KR20100114674A - 꾸지뽕나무 추출물을 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물 및 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물 - Google Patents

꾸지뽕나무 추출물을 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물 및 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 꾸지뽕나무 추출물을 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물 및 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 꾸지뽕나무 추출물, 분획물 및 이로부터 분리된 잔톤계열 화합물들이 뉴라미니데이즈의 활성을 억제하는 효과를 나타내므로 본 발명에 따른 조성물들은 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용으로 유용하게 사용될 수 있다.
꾸지뽕나무, 꾸지뽕나무 추출물, 뉴라미니데이즈, 인플루엔자 바이러스 감염 질환, 조류독감

Description

꾸지뽕나무 추출물을 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물 및 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물{Composition for inhibiting the activity of neuraminidase and pharmaceutical composition for prevention and treatment of influenza viral diseases comprising extracts of Cudrania tricuspidata}
본 발명은 꾸지뽕나무 추출물을 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물 및 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.
인플루엔자 바이러스는 급성 호흡기 질환을 일으키는 전염성이 매우 강한 바이러스로 온 세계에 집단감염이나 대 유행을 야기하여 소아, 고령자, 심폐질환 환자에게 심각한 호흡기 증상을 유발하는 바이러스중 하나이다(Hien, T. T. et al. N. Eng . J. Med ., 350, 1179, 2004). 인플루엔자 바이러스는 분류학적으로 오르토믹소바이러스(Orthomyxovirus)에 속하며 A, B, C의 3가지 형이 있으며 특히 유행적 으로 확산되는 형은 A, B형이다. 이들 바이러스 표면에는 당단백질인 적혈구 응집소(Hamagglutinin, HA)와 뉴라미니데이즈(Neuraminidase, NA)라는 두 종류의 표면 항원이 존재하고 내부에는 8개의 분절되어진 RNA가 존재한다. 헤마글루티닌(Hamagglutinin)은 머리와 줄기로 구성되어져 있는 트라이머(trimer) 형태이고, 이중 머리 부분은 대부분의 항원변이와 관련되어 있으며 숙주세포의 표면에 있는 말단 시알산 잔기와 결합하여 바이러스를 부착시키고 순차적으로 바이러스가 숙주세포로 침투가 가능하게 한다(Chandrasekaran, A. et al. Nature biotechnology 26, 107, 2008). 뉴라미니데이즈(neuraminidase)는 머리와 줄기형태를 가지는 버섯모양의 테트라머(tetramer)로 머리상단 표면에 활성자리가 있으며 감염된 세포내에서 복제 및 증식된 바이러스가 세포표면의 올리고사카라이드 부분과 말단 뉴라민산(neuraminic acid) 잔기를 연결해주는 알파-케토사이딕 본드(ketosidic bond)를를 절단하여 바이러스를 숙주세포 밖으로 배출하여 호흡기 점막세포로 침투하는데 중요한 역할을 한다(a. Mark, V. I. Nature review 6, 967, 2007. b. Huberman, K. et al. Virology 214, 294, 1995).
바이러스의 표면항원들은 동일한 아형에서 변이를 일으키고, 매년 새로운 항원 변이주가 출현한다. 특히 인플루엔자 바이러스 중 최근까지 문제가 되고 있는 조류 인플루엔자 바이러스는 대변이가 일어나 닭, 칠면조, 오리 및 야생조류 등 여러 종류의 조류를 감염시키며 빠른 전파로 인해 닭이 감염되면 80% 이상이 폐사함으로 전 세계적으로 양계산업에 가장 큰 피해와 위협을 주는 바이러스 질환이며, 그 파급효과는 양계산업에만 한정되어 있지 않고 인체에 대한 감염으로 인하여 사 람에게 질병을 일으키는 것으로 보고되고 있다(Gubareva, L. V. et al. Lancet . 355, 2000).
따라서, 바이러스 질병을 치료하기 위한 방법으로 상피세포로의 흡착 저해, 세포로의 침입 저해, 유전자의 전사 및 복제의 저해, 단백질 합성의 저해, 세포로부터 방출의 억제 등을 생각할 수 있으며, 이들 각각은 항 바이러스의 표적이 되고 있다.
종래부터 인플루엔자 바이러스를 치료하기 위해서 아만타딘(Amatadine), 리만타딘(Rimatadine), 자나미비(Zanamivir), 오셀타미비르(Oseltamivir) 등 4가지 물질이 미국식품의약품 안전청(FDA)으로부터 승인받아 사용되고 있다. 그러나 바이러스 증식에 필수적인 세포막 단백질인 M2 단백질의 이온채널을 차단하여 바이러스의 탈외피(uncoating)를 방해함으로써 항바이러스 작용을 하는 M2 억제제인 아만타딘(Amatadine), 리만타딘(Rimatadine)은 인플루엔자 바이러스 A형에만 효과가 있으며 40년 동안 사용되는 동안 내성을 가진 바이러스가 발생되고 신경계 및 위장에 심각한 부작용이 나타나는 것으로 보고되고 있다(Bantia, S. et al. Antiviral Research 69, 39, 2006). 1999년 이후에는 바이러스의 증식에 중요한 역할을 하고 내성 발생빈도가 적으며, A형 및 B형 인플루엔자 바이러스 모두에 안정적으로 존재하는 뉴라미니데이즈의 저해제인 자나미비르(Zanamivir), 오셀타미비르(Oseltamivir)와 같은 신약에 의한 바이러스 감염 치료에 대한 보고되고 있다(Zhang, J. et al. Bioorg . Med . Chem . Lett . 16, 3009, 2006).
그러나 자나미비르의 경우에는 높은 항바이러스 효과를 가지고 있지만 낮은 생체이용율과 빠른 신장에서의 배출의 단점(Ryan, D. M. et al. Antimicrob . Agents Chemother ., 39, 2583, 1995)을 가지고 있으며, 오셀타미르는 심각한 구토증세가 나타나는 부작용이 있다.
현재까지 개발된 항바이러스들은 심한 부작용을 나타내고 있으며 그 응용에 대한 많은 주의가 필요하다. 또한 백신의 개발은 유행하는 바이러스의 형과 백신의 바이러스가 맞지 않으면 효과가 낮은 문제점이 있기 때문에 감염 억제 효과가 뛰어나고 안정성이 우수한 새로운 인플루엔자 바이러스제의 개발의 필요성이 증가하고 있다.
