KR100999872B1

KR100999872B1 - 홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 이로부터 분리한플라보노이드계 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는바이러스 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR100999872B1
Application number: KR1020080055069A
Authority: KR
Inventors: 이우송; 정형재; 권형준; 김장훈; 박기훈; 전효곤; 윤병대
Original assignee: 한국생명공학연구원
Priority date: 2008-06-12
Filing date: 2008-06-12
Publication date: 2010-12-09
Also published as: KR20090129016A

Abstract

본 발명은 홍경천(Rhodiola) 추출물, 홍경천 분획물, 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로서, 특히 홍경천 추출물로부터 분리되어진 화합물, 이의 유도체 화합물들은 뉴라미니데이즈에 대한 우수한 억제효과를 나타내므로, 본 발명에 따른 조성물은 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 및 치료용으로 또는 인플루엔자 소독용으로 유용하게 사용될 수 있다.

홍경천, 홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 뉴라미니데이즈, 항 바이러스제, 바이러스 질환, 인플루엔자

Description

홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical compositions for prevention and treatment of viral diseases containing rodiola extracts, fractions, the isolated flavonoid compounds therefrom, derivatives compounds thereof or the pharmaceutically acceptable salts as an active ingredient}

본 발명은 홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물 또는 인플루엔자 소독용 조성물에 관한 것이다.

인플루엔자 바이러스는 급성 호흡기 질환을 일으키는 전염성이 매우 강한 바이러스로 온 세계에 집단감염이나 대 유행을 야기하여 소아, 고령자, 심폐질환 환자에게 심각한 호흡기 증상을 유발하는 바이러스중 하나이다(Hien, T. T. et al. N. Eng . J. Med ., 350, 1179, 2004). 인플루엔자 바이러스는 분류학적으로 오르토믹소바이러스(Orthomyxovirus)에 속하며 A, B, C의 3가지 형이 있으며 특히 유행적으로 확산되는 형은 A, B형이다. 이들 바이러스 표면에는 당단백질인 적혈구 응집소(Hamagglutinin, HA)와 뉴라미니데이즈(Neuraminidase, NA)라는 두 종류의 표면 항원이 존재하고 내부에는 8개의 분절되어진 RNA가 존재한다. 헤마글루티닌(Hamagglutinin)은 머리와 줄기로 구성되어져 있는 trimer 형태이며 이중 머리 부분이 대부분의 항원변이와 관련되어 있으며 숙주세포의 표면에 있는 말단 시알산 잔기와 결합하여 바이러스를 부착시키고 순차적으로 바이러스가 숙주세포로 침투가 가능하게 한다(Chandrasekaran, A. et al. Nature biotechnology 26, 107, 2008). 뉴라미니데이즈(neuraminidase)는 머리와 줄기형태를 가지는 버섯모양의 테트라머(tetramer)로 머리상단 표면에 활성자리가 있으며 감염된 세포내에서 복제 및 증식된 바이러스가 세포표면의 올리고사카라이드 부분과 말단 neuraminic acid 잔기를 연결해주는 알파-ketosidic bond를 절단하여 바이러스를 숙주세포 밖으로 배출하여 호흡기 점막세포로 침투하는데 중요한 역할을 한다(a. Mark, V. I. Nature review 6, 967, 2007. b. Huberman, K. et al. Virology 214, 294, 1995).

바이러스의 표면항원들은 동일한 아형에서 변이를 일으키고, 매년 새로운 항원 변이주가 출현한다. 특히 인플루엔자 바이러스 중 최근까지 문제가 대두되고 있는 조류인플루엔자 바이러스는 대변이가 일어나 닭, 칠면조, 오리 및 야생조류 등 여러 종류의 조류를 감염시키며 빠른 전파로 인해 닭이 감염되면 80% 이상이 폐사함으로 전 세계적으로 양계산업에 가장 큰 피해와 위협을 주는 바이러스 질환이며, 그 파급효과는 양계산업에만 한정되어 있지 않고 인체에 대한 감염으로 인하여 사람에게 질병을 일으키는 것으로 보고되어지고 있다(Gubareva, L. V. et al. Lancet . 355, 2000).

따라서, 바이러스 질병을 치료할 목적으로 상피세포로의 흡착을 저해, 세포로의 침입을 저해, 유전자의 전사 및 복제의 저해, 단백질 합성의 저해, 세포로부터 방출의 억제등을 생각할 수 있으며 각각 항 바이러스의 타겟이 되고 있다.

