KR20070097535A

KR20070097535A - 캄토테신의 입체선택적 방법 및 결정성 형태

Info

Publication number: KR20070097535A
Application number: KR1020077016814A
Authority: KR
Inventors: 파올로 까르미나띠; 마리아 오르넬라 틴티; 마우로 마르지; 파브리지오 기오르기; 월터 카브리; 마르코 알페기아니; 도메니코 베르가니; 파올로 게티
Original assignee: 시그마타우 인두스트리에 파르마슈티케 리우니테 에스.피.에이.
Priority date: 2004-12-21
Filing date: 2005-12-16
Publication date: 2007-10-04
Also published as: CA2590756C; HRP20120926T1; PT1828196E; HK1113487A1; ME01495B; JP2008524306A; PL1828196T3; JP2013067629A; SI1828196T1; CA2590756A1; US20090239893A1; WO2006067092A2; BRPI0515832A; RS52585B; CN101084221B; CY1117243T1; JP5982261B2; KR101355121B1; DK1828196T3; JP5491699B2

Abstract

7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신(또한 지마테칸으로서도 공지됨)의 입체선택적인 제조 방법을 본 발명에 개시한다. 적합한 상이한 용매 혼합물 중에서 수행된 추가의 용해 및 침전 단계를 더하여, 지마테칸의 4 개의 신규의 결정형들을 또한 동일한 입체선택적인 방법을 사용하여 수득할 수 있다.

입체선택적인 제조 방법, 지마테칸, 결정형

Description

캄토테신의 입체선택적 방법 및 결정성 형태{STEREOSELECTIVE PROCESS AND CRYSTALLINE FORMS OF A CAMPTOTHECIN}

본 발명은 7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신(또한 지마테칸으로도 공지됨)의 입체선택적 제조 방법에 관한 것이다. 적합한 상이한 용매 혼합물 중에서 수행된 추가의 용해 및 침전 단계를 더하여, 지마테칸의 3 개의 신규의 결정형들을 동일한 입체선택적인 방법을 사용하여 수득할 수 있다.

캄토테신은 나이사세아에(Nyssaceae) 과에 속하는, 중국 원산의 식물인 캄토테카 아큐미나타(Camptotheca acuminata) 나무에서 처음으로 월(Wall) 등(J. Am. Chem. Soc., 88, 3888-3890(1966))에 의해 단리된 알칼로이드이다. 상기 분자는 세포독성에 필수적인 E 고리에 락톤을 갖는 펜타사이클릭 구조로 이루어진다. 상기 약물은 특히 결장 종양, 다른 충실성 종양 및 백혈병에 대해 광범위한 종양 억제 활성을 나타내었으며, 최초의 임상 시험은 70년대 초에 수행되었다.

캄토테신(CPT)은 낮은 수 용해도를 가지며, 임상 시험을 준비하기 위해서 국립 암 연구소(NCI)는 수용성인 나트륨 염(NSC100880)을 제조하였다. I 기 및 II 기의 임상 시험은 상기 화합물에 의해 나타난 높은 독성(출혈 방광염, 위장 독성, 예를 들어 오심, 구토, 설사, 및 골수 억제, 특히 백혈구 감소증 및 저혈소판증)으 로 인해 완료되지 못했다.

후속적으로, 다수의 CPT 동족체들이 보다 낮은 독성과 보다 높은 수 용해도를 갖는 화합물을 수득하기 위해 합성되었다. 2 개의 약물, 즉 업존(Upjohn) 사의 캄토사(Camptosar)^TM라는 상표명의 이리노테칸(CPT-11)과, 스미스 클라인 앤드 비캄(Smith Kline & Beecham) 사의 힘캠틴(Hymcamtin)^TM 또는 티칸틴(Thycantin)^TM이라는 토포테칸이 시판되고 있다.

지금까지 확인된 모든 유도체들은 세포독성에 필수적인 5 개의 고리를 갖는 모 구조를 함유한다. 첫 번째 고리상의 변경은, 예를 들어 상기 언급한 약물의 경우에 수 용해도를 증가시키고 상기 약물의 보다 큰 허용성을 허용하는 것으로 입증되었다.

