KR20070061837A - 측면 흐름 분석을 사용한 효모 감염 검출 - Google Patents

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슈-핑 양
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킴벌리-클라크 월드와이드, 인크.
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Abstract

공액 패드 및 흡상 패드와 액체 소통하는 다공성 막을 갖는, 시험 샘플에 존재하는 피검물의 존재 또는 양 검출용 측면 흐름 분석 장치가 제공된다. 공액 패드는 금 콜로이드 함유 검출 탐침을 갖는다. 다공성 막은 검출 대역을 가지며, 여기서 고정된 제1 포획 시약은 적어도 부분적인 피검물 및 피검물-공액화물 착물에 결합하여 검출 신호를 생성하도록 구성된다. 조절 대역은 다공성 막 상의 검출 대역으로부터 하류에 위치하고, 조절 대역 내에 고정된 제2 포획 시약을 갖는다. 공액 패드는 검출 대역으로부터 상류에 위치하고, 피검물에 대한 특이적 결합 요소를 갖춘 검출 탐침을 갖는다. 피검물을 함유하는 샘플은 공액 패드 상에 침착되고, 검출 탐침과 상호작용하고, 검출을 위해 조절 대역을 향해 움직인다.
측면 흐름 분석 장치, 효모 감염, 유동 분석 장치

Description

측면 흐름 분석을 사용한 효모 감염 검출{DETECTING YEAST INFECTIONS USING A LATERAL FLOW ASSAY}
매년 미국에서 약 백사십만 건의 효모 감염을 일으키는 칸디다 알비칸스(Candida albicans)와 같은 큰 병원체의 진단은 현재, 현미경 하에서 샘플을 조사하거나 표본을 배양함으로써 수행된다. 현미경 평가는 숙련된 전문가 및 장치를 필요로 하며, 표본 배양은 일반적으로 결과를 얻기 위해 24시간 초과의 시간을 필요로 한다.
따라서, 유동 분석은 병원체의 크기 때문에 큰 병원체의 검출시 제한적으로 사용될 수 있는 것으로 증명되었다. 통상, 다양한 분석 절차 및 장치를 측면 흐름 분석에 사용하여 시험 샘플에 존재할 수 있는 작은 피검물(analyte)의 존재 및(또는) 농도를 결정한다. 예를 들면, 면역분석은 면역계의 기전을 사용하며, 여기서 유기체에 대해 병원체 또는 외래인 항원의 존재에 반응하여 항체가 생산된다. 이러한 항체 및 항원, 즉 면역반응물은 서로 결합할 수 있기 때문에 생물학적 샘플 중 특정 항원의 존재 또는 농도를 결정하는 데 사용될 수 있는 매우 특이적인 반응 기전을 일으킨다. 이러한 분석은 피검물이 장치를 통해 움직일 것을 필요로 하기 때문에 큰, 낮은 이동성 병원체의 경우 유용성이 떨어진다 .
이러한 장치로부터 얻어지는 이득에도 불구하고, 많은 통상적인 측면 흐름 분석은 흐름을 일으키기 어려운 매우 큰 병원체의 검출시 상당히 부정확하다. 예를 들면, 칸디다 알비칸스와 같은 큰 병원체의 경우, 형성된 착물의 크기로 인해 착물이 막 상에서 검출 대역으로 적합하게 흐를 수 없는 경우가 종종 있다.
그러나, 측면 흐름 장치를 통해 흐르기 어려운 큰 병원체를 검출하는 개선된 기술에 대한 요구는 여전히 존재한다.
발명의 개요
본 발명의 한 실시양태에 따르면, 시험 샘플에 존재하는 피검물의 존재 또는 양 검출용 유동 분석 장치가 개시된다. 측면 흐름 분석 장치는 공액 패드 및 흡상 패드와 액체 소통하는 다공성 막을 갖는다. 공액 패드는 금 콜로이드 함유 검출 탐침을 갖는다. 다공성 막은 검출 대역을 가지며, 여기서 고정된 제1 포획 시약은 적어도 부분적인 피검물 및 피검물-공액화물 착물에 결합하여 검출 신호를 생성하도록 구성된다. 조절 대역은 다공성 막 상의 검출 대역으로부터 하류에 위치하고, 조절 대역 내에 고정된 제2 포획 시약을 갖는다. 공액 패드는 검출 대역으로부터 상류에 위치하고, 피검물에 대한 특이적 결합 요소를 갖춘 검출 탐침을 갖는다. 피검물을 함유하는 샘플은 공액 패드 상에 침착되고, 검출 탐침과 상호작용하고, 검출을 위해 검출 대역을 향해 움직인다. 상류 및 하류는 분석 장치 상의 침착점으로부터 샘플의 흐름 방향을 기준한 물체의 위치를 지칭한다.
