KR20070109282A

KR20070109282A - 담마란계 화합물을 유효성분으로 포함하는 신장 보호용약학 조성물

Info

Publication number: KR20070109282A
Application number: KR1020060042040A
Authority: KR
Inventors: 백승훈; 강기성; 김현영; 김복득; 박정일
Original assignee: 주식회사 진생사이언스
Priority date: 2006-05-10
Filing date: 2006-05-10
Publication date: 2007-11-15
Also published as: KR100828192B1

Abstract

본 발명은 담마란(dammarane) 화합물을 유효성분으로 포함하는 신장보호용 약학조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 진세노사이드 (ginsenoside) Rk3, 진세노사이드 (ginsenoside) Rh4, PD (panaxadiol), PT (panaxatriol), PPD (protopanaxadiol), PPT (protopanaxatriol), DHPPD-I (dehydroprotopanaxadiol-I), DHPPD-II (dehydroprotopanaxadiol-II), DHPPT-I (dehydroprotopanaxatriol-I) 또는 DHPPT-II (dehydroprotopanaxatriol-II) 화합물을 유효성분으로 포함하는 신장질환의 예방 및 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

담마란 화합물, 신장보호

Description

담마란계 화합물을 유효성분으로 포함하는 신장 보호용 약학 조성물 {Pharmaceutical composition comprising dammarane compounds showing kidney protecting activity}

도 1은 가열에 의한 담마란 화합물의 구조 변화를 나타낸 도이고,

도 2는 담마란 화합물의 산 가수분해에 의한 PD(R=H) 및 PT(R=OH)생성을 나타낸 도이며,

도 3은 알칼리 가수분해에 의한 담마란 화합물의 변환에 대한 도이다.

본 발명은 담마란 화합물을 유효성분으로 포함하는 신장 보호용 약학조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 진세노사이드 (ginsenoside) Rk3, 진세노사이드 (ginsenoside) Rh4, PD (Panaxadiol), PT (Panaxatriol), PPD (protopanaxadiol), PPT (protopanaxatriol), DHPPD (Dehydroprotopanaxadiol)-I, DHPPD (dehydroprotopanaxadiol)-II, DHPPT (Dehydroproto panaxatriol)-I, 또는 DHPPT (Dehydroprotopanaxatriol)-II을 유효성분으로 포함하는 신장 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

신장은 인체에서 뇨(尿)를 통한 배설을 담당하는 중요한 배설기관이다. 여러 가지 의약품이나 환경 오염물질이 신장에 대한 독성을 나타내는 바, 신장독성을 일으키는 대표적인 약물로는 펜아세틴, 아스피린, 인도메타신 등의 비스테로이드성 해열 진통 소염제, 퓨로마이신, 다우노마이신, 시클로포스파미드, 페니실라민, 아드리아마이신, 씨스플라틴 등의 항암제, 면역억제제, 아미카신, 겐타마이신, 카나마이신, 네오마이신, 시소마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신 등의 아미노글라이코사이드계 항생제, 세팔로스포린계 항생제, 이미페넴, 멜로페넴 등 카바페넴계 항생제, 카드뮴, 납, 수은, 크롬 등의 중금속 및 무기·유기중금속 화합물, 클로로포름, D-세린, 설폰아미드, 2-브로모에틸렌, 하이드로브로마이드 등의 화합물 또는 오카라톡신, 시트리닌과 같은 곰팡이 독소 등이 있다. 그러나 현재까지 이러한 신장독성 유발 물질에 의한 신장독성을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있는 약물의 개발은 미흡한 실정이다.