특허 출원 WO 97/31003에는 7, 9 및 10 번 위치에서 치환된 캄토테신의 유도체가 개시되어 있다. 7 번 위치는 하기의 치환을 제공한다: -CN, -CH(CN)-R₄, -CH=C(CN)-R₄, -CH₂-CH=C(CN)-R₄-, -C(=NOH)-NH₂, -CH=C(NO₂)-R₄, -CH(CH₂NO₂)-R₄, 5-테트라졸릴, 2-(4,5-다이하이드록사졸릴), 1,2,4-옥사다이아졸리딘-3-일-5-온, 여기에서 R₄는 수소, 탄소수 1 내지 6의 선형 또는 분지된 알킬, 나이트릴, 카복시알콕시이다.

상기 화합물들 중에서, 가장 좋은 것은 비 소 세포 폐 암종(비-SCLC, H-460)에 대한 세포독성 활성을 갖는 7-나이트릴(7-CN)(이후부터 CPT83이라 칭함)인 것으 로 입증되었다. 상기 종양 주는 본질적으로 세포독성 요법에 내성이며 표적 효소의 과발현에도 불구하고 국소이성화효소 I 억제제에 대해 단지 중간 정도로 반응성이다. CPT83은, 비교 화합물로 취한 토포테칸보다 더 활성이며 허용성의 면에서조차 대체로 보다 양호한 약물학적 프로파일을 제공하며, 이어서 보다 양호한 치료 지수를 제공한다.

CPT83은 7-하이드록시메틸캄토테신의 캄토테신 7-알데하이드로의 산화, 후자의 옥심으로의 변환 및 나이트릴로의 최종 전환을 포함한 합성 경로를 통해 제조된다.

출발 화합물 및 중간체가 문헌[Sawada et al., Chem. Pharm. Bull., 39, 5272(1991)]에 개시되어 있다. 상기 논문은 1981년의 우선권을 갖는 특허 일족, 예를 들어 1982년에 공개된 유럽 특허 출원 EP 0056692를 참고로 한다. 상기 공보에는 특히 캄토테신 7-알데하이드 및 그의 옥심이 개시되어 있다.

상기 유도체의 유용성은 7-하이드록시메틸캄토테신으로부터 출발하여 저 독성의 종양억제 활성을 갖는 화합물을 제공하는 것이다. 문헌[Chem. Pharm. Bull. 39, 5272(1991)] 상에 공개된 논문에서, 저자들은 캄토테신에 관하여 상기 언급한 특허 출원에서 예견되지 않았던 7-알킬 및 7-아실옥시메틸 유도체가 쥐 백혈병 L1210의 계통에 대해 보다 활성인 화합물인 반면, 항상 캄토테신과 관련하여 높은 극성 특징을 갖는 7-치환체를 갖는 화합물, 예를 들어 히드라존 및 옥심 -CH(=NOH)에서 보다 낮은 활성이 관찰되었음을 설명한다.

특허 출원 EP 1044977 및 문헌[Dallavalle S. et al., J. Med. Chem. 2001, 44, 3264-3247]에는 7 번 위치에서 O-치환된 알킬옥심을 갖고 비교 화합물인 토포테칸보다 더 큰 종양억제 활성이 부여된 캄토테신 유도체가 개시되어 있다. 더욱이, 상기 7 번 위치에 이미노 그룹을 갖는 이들 캄토테신 유도체는 또한 개선된 치료 지수를 나타낸다. 이러한 화합물들 중에서 바람직한 분자들 중 하나는 7-t-부톡시이미노메틸캄토테신(CPT 184)인 것으로 나타났다. 상기 분자를 EP1044977 및 상기 달라발레(Dallavalle) 논문에 개시된 바와 같이 제조하는 경우, 2 개의 E 및 Z 이성체의 혼합물(8:2의 비)을 에탄올 및 피리딘을 함유하는 용매 혼합물로부터 수득한다.

7 번 위치에서 O-치환된 알킬옥심을 갖는 캄토테신 유도체를 수득하기 위한 상기 언급한 문헌에 개시된 모든 방법들은 상기 옥심 또는 알킬옥심의 2 개의 E 및 Z 이성체들의 혼합물을 생성시킨다.

따라서, 각각 단일 E, Z 이성체, 보다 특히 E 이성체를 생성시키는 입체선택적인 방법을 획득하는 것이 바람직하다.