본 발명의 소재로 이용한 꾸지뽕나무(Cudrania tricuspidata)는 뽕나무과(Moraceae)에 속하는 관목으로 꾸지뽕나무의 목부, 뿌리, 경엽 및 과실 모두 약재로 사용된다. 꾸지뽕나무의 목부는 자목이라 하여 부인의 붕중(崩中), 혈결(血結)을 치료하고, 꾸지뽕나무의 뿌리는 코르크층을 벗겨낸 근피를 약재로 사용하는바, 이는 자목백피라 하여 보신고정(補腎固精), 양혈서근(凉血舒筋)의 효능이 있으며, 자수경엽은 꾸지뽕나무의 경엽(經葉)으로서 여기에는 모린(morin), 포풀린(populin), 스태치드린(stachydrin) 및 프로린(proline), 글루타민산, 아르기닌(arginine), 아스파라긴산이 함유되어 있으며, 소염(消炎), 지통(止痛), 거풍(祛風)의 효능이 있고, 자수과실은 꾸지뽕나무의 과실로 청열(淸熱), 양혈(凉血), 서근활략(舒筋活略)의 효능이 있다. (정보섭 및 신민교, 향가대사전, 영림사, pp544-545, 1998) 꾸지뽕나무 뿌리 및 줄기에서 분리되어진 주요 성분으로는 잔톤(Arch Pharm Res 28, 44, 2005), 플라보노이드(J. Nat . Prod. 70, 1207-1209, 2007) 유도 체 등이 있으며 꾸지뽕나무 이차대사 산물들이 동맥경화, 항염증(Park, et al., Bioorg . Med . Chem . Lett., 5580-5583, 2006), 당분해효소 저해활성(Park, et al., Bioorg. Med . Chem . Lett., 6421-6424, 2007) 및 모노아민옥시다아제(J. Nat . Prod . 1207-1209, 2007) 저해활성이 있음이 보고되었다.
종래 꾸지뽕나무 추출물 및 이로부터 분리한 폴리페놀성 화합물과 관련하여 등록된 특허기술을 살펴보면, 꾸지뽕나무 추출물 또는 카테콜린 잔톤 계열 화합물을 함유하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물(대한민국특허등록 제10-0823155호), 꾸지뽕나무 플라보노이드 계열 화합물의 토포아이소머라제 I 저해활성에 의해 세포를 사멸시킴으로써 암 예방치료용 약학적 조성물(대한민국특허등록 제10-0784628호) 등이 있다. 그러나 꾸지뽕나무 추출물 및 이로부터 분리한 잔톤 계열 화합물의 바이러스 질환, 특히 인플루엔자 바이러스의 억제 및 예방 용도는 전혀 알려진 바 없다.
이에, 본 발명자들은 꾸지뽕나무 추출물 및 분획물 또는 이로부터 분리한 잔톤 화합물들, 이의 유도체 화합물들이 뉴라미니데이즈에 대한 억제활성을 가짐을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 다양한 생물 종에 존재하는 뉴라미니데이즈의 활성을 억제하여 그와 관계되는 질환의 치료에 이용할 수 있는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료를 위한 조성물 및 이를 이용한 치료방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 개선을 위한 건강식품을 제공하는 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명의 일 양상으로서, 꾸지뽕나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물이 제공된다.
본 발명의 다른 양상에 따르면, 상기 조성물을 뉴라미니데이즈를 포함하는 시료와 접촉시키는 단계를 포함하는 뉴라미니데이즈의 활성을 억제하는 방법이 제공된다.
본 발명의 또 다른 양상에 따르면, 꾸지뽕나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 양상에 따르면, 상기 조성물을 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 발병 또는 발병가능성이 있는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 치료방법이 제공된다.
본 발명의 또 다른 양상에 따르면, 꾸지뽕나무 추출물 또는 꾸지뽕나무 분획물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 개선용 건강식품이 제공된다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 꾸지뽕나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물을 제공한다.
이 때, 상기 뉴라미니데이즈는 A형 인플루엔자 바이러스, B형 인플루엔자 바이러스, C형 인플루엔자 바이러스, 클로스트리디움 퍼프린젠(Clostridium perfringens), 인간에서 유래할 것일 수 있으며, 바람직하게는 조류 인플루엔자 바이러스에서 유래한 것일 수 있다.
뉴라미니데이즈(neuraminidase: 시알리데이즈, 아실뉴라미닐 하이드롤레이즈 라고도 알려져 있음)는 동물과 몇몇 미생물에 흔한 효소로, 뉴라미니데니즈를 함유하는 많은 미생물이 인간과 가금류, 말, 돼지, 및 바다표범을 비롯한 다른 동물에게 병을 일으킨다. 따라서, 뉴라미니데이즈 활성을 억제하는 본 발명의 조성물은 뉴라미니데니즈의 활성과 관련된 많은 질환들의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 뉴라미니데이즈를 포함하는 시료와 접촉시키 는 단계를 포함하는 뉴라미니데이즈의 활성을 억제하는 방법을 제공한다. 이때, 상기 접촉은 통상적인 방법으로 이루어지고, 뉴라미니데이즈를 포함하는 시료는 살아있는 유기체, 조직 또는 세포 배양체, 생물학적 물질 시료(혈액, 혈청, 뇨, 뇌척수액, 눈물, 가래, 타액, 조직 시료 등) 등이 포함되며, 뉴라미니데이즈를 생성시키는 유기체, 대개 바이러스와 같은 병인성 유기체를 함유할 수 있다. 이러한 시료들은 물 및 유기 용매/물 혼합물을 포함하는 어떠한 배지 내에 담길 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물을 투여한 후에 뉴라미니데이즈의 활성은 뉴라미니데이즈 활성을 진단하는 직접 또는 간접 방법을 포함한 어떠한 방법에 의해서도 관찰될 수 있다. 뉴라미니데이즈 활성을 진단하는 정량적인, 정성적인 또는 세미-정량적인 방법들 모두가 사용가능하며, 살아있는 유기체의 생리학적인 특성을 관찰하는 등의 다른 어떠한 방법도 적용될 수 있다.
본 발명에 사용되는 꾸지뽕나무(Cudrania tricuspidata)는 뽕나무과에 속하는 낙엽성 소교목 또는 관목으로서 한국과 중국, 일본 등지에 주로 분포하는 식물이다. 이 식물의 잎은 한방에서 습진, 유행성 이하선염, 폐결핵, 만성요통, 타박상, 급성관절염 등의 치료에 사용되고 있으며, 민간에서는 열매와 수피를 악창, 강장, 중풍, 이뇨, 진해 등의 치료약으로 이용하고 있다. 줄기에는 폐암, 대장암, 피부암 및 자궁암에 효과가 있는 플라보노이드계열의 화합물들이 많이 함유되어 있다는 것이 보고되어 있다. 특히, 본초습유(本草拾遺)에 언급된 경험적인 임상효능에 의하면, 수피와 뿌리껍질은 자목백피라 하여 혈을 차갑게 하고, 근육과 힘줄을 푸는 효능이 뛰어나기 때문에 민간요법으로 많이 사용되어 오고 있다.
본 발명에서는 꾸지뽕나무의 모든 부위를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 잎, 줄기, 뿌리 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있다. 이들은 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있다.
상기 꾸지뽕나무 추출물을 제조하는 방법은 초음파 추출법, 여과법 및 환류추출법 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있다. 바람직하게는 세척 및 건조로 이물질이 제거된 꾸지뽕나무의 잎, 줄기 또는 뿌리를 분쇄하여 얻은 꾸지뽕나무 건조물을 물, C1~C3의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물일 수 있으며, 보다 바람직하게는 C1~C3의 알코올로 추출한 추출물일 수 있고, 가장 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올로 추출한 추출물일 수 있다. 이때, 추출용매는 꾸지뽕나무의 건조중량의 2 ~ 20 배로 하는 것이 바람직하다. 일례로 꾸지뽕나무 뿌리 건조물을 세절한 후 추출용기에 넣고 C1~C3의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올을 넣고 일정기간 상온에서 방치한 다음, 여과하여 알코올 추출물을 얻을 수 있다. 이때, 추출은 상온에서 1주 동안 방치하는 것이 바람직하며, 이후에 농축 또는 동결건조 등의 방법을 추가적으로 거칠 수 있다.