종전부터 인플루엔자 바이러스를 치료하기 위해서 기존의 개발되어진 치료제로는 아만타딘(Amatadine), 리만타딘(Rimatadine), 자나미비(Zanamivir), 오셀타미비르(Oseltamivir)등 4가지 물질이 미국식품의약품 안전청(FDA)으로부터 승인되어 사용해오고 있다. 그러나 바이러스 증식에 필수적인 세포막 단백질인 M2 단백질의 이온채널을 차단하여 바이러스의 탈외피(uncoating)를 방해함으로서 항바이러스 작용을 하는 M2 억제제인 아만타딘(Amatadine), 리만타딘(Rimatadine)은 인플루엔자 바이러스 A형에만 효과가 있으며 40년 동안 사용되는 동안 내성을 가진 바이러스가 발생되고 신경계 및 위장에 심각한 부작용이 나타나는 것으로 보고되어지고 있다(Bantia, S. et al. Antiviral Research 69, 39, 2006). 1999년 이후에는 바이러스의 증식에 중요한 역할을 하고 내성 발생빈도가 적으며, A형 및 B형 인플루엔자 바이러스 모두에 안정적으로 존재하는 뉴라미니데이즈의 저해제인 자나미비르(Zanamivir), 오셀타미비르(Oseltamivir)와 같은 신약에 의한 바이러스 감염 치료에 대한 보고가 이루어지고 있다(Zhang, J. et al. Bioorg . Med . Chem . Lett . 16, 3009, 2006).

그러나 자나미비르의 경우에는 높은 항바이러스 효과를 가지고 있지만 낮은 생체이용율과 빠른 신장에서의 배출의 단점(Ryan, D. M. et al. Antimicrob . Agents Chemother ., 39, 2583, 1995)을 가지고 있으며, 오셀타미르는 심각한 구토증세가 나타나는 부작용이 있다.

현재까지 개발되어진 항바이러스들은 심한 부작용을 나타내고 있으며 그 응용에 대한 많은 주의가 필요하다. 또한 백신의 개발은 유행하는 바이러스의 형과 백신의 바이러스가 맞지 않으면 효과가 적은 문제점이 있기 때문에 감염 억제 효과가 뛰어나고 안정성이 우수한 새로운 인플루엔자 바이러스제의 개발의 필요성이 증가하고 있다.

한편, 홍경천(紅景天, Rhodiola)은 피지식물군, 경천과, 홍경천속에 속하는 고산지대에서 자라는 다년생 초본식물로서 전 세계적으로 96종이 있는 것으로 보고되어져 있으며 특히 중국에는 50%가 서식한다. 또한, 홍경천은 온도가 낮고 건조하며 산소가 적고 강한 자외선이 비치며 낮과 밤의 온도차가 큰 해발 1700-2300m에서 생존할 수 있는 특수한 적응성을 가지고 있는 식물이다.

최근에는 인삼, 가시오가피 이후에 발견한 보건약용 식물의 일종으로 원기를 회복하고 병과 독을 극복할 수 있어 고원 인삼이라는 별칭을 가지고 있다(김주철, 안상득, 이명례, 원색백두자원식물, 아카데미서적, 서울, p.324). 홍경천은 식용, 약용으로 쓰이고, 민간에서는 진정제, 해열제, 수렴제로 쓰였으며 한의학에서는 강장약, 특히 노인성 심장쇠약, 음위(陰威)에 효과가 뛰어나며 당뇨병, 빈혈, 담낭질 병에 가루약이나 탕제로 사용되고 전신 및 육체 피로, 신경쇠약, 산후 치료약제로 사용되고 있다(Zucker, L. M., et al. J. Lipid Res . 13, 234, 1972). 홍경천 뿌리 및 줄기에서 분리되어진 주요 성분으로는 플라보노이드(Ming, D. S., et al. Phytother. Res . 19, 740, 2005), 모노터페노이드(Ma, G. et al. Chem . Pharm . Bull. 54, 1229, 2006), 페닐 프로판노이드 및 페닐에탄올 유도체(Tolonen, A. et al. Chem . Pharm . Bull . 51, 467, 2003), 알리파틱 글리코사이드 (Nakamura, S. et al. Chem . Pharm . Bull . 55, 1505, 2007) 등이 있다.

종래 홍경천 추출물과 관련하여 등록된 특허기술을 살펴보면, 홍경천 추출물을 함유하는 혈중 알콜 농도 저하용 조성물(대한민국 특허등록 제10-0179087호), 홍경천 추출물을 함유하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물(대한민국 특허등록 제10-0179088호), 순환기 질환의 예방 및 치료 효능을 갖는 홍경천 추출물(대한민국 특허등록 제10-0265385호), 고산 홍경천 추출물을 함유하는 간 섬유화 억제 조성물(대한민국 특허등록 제10-0316790호), 홍경천 뿌리 추출물을 함유한 면역기능강화제 조성물(대한민국 특허등록 제10-0386809호), 홍경천 추출물을 함유하는 미백조성물(대한민국 특허등록 제10-0445404호) 등이 있다. 하지만 홍경천 추출물의 바이러스 질환, 특히 인플루엔자 바이러스의 억제 및 예방 용도는 전혀 알려진 바 없다.