공액 패드는 피검물의 존재를 신호하는 검출 탐침을 함유한다. 또한, 공액 패드는 조절 대역에서의 표시용 탐침을 비롯한 다른 상이한 탐침 군도 포함할 수 있다. 검출 탐침은 통상적인 탐침보다 상당히 작아 예를 들면, 5-150 nm의 직경 범위의 나노입자로 간주될 수 있고, 더욱 특히, 이 탐침은 탐침/피검물 공액화물의 이동성을 촉진하기 위해 20 내지 60 nm의 직경을 갖는다. 적합한 탐침은 금 콜로이드, 탄소 및 염색한 라텍스 입자로부터 제조된 것들을 포함한다.
흡상 패드는 막과 액체 소통하고, 패드의 모세관 형상으로 인해 액체 운동에 대한 구동력을 제공한다.
또다른 실시양태에 따르면, 시험 샘플에 존재하는 피검물의 존재 또는 양 검출 방법이 개시된다. 이 방법은
i) 다공성 막이 a) 내부에 제1 항체가 고정되고, 피검물과 공액화된 검출 탐침 간에 형성된 착물에 결합하여 검출 신호를 생성하도록 구성된 검출 대역, 및 b) 조절 대역 내에 함유되는 경우 조절 신호를 생성할 수 있는, 내부에 제2 항체가 고정된 조절 대역을 정하는 것인 공액 패드 및 흡상 패드와 액체 소통하는 다공성 막을 포함하는 유동 분석 장치를 제공하고,
ii) 상기 시험 피검물을 함유하는 샘플을 공액화된 검출 탐침과 접촉시키고,
iii) 검출 신호를 검출하는 것을 포함한다.
도 1은 본 발명의 유동 분석 장치의 한 실시양태의 사시도이다.
대표적인 실시양태의 상세한 설명
일반적으로, 본 명세서에 사용된 용어 "피검물"은 검출되는 물질을 지칭한다. 예를 들면, 피검물은 항원 물질, 합텐, 항체 및 그들의 조합물을 포함할 수 있다. 피검물은 독소, 유기 화합물, 단백질, 펩티드, 미생물, 아미노산, 핵산, 호르몬, 스테로이드, 비타민, 약물(치료 목적으로 투여되는 것들, 뿐만 아니라 불법으로 투여되는 것들 포함), 약물 중간물 또는 부산물, 세균, 바이러스 입자 및 상기 물질의 대사산물 또는 상기 물질에 대한 항체를 포함하며 이에 한정되지 않는다. 일부 피검물의 구체적인 예는 페리틴(ferritin), 크레아티닌 키나아제 MB(CK-MB), 디곡신(digoxin), 페니토인(phenytoin), 페노바르비톨(phenobarbitol), 카르바마제핀(carbamazepine), 반코마이신, 젠타마이신, 테오필린(theophylline), 발프로산, 퀴니딘(quinidine), 황체형성 호르몬(LH), 난포 자극 호르몬(FSH), 에스트라디올, 프로게스테론, C-반응성 단백질, 리포칼린(lipocalin), IgE 항체, 시토킨, 비타민 B2 마이크로글로불린, 글리코헤모글로빈(Gly. Hb), 코르티졸(cortisol), 디지톡신(digitoxin), N-아세틸프로카인아미드(NAPA), 프로카인아미드, 풍진에 대한 항체, 예를 들면 풍진-IgG 및 풍진 IgM, 톡소플라스마증에 대한 항체, 예를 들면 톡소플라스마증 IgG(Toxo-IgG) 및 톡소플라스마증 IgM(Toxo-IgM), 테스토스테론, 살리실레이트, 아세트아미노펜, 간염 B 바이러스 표면 항원(HBsAg), 간염 B 코어 항원에 대한 항체, 예를 들면 항-간염 B 코어 항원 IgG 및 IgM(Anti-HBC), 인간 면역 결핍 바이러스 1 및 2(HIV 1 및 2), 인간 T 세포 백혈병 바이러스 1 및 2(HTLV), 간염 B e 항원(HBeAg), 간염 B e 항원에 대한 항체(Anti-HBe), 감기 바이러스, 갑상선 자극 호르몬(TSH), 티록신(T4), 총 트리요오도티로닌(총 T3), 유리 트리요오도티로닌(유리 T3), 암배아 항원(CEA), 지단백질, 콜레스테롤, 및 트리글리세리드 및 알파 페토프로테인(alpha fetoprotein, AFP)을 포함한다. 