또한, 본 발명은 꾸지뽕나무 추출물로부터 분획하여 얻은 꾸지뽕나무 분획물을 유효성분으로 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물을 제공한다. 이 때, 상기 꾸지뽕나무 분획물은 꾸지뽕나무 추출물을 물에 현탁시킨 후 헥산, 클로 로포름 및 에틸아세테이트로 분획하여 얻을 수 있다.
나아가, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112009023011549-PAT00001
상기 화학식 1에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, 히드록시기, C1~C20의 알콕시기, C2~C20의 알케닐기, C2~C20의 알키닐기,
Figure 112009023011549-PAT00002
또는
Figure 112009023011549-PAT00003
이고,
R3 및 R4는 서로 피란, 또는 C1~C4의 알킬기,
Figure 112009023011549-PAT00004
또는
Figure 112009023011549-PAT00005
로 치환된 피란을 형성할 수 있고,
R6 및 R7은 서로 퓨란, 또는 C1~C4의 알킬기,
Figure 112009023011549-PAT00006
또는
Figure 112009023011549-PAT00007
로 치환된 퓨란을 형성할 수 있다.
이 때, 상기 화학식 1의 잔톤계 화합물은 꾸지뽕나무 추출물 또는 꾸지뽕나무 분획물로 부터 분리된 것일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화학식 2-9로 표시되는 화합물일 수 있다.
[화학식 2]
Figure 112009023011549-PAT00008
[화학식 3]
Figure 112009023011549-PAT00009
[화학식 4]
Figure 112009023011549-PAT00010
[화학식 5]
Figure 112009023011549-PAT00011
[화학식 6]
Figure 112009023011549-PAT00012
[화학식 7]
Figure 112009023011549-PAT00013
[화학식 8]
Figure 112009023011549-PAT00014
[화학식 9]
Figure 112009023011549-PAT00015
또한, 본 발명에 따른 상기 화합물 중 화학식 2-9로 표시되는 화합물은 꾸지뽕나무에 존재하는 대표적인 활성성분으로, 상기 화합물을 분리하기 위한 방법은 하기와 같이 수행될 수 있다.
먼저, 꾸지뽕나무를 물, C1~C4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 꾸지뽕나무 추출물을 얻는다(단계 1). 상기 꾸지뽕나무는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있으며, 깨끗이 세척하고 건조하여 사용한다. 상기 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등의 저급 알코올을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올을 사용할 수 있다.
상기 단계 1에 있어서, 상기 꾸지뽕나무 추출물을 얻는 단계는 건조된 꾸지뽕나무를 음건 세절하여 추출용기에 넣고 적당한 양의 알코올을 첨가하고, 이를 상온에서 10일 동안 방치한 후 거름종이 등으로 여과하여 수행될 수 있다. 이러한 추출 과정은 수회 반복될 수 있으며, 이후에 농축 또는 동결건조 등의 방법이 추가적으로 수행될 수 있다.
이어서, 상기 단계 1에서 얻은 꾸지뽕나무 추출물에 물을 가하여 현탁시키고, 헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트를 사용하여 순차적으로 분획하여 꾸지뽕나무 분획물을 얻는다(단계 2). 이때, 통상의 분별 추출 방법을 이용할 수 있으며, 바람직하게는 분별 깔데기를 사용할 수 있다. 상기 꾸지뽕나무 분획물은 꾸지뽕나무 헥산 분획물, 클로로포름 꾸지뽕나무 분획물, 에틸아세테이트 꾸지뽕나무 분획물로 얻을 수 있다.
그 후, 상기 단계 2에서 얻은 꾸지뽕나무 분획물을 실리카겔 크로마토그래피로 화합물을 분리하고 정제하여 상기 화학식 2-9의 잔톤계 화합물을 얻을 수 있다(단계 3). 보다 구체적으로, 상기 단계 2에서 얻은 꾸지뽕나무 분획물을 실리카겔 크로마토그래피를 이용하여 화합물을 분리하고 정제하여 상기 화학식 2-9의 잔톤계 화합물을 얻을 수 있다. 상기 화합물 분리를 위한 실리카겔 크로마토그래피를 수행하는 경우, 이동상으로는 n-헥산, n-헥산 에틸아세테이트, 클로로포름ㆍ아세톤 혼합용매 및 메탄올을 사용하는 것이 바람직하고, 추가되는 크로마토그래피에서는 n-헥산ㆍ아세톤 혼합용매를 사용할 수 있다. 이때 사용되는 n-헥산ㆍ에틸아세테이트 혼합용매의 부피비는 50:1 ~ 1:5 부피비가 바람직하며, 클로로포름ㆍ아세톤 혼합용매일 경우에는 150:1 ~ 1:4 부피비가 바람직하다. 상기 크로마토그래피는 단일 화합물이 정제될 때까지 1회 내지 수회에 걸쳐 수행할 수 있으며, 필요에 따라 농축, 재결정을 실시할 수 있다.
한편, 본 발명은 꾸지뽕나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 인플루엔자 바이러스 표면에 존재하면서 바이러스 복제에 필수적인 기능을 하는 뉴라미니데이즈의 활성을 억제함으로써 인플루엔자 바이러스가 호흡기관 내 다른 세포로 확산되는 것을 차단하기 때문에 인플루엔자 바이러스 감염질환의 예방 및 치료에 사용될 수 있다.
본 발명에서 용어, "예방"이란 조성물의 투여에 의해 인플루엔자바이러스 감염을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 용어, "치료"란 조성물의 투여에 의해 인플루엔자바이러스 감염에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
상기 인플루엔자 바이러스는 A형 인플루엔자 바이러스, B형 인플루엔자 바이러스, C형 인플루엔자 바이러스일 수 있으며, 바람직하게는 조류 인플루엔자 바이러스일 수 있다. 또한, 상기 인플루엔자 바이러스 감염 질환은 독감, 감기, 인후염, 기관지염, 폐렴일 수 있으며, 특히 조류독감일 수 있다.
또한, 상기 꾸지뽕나무 추출물은 상술한 바와 같이, 꾸지뽕나무를 물, C1~C3의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 얻을 수 있다.
또한, 본 발명은 꾸지뽕나무 추출물로부터 분획하여 얻은 꾸지뽕나무 분획물 을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물을 제공한다. 이때, 상기 꾸지뽕나무 분획물은 꾸지뽕나무 추출물을 물에 현탁시킨 후 헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 분획하여 얻을 수 있다.
한편, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112009023011549-PAT00016
상기 화학식 1에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, 히드록시기, C1~C20의 알콕시기, C2~C20의 알케닐기, C2~C20의 알키닐기,
Figure 112009023011549-PAT00017
또는
Figure 112009023011549-PAT00018
이고,
R3 및 R4는 서로 피란, 또는 C1~C4의 알킬기,
Figure 112009023011549-PAT00019
또는
Figure 112009023011549-PAT00020
로 치환된 피란을 형성할 수 있고,
R6 및 R7은 서로 퓨란, 또는 C1~C4의 알킬기,
Figure 112009023011549-PAT00021
또는
Figure 112009023011549-PAT00022
로 치환된 퓨란을 형성할 수 있다.