오래된 것이든 새로운 것이든 다수의 약물들이 발견되었고, 이들의 '적합한' 결정형들이 시중에 쏟아져 나왔으며 그의 잠재적인 동질이상 형태들은 결코 철저하게 선별되지 않았다. 최근의 고체 상태 화학의 기술적 진보에 의해, 전에는 결코 보이지 않았던 새로운 동질이상 형태들이 발견될 수 있었다. 상기 새로운 동질이상 형태들은 종종 치료 이점을 전달할 수 있으며 제약 산업의 새로운 도전들 중 하나를 나타낸다. 실제로 분자가 하나보다 많은 결정 배열로 결정화하는 능력인 동질이상은 약물의 저장 수명, 용해도, 제형성, 및 가공 성질에 심오한 영향을 미칠 수 있다. 보다 중요하게, 약물의 작용은 상기 약물 분자의 동질이상에 의해 영향을 받을 수 있다. 상이한 동질이상은 상이한 체내 흡수율을 가질 수 있으며, 이는 목적하는 것보다 더 낮거나 더 높은 생물 활성을 생성시킨다. 극단적인 경우에, 원하지 않는 동질이상은 심지어 독성일 수 있다. 제조 도중 미지의 동질이상 형태의 출현은 약물 회사에 막대한 영향을 미칠 수 있다. 따라서 결정성 생성물의 제형화에 관련된 연구자들이 올바른 성질을 갖는 동질이상을 선택할 수 있고 다른 동질이상의 불필요한 결정화와 같은 문제를 예상할 수 있음은 대단히 중요하다. 놀랍게도, 매우 많은 수의 약제들이 동질이상 현상을 나타낸다. 바비튜레이트의 70%, 설폰아미드의 60% 및 스테로이드의 23%가 상이한 동질이상 형태로 존재한다.

유기 화학에서 동질이상의 문제점은 문헌[Caira, M.R. "유기 화합물의 결정성 동질이상", Topics in Current Chemistry, Springler, Berlin, DE, Vol. 198, 1998, pages 163-208]에 일반적으로 고찰되어 있다.

지마테칸에 대한 결정성 연구의 수행은 본 출원인을 청구된 발명으로 이끌었다.

놀랍게도 본 발명에 이르러 7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신(또한 지마테칸으로서도 공지됨)의 입체선택적인 제조 방법이 밝혀졌다. 또한 Z 이성체의 E 이성체로의 완전한 전환을 획득하는 것이 가능한 것으로 밝혀졌다. 명확성을 위해서, 상기 두 이성체들의 화학식을 도 1에 나타낸다.

더욱이, 상기 생성물이 상이한 결정형들로 존재할 수 있고 이들 형태를 적합한 상이한 용매 혼합물 중에서 수행된 추가의 용해 및 침전 단계가 추가된 동일한 입체선택적인 방법을 사용하여 수득할 수 있음이 밝혀졌다.

따라서, 본 발명의 주 목적은 7-폼일-캄토테신의 아세탈을 극성 양성자성 또는 비양성자성 유기 용매 중에서 바람직하게는 산성 조건(pH<7) 하에 O-t-부틸하이드록실아민 하이드로클로라이드와 반응시킴을 포함하는 7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신의 입체선택적인 제조 방법이다. 실제로 Z 이성체의 양은 첨가되는 염기(예를 들어 피리딘)의 양에 비례하는 것으로 밝혀졌다. 따라서 본 발명의 방법을 유기 염기, 특히 피리딘의 부재 하에서 수행해야 한다.

상기 방법의 상이한 실시태양 및 변화들은 본 발명에 포함된다.

바람직하게는, 상기 극성 양성자성 또는 비양성자성 유기 용매는 알콜, 예를 들어 메탄올, 에탄올, n-프로판올, i-프로판올, n-부탄올, i-부탄올이다. 보다 바람직하게는, 상기는 에탄올 또는 메탄올이다.

pH는 바람직하게는 산성이나, 상기를 무기 염기의 첨가에 의해 보다 높은 값(7에 가깝지만 7은 아닌)으로 만들 수 있다. 바람직하게는, 상기 무기 염기는 수산화 나트륨 또는 칼륨이다. 바람직하게는, 무기 염기를 하이드록실아민 하이드로클로라이드에 대해 0.5 내지 0.9:1의 몰 비로 첨가한다.

7-폼일-캄토테신의 아세탈은 다이알킬 아세탈, 바람직하게는 메틸 또는 에틸 아세탈이다.

