉스네리(S. flexneri), 시겔라 보이디(S. boydii), 시겔라 소네이(S. sonnei), 에르시내 페스티스(Yersinea pestis), 프란시셀라 투라렌시스(Francicella tularensis), 에르시니아 슈도튜버쿨로시스(Yersinia pseudotuberculosis), 에르시니아 엔테로코리티스(Yersinia enterocolitis), 리스테리아 코노시토게네스(Listeria monocytogenes), 파스테우렐라 멀토시다(Pasteurella multocida), 스트렙토바실러스 모니리포르미스(Streptobacillus moniliformis), 스피릴리움 미노르(Spirilium minor(Spirillum minus)), 보레리아 레쿠렌티스(Borrelia recurrentis), 스트렙토코커스 피오제네스(Streptococcus pyogenes), 스트렙토코커스 아갈락티애(S. agalactiae), 스트렙토코커스 에퀴미리스(S. equimilis), 스트렙토코커스 패칼리스(S. faecalis), 클로스트리디움 테타니(Clostridium tetani), 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 클로스트리디움 노비(Cl. novyi), 클로스트리디움 셉티쿰(Cl. septicum), 클로스트리디움 히스토리티쿰(Cl. histoliticum), 클로스트리디움 스포로제네스(Cl. sporogenes), 퓨소박테리움 네크로포룸(Fusobacterium necrophorum), 살모넬라 티피(Salmonella typhi), 살모넬라 파라티피(S. paratyphi), 살모넬라 갈리나리움(Salmonella gallinarium), 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium), 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis), 참피로박터 페투스(Champylobacter fetus( subsp.fetus, venerealis)), 참피로박터 제주니(C. jejuni), 참피로박터 콜리(C. coli), 액티노마이세스 보비스(Actinomyces bovis), 액티노마이세스 이스래리(A. israelii), 노카르디아 아스테리오이데스(Nocardia asterioides), 노카르디아 마두래(N. madurae), 노카르디아 파르시니카(N. farcinica), 라비에스 바이러스(Rabies virus), 한탄 바이러스(Hantan virus), 서울 바이러스(Seoul virus), 푸마라 바이러스(Puumala virus), 헤르페스바이러스 시미애(Herpesvirus simiae(herpesvirus B), 필로비리대(Filoviridae(Marburg virus)), 파라믹소바이러스(Paramyxovirus)속의 뉴캐슬 바이러스(Newcastle virus), 오르토폭스바이러스(Orthopoxvirus)속의 카우폭스 바이러스(Cowpox virus), 파라폭스바이러스(Parapoxvirus)속의 슈도카우폭스바이러스(Pseudocowpoxvirus), 파라폭스바이러스(Parapoxvirus)속의 콘타지오스 푸스투라 더마티티스 바이러스(Contagious pustular dermatitis virus), 구제역 바이러스(Foot and mouth disease virus), 베시큘라 스토마티티스 바이러스(Vesicular stomatitis virus), 아레나바이러스(Arenavirus)속 림포사이틱 코리오메닌기티스바이러스(Lymphocytic choriomeningitis virus), 아레나바이러스(Arenavirus)속 라싸 페버 바이러스(Lassa fever virus), 오르토믹소비리대(Orthomyxoviridae)의 인플루엔자 바이러스(Influenza virus), 플라비바이러스(Flavivirus)속 자페니즈 B 엔세파리티스 바이러스(Japanese B encephalitis virus), 아스퍼질러스 푸미가타(Aspergillus fumigata), 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 스포로트리컴 스케키(Sporothricum scheckii), 콕시디오이데스 이미티스(Coccidioides immitis), 블라스토마이세스 더마티티디스(Blastomyces dermatitidis), 히스토플라스마 캡슐라텀(Histoplasma capsulatum), 하플로스포란지움 파르붐(Haplosporangium parvum), 하플로스포란지움 크레스센스(H. crescens), 트리크피톤 스코엔레이니(Trichphyton schoenleini), 라케차 티피(Richettia typhi(R. mooseri)), 리케차 프로와제키(Richettia prowazekii), 리케차 추추가무시(Rickettsia tsutsugamusi(R. orientali)), 리케차 아카리(R. akari), 콕시엘라 버네티(Coxiella burnetii), 클라마이디아 시타치(Chlamydia psittaci), 엔타모에바 히스토리티카(Entamoeba histolytica), 톡소플라스나 곤디(Toxoplasna gondii), 바란티디움 콜리(Balantidium coli), 파스시올라 헤파티카(Fasciola hepatica), 파스시올라 기간티카(Fasciola gigantica), 클로노르치스 시넨시스(Clonorchis sinensis), 파라고니머스 웨스터마니(Paragonimus westermanii), 디보테리오세팔러스 라텀(Dibothriocephalus latum), 태니아 사기나터스(Taenia saginatus), 태니아솔리움(Taenia solium), 에키노코커스 그라눌로서스(Echinococcus glanulosus), 아스카리스 룸브리코이데스(Ascaris lumbricoides), 아스카리스 수움(Ascaris suum), 비브리오 콜레라(Vibrio cholerae), 이콜라이(Escherichia coli) 및 S.아우레우스(methicillin-resistant S. aureus ; MRSA), 바람직하게는 비브리오 콜레라 O1(Vibrio cholerae O1), 비브리오 콜레라 O139(Vibrio cholerae O139), 시겔라 디센테리애(Shigrlla dysenteriae ), 시겔라 플렉세네리(Shigella flexeneri ), 이 콜라이 O157(E. coli O157), 살모넬라 티피(Salmonella typhi ), 살모넬라 파라티피 A(Salmonella paratyphi A), 메티실린 저항 S. 아우레우스 104(MRSA 104), 메티실린 저항 S. 아우레우스 6(MRSA 6), 이 콜라이 O157(E. coli O157), 메티실린 저항 S. 아우레우스(MRSA), 살모넬라 갈리나리움(Salmonella gallinarium ), 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium ), 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis), 이 콜라이 K99(E. coli K99) 및 이 콜라이 K88(E. coli K88)을 포함한다.