이 때, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 상술한 바와 같이, 상기 화학식 2-9로 표시되는 화합물일 수 있다.
또한, 본 발명의 상기 화학식 2-9로 표시되는 잔톤계 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6- 디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 상기 화학식 3 또는 6의 유도체를 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다.
동량의 상기 화학식 2-9로 표시되는 잔톤계 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고, 이어서 이 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속 염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
본 발명의 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 상기 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
한편, 본 발명은 상기 조성물을 약제학적으로 유효한 양으로 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 발병 또는 발병가능성이 있는 개체에게 투여하는 단계를 포함 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 치료방법을 제공한다. 상기 인플루엔자 바이러스는 A형 인플루엔자 바이러스, B형 인플루엔자 바이러스, C형 인플루엔자 바이러스일 수 있으며, 바람직하게는 조류 인플루엔자 바이러스일 수 있다. 또한, 상기 인플루엔자 바이러스 감염 질환은 독감, 감기, 인후염, 기관지염, 폐렴일 수 있으며, 특히 조류독감일 수 있다.
본 발명에서 용어, “개체”란 인플루엔자바이러스에 이미 감염되었거나 감염될 수 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미하고 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물을 개체에게 투여함으로써, 상기 질환을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물로 다양한 인플루엔자바이러스 아형 또는 변이형의 인간 인플루엔자바이러스로 감염된 인간을 치료할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물로 다양한 인플루엔자바이러스 아형 또는 변이형의 조류 인플루엔자바이러스로 감염된 인간을 치료할 수 있다. 또한, 다양한 인플루엔자바이러스 아형 또는 변이형의 조류 인플루엔자바이러스로 감염된 닭 또는 돼지를 치료할 수 있다. 본 발명의 조성물을 기존의 인플루엔자바이러스 감염 질환 치료제와 병행하여 투여할 수 있다.
상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 목적하는 바에 따라 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 용어 "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 감염된 바이러스 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물은 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
아울러, 본 발명은 꾸지뽕나무 추출물 또는 꾸지뽕나무 분획물, 이로부터 분리한 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112009023011549-PAT00023
상기 화학식 1에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, 히드록시기, C1~C20의 알콕시기, C2~C20의 알케닐기, C2~C20의 알키닐기,
Figure 112009023011549-PAT00024
또는
Figure 112009023011549-PAT00025
이고,
R3 및 R4는 서로 피란, 또는 C1~C4의 알킬기,
Figure 112009023011549-PAT00026
또는
Figure 112009023011549-PAT00027
로 치환된 피란을 형성할 수 있고,
R6 및 R7은 서로 퓨란, 또는 C1~C4의 알킬기,
Figure 112009023011549-PAT00028
또는
Figure 112009023011549-PAT00029
로 치환된 퓨란을 형성할 수 있다.
이 때, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 상술한 바와 같이, 상기 화학식 2-9로 표시되는 화합물일 수 있다.
즉, 본 발명의 조성물은 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 또는 개선을 목적으로 건강식품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 꾸지뽕나무 추출물, 분획물 또는 그로부터 분리된 잔톤 계열 화합물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 추출물 또는 화합물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에는 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 0.01 ~ 10 중량부, 바람직하게는 0.05 ~ 1중량부의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄 수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명에 따른 꾸지뽕나무 추출물, 분획물 및 이로부터 분리된 잔톤계열 화합물들을 포함하는 조성물들은 뉴라미니데이즈의 활성을 억제하는 효과를 나타내므로 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용으로 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 제조예 및 실시예에 의해 보다 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 꾸지뽕나무 추출물의 제조
대한민국 경상남도 합천에서 구입한 꾸지뽕나무 뿌리 2 kg에 100% 에탄올(EtOH) 10ℓ를 가하여 실온에서 3일 방치하고 여과지로 여과하고 농축하여 꾸지뽕나무 에탄올 추출물(150 g)을 얻었다.
한편, 꾸지뽕나무 뿌리 100 g을 500 ㎖의 물을 가하고, 90 ℃에서 4시간 동안 끓인 후, 여과지로 여과하고 농축하여 꾸지뽕나무 뿌리 열수추출물(11 g)을 얻었다.
실시예 2: 꾸지뽕나무 추출물로부터 꾸지뽕나무 분획물 및 잔톤 계열 화합물의 분리 및 정제
상기 실시예 1에서 수득한 꾸지뽕나무 뿌리의 에탄올추출물로서 얻어진 갈색의 분말 150 g에 물 1ℓ를 넣어 현탁시켰다. 이를 분별 깔대기에 넣고, n-헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트를 순서대로 이용하여 분별 추출하여 n-헥산 가용추출물 (24.7 g), 클로로포름 가용추출물 (46.6 g), 에틸아세테이트 가용추출물 (15.0 g) 및 물 가용추출물을 수득하였다.
상기에서 수득한 클로로포름 가용추출물 46.6 g을 100% 클로로포름, 아세톤 및 이들의 혼합용매 (40:1 ~ 1:1)를 이동상으로 하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 500g, 70~230 메쉬(mesh))를 수행하여 11개의 분획물(Fr.-1~11)로 분 리하였다. 이중 세 번째 분획물(Fr.-3, 1.6 g)은 n-헥산 : 에틸아세테이트(40:1 ~ 8:1 (v/v))의 혼합용매를 이동상으로 하여 다시 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (30 g, 230 ~ 400 메쉬)를 수행하여 90개의 분획물(Fr.-3-1~90)을 얻었다. 그 중 Fr.-3-48~61 분획물(0.18 g)에 대해 제조용 TLC(preparative TLC)를 수행하였고, 이때 이동상으로 클로로포름:아세톤=8:1 (v/v) 용매를 사용하여 화합물 1 (18 ㎎) 및 화합물 2 (28 ㎎)를 수득하였다.
또한, 클로로포름 가용추출물의 네 번째 분획물(Fr.-4, 1.2 g)은 n-헥산 : 에틸아세테이트 (40:1 ~ 2:1)의 혼합용매를 이동상으로 하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피법 (25g, 230 ~ 400 메쉬)를 수행하여 80개의 분획물 (Fr.-4-1~80)을 얻었다. 그 중 Fr.-4-22~32 분획물은 헥산과 클로로포름의 극성차이를 이용하여 재결정함으로써 화합물 3 (84 ㎎)을 얻었다. 또한, Fr.-4-45~52 분획물에 대해 클로로포름:아세톤(6:1)을 이동상 용매로 이용하여 제조용 TLC를 수행하여 화합물 4 (16 ㎎)를 분리하였다.
또한, 클로로포름 가용추출물의 다섯 번째 분획물(Fr.-5, 2.1 g)에 대해 n-헥산 : 에틸아세테이트 (30:1 ~ 2:1)을 이동상 용매로 이용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피법 (6 g, 230 ~ 400 메쉬)으로 110개의 분획물(Fr.-5-1~110)을 얻었다. 그 중 Fr.-5-32~49 분획물에 대해 다시 한번 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (5 g, 230 ~ 400 mesh)를 수행하였으며, 이때 이동상 용매로는 클로로포름:아세톤 (40:1 ~ 4:1)의 혼합용매를 사용하였다. 이때 얻은 Fr.-5-2-32~41 분획물로부터 클로로포름을 이용하여 재결정법으로 화합물 7 (26 ㎎)을 수득하였다.