담마란 화합물은 아래의 기본구조를 갖는 트리테르페노이드 화합물로 자연계에는 인삼속 식물에 주로 존재하는 것으로 알려져 있다. 담마란 화합물을 함유하고 있는 인삼속 식물은 고려인삼 (Panax ginseng), 화기삼 (Panax quinquefolia), 전칠삼 (삼칠, Panax notoginseng), 죽절삼 (Panax japonica), 삼엽삼 (Panax trifolia), 히말라야삼 (Panax pseudoginseng), 베트남삼 (Panax vietnamensis) 등이 있다 (고려삼의 이해, 고려인삼학회, p9, 1995; Advances in Ginseng Research, 고려인삼학 회, pp127-137, 1998). 담마란 화합물은 인삼속 식물의 특이성분이긴 하지만 인삼속이 아닌 돌외 (Gynostemma pentaphyllum Makino) 에서 발견되기도 한다 (Norberg A et al., J. Biol . Chem ., 279(40), pp41361-41367, 2004).

담마란 화합물은 프로토파낙스다이올과 프로토파낙스트리올을 모핵으로 가지고 있으며 자연계에서 발견되는 담마란 화합물들은 표 1에 나타나 있다.


Ginsenoside	R ₁	R ₂	R ₃
protopanaxadiol	H	H	H
protopanaxatriol	H	OH	H
ginsenoside-Ra₁	Glc-Glc-	H	Xyl-Ara(p)-Glc-
ginsenoside-Ra₂	Glc-Glc-	H	Xyl-Ara(f)-Glc-
ginsenoside-Ra₃	Glc-Glc-	H	Xyl-Glc-Glc-
ginsenoside-Rb₁	Glc-Glc-	H	Glc-Glc-
ginsenoside-Rb₂	Glc-Glc-	H	Ara(p)-Glc-
ginsenoside-Rb₃	Glc-Glc-	H	Xyl-Glc-
ginsenoside-Rc	Glc-Glc-	H	Ara(f)-Glc-
ginsenoside-Rd	Glc-Glc-	H	Glc-
ginsenoside-Rg₃	Glc-Glc-	H	H
ginsenoside-Rh₂	Glc-	H	H
ginsenoside-Ri	Ac-Glc-Glc-	H	Glc-Glc-
ginsenoside-Rs₁	Ac-Glc-Glc-	H	Ara(p)-Glc-
ginsenoside-Rs₂	Ac-Glc-Glc-	H	Ara(f)-Glc-
malonyl-ginsenoside-Rb₁	Glc-Glc-	H	Glc-Glc-
malonyl-ginsenoside-Rb₁	Glc-Glc-	H	Ara(p)-Glc-
malonyl-ginsenoside-Rc	Glc-Glc-	H	Ara(f)-Glc-
malonyl-ginsenoside-Rd	Glc-Glc-	H	Glc-
ginsenoside-Re	H	Glc-Rha-	Glc-
ginsenoside-Rf	H	Glc-Glc-	H
ginsenoside-Rg₁	H	Glc-	Glc-
ginsenoside-Rg₂	H	Glc-Rha-	H
ginsenoside-Rh₁	H	Glc	H
20-gluco-ginsenoside-Rf	H	Glc-Glc-	Glc-

담마란 화합물은 가열과정 중 글리코실잔기의 이탈에 의해 Rg2, Rg3, Rh2, Rh1 등이 생성되며 이어서 20번 위치에서 탈수반응이 일어나 Rg5, Rk1, Rh3, F4, Rh4 이 생성된다 (고려인삼 연구 20년사, 고려인삼학회, p81-84, 1997). (도 1)

또한, 담마란 화합물은 하기 도 2와 같이 산으로 강하게 가수분해하면 모든 당이 떨어져 나가고 측쇄부분이 고리화 (cyclization)되어 PD 또는 PT로 변환되며 ( Shibata S et al., Chem . Pharm . Bull . 11, pp762-765, 1963; Sanada S et al., Chem. Pharm . Bull . 22, pp421-428, 1974), 하기 도 3과 같이 알칼리로 가수분해 하면 모든 당이 떨어져 나간 PPD, PPT, DHPPD 또는 DHPPT를 생성한다 (Cui J et al., J. Org . Chem . 59, pp8251-8255, 1994).

