KR20070036035A

KR20070036035A - 자가면역 및 염증성 질환의 치료 방법

Info

Publication number: KR20070036035A
Application number: KR1020067022486A
Authority: KR
Inventors: 버나드 마흐; 얀 딘; 마리 코스코-빌부아
Original assignee: 노비뮨 에스 에이
Priority date: 2004-04-06
Filing date: 2005-04-06
Publication date: 2007-04-02
Also published as: CA2563260C; AU2005232653B2; IL178478A; NO340627B1; MXPA06011526A; CA2563260A1; UA89780C2; UA103594C2; PT1737490E; IL178478A0; JP2007532565A; ZA200608884B; NO20064896L; EA200601871A1; CN102847149B; EP1737490B1; CN1972714B; EP1737490A2; EA012725B1; ES2348984T3

Abstract

본 발명은 자가면역 질환 및(또는) 염증성 질환의 치료 방법을 제공한다.

Description

자가면역 및 염증성 질환의 치료 방법{METHODS OF TREATING AUTOIMMUNE AND INFLAMMATORY DISEASES}

본 발명은 일반적으로 항-CD3 항체와 같이 면역학적 내성과 면역 반응의 조절을 유도하는 CD3 조절제를 자가면역 질환 및(또는) 염증성 질환의 치료에 사용하는 용도에 관한 것이다.

면역계는 매우 복잡하고 긴밀하게 조절되는 것으로, 계의 다른 부분에 생긴 결함을 보상할 수 있는 많은 대체 경로를 가지고 있다. 그러나, 면역 반응은 활성화되는 경우, 질병이나 다른 바람직하지 못한 증상의 원인이 되는 경우도 있다. 그러한 질병이나 바람직하지 못한 증상으로는, 예를 들어, 자가면역 질환, 이식 후 이식편 거부 반응, 무해한 항원에 대한 알러지, 건선, 죽상동맥경화증과 같은 만성 염증성 질환 및 염증 일반 등이 있다. 이러한 경우 및 기타 부적절하거나 바람직하지 않은 면역 반응을 포함하는 증상에 있어서, 임상적으로 면역억제가 필요하다.

따라서, 면역 관련 질병 및(또는) 질환을 치료하는 데 사용되는 조성물의 개발이 필요하다.

발명의 개요

본 발명은 CD3의 발현 또는 활성을 조절하는 것이 임상적 포도막염에 대한 래트 모델에서 염증을 억제하고, 임상적 죽상동맥경화증에 대한 마우스 모델에서는 죽상동맥경화 플라크의 형성을 감소시킨다는 발견에 기초한 것이다. 따라서, 본 발명은 체내 조직에서 염증을 예방 또는 억제하는 방법을 특징으로 한다. 염증이 있는 조직은 일반적으로 조직이 붉어지고 통증이 있으며 부풀어오르는 것을 특징으로 한다. 포도막염은 시력의 감소, 눈의 초자체(눈의 뒤쪽) 및 전방에서의 세포 및 혼탁(피브린, 변성 단백질)을 특징으로 한다. 조직은 포도막과 같은 안 조직, 또는 정맥, 동맥, 모세 혈관과 같은 심장 조직을 포함한다.

염증은 세포나 조직을, 염증전 사이토카인의 생산을 감소시키거나 항-염증성 사이토카인을 증가시키는 양으로 또는 면역학적 내성을 일으키는 양으로 CD3 조절제에 노출시킴으로써 억제할 수 있다.

본 발명은 CD3 발현 세포를 CD3 조절제에 노출시킴으로써 죽상동맥경화 플라크의 형성을 억제하는 방법을 제공한다. 죽상동맥경화 플라크는 동맥 벽에 부착된 플라크의 양이 CD3 억제제에 노출되기 전과 비교하여 CD3 조절제에 노출된 후에 감소되는 식으로 억제된다.

세포는 CD3를 발현하는 것이라면 어느 것이라도 무방하며, 예를 들어, T-세포와 같은 림프구이다. T-세포는 순환하는, 즉, 혈액 또는 림프 중의 T-세포이다. T-세포는 또한 조직내에, 예를 들어, 림프절, 림프관, 림프선 및 비장 내에 존재한다. 조직은 염증이 있는 (또는 염증 발생 위험이 있는) 조직이다. "노출시킨다"는 의미는 세포 또는 조직을 CD3 조절제와 접촉시키는 것을 의미한다. 조직의 세포는 직접 또는 간접적으로(즉, 전신적으로) 접촉된다. 세포는 생체 내, 시험관 내 또는 생체 외 접촉한다.

본 발명은 또한 염증성 질환을 앓고 있거나 염증성 질환 발병의 위험이 있는 개체를 찾아내고, 그에 CD3 조절제를 투여함으로써 염증성 질환의 증후를 예방 또는 완화시키는 방법을 특징으로 한다.

CD3 조절제는 CD3의 발현이나 활성을 감소시키는 화합물을 이른다. CD3 활성은 T-세포 활성을 포함한다. T-세포 활성을 측정하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. CD3 조절제는, 예를 들어, 항-CD3 항체를 포함한다. CD3 조절제는 단독으로 또는 다른 소염제나 염증성 질환을 치료하는 데 사용되는 면역억제 약물과 조합하여 투여된다. CD3 조절제는, 예를 들어, 코르티코스테로이드, 스타틴, 인터페론 베타, 비스테로이드계 소염제(NSAID), 메토트렉세이트, 사이클로스포린 A, 질병 수정 항-류마티스제(DMARD)와 함께 투여된다.

개체는 사람, 마우스, 래트, 개, 고양이, 소, 말, 돼지와 같은 포유 동물이다. 개체는 염증성 질환을 앓고 있거나 염증성 질환 발병의 위험에 처해 있다. 염증성 질환은 심장혈관계 염증, 안 염증, 위장관계 염증, 간 염증, 폐 염증, 자가면역 질환 또는 근육 염증을 포함한다. 염증성 질환을 앓고 있거나 염증성 질환 발병의 위험에 처해 있는 개체는 당업계에 알려진 방법으로, 예를 들어, 조직을 육안으로 검사하거나 혈액 또는 조직 내에 염증과 관련된 증후를 검출하여 찾아낸다. 염증의 증후는 이환된 조직의 통증, 붉어짐, 부풀어오름을 포함한다.

