KR20070040375A - 큰 병원체의 검출을 위한 측면 흐름 장치 - Google Patents
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Abstract
시험 시료 내에 체류하는 분석물의 존재 또는 양을 검출하기 위한 측면 흐름 분석 장치로서, 접합 패드 및 흡상 패드와 소통하는 다공성 막을 갖는 측면 흐름 분석 장치가 제공된다. 다공성 막은 시험 시료가 적용되는 검출 구역을 가지며, 그 구역은 고정화된 제1 포획 시약이 분석물 및 분석물-접합체 복합체의 적어도 일부와 결합하여 검출 신호를 생성하도록 되어 있다. 다공성 막 상의 검출 구역의 하류에는 조절 구역이 위치하고, 조절 구역 내에는 제2 포획 시약이 고정화되어 있다. 접합 패드는 검출 구역의 상류에 위치하며, 분석물에 특이적으로 결합하는 구성원을 갖는 검출 프로브를 가진다. 완충액 방출 구역이 접합체 구역의 상류에 위치하며, 장치에 완충액 첨가를 제공하는데, 완충액은 검출 프로브를 검출 및 조절 구역으로 이동시키는 역할을 한다.
측면 흐름 분석 장치, 병원체
Description
큰 병원체의 진단은 현재 현미경 하에 시료를 검사하거나 시편을 배양함으로써 수행된다. 현미경을 통한 평가에는 숙련된 전문가와 장비가 필요한 반면, 시료 배양에는 일반적으로 결과를 얻기 위해서는 24 시간을 초과하는 시간이 필요하다.
유체 통과 분석법(flow through assay)은 여태까지는 병원체의 크기 때문에 큰 병원체의 검출에는 사용이 한정된 것으로 증명되어 왔다. 예를 들면, 시험 시료에 존재할 수도 있는 보다 작은 분석물의 존재 및/또는 농도를 구하기 위해, 각종 분석 절차 및 장치가 측면 흐름 분석(lateral flow assay)에 흔히 채택된다. 예를 들어 면역분석은, 병원성이거나 생물체에 이물질인 항원의 존재에 대한 반응으로 항체가 생성되게 되는 면역체계의 메커니즘을 활용한다. 이러한 항체 및 항원, 즉 면역반응물(immunoreactant)은 서로 결합함으로써, 생물학적 시료 중 특정 항원의 존재 또는 농도를 구하는데 사용될 수도 있는 고도로 특이적인 반응 메커니즘을 유발할 수 있다. 이러한 분석에는 분석물이 장치를 통과해 이동하는 것이 필요하므로, 보다 크고 운동성이 보다 적은 병원체에 대해서는 그리 유용하지 못하다.
분석물이 분석적으로 검출될 수 있도록 검출가능한 성분으로 표지되어 있는 면역반응물을 사용하는 몇가지 공지된 면역분석(immunoassay) 방법이 있다. 예를 들면, "샌드위치형(sandwich-type)" 분석은 전형적으로 염색된 라텍스 또는 방사능 동위원소와 같은 검출가능한 프로브를 시험 시료와 혼합하는 것을 포함하는데, 이 프로브는 분석물에 대해 특이적으로 결합하는 구성원과 접합된다. 접합된 프로브는 분석물과 함께 복합체를 형성한다. 이러한 복합체는 이어서 고정화된 항체 구역에 이르며, 여기에서 항체와 분석물 사이에 결합이 일어나, 삼원 "샌드위치 복합체(sandwich complex)"를 형성한다. 샌드위치 복합체는 분석물 검출을 위한 구역에 국소화된다. 이러한 기법은 정량적 또는 반-정량적 결과를 얻는데 사용될 수 있다.
대안적인 기법은 "경쟁형(competitive-type)" 분석이다. "경쟁형" 분석에서는 표지가 전형적으로, 시료 중에 존재하는 임의의 미표지 분석물과 항체의 결합에 대해 경쟁하는 표지된 분석물 또는 분석물-유사체이다. 경쟁형 분석은 전형적으로 합텐과 같은 분석물의 검출에 사용되는데, 각 합텐은 일가(monovalent)이고 단 하나의 항체 분자와 결합할 수 있다.
이러한 장치로부터 얻는 유익에도 불구하고, 다수의 통상적인 측면 흐름 분석은 비교적 높은 분석물 농도에 노출되는 경우 및 흐름을 유발하기에 곤란한 매우 큰 병원체를 검출하려고 하는 경우에는 부정확성이 상당하는 문제가 있다. 예를 들어 분석물이 고농도로 존재하면, 시험 시료 중 분석물의 상당한 부분이 접합된 프로브와 복합체를 형성할 수 없다. 따라서 검출 구역에 도달하면, 복합체화되지 않은 분석물이 복합체화된 분석물과 결합 부위에 대해 경쟁을 벌인다. 복합체화되 지 않은 분석물은 프로브로 표지되지 않기 때문에 검출될 수가 없다. 결과적으로, 복합체화되지 않은 분석물이 상당수의 결합 부위를 차지하게 되면, 분석은 "거짓 음성(false negative)"을 나타낼 수도 있다. 이러한 문제는 통상 "후크(hook) 효과"라고 칭해진다. 예를 들면, 칸디다 알비칸스(Candida albicans)와 같은 큰 병원체의 경우에는, 형성된 복합체의 크기로 인해 복합체가 막상의 검출 구역으로 적절히 흐르지 않기 쉽다.
그러나 "후크 효과"를 감소시키고, 측면 흐름 장치를 통해 흐르도록 하기에 곤란한 큰 병원체를 검출하는 개선된 기법에 대한 요구는 여전히 존재한다.
발명의 개요
본 발명의 한 실시양태에 따르면, 시험 시료 내에 체류하는 큰 분석물의 존재 또는 양을 검출하기 위한 분석 장치가 개시된다. 분석 장치는, 흡상 패드(wicking pad)와도 소통하는 다공성 막과 액상 소통(liquid communication)을 하는 접합 패드(conjugate pad)를 포함한다.
다공성 막은, 예를 들면 니트로셀룰로오스와 같은, 검출 프로브가 통과할 수 있는 각종 물질들 중 임의의 것으로 이루어질 수 있다. 다공성 막은, 시험 시료가 접촉, 증착 또는 적용되고, 내부에 제1 포획 시약이 고정화되어 있는 검출 구역을 가진다. 제1 포획 시약은 분석물 및 분석물-접합체 복합체의 적어도 일부와 결합하여 검출 신호를 생성하도록 되어 있다. 제1 포획 시약은 항원, 합텐, 단백질 A 또는 G, 뉴트라비딘, 아비딘, 스트렙타비딘, 캡타비딘, 일차 또는 이차 항체, 및 이들의 복합체로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 제1 포획 시약은, 예를 들면 분석물과 접합된 검출 프로브 사이에 형성된 복합체와 결합할 수 있다.