현재까지 자연계에서 발견되는 담마란 화합물의 생리활성에 대한 다양한 연구가 진행되어 왔다. 또한, 상기와 같은 방법으로 이러한 화합물의 구조를 변환시키고 이러한 변환된 담마란 화합물의 항산화작용, 항암작용, 혈액순환개선작용 등의 생리적 활성이 보고되어 있다 (대한민국특허 제0425798호; Kim WY et al., J. Nat . Prod., 63(12), pp1702-1704, 2000; Kwon SW et al., J. Chromatogr A., 921(2), pp335-339, 2001). 특히 자연계에 존재하지 않는 변화된 담마란 화합물은 기존의 담마란 화합물보다 훨씬 강력한 항암작용을 갖고 있는 것으로 밝혀졌다 (Keum YS et al., Cancer Letters , 150, pp41-48, 2000; Kim SE et al.,Anticancer Research, 19, pp487-492 1999; Kwang YL et al., Anticancer Research 17, pp1067-1072,1997)

그러나 변환된 담마란 화합물의 신장보호활성에 관하여서는 아직 연구된 바 없다.

박 등은 인삼을 통상의 온도보다 높게 가열하여 가공한 인삼추출물의 신장 보호용 약학 조성물로 특허를 출원한 바 있다 (대한민국특허 제0337471호). 이 가공인삼추출물의 주성분은 진세노사이드 Rg3, Rg5, Rk1으로 이 성분들이 신장보호활성을 나타낸다. 그러나 아직 진세노사이드 (ginsenoside) Rk3, 진세노사이드 (ginsenoside) Rh4, PD (Panaxadiol), PT (Panaxatriol), PPD (protopanaxadiol), PPT (protopanaxatriol), DHPPD (Dehydroprotopanaxadiol)-I, DHPPD (dehydroprotopanaxadiol)-II, DHPPT (Dehydroproto panaxatriol)-I, 또는 DHPPT (Dehydroprotopanaxatriol)-II와 같은 화합물의 신장 보호효과에 관해서는 알려진 바가 없다.

본 발명자들은 이처럼 변환된 담마란 화합물의 신장보호활성을 연구하던 중, 자연계에는 없는 새로운 변환 담마란 화합물인 진세노사이드 Rk3, 진세노사이드 Rh4, 담마란 화합물의 아글리콘에 해당하는 PD (Panaxadiol), PT (Panaxatriol), PPD (protopanaxadiol), PPT (protopanaxatriol), DHPPD (Dehydroprotopanaxadiol)-I, DHPPD (dehydroprotopanaxadiol)-II, DHPPT (Dehydroproto panaxatriol)-I, 또는 DHPPT (Dehydroprotopanaxatriol)-II이 라디칼 생성제인 AAPH로 유도된 신장독성에 대하여 신장보호 효과가 있음을 발견하게 되어 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 천연에는 존재하지 않는 담마란 화합물인 진세노사이드 (ginsenoside) Rk3, 진세노사이드 (ginsenoside) Rh4, PD (Panaxadiol), PT (Panaxatriol), PPD (protopanaxadiol), PPT (protopanaxatriol), DHPPD (Dehydroprotopanaxadiol)-I, DHPPD (dehydroprotopanaxadiol)-II, DHPPT (Dehydroproto panaxatriol)-I, 또는 DHPPT (Dehydroprotopanaxatriol)-II를 유효성분으로 포함하는 신장 보호용 약학조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 하기 구조식 (1) 내지 (10)으로 표기되는 진세노사이드 (ginsenoside) Rk3, 진세노사이드 (ginsenoside) Rh4, PD (Panaxadiol), PT (Panaxatriol), PPD (protopanaxadiol), PPT (protopanaxatriol), DHPPD (Dehydroprotopanaxadiol)-I, DHPPD (dehydroprotopanaxadiol)-II, DHPPT (Dehydroproto panaxatriol)-I, 또는 DHPPT (Dehydroprotopanaxatriol)-II를 유효성분으로 함유하는 신장 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

상기 화합물들은 모두 담마란 골격을 갖고 있으며 아직 자연계에서의 존재는 보고된 바 없으나 자연계에 존재하는 담마란 화합물을 이화학적으로 변형시켜 얻을 수 있다.