남용 약물 및 규제 물질은 암페타민, 메트암페타민, 바비튜레이트(barbiturate), 예를 들면 아모바비탈(amobarbital), 세코바비탈(secobarbital), 펜토바비탈(pentobarbital), 페노바비탈(phenobarbital) 및 바비탈, 벤조디아제핀, 예를 들면 리브륨 및 발륨, 칸나비노이드(cannabinoid), 예를 들면 해시시 및 마리화나, 코카인, 펜타닐, LSD, 메타콸론, 아편, 예를 들면 헤로인, 모르핀, 코데인, 히드로모르폰(hydromorphone), 히드로코돈(hydrocodone), 메타돈(methadone), 옥시코돈(oxycodone), 옥시모르폰(oxymorphone) 및 오피움(opium), 펜시클리딘(phencyclidine) 및 프로폭시헨(propoxyhene)을 포함하며 이에 한정되지 않는다. 다른 가능한 피검물은 미국 특허 6,436,651 및 4,366,241에서 설명될 수 있다.
일반적으로, 본 명세서에 사용된 용어 "시험 샘플"은 피검물을 함유하는 것으로 의심되는 물질을 지칭한다. 시험 샘플은 예를 들면, 공급원으로부터 직접 얻은 물질, 뿐만 아니라 예를 들면, 여과, 침전, 희석, 용균, 증류, 혼합, 농도, 저해 성분의 불활성화, 시약의 첨가 등을 포함하며 이에 한정되지 않는 기술을 사용하여 전처리된 물질을 포함할 수 있다. 시험 샘플은 생물학적 공급원, 예를 들면 혈액, 간질액, 타액, 안액(ocular lens fluid), 뇌척수액, 땀, 소변, 젖, 복수, 점액, 활액, 복막강액, 질액, 월경, 양수 등을 비롯한 생리학적 유체로부터 유래할 수 있다. 생리학적 유체 외에, 다른 액체 샘플, 예를 들면 물, 식품 등도 사용할 수 있다. 또한, 피검물을 함유하는 것으로 의심되는 고체 물질도 시험 샘플로 사용할 수 있다.
본 발명은 시험 샘플에 존재하는 피검물의 존재 또는 양 검출용 유동 분석 장치에 관한 것이다. 이 장치는 다중 검출 대역을 사용하며, 이 중 하나는 탐침의 "조절" 결합을 전제로 하고, 다른 것은 피검물의 "샌드위치" 결합을 전제로 한다. 본 발명자들은 이러한 대역의 조합이 피검물을 광역의 농도 범위에서 검출할 수 있게 하는 것으로 믿고 있다. 예를 들면, 본 발명에 따라 형성될 수 있는 유동 분석 장치(20)의 한 실시양태를 이제 도 1을 참고하여 더욱 상세히 설명할 것이다. 도시한 바와 같이, 장치(20)는 임의적으로, 강성 물질(24)에 의해 지지되는 다공성 막(22)을 함유한다. 일반적으로, 다공성 막(22)은 시험 샘플이 이를 통해 통과할 수 있는 임의의 다양한 물질로부터 제조될 수 있다. 