조절 구역이 다공성 막상에서 검출 구역의 하류에 위치한다. 제2 포획 시약이 조절 구역 내에 고정화되어 있고, 이는 접합체, 접합체-분석물 복합체 또는 순수 프로브와 결합하여 분석이 제대로 수행되고 있는지를 표시하도록 한다. 한 실시양태에서는, 제2 포획 시약이 항원, 합텐, 단백질 A 또는 G, 뉴트라비딘, 아비딘, 스트렙타비딘, 캡타비딘, 일차 또는 이차 항체, 및 이들의 복합체로 이루어진 군에서 선택된다.
접합 패드는 분석물의 존재를 신호로 보내는 검출 프로브를 함유한다. 접합 패드는 또한, 조절 구역에서의 표시를 위한 프로브를 포함한 다른 상이한 프로브 집단을 포함할 수도 있다. 원하는 경우, 검출 프로브는 색원체(chromogen), 촉매, 발광 화합물(예를 들면, 형광, 인광 등), 방사성 화합물, 시각적 표지, 리포좀, 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 물질을 포함할 수 있다. 특이적 결합 구성원은 항원, 합텐, 압타머(aptamer), 일차 또는 이차 항체, 비오틴, 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
막으로부터 멀리 떨어진 접합 패드의 말단과 액상 소통하는 완충액 방출 구역이 있다. 시료가 검출 구역에 증착된 후, 완충액은 완충액 방출 구역 내 접합체의 상류에서 방출된다. 완충액은 접합 패드로부터 검출 구역 쪽으로 프로브를 세정하여, 거기에서 검출 프로브가 검출 구역에서 존재할 수 있는 분석물에 의해 포획되고 양성 결과를 내게 된다. 시료가 분석물을 함유하지 않는다면, 검출선은 음성이 될 것이다. 여전히 일부 프로브를 함유하는 (검출 프로브와는 상이한 프로브 를 포함할 수도 있음) 완충액은 계속해서 조절 구역으로 유입되는데, 여기에서 시약은 접합체, 접합체-분석물 복합체 또는 순수 프로브를 포획하여 분석이 제대로 기능하고 있는지를 표시한다.
흡상 패드는 막과 액상 소통하며, 패드의 모세관 현상으로 인해 액체 이동을 위한 구동력을 제공한다.
본 발명의 또 다른 실시양태에 따르면, 시험 시료에 체류하는 분석물의 존재 또는 양을 검출하는 방법이 개시된다. 이 방법은,
i) 접합 패드 및 흡상 패드와 액상 소통하는 다공성 막을 갖는 측면 흐름 분석 장치로서, 접합 패드는 분석물에 대해 특이적으로 결합하는 구성원과 접합되는 검출 프로브를 가지고, 다공성 막은 제1 포획 시약이 고정화되는 검출 구역, 및 제2 포획 시약이 고정화되는 조절 구역을 한정하는데, 조절 구역은 검출 구역의 하류에 위치하고, 접합 패드는 다공성 막의 상류에 위치하며, 완충액 방출 구역이 접합 패드의 상류에 존재하는 것인 장치를 제공하는 단계;
ii) 분석물을 함유하는 시험 시료를 검출 구역과 접촉시키는 단계;
iii) 완충액 방출 구역에서 완충액을 방출시켜, 완충액이 검출 프로브를 검출 및 조절 구역으로 이송하도록 하는 단계; 및
iv) 검출 신호를 검출하는 단계
를 포함한다.
본 발명의 다른 특징 및 측면을 하기에 더욱 상세히 논의한다.
도 1은 본 발명의 측면 흐름 분석 장치의 한 실시양태의 투시도이다.
본원에서 사용되는 용어 "분석물"은 일반적으로 검출될 물질을 가리킨다. 예를 들면, 분석물에는 항원성 물질, 합텐, 항체, 및 이들의 조합이 포함될 수 있다. 분석물에는 독소, 유기 화합물, 단백질, 펩티드, 미생물, 아미노산, 핵산, 호르몬, 스테로이드, 비타민, 약물(치료적 목적으로 투여된 것들을 비롯하여 불법적인 목적을 위해 투여된 것들 포함), 약물 중간체 또는 부산물, 박테리아, 바이러스 입자 및 상기 임의 물질의 대사산물 또는 항체가 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 분석물의 구체적 예에는 페리틴; 크레아티닌 키나제 MB(CK-MB); 디곡신; 페니토인; 페노바르비톨; 카르바마제핀; 반코마이신; 겐타마이신; 테오필린; 발프로산; 퀴니딘; 황체형성호르몬(LH); 여포자극호르몬(FSH); 에스트라디올, 프로게스테론; C-반응성 단백질; 리포칼린; IgE 항체; 사이토카인; 비타민 B2 마이크로-글로불린; 당화 혈색소(glycated hemoglobin; Gly. Hb); 코르티솔; 디기톡신; N-아세틸프로카인아미드(NAPA); 프로카인아미드; 루벨라에 대한 항체, 예컨대 루벨라-IgG 및 루벨라 IgM; 톡소플라스마증(toxoplasmosis)에 대한 항체, 예컨대 톡소플라스마증 IgG(Toxo-IgG) 및 톡소플라스마증 IgM(Toxo-IgM); 테스토스테론; 살리실레이트; 아세트아미노펜; B형 간염 바이러스 표면 항원(HBsAg); B형 간염 핵 항원에 대한 항체, 예컨대 항-B형 간염 핵 항원 IgG 및 IgM(항-HBC); 인간 면역결핍 바이러스 1 및 2(HIV 1 및 2); 인간 T-세포 백혈병 바이러스 1 및 2(HTLV); B형 간염 e 항원(HBeAg); B형 간염에 대한 e 항체(항-HBe); 인플루엔자 바이러스; 갑상선 자극 호르몬(TSH); 티록신(T4); 토털 트리요오도타이로닌(Total T3); 유리 트리요오도타이로닌(Free T3); 암배아성 항원(CEA); 지질단백질, 콜레스테롤 및 트리글리세라이드; 및 알파 태아단백(AFP)이 포함된다. 남용 약물 및 규제 물질에는 암페타민; 메탐페타민; 바르비튜레이트, 예컨대 아모바르비탈, 세코바르비탈, 펜토바르비탈, 페노바르비탈 및 바르비탈; 벤조디아제핀, 예컨대 리브륨 및 발륨; 카나비노이드, 예컨대 하시시 및 마리화나; 코카인; 펜타닐; LSD; 메타쿠알론; 아편양, 예컨대 헤로인, 모르핀, 코데인, 히드로모르폰, 히드로코돈, 메타돈, 옥시코돈, 옥시모르폰 및 아편; 펜시클리딘; 및 프로폭시헨이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 기타 잠재적 분석물은 미국특허 제6,436,651호에 기재되어 있을 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "시험 시료"는 일반적으로 분석물을 함유하는 것으로 추정되는 물질이다. 시험 시료는, 예를 들어 공급원으로부터 직접 수득한 물질을 비롯하여, 여과, 침전, 희석, 증류, 혼합, 농축, 간섭 성분의 불활성화, 시약의 첨가 등과 같은 (다만, 이에 제한되지는 않음) 기법을 사용하여 전처리된 물질을 포함할 수 있다. 시험 시료는 생물학적 공급원, 예컨대 혈액, 간질액(insterstitial fluid), 침, 안구 렌즈 체액, 뇌척수액, 땀, 소변, 모유, 복수액, 점액, 활액(synovial fluid), 복강액, 질액, 양수 등을 포함하는 생리학적 체액에서 유래할 수 있다. 생리학적 체액 외에도, 다른 액체 시료, 예컨대 물, 음식물 등이 사용될 수도 있다. 또한, 분석물을 함유하는 것으로 추정되는 고체 물질도 시험 시료로서 사용될 수 있다.