상기 화합물은 고려인삼 (Panax ginseng), 화기삼 (Panax quinquefolia), 전칠삼 (삼칠, Panax notoginseng), 죽절삼 (Panax japonica), 삼엽삼 (Panax trifolia), 히말라야삼 (Panax pseudoginseng), 베트남삼 (Panax vietnamensis) 또는 돌외 (Gynostemma pentaphyllum Makino)에서 분리됨을 특징으로 한다.

상기 화합물은 상기 식물을 추출하여 담마란 화합물을 함유하고 있는 추출물, 추출분획, 부분 정제물, 또는 이로부터 분리된 순수 화합물을 이화학적으로 처리하여 수득할 수 있고, 이들 식물로부터 담마란 화합물을 추출하는 방법은 여러 문헌에 이미 보고가 되어 있으므로 이를 참조하여 추출 및 분획할 수 있다.(고려인삼 연구 20년사, 고려인삼학회, pp75-77, 1997; Norberg A et al., J. Biol . Chem ., 279(40), pp41361-41367, 2004).

또한, 상기 신장질환은 신장염, 신우염, 신증후군, 신장암, 급성신우신염, 만성신우신염, 신장결핵, 요로감염증, 요로결석, 요관결석, 급성신부전, 만성신부전 또는 당뇨병성신증, 만성사구체신염, 급성진행성신염, 네프로제증후군, 소상사구체경화증, 막성신증 또는 막성증식성사구체신염을 포함한다.

상기 화합물은 인삼속 식물을 80~200 ℃에서 0.5~20시간 동안 가열하여 수득한 가공인삼 추출물에서 분리됨을 특징으로 한다.

이하, 담마란 화합물을 수득하는 방법을 상세히 설명한다.

담마란 화합물을 함유하고 있는 인삼속 식물 또는 돌외를 50 내지 200℃, 바람직하게는 120℃에서 30분 내지 10시간, 바람직하게는 3시간 동안 가열, 가공 한 후 저급알콜 또는 그들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매, 바람직하게는 CH₃OH을 넣고 환류 추출하여 여과하는 조작을 1회 이상, 바람직하게는 3회 실시하고 여액을 합해 감압 농축하여 CH₃OH 추출물을 수득하고, 수득한 CH₃OH 추출물을 감압하에서 용매를 건조 시키고 잔사를 물에 현탁시켜 CH₂Cl₂과 수포화 n-BuOH을 차례로 사용하여 CH₂Cl₂ 분획, n-BuOH 분획 그리고 H₂O 분획으로 나누었으며, 각 분획을 감압하에서 증발 건조하여 각각 CH₂Cl₂ 추출물, n-BuOH 추출물 그리고 H₂O 추출물을 수득한다.

상기 제조공정으로부터 수득한 CH₂Cl₂ _,수포화 n-BuOH 또는 H₂O 추출물을 바람직하게는 CH₂Cl₂ 분획을 대상으로 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 분취(preparaative) HPLC로부터 정제 및 분획하여 구조식 (1) 내지 (2)의 진세노사이드 Rk3 및 Rh4의 사포닌을 수득할 수 있다. 또한, PPD, PPT, DHPPD, DHPPT는 NaOH 첨가 후 90 ℃로 가열 교반하여 염기가수분해 한 후 실리카겔 오픈 컬럼(silica gel open column)법을 사용하여 분리하고, 분취(preparative) HPLC법을 사용하여 정제함으로써 수득할 수 있으며, PD 및 PT는 참고문헌(Shibata S. et al., Chem . Pharm. Bull . 11, pp762-765, 1963)에 기재된 방법으로 산가수분해하여 수득 가능하다.