이에 본 발명자들은 홍경천 추출물 및 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보 노이드 화합물들, 이의 유도체 화합물들이 뉴라미니데이즈에 대한 억제활성을 가짐을 확인하여, 이의 바이러스 질환의 예방 및 치료 용도 또는 인플루엔자 소독 용도를 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 이로부터 분리한 플라보노이드 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물 또는 인플루엔자 소독용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 이로부터 분리한 플라보노이드 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 개선용 건강식품 조성물을 제공하는 데 있다.

상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 이로부터 분리한 플라보노이드 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 본 발명은 홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 이로부터 분리한 플라보노이드 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 소독용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 이로부터 분리한 플라보노 이드 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.

본 발명은 홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 이로부터 분리한 플라보노이드 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 추출물, 분획물 또는 화합물은 뉴라미니데이즈에 대한 우수한 억제효과를 나타내므로, 인플루엔자 바이러스의 감염의 예방 및 치료 용도 또는 소독 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 홍경천 추출물을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 홍경천 추출물은 홍경천으로부터 추출하여 얻은 것이 바람직한데, 상기 홍경천은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 홍경천 추출물을 제조하는 방법은 초음파 추출법, 여과법 및 환류추출법 등 당업계의 통상 적인 추출방법을 사용할 수 있다. 바람직하게는 홍경천 건조물을 물, C₁~C₃의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물일 수 있으며, 보다 바람직하게는 C₁~C₃의 알코올로 추출한 추출물일 수 있고, 가장 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올로 추출한 추출물일 수 있다. 일례로 홍경천 뿌리 건조물을 세절한 후 추출용기에 넣고 C₁~C₃의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올을 넣고 일정기간 상온에서 방치한 다음, 여과하여 알코올 추출물을 얻을 수 있다. 이때 추출은 상온에서 1주 동안 방치하는 것이 바람직하며, 이후에 농축 또는 동결건조 등의 방법을 추가적으로 거칠 수 있다.

또한, 본 발명은 홍경천 분획물을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

바람직하게는 상기 홍경천 분획물은 홍경천 추출물을 물에 현탁시킨 후 헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 것일 수 있다.

나아가, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 캠프페롤, 하기화학식 2로 표시되는 캠프페롤-3-오-글루코시드, 하기화학식 3으로 표시되는 캠프페롤-3-오-루티노시드, 하기 화학식 4로 표시되는 허바세틴, 하기 화학식 5로 표시되는 로디올리닌, 하기 화학식 6으로 표시되는 로디오닌, 하기 화학식 7로 표시되는 로디오신, 하기 화학식 8로 표시되는 허바세틴-3,8-오-디글루코시드 및 이들의 약학적으로 허 용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

[화학식 1]

[화학식 2]

[화학식 3]

[화학식 4]

[화학식 5]

[화학식 6]

[화학식 7]

[화학식 8]

상기 화학식 1 내지 8의 화합물은 홍경천 추출물 또는 홍경천 분획물로부터 분리하거나, 시중에서 구입하거나 또는 유기화학적 합성법으로 합성하여 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 상기 화합물 중 화학식 1, 5, 6 및 7로 표시되는 화합물은 홍경천에 존재하는 대표적인 활성성분으로, 상기 화합물을 분리하기 위한 방법은 하기와 같이 수행될 수 있다.

본 발명은 홍경천을 물, C₁~C₄의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 홍경천 추출물을 얻는 단계(단계 1);

상기 단계 1에서 얻은 홍경천 추출물을 헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 분획하여 홍경천 분획물을 얻는 단계(단계 2); 및

상기 단계 2에서 얻은 홍경천 분획물을 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 상기 화학식 1, 5, 6 내지 7의 화합물들을 얻는 단계(단계 3)를 포함하여 분리되는 상기 화학식 1, 5, 6 내지 7로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.

본 발명에 따른 단계 1은 홍경천을 물, C₁~C₃의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 홍경천 추출물을 얻는 단계이다. 상기 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등의 저급 알코올을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올이고, 가장 바람직하게는 에탄올이다.

본 발명에 따른 단계 1에 있어서, 상기 알코올 추출물을 얻는 방법은 건조된 홍경천 뿌리를 적당한 크기로 분쇄하여 추출용기에 넣고 적당한 양의 알코올을 첨 가하여 3주 동안 방치한 다음, 상기 추출액을 여과하고, 감압 농축하여 홍경천의 알코올 추출물을 제조할 수 있다.

본 발명에 따른 단계 2는 상기 단계 1에서 얻은 홍경천 추출물을 헥산, 클로로포름 및 부탄올로 분획하여 홍경천 분획물을 얻는 단계이다.

본 발명에 따른 단계 3은 상기 단계 2에서 얻은 홍경천 분획물을 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 화학식 1, 5, 6 내지 7로 표시되는 플라보노이드계 화합물을 얻는 단계이다.