일반적으로, 본 발명은 시험 시료 내에 체류하는 분석물의 존재 또는 양을 검출하기 위한 측면 흐름 분석 장치에 관한 것이다. 공지된 분석법에서는 병원체가 증착 지점으로부터 검출될 수 있는 지점까지 이동해야 함을 요구한다. 그러나 본 발명에서는, 검출 프로브를 함유하는 영역을 통과해 검출 구역까지 병원체를 이동시키기보다는, 초기에 접합 패드 상에 위치한 프로브를, 포획 시약이 있는 검출 구역 내에 위치한 병원체로 이동시킨다. 본 발명자들은, 반대되는 일반적 관례 대신에, 검출 프로브가 시료로 이동하도록 하는 것이 넓은 농도 범위에 걸쳐 큰 분석물의 검출을 단순하고, 효율적이며 비용 효과적인 방식으로 할 수 있게 한다는 것을 발견하였다. 또한, 그것이 더 작은 병원체의 검출, 특히 저농도에서의 검출에 적당하며, 과량의 복합체화되지 않은 분석물에 의해 유발되는 "후크 효과"를 거의 제거한다.
장치는 검출 구역 및 조절 구역을 갖는 다공성 막을 이용한다. 검출 및 조절 구역에는 고정화된 포획 시약이 있다. 장치는 또한 장치의 상류 말단에 완충액 방출 구역을, 또한 완충액 방출 구역과 다공성 막 사이에 위치한 접합 패드를 사용한다. 흡상 패드는 장치의 하류 말단에서 다공성 막의 반대쪽 말단과 액상 소통한다. 사용 시, 시료가 검출 구역에 적용되고, 일정 기간 후에 완충액이 방출된다. 완충액이 검출 프로브, 및 임의적으로 다른 종류의 프로브를, 접합 패드로부터 검출 구역을 통과하도록 세정하면, 병원체의 존재가 표시되게 된다.
본 발명에서의 분석을 위해 바람직한 병원체는 비교적 큰, 즉 크기가 약 0.03 내지 30 ㎛인 것들이다. 큰 병원체는 현재 알려진 측면 흐름 장치를 사용하여 검출하기 어려운데, 그 이유는 그 크기가 이동을 곤란하게 하기 때문이다.
본 발명을 사용하여 검출될 수 있는 적당한 병원체의 예에는 살모넬라(Salmonella) 종, 나이세리아 메닌지티데스(Neisseria meningitides) 군, 스트렙토코커스 뉴모니에(Streptococcus pneumoniae), 칸디다 알비칸스, 칸디다 트로피칼리스(Candida tropicalis) 와 같은 효모, 아스퍼질루아(aspergillua)와 같은 진균류, 헤모필러스 인플루엔자(Haemophilus influenza), HIV와 같은 바이러스, 및 트리코모나스(Trichomonas) 및 플라스모디움(Plasmodium)과 같은 원생동물이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.
보다 큰 병원체가 바람직하지만, 본 발명의 분석법은 보다 작은 병원체(분석물), 예를 들면 크기가 0.3 ㎛ 미만인 것들에 대해서도 적당하다. 작은 분석물이 저농도로 존재하는 경우에는, 분석물이 너무 분산되거나 희석되어, 통상적인 측면 흐름 장치의 검출 구역에서 표시되기에 양이 너무 불충분할 수 있다. 시험 시료를 검출 구역에 증착시키면, 저농도, 작은 병원체에 대한 검출의 가능성이 증가된다. 작은 분석물이 고농도로 존재하는 경우에는, 하기에 추가 설명하는 바와 같이, 통상적인 분석법에서 흔한 "후크 효과"를 피할 수 있다. 또한, 작은 병원체는, 다공성 막이 비교적 세공이 큰 것이라면, 막을 통과하여 잘 움직이지 않는다. 이러한 경우에는, 병원체의 검출 구역으로의 이동성 부족으로 인해 거짓 음성 결과가 또 나올 수 있다. 본 발명은 시험 시료를 직접 검출 구역에 증착시킴으로써, 이러한 작은 병원체를 검출하는데 따르는 실패를 극복한다.
이제, 도 1을 참조하여, 본 발명에 따라 형성될 수 있는 측면 흐름 분석 장치(20)의 한 실시양태를 더욱 상세히 설명할 것이다. 장치가 동일한 효과를 갖도록 다른 방식으로도 배열될 수도 있는 바, 용어 "측면 흐름(lateral flow)"이란 설명적인 것이고 제한적이지는 않음에 주목해야 한다. 예를 들면, 본 발명의 사상으로부터 벗어나지 않으면서 본 발명과 동일한 원리를 이용하여, 방사상 또는 수직 흐름 장치를 용이하게 구상할 수 있다. 나타난 바와 같이, 장치(20)는 임의적으로 경질 물질(24)에 의해 지지되는 다공성 막(22)을 포함한다. 다공성 막(22)은 검출 구역 (또는 선)(30)을 가진다. 다공성 막(22)은 또한 조절 구역 (또는 선)(32)을 가진다.