상기 반응의 온도는 대개 실온 내지 용매 비점이다.

상기 반응의 끝에서, 침전물을 반응 혼합물로부터 예를 들어 여과에 의해 단리한다.

본 발명의 방법에 따라, 상기 E 이성체는 Z 이성체에 대해 95:5 이상의 비로 항상 수득된다. 실시예는 본 발명의 방법이 상기 E 이성체를 Z 이성체에 대해 99.8:0.2의 비까지 수득하게 함을 보인다.

본 발명의 바람직한 실시태양에 따라 상술한 방법은 추가의 단계들, 예를 들어 다이클로로메탄 중에 앞서 수득한 침전물을 용해시키고, 공용매를 가하고, 상기 수득된 용액을 농축시키고 상기와 같이 수득한 생성물을 결정화시킴을 포함한다.

사용되는 공용매에 따라, 상이한 결정형들을 하기와 같이 수득한다.

이들 상이한 결정형은 본 발명의 추가의 목적이다.

용매	동질이상(IR 및 DSC에 의해)	동질이상(분말 X-선 회절에 의해)
아세톤	I	I
MeOH	III	III
EtOH	III	III
헥산	II 75%	II(상당량의 비결정형이 공존)
EtOAc	II	II
톨루엔	II	II
n-부틸 클로라이드	II	II
메틸 t-부틸 에테르	II 90% III 10%	II

공용매로서 아세톤을 사용하여, 지마테칸의 결정형 I를 수득하며, 이를 도 2에 나타낸 바와 같이, CuK-α 1 X-선 조사에 의해 획득한 분말 X-선 회절 패턴에 의해 특성화한다. 상기 형태의 특징적인 주요 회절 피크들을 하기 표에 나타낸다.

2-쎄타	상대 강도(%)
7.2	100
9.2	4.8
10.2	7.3
12.7	16.3
14.0	8.1
14.7	9.5
15.2	13.0
16.0	2.4
16.7	4.06
19.7	3.2
20.5	3.2
20.7	4.06
22.2	6.5
26.5	3.2
32.5	2.4

공용매로서 에탄올 또는 메탄올을 사용하여, 지마테칸의 결정형 III를 수득하며, 이를 도 4에 나타낸 바와 같이, CuK-α 1 X-선 조사에 의해 획득한 분말 X-선 회절 패턴에 의해 특성화한다. 상기 형태의 특징적인 주요 회절 피크들을 하기 표에 나타낸다.

2-쎄타°	상대 강도(%)
6.0	1.0
7.5	100.0
8.51	8.1
12.3	4.8
16.0	6.0
17.0	11.0
18.0	6.6
18.2	4.0
18.7	6.0
23.2	2.4
25.2	3.6

공용매로서 에틸 아세테이트, 톨루엔, n-부틸 클로라이드, 메틸 t-부틸 에테르 또는 헥산을 사용하여, 지마테칸의 결정형 II를 수득하며, 이를 도 3에 나타낸 바와 같이, CuK-α 1 X-선 조사에 의해 획득한 분말 X-선 회절 패턴에 의해 특성화한다. 상기 형태의 특징적인 주요 회절 피크들을 하기 표에 나타낸다.

2-쎄타	상대 강도(%)
6.7	100.0
7.2	4.8
9.7	6.0
11.2	24.0
13.2	3.0
14.5	4.8
16.0	2.4
16.7	21.6
17.0	31.2
17.5	10.8
19.0	3.0
21.0	4.8
23.0	3.6
25.5	7.2
26.5	6.0
28.2	3.0

이들 새로운 지마테칸의 결정형 I, II 및 III은 본 발명의 추가의 목적들이다. 지마테칸의 결정형 I가 바람직하다.

지마테칸의 비결정형 I는 본 발명의 추가의 목적이다.

본 발명의 또 다른 목적은 특히 세포 증식으로부터 발생하거나 상기에 의해 악화되는 병리상태의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 약제로서 지마테칸의 임의의 결정형 I, II, III 또는 이들의 혼합물의 용도이다.

본 발명의 추가의 목적은 유효 성분으로서 상기 언급한 결정형들 중 하나를 포함하는 조성물, 특히 약학 조성물이며, 상기 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 희석제와의 혼합물로 존재한다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 또한 함유할 수 있다.