바람직하게는 상기 2단계의 에틸아세테이트 가용추출물을 클로로포름과 메탄올의 혼합용매를 이동상 용매로 두 번에 걸쳐 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여, 뉴라미니데이즈 저해활성이 높은 분획물을 선정하고, 실리카겔 크로마토그래피를 수행하는데, 실리카겔을 고정상으로 하고 클로로포름:메탄올 9:1(v/v)비의 전개용매조건으로 전개시켜 분획한 후 수득한 분획물을 모아 세파덱스 LH-20(sephadex LH-20) 컬럼을 고정상으로 하고 메탄올 또는 클로로포름:메탄올 1:1(v/v)비를 이동상으로 하는 오픈 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 정제된 분획물을 얻고, 이 분획물로부터 본 발명의 플라보노이드계 화합물들을 분리하여 수득이 가능하다.

본 발명에 따른 홍경천 추출물 및 분획물의 뉴라미니데이즈 효소에 대한 저해 활성을 측정한 결과, 홍경천 에탄올 추출물은 20 μg/mL의 농도에서 92%의 억제활성을 나타내었고, 이의 분획물 중 에틸아세테이트 분획물은 95%의 억제활성을 나타내었다(표 1 참조).

또한, 상기 홍경천 추출물 또는 분획물로부터 분리된 화합물들과, 이들의 유도체 화합물들의 뉴라미니데이즈 효소에 대한 저해활성을 측정한 결과 높은 저해효과를 나타내어, 본 발명 화합물들의 우수한 항 인플루엔자 활성을 확인하였다(표 2 참조).

따라서, 본 발명의 홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 이로부터 분리한 화합물 및 이의 유도체 화합물은 뉴라미니데이즈 효소에 대해 저해활성을 나타내므로, 바이러스 감염에 의해 유발되는 바이러스계 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물로 또는 소독용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명은 상기 화학식 1 내지 8로 표시되는 플라보노이드계 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물 또는 라세미체를 모두 포함한다.

본 발명의 화학식 1 내지 8의 플라보노이드계 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지 방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 화학식 1의 유도체를 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다.

동량의 화학식 1 내지 8의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고, 이어서 이 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제 조할 수도 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속 염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

상기 조성물은 약학적 조성물로 사용할 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리 에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)하거나 경구 투여할 수 있으며, 하루에 체중 1 ㎏당 0.1~500 ㎎, 바람직하게는 1~100 ㎎, 가장 바람직하게는 0.5~10 mg의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 식이, 투여 시간, 투여 방법, 배설률, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.

본 발명의 화합물을 마우스에 경구 투여하여 독성 실험을 수행한 결과, 경구 투여 독성시험에 의한 50% 치사량(LD₅₀)은 적어도 1,000 mg/kg 이상인 안전한 물질로 판단된다.

아울러, 본 발명은 홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 이로부터 분리한 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 소독 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.

상기 바이러스 질환은 인플루엔자 바이러스의 감염에 의해 야기되는 것일 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 바이러스 질환의 예방 또는 개선을 목적으로 홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 이로부터 분리한 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 식품, 음료 등의 건강보조 식품에 첨가할 수 있다. 이 경우, 홍경천 추출물, 분획물, 이로부터 분리한 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 식품 첨가물로 사용시에 원료에 대하여 0.01~20 중량%, 바람직하게는 0.1~5 중량%의 양으로 첨가될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안정성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다. 상기 추출물, 분획물, 이로부터 분리한 화합물 또는 이의 유도체 화합물을 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한이 없다. 상기 추출물, 분획물, 이로부터 분리한 화합물, 이의 유도체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸컬릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함하는 낙농제품, 각종 스프, 음료 수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 식품 보조 첨가제는 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 수크로오스 등과 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 솔비톨, 에르트리톨 등의 당알코올이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명에 따른 조성물 100 중량부당 일반적으로 약 0.01~0.04 중량부, 바람직하게는 0.02~0.03 중량부이다.

상기 외에 본 발명에 따른 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 중점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명에 따른 조성물은 천연 과일쥬스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명에 따른 조성물 100 중량부당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명을 상세히 설명한다. 단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예에 의해 한 정되는 것은 아니다.

실시예 1: 홍경천 추출물의 제조

건조된 홍경천(한국 홍경천 협회, 대한민국)뿌리 1.0 kg에 100% 에탄올(EtOH) 10L를 가하여 실온에서 1주 동안 방치시킨 후, 여과지로 여과하고 농축하여 홍경천 뿌리의 에탄올 추출물(380 g)을 얻었다.

실시예 2: 홍경천 분획물의 제조

상기 실시예 1에서 얻은 에탄올 추출물을 물 1000 mL에 현탁시킨 후, n-헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트 순으로 분획하여, n-헥산 분획물(n-hexane-soluble) 11 g, 클로로포름 분획물(CHCl₃-soluble) 14 g 및 에틸아세테이트 분획물(EtOAc-soluble) 59 g을 각각 수득하였다.

실시예 3: 플라보노이드 화합물의 분리 및 구조 동정

상기 실시예 2에서 수득한 에틸아세테이트 가용추출물 59 g을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피와 이동상 용매로 클로로포름과 메탄올의 혼합용매를 사용하여 두 단계로 분리하였다.