일반적으로, 다공성 막(22)은 검출 프로브가 통과할 수 있는 각종 물질 중 임의의 것으로 이루어질 수 있다. 예를 들면, 다공성 막(22)을 형성하는데 사용되는 물질에는 천연, 합성 또는 합성적으로 개질된 천연 발생 물질, 예컨대 다당류(예를 들면, 종이와 같은 셀룰로오스 물질, 및 셀룰로오스 아세테이트 및 니트로셀룰로오스와 같은 셀룰로오스 유도체); 폴리에테르 술폰; 폴리에틸렌; 나일론; 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF); 폴리에스테르, 폴리프로필렌; 실리카, 무기 물질, 예컨대 불활성화 알루미나, 규조토, MgSO4, 또는 기타 무기질의 세분화된 물질이 다공성 고분자 매트릭스에 분산된 것으로서, 고분자는 예컨대 염화비닐, 염화비닐-프로필렌 공중합체, 및 염화비닐-초산비닐 공중합체인 것; 천연 발생적 천(예를 들면, 면) 및 합성 천(예를 들면, 나일론 또는 레이온)의 양자 모두; 다공성 겔, 예컨대 실리카 겔, 아가로스, 덱스트란, 및 젤라틴; 고분자성 필름, 예컨대 폴리아크릴아미드; 등이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 한 특정 실시양태에서는, 다공성 막(22)이 니트로셀룰로오스 및/또는 폴리에테르 술폰 물질로부터 형성된다. 용어 "니트로셀룰로오스"는 니트로셀룰로오스 단독이거나, 질산 및 기타 산, 예컨대 탄소수 1 내지 7의 지방족 카르복실산의 혼합 에스테르일 수도 있는 셀룰로오스의 질산 에스테르를 가리킨다는 것을 이해해야 한다.
장치(20)는 또한 흡상 패드(26)를 포함할 수도 있다. 흡상 패드(26)는 일반적으로 다공성 막(22) 전체를 통과하여 이동한 유체를 수용한다. 당해 분야에서 잘 알려진 바와 같이, 흡상 패드(26)는 모세관 작용 및 막(22)을 통한 유체 흐름을 촉진하는데 도움을 줄 수 있다.
장치(20)는 완충액 방출 구역(34)을 가진다. 한 실시양태에서는, 완충액 방출 구역(34)은 완충액(38)이 내부에 저장될 수 있는 완충액 저장소(36)를 가진다. 완충액(38)은 대안적으로 별도의 저장소에 의해 공급될 수도 있다. 완충액(28)은 본 발명에서 사용되는 검출 프로브를 이송해갈 임의의 액체일 수 있다. 적당한 완충액의 예에는 인산 완충 식염수(PBS) 용액(pH 7.2), 트리스-완충 식염수(TBS) 용액(pH 8.2) 또는 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산(MES)(pH 5.3)이 포함된다.
접합 패드(40)는 완충액 방출 구역(34)과 액상 소통하며, 완충액 방출 구역(34)과 다공성 막(22) 사이에 위치하여, 완충액(38)이 완충액 방출 구역(34)으로부터 이동함에 따라 접합 패드(40)를 통과하며, 프로브를 다공성 막(22) 상의 검출 구역(30) 및 조절 구역(32)으로 이송하게 된다. 접합 패드(40)는 완충액이 통과할 수 있는 물질로 형성된다. 접합 패드(40)는 예를 들면 유리섬유로부터 형성될 수 있다. 단 하나의 접합 패드(40)만이 나와 있지만, 본 발명에서는 다른 접합 패드도 사용될 수 있음을 이해해야 한다.
시험 시료 중의 분석물의 검출을 개시하기 위해, 사용자는 시험 시료를 다공성 막(22)의 검출 구역(30) 부분에 직접 적용, 접촉 또는 증착시킬 수 있다. 도시된 실시양태에서는, 시험 시료가 검출 구역(30)에 위치해 있다. 일단 시료가 검출 구역(30)과 접촉하면, 완충액(38)이 완충액 방출 구역(34)으로 방출된다. 완충액(38)은 통합 저장소에 의해, 또는 피펫 또는 당업자에게 공지된 임의의 기타 효과적인 수단에 의해 적용될 수 있다. 완충액(38)은, 다공성 막과 액상 소통하는 접합 패드(40)를 통과하여 검출 구역(30) 및 조절 구역(32)으로 이동한다.
시험 시료 중 분석물의 존재 또는 부재의 정확한 검출을 용이하게 하기 위해, 소정량의 1종 이상의 검출 프로브를 접합 패드에 적용한다. 일반적으로 시각적으로 또는 기계 장치에 의해 검출될 수 있는 신호를 생성할 수 있는 임의의 물질이 검출 프로브로서 사용될 수 있다. 적당한 각종 물질에는 색원체; 촉매; 발광 화합물(예를 들면, 형광, 인광 등); 방사성 화합물; 콜로이드성 금속성(예를 들면, 금) 및 비금속성 입자, 염료 입자, 효소 또는 기질, 또는 유기 고분자 라텍스 입자를 포함한 시각적 표지; 신호 생성 물질을 함유하는 리포좀 또는 기타 소포체; 등이 포함될 수 있다. 검출 프로브로서 사용하기에 적당한 일부 효소가 미국특허 제4,275,149호에 개시되어 있다. 효소/기질 시스템의 한 예는 효소 알칼리성 포스파타제 및 기질 니트로 블루 테트라졸륨-5-브로모-4-클로로-3-인돌릴 포스페이트, 또는 그의 유도체 또는 유사체, 또는 기질 4-메틸움벨리퍼릴-포스페이트이다. 기타 적당한 검출 프로브가 미국특허 제5,670,381호 및 제5,252,459호에 기재되어 있을 수 있다.
일부 실시양태에서는, 검출 프로브가 검출가능한 신호를 생성하는 형광 화합물을 함유할 수 있다. 형광 화합물은 형광 분자, 고분자, 덴드리머, 입자 등일 수 있다. 적당한 형광 분자의 일부 예에는, 예를 들면 플루오레신, 유로퓸 킬레이트화물, 파이코빌린 단백질(phycobiliprotein), 로다민, 및 그것의 유도체 및 유사체가 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.