이하, 본 발명의 화합물을 수득하는 방법을 상세히 설명한다.

본 발명의 목단피 추출물은, 건조된 모란 뿌리껍질인 목단피를 세절하여 건조 중량의 약 1 내지 20배, 바람직하게는 약 2 내지 6배의 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 또는 메탄올로, 20 내지 150℃, 바람 직하게는 70 내지 120℃ 추출온도에서 약 1시간 내지 10일, 바람직하게는 약 2시간 내지 5시간 동안 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출 등의 추출방법, 바람직하게는 환류냉각 추출방법을 이용하여 수득한 1 내지 10회, 바람직하게는 2 내지 7회 반복 추출한 후 감압 농축하여 조추출물을 수득하는 제 1단계; 상기 조추출물을 증류수에 현탁한 후, 클로로포름과 에틸아세테이트로 각각 추출하는 제 2단계; 제 2단계에서 수득한 에틸아세테이트 용매 추출물을 클로로포름 : 메탄올 (8 : 1 → 1:1(v/v))을 용출용매로 크로마토그래피를 수행하여 5개의 분획으로 나누는 제 3단계; 상기 제 3단계의 분획 중 세 번째 분획을 세파덱스 컬럼크로마토그래피로 분리하여 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린을 수득하는 제 4단계의 제조 공정을 통해 본 발명의 목단피 추출물로부터 순수 분리된 화합물을 수득할 수 있다.

본 발명은 상기 제법으로부터 분리되는 목단피 비극성용매 가용추출물을 유효성분으로 함유하는 항균조성물을 제공한다.

상기에서 비극성용매 가용추출물은 헥산, 클로로포름, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트로부터 선택되어진 용매, 바람직하게는 클로로포름 또는 에틸아세테이트에 가용된 추출물을 포함한다.