지마테칸은 증식억제 활성을 나타내며, 따라서 그의 결정형들은 그의 치료 활성에 유용하고 상기를 약학 조성물로 제형화하기에 적합하게 만드는 물리화학적 성질들을 갖는다.

상기 약학 조성물은 지마테칸의 상기 언급한 결정형들 중 하나 이상을, 예를 들어 중요한 치료 효과, 특히 종양 억제 효과를 생성시키는 양으로 포함한다. 본 발명 내에 포함된 상기 조성물은 통상적이며 제약 산업에 통상적으로 사용되는 방법에 의해 수득된다. 목적하는 투여 경로에 따라, 상기 조성물은 경구, 비 경구, 정맥 내 경로에 적합한 고체 또는 액체 형일 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 상기 유효 성분과 함께 적어도 약학적으로 허용 가능한 비히클 또는 부형제를 포함한다. 제형 보조제, 예를 들어 용해제, 분산제, 현탁제, 유화제가 특히 유용할 수 있다.

상기 언급한 지마테칸의 결정형들을 또한 다른 유효 성분들, 예를 들어 다른 종양 억제 약물과 함께 별도의 형태 및 단일 용량 형태로 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 지마테칸의 상기 언급한 결정형들은 예를 들어 폐 종양, 예를 들어 비 소 세포 폐 종양, 결장-직장, 전립선, 신경교종의 종양에서 종양억제 활성을 갖는 약제로서 유용하다.

세포독성 활성을 세포독성 가능성의 평가 방법으로서 증식 억제 활성 시험을 사용하여 인간 종양 세포의 세포 계에서 분석한다.

본 발명의 상기 및 다른 목적들은 하기 실시예에 의해 또한 상세히 예시될 것이다.

하기의 예들은 본 발명을 추가로 예시한다.

도 1은 왼쪽에 7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신(지마테칸)의 화학식을 나타내고 오른쪽에는 7-[(Z)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신의 화학식을 나타낸다.

도 2는 7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신(지마테칸)의 결정형 I의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.

도 3은 7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신(지마테칸)의 결정형 II의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.

도 4는 7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신(지마테칸)의 결정형 III의 X-선 회절 패턴을 나타낸다.

도입

실시예 1 및 2는 출발 물질로서 7-폼일-캄토테신 다이메틸아세탈을 사용하는 7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신의 합성을 다룬다.

실시예 3 및 4는 E 이성체를 제공하는 조건 하에서 출발 물질로서 7-폼일-캄토테신을 사용하는 7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신의 합성을 보고한다. 상기 그룹의 모든 반응들은 실시예 1 및 2에 보고한 반응들보다 더 빠르며, 이는 상기 아세탈의 가수분해가 옥심을 제공하는 상기 알데하이드의 반응보다 더 느림을 가리킨다.

실시예 5는 Z 이성체의 E 이성체로의 전환을 보고한다.

실시예 6은 7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신(지마테칸)을 수득할 수 있는 상이한 (동질이상) 결정형들의 합성 및 특성화를 보고한다.

HPLC: 자동 주입기(주입 부피 5 ㎕)가 있는 4 조 펌프(Waters Alliance 2690) 및 워터스 '임파워 프로(Empower Pro)' 소프트웨어에 의해 조절되는 260 ㎚에서 작동하는 UV 검출기(Waters 2487)가 구비된 장치상에서 분석을 수행한다.

C18 역상 컬럼(Symmetry C18; 75 x 4.6 ㎜ Waters)을 1.0 ㎖/분 유속의 선형 용출 구배(하기 표 참조)로 사용한다.

구배 프로그램

A: H₂O/CH₃CN 60/40(v/v)

B: H₂O/CH₃CN 30/70(v/v)

시간(분)	% A	% B
0	100	0
30	100	0
40	0	100
45	100	0
50	100	0

7-[(E)-3급-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신의 체류 시간은 12 분이고, Z-이성체의 체류 시간은 8 분이다.