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 또는 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 전문인에 의해 통상적으로 이해되는 바와 같은 의미를 갖는다. 본 발명을 실시하고 시험하는 데 본 명세서에 기술된 것과 유사 또는 균등한 방법 및 물질을 사용할 수 있지만, 이하 적절한 방법과 물질을 기술한다. 본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 기타 참고 자료는 그 내용 전체가 본 명세서에 포함된다. 충돌이 발생했을 때, 정의 부분을 포함하는 본 명세서가 조절 기능을 할 것이다. 본 명세서에 기재된 물질, 방법 및 실시예는 단지 예시적인 것일 뿐, 제한적인 것으로 의도된 것이 아니다.

본 발명의 특징 및 이점은 하기 상세한 설명 및 특허 청구 범위로부터 자명할 것이다.

도 1은 래트 포도막염 모델에서 항-CD3 치료법의 임상 및 조직학적 효과를 도시한 그래프이다.

도 2는 마우스의 대동맥근에서 항-CD3 치료법이 죽상동맥경화 플라크의 형성을 억제하는 효과를 도시한 그래프이다.

도 3은 마우스에서 항-CD3 치료법이 확립된 죽상동맥경화 병변 부위의 진전을 억제하는 효과를 도시한 그래프이다.

본 발명은 부분적으로는 CD3 발현 또는 활성의 조절이 면역 반응을 감소시키고 소염 효과를 가져온다는 발견에 기초한 것이다. 보다 구체적으로는, 항-CD3 항체를 투여했을 때 포도막염과 관련된 신호 및 증상이 감소하고, 죽상동맥경화 플라크의 형성이 감소되었다는 것이다.

CD3는 서로 간에 또한 T-세포 수용체와 비-공유적으로 결합된, 성숙한 T-림프구 중에 존재하는 적어도 5개의 막-결합된 폴리펩티드의 복합체이다. CD3 복합체는 감마, 델타, 엡실론, 제타 및 에타 쇄(서브유닛으로도 칭함)를 포함한다. 항원이 T-세포 수용체와 결합했을 때, CD3 복합체는 T-세포의 세포질에 활성화 신호를 보낸다.

CD3 조절제

CD3 조절제란 CD3의 발현 또는 활성을 조절하는 물질을 이른다. "조절한다"라 함은 그러한 물질이 CD3의 발현 또는 활성을 촉진, 증가, 감소 또는 중화하는 것을 의미한다. CD3 활성은, 예를 들어, T-세포 활성화 신호를 보내는 것을 포함한다. T-세포 활성화는 칼슘-매개 세포 내 cGMP의 증가 또는 IL-2에 대한 세포 표면 수용체의 증가로 정의된다. 예를 들어, T-세포 활성화의 증가는 조절 화합물이 부재하는 경우에 비하여 그러한 화합물이 있는 경우, 칼슘-매개 세포 내 cGMP 및 IL-2 수용체의 감소로 특징지워진다. 세포 내 cGMP는, 예를 들어, 시판되고 있는 시험 키트를 사용하여 경쟁적 면역 검정 또는 신틸레이션 근접 검정법으로 측정할 수 있다. 세포 표면 IL-2 수용체는, 예를 들어, PC61 항체와 같은 IL-2 수용체 항체에의 결합을 이용하여 측정한다.

CD3 조절제는, 예를 들어, 항-CD3 항체 또는 그의 단편을 포함한다. 임의로는, 항-CD3 항체는 단쇄 항-CD3 항체, 이중특이적 항-CD3 항체, 또는 헤테로컨쥬게이트 항-CD3 항체이다. 이 항체는 활성화 항-CD3 항체이며, 즉 항체는 CD3 활성을 유도한다. 이 항체는 또한 중화 항-CD3 항체일 수 있으며, 즉 항체는 CD3 활성을 감소시킨다.

항-CD3 항체는 당업계에 잘 알려져 있다. 항-CD3 항체는, 예를 들어, OKT3, G4.18, 145-2C11, Leu4, HIT3a, BC3, SK7, SP34, RIV-9 및 UCHT1을 포함하나, 이에 국한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 항-CD3 항체가 OKT3, G4.18, 145-2C11, Leu4, HIT3a, BC3, SK7, SP34, RIV-9 및 UCHT1와 동일한 에피토프에 결합한다. 바람직하게는, 항체는 그에 대한 숙주의 면역 반응을 감소시키도록 인간화되거나 마(馬)화된 것이다.

어떠한 항체가 항-CD3 항체인 OKT3, G4.18, 145-2C11, Leu4, HIT3a, BC3, SK7, SP34, RIV-9 및 UCHT1로 하여금 CD3 항원 폴리펩티드 또는 다른 T-세포 표면 항원 폴리펩티드에 결합하는 것을 방해하는지를 확인함으로써, 상기 미지의 항체가 상기 기지의 항-CD3 항체와 동일한 에피토프를 가지는지 여부를 과도한 실험 없이도 결정할 수 있다는 것을 당업자는 잘 알고 있다. CD3 항원 폴리펩티드는, 예를 들어, 다른 서브유닛 폴리펩티드(예를 들어, 감마, 델타, 엡실론, 제타 또는 에타 쇄)와 결합된 CD3 엡실론 폴리펩티드이다. 시험 항체가, 본 발명의 항체에 의한 결합이 감소되는 것으로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 항체와 경쟁한다면, 그 두 항체는 동일하거나 밀접하게 연관된 에피토프에 결합하는 것이다. 어떠한 항체가 본 발명의 항체의 특이성을 가졌는지를 결정하는 또 다른 방법은, 본 발명의 항체를 통상적으로 그에 반응성인 CD3 항원 폴리펩티드 또는 T-세포 표면 항원 폴리펩티드와 프리인큐베이팅한 다음, 시험 항체를 가하여 시험 항체가 CD3 또는 T-세포 표면 항원 폴리펩티드에 결합하는 능력이 억제되는지를 결정하는 것이다. 시험 항체의 결합 능력이 어떤 정도이건 억제된다면, 시험 항체는 본 발명의 항체와 동일하거나 적어도 기능적으로 등가의 에피토프 특이성을 갖는다고 볼 수 있다.