상기 구조식 (1)로 표시되는 본 발명의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린은 당해 기술 분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용 가능한 염으로 제조될 수 있다.

염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산 (free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올 (예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.

이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 시트르산, 말레인산 (maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산 (propionic acid), 구연산 (citric acid), 젖산 (lactic acid), 글리콜산 (glycollic acid), 글루콘산 (gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산 (glutaric acid), 글루쿠론산 (glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르브산, 카본산, 바닐릭산, 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이 때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염 (예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

상기의 구조식 (1)의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린의 약학적으로 허용 가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 구조식 (1)의 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용 가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨염이 포함되며, 아미노기의 기타 약학적으로 허용 가능한 염으로는 히드로브로마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포네이트 (메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트 (토실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.

본 발명은 상기 제조방법으로 얻어지는 목단피 추출물로부터 분리된 신규 구조의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물을 유효성분으로 함유하는 인수 공통 전염병 균주에 대한 항균조성물을 제공한다.

본 발명의 항균조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.

본 발명의 화합물을 포함하는 항균조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 화합물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 화합물을 포함 하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골(macrogol), 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물은 1일 0.0001 내지 100㎎/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 10㎎/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 화합물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 목단피 추출물의 제조

1-1. 목단피 조추출물의 제조

익산시 소재 대학한약국에서 구입한 건조된 모란 뿌리껍질인 목단피를 분쇄기를 이용하여 입자의 크기가 30메시(mesh) 이하가 되도록 분쇄하여 목단피 분말을 수득한 후, 상기에서 수득한 건조된 목단피 분말(2 kg) 질량의 3배에 해당하는 100% 메탄올 용액을 가하여 100℃에서 3시간 동안 환류 냉각 추출하고 여과 및 감 압 농축하여 217 g의 목단피 조추출물을 수득하였다.

1-2. 목단피 극성용매 및 비극성용매 가용 추출물의 제조

상기 실시예 1-1에서 수득한 목단피 조추출물(217 g)을 증류수(1 ℓ)에 현탁하고 분액깔대기에 넣은 후, 여기에 클로로포름(800 ㎖)과 에틸아세테이트(800 ㎖)를 각각 순차적으로 가한 다음 진탕하여 각각의 가용부를 감압농축기를 사용하여 농축하여 목단피의 클로로포름 가용 추출물(56 g), 에틸아세테이트 가용추출물(16 g) 및 물 가용추출물(140 g)을 수득하였다.

실시예 2. 목단피 추출물로부터 6‘-오- 바닐릴옥시파에오니플로린의 분리

상기 실시예 1-2에서 수득한 목단피 에틸아세테이트 가용추출물(16 g)을 실리카겔 컬럼에 걸고 클로로포름 : 메탄올(8 : 1 → 1:1(v/v))을 용출용매로 사용하여 크로마토그래피를 실시하여 박층 크로마토그래피에서 동일한 양상을 나타내는 것들을 합하고 농축하여 5개의 분획(A~E)으로 나누었으며, 세 번째 분획인 C(1.1 g)를 세파덱스(Sephadex LH-20) 컬럼 크로마토그래피(용출용매; 클로로포름 : 메탄올(6 : 1(v/v))를 실시하여 100 ㎖에서 160 ㎖ 사이에 용출된 용매분획을 합하고 농축하여 하기 물성치를 갖는 신규 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린 50mg을 수득하였다.