우선, 첫 번째로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 : Merk, Art 9385, 컬럼크기 : φ7 × 40 cm)에 클로로포름:메탄올 = 9:1, 7:1, 5:1, 3:1, 1:1 및 메 탄올 100%(v/v)의 이동상 용매조건으로 각각 1.5 L씩을 전개시켜 3가지 분획물(Fr.1～3)을 수득하였으며, 1번 분획물 (Fr.1, 클로로포름:메탄올 = 9:1 및 7:1 용매조건, 수득량 7.6 g)대하여, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피법을 수행하였다. 이때, 클로로포름:메탄올 = 20:1, 15:1, 10:1, 7:1의 이동상 용매조건으로 각각 500 mL씩을 전개시켜 4가지 분획물 (Fr.1-1～1-4)을 수득하였으며, 분획물 3(Fr.1-3, 클로로포름:메탄올 = 10:1 내지 7:1 용매조건, 3.7 g)은 세파덱스 LH-20 컬럼(sephadex LH-20 column, GE Heathcare Co, Sweden, CHCl₃/MeOH = 1:1의 용매조건) 및 Lichroprep RP-18 (40 -63 μm, Merck)을 이용하여 화학식 1의 캠프페롤 화합물 및 화학식 5의 로딜올리닌 화합물을 수득하였으며, 분획물 2 (Fr.2, 클로로포름:메탄올 = 5:1 및 3:1 용매조건, 수득량 25 g)대하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피법을 수행하였다. 이때, 클로로포름:메탄올 = 9:1, 5:1, 3:1, 1:1 및 메탄올 100%(v/v)의 이동상 용매조건으로 각각 500 ㎖씩을 전개시켜 5개 분획물 (Fr.2-1～2-5)을 수득하였으며 분획물 3 (Fr.2-3, 클로로포름:메탄올 = 5:1 내지 3:1 용매조건, 6.56 g)은 세파덱스 LH-20 컬럼(sephadex LH-20 column, GE Heathcare Co, Sweden, CHCl₃/MeOH = 1:1의 용매조건) 및 Lichroprep RP-18 (40 -63 μm, Merck)을 이용하여 화학식 6의 로디오닌 및 화학식 7의 로디오신을 분리하였다.

상기 네 가지 화합물의 구조분석을 위하여 실시예 1을 통하여 얻은 물질은 VG 고분해능 GC/MS 분광기(VG high resolution GC/MS spectrometer, Election Ionization MS, Autospec-Ultima, Micromass, UK)를 사용하여 분자량 및 분자식을 결정하였으며, 선광도는 편광기(DIP-181 digital polarimeter, Jasco, Japan)를 사용하여 측정하였다. 또한 핵자기 공명(NMR) 분석(AMX 500, Bruker, Germany)을 통하여 ¹H NMR, ¹³C NMR, 호모-코지(HOMO-COSY), HMQC(¹H-Detected heteronuclear Multiple-Quantum Coherence), HMBC(Heteronuclear Multiple-Bond Coherence), DEPT(Distortionless Enhancement by Polarization) 스펙트럼을 얻고, 분자구조를 결정하였다.

이상의 기기분석결과를 발표된 문헌의 것과 비교 분석한 결과, 하기 화학식 1의 캠프페롤(18mg; Lee, M. W., Lee, Y. A., Park, H. M., Toh, S. H., Lee, E. J., Jang, H. D., Kim, Y. H., Arch . Parm . Res. 23, 455, 2002), 하기 화학식 5의 화합물을 로디올리닌(24mg; Yu W. S., Chen X. M., Li H., Yang L., Planta Med . 59, 80, 1993), 하기 화학식 6의 로디오닌(92mg; Lee, M. W., Lee, Y. A., Park, H. M., Toh, S. H., Lee, E. J., Jang, H. D., Kim, Y. H., Arch . Parm . Res . 23, 455, 2002), 하기 화학식 7의 로디오신(89mg; Yu W. S., Chen X. M., Li H., Yang L., Planta Med . 591, 80, 1993)으로 확인하였다. 구체적인 분석결과는 다음과 같다.

캠프페롤

1) 물성: 노란색 결정

2) 분자량: 286.0477

3) 분자식: C₁₅H₁₀O₆

4) ¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ 8.06 (d, J = 8.90 Hz, 2H, H-2′,6′), 6.88 (d, J = 9.15 Hz, 2H, H-3′,5′), 6.37 (d, J = 2.2 Hz, 1H, H-8), 6.16 (d, J = 2.0 Hz, 1H, H-6).

5) ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ 177.4(C-4), 165.6(C-7), 162.5(C-5), 160.5(C-4′), 158.2(C-9), 148.0(C-2), 137.1(C-3), 130.7(C-2′,6′), 123.7(C-1′), 116.3(C-3′,5′), 104.5(C-10), 99.3(C-6), 94.5(C-8).