또한, 본 발명은 상기 제법으로 얻어진 구조식 (1) 내지 (10)의 화합물을 유효성분으로 포함하는 신장 보호용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 화합물들은 당해 기술 분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물로 제조될 수 있다.

약학적으로 허용 가능한 염으로는 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴과 같은 수혼화성 유기 용매를 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올(예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.

이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 시트르산, 말레인산(maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산 (propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산(lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르빈산, 카본산, 바닐릭산, 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

상기의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 상기 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용 가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨 염이 포함되며, 아미노 기의 기타 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드로브로마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포네이트(메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트(토실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.

또한, 본 발명은 담마란 화합물을 포함하는 신장질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 본 발명의 담마란 화합물을 0.01 ~ 99.9% 함유하는 것이 바람직하고, 0.1 ~ 90% 함유하는 것이 더욱 바람직하다. 그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 담마란 화합물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 담마란 화합물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 담마란 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.01 mg/kg 내지 10 g/kg으로, 바람직하게는 1 mg/kg 내지 1 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 따라서 상기 투여량 은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

또한 본 발명은 신장보호 효능이 있는 상기 구조식 (1) 내지 (10)의 화합물을 유효성분으로 하는 신장질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 담마란 화합물을 포함하는 조성물은 신장보호에 효과적인 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 담마란 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 담마란 화합물 자체는 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 및 개선 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

본 발명의 상기 담마란 화합물은 신장질환의 예방 및 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 실시 예 및 실험 예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시 예 및 실험 예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시 예 및 실험 예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 진세노사이드 Rk3 및 Rh4 의 분리

백삼 1 kg을 120℃에서 3시간 동안 열처리한 후 CH₃OH을 넣고 3시간 환류 추출하여 여과하는 조작을 3회 실시하고 여액을 합해 감압 농축하여 CH₃OH 추출물을 얻었다.

CH₃OH 추출물을 감압하에서 유기 용매를 건조시키고 잔사를 물에 현탁시켜 CH₂Cl₂과 수포화 n-BuOH을 차례로 사용하여 CH₂Cl₂ 분획, n-BuOH 분획 그리고 수층 분획으로 나누었으며, 각 분획을 감압하에서 증발 건조 시켰다.

CH₂Cl₂ 분획을 대상으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography)를 실시하였다. 이동상 CHCl₃ : MeOH을 40 : 1로부터 시작하여 30 : 1, 20 : 1, 10 : 1, 5 : 1 등으로 용매 극성을 증가시켜 용출시켜 10개의 분획을 얻었다. 분획 9를 대상으로 분취(preparative) HPLC [Gilson 321 pump, Luna C18 (250 nm× 10 mm I.D., 5μm, Phenomenex), Gilson UV/VIS-155 (210 nm), 이동상(water : CH₃CN을 50: 50 → 30 : 70), 4 ml/min]를 실시하여 상기 구조식 (1)의 진세노사이드 Rk3 및 상기 구조식 (2)의 진세노사이드 Rh4를 각각 24.5 mg, 13.8 mg 얻었다.

실시예 2. PD 및 PT 의 제조

상기 실시예 1에서 수득한 n-BuOH 분획에 5% EtOH성 황산 용액을 가하고 5시간 동안 환류시켰다. 반응이 끝나고 45% NaOH용액을 가하여 중화시키고 CH₂Cl₂로 추출한 후 감압하에서 증발 건조 시켰다. CH₂Cl₂ 분획을 대상으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography)를 실시하여 이동상 CHCl₃ : MeOH : H₂O을 65 : 35 : 10 으로부터 시작하여 용매 극성을 증가시켜 용출시켜 참고문헌(Shibata S. et al., Chem . Pharm . Bull . 11, pp762-765, 1963)의 방법으로 PD와 PT를 분리 하였다.