본 명세서에서, "항체"란 면역글로불린(Ig) 분자, 즉 항원과 특이적으로 결합하는(면역반응하는) 항원 결합 부위를 함유하는 분자, 및 그러한 분자의 면역학적 활성 부분을 의미한다. 그러한 항체는 폴리클로날, 모노클로날, 키메라, 단쇄, F_ab, F_ab' 및 F₍ _ab' ₎₂ 단편 및 F_ab 발현 라이브러리를 포함한다. 바람직하게는, 항체는 완전한 인간 항체이다. "특이적으로 결합한다" 또는 "면역반응한다"라는 표현은 항체가 목적하는 항원의 하나 이상의 항원 결정 부위와 반응하며, 다른 폴리펩티드와는 반응(즉, 결합)하지 않거나 아주 낮은 친화도(K_d > 10^-6)로 결합하는 것을 의미한다.

본 명세서에서 "에피토프"는 면역글로불린, scFv 또는 T-세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 단백질 결정 부위는 어느 것이나 포함한다. 본 명세서에서 "에피토프"는 면역글로불린 또는 T-세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 단백질 결정 부위는 어느 것이나 포함한다. 에피토프 결정 부위는 보통 아미노산이나 당 측쇄 분자들과 같이, 화학적으로 활성인 표면 분자 그룹으로 구성되며, 대개는 특이적 3차원 구조적 특성 및 특이적 하전 특성을 갖는다. 해리 상수가 1 μM 이하, 바람직하게는 100 nM 이하, 가장 바람직하게는 10 nM 이하일 때, 항체가 항원에 특이적으로 결합한다고 한다.

본 명세서에서, "면역학적 결합" 또는 "면역학적 결합 특성"이라 함은 면역글로불린 분자와 그에 특이적인 항원 사이에 일어나는 종류의 비-공유 상호작용을 이른다. 면역학적 결합 상호작용의 강도 또는 친화도는 상호작용의 해리 상수(K_d)로 나타낼 수 있으며, K_d 값이 작을수록 친화도는 크다. 선택된 폴리펩티드의 면역학적 결합 특성은 당업계에 공지된 방법으로 정량화된다. 그러한 방법 중 하나는 항원 결합 부위/항원 결합체의 형성 및 해리 속도를 측정하는 것이며, 이들 속도는 결합체 파트너의 농도, 상호작용의 친화도, 양쪽 방향으로의 속도에 동일하게 영향을 미치는 기하학적 변수에 따라 달라진다. "온(on) 속도 상수(K_on)" 및 "오프(off) 속도 상수(K_off)" 모두 농도 및 결합과 해리의 실제 속도를 계산함으로써 측정할 수 있다[참조: Nature 361: 186-87(1993)]. K_off/K_on 비율은 친화도와 관련이 없는 모든 변수를 제거할 수 있으며, 해리 상수(K_d)와 같다[일반적 사항에 대하여: Davis et al.(1990) Annual Rev Biochem 59:493-473]. 평형 결합 상수(K_d)가 1 μM 이하, 바람직하게는 100 nM 이하, 보다 바람직하게는 10 nM 이하, 가장 바람직하게는 100 pM 이하 내지 약 1 pM 일 때, 본 발명의 항체가 CD3 에피토프에 특이적으로 결합한다고 한다.

본 발명의 항체를 이펙터 기능과 관련하여 면역-관련된 질환을 치료함에 있어서 항체의 효과를 증진시키도록 변형시키는 것이 바람직하다. 예를 들어, 시스테인 잔기를 Fc 영역에 도입시켜, 이 영역에서 연쇄간 디설파이드 결합을 형성시킬 수 있다. 이와 같이 생성된 호모이합체성 항체는 개선된 내부화 능력을 가지고(가지거나) 보체-매개 세포 사멸 또는 항체-의존적 세포성 세포 독성(ADCC)을 증가시킬 수 있다[참조: Caron et al., J. Exp Med., 176: 1191-1195(1992) and Shopes, J. Immunol., 148:2918-2922(1992)]. 다른 방법으로는 항체가 이중 Fc영역을 갖게 하여 보체 분해 및 ADCC 능력을 증진시키도록 조작할 수 있다[참조: Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design, 3:219-230(1989)].

항체는 단백질 A 또는 단백질 G를 사용하는 친화도 크로마토그래피와 같은 공지된 기술로 정제하는데, 이 방법은 주로 면역 혈청의 IgG 분획을 제공한다. 후속적으로 또는 다른 방법으로, 찾고 있는 면역글로불린의 표적인 특이적 항원 또는 그의 에피토프를 칼럼 상에 고정화시키고 면역 친화도 크로마토그래피에 의해 면역 특이적 항체를 정제할 수 있다. 면역글로불린의 정제 방법은 문헌들에 논의되어 있다[참조: D. Wilkinson, The Scientist, published by The Scientist, Inc., Philadelphia, PA, Vol. 14, No. 8(April 17, 2000), pp. 25-28].

치료 방법

염증은 조직 또는 CD3 발현 세포를 CD3 조절제, 예를 들어, 항-CD3 항체에 노출, 예컨대, 접촉시킴으로써 억제될 수 있다. CD3 발현 세포는, 예를 들어, T-세포와 같은 림프구이다. T-세포는 T 세포독성 세포, T 헬퍼 세포(예를 들어, Th1 및 Th2), 및 천연 킬러 T-세포를 포함한다. 치료될 조직은 내장 조직과 같은 위장관계 조직; 정맥, 동맥 및 모세 혈관과 같은 심장 조직; 폐 조직; 피부 조직; 홍채, 모양체 또는 맥락막과 같은 안 조직; 또는 간 조직을 포함한다.

염증의 억제는 CD3 조절제와 접촉하지 않은 조직에 비해 처리된 조직에서 나타나는 붉어짐, 통증 및 부풀어 오르는 현상의 감소에 의해 특징지워 진다. 포도막염과 관련된 다른 현상으로는, 염증의 억제는 증가된 시력, 눈의 초자체(눈의 뒤쪽 부분) 및 전방에서의 감소된 세포 및 혼탁도(피브린, 변성 단백질)를 특징으로 한다. 조직 또는 세포는 CD3 조절제와 직접 접촉된다. CD3 조절제는 또한 전신적으로 투여되기도 한다. CD3 조절제는 염증전 사이토카인 생산을 감소(또는 억제)하는 데 충분한 양으로 투여된다. 염증전 사이토카인은 염증 반응을 유도하는 사이토카인이다. 염증전 사이토카인은, 예를 들어, 인터루킨(IL)-1, 종양 괴사 인자(TNF), IL-17, IL-8, 매크로파지 염증 단백질-1 알파(MIP-1 α)를 포함한다. 다른 방식으로, CD3 조절제는 항-염증성 사이토카인 생산을 증가(또는 촉진)시키는 데 충분한 양으로 투여된다. 항-염증성 사이토카인은 염증 반응을 감소시키는 사이토카인이다. 보다 구체적으로, 항-염증성 사이토카인은 염증전 사이토카인의 반응을 조절하여 면역 반응을 조절한다. 항-염증성 사이토카인은, 예를 들어, IL-1 수용체 길항제, TGFβ, IL-4, IL-6, IL-10, IL-11 및 IL-13을 포함한다. 사이토카인은 혈청, 혈장, 조직 등에서 검출된다. 사이토카인 생산은 당업계에 공지된 방법으로 측정된다. 예를 들어, 염증전 사이토카인 또는 항-염증성 사이토카인에 특이적인 면역 검정법을 사용하여 사이토카인 생산을 측정할 수 있다.