또한, 상기 클로로포름 가용추출물 41 g을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(1 kg, 230 ~ 400 메쉬)를 수행하였으며, 이때 이동상 용매로는 클로로포름:메탄올 (100:0, 30:1, 20:1, 10:1 또는 5:1 (v/v))의 혼합 용매를 사용하였다. 그 중 클로로포름:메탄올 (10:1 (v/v))로 용출한 분획을 감압 하에서 농축하여 갈색의 유성물질 (8. 6g)을 얻었으며, 이를 다시 n-헥산 : 에틸아세테이트 (15:1, 10:1, 5:1 또는 1:1 (v/v))의 혼합용매를 이동상으로 하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(250 g, 230 ~ 400 메쉬)를 수행하였다. 이때, Fr.-1-23~25 분획물에서 화합물 5(60 ㎎)를 분리하였고, Fr.-1-18~21 분획물에서 화합물 6 (120㎎)을 분리하였으며, Fr.-1-30~34 분획물에서 화합물 8 (70 mg)을 분리하였다.
실시예 3: 잔톤계 화합물의 구조 분석
상기 실시예 2에서 얻은 화합물의 분자량 및 분자식을 VG 고분해능 GC/MS 분광기(VG high resolution GC/MS spectrometer, Election Ionization MS, Autospec-Ultima)를 사용하여 결정하였다. 또한, 핵자기공명(NMR) 분석(Bruker AM 500)을 통하여 1H NMR, 13C NMR, 호모-코지(HOMO-COSY), HMQC (1H-Detected heteronuclear Multiple-Quantum Coherence), HMBC (Heteronuclear Multiple-Bond Coherence), DEPT (Distortionless Enhancement by Polarization) 스펙트럼을 얻어, 분자구조를 결정하였다.
이상의 기기분석결과를 발표된 문헌의 것과 비교 분석한 결과, 하기 화학식 2로 표시되는 쿠드라트리쿠스잔톤 A, 하기 화학식 3으로 표시되는 마클루라잔톤 B, 하기 화학식 4로 표시되는 쿠드라잔톤 L, 하기 화학식 5로 표시되는 1,3,7-트라이하이드록시-4-(1,1-다이메틸-2-프로페닐)-5,6-(2,2-다이메틸크로메노)잔톤, 하기 화학식 6으로 표시되는 쿠드라잔톤 D, 하기 화학식 7로 표시되는 1,6,7-테트라하이드록시-2,3-(2,3,3-트라이메틸-2,3-다이하이드로퓨라노)-4-프레닐-잔톤, 하기 화학식 8로 표시되는 쿠드라잔톤 M으로 확인하였다(J. Nat . Prod . 1207-1209, 2007). 구체적인 분석결과는 다음과 같다.
화합물 1: 4-(1,1-다이메틸-2-프로페닐)-1,3,6,7-테트라하이드록시-8-프레닐잔톤 (쿠드라트리쿠스잔톤 A)
[화학식 2]
1) 물성 : 노란색 고형 (m.p. 187 ℃)
2) 분자량 : 396
3) 분자식 : C23H24O6
4) 1H-NMR (CDCl3, 500 ㎒) δ 1.68 (s, 3H, H-12, 13), 1.88 (s, 3H, H-19), 2.19 (s, 3H, H-20), 4.30 (d, J = 6.7 Hz, 2H, H-16), 5.30 (m, 1H, H-17), 5.35 (d, J = 10.5 Hz, 1H, H-15), 5.44 (d, J = 17.8 Hz, 1H, H-15), 6.22 (s, 1H, H-2), 6.45 (dd, J = 17.8, 10.5 Hz, 1H, H-14), 6.83 (s, 1H, H-5), 13.33 (s, 1H, -OH).
5) EIMS m/z 396 [M]+ (81), 381 (100), 353, (74), 337 (32), 325 (56), 311 (22), 297 (17), 285 (13), 269 (9), 253 (5), 205 (6), 182 (7), 161 (6), 149 (6), 135 (3), 115 (6), 91 (6), 69 (10), 59 (7); HREIMS m/z 396.1528 [M]+ (calcd for C23H24O6, 396.1573).
화합물 2: 1,3,6,7- 테트라하이드록시 -2-(1,1- 다이메틸 -2- 프로페닐 )-4- 프레닐잔톤 ( 마클루라잔톤 B)
[화학식 3]
Figure 112009023011549-PAT00031
1) 물성 : 노란색 주형(prisms) (m.p. 152 ℃)
2) 분자량 : 396
3) 분자식 : C23H24O6
4) 1H-NMR (CDCl3, 500 ㎒) δ 1.68 (s, 3H, H-12, 13), 1.70 (s, 3H, H-19), 1.84 (s, 3H, H-20), 3.44 (d, J = 7.0 Hz, 2H, H-16), 5.20 (m, 1H, H-17), 5.40 (d, J = 10.5 Hz, 1H, H-15), 5.50 (d, J = 17.8 Hz, 1H, H-15), 6.41 (s, 1H, H-5), 6.53 (dd, J = 17.8, 10.5 Hz, 1H, H-14), 7.51 (s, 1H, H-8), 13.44 (s, 1H, -OH).
5) EIMS m/z 396 [M]+ (67), 381 (100), 355 (29), 341 (19), 325 (49), 297 (18), 285 (12), 272 (7), 257 (4), 241 (2), 203 (2), 176 (3), 165 (5), 143 (3), 121 (4), 115 (3), 77 (4), 55 (4) ; HERIMS m/z 396.1568 [M]+ (calcd for C23H24O6, 396.1573).
화합물 3: 1,3,6,7- 테트라하이드록시 -2-(1,1- 다이메틸 -2- 프로페닐 )-5- 프레닐잔톤 ( 쿠드라잔톤 L)
[화학식 4]
Figure 112009023011549-PAT00032
1) 물성 : 노란색 바늘형 (m.p. 202 ℃)
2) 분자량 : 396
3) 분자식 : C23H24O6
4) 1H-NMR (CDCl3 , 500 ㎒) δ 1.59 (s, 3H, H-12, 13), 1.65 (s, 3H, H-19), 1.85 (s, 3H, H-20), 3.51 (d, J = 7.1 Hz, 2H, H-16), 4.81 (d, J = 10.6 Hz, 1H, H-15), 4.90 (d, J = 17.5 Hz, 1H, H-15), 5.23 (s, 1H, H-17), 6.28 (s, 1H, H-4), 6.33 (dd, J = 17.5, 10.6 Hz, 1H, H-14), 7.32 (s, 1H, H-8).
5) EIMS m/z 396 [M]+ (67), 381 (100), 355 (29), 341 (19), 325 (49), 297 (18), 285 (12), 272 (7), 257 (4), 241 (2), 203 (2), 176 (3), 165 (5), 143 (3), 121 (4), 115 (3), 77 (4), 55 (4) HERIMS m/z 396.1568 [M]+ (calcd for C23H24O6, 396.1573).