실시예 3. PPD , PPT , DHPPD 와 DHPPT 의 제조

상기 실시예 1과 같이 추출하여 수득한 CH₃OH 분획 500g을 물에 현탁하여 적절한 크기의 유리 용기에 1 kg 의 비극성 DIAION HP 20 수지와 함께 교반하였다. 수지를 정제수로 3회 세척 후 메칠알코올로 용출하여 얻은 메칠알코올 분획을 감압 건조하여 사포닌분획 110 g을 얻었다. 이 사포닌분획을 참고문헌(Cui J. F. et al., J. Org . Chem. 59, pp8251-8255, 1994; Im K. S., et al., Arch . Pharm . Res. 18, pp454-457, 1995)에 기재된 방법으로 n-BuOH을 용매로 하여 NaOH 첨가 후 90 ℃로 12시간 가열 교반하여 염기 가수분해 하였다. 반응이 끝나고 묽은 HCl용액을 가하여 중화시킨 후, 상징액을 모아서 감압하에서 증발 건조 시켰다. 이렇게 건조된 상징액을 실리카겔 컬럼(silica gel column) 법과 반분취(semi-preparative) HPLC 법을 사용해 PPD, PPT, DHPPD와 DHPPT를 분리 및 정제하였다. 이때, DHPPD, DHPPT의 위치 이성질체들의 용매조건은 헥산 : 에틸아세테이트 (7:1→5:1→1:1)이였으며, 반분취(semi-preparative) HPLC를 이용하여, 이동상 (water : CH₃CN)을 50 : 50로부 터 시작하여 30분 후 0 : 100이 되도록 용출하여 각각 50 mg 의 무정형 파우더로 분리하였다. 한편, PPD 와 PPT는 헥산 : 에틸아세테이트 1:1 로부터 시작하여 1:5 으로 극성을 증가시키는 용매조건하에서 실리카겔 컬럼을 실시하여 각각 200 mg의 무정형 파우더로 분리하였다.

실험예 1. 담마란 화합물의 신장세포 보호 활성 실험

1-1. 실험 방법

문헌에 보고된 방법(Yokozawa T. et al., Food Chem. 48, pp5068-5073, 2000)을 참조하여 돼지 신장세포 (LLC-PK1)를 사용하여 담마란 화합물의 신장독성에 대한 보호 효과를 다음과 같이 평가하였다.

먼저, LLC-PK1 세포를 5 % 소 태아 혈청(fetal bovine serum;Gibco BRL Life Technologies), 페니실린 G 50 유닛/ml (Gibco BRL Life Technologies) 및 스트렙토마이신(streptomycin; Gibco BRL Life Technologies) 50 /ml을 가한 DMEM/F12 (Gibco BRL Life Technologies, Grand Island, NY, USA) 배지를 사용하여 37℃가 유지된 95% 공기 / 5% 이산화탄소 배양기에서 배양하였다. 배양된 LLC-PK1 세포를 96-웰 배양 플레이트에 10⁴ 개씩 도입하고 2시간 동안 세포가 안정되도록 하였다. 그 후, 각각의 담마란 화합물과 라디칼 발생 시약(배지에 녹인 1 mM AAPH)을 첨가하여 24시간 배양한 후 50㎕의 MTT (1 mg/mL) 시약을 각 웰(well)에 첨가 후, 37 ℃에서 배양하였다. 4시간 후 MTT를 포함한 배지를 제거하고, 디메틸설폭시 드(dimethylsulfoxide)를 100 ㎕ 첨가 하여 SPECTRAmax 340PC (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) 마이크로플레이트 리더(microplate reader)에서 540 nm 검출 파장을 이용하여 흡광도를 측정하였다.

1-2. 실험 결과

하기 표 2는 AAPH처리한 신장 상피세포인 LLC-PK1세포에 대한 담마란화합물의 효과를 나타낸다. LLC-PK1 세포수는 1 mM AAPH 처리로 AAPH 비처리군의 62.1%까지 감소하였다. 담마란 화합물은 이런 세포손상을 억제하는 것으로 나타났다. 특히, 10㎍/mL의 PT, PPT 또는 DHPPT-Ⅰ은 세포의 생존율을 94.9, 85.7, 또는 100.6% 까지 각각 증가시켰다. 또한, DHPPD-I도 10㎍/mL처리 하였을 때 85.5% 까지 유의적으로 세포의 생존율을 증가시켰다.