무색 분말(Colorless powder);

[α]_D ²³ : - 6.0° (c 0.5, MeOH);

UV (MeOH) λmax (log ε) : 201 (4.56), 262 (4.21) nm;

HRFAB-MS m/z 669.5927 (계산치 C₃₁H₃₄O₁₅Na : 669.5917);

¹H-NMR (CD₃OD, 500 MHz) : δ ppm 2.31 (1H, d, J = 12 Hz, H-3a), 2.50 (1H, d, J = 12 Hz, H-3b), 3.08 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-5), 2.33 (1H, d, J = 10.5 Hz, H-6a), 2.92 (1H, dd, J = 10.5, 6.4 Hz, H-6b), 5.04 (1H, d, J = 12 Hz, H-8a), 5.19 (1H, d, J = 12 Hz, H-8b), 5.95 (1H, s, H-9), 1.71 (3H, s, H-10), 5.18 (1H, d, J = 7.3 Hz, H-1′), 4.06 (1H, t, J = 8.7 Hz, H-2′), 4.26 (1H, t, J = 8.7 Hz, H-3′), 4.10 (1H, t, J = 8.7 Hz, H-4′), 4.14 (1H, dd, J = 8.7, 7.3 Hz, H-5′), 4.97 (1H, dd, J = 11.4, 7.3 Hz, H-6′a), 5.27 (1H, d, J = 11.4 Hz, H-6′b), 8.16 (2H, d, J = 8.7 Hz, H-2˝, 6˝), 7.06 (2H, d, J = 8.7 Hz, H-3˝, 5˝), 7.94 (1H, d, J = 1.3 Hz, H-2), 7.25 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5), 8.02 (1H, dd, J = 8.2, 1.3 Hz, H-6), 3.80 (3H, s, OCH₃);

¹³C-NMR (CD₃OD, 125 MHz) : δ ppm 88.7 (C-1), 86.0 (C-2), 44.6 (C-3), 105.8 (C-4), 43.7 (C-5), 22.9 (C-6), 71.4 (C-7), 60.7 (C-8), 101.6 (C-9), 19.7 (C-10), 100.2 (C-1′), 74.8 (C-2′), 78.1 (C-3′), 71.8 (C-4′), 75.2 (C-5′), 64.9 (C-6′), 121.2 (C-1˝), 132.3 (C-2˝, 6˝), 116.0 (C-3˝, 5˝), 163.6 (C-4˝), 166.5 (C-7˝), 121.5 (C-1), 113.3 (C-2), 148.3 (C-3), 153.3 (C-4), 116.2 (C-5), 124.7 (C-6), 166.5 (C-7), 55.8 (OCH₃).

실험예 1. 항균력 시험

1-1. 공시 균주 및 배지와 균주배양

항균력 측정에 사용된 균주는 인체나 동물에서 분리 야외균주와 ATCC 표준균주이며, 표 2에 균주 목록을 나타내었다. 균주는 TSB(Tryptic Soy broth; Difco, USA) 배지에 접종하여 37℃ 항온기에서 24시간동안 배양하여 실험에 사용하였으며 육안의 관찰을 위해서 뮬러-힌톤(Muller-Hinton; Difco, USA) 한천 배지를 사용하였다.

항균 활성 시험용 균주 목록은 하기 표 2에 나타내었다.

1-2. 디스크 검사법( Bauer - Kirby test )

세균 배양액을 뮬러-힌톤 한천 배지 위에 접종하고 이 위에 항균력 시험용 시료용액을 디스크에 주입하여 배지에 항생제 농도구배가 생기도록한 후 디스크 주위로 생기는 억제환으로 항균력을 측정하였다. 억제환은 항균물질의 용해도와 세균의 민감성정도에 따라 크기가 나타나며 각 항균물질에 대한 민감성은 항균물질마다 일정한 억제환의 크기에 따라 감수성(sensitive, S), 중간내성(intermeditely sensitive, I), 내성(resistant, R)으로 나누어 표기하였다.

A. 목단피 조추출물의 항균력 측정

상기 실시예 1-1의 목단피 조추출물을 1 ㎎/㎖농도로 처리한 후, 디스크 확산법으로 항균력을 측정하였으며, 그 결과를 표 3에 나타내었다.

실험결과, 상기 표 3에서 나타나는 바와 같이 목단피 조추출물은 E. coli O157 ATCC 43890, MRSA 6 동물(닭) 분리주, MRSA 104 사람 분리주, Shigrlla dysenteriae JOL377, Shigella flexeneri JOL378, Vibrio cholerae O1 JOL375 및 Vibrio cholerae O139 JOL376의 세균에 감수성을 나타냄을 확인하였다.