예를 들면, 다공성 막(22)을 형성하는 데 사용되는 물질은 천연, 합성 또는 합성으로 변형된 천연 발생 물질, 예를 들면 다당류(예를 들면, 셀룰로오스 물질, 예를 들면 종이 및 셀룰로오스 유도체, 예를 들면 셀룰로오스 아세테이트 및 니트로셀룰로오스), 폴리에테르 술폰, 폴리에틸렌, 나일론, 폴리비닐리덴 플루오리드(PVDF), 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 실리카, 무기 물질, 예를 들면 탈활성화된 알루미나, 규조토, MgSO4, 또는 비닐 클로리드, 비닐 클로리드-프로필렌 공중합체 및 비닐 클로리드-비닐 아세테이트 공중합체와 같은 중합체를 사용하여 다공성 중합체 메트릭스에 균일하게 분산된 다른 무기 미분 물질, 천연 발생 섬유(예를 들면, 면) 및 합성 섬유(예를 들면, 나일론 또는 레이온) 양쪽 모두, 다공성 겔, 예를 들면 실리카겔, 아가로오스, 덱스트란 및 젤라틴, 중합체 필름, 예를 들면 폴리아크릴아미드 등을 포함할 수 있으며 이에 한정되지 않는다. 한 특정 실시양태에서, 다공성 막(22)은 니트로셀룰로오스 및( 또는) 폴리에테르 술폰 물질로부터 형성된다. 용어 "니트로셀룰로오스"가 니트로셀룰로오스 자체, 또는 질산 및 다른 산, 예를 들면 1 내지 7개의 탄소 원자를 갖는 지방족 카르복실산의 혼합된 에스테르일 수 있는 셀룰로오스의 질산 에스테르를 지칭한다는 점이 이해되어야 한다.
또한, 장치(20)는 흡상 패드(26)를 함유할 수 있다. 일반적으로, 흡상 패드(26)는 전체 다공성 막(22)을 통해 이동한 유체를 수용한다. 당업계에 공지된 바와 같이, 흡상 패드(26)는 다공성 막(22)을 통한 유체 흐름 및 모세관 작용을 촉진하는 데 보조할 수 있다.
시험 샘플 내 피검물의 검출을 개시하기 위해, 사용자는 시험 샘플을 다공성 막(22) 부분에 직접 가할 수 있으며, 그 다음, 이 부분을 통해 샘플은 도 1에 화살표 "L"로 도시한 방향으로 이동할 수 있다. 별법으로, 시험 샘플을 다공성 막(22)과 액체 소통하는 샘플 패드(도시되지 않음)에 먼저 가할 수 있다. 샘플 패드를 형성하는 데 사용할 수 있는 일부 적합한 물질은 니트로셀룰로오스, 셀룰로오스, 다공성 폴리에틸렌 패드 및 유리 섬유 여과지를 포함하며 이에 한정되지 않는다. 필요에 따라, 샘플 패드는 이에 확산적으로 또는 비확산적으로 부착된 하나 이상의 분석 전처리 시약도 함유할 수 있다. 또다른 실시양태에서, 별도의 샘플 패드가 필요치 않도록 시험 샘플을 공액 패드에 가할 수 있다.
예시된 실시양태에서, 시험 샘플은 공액 패드(40)로부터 이동한다. 공액 패드(40)는 시험 샘플이 통과할 수 있는 물질로부터 형성된다. 예를 들면, 한 실시양태에서, 공액 패드(40)는 유리 섬유로부터 형성된다. 비록 오직 하나의 공액 패 드(40)만을 도시하였지만, 다수의 공액 패드도 본 발명에 사용할 수 있다는 점이 이해되어야 한다.
시험 샘플 내 피검물의 존재 또는 부재의 정확한 검출을 용이하게 하기 위해, 미리 정한 양의 검출 탐침을 장치(20)의 다양한 위치에 가한다. 일반적으로, 육안으로 또는 기계 장치에 의해 검출가능한 신호를 생성할 수 있는 임의의 물질을 검출 탐침으로 사용할 수 있다. 그러나, 칸디다 알비칸스의 경우, 피검물 및 탐침으로부터 유래한 착물이 막을 통해 장치의 검출 대역으로 이동하기에는 너무 크기 때문에 다른 피검물을 사용하여 기능할 수 있는 많은 탐침들이 허용가능하지 않다. 본 발명자들이 발견한 이러한 이동성의 결핍은 금 콜로이드, 탄소, 또는 소형 라텍스 입자로부터 제조된 탐침을 사용함으로써 극복될 수 있다.