염증 반응은 조직 손상, 국소적인 붉어짐, 이환된 면적의 부풀어오름, 눈의 초자체 및 전방에서의 세포 및 혼탁을 관찰하여 형태학적으로 평가한다. 다른 방법으로는, 조직, 혈청 또는 혈장 중의 반응성 단백질 또는 IL-1을 측정하여 염증 반응을 평가한다. 백혈구가 기준 수치로 돌아가면 염증이 감소되었음을 나타내는 것이다.

다른 방법으로는, 조직 또는 CD3 발현 세포를, 예컨대, 림프구와 같은 세포의 표면 상의 CD3-T 세포 수용체 결합체 또는 CD3 복합체를 재분포 및(또는) 제거하는 양으로 CD3 조절제에 노출시킴으로써 감소된다. 예를 들어, CD3 발현 세포를 CD3 발현 세포-세포 접촉을 조절, 즉 감소시키는 양의 CD3 조절제에 노출시킨다. 세포상 TcR의 세포 표면 발현 또는 활성 수준의 감소는 세포 표면 상의 TcR의 양 또는 기능이 감소되었음을 의미한다. CD3의 세포 표면 발현 또는 활성 수준의 조절은 세포 표면 상의 CD3의 양 또는 CD3의 기능이 변화, 예를 들어, 감소되었다는 것을 의미한다. 세포의 세포막에서 발현되는 CD3 또는 TcR의 양은, 예를 들어, 세포가 CD3 조절제와 접촉할 때 일어나는 CD3 또는 TcR의 내부화에 의해 감소된다. 다른 방식으로, 세포가 CD3 조절제와 접촉할 때CD3가 마스킹된다. 세포 표면 상의 CD3-T 세포 수용체 결합체의 재분포 및(또는) 제거는 면역학적 억제 또는 면역 내성을 가져온다. 면역학적 억제는 모든 항원에 대한 일반적인 면역 반응을 작동하는 데 실패함으로써 자가면역 질환의 하나 이상의 증상을 완화시키거나 염증 반응을 감소시킨다. 면역학적 억제는 CD3 조절제로의 처리가 중단되면 회복될 수 있다. 따라서, 면역학적 억제는 급성 염증성 질환의 증상을 치료 또는 완화시키는 데 특히 유용하다. 이와는 대조적으로, 면역 내성은 특정 항원에 대한 면역 반응을 작동시키는 데 실패함으로써 자가면역 질환의 하나 이상의 증상을 완화시키거나 염증 반응을 감소시키는데, 이는 처치가 중단된 후에도 장기간 유지된다. 면역 내성은 처치가 중단된 후 적어도 1주, 1개월, 3개월, 6개월, 1년, 2년, 5년 또는 그 이상 년 수 동안 유지된다. 따라서, 면역 내성은 만성 염증성 질환의 증상을 치료 또는 완화시키는 데 특히 유용하다. 장기 면역학적 내성은 사이토카인과 같은 가용성 메카니즘을 통하거나, 비제한적으로 그랜자임 A, 그랜자임 B 및(또는) 페르포린을 포함하는 직접적인 세포-세포 접촉을 통하여 달성될 수 있다.

동맥, 즉 동맥벽 상의 죽상동맥경화 플라크는 개체에 CD3 조절제를 투여함으로써 감소 또는 예방할 수 있다. 플라크는 콜레스테롤, 기타 지방질, 칼슘 및 동맥 내벽면에 축적된 혈액 성분의 조합이다. 죽상동맥경화 플라크의 감소는 동맥 혈관 내경의 협소화의 감소, 즉 혈관 내경의 확장으로 정의된다. 내경은 혈관 조영법이나 도플러(Doppler) 속도 파형 분석법과 같은 공지된 방법으로 측정한다.

상기 치료 방법은 각종 염증성 질환 또는 자가면역 질환의 증상을 완화시키는 데 유용하다. 염증성 질환은 급성 또는 만성일 수 있다. 염증성 질환은 죽상동맥경화증, 졸중과 같은 심장혈관계 염증; 위장관계 염증; 간 염증성 질환; 천식, 환풍기 유도 폐 손상과 같은 폐 염증; 신장 염증; 포도막염과 같은 안 염증; 췌장 염증; 성뇨기관 염증; 다발성 경화증, 알츠하이머 병과 같은 신경염증성 질환; 알러지성 비염, 부비강염, 또한 담마진, 건피증, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 건선과 같은 피부 알러지 및 질환, 및 음식물 알러지, 약물 알러지, 곤충 알러지, 비만세포증을 포함하는 알러지; 관절염, 골관절염, 류마티스성 관절염, 척추관절병증과 같은 관골 염증; 세균 또는 바이러스 감염증과 같은 감염증; 치주염, 치은염, 구내염과 같은 구강 염증 질환; 이인자형 이식 거부, 이종 이식 거부, 모태 내성과 같은 이식 후 증상을 포함한다.