B. 목단피 극성용매 및 비극성용매 가용추출물의 항균력 측정

상기 실시예 1-2로부터 얻은 목단피의 클로로포름, 에틸아세테이트 및 물 가용추출물을 각각 1 ㎎/㎖ 농도로 처리한 후, 디스크 확산법으로 항균력을 측정하였으며, 그 결과를 표 4에 나타내었다.

균주	목단피 극성 및 비극성용매 가용추출물 처리 시 깨끗한 부분의 지름 (mm)
균주	목단피 클로로포름 가용추출물	목단피 에틸아세테이트 가용추출물	목단피 물 가용추출물
E. coli O157 ATCC 43890	8	10	-
E. coli O157 동물 분리주	-	10	-
MRSA 6 동물(닭) 분리주	7	11	-
MRSA 104 사람 분리	7	12	-
Salmonella paratyphi A JOL381	-	13	-
Salmonella typhi JOL380	-	11	-
Shigrlla dysenteriae JOL377	8	14	-
Shigella flexeneri JOL378	13	15	-
Vibrio cholerae O1 JOL375	7	15	7
Vibrio cholerae O139 JOL376	11	16	-

실험결과, 상기 표 4에서 나타나는 바와 같이 목단피의 에틸아세테이트

가용 추출물이 모든 균주에 강한 감수성을 나타냄을 확인하였다.

1-3. 최소 억제 농도 ( Minimum inhibitory concentration , MIC ) 측정

상기 실시예 2에서 수득한 6′-오-바닐릴옥시파에오니플로린의 18종의 시험 균주에 대한 최소 억제 농도 측정을 위하여 뮬러-힌톤 한천배지를 이용하였다.

TSB에 증균된 균을 같은 배지를 이용하여 재증균 후 590nm에서 흡광도를 측정하여 CFU (개/㎖)를 계산 후, 0.85% 생리식염수를 이용하여 1X 10⁵개/㎖로 희석하였다.

측정 농축물은 55~60℃의 뮬러-힌톤 브로스(broth)로 녹이고 희석된 균과 동량으로 넣어 37℃ 항온기에서 24시간 배양하였다. 배양된 균을 멸균된 증류수를 이용하여 100배 희석한 후, 뮬러-힌톤 한천배지에 100㎕ 희석액을 도말하여 37℃ 항온기에서 18시간 배양한 후, 육안으로 관찰하여 군집 수가 100개 미만인 농도를 최소 억제 농도로 결정하여 측정하였으며, 그 결과를 표 5에 나타내었다.

균 주 명	기 원	항균활성 (최소발육농도: μg/ml)
균 주 명	기 원	6′-오-바닐릴옥시파에오니플로린	Kanamycin A^a ⁾	Penicillin G^b ⁾
E. coli O157	ATCC 43890	200	10	50
E. coli O157	ATCC 35150	300	10	50
E. coli O157	동물 분리주	200	ND^c ⁾	ND
E. coli K88	수과연표준균주 (E-126)	200	50	100
E. coli K99	수과연표준균주 (E-125)	200	50	50
MRSA	ATCC 700698	200	ND	100
MRSA 6	동물(닭) 분리주	300	50	ND
MRSA 104	사람 분리주	200	ND	ND
Salmonella enteritidis	수과연표준균주 (Sal-36)	200	50	50
Salmonella gallinarium	수과연표준균주	200	50	10
Salmonella paratyphi A	JOL381	200	ND	ND
Salmonella typhi	JOL380	200	50	ND
Salmonella typhimurium	수과연표준균주 (Sal-13)	200	50	10
Shigella dysenteriae	ATCC 49557	500	ND	ND
Shigrlla dysenteriae	JOL377	200	ND	ND
Shigella flexeneri	JOL378	200	10	ND
Vibrio cholerae O1	JOL375	100	ND	ND
Vibrio cholerae O139	JOL376	100	50	1
^a): 양성대조약물(카나마이신 에이)^b): 양성대조약물(페니실린 지)^c): 100 μg/ml이하의 농도에서 항균활성 없음

실험결과, 상기 표 5에서 나타나는 바와 같이 6′-오-바닐릴옥시파에오니플로린은 인수 공통 감염병을 유발하는 원인균 18종 모두에 대하여 각각 최소 억제 농도가 100~500 ㎍/㎖로 뛰어난 항균력을 나타냄을 확인하였다.