화합물 4: 1,3,7- 트라이하이드록시 -4-(1,1- 다이메틸 -2- 프로페닐 )-5,6-(2,2- 다이메틸크로메노 ) 잔톤
[화학식 5]
Figure 112009023011549-PAT00033
1) 물성 : 노란색 분말 (m.p. 166-167 ℃)
2) 분자량 : 394
3) 분자식 : C23H22O6
4) 1H-NMR(CDCl3, 500 ㎒) δ 1.43 (s, 3H, H-12, 13), 1.62 (s, 3H, H-19), 1.63 (s, 3H, H-20), 5.30 (d, J = 10.5 ㎐, 1H, H-15), 5.39 (d, J = 17.8 ㎐, 1H, H-15), 5.75 (d, J = 10.2 Hz, 1H, H-17), 6.20 (s, 1H, H-2), 6.39 (dd, J = 17.8, 10.5 Hz, 1H, H-14), 6.77 (1H, s, H-8), 7.93 (d, J = 10.2 Hz, 1H, H-16), 13.43 (s, 1-OH, 1H).
5) EIMS m/z 394 [M]+ (49), 379 (100), 349 (9); HERIMS m/z 394.1435 [M]+ (calcd for C23H24O6, 394.1416).
화합물 5: 1,6,7- 트라이하이드록시 -3- 메톡시 -4-(1,1- 다이메틸 -2- 프로페닐 )-8- 프레닐 -잔톤( 쿠드라잔톤 D)
[화학식 6]
Figure 112009023011549-PAT00034
1) 물성 : 노란색 바늘형(yellowish needles) (m.p. 131 ℃)
2) 분자량 : 410
3) 분자식 : C24H26O6
4) 1H-NMR(CDCl3, 500 ㎒) δ 1.62 (s, 3H, H-12, 13), 1.77 (s, 3H, H-19), 1.88 (s, 3H, H-20), 3.82 (s, 3H, OMe), 4.30 (br d, J = 6.8 Hz, 2H, H-16), 4.84 (d, J = 10.6 Hz, 1H, H-15) 4.90 (d, J = 17.4 Hz, 1H, H-15), 5.30 (m, 1H, H-17), 6.25 (dd, J = 17.4, 10.6 Hz, 1H, H-14), 6.32 (s, 1H, H-2), 7.26 (s, 1H, H-5), 13.79 (s, -OH).
5) EIMS m/z 410 [M]+ (7), 395 (100), 367 (47), 355 (28); HERIMS m/z 410.1731 [M]+ (calcd for C24H26O6, 410.1728).
화합물 6: 1,6,7- 테트라하이드록시 -2,3-(2,3,3- 트라이메틸 -2,3- 다이하이드로퓨라노 )-4- 프레닐 - 잔톤
[화학식 7]
Figure 112009023011549-PAT00035
1) 물성 : 노란색 주형 (m.p. 208 ℃)
2) 분자량 : 396
3) 분자식 : C23H24O6
4) 1H-NMR (Acetone-d6, 500 ㎒) δ 1.11 (s, 3H, H-13), 1.26 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H-15), 1.35 (s, 3H, H-12), 1.52 (s, 3H, H-20), 1.72 (s, 3H, H-19), 3.26 (d, 2H, J = 7.2 Hz, H-16), 4.39 (q, 1H, J = 13.14, 6.58 Hz, H-14), 5.27 (br t, 1H, J = 7.2 Hz, H-17), 6.84 (s, 1H, H-5), 7.41 (s, 1H, H-10), 13.30 (s, 1H, OH)
5) EIMS m/z 396 [M]+ (16), 381 (100), 325 (47).
화합물 7: 1,6,7- 테트라하이드록시 -2,3-(2,3,3- 트라이메틸 -2,3- 다이하이드로퓨라노 )-5- 프레닐 - 잔톤 ( 쿠드라잔톤 M)
[화학식 8]
Figure 112009023011549-PAT00036
1) 물성 : 노란색 분말 (m.p. 119 ℃)
2) 분자량 : 396
3) 분자식 : C23H24O6
4) 1H-NMR (CDCl3, 500 ㎒) δ 1.28 (s, 3H, H-12), 1.42 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-15), 1.51 (s, 3H, H-13), 1.65 (s, 3H, H-19), 1.81 (s, 3H, H-20), 3.25 (m, 2H, H-16), 4.53 (q, J = 6.6 Hz, 1H, H-14), 5.14 (m, 1H, H-17), 6.33 (s, 1H, H-4), 7.50 (s, 1H, H-8), 12.77 (s, 1H, -OH).
5) EIMS m/z 396 [M]+ (16), 381 (100), 325 (47).
화합물 8: 1,3,6,7- 테트라하이드록시 -2-(1,1- 다이메틸 -2- 프로페닐 )-8- 프레닐 -잔톤
[화학식 9]
Figure 112009023011549-PAT00037
1) 물성 : 노란색 분말 (m.p. 154-155 ℃)
2) 분자량 : 396
3) 분자식 : C24H26O6
4) 1H-NMR(CDCl3, 500 ㎒) δ 1.56 (s, 3H, H-19), 1.59 (s, 1H, H-13), 1.59 (s, 3H, H-12), 1.72 (3s, H, H-20), 1.73 (s, 3H, H-18), 3.09 (d, 2H, J= 7.0 Hz, H-16), 5.01 (d, 1H, J= 7.0 Hz, H-17), 5.34 (d, 1H, J= 10.6 Hz, H-15a), 5.44 (d, 1H, J=17.8 Hz, H-15b), 6.29 (dd, 1H, J = 10.6, 17.8 Hz, H-14), 6.29 (s, 1H, H-4), 7.43 (s, 1H, H-5).
5) EIMS m/z 396 [M]+ (6), 395 (100), 367 (53), 355 (24)
실험예 1: 꾸지뽕나무 추출물 및 분획물의 뉴라미니데이즈 ( Clostridium perfringens ) 저해 활성 측정
본 발명의 실시예 1 및 2의 꾸지뽕나무 추출물 및 이의 분획물의 뉴라미니데이즈에 대한 저해활성을 측정하기 위하여, Potier 및 Ryu 등의 방법(Anal . Biochem . 94, 287, 1979, Bioorg . Med . Chem . Lett . 18, 6046, 2008)을 일부 수정하여 사용하였다. 효소원으로 뉴라미니데이즈(효소 농도, 0.1～0.11 U, from Clistridium Perfringgens, Sigma), 기질은 2′-(4-trimethylumbelliferyl)-α-D-N-acetyl- neuraminic acid sodium salt를 Sigma에서 구입하여 사용하였다.
실시예 1 및 2의 꾸지뽕나무 추출물 및 이의 분획물을 메탄올에 녹여 20 μg/mL로 희석하였다. 상기 희석한 추출물과 분획물을 각각 15 μL씩 첨가하고 기질은 2′-(4-methylumbelliferyl)-α-D-N-acetylneuraminic acid sodium salt (최종농도, 12.5 μM)를 60 μL를 넣고, 50 mM 소듐 아세테이트 용액(pH=5.0) 510 μL와 혼합하였으며, 효소원인 뉴라미니데이즈(효소 최종농도,2.5 mU/mL) 15 μL을 첨가 하여 37 ℃에서 10분 동안 반응시키고 형광 분광기로 365 ㎚에서 흡광과 450 nm에서의 발광을 측정함으로서 뉴라미니데이즈의 저해 활성을 측정하였다. 측정 결과는 하기 표 1에 나타내었다.