또한, 이러한 탐침은 비색 또는 형광 발색단, 촉매, 발광 화합물(예를 들면, 형광, 인광물질 등), 방사성 화합물, 중공 입자, 효소 또는 기질, 또는 유기 중합체 라텍스 입자, 신호 생성 물질을 함유하는 리포좀 또는 다른 소포 등을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 검출 탐침은 검출가능한 신호를 생성하는 형광 화합물을 함유할 수 있다. 형광 화합물은 형광 분자, 중합체, 덴드리머(dendrimer), 입자 등일 수 있다.
상기한 바와 같은 검출 탐침을 단독으로 또는 입자(때때로, "비드" 또는 "마이크로비드"로 지칭함)와 함께 사용할 수 있다. 핵, 미코플라스마, 플라스미드, 색소체, 포유류 세포(예를 들면, 적혈구 허깨비), 단세포 미생물(예를 들면, 세균), 다당류(예를 들면, 아가로오스) 등과 같은 천연 발생 입자는 충분히 작은 경우 사용할 수 있다. 형광 표지화되거나 염색된 라텍스 입자를 사용할 수 있다.
비록 임의의 라텍스 입자를 본 발명에 사용할 수 있지만, 라텍스 입자는 전형적으로, 폴리스티렌, 부타디엔 스티렌, 스티렌아크릴-비닐 삼원공중합체, 폴리메틸메타크릴레이드, 폴리에틸메타크릴레이드, 스티렌-말레산 무수물 공중합체, 폴리비닐 아세테이트, 폴리비닐피리딘, 폴리디비닐벤젠, 폴리부틸렌테레프탈레이트, 아크릴로니트릴, 비닐클로리드-아크릴레이드 등, 또는 그의 알데히드, 카르복실, 아미노, 히드록실 또는 히드라지드 유도체로부터 형성된다. 칸디다 알비칸스의 경우, 피검물에 더욱 용이하게 결합할 수 있도록 검출 탐침을 변형시키는 것이 바람직하다. 검출 탐침은 이에 접착되어 공액화된 탐침을 형성하는 특정한 특이적 결합 요소를 사용하여 변형될 수 있다. 일반적으로, 특이적 결합 요소는 특이적 결합 쌍(즉, 분자 중 하나가 화학적으로 및(또는) 물리적으로 제2 분자에 결합하는 두 상이한 분자)의 요소를 지칭한다. 예를 들면, 면역반응성 특이적 결합 요소는 재조합 DNA 방법 또는 펩티드 합성에 의해 형성된 것들을 비롯한 항원, 합텐, 엡타머(aptamer), 항체(1차 또는 2차) 및 그들의 착물을 포함할 수 있다.
항체는 단일클론 항체(Mab) 또는 다클론 항체(Pab), 그의 재조합 단백질 또는 혼합물(들) 또는 단편(들), 뿐만 아니라 항체 및 다른 특이적 결합 요소의 혼합물일 수 있다. 이러한 항체의 제조 및 특이적 결합 요소로서의 그들의 적합성에 대한 상세는 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들면, 항체는 금 콜로이드와 공액화되어 검출 탐침을 생산할 수 있다. 이러한 탐침을 적합한 공액 패드로 건조시키고, 다양한 농도에서 칸디다 알비칸스 용액과의 감응성을 시험할 수 있다.
다른 통상의 특이적 결합 쌍은 바이오틴 및 아비딘(또는 그들의 유도체), 바이오틴 및 스트렙타비딘, 탄수화물 및 렉틴, 상보적 뉴클레오티드 서열(표적 핵산 서열을 검출하기 위해 DNA 혼성화 분석에 사용되는 포획 핵산 서열 및 탐침 포함), 재조합 방법에 의해 형성된 것들을 비롯한 상보적 펩티드 서열, 이펙터(effector) 및 수용체 분자, 호르몬 및 호르몬 결합 단백질, 효소 보조인자 및 효소, 효소 억제제 및 효소 등을 포함하며 이에 한정되지 않는다. 특이적 결합 쌍은 본래의 특이적 결합 요소의 유사체인 요소를 포함할 수 있고, 피검물의 유도체 또는 단편, 즉 피검물-유사체는 피검물과 공통으로 하나 이상의 에피토프를 갖는 경우 사용될 수 있다.