자가면역 질환은, 예를 들어, 후천성 면역 결핍증(AIDS, 자가면역 성질을 갖는 바이러스성 질환), 원형 탈모증, 강직성 척추염, 항-인지질 증상, 자가면역 애디슨(Addison's) 병, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이 질병(AIED), 자가면역 림프구증식증(ALPS), 자가면역 혈소판감소성 자반병(ATP), 베체트(Behcet's) 병, 심근증, 복강 스프루-포진상피부염, 만성 피로 면역 이상 증상(CFIDS), 만성 염증성 탈수초성 다발신경증(CIPD), 반흔성 천포창, 한랭 응집소 질환, 릉(crest) 증상, 크론(Crohn's) 병, 데고스(Degos') 병, 유년성 피부근염, 원판상 루프스, 필수 혼합 크리오글로불린혈증, 섬유근통-섬유근염, 그레이브스(Graves') 병, 줄리앙-바레(Guillain-Barre) 증상, 하시모토(Hashimoto's) 갑상선염, 특발성 폐 섬유증, 특발성 혈소판감소성 자반병(ITP), IgA 신장병증, 인슐린 의존성 당뇨병, 유년성 만성 관절염(스틸(Still's) 병), 유년성 류마티스성 관절염, 메니에르(Meniere's) 병, 혼합 결합조직 병증, 다발성 경화증, 중증성 근무력증, 악성 빈혈, 결절성 다발동맥염, 다발연골염, 다분비선 증상, 류마티스성 다발성 근통, 다발근염 및 피부근염, 일차 무감마글로불린혈증, 일차 담낭 경변, 건선, 건선 관절염, 레이노드(Raynaud's) 현상, 라이터(Reiter's) 증상, 류마티스 열, 류마티스 관절염, 유육종증, 공피증(진행성 전신성 경화증(PSS), 전신성 경화증(SS)으로도 알려짐), 쇼그렌(Sjogren's) 증상, 굳은 사람(stiff-man) 증상, 전신성 홍반성 루프스, 다까야스(Takayasu) 동맥염, 일시적 동맥염/거대 세포 동맥염, 궤양성 대장염, 포도막염, 백반증 및 베그너(Wegner's) 육아종증을 포함한다.

본 명세서에 기재된 방법은 본 명세서에 기재된 것과 같은 염증성 질환 또는 자가면역 질환의 하나 이상의 증상의 정도를 감소하던지 완화시킨다. 치료 효율은 특정 염증성 질환을 진단 또는 치료하는 공지된 방법과 관련해서 측정한다. 염증성 질환 또는 자가면역 질환의 하나 이상의 증상을 완화시킨다는 것은 그 화합물이 임상적 이점을 부여한다는 것이다. 염증성 질환 또는 자가면역 질환은 전형적으로 내과 의사 또는 수의사가 표준 방법을 이용하여 진단 및(또는) 모니터링한다.

포도막염

포도막염은 포도막의 염증으로 정의된다. 포도막은 세 가지 구조, 즉, 홍채, 모양체 및 맥락막으로 구성된다. 홍채는 동공을 싸고 있는 색깔 있는 구조로서, 눈의 앞쪽에 보인다. 모양체는 근육을 함유하는 구조로서, 수정체의 촛점을 맞추며 홍채 뒤에 위치한다. 맥락막은 눈의 뒷면을 싸고 있는 혈관들을 함유하는 층으로서, 망막과 공막 사이에 위치한다. 포도막염의 증후는 감소된 시력, 눈의 초자체 및 전방에서 세포 및 혼탁(피브린, 변성 단백질), 망막 혈관에서의 혈관염을 포함한다. 홍채는 수정체 캡슐에 들러붙거나(후유착), 또는 덜 통상적인 경우로는, 각막 주변에 들러붙을 수 있다(전유착). 또한, 홍채 지질 내의 결절성 육아종이 뚜렷해질 수 있다. 염증이 있는 눈의 안내압은 초기에는 모양체의 분비 저하로 감소될 수 있다. 그러나, 반응이 계속됨에 따라 염증 부산물이 안주에 축적될 수 있다. 이와 같은 찌꺼기가 상당히 누적되고 또한 모양체가 정상적인 분비를 개시하면, 안압은 급격하게 상승하여 이차 포도막 녹내장을 유발할 수 있다.

포도막염은 내과 의사 또는 수의사에 의한 안구 검사에 의해 진단된다.

혈관염

혈관염은 혈관의 염증이다. 염증은 조직이 조직으로 들어가는 혈액 세포에 의해 손상받은 상태이다. 혈관 내를 순환하면서 감염에 대항하여 주된 방어 수단으로 작용하는 것은 주로 백혈구 세포이다. 일반적으로, 백혈구 세포는 세균 및 바이러스를 파괴한다. 그러나, 백혈구 세포는 조직에 침투하는 경우, 정상 조직에 손상을 줄 수도 있다. 혈관염은 매우 작은 혈관(모세 혈관), 중간 크기의 혈관(세동맥 및 세정맥), 및 큰 혈관(동맥 및 정맥)에 일어날 수 있다.

혈관염은 관련된 조직의 종류 및 조직 손상의 심각도에 따라 아주 다양한 증상을 나타낼 수 있다. 어떤 환자는 아프지 않고 단지 가끔 피부 상에 반점이 나타난다. 다른 환자는 전신적 증상 및 주된 기관의 손상으로 매우 아픔을 느낀다. 증상은, 예를 들어, 발열, 일반적으로 기분이 상쾌하지 못함(불쾌감 또는 권태), 근육 및 관절 통증, 식욕 부진, 체중 감소, 피로, 점상 출혈, 자반, 궤양으로서의 특히 발목 주변의 피부 괴사 흔적, 관절의 쑤심, 통증이 있는 진성 관절염, 관절의 팽창과 열증, 두통, 행동 장애, 혼돈, 발작, 졸중, 혼몽 및 울림 등을 포함한다. 혈관염의 진단은 개인의 병력, 현재 증상, 완전한 신체 검사 및 특화된 검진의 결과에 기초한다. 혈관염이 존재할 때 자주 일어나는 혈액 이상은 침강 속도의 상승, 빈혈, 높은 백혈구 수치 및 높은 혈소판 수치이다. 혈액 검사는 또한 순환계에서 혈관염을 일으키는 면역 결합체 또는 항체를 찾아내고, 보체 수준이 비정상적이지 않은지를 측정하는 데 사용될 수 있다.

죽상동맥경화증

죽상동맥경화증은 동맥의 내벽면에 지방질, 콜레스테롤, 세포 폐기물 및 칼슘의 침적물의 누적(즉, 플라크)을 일으키며, 상당한 염증 성질을 갖는다. 궁극적으로, 지방질 조직은 동맥 벽을 잠식하여 탄성(신장성)을 감소시키고, 혈액의 흐름을 방해하게 된다. 플라크는 파괴되어 그 잔해가 동맥내 혈류를 따라 이동하게 되는데, 이것이 심장 마비나 졸중의 일반적인 원인이 된다. 플라크 침적물 주변에 응혈이 형성될 수 있으며, 이는 혈액의 흐름을 더욱 방해하고, 파괴되어 심장, 폐 또는 뇌로 가는 경우에는 더욱 위험해진다.