실험예 2: 꾸지뽕나무 추출물 및 분획물의 뉴라미니데이즈 A/ Bervig - Mission /1/18 ( rvH1N1 ) 저해 활성 측정
본 발명의 실시예 1 및 2의 꾸지뽕나무 추출물 및 이의 분획물의 뉴라미니데이즈에 대한 저해활성을 측정하기 위하여, 1918년 스페인 독감으로부터 분리된 바이러스(A/Bervig_Mission/1/18)의 재조합 뉴라미니데이즈인 rvH1N1 인플루엔자 A 바이러스의 뉴라미니데이즈(R&D SYSTEM, 4858-NM)를 사용하였다. 기질은 2′-(4-trimethylumbelliferyl)-α-D-N-acetyl-neuraminic acid sodium salt를 Sigma에서 구입하여 사용하였다.
실시예 1 및 2의 꾸지뽕나무 추출물 및 이의 분획물을 메탄올에 녹여 각각 20 μL씩 첨가하고 기질은 2′-(4-methylumbelliferyl)-α-D-N-acetylneuraminic acid sodium salt (최종농도, 200 μM)를 50 μL를 넣고, 5 mM CaCl2 와 200 mM NaCl 50 mM이 첨가된 트리스 완충용액(pH 7.5) 80 μL와 혼합하였으며, 효소원인 뉴라미니데이즈(효소 최종농도, 0.05 ng/μL) 50 μL을 첨가하여 25 ℃ 상온에서 10분 동안 반응시키고 형광 분광기로 365 ㎚에서 흡광과 445 nm에서의 발광을 측정함으로서 뉴라미니데이즈의 저해 활성을 측정하였다.
측정 결과는 하기 표 1에 나타내었다.
Figure 112009023011549-PAT00038
표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 꾸지뽕나무 추출물 및 분획물은 각각의 뉴라미니데이즈에 대한 저해 활성을 측정한 결과, 꾸지뽕나무 열수 추출물은 박테리아원의 뉴라미니데이즈에 대해 37.5 μg/mL과 인플루엔자 바이러스원의 뉴라미니데이즈에 대해 136.7 μg/mL의 IC50값을 보여주었고, 꾸지뽕나무 에탄올 추출물에 대해 각각 10.9 μg/mL 및 266.6 μg/mL의 IC50값을 보여 주었고, 꾸지뽕나무 에틸아세테이트 분획물에 대해 0.12 μg/mL 및 4.7 μg/mL의 IC50값을 보여 주었다. 즉, 꾸지뽕나무 뿌리 에탄올 추출물 및 꾸지뽕나무 뿌리 에틸아세테이트 분획물이 가장 우수한 저해효과를 나타냄을 알 수 있다.
실험예 3: 꾸지뽕나무 추출물로부터 분리한 잔톤계 화합물의 뉴라미니데이즈[( Clostridium perfringens 및 A/ Bervig - Mission /1/18 ( rvH1N1 )] 저해 활성 측정
실시예 1 및 2의 꾸지뽕나무 추출물에서 분리, 동정한 8종의 화합물에 대하여 실험예 1과 동일한 방법으로 뉴라미니데이즈에 대한 저해활성을 측정하였다. 측정결과는 하기 표 2에 나타내었다.
Figure 112009023011549-PAT00039
상기 표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명의 꾸지뽕나무 추출물 또는 이로부터 분리된 잔톤계 화합물은 뉴라미니데이즈 효소에 대한 저해 활성이 뛰어남을 확인할 수 있다.
따라서, 본 발명의 조성물은 뉴라미니데이즈에 대한 우수한 억제효과를 나타내므로, 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용으로 유용하게 사용될 수 있을 것으로 판단된다.
실험예 4: 본 발명의 화합물의 급성 독성 실험
본 발명의 화합물들에 대한 급성 독성을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.
6주령의 특정 병원체 부재(SPF, specific pathogens free) C57BL/6J 마우스를 암수 각각 12 마리씩 4군(암수 각각 3마리/실험군)으로 나누어, 온도 22± 3℃, 습도 55± 10%, 조명 12L/12D의 동물실내에서 사육하였다. 마우스는 실험에 사용되기 전 1주일 정도 순화시켰다. 실험동물용 사료(마우스 및 랫트용, (주)제일제당, 서울, 대한민국) 및 음수는 멸균한 후 공급하였으며 자유 섭취시켰다.
상기 실시예 2에서 제조한 본 발명의 화합물들을 0.5% 트윈 80(tween 80) 에 50 mg/mL 농도로 조제한 후, 마우스 체중 20 g 당 0.04 mL(100 mg/kg), 0.2 mL(500 mg/kg) 및 0.4 mL(1,000 mg/kg)씩 경구 투여하였다. 시료는 단회 경구 투여하였으며, 투여 후 7일 동안 다음과 같이 부작용 또는 치사 여부를 관찰하였다. 즉, 투여당일은 투여 후 1시간, 4시간, 8시간, 12시간 뒤에, 그리고 투여 익일부터 7일째 까지는 매일 오전, 오후 1회 이상씩 일반증상의 변화 및 사망동물의 유무를 관찰하였다.
상기와 같은 급성 독성실험 결과, 시료를 투여한 모든 마우스에서 특기할 만한 임상증상이 나타나지 않았고 폐사된 마우스도 없었으며, 또한 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.
따라서, 본 발명의 화합물들은 모든 마우스에서 1,000 mg/kg까지 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD50)이 1,000 mg/kg 이상인 안전한 물질로 판단되었다.
이하, 꾸지뽕나무 추출물, 꾸지뽕나무 분획물, 이로부터 분리된 잔톤계 화합물 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 함유한 약학적 제제 또는 건강식품의 예를 설명한다.
제조예 1: 약학적 제제의 제조
1-1. 산제의 제조
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합한 후, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
1-2. 정제의 제조
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염 100 ㎎
옥수수 전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
1-3. 캡슐제의 제조
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염 100 ㎎
옥수수 전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
1-4. 주사액제의 제조
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염 10 ㎍/㎖
묽은 염산 BP pH 3.5로 될 때까지
주사용 염화나트륨 BP 최대 1 ㎖
적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤 계 화합물 또는 이의 염을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고, 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5 ㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120 ℃에서 15분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다.
제조예 2: 건강식품의 제조
2-1. 조리용 양념의 제조
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염 0.2 ~ 10 중량%로 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.
2-2. 토마토 케찹 및 소스의 제조
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염 0.2 ~ 1.0 중량%를 토마토 케찹 또는 소스에 첨가하여 건강 증진용 토마토 케찹 또는 소스를 제조하였다.
2-3. 밀가루 식품의 제조
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염 0.1 ~ 5.0 중량%를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
2-4. 스프 및 육즙( gravies )의 제조
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염 0.1 ~ 1.0 중량%를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
2-5. 그라운드 비프(ground beef)의 제조
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물계 화합물 또는 이의 염 10 중량%를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
2-6. 유제품( dairy products )의 제조
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염 0.1 ~ 1.0 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
2-7. 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%),
종실류(들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%),
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염의 건조분말 (1 중량%),
영지(0.5중량%),
지황(0.5중량%)
2-8. 탄산음료의 제조
설탕 5~10%, 구연산 0.05~0.3%, 카라멜 0.005~0.02%, 비타민 C 0.1~1%의 첨가물을 혼합하고, 여기에 79~94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85~98 ℃에서 20~180 초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5~0.82% 주입하여 꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염을 함유하는 탄산음료를 제조하였다.