일반적으로, 임의의 다양한 공지된 기술을 사용하여 특이적 결합 요소를 검출 탐침에 부착할 수 있다. 카르복실, 아미노, 알데히드, 브로모아세틸, 요오도아세틸, 티올, 에폭시 및 다른 반응성 또는 연결 관능기, 뿐만 아니라 단백질 커플링 반응이 이를 통해 달성될 수 있는 라디칼 양이온 및 잔여 자유 라디칼을 사용하여 특이적 결합 요소를 검출 탐침(예를 들면, 입자)에 공유 부착시킬 수 있다. 또한, 검출 탐침의 표면은 비교적 높은 표면 농도의 극성 기를 함유할 수 있기 때문에 표면 관능기를 관능화된 공단량체로서 혼입할 수 있다. 또한, 비록 검출 탐침이 종종 합성 후 관능화되지만, 폴리(티오페놀)과 같은 특정한 경우, 입자는 추가 변형의 필요 없이 단백질과 직접 공유 연결될 수 있다.
활성화 및(또는) 항체 커플링은 완충제, 예를 들면 인산 완충 식염수(PBS)(예를 들면, pH 7.2) 또는 2-(N-모르폴리노) 에탄 술폰산(MES)(예를 들면, pH 5.3) 에서 발생할 수 있다. 이 과정은 공액화된 검출 탐침을 형성하며, 여기서 항체는 탐침에 공유 부착된다.
물리적 흡착과 같은 공유 결합 외의 부착 기술도 본 발명에 사용할 수 있다. 금 콜로이드의 경우, 항체와 같은 단백질은 황-금 상호작용, 전하 인력 및 소수성 결합을 통한 배위 결합을 비롯한 힘의 조합을 통해 그 표면에 잘 결합한다.
다시 도 1을 참조하면, 다공성 막(22)은 분석을 수행하도록 구성된 다양한 대역을 정한다. 또한, 분석 장치(20)는 검출 대역(30)을 함유한다. 비록 요구되는 것은 아니지만, 전형적으로 검출 대역(30)은 조절 대역(32)으로부터 상류에 위치한다. 제2 포획 시약은 검출 대역(30) 내에 고정된다. 예를 들면, 일부 실시양태에서, 제2 포획 시약은 상기한 바와 같은 생물학적 포획 시약일 수 있다. 한 실시양태에서, 예를 들면, 제2 포획 시약은 피검물에 특이적인 항체이다. 제2 포획 시약은 피검물과 공액화된 검출 탐침 간에 형성된 착물에 대한 정적 결합 부위로 작용한다. 구체적으로, 피검물, 예를 들면 항체, 항원 등은 전형적으로 2개 이상의 결합 부위(예를 들면, 에피토프)를 갖는다. 검출 대역(30)에 도달시, 공액화된 탐침의 특이적 결합 요소는 이러한 결합 부위 중 하나를 차지한다. 그러나, 피검물의 자유 결합 부위는 고정된 포획 시약에 결합할 수 있다. 고정된 포획 시약에 결합한 경우, 착화된 탐침은 신규한 3원 샌드위치 착물을 형성한다.
사용자가 시험 샘플 내 특정 피검물의 농도를 잘 결정할 수 있도록 검출 대역(30) 및 조절 대역(32)은 각각 임의의 수의 별개의 검출 영역을 제공할 수 있다. 각 영역은 동일하거나 상이한 포획 시약을 함유할 수 있다. 예를 들면, 이 대역은 2개 이상의 별개의 영역(예를 들면, 선, 점 등)을 포함할 수 있다. 이 영역은 분석 장치(20)를 통한 시험 샘플의 흐름에 실질적으로 수직인 방향으로 선의 형태로 배치될 수 있다. 유사하게, 일부 실시양태에서, 이 영역은 분석 장치(20)를 통한 시험 샘플의 흐름에 실질적으로 평행한 방향으로 선의 형태로 배치될 수 있다.