상기한 바와 같은 검출 프로브는 단독으로 사용되거나, 미세입자 (때때로 "비드(bead)" 또는 "마이크로비드(microbead)"라 칭함)와 함께 사용될 수 있다. 예를 들면, 천연 발생 미세입자, 예컨대 핵, 마이코플라스마, 플라스미드, 플라스티드, 포유류 세포(예를 들면, 적혈구 허깨비(erythrocyte ghost)), 단세포 미생물(예를 들면, 박테리아), 다당류(예를 들면, 아가로오스) 등이 사용될 수 있다. 또한, 합성 미세입자가 이용될 수도 있다. 예를 들면, 한 실시양태에서는 형광 또는 착색된 염료로 표지된 라텍스 미세입자가 이용된다. 아무 라텍스 미세입자가 본 발명에서 사용될 수 있지만, 라텍스 미세입자는 전형적으로 폴리스티렌, 부타디엔 스티렌, 스티렌아크릴-비닐 삼원공중합체, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리에틸메타크릴레이트, 스티렌-무수 말레산 공중합체, 폴리비닐 아세테이트, 폴리비닐피리딘, 폴리디비닐벤젠, 폴리부틸렌테레프탈레이트, 아크릴로니트릴, 염화비닐-아크릴레이트 등, 또는 이들의 알데히드, 카르복실, 아미노, 히드록실 또는 히드라자이드 유도체로부터 형성된다. 다른 적당한 미세입자는 미국특허 제5,670,381호 및 제5,252,459호에 기재되어 있을 수 있다. 적당한 형광 입자의 상업적으로 입수가능한 예에는 몰레큘라 프로브스 사(Molecular Probes, Inc.)에서 "플루오스피어(FluoSphere)"(레드 580/605) 및 "트랜스플루오스피어(TransfluoSphere)"(543/620)란 상표명 하에 판매하는 형광 카르복실화 미소구체를 비롯하여, 역시 몰레큘라 프로브스 사에서 판매하는 "텍사스 레드(Texas Red)" 및 5- 및 6-카르복시테트라메틸로다민이 포함된다. 또한, 적당한 착색된 라텍스 미세입자의 상업적으로 입수가능한 예에는 뱅스 래보러토리 사(Bang's Laboratory, Inc.)에서 판매하는 카르복실화 라텍스 비드가 포함된다.
이용 시, 입자의 모양은 일반적으로 다양할 수 있다. 예를 들어, 한 특정 실시양태에서는, 입자의 모양이 구형이다. 그러나, 판, 로드, 원반, 막대, 관, 불규칙한 모양 등과 같은 다른 모양도 또한 본 발명에서 구상될 수 있다는 점을 이해해야 한다. 또한, 입자의 크기도 다양할 수 있다. 예를 들면, 입자의 평균 크기(예를 들면, 직경)는 약 0.1 나노미터 내지 약 1,000 ㎛, 일부 실시양태에서는 약 0.1 나노미터 내지 약 100 ㎛, 일부 실시양태에서는 약 1 나노미터 내지 약 10 ㎛ 범위일 수 있다. 예를 들면, "㎛-규모" 입자가 종종 바람직하다. 이용 시, 그러한 "㎛-규모" 입자는 평균 크기가 약 1 ㎛ 내지 약 1,000 ㎛, 일부 실시양태에서는 약 1 ㎛ 내지 약 100 ㎛, 일부 실시양태에서는 약 1 ㎛ 내지 약 10 ㎛일 수 있다. 마찬가지로, "나노-규모" 입자도 또한 이용될 수 있다. 그러한 "나노-규모" 입자는 평균 크기가 약 0.1 내지 약 10 나노미터, 일부 실시양태에서는 약 0.1 내지 약 5 나노미터, 일부 실시양태에서는 약 1 내지 약 5 나노미터일 수 있다.
일부 경우에서는, 검출 프로브가 분석물에 보다 용이하게 결합할 수 있도록 하는 검출 프로브를 일부 방식으로 개질하는 것이 요망된다. 그러한 경우에는, 검출 프로브를, 그 검출 프로브에 접착되어 접합된 프로브를 형성하는 특정 특이적 결합 구성원으로 개질될 수 있다. 특이적 결합 구성원은 일반적으로 특이적 결합쌍, 즉 두 가지 상이한 분자 중 하나가 제2의 분자에 화학적으로 및/또는 물리적으로 결합한 상기 분자의 한 구성원을 가리킨다. 예를 들면, 면역반응성 특이적 결합 구성원에는 항원, 합텐, 압타머, (일차 또는 이차) 항체, 및 이들의 복합체(여기에는 재조합 DNA 방법 또는 펩티드 합성에 의해 형성된 것들이 포함됨)가 포함될 수 있다. 항체는 단클론성 또는 다클론성 항체, 재조합 단백질 또는 이들의 혼합물(들) 또는 단편(들)뿐만 아니라, 항체와 다른 특이적 결합 구성원의 혼합물일 수도 있다. 이와 같은 항체의 제조의 세부사항 및 이들을 특이적 결합 구성원으로서 사용하는데 대한 적합성은 당업자에게 잘 알려져 있다. 다른 통상의 특이적 결합쌍에는 비오틴과 아비딘 (또는 이들의 유도체), 비오틴과 스트렙타비딘, 탄수화물과 렉틴, 상보 뉴클레오타이드 서열(이에는 표적 핵산 서열을 검출하기 위한 DNA 교잡 분석법에서 사용되는 프로브와 포획 핵산 서열이 포함됨), 재조합 방법에 의해 형성된 것들을 포함한 상보 펩티드 서열, 작용자와 수용체 분자, 호르몬과 호르몬 결합 단백질, 효소 보조인자와 효소, 효소 저해제와 효소 등이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 특이적 결합쌍에는 원래의 특이적 결합 구성원의 유사체인 구성원들이 포함될 수도 있다. 예를 들면, 분석물의 유도체 또는 단편, 즉 분석물-유사체는, 분석물과 하나 이상의 에피토프를 공통으로 갖고 있는 한, 사용될 수 있다.
특이적 결합 구성원은 일반적으로 각종 숙지된 기법 중 임의의 것을 사용하여 검출 프로브에 부착될 수 있다. 예를 들면, 특이적 결합 구성원의 검출 프로브(예컨대, 입자)에 대한 공유 부착은 카르복실, 아미노, 알데히드, 브로모아세틸, 요오도아세틸, 티올, 에폭시 및 기타 반응성 또는 연결 작용기를 비롯하여, 단백질 커플링 반응을 달성시킬 수 있는 잔류 자유 라디칼 및 라디칼 양이온을 사용하여 이루어질 수 있다. 표면 작용기도 또한 작용기화 공단량체로서 혼입될 수 있는데, 그 이유는 검출 프로브의 표면이 비교적 높은 표면 농도의 극성 기를 함유할 수 있기 때문이다. 또한, 검출 프로브는 종종 합성 후에 작용기화되지만, 폴리(티오페놀)과 같은 특정한 경우에는 미세입자가 추가적 개질에 대한 필요 없이도 단백질에 직접적으로 공유 연결될 수 있다.