죽상동맥경화증은 종종 혈관내 혈류가 심하게 방해를 받게될 때까지는 증상을 보이지 않는다. 죽상동맥경화증의 전형적인 증상은 관상 동맥이 관련된 경우에는 가슴 통증, 다리 동맥이 관련된 경우에는 다리 통증을 포함한다. 때때로 증상은 운동 시에만 나타나나, 어떤 환자들에서는 휴식 시에도 나타난다.

위험 인자는 흡연, 당뇨병, 비만, 높은 혈중 콜레스테롤 농도, 지방분이 높은 식사, 개인 또는 가족의 심장 병력을 포함한다. 뇌혈관계 질환, 말초 혈관 질환, 고혈압 및 투석을 포함하는 신장병도 또한 죽상동맥경화증과 관련될 수 있는 질병이다.

치료를 위한 투여

본 발명은 인간이나 말과 같은 개체에 CD3 조절제(이하, "치료용 화합물"이라고 함)를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.

치료용 화합물의 유효량은 바람직하게는 약 0.1 mg/kg 내지 약 150 mg/kg이다. 당업자에 의해 인식되고 있는 바와 같이, 유효량은 투여 경로, 부형제 사용, 특정 염증성 질환 증상의 치료, 예방 또는 완화를 위해 다른 소염제 또는 치료제를 사용하는 것을 포함하는 다른 치료법과의 병행 여부에 따라서 달라진다. 치료 계획은 표준 방법을 사용하여 염증성 질환 또는 자가면역 질환이 있는(또는 발병 위험에 처해 있는) 사람 환자 또는 말 등의 포유 동물을 찾아내서 수행한다.

약제학적 화합물은 그러한 개체에 당업계에 공지된 방법으로 투여한다. 바람직하게는, 화합물은 경구, 직장 내, 비내, 국소적으로 투여되거나, 피하, 복강내, 근육내, 및 정맥내 투여 등의 비경구적 경로로 투여된다. 화합물은 예방적으로 투여되거나, 천식 발작, 알러지 반응 등과 같이 염증 반응이 검출된 후에 투여될 수있다. 화합물은 임의로는 염증성 질환의 치료를 위한 칵테일 약물의 한 성분으로서 제제화될 수 있다. 비경구 투여에 적절한 제제는 등장성 염용액, 5% 글루코스 용액, 기타 약제학적으로 허용되는 표준 부형제 중 치료용 화합물의 수용액제를 포함한다. PVP 또는 사이클로덱스트린과 같은 표준 가용화제를 치료용 화합물의 전달을 위한 약제학적 부형제로 사용할 수 있다.

본 명세서에 기재된 치료용 화합물은 종래 방법에 따라 다른 투여 경로를 위한 조성물로 제제화될 수 있다. 예를 들어, 치료용 화합물은 경구 투여를 위해 캡슐 내에 또는 정제로서 제제화될 수 있다. 캡슐은 젤라틴이나 셀룰로스와 같은 약제학적으로 허용되는 표준 물질은 어느 것이라도 함유할 수 있다. 정제는 통상적인 방법으로, 치료용 화합물과 고체 담체 및 윤활제의 혼합물을 압착하여 제제화할 수 있다. 고체 담체의 예로 전분 및 당 벤토나이트가 있다. 화합물은 락토스, 만니톨과 같은 결합제, 통상의 충전제 및 정제화제를 함유하는 경질 외피 정제 또는 캡슐제의 형태로 투여된다. 다른 제제는 연고제, 좌제, 페이스트제, 분무제, 패취, 젤, 재흡수 스폰지 또는 발포제를 포함하며, 이들은 모두 당업계에 공지된 방법으로 제조된다.

치료용 화합물은 화합물을 이환된 조직과 직접 접촉시킬 때 효과적이다. 따라서, 화합물은 국소적으로 투여된다. 예를 들어, 접촉성 피부염을 치료할 때, 화합물을 피부 환부에 도포한다. 치료용 화합물은 전신적으로 투여될 수도 있다. 또 다른 방법으로서, 치료용 화합물을 근접 또는 주변 조직으로 서서히 방출하는 고체 또는 재흡수성 매트릭스를 (내장과 같은 기관 또는 간에 직접적으로 또는 피하에) 이식하여 화합물을 투여하기도 한다.

예를 들어, 위장관계 염증을 치료하기 위하여, 화합물을 전신적으로 투여하거나 위장 조직 내에 직접 국소적으로 투여한다. 전신 투여는 정맥 내, 직장 내 또는 경구 투여로 이루어진다. 국소적 투여는 화합물이 함입된 웨이퍼 또는 재흡수성 스폰지를 위장 조직과 직접 접촉되게 위치시킨다. 화합물 또는 화합물의 혼합물은 웨이퍼로부터 약물이 확산해 나오고 중합체 매트릭스가 잠식되면서 생체 내에서 서서히 방출된다.

간의 염증, 즉 간염은 예를 들어, 간 혈관계에 치료용 화합물을 함유하는 용액을 주입하여 치료한다. 복강 내 주입 또는 세정은 복강 내 염증 일반을 감소시키거나, 외과 수술 후 염증을 예방하는 데 유용하다.

신경계 염증을 치료하기 위해서, 화합물을 정맥 내 또는 척추 내(즉, 뇌척수액 중으로 직접 주입하여)로 투여한다. 국소적 투여를 위해서는 치료용 화합물이 함입된 웨이퍼 또는 재흡수성 스폰지를 중추 신경계 조직과 직접 접촉하여 둔다. 화합물 또는 화합물의 혼합물은 웨이퍼로부터 약물이 확산해 나오고 중합체 매트릭스가 잠식되면서 생체 내에서 서서히 방출된다. 다른 방법으로는, 공지의 방법으로 화합물을 뇌 또는 뇌척수액으로 주입한다. 예를 들어, 주입 포트로 사용하기 위한 카테터가 있는 버어 홀 링(burr hole ring)을 두개골 내로 파고들어간 버어 홀 부분에서 두개골에 잘 정착되도록 위치시킨다. 카테터에 연결된 액체 저장기는 버어 홀 링의 상부 위에 배치된 격벽을 통해 삽입된 바늘 또는 탐침에 연결되어 있다. 카테터 어셈블리(예를 들어, 미합중국 특허 제6,954,687호에 기재된 어셈블리)는 뇌 위의, 또는 그와 가깝거나 그 안의 선택된 부위로부터 또는 그러한 부위로의 유체의 전달을 위한 적절한 경로를 제공하여 약물을 일정 기간에 걸쳐 투여할 수 있게 한다.