비록 장치 구성의 다양한 실시양태를 앞서 설명하였지만, 일반적으로 장치는 임의의 원하는 구성을 가질 수 있고, 상기 모든 성분을 함유할 필요는 없다는 점이 이해되어야 한다. 분석 장치(20)의 특정 구성과는 무관하게, 조절 대역(32) 및 검출 대역(30)은 피검물 검출 범위를 개선하도록 제휴하여 기능한다.
하기 실시예는 본 발명의 다양한 실시양태를 예시한다.
40 nm 직경 금 콜로이드를 단일클론 및 다클론 항체로 공액화하였다. 단일클론 항체는 Mab1(카탈로그 번호 10-C07, 미국 01742-3049 메사추세츠주 콩코드 소재의 피츠제랄드 인더스트리즈 인터네쇼날 인크.(Fitzgerald Industries International, Inc.))이고, 다클론 항체는 Pab2(카탈로그 번호 B65411R, 미국 04072 메인주 사코 소재의 바이오디자인 인터네쇼날(Biodesign International))였다. 니트로셀룰로오스 막(미국 메사추세츠 빌러리카 소재의 밀리포어 코퍼레이션(Millipore Corporation)으로부터 HF075 및 HF120)에 포획 시약으로서 1 mg/ml의 항체 Pab2 및 조절선으로서 1 mg/ml의 마우스에 대한 염소 항체(goat anti-mouse)를 스트리핑(striping)하였다. 막을 약 37 ℃에서 약 1시간 동안 건조시켰다. 막을 오븐에서 꺼낸 후, 흡상 패드(밀리포어 코퍼레이션)를 조절선 근처 상부에 적층 시켰다. 카드를 4 mm 폭 절반 스트립으로 절단하고, 시험을 위해 96 웰 플에이트에 침지시켰다. 공액화물 각각을 완충제 대조군 및 칸디다 알비칸스 용액에 대해 시험하였다. 시험 웰이 완충제 용액을 함유한 경우, 포획선은 음성이고, 오직 조절선만이 양성으로 변하였다. 시험 웰이 칸디다 알비칸스를 함유한 경우, 포획선 및 조절선 양쪽 모두가 양성으로 변하였다. 이 시스템은 이러한 두 항체 쌍을 사용하여 107-108 CFU/ml를 검출할 수 있었다.
포획 시약으로서 동일한 Pab2를 사용하여 추가로 2개의 공액화물, Mab3(카탈로그 번호 1750-5007, 03833 뉴 헴프셔주 브랜드우드 소재의 바이오제네시스 인크.(Biogenesis Inc.)), Mab5(카탈로그 번호 A63100069P, 94608 캘리포니아주 에머리빌 소재의 바이오스파시픽 코퍼레이션(BioSpacific Corporation))를 사용하여 추가 시험을 수행하였다. 완충제 및 칸디다 알비칸스 용액을 구비한 상기 절반 스틱을 시험하는 데 이 공액화물을 사용하였다. 또다시, 이 시스템은 완충제 대조군의 경우 음성을 나타내고, 칸디다 알비칸스 저장 용액(108 CFU/ml) 및 10배 희석(107 CFU/ml) 용액 사용시 양성으로 변하였다.
상기 유기체 용액으로 양성 시험 결과를 얻었지만, 상이한 완충제 중에서 재현탁된 속도 감소된(spun down) 칸디다 알비칸스를 사용한 경우에도 양성이 되었으며, 이는 칸디다 알비칸스에 대한 양성 시험 결과가 전 유기체, 잔해 또는 전 유기체로부터 분비된 단백질에 의한 것일 수 있다는 점을 시사한다
본 발명을 그의 구체적인 실시양태를 참조로 상세히 설명하였지만, 당업자가 상기 내용을 이해한 후, 이러한 실시양태에 대한 변화, 변형 및 등가물을 용이하게 고안해낼 수 있다는 점이 이해될 것이다. 따라서, 본 발명의 범위는 첨부되는 청구 범위 및 그의 임의의 등가물의 범위로 사정되어야 한다.