로디올리닌

1) 물성: 녹색 결정

2) 선광도: [α]_D ²⁵-57.5 °(c = 0.6, Acetone)

3) 분자량: 480.1056

4) 분자식: C₂₅H₂₀O₁₀

5) ¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ 8.16 (d, J = 8.60 Hz, 2H, H-2′,6′), 7.02 (d, J = 1.40 Hz, 1H, H-2″), 6.92 (dd, J = 1.75 Hz, 8.05 Hz, 1H, H-6″), 6.90 (d, J = 8.9 Hz, 2H, H-3′,5′), 6.85 (d, J = 8.0 Hz, 1H, H-5″), 6.24 (s, 1H, H-6), 5.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H, H-7″), 4.06 (m, 1H, H-8″), 3.88 (s, 3H, -OCH₃), 3.85 (m, 1H, H-9″), 3.53 (dd, J = 3.70 Hz, 12.6 Hz, 1H, H-9″).

6) ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ 177.4(C-4), 160.7(C-4′), 154.1(C-5), 150.5(C-7), 149.2(C-3″), 148.5(C-4″), 148.1(C-2), 145.5(C-9), 137.5(C-3), 140.0(C-2′,6′), 128.7(C-1″), 126.2(C-8), 123.7(C-1′), 121.8(C-5″,6″), 116.3(C-3′,5′), 112.1(C-2″), 105.5(C-10), 99.2(C-6), 79.7(C-8″), 78.9(C-7 ″), 61.9(C-9), 56.5(-OCH₃).

로디오닌

1) 물성: 녹색 결정

2) 선광도: [α]_D ²⁵-78.5°(c = 0.7, Acetone)

3) 분자량: 448.1006

4) 분자식: C₂₁H₂₀O₁₁

5) ¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ 8.20 (d, J = 8.8 Hz, 2H, H-2′,6′), 6.90 (d, J = 8.6 Hz, 2H, H-3′,5′), 6.64 (s, 1H, H-6), 5.53 (d, J = 1.4 Hz, 1H, H-1″), 4.14 (q, J = 1.7 Hz, 1H, H-2), 3.98 (dd, J =3.4 Hz, 9.45 Hz, 1H, H-5″), 3.72-3.67 (m, 1H, H-3″), 3.49 (t, J = 9.57 Hz, 1H, H-4″), 1.27 (d, J = 6.3 Hz, 3H, -CH₃).

6) ¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ 176.4(C-4), 159.4(C-4′), 152.4(C-5), 150.1(C-7), 147.4(C-2), 144.8(C-9), 135.9(C-3), 129.7(C-2′,6′), 127.1(C-8), 122.4(C-1′), 114.9(C-3′,5′), 104.7(C-10), 99.6(C-1″), 97.9(C-6), 72.4(C-3″), 70.7(C-4″), 70.4(C-2″), 69.8(C-5″), 16.7(C-6″, -CH₃).

로디오신

1) 물성: 녹색 결정

2) 선광도: [α]_D ²⁵-42.8 °(c = 0.3, Acetone)

3) 분자량: 610.1534

4) 분자식: C₂₇H₃₀O₁₆

5) ¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ 8.20 (d, J = 8.85 Hz, 2H, H-2′,6′), 6.91 (d, J = 9.15 Hz, 2H, H-3′,5′), 6.64 (s, 1H, H-6), 5.56 (s, 1H, H-1″), 4.67 (d, J = 7.45 Hz, 1H, H-1), 4.42 (d, J = 1.15 Hz, 1H), 4.16 (dd, J = 3.30 Hz, 9.30 Hz, 1H), 3.90 (d, J = 11.45 Hz, 1H), 3.75 (m, 2H), 3.67 (t, J = 9.45 Hz, 1H), 3.42 (m, 1H), 3.37 (m, 2H), 3.35 (m, 1H), 1.28 (d, J = 6.0 Hz, 3H, -CH₃).

6) ¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ 177.7(C-4), 160.7(C-4′), 153.6(C-5), 150.9(C-7), 148.7(C-2), 145.9(C-9), 137.2(C-3), 131.0(C-2′,6′), 128.5(C-8), 123.8(C-1′), 116.3(C-3′,5′), 106.1(C-1), 105.7(C-10), 100.5(C-6), 99.1(C-1″), 82.3(C-3″), 77.8(C-5), 77.7(C-2), 75.4(C-3), 72.4(C-4″), 71.2(C-4), 71.0(C-2″), 70.8(C-5″), 62.4(C-6), 18.1(C-6″, -CH₃).

실시예 4: 유도체 화합물의 준비

실시예 3에서 분리한 화합물들의 유도체를 시그마(Sigma Aldrich)에서 구입하였다. 구입한 유도체들은 각각 화학식 2로 표시되는 캠프페롤-3-오-글루코시드, 화학식 3으로 표시되는 캠프페롤-3-오-루티노시드, 화학식 4로 표시되는 허바세틴, 화학식 8로 표시되는 허바세틴-3,8-오-디글루코시드이다.