도 1을 다시 참조하면, 분석 장치(20)는 또한 분석물 또는 접합된 검출 프로브와 결합할 수 있는 제1 포획 시약이 내부에 고정화되어 있는 검출 구역(30)을 포함한다. 분석물의 결합은 분석물이 존재한다는 검출가능한 표시를 산출하고, 그러한 표시는 시각적이거나, 또는 하기에 거론하는 각종 검출기 또는 판독기(예를 들면, 형광 판독기)와 같은 다른 수단을 통할 수 있다. 판독기는 또한 검출 구역에서 신호의 강도를 기초로 하여, 검출 부위에서의 분석물의 상대적 양을 결정하도록 고안될 수도 있다.
일부 실시양태에서는, 제1 포획 시약이 생물학적 포획 시약일 수 있다. 그러한 생물학적 포획 시약은 당해 분야에 잘 알려져 있으며, 항원, 합텐, 단백질 A 또는 G, 뉴트라비딘, 아비딘, 스트렙타비딘, 캡타비딘, 일차 또는 이차 항체(예를 들면, 다클론성, 단클론성 등) 및 이들의 복합체가 포함될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 많은 경우에, 이러한 생물학적 포획 시약은 검출 프로브 상에 존재하는 특이적 결합 구성원(예를 들면, 항체)과 결합할 수 있는 것이 요망된다.
포획 시약을 위해서는 다양한 비-생물학적 물질을 이용하는 것이 요망될 수도 있다. 예를 들면, 일부 실시양태에서는, 시약이 고분자 전해질을 포함할 수 있다. 고분자 전해질은 알짜 양전하 또는 음전하, 또는 일반적으로 중성인 알짜 전하를 가질 수 있다. 알짜 양전하를 갖는 고분자 전해질의 일부 적당한 예에는 폴리라이신(미국 미주리주 세인트 루이스 소재의 시그마-알드리치 케미컬 사(Sigma-Aldrich Chemical Co., Inc.)에서 상업적으로 입수가능함), 폴리에틸렌이민; 에피클로로히드린-작용기화 폴리아민 및/또는 폴리아미도아민, 예컨대 폴리(디메틸아민-코-에피클로로히드린); 폴리디알릴디메틸-암모늄 클로라이드; 양이온성 셀룰로오스 유도체, 예컨대 셀룰로오스 공중합체, 또는 사차 암모늄 수용성 단량체로 그라프트된 셀룰로오스 유도체 등이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 한 특정 실시양태에서는, 사차 암모늄 수용성 단량체를 함유하는 셀룰로오스성 유도체인 셀콰트(CelQuat, 등록상표) SC-230M 또는 H-100(내셔널 스타치 앤드 케미컬 사(National Starch ＆ Chemical, Inc.)로부터 입수가능함)를 이용할 수 있다. 알짜 음전하를 갖는 고분자 전해질의 일부 적당한 예에는 폴리아크릴산, 예컨대 폴리(에틸렌-코-메타크릴산, 나트륨 염) 등이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 다른 고분자 전해질도 사용될 수 있음을 이해해야 한다. 이들 중 일부, 예컨대 양친성 고분자 전해질(즉, 극성 및 비극성 부분을 갖는 것)은 일반적으로 중성인 알짜 전하를 가질 수 있다. 예를 들면, 적당한 양친성 고분자 전해질의 일부 예에는 폴리(스티릴-b-N-메틸-2-비닐 피리디늄 요오다이드) 및 폴리(스티릴-b-아크릴산)(양자 모두 캐나다 도벌 소재의 폴리머 소스 사(Polymer Source, Inc.)에서 입수가능함)이 포함될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
제1 포획 시약은 분석물과 검출 프로브 사이에 형성된 복합체를 위한 고정적 결합 부위로서 역할을 한다. 구체적으로, 분석물, 예컨대 항체, 항원 등은 전형적으로 둘 이상의 결합 부위(예를 들면, 에피토프)를 가진다. 검출 구역(30)에 도달할 때, 이러한 결합 부위 중 하나가 프로브의 특이적 결합 구성원에 의해 점유된다. 그러나 분석물의 자유 결합 부위가 고정화된 포획 시약에 결합할 수도 있다. 고정화된 포획 시약에 결합될 때, 복합체화된 프로브는 새로운 삼원 샌드위치 복합체를 형성한다.
검출 구역(30)은 일반적으로, 사용자가 시험 시료 중의 특정 분석물의 농도를 더 잘 구하도록 하기 위해 임의의 수의 구별되는 검출 영역들을 제공할 수 있다. 각 영역은 동일한 포획 시약을 함유하거나, 다중 분석물을 포획하기 위한 상이한 포획 시약을 함유할 수 있다. 예를 들면, 검출 구역(30)은 둘 이상의 구별되는 검출 영역(예를 들면, 선, 점 등)을 포함할 수 있다. 검출 영역은, 분석 장치(20)을 통한 시험 시료의 흐름에 실질적으로 수직인 방향으로 선 형태로 배치될 수 있다. 마찬가지로, 일부 실시양태에서는, 검출 영역이 분석 장치를 통과하는 시험 시료의 흐름에 실질적으로 평행인 방향으로 선 형태로 배치될 수 있다.
통상적인 측면 흐름 샌드위치 장치에서는, 복합체화되지 않은 분석물이 복합체화된 분석물과, 검출 구역에 위치한 포획 시약에 대해 경쟁하여, 분석물의 존재의 표시를 감소시킬 것이다. 신호 강도 대 시간을 그래프로 나타내면, 이 감소가 후크 모양을 닮아서, 이러한 현상이 "후크 효과"로 알려져 있다. 시험 시료를 검출 구역(30)에 직접 증착시키면, 분석물이 검출 프로브와 접촉하기 전에 포획 시약과 복합체를 형성한다. 이는 일반적으로 시약의 모든 또는 실질적으로 모든 포획 부위가 분석물에 의해 점유되게 된다. 검출 프로브는 후속하여 검출 구역에 도달할 때 새로운 삼원 샌드위치 복합체를 형성한다. 이러한 순서는 이전의 분석법에서 발견되는 "후크 효과"를 거의 제거시키는데, 그 이유는 분석물이 거의 모든 포획 시약과 결합하고(단, 분석물이 충분히 있는 경우에만), 과량의 검출 프로브는 거의 모든 포획 시약 부위가 복합체화된 분석물을 함유하도록 보장하기 때문이다.