물질	농도 (μg/ mL )	세포 생존율 (%)
Rk3	0	62.1±1.1
	1	63.5±1.2
	5	74.4±0.6^a
	10	90.5±0.8^a
Rh4	0	62.1±1.1
	1	72.9±2.1^a
	5	86.8±1.7^a
	10	99.2±1.3^a
PD (Panaxadiol)	0	62.1±1.1
	1	61.0±2.0
	5	60.5±0.4
	10	63.0±2.2
PT (Panaxatriol)	0	62.1±1.1
	1	77.3±0.4^a
	5	92.5±1.4^a
	10	94.9±1.4^a
PPD (Protopanaxadiol)	0	62.1±1.1
	1	62.2±1.1
	5	72.6±0.4^a
	10	62.6±2.8
PPT (protopanaxatriol)	0	62.1±1.1
	1	61.1±0.3
	5	73.3±1.0^a
	10	85.7±1.6^a
DHPPD-I (Dehydroprotopanaxadiol-I)	0	62.1±1.1
	1	61.8±0.9
	5	69.9±0.1^a
	10	85.5±0.6^a
DHPPD-II (Dehydroprotopanaxadiol-II)	0	62.1±1.1
	1	60.7±0.4
	5	63.7±2.2
	10	64.6±1.1
DHPPT-I (Dehydroprotopanaxtriol-I)	0	62.1±1.1
	1	76.9±2.3^a
	5	94.4±1.2^a
	10	100.6±1.0^a
DHPPT-II (Dehydroprotopanaxatriol-II)	0	62.1±1.1
	1	61.5±0.9
	5	63.3±1.2
	10	63.3±1.0
	-
* 통계적 유의성 : ^ap<0.001 vs. AAPH 처리 표준 수치

이상의 결과로, Rk3, Rh4, PT, PPT, DHPPT-Ⅰ 또는 DHPPD-Ⅰ이 AAPH에 대한 신장세포 손상을 효과적으로 보호함을 알 수 있었으며. 이런 결과들은 Rk3, Rh4, PT, PPT와 DHPPT-Ⅰ과 DHPPD-Ⅰ등의 담마란 화합물이 산화적 스트레스로부터 야기되는 신장세포 손상을 보호해줄 수 있다는 것을 의미한다.

제제예 1. 주사제제의 제조

실시예 1의 Rk3.......................................100 ㎎

소디움 메타비설파이트................................3.0 ㎎

메틸파라벤...........................................0.8 ㎎

프로필파라벤.........................................0.1 ㎎

주사용 멸균증류수....................................적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 방법으로 최종 부피가 2㎖가 되도록 제조한 후, 2㎖용량의 앰플에 충전하고 멸균하여 주사제를 제조한다.

제제예 2. 환제의 제조

실시예 1의 Rh4.......................................120 ㎎

옥수수 전분..........................................100㎎

멸균증류수............................................적량

상기의 성분을 혼합하고, 통상의 환제 제조방법으로 0.3cm 지름으로 제환하여 환제를 제조한다.

제제예 3. 정제의 제조

실시예 2의 PT........................................200 ㎎

유당.................................................100 ㎎

전분.................................................100 ㎎

스테아린산 마그네슘....................................적량

통상의 정제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 4. 캡슐제의 제조

실시예 2의 PPT.......................................100 ㎎

유당..................................................50 ㎎

전분..................................................50 ㎎

탈크...................................................2 ㎎

스테아린산마그네슘.....................................적량

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

실시예 3의 DHPPT-Ⅰ...................................100 ㎎

설탕....................................................20 g

이성화당................................................20 g

레몬향 .................................................적량

정제수를 가하여 전체 1000㎖로 맞추었다. 통상의 액제의 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 갈색병에 충전하고 멸균시켜 액제를 제조한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