실시예 1

7- 폼일캄토테신 - 다이메틸아세탈로부터 7-[(E)-3급- 부틸옥시이미노메틸 ]- 캄토테신의 제조

7-폼일-캄토테신-다이메틸아세탈(500 ㎎; 1.2 밀리몰) 및 O-3급-부틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(372 ㎎; 2.9 밀리몰)를 빛이 차단되고 자기 교반기 및 응축기가 장착된 3목 플라스크 중의 95% 에탄올(12.5 ㎖)에 가하였다. 상기 혼합물을 4 시간 동안 가열 환류시켰다. HPLC 분석은 E:Z 비가 99.8:0.2임을 나타내었다. 조 생성물을 상기 반응 혼합물로부터 침전되고 여과에 의해 단리된 바와 같이 수득하였다. 다이클로로메탄-메탄올 95:5로 용출시키면서 실리카젤(20 g) 상에서 크로마토그래피 정제시킨 후에, 지마테칸(460 ㎎)을 황색 분말로서 수득하였다(수율: 87%).

실시예 2

7-폼일-캄토테신-다이메틸아세탈(500 ㎎; 1.2 밀리몰), O-3급-부틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(372 ㎎; 2.9 밀리몰) 및 수산화 나트륨(59 ㎎; 1.47 밀리몰)을 빛이 차단되고 자기 교반기 및 응축기가 장착된 3목 플라스크 중의 95% 에탄올(12.5 ㎖)에 가하였다. 상기 혼합물을 24 시간 동안 가열 환류시켰다. HPLC 분석은 E:Z 비가 98.8:1.2임을 나타내었다. 조 생성물을 상기 반응 혼합물로부터 침전되고 여과에 의해 단리된 바와 같이 수득하였다. 다이클로로메탄-메탄올 95:5로 용출시키면서 실리카젤(20 g) 상에서 크로마토그래피 정제시킨 후에, 지마테칸을 황색 분말로서 수득하였다(수율: 80%).

실시예 3(비교 실시예 )

7- 폼일캄토테신으로부터 7-[(E)-3급- 부틸옥시이미노메틸 ]- 캄토테신의 제조

7-폼일-캄토테신(500 ㎎; 1.33 밀리몰), O-3급-부틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(417 ㎎; 3.3 밀리몰) 및 수산화 나트륨(67 ㎎; 1.65 밀리몰)을 빛이 차 단되고 자기 교반기 및 응축기가 장착된 3목 플라스크 중의 95% 에탄올(12.5 ㎖)에 가하였다.

상기 혼합물을 2 시간 동안 가열 환류시켰다. HPLC 분석은 E:Z 비가 97.4:2.6 임을 나타내었다. 조 생성물을 상기 반응 혼합물로부터 침전되고 여과에 의해 단리된 바와 같이 수득하였다. 다이클로로메탄-메탄올 95:5로 용출시키면서 실리카젤(20 g) 상에서 크로마토그래피 정제시킨 후에, 지마테칸(480 ㎎)을 황색 분말로서 수득하였다(수율: 80%).

실시예 4(비교 실시예 )

7-폼일-캄토테신(500 ㎎; 1.33 밀리몰), O-3급-부틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(417 ㎎; 3.3 밀리몰) 및 수산화 나트륨(120 ㎎; 3 밀리몰)을 빛이 차단되고 자기 교반기 및 응축기가 장착된 3목 플라스크 중의 95% 에탄올(12.5 ㎖)에 가하였다.

상기 혼합물을 2 시간 동안 가열 환류시켰다. HPLC 분석은 E:Z 비가 95:5임을 나타내었다. 조 생성물을 상기 반응 혼합물로부터 침전되고 여과에 의해 단리된 바와 같이 수득하였다. 다이클로로메탄-메탄올 95:5로 용출시키면서 실리카젤(20 g) 상에서 크로마토그래피 정제시킨 후에, 지마테칸(550 ㎎)을 황색 분말로서 수득하였다(수율: 93%).

실시예 5

이성체 전환

7-[(Z)-3급-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신(100 ㎎)을 다이클로로메탄(30 ㎖)에 용해시켰다. 염산(0.2 ㎖)을 실온에서 가하고 상기 혼합물에 125 W Hg 고압 U.V. 램프를 1 시간 동안 조사하였다. HPLC 분석은 Z 이성체가 E 이성체로 완전히 전환되었음을 보였다.

실시예 6

결정화 연구

7-[(E)-3급-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신(2.5 g)을 다이클로로메탄(500 ㎖)에 용해시켰다. 공용매(500 ㎖)를 상기 용액에 가하고, 이어서 회전증발기에 의해 상기 혼합물을 40 ℃의 온도에서 250 ㎖ 이하의 부피로 농축시켰다.