도 1을 다시 참조하면, 다공성 막(22)은 검출 구역(30)의 하류에 위치한 조절 구역(32)을 또한 포함한다. 조절 구역(32)은 일반적으로 단일의 구별된 영역(예를 들면, 선, 점 등)을 제공하나, 복수의 영역도 본 발명에 의해 확실히 구상된다. 예를 들면, 도시된 실시양태에서는, 단일선이 이용된다. 조절 구역(32)은, 장치(20)를 통과하는 완충액 및 검출 프로브의 흐름에 실질적으로 수직인 방향으로 배치될 수 있다. 마찬가지로, 일부 실시양태에서는, 구역(32)이 장치(20)를 통과하는 흐름에 실질적으로 평행인 방향으로 배치될 수 있다.
그 배열과는 상관없이, 다공성 막(22) 상에 제2 포획 시약이 조절 구역(32) 내에 고정화된다. 제2 포획 시약은 검출 구역(30)에서 제1 포획 시약과 결합하지 않는 임의의 검출 프로브 및/또는 분석물/접합된 프로브 복합체를 위한 고정적 결합 부위로서 역할을 한다. 제2 포획 시약은 복합체화된 검출 프로브와 복합체화되지 않은 검출 프로브 모두와 결합하는 것이 요망되기 때문에, 제2 포획 시약은 정상적으로 제1 포획 시약과는 상이하다. 한 실시양태에서는, 제2 포획 시약은 제1 포획 시약과는 상이한 생물학적 포획 시약(예를 들면, 항원, 합텐, 단백질 A 또는 G, 뉴트라비딘, 아비딘, 스트렙타비딘, 일차 또는 이차 항체(예를 들면, 다클론성, 단클론성 등), 및 이들의 복합체)이다. 예를 들면, 제1 포획 시약은 단클론성 항체(예를 들면, CRP Mab1)일 수 있는 반면, 제2 포획 시약은 아비딘(고도로 양이온성인 66,000-달톤 당단백질), 스트렙타비딘(비당화 52,800-달톤 단백질), 뉴트라비딘(당제거 아비딘 유도체), 및/또는 캡타비딘(질산화 아비딘 유도체)일 수 있다. 이 실시양태에서는, 제2 포획 시약이, 비오틴화되거나 제1 포획 시약의 단클론성 항체와는 상이한 단클론성 항체(예를 들면, CRP Mab2)와 접합된 검출 프로브 상에 함유된 비오틴과 결합할 수 있다.
또한, 조절 구역(32)의 제2 포획 시약을 위해 각종 비-생물학적 물질을 이용하는 것도 요망될 수 있다. 많은 경우들에서, 그러한 비-생물학적 포획 시약은, 잔존하는 접합된 검출 프로브 및/또는 분석물/접합된 프로브 모두가 복합체화하도록 더 잘 보장하기 위해 특히 요망될 수 있다.
형광 검출은 검출 및 조절 구역에서 분석물의 존재를 검출하는데 사용될 수 있으며, 일반적으로 여기 광자로부터 방사 광자를 단리하는 파장 여과, 및 방사 광자를 등록하고 기록가능한 결과를, 보통 전기 신호 또는 사진적 화상으로서 생성하는 검출기를 이용한다. 일반적으로 형광 분광계 및 마이크로플레이트 판독기; 형광 현미경; 형광 스캐너; 및 유세포 분석기(flow cytometer)의 네 종류의 인지된 검출기가 있다. 본 발명에 사용하기에 적당한 한 형광 검출기는 미국 뉴저지주 에디슨 소재의 스펙스 인더스트리즈 사(SPEX Industries, Inc.)에서 판매하는 플루오로로그 III(FluoroLog III) 형광분광계이다.
원하는 경우, "시간-분해 형광 검출(time-resolved fluorescence detection)"로 알려진 기법도 본 발명에서 이용할 수 있다. 시간-분해 형광 검출은, 유로퓸(Eu(III)) 및 테르븀(Tb(III))의 란탄족 킬레이트와 같은 특정 형광 물질의 형광 특징을 활용함으로써, 방사원으로부터 또는 산란 공정(여기 복사의 산란의 결과임)으로부터의 배경 신호를 감소시키도록 고안되었다. 상기와 같은 킬레이트는, 실질적으로 더 짧은 파장에서의 킬레이트의 여기 후에 강하게 적색 이동된, 좁은 밴드의 긴 수명 방사를 나타낼 수 있다. 전형적으로, 킬레이트는 분자 내 란탄족 원소에 근접하게 위치한 색소포(chromophore)로 인한 강한 자외선 흡수 밴드를 보유한다. 색소포에 의한 광흡수 후에는, 여기 에너지가 여기된 색소포로부터 란탄족 원소로 전달될 수 있다. 그 후, 란탄족 원소의 형광 방사 특징이 이어진다. 펄스형 여기 및 시간-게이트 검출을 좁은 밴드의 방사 필터와 조합하여 사용하면, 란탄족 킬레이트만으로부터의 형광이 특이적으로 검출되어, 전형적으로 단수명이거나 보다 짧은 파장 방사를 하는, 시료에 존재하는 다른 화학종들로부터의 방사를 거부한다.
본 발명을 그의 특정 실시양태에 대하여 상세하게 설명하였으나, 당업자는 상기 내용을 이해하게 될 때 이러한 실시양태의 변경예, 변형예 및 대등예를 용이하게 생각할 수 있을 것임이 인식될 것이다. 따라서, 본 발명의 범주는 첨부된 청구범위, 및 임의의 그것의 균등물의 범주인 것으로 해석되어야 한다.