심장 염증을 치료하기 위하여 치료용 화합물을 심장 조직에 전달하는 것은, 예를 들어, 흉벽을 통하여 관상혈관 내에 직접 주사하거나, 심근과 같은 심장 조직 내로 직접 주사하기 위하여 형광 조영 하에 경피 카테터에 기초한 표준 방법을 사용하거나, 체내 관강에 삽입된 스텐트 또는 카테터로부터 화합물을 주입하여 넣는 방법에 의하여 이루어진다. 화합물을 투여하기 위하여 각종 관상 카테터 또는 주입 카테터가 사용될 수 있다. 다른 방법으로는, 화합물을 관상 혈관에 위치한 스텐트 상에 코팅하거나 그에 함입시킨다.

폐 염증은 치료용 화합물을 흡입 투여하여 치료한다. 화합물은 이산화탄소 가스와 같은 적절한 추진제를 함유하는 압력 용기 또는 디스펜서 또는 네뷸라이저로부터 에어로졸 스프레이 형태로 전달된다.

안 염증은, 예를 들어, 치료용 화합물을 눈에 국소적으로 투여하여 치료한다. 화합물은 젤, 액제 또는 연고제의 형태로 전달된다. 연고제, 젤 또는 점적액제는 어플리케이터 또는 점안기와 같은 공지된 안과용 약물 전달계에 의해 전달될수 있다. 다른 방법으로는, 화합물은 눈의 결막 아래 위치시킨 중합체 이식물을 통해 전달된다. 임의로는, 화합물이 전신적으로 전달된다.

혈관염은 이환된 부위에 따라 특이적인 경로로 치료된다. 일반적으로, 혈관염은 CD3 조절제를 정맥 내 투여하여 전신적으로 치료한다.

CD3 조절제는 소염제 또는 면역억제제와 같은 1종 이상의 추가의 치료용 화합물과 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, CD3 조절제는 자가면역 질환 및(또는) 염증성 질환의 치료에 공지된 각종 치료제 중 어느 것이나와 함께 투여된다. 본 발명의 방법에 따라 함께 투여될 수 있는 공지된 자가면역 질환 및(또는) 염증성 질환 치료제의 적절한 예는 메토트렉세이트, 사이클로스포린 A(사이클로스포린 마이크로에멀션 및 타크로리무스(tacrolimus) 포함), 코르티코스테로이드, 스타틴, 인터페론 베타, 비스테로이드계 소염제(NSAID), 질병-조정 항-류마티스제(DMARD)를 포함하나, 이에 국한되는 것은 아니다. 추가의 치료제는 CD3 조절제 투여 전에, 투여와 동시에 또는 투여 후에 투여된다.

병용 치료의 이로운 효과로서 치료제의 병용 투여에 따르는 약물동력학 또는 약물동태학적 동시 작용을 들 수 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 상기한 치료제들의 병용 투여는 일반적으로 일정한 기간(선택된 조합에 따라 대개 분, 시간, 일 또는 주 단위)에 걸쳐 실시된다. "병용 치료"는, 일반적으로 그러한 것은 아니지만, 단일 약물 치료 계획의 일환으로 상기 치료제들 중 2종 이상의 약물을 투여한 것이 우연히 또는 자의적으로 본 발명에 따른 병용 치료에 이르게 된 경우를 포함하는 것으로 의도된다. "병용 치료"는 상기 치료제들을 연속적으로, 즉, 각 치료제를 다른 시간에 투여하는 방식; 및 상기 치료제들, 또는 상기 치료제 중 2종 이상의 치료제를 실질적으로 동시에 투여하는 방식을 포함하는 것으로 의도된다. 실질적 동시 투여는 개체에, 예를 들어, 각 치료제를 정해진 비율로 함유하는 하나의 캡슐을 투여하거나, 각 치료제를 함유하는 캡슐을 여러 개 모아서 투여하는 것으로 달성될 수 있다.

치료제들은 동일한 경로 또는 상이한 경로로 투여될 수 있다. 예를 들어, 선택된 병용 치료의 제1 치료제를 정맥 주사하고 다른 치료제를 경구 투여할 수 있다. 또 다른 방법으로서, 모든 치료제를 경구 투여하거나 또는 모든 치료제를 정맥 주사하여 투여할 수 있다. 치료제를 투여하는 순서는 크게 중요하지 않다. "병용 치료"는 또한 상기한 바와 같이 병용되는 치료제를 다시 다른 생물학적 활성 성분 및 비-약물 요법(예를 들어, 외과적 수술 또는 방사선 요법)과 병행하는 것을 포함하는 것으로 의도된다. 비-약물 요법을 추가로 포함하는 병용 치료의 경우에, 비-약물 요법은 치료제 투여와 비-약물 요법을 병행하는 데 따르는 동시 작용의 유익한 효과가 달성되는 한, 어느 적절한 시기에 행하여져도 무방하다. 적절한 경우에는 치료제를 투입하고 나서 일시적으로, 예를 들어, 수 일 또는 수 주간 비-약물 요법을 실시하지 않아도 유익한 효과는 여전히 달성된다.

환자가 항-CD3 항체의 단독 또는 병용 투여의 효과를 보고 있는지를 평가하기 위해, 환자의 증상 및(또는) 면역 반응을 정량적으로 측정하고, 항체로 치료하기 전과 후의 이러한 자료를 서로 비교할 수 있을 것이다. 환자의 증상은 항-CD3 항체로 치료하기 전과 후에 환자에 있어서 특정 증상 또는 일련의 증상을 측정하여 알아볼 수 있을 것이다. 예를 들어, 당업계에 공지된 표준 측정 기술로 발열, 관절 통증, 근육 약화 증상 등을 측정하고 모니터링할 수 있을 것이다. 치료가 성공적인 경우, 환자의 상태는 개선되어 있을 것이다. 즉, 측정치는 떨어져 있을 것이고, 호전 상태를 유지하는 시간은 증가되었을 것이다.