하기에 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

6′-오-바닐릴옥시파에오니플로린 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

6′-오-바닐릴옥시파에오니플로린 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

6′-오-바닐릴옥시파에오니플로린 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

6′-오-바닐릴옥시파에오니플로린 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO₄12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

6′-오-바닐릴옥시파에오니플로린 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

상술한 바와 같이, 목단피(Moutan Cortex Radicis)의 추출물 및 이로부터 분리된 신규 구조의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 인수 공통 전염병 균주에 대한 뛰어난 항균력을 나타냄으로써 항균조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

Claims

하기 구조식 (1)로 표기되는 신규 구조의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린 및 이의 약학적으로 허용가능한 염:

(1)
제 1항의 구조식 (1)로 표기되는 신규 구조의 6‘-오-바닐릴옥시파에오니플로린 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 인수 공통 전염병 균주에 대한 항균조성물.
제 2항에 있어서, 상기 화합물은 목단피(Moutan Cortex Radicis)로부터 분리됨을 특징으로 하는 항균조성물.
목단피 비극성용매 가용추출물을 유효성분으로 함유하는 인수 공통 전염병 균주에 대한 항균조성물.
제 4항에 있어서, 상기 비극성용매 가용추출물은 헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로부터 선택된 용매에 가용한 추출물인 항균조성물.
제 2항 또는 제 4항에 있어서, 상기 인수 공통 전염병 균주는 인형균(Mycobacterium tuberculosis), 우형균(Mycobacterium bovis), 바실러스 안테라시스(Bacillus anthracis), 브루셀라 속 균주(Brucella abortus , B. melitensis , B. suis , B. canis), 렙토스피라병 균주(Leptospira canicola , L. pomona , L. icterohaemorrhagiae, L. ballum),비저 균주(Pseudomonas mallei), 유비저 균주(Pseudomonas Pseudomallei), 에리시페로트릭스 류시오파티에(Erysipelothrix rhusiopathiae(E. insidiosa), 시겔라 디센테리에(Shigella disenteriae), 시겔라 프렉스네리(S. flexneri), 시겔라 보이디(S. boydii), 시겔라 소네이(S. sonnei), 에르시내 페스티스(Yersinea pestis), 프란시셀라 투라렌시스(Francicella tularensis), 에르시니아 슈도튜버쿨로시스(Yersinia pseudotuberculosis), 에르시니아 엔테로코리티스(Yersinia enterocolitis), 리스테리아 코노시토게네 스(Listeria monocytogenes), 파스테우렐라 멀토시다(Pasteurella multocida), 스트렙토바실러스 모니리포르미스(Streptobacillus moniliformis), 스피릴리움 미노르(Spirilium minor(Spirillum minus)), 보레리아 레쿠렌티스(Borrelia recurrentis), 스트렙토코커스 피오제네스(Streptococcus pyogenes), 스트렙토코커스 아갈락티애(S. agalactiae), 스트렙토코커스 에퀴미리스(S. equimilis), 스트렙토코커스 패칼리스(S. faecalis), 클로스트리디움 테타니(Clostridium tetani), 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 클로스트리디움 노비(Cl. novyi), 클로스트리디움 셉티쿰(Cl. septicum), 클로스트리디움 히스토리티쿰(Cl. histoliticum), 클로스트리디움 스포로제네스(Cl. sporogenes), 퓨소박테리움 네크로포룸(Fusobacterium