상기 현탁액을 실온에서 30 분간 교반 하에 유지시키고, 이어서 형성된 고체를 공용매 20 ㎖로 2 회 세척하여 여과하였다. 50 ℃ 오븐에서 진공 하에서 하룻밤 후에 생성물 2.1 g을 수득하였다.

사용된 공용매는 하기와 같다: 아세톤, 에탄올, 메탄올, 에틸 아세테이트, 톨루엔, n-부틸클로라이드, 메틸 3급-부틸 에테르 및 헥산.

수득된 결정을 X-선 분말 회절계에 의해 분석하였다. 솔라스(Sollers) 슬릿과 좁은(0.3°) 발산비를 갖는, (002) 그라파이트 결정으로 단색화된 CuK-α 조사원 및 수신 구멍이 구비된 지멘스(Siemens) D-500 컴퓨터 조절 회절계를 사용하여 분말 20 내지 50 ㎎ 상에서 회절사진을 획득하였다. 상기 산란 각의 신뢰도 한계는 ±0.5 2-쎄타이다.

공용매로서 아세톤을 사용하여 수득한 샘플(형태 I)은 하기의 결과를 제공하 였다.

X-선 분말 회절사진은 결정성 물질의 특징이다. 상기 형태의 특징적인 주요 회절 피크를 하기 표에 나타낸다.

2 쎄타	상대 강도(%)
7.2	100
9.2	4.8
10.2	7.3
12.7	16.3
14.0	8.1
14.7	19.5
15.2	13.0
16.0	2.4
16.7	4.06
19.7	3.2
20.5	3.2
20.7	4.06
22.2	6.5
26.5	3.2
32.5	2.4

공용매로서 에탄올 또는 메탄올을 사용하여 수득한 샘플(형태 III)은 하기의 결과를 제공하였다.

2 쎄타	상대 강도(%)
6.0	11.0
7.5	100.0
8.5	18.1
12.3	4.8
16.0	6.0
17.0	11.0
18.0	6.6
18.2	4.0
18.7	6.0
23.2	2.4
25.2	3.6

공용매로서 에틸 아세테이트, 톨루엔, n-부틸 클로라이드, 메틸 t-부틸 에테르 또는 헥산을 사용하여 수득한 샘플(형태 II)은 하기의 결과를 제공하였다.

2 쎄타	상대 강도(%)
6.7	100.0
7.2	4.8
9.7	6.0
11.2	24.0
13.2	3.0
14.5	4.8
16.0	2.4
16.7	21.6
17.0	31.2
17.5	10.8
19.0	3.0
21.0	4.8
23.0	3.6
25.5	7.2
26.5	6.0
28.2	3.0

이러한 지마테칸의 결정형들을 추가로 특성화하기 위해서, 동일한 샘플들을 IR 분광학에 의해 검사하였다. 하기 표에 상기 3 가지 형태의 피크(㎝^-1) 특징을 제공한다.

형태 I(아세톤)	형태 II(AcOEt)^*	형태 III(EtOH)^**
진동수(㎝-1)	진동수(㎝-1)	진동수(㎝-1)
1751.7	1761.7	1739.3
1606.4	1605.0	1619.8
1162.2	1156.7	1154.4
766.2	764.3	759.5
* 톨루엔, n-부틸 클로라이드, 메틸 t-부틸 에테르 또는 헥산으로부터 수득한 형태들에 대해서 또한 동일한 데이터가 관찰된다. ** 메탄올로부터 수득한 형태들에 대해서 또한 동일한 데이터가 관찰된다.

IR 스펙트럼을 퍼킨 엘머 스펙트럼 1000 FT-IR에 의해 1% KBr 펠릿 상에서 4 ㎝^-1에서 수집하였다.

Claims

7-폼일-캄토테신의 아세탈을 극성 양성자성 또는 비양성자성 유기 용매 중에서 O-t-부틸하이드록실아민 하이드로클로라이드와 반응시킴을 포함하는, 7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신의 입체선택적인 제조 방법.
제 1 항에 있어서,

반응을 산성 조건 하에서 수행하는 방법.
제 1 항에 있어서,

극성 양성자성 또는 비양성자성 유기 용매가 알콜인 방법.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,

극성 양성자성 또는 비양성자성 유기 용매가 에탄올 또는 메탄올인 방법.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,