Claims (16)

  1. 공액 패드는 검출 대역으로부터 상류에 위치하며, 나노입자를 포함하는 피검물(analyte)에 대한 특이적 결합 요소를 갖춘 검출 탐침을 갖고, 상기 검출 대역은 적어도 부분적인 피검물 및 피검물-공액화물 착물에 결합하여 강도를 갖는 검출 신호를 생성하도록 구성된 고정된 제1 포획 시약을 갖고, 조절 대역은 상기 검출 대역의 하류에 위치하며, 여기서 제2 포획 시약은 상기 조절 대역 내에 고정되며, 상기 공액화물 또는 공액화물-피검물 착물에 결합하도록 구성되고, 상기 피검물을 함유하는 샘플은 상기 공액 패드 상에 침착되며, 상기 조절 대역을 향해 움직이는 것인 공액 패드 및 흡상 패드와 액체 소통하는 다공성 막을 포함하는, 시험 샘플에 존재하는 피검물의 존재 또는 양 검출용 측면 흐름 분석 장치.
  2. 제1항에 있어서, 상기 공액화된 검출 탐침이 발색단, 촉매, 발광 화합물, 방사성 화합물, 가시적 표지, 리포좀 및 그들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 물질을 포함하는 것인 측면 흐름 분석 장치.
  3. 제1항에 있어서, 상기 공액화된 검출 탐침이 발광 화합물을 포함하는 것인 측면 흐름 분석 장치.
  4. 제1항에 있어서, 상기 공액화된 검출 탐침이 가시적 표지를 포함하는 것인 측면 흐름 분석 장치.
  5. 제1항에 있어서, 상기 특이적 결합 요소가 항원, 합텐, 엡타머(aptamer), 1차 또는 2차 항체, 바이오틴 및 그들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 측면 흐름 분석 장치.
  6. 제1항에 있어서, 상기 제1 포획 시약이 항원, 합텐, 단백질 A 또는 G, 뉴트라비딘(neutravidin), 아비딘, 스트렙타비딘, 캡타비딘(captavidin), 1차 또는 2차 항체 및 그들의 착물로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 측면 흐름 분석 장치.
  7. 제1항에 있어서, 상기 제2 포획 시약이 항원, 합텐, 단백질 A 또는 G, 뉴트라비딘, 아비딘, 스트렙타비딘, 캡타비딘, 1차 또는 2차 항체 및 그들의 착물로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 측면 흐름 분석 장치.
  8. 제1항에 있어서, 상기 피검물이 칸디다 알비칸스(Candida albicans)인 측면 흐름 분석 장치.
  9. i) 공액 패드는 피검물에 대한 특이적 결합 요소로 공액화된 나노입자 검출 탐침을 갖고, 다공성 막은 내부에 제1 포획 시약이 고정된 검출 대역 및 내부에 제2 포획 시약이 고정된 조절 대역을 정하고, 상기 조절 대역은 상기 검출 대역으로 부터 하류에 위치하는 것인 공액 패드 및 흡상 패드와 액체 소통하는 다공성 막을 포함하는 측면 흐름 분석 장치를 제공하고,
    ii) 상기 피검물을 함유하는 시험 샘플을 공액 패드와 접촉시키고,
    iii) 검출 신호를 검출하는
    것을 포함하는 시험 샘플에 존재하는 피검물의 존재 또는 양 검출 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 공액화된 검출 탐침이 발색단, 촉매, 발광 화합물, 방사성 화합물, 가시적 표지, 리포좀 및 그들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 물질을 포함하는 것인 방법.
  11. 제9항에 있어서, 상기 공액화된 검출 탐침이 가시적 표지를 포함하는 것인 방법.
  12. 제9항에 있어서, 상기 특이적 결합 요소가 항원, 합텐, 엡타머, 1차 또는 2차 항체, 바이오틴 및 그들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  13. 제9항에 있어서, 상기 제1 포획 시약이 항원, 합텐, 단백질 A 또는 G, 뉴트라비딘, 아비딘, 스트렙타비딘, 캡타비딘, 1차 또는 2차 항체 및 그들의 착물로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  14. 제9항에 있어서, 상기 제2 포획 시약이 항원, 합텐, 단백질 A 또는 G, 뉴트라비딘, 아비딘, 스트렙타비딘, 캡타비딘, 1차 또는 2차 항체 및 그들의 착물로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  15. 제9항에 있어서, 상기 제2 포획 시약이 고분자 전해질(polyelectrolyte)을 포함하는 것인 방법.
  16. 제9항에 있어서, 상기 피검물이 칸디다 알비칸스인 방법.
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