2-9. 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.
2-10. 야채쥬스의 제조
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염 0.5g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.
2-11. 과일쥬스의 제조
꾸지뽕나무 추출물, 분획물, 잔톤계 화합물 또는 이의 염 0.1 g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.

Claims (25)

  1. 꾸지뽕나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 뉴라미니데이즈는 A형 인플루엔자 바이러스, B형 인플루엔자 바이러스, C형 인플루엔자 바이러스, 클로스트리디움 퍼프린젠(Clostridium perfringens) 또는 인간에서 유래한 것을 특징으로 하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 뉴라미니데이즈는 조류 인플루엔자 바이러스에서 유래한 것을 특징으로 하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물.
  4. 제1항의 꾸지뽕나무 추출물로부터 분획하여 얻은 꾸지뽕나무 분획물을 유효성분으로 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 꾸지뽕나무 분획물은 꾸지뽕나무 추출물을 물에 현탁시킨 후 헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 분획하여 얻은 것을 특징으로 하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물.
  6. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물.
    [화학식 1]
    Figure 112009023011549-PAT00040
    상기 화학식 1에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, 히드록시기, C1~C20의 알콕시기, C2~C20의 알케닐기, C2~C20의 알키닐기,
    Figure 112009023011549-PAT00041
    또는
    Figure 112009023011549-PAT00042
    이고,
    R3 및 R4는 서로 피란, 또는 C1~C4의 알킬기,
    Figure 112009023011549-PAT00043
    또는
    Figure 112009023011549-PAT00044
    로 치환된 피란을 형성할 수 있고,
    R6 및 R7은 서로 퓨란, 또는 C1~C4의 알킬기,
    Figure 112009023011549-PAT00045
    또는
    Figure 112009023011549-PAT00046
    로 치환된 퓨란을 형성할 수 있다.
  7. 제6항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화학식 2-9로 표시되는 화합물인 것을 특징으로 하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물.
    [화학식 2]
    Figure 112009023011549-PAT00047
    [화학식 3]
    Figure 112009023011549-PAT00048
    [화학식 4]
    Figure 112009023011549-PAT00049
    [화학식 5]
    Figure 112009023011549-PAT00050
    [화학식 6]
    Figure 112009023011549-PAT00051
    [화학식 7]
    Figure 112009023011549-PAT00052
    [화학식 8]
    Figure 112009023011549-PAT00053
    [화학식 9]
    Figure 112009023011549-PAT00054
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 조성물을 뉴라미니데이즈를 포함하는 시료와 접촉시키는 단계를 포함하는 뉴라미니데이즈의 활성을 억제하는 방법.
  9. 꾸지뽕나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이러스는 A형 인플루엔자 바이러스, B형 인플루엔자 바이러스, C형 인플루엔자 바이러스인 것을 특징으로 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
  11. 제9항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이러스는 조류 인플루엔자 바이러스인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
  12. 제9항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이러스 감염 질환은 독감, 감기, 인후염, 기관지염, 폐렴 또는 조류독감인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
  13. 제9항에 있어서, 상기 꾸지뽕나무 추출물은 꾸지뽕나무를 물, C1~C3의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
  14. 제13항의 꾸지뽕나무 추출물로부터 분획하여 얻은 꾸지뽕나무 분획물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 꾸지뽕나무 분획물은 꾸지뽕나무 추출물을 물에 현탁시킨 후 헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 분획하여 얻은 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
  16. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
    [화학식 1]
    Figure 112009023011549-PAT00055
    상기 화학식 1에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, 히드록시기, C1~C20의 알콕시기, C2~C20의 알케닐기, C2~C20의 알키닐기,
    Figure 112009023011549-PAT00056
    또는
    Figure 112009023011549-PAT00057
    이고,
    R3 및 R4는 서로 피란, 또는 C1~C4의 알킬기,
    Figure 112009023011549-PAT00058
    또는
    Figure 112009023011549-PAT00059
    로 치환된 피란을 형성할 수 있고,
    R6 및 R7은 서로 퓨란, 또는 C1~C4의 알킬기,
    Figure 112009023011549-PAT00060
    또는
    Figure 112009023011549-PAT00061
    로 치환된 퓨란을 형성할 수 있다.
  17. 제16항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화학식 2-9로 표시되는 화합물인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
    [화학식 2]
    Figure 112009023011549-PAT00062
    [화학식 3]
    Figure 112009023011549-PAT00063
    [화학식 4]
    Figure 112009023011549-PAT00064
    [화학식 5]
    Figure 112009023011549-PAT00065
    [화학식 6]
    Figure 112009023011549-PAT00066
    [화학식 7]
    Figure 112009023011549-PAT00067
    [화학식 8]
    Figure 112009023011549-PAT00068
    [화학식 9]
    Figure 112009023011549-PAT00069
  18. 제9항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물.
  19. 제9항 내지 제17항 중 어느 한 항의 조성물을 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 발병 또는 발병가능성이 있는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 치료방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이러스는 A형 인플루엔자 바이러스, B형 인플루엔자 바이러스, C형 인플루엔자 바이러스인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 치료방법.
  21. 제19항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이러스는 조류 인플루엔자 바이러스인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 치료방법.
  22. 제19항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이러스 감염 질환은 독감, 감기, 인후 염, 기관지염, 폐렴 또는 조류독감인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 치료방법.
  23. 제9항의 꾸지뽕나무 추출물 또는 제14항의 꾸지뽕나무 분획물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 개선용 건강식품.
  24. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 개선용 건강식품.
    [화학식 1]
    Figure 112009023011549-PAT00070
    상기 화학식 1에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 수소, 히드록시기, C1~C20의 알콕시기, C2~C20의 알케닐기, C2~C20의 알키닐기,
    Figure 112009023011549-PAT00071
    또는 이고,
    R3 및 R4는 서로 피란, 또는 C1~C4의 알킬기,
    Figure 112009023011549-PAT00073
    또는
    Figure 112009023011549-PAT00074
    로 치환된 피란을 형성할 수 있고,
    R6 및 R7은 서로 퓨란, 또는 C1~C4의 알킬기,
    Figure 112009023011549-PAT00075
    또는
    Figure 112009023011549-PAT00076
    로 치환된 퓨란을 형성할 수 있다.
  25. 제24항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화학식 2-9로 표시되는 화합물인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 개선용 건강식품.
    [화학식 2]
    Figure 112009023011549-PAT00077
    [화학식 3]
    Figure 112009023011549-PAT00078
    [화학식 4]
    Figure 112009023011549-PAT00079
    [화학식 5]
    Figure 112009023011549-PAT00080
    [화학식 6]
    Figure 112009023011549-PAT00081
    [화학식 7]
    Figure 112009023011549-PAT00082
    [화학식 8]
    Figure 112009023011549-PAT00083
    [화학식 9]
    Figure 112009023011549-PAT00084
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