실시예 3의 DHPPD-I...................................1000 ㎎

비타민 혼합물..........................................적량

비타민 A 아세테이트....................................70 ㎍

비타민 E..............................................1.0 ㎎

비타민 B1............................................0.13 ㎎

비타민 B2............................................0.15 ㎎

비타민 B6.............................................0.5 ㎎

비타민 B12............................................0.2 ㎍

비타민 C...............................................10 ㎎

비오틴.................................................10 ㎍

니코틴산아미드........................................1.7 ㎎

엽산...................................................50 ㎍

판토텐산 칼슘.........................................0.5 ㎎

무기질 혼합물...........................................적량

황산제1철............................................1.75 ㎎

산화아연.............................................0.82 ㎎

탄산마그네슘.........................................25.3 ㎎

제1인산칼륨............................................15 ㎎

제2인산칼슘............................................55 ㎎

구연산칼륨.............................................90 ㎎

탄산칼슘..............................................100 ㎎

염화마그네슘.........................................24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

실시예 1의 Rk3......................................1000 ㎎

구연산..............................................1000 ㎎

올리고당..............................................100 g

매실농축액..............................................2 g

타우린..................................................1 g

정제수를 가하여 전체.................................900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 진세노사이드 (ginsenoside) Rk3, 진세노사이드 (ginsenoside) Rh4, PD (Panaxadiol), PT (Panaxatriol), PPD (protopanaxadiol), PPT (protopanaxatriol), DHPPD (Dehydroprotopanaxadiol)-I, DHPPD (dehydroprotopanaxadiol)-II, DHPPT (Dehydroproto panaxatriol)-I, 또는 DHPPT (Dehydroprotopanaxatriol)-II 화합물은 신장독성을 현저하게 경감시키는 효과를 나타내므로 신장보호용 약학 조성물로 사용될 수 있다.

Claims

진세노사이드 (ginsenoside) Rk3, 진세노사이드 (ginsenoside) Rh4, PD (Panaxadiol), PT (Panaxatriol), PPD (protopanaxadiol), PPT (protopanaxatriol), DHPPD (Dehydroprotopanaxadiol)-I, DHPPD (dehydroprotopanaxadiol)-II, DHPPT (Dehydroproto panaxatriol)-I, 또는 DHPPT (Dehydroprotopanaxatriol)-II 화합물을 유효성분으로 포함하는 신장 질환의 예방 및 치료용 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 화합물은 고려인삼, 화기삼, 전칠삼, 죽절삼, 삼엽삼, 히말라야삼, 베트남삼 또는 돌외에서 분리됨을 특징으로 하는 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 신장질환은 신장염, 신우염, 신증후군, 신장암, 급성신우신염, 만성신우신염, 신장결핵, 요로감염증, 요로결석, 요관결석, 급성신부전, 만성신부전 또는 당뇨병성신증, 만성사구체신염, 급성진행성신염, 네프로제증후군, 소상사구체경화증, 막성신증 또는 막성증식성사구체신염을 포함하는 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 화합물은 인삼속 식물을 80~200 ℃에서 0.5~20시간 동안 가열하여 수득한 가공인삼 추출물에서 분리됨을 특징으로하는 약학조성물.
신장보호 효능이 있는 진세노사이드 (ginsenoside) Rk3, 진세노사이드 (ginsenoside) Rh4, PD (Panaxadiol), PT (Panaxatriol), PPD (protopanaxadiol), PPT (protopanaxatriol), DHPPD (Dehydroprotopanaxadiol)-I, DHPPD (dehydroprotopanaxadiol)-II, DHPPT (Dehydroprotopanaxatriol)-I 또는 DHPPT (Dehydroprotopanaxatriol)-II 화합물을 포함하는 신장질환의 예방 및 개선용 건강기능식품.
제 5항에 있어서, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태인 건강기능식품.