Claims (20)
- 시험 시료 내에 체류하는 분석물의 존재 또는 양을 검출하기 위한 측면 흐름 분석 장치로서,상기 측면 흐름 분석 장치는 다공성 막을 포함하고,상기 다공성 막은 접합 패드(conjugate pad) 및 흡상 패드(wicking pad)와 소통하며,상기 다공성 막은상기 시험 시료가 적용되고, 내부에 제1 포획 시약이 고정화되어 있는 검출 구역으로서, 상기 제1 포획 시약은 상기 분석물 및 분석물-접합체 복합체의 적어도 일부와 결합하여 강도를 갖는 검출 신호를 생성하도록 되어 있는 것인 검출 구역;상기 검출 구역의 하류에 위치하고, 내부에 제2 포획 시약이 고정화되어 있는 조절 구역으로서, 상기 제2 포획 시약은 상기 접합체 또는 접합체-분석물 복합체와 결합하도록 되어 있는 것인 조절 구역;상기 검출 구역의 상류에 위치한 상기 접합 패드로서, 상기 접합체 구역이 분석물에 대한 특이적 결합 구성원과 함께 검출 프로브를 갖는 것인 접합 패드;상기 접합 패드의 상류에 위치하고, 상기 장치에 완충액 첨가를 제공하는 상기 완충액 방출 구역으로서, 상기 완충액은 상기 검출 프로브를 상기 검출 구역 및 상기 조절 구역으로 이동시키는 역할을 하는 것인 완충액 방출 구역을 한정하는 것인 측면 흐름 분석 장치.
- 제1항에 있어서, 상기 접합된 검출 프로브가 색원체(chromogen), 촉매, 발광 화합물, 방사성 화합물, 시각적 표지, 리포좀, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 물질을 포함하는 것인 측면 흐름 분석 장치.
- 제1항에 있어서, 상기 접합된 검출 프로브가 발광 화합물을 포함하는 것인 측면 흐름 분석 장치.
- 제1항에 있어서, 상기 접합된 검출 프로브가 시각적 표지를 포함하는 것인 측면 흐름 분석 장치.
- 제1항에 있어서, 상기 특이적 결합 구성원이 항원, 합텐, 압타머(aptamer), 일차 또는 이차 항체, 비오틴, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 측면 흐름 분석 장치.
- 제1항에 있어서, 상기 제1 포획 시약이 항원, 합텐, 단백질 A 또는 G, 뉴트라비딘, 아비딘, 스트렙타비딘, 캡타비딘, 일차 또는 이차 항체, 및 이들의 복합체로 이루어진 군에서 선택되는 것인 측면 흐름 분석 장치.
- 제1항에 있어서, 상기 제2 포획 시약이 항원, 합텐, 단백질 A 또는 G, 뉴트 라비딘, 아비딘, 스트렙타비딘, 캡타비딘, 일차 또는 이차 항체, 및 이들의 복합체로 이루어진 군에서 선택되는 것인 측면 흐름 분석 장치.
- 제1항에 있어서, 상기 분석물이 살모넬라(Salmonella) 종, 나이세리아 메닌지티데스(Neisseria meningitides) 군, 스트렙토코커스 뉴모니에(Streptococcus pneumoniae), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 칸디다 트로피칼리스(Candida tropicalis), 아스퍼질루아(aspergillua), 헤모필러스 인플루엔자(Haemophilus influenza), HIV, 트리코모나스(Trichomonas) 및 플라스모디움(Plasmodium)으로 이루어진 군에서 선택되는 큰 병원체인 측면 흐름 분석 장치.
- 제1항에 있어서, 상기 분석물이 독소, 유기 화합물, 단백질, 펩티드, 미생물, 아미노산, 핵산, 호르몬, 스테로이드, 비타민, 약물, 약물 중간체 또는 부산물, 박테리아, 바이러스 입자, 및 상기 물질 중 임의의 것의 대사산물 또는 그 임의의 것에 대한 항체로 이루어진 군에서 선택되는 것인 측면 흐름 분석 장치.
- 제1항에 있어서, 상기 분석물이 작은 병원체인 측면 흐름 분석 장치.
- i) 접합 패드 및 흡상 패드와 액상 소통하는 다공성 막을 포함하는 측면 흐름 분석 장치로서, 상기 접합 패드는 분석물에 대한 특이적 결합 구성원과 접합된 검출 프로브를 가지고, 상기 다공성 막은 내부에 제1 포획 시약이 고정화되어 있는 검출 구역, 및 내부에 제2 포획 시약이 고정화되어 있는 조절 구역을 한정하며, 상기 조절 구역은 상기 검출 구역의 하류에 위치하고, 상기 접합 패드는 상기 다공성 막의 상류에 위치하며, 완충액 방출 구역이 상기 접합 패드의 상류에 있는 것인 장치를 제공하는 단계;ii) 분석물을 함유하는 시험 시료를 검출 구역과 접촉시키는 단계;iii) 상기 완충액 방출 구역에서 완충액을 방출하여, 상기 완충액이 상기 검출 프로브를 상기 검출 및 조절 구역으로 이송하도록 하는 단계; 및iv) 검출 신호를 검출하는 단계를 포함하는, 시험 시료 내에 체류하는 분석물의 존재 또는 양을 검출하는 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 접합된 검출 프로브가 색원체, 촉매, 발광 화합물, 방사성 화합물, 시각적 표지, 리포좀, 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 물질을 포함하는 것인 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 접합된 검출 프로브가 시각적 표지를 포함하는 것인 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 특이적 결합 구성원이 항원, 합텐, 압타머, 일차 또는 이차 항체, 비오틴, 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 것인 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 제1 포획 시약이 항원, 합텐, 단백질 A 또는 G, 뉴트라비딘, 아비딘, 스트렙타비딘, 캡타비딘, 일차 또는 이차 항체, 및 이들의 복합체로 이루어진 군에서 선택되는 것인 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 제2 포획 시약이 항원, 합텐, 단백질 A 또는 G, 뉴트라비딘, 아비딘, 스트렙타비딘, 캡타비딘, 일차 또는 이차 항체, 및 이들의 복합체로 이루어진 군에서 선택되는 것인 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 제2 포획 시약이 고분자 전해질을 포함하는 것인 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 분석물이 살모넬라 종, 나이세리아 메닌지티데스 군, 스트렙토코커스 뉴모니에, 칸디다 알비칸스, 칸디다 트로피칼리스, 아스퍼질루아, 헤모필러스 인플루엔자, HIV, 트리코모나스 및 플라스모디움으로 이루어진 군에서 선택되는 큰 병원체인 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 분석물이 독소, 유기 화합물, 단백질, 펩티드, 미생물, 아미노산, 핵산, 호르몬, 스테로이드, 비타민, 약물, 약물 중간체 또는 부산물, 박테리아, 바이러스 입자, 및 상기 물질 중 임의의 것의 대사산물 또는 그 임의의 것에 대한 항체로 이루어진 군에서 선택되는 것인 방법.
- 시험 시료 내에 체류하는 분석물의 존재를 검출하기 위한 측면 흐름 분석 장치로서, 초기에는 접합 패드 상에 위치한 검출 프로브가 포획 시약을 갖는 검출 구역에 위치한 병원체로 이동되는 측면 흐름 분석 장치.
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