실험예 1: 홍경천 추출물 및 분획물의 뉴라미니데이즈 저해 활성 측정

본 발명의 실시예 1의 홍경천 추출물과 실시예 2의 홍경천 분획물의 인플루엔자 바이러스 뉴라미니데이즈에 대한 인플루엔자 저해활성을 측정하기 위하여, Markus 등의 방법(Anal. Biochem. 250, 176, 1997)을 일부 수정하여 사용하였다. 효소원으로 뉴라미니데이즈(효소 농도, 0.1～0.11 U, from Clistridium Perfringgens, Sigma), 기질은 2′-(4-trifluoromethyl)-α-D-N-acetylneuraminic acid를 합성하여 사용하였다.

실시예 1 및 2의 추출물과 분획물을 메탄올에 녹여 20 μg/mL로 희석하였다. 상기 희석한 추출물과 분획물을 각각 10 μL씩 첨가하고 기질은 2′-(4-trifluoromethyl)-α-D-N-acetylneuraminic acid (최종 농도, 0.2 mM)를 10 μL를 넣고 50 mM 소듐 아세테이트 용액(pH=5.0) 70 μL와 혼합하였으며, 효소원인 뉴라미니데이즈(효소 최종농도,0.1～0.11 U) 10 μL을 첨가하여 37 ℃에서 15분 동안 반응시키고, 0.1 M 글라이신-수산화나트륨 용액 200 μL를 첨가하여 반응을 중지시켰다. 형광 분광기로 357 ㎚에서 흡광과 499nm에서의 발광을 측정함으로서 뉴라미니데이즈의 저해 활성을 측정하였다.

측정 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

본 발명 추출물 및 분획물의 뉴라미니데이즈 효소에 대한 저해 활성

추출물, 추출물 분획	억제활성¹⁾
홍경천 뿌리 열수 추출물	91.8% at 20 μg/mL
홍경천 뿌리 에탄올 추출물	92.1% at 20 μg/mL
홍경천 뿌리 n-헥산 분획물	92.5% at 20 μg/mL
홍경천 뿌리 클로로포름 분획물	89.1% at 20 μg/mL
홍경천 뿌리 에틸아세테이트 분획물	94.9% at 20 μg/mL
[주] 1) : 두번 실험의 평균값으로 결과를 나타내었다.

표 1에 나타낸 바와 같이, 대부분의 추출물 및 분획물들이 우수한 저해효과를 나타내었으며, 그 중에서도 에틸아세테이트 분획물이 가장 우수한 저해효과를 나타내었다.

실험예 2: 홍경천 추출물로부터 분리한 플라보노이드 화합물의 뉴라미니데이즈 저해 활성 측정

실시예 3에서 분리, 동정한 4종의 화합물에 대하여 실험예 1과 동일한 방법으로 뉴라미니데이즈에 대한 인플루엔자 저해활성을 측정하였다.

측정결과는 하기 표 2에 나타내었다.

본 발명 화합물들의 뉴라미니데이즈 효소에 대한 저해 활성

화합물	IC₅₀(μM)¹⁾
	19.9
	0.9
	21% at 25 mM
	1.6
	3.1
	21% at 25μM
	1.0
	3.5
[주] 1) : 두번 실험의 평균값으로 결과를 나타내었다.

상기 표 2에서 보는 바와 같이, 본 발명의 화합물인 캠프페롤, 캠프페롤-3-오-글루코시드, 캠프페롤-3-오-루티노시드, 허바세틴, 로디올리닌, 로디오닌, 로디오신 및 허바세틴-3,8-오-디글루코시드 화합물들은 낮은 IC₅₀값을 나타내었으며, 이로부터 뉴라미니데이즈 효소에 대한 저해 활성이 뛰어남을 확인할 수 있었다.

따라서, 본 발명의 화합물들은 뉴라미니데이즈에 대한 우수한 억제효과를 나타내므로, 이를 포함하는 조성물은 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 및 치료용으로 또는 인플루엔자 소독용으로 유용하게 사용될 수 있을 것으로 판단된다.

실험예 3: 본 발명의 화합물의 급성 독성 실험

본 발명의 화합물들에 대한 급성 독성을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

6주령의 특정 병원체 부재(SPF, specific pathogens free) C57BL/6J 마우스를 암수 각각 12 마리씩 4군(암수 각각 3마리/실험군)으로 나누어, 온도 22± 3℃, 습도 55± 10%, 조명 12L/12D의 동물실내에서 사육하였다. 마우스는 실험에 사용되기 전 1주일 정도 순화시켰다. 실험동물용 사료(마우스 및 랫트용, (주)제일제당, 서울, 대한민국) 및 음수는 멸균한 후 공급하였으며 자유 섭취시켰다.