necrophorum), 살모넬라 티피(Salmonella typhi), 살모넬라 파라티피(S. paratyphi), 살모넬라 갈리나리움(Salmonella gallinarium), 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium), 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis), 참피로박터 페투스(Champylobacter fetus( subsp.fetus, venerealis)), 참피로박터 제주니(C. jejuni), 참피로박터 콜리(C. coli), 액티노마이세스 보비스(Actinomyces bovis), 액티노마이세스 이스래리(A. israelii), 노카르디아 아스테리오이데스(Nocardia asterioides), 노카르디아 마두래(N. madurae), 노카르디아 파르시니카(N. farcinica), 라비에스 바이러스(Rabies virus), 한탄 바이러스(Hantan virus), 서울 바이러스(Seoul virus), 푸마라 바이러스(Puumala virus), 헤르페스바이러스 시미애(Herpesvirus simiae(herpesvirus B), 필로비리대(Filoviridae(Marburg virus)), 파라믹소바이러스(Paramyxovirus)속 의 뉴캐슬 바이러스(Newcastle virus), 오르토폭스바이러스(Orthopoxvirus)속의 카우폭스 바이러스(Cowpox virus), 파라폭스바이러스(Parapoxvirus)속의 슈도카우폭스바이러스(Pseudocowpoxvirus), 파라폭스바이러스(Parapoxvirus)속의 콘타지오스 푸스투라 더마티티스 바이러스(Contagious pustular dermatitis virus), 구제역 바이러스(Foot and mouth disease virus), 베시큘라 스토마티티스 바이러스(Vesicular stomatitis virus), 아레나바이러스(Arenavirus)속 림포사이틱 코리오메닌기티스바이러스(Lymphocytic choriomeningitis virus), 아레나바이러스(Arenavirus)속 라싸 페버 바이러스(Lassa fever virus), 오르토믹소비리대(Orthomyxoviridae)의 인플루엔자 바이러스(Influenza virus), 플라비바이러스(Flavivirus)속 자페니즈 B 엔세파리티스 바이러스(Japanese B encephalitis virus), 아스퍼질러스 푸미가타(Aspergillus fumigata), 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 스포로트리컴 스케키(Sporothricum scheckii), 콕시디오이데스 이미티스(Coccidioides immitis), 블라스토마이세스 더마티티디스(Blastomyces dermatitidis), 히스토플라스마 캡슐라텀(Histoplasma capsulatum), 하플로스포란지움 파르붐(Haplosporangium parvum), 하플로스포란지움 크레스센스(H. crescens), 트리크피톤 스코엔레이니(Trichphyton schoenleini), 라케차 티피(Richettia typhi(R. mooseri)), 리케차 프로와제키(Richettia prowazekii), 리케차 추추가무시(Rickettsia tsutsugamusi(R. orientali)), 리케차 아카리(R. akari), 콕시엘라 버네티(Coxiella burnetii), 클라마이디아 시타치(Chlamydia psittaci), 엔타모에바 히 스토리티카(Entamoeba histolytica), 톡소플라스나 곤디(Toxoplasna gondii), 바란티디움 콜리(Balantidium coli), 파스시올라 헤파티카(Fasciola hepatica), 파스시올라 기간티카(Fasciola gigantica), 클로노르치스 시넨시스(Clonorchis sinensis), 파라고니머스 웨스터마니(Paragonimus westermanii), 디보테리오세팔러스 라텀(Dibothriocephalus latum), 태니아 사기나터스(Taenia saginatus), 태니아솔리움(Taenia solium), 에키노코커스 그라눌로서스(Echinococcus glanulosus), 아스카리스 룸브리코이데스(Ascaris lumbricoides), 아스카리스 수움(Ascaris suum), 비브리오 콜레라(Vibrio cholerae), 이콜라이(Escherichia coli) 및 S.아우레우스(methicillin-resistant S. aureus ; MRSA)로부터 선택된 균주임을 특징으로 하는 항균조성물.