무기 염기를 하이드록실아민 하이드로클로라이드에 대해 0.5 내지 0.9:1의 몰 비로 반응 매질에 첨가하는 방법.
제 5 항에 있어서,

무기 염기가 수산화 나트륨 또는 칼륨인 방법.
제 5 항에 있어서,

침전물을 여과에 의해 반응 혼합물로부터 단리하는 방법.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,

7-폼일-캄토테신의 아세탈이 다이알킬 아세탈인 방법.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,

7-폼일-캄토테신의 아세탈이 다이메틸 또는 다이에틸 아세탈인 방법.
제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,

반응 온도를 실온 내지 용매 비점에서 유지시키는 방법.
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,

반응의 끝에서 침전물을 반응 혼합물로부터 단리하는 방법.
제 11 항에 있어서,

침전물을 여과에 의해 반응 혼합물로부터 단리하는 방법.
제 11 항 또는 제 12 항에 있어서,

침전물을 다이클로로메탄에 용해시키고, 공용매를 가하고, 상기와 같이 수득한 용액을 농축시키고 반응 생성물을 침전 및 결정화함을 또한 포함하는 방법.
제 13 항에 있어서,

공용매가 아세톤, 톨루엔, n-부틸 클로라이드, 메틸-t-부틸 에테르 또는 헥산, 에틸 아세테이트, 에탄올, 메탄올 중에서 선택되는 방법.
7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신의 결정형인, 제 13 항 또는 제 14 항의 방법에 의해 수득할 수 있는 화합물.
제 15 항에 있어서,

7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신의 결정형 I인 화합물.
제 16 항에 있어서,

X-선 회절 상에서 7.2±0.2°의 2 쎄타(θ) 굴절각에서의 피크를 나타내는 화합물.
제 17 항에 있어서,

약 10.2, 12.7, 14.0, 14.7 및 15.2±0.02°로 이루어진 그룹 중에서 선택된 5 개 이상의 피크를 포함하는, 2θ각의 항으로 나타내는 X-선 회절 패턴을 갖는 화합물.
제 16 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,

도 2에 나타낸 바와 같은 X-선 회절 패턴을 실질적으로 갖는 화합물.
제 15 항에 있어서,

7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신의 결정형 II인 화합물.
제 20 항에 있어서,

X-선 회절 상에서 6.7±0.2°의 2 쎄타(θ) 굴절각에서의 피크를 나타내는 화합물.
제 21 항에 있어서,

약 11.2, 16.7, 17.0, 17.5 및 25.5±0.02°로 이루어진 그룹 중에서 선택된 5 개 이상의 피크를 포함하는, 2θ각의 항으로 나타내는 X-선 회절 패턴을 갖는 화합물.
제 20 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서,

도 3에 나타낸 바와 같은 X-선 회절 패턴을 실질적으로 갖는 화합물.
제 15 항에 있어서,

7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신의 결정형 III인 화합물.
제 24 항에 있어서,

X-선 회절 상에서 6.7±0.2°의 2 쎄타(θ) 굴절각에서의 피크를 나타내는 화합물.
제 25 항에 있어서,

약 11.2, 16.7, 17.0, 17.5 및 25.5±0.02°로 이루어진 그룹 중에서 선택된 5 개 이상의 피크를 포함하는, 2θ각의 항으로 나타내는 X-선 회절 패턴을 갖는 화합물.
제 24 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서,

도 4에 나타낸 바와 같은 X-선 회절 패턴을 실질적으로 갖는 화합물.
비결정성 7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신인 화합물.
7-[(E)-t-부틸옥시이미노메틸]-캄토테신의 결정형 I, 결정형 II, 결정형 III 및 비결정형으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화합물.
제 15 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하는 조성물.
(a) 제 15 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항의 화합물; 및

(b) 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제

를 포함하는 약학 조성물.
제 31 항에 있어서,

하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 또한 포함하는 약학 조성물.
제 31 항 또는 제 32 항에 있어서,

경구 투여에 적합한 투여형인 약학 조성물.
제 31 항 내지 제 33 항 중 어느 한 항에 있어서,

투여형이 정제, 캡슐 및 용액 중에서 선택되는 약학 조성물.
종양 질병의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 제 15 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항의 화합물의 용도.
치료 유효량의 제 15 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제 31 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항의 약학 조성물을 투여함을 포함하는, 종양 질병을 앓고 있는 포유동물의 치료 방법.