상기 실시예 3 및 4에서 제조한 본 발명의 화합물들을 0.5% 트윈 80(tween 80) 에 50 mg/mL 농도로 조제한 후, 마우스 체중 20 g 당 0.04 mL(100 mg/kg), 0.2 mL(500 mg/kg) 및 0.4 mL(1,000 mg/kg)씩 경구 투여하였다. 시료는 단회 경구 투여하였으며, 투여 후 7일 동안 다음과 같이 부작용 또는 치사 여부를 관찰하였다. 즉, 투여당일은 투여 후 1시간, 4시간, 8시간, 12시간 뒤에, 그리고 투여 익일부터 7일째 까지는 매일 오전, 오후 1회 이상씩 일반증상의 변화 및 사망동물의 유무를 관찰하였다.

상기와 같은 급성 독성실험 결과, 시료를 투여한 모든 마우스에서 특기할 만한 임상증상이 나타나지 않았고 폐사된 마우스도 없었으며, 또한 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.

따라서, 본 발명의 화합물들은 모든 마우스에서 1,000 mg/kg까지 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD₅₀)이 1,000 mg/kg 이상인 안전한 물질로 판단되었다.

이하, 홍경천 추출물, 홍경천 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 함유한 약학적 제제 또는 건강식품의 예를 설명한다.

제제예 1: 약학적 제제의 제조

1-1. 산제의 제조

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 염 2 g

유당 1 g

상기의 성분을 혼합한 후, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

1-2. 정제의 제조

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 염 100 ㎎

옥수수 전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

1-3. 캡슐제의 제조

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 염 100 ㎎

옥수수 전분 100 ㎎

유당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

1-4. 주사액제의 제조

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 염 10 ㎍/㎖

묽은 염산 BP pH 3.5로 될 때까지

주사용 염화나트륨 BP 최대 1 ㎖

적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고, 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5 ㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120 ℃에서 15분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다.

제조예 2: 건강식품의 제조

2-1. 조리용 양념의 제조

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염 0.2 ~ 10 중량%로 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.

2-2. 토마토 케찹 및 소스의 제조

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염 0.2 ~ 1.0 중량%를 토마토 케찹 또는 소스에 첨가하여 건강 증진용 토마토 케찹 또는 소스를 제조하였다.

2-3. 밀가루 식품의 제조

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염 0.1 ~ 5.0 중량%를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.

2-4. 스프 및 육즙( gravies )의 제조

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염 0.1 ~ 1.0 중량%를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

2-5. 그라운드 비프(ground beef)의 제조

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염 10 중량%를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

2-6. 유제품( dairy products )의 제조

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염 0.1 ~ 1.0 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

2-7. 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%),

종실류(들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%),

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염의 건조분말(1 중량%),

영지(0.5중량%),

지황(0.5중량%)

2-8. 탄산음료의 제조

설탕 5~10%, 구연산 0.05~0.3%, 카라멜 0.005~0.02%, 비타민 C 0.1~1%의 첨가물을 혼합하고, 여기에 79~94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85~98 ℃에서 20~180초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5~0.82% 주입하여 홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염을 함유하는 탄산음료를 제조하였다.

3-2. 건강음료의 제조

액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.

3-3. 야채쥬스의 제조

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염 0.5g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.

3-4. 과일쥬스의 제조

홍경천 추출물, 분획물, 플라보노이드 화합물 또는 이의 염 0.1 g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 캠프페롤, 하기 화학식 2로 표시되는 캠프페롤-3-오-글루코시드, 하기 화학식 3으로 표시되는 캠프페롤-3-오-루티노시드, 하기 화학식 4로 표시되는 허바세틴, 하기 화학식 5로 표시되는 로디올리닌, 하기 화학식 6으로 표시되는 로디오닌, 하기 화학식 7로 표시되는 로디오신, 하기 화학식 8로 표시되는 허바세틴-3,8-오-디글루코시드 및 이들의 약학적으로 허용 가능한 염으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스의 감염에 의한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.

[화학식 1]

[화학식 2]

[화학식 3]

[화학식 4]

[화학식 5]

[화학식 6]

[화학식 7]

[화학식 8]
제1항에 있어서, 상기 화학식 1, 5, 6 내지 7의 화합물은 홍경천으로부터 분리된 것임을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스의 감염에 의한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제2항에 있어서, 상기 화학식 1, 5, 6 내지 7의 화합물은

홍경천을 물, C₁~C₃의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 홍경천 추출물을 얻는 단계(단계 1);

상기 단계 1에서 얻은 홍경천 추출물을 헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 분획하여 홍경천 분획물을 얻는 단계(단계 2); 및

상기 단계 2에서 얻은 홍경천 분획물을 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 상기 화학식 1, 5, 6 내지 7의 화합물들을 얻는 단계(단계 3)를 포함하여 분리되는 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스의 감염에 의한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제3항에 있어서, 상기 단계 1의 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스의 감염에 의한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제3항에 있어서, 상기 단계 2의 홍경천 분획물은 에틸아세테이트 분획물인 것을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스의 감염에 의한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 뉴라미니데이즈(neuraminidase)에 대한 억제활성을 나타내는 것임을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스의 감염에 의한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제 1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스의 감염에 의한 질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물.
삭제
제 1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 소독용 조성물.