예를 들어, 포도막염의 치료에는 항-CD3 항체를 코르티코스테로이드, 메토트렉세이트, 사이클로스포린 A, 사이클로포스파미드 및(또는) 스타틴 등과 함께 투여할 수 있다. 마찬가지로, 크론 병이나 건선이 있는 환자는 본 발명의 항-CD3 항체와 레미카이드(인플릭시맙;Infliximab) 및(또는) 휴미라(아달리무맙;Adalimumab)를 병용하여 치료할 수 있다.

류마티스성 관절염 치료를 위해, 항-CD3 항체를 코르티코스테로이드, 메토트렉세이트, 사이클로스포린 A, 스타틴, 레미카이드(인플릭시맙), 엔브렐(에타너셉트; Etanercept) 및(또는) 휴미라(아달리무맙)와 함께 투여할 수 있다.

다발성 경화증이 있는 환자는 항-CD3 항체와, 예를 들어, 글라티라머 아세테이트(코팍손; Copaxone), 인터페론 베타-1a(아보넥스; Avonex), 인터페론 베타-1a(레비프; Rebif), 인터페론 베타-1b(베타세론; Betaseron 또는 베타페론; Betaferon), 미톡산트론(노반트론; Novantrone), 덱사메타손(데카드론; Decadron), 메틸프레드니솔론(데포-메드롤; Depo-Medrol), 및(또는) 프레드니손(델타손; Deltasone) 및(또는) 스타틴을 함께 투여받는다.

제I형 당뇨병 또는 성인에 있어서 잠재성 자가면역 당뇨병(LADA)이 있는 환자는 제2 약제로서, 예를 들어, GLP-1 또는 베타 세포 휴지 화합물(칼륨 채널 개방제와 같이, 인슐린 방출을 감소시키거나 억제하는 화합물)을 함께 투여받는다.

또한, CD3 조절제는 환자에 예방적으로(즉, 자가면역 질환 및(또는) 염증성 질환의 발병 이전에) 또는 치료적으로(즉, 자가면역 질환 및(또는) 염증성 질환의 진행 도중에) 투여된다.

본 발명의 방법에서, 조절제는 치료 유효량으로 투여된다. CD3 조절제 "치료 유효량"이란 자가면역 질환 및(또는) 염증성 질환을 치료하거나 그에 연관된 증상의 완화와 같은 치료 목적을 달성하는 데 필요한 양이다.

본 명세서에 인용된 모든 간행물 및 특허 문헌은, 각 간행물이나 문헌에 대하여 그 내용이 본 명세서에 포함되는 것으로 구체적으로 또한 개별적으로 언급된 경우와 마찬가지로, 그 내용이 본 명세서에 모두 포함된다. 간행물과 특허 문헌을 인용한 것이 그들 중 어느 것이라도 선행 기술에 속한다는 것을 시인하는 것은 아닐 뿐더러, 그 내용 및 일자와 관련하여서도 아무 것도 시인하는 것이 아니다. 본 발명을 명세서를 통해 서면의 형식으로 기재하였지만, 본 발명이 각종 실시 태양으로 실시될 수 있다는 점과, 상기 상세한 설명 및 하기 실시예는 단지 본 발명을 설명하기 위해 제시되었을 뿐 첨부된 청구 범위를 한정하려는 목적으로 제시된 것이 아님을 당업자는 잘 인식하고 있을 것이다.

실시예 1: 포도막염 치료에 있어서의 항- CD3 항체

본 발명의 항-CD3 항체는 CD3를 인식하는 각종 모노클로날 항체(mAb)는 어느 것이나 포함하며, 예를 들어, OKT3, SP34, UCHTI 또는 64.1이 있다[참조: June et al., J. Immunol. 136:3945-3952(1986); Yang et al., J. Immunol. 137:1097-1100(1986); and Hayward et al., Immunol. 64:87-92(1988)].

G4.18 항체로 불리우는 정제된 마우스 항-래트 CD3 모노클로날 항체(BD Pharmigen 제조)를, 예를 들어, 문헌[Wildner G., Diedrichs-Mohring M., Thurau SR., Eur. J. Immunol., 32(1):299-306(2002); and Wildner G., Diedrichs-Mohring M., Int. Immunol. 15(8);927-35(2003)]에 기재되어 있는 바와 같이, 유도 가능한 포도막염 래트 모델에서 시험하였다. G4.18 항체는 흉선 세포, 말초 T-림프구 및 수지상 상피 T-세포 상에서 발견되는 T-세포 수용체-결합된 CD3 세포 표면 항원과 반응한다[참조: Nicolls, M.R. et al., Transplantation 55:459-468(1993); Nelson, D.J. et al., J. Exp. Med. 179:203-212(1994); Morris D.L., and W.J. Komocsar, J. Pharmacol. Toxicol. Methods 37:37-46(1997)]

항-CD3 항체가 포도막염에 미치는 효과를 평가하기 위하여, 복강 내(i.p.) T 세포 전달 과정을 이용하여 래트에 실험용 자가면역 포도막염(EAU)을 유도하였다. 특히, 제 0 일에 암컷 루이스(Lewis) 래트(각각 체중 약 140 g, 군 당 3 마리의 래트)에 망막 자가항원 S-항원(SAg)으로부터 유도된 PDSAg-2/3으로 트랜스펙션된 L37 세포 2.4 × 10⁶개를 복강 내 주사하였다.

실험용 자가면역 포도막염을 유도하기 위해 트랜스제닉 T-세포를 전달하기 전 30분 및 전달 후 제 1, 2 및 3일 되는 날에, 래트에 인산염 완충 염용액(PBS) 300 ㎕ (제 1 군) 및 PBS 300 ㎕중 G4.18 항체(제 2 군)를 투여하였다. 각 군의 래트가 임상적으로 포도막염의 증후를 표시하는지를 매일 모니터링하였다. 본 실험에서 사용된 임상적 등급화 기준은 문헌[de Smet et al., J. Autoimmune., vol. 6:587(1993)]에 기재된 바와 같이, 안구 검사를 통해 등급화한 눈의 전방에서의 염증만을 고려한 것이다. 본 실험에서 사용한 등급화 기준을 하기 표 A에 나타내었다:

임상적 등급화 기준
등급	설명
0.5	확장된 홍채 혈관, 홍채 테두리에서 부분적 염증성 침윤, 뿌연 안구 전방
1.0	홍채 테두리에서 완전한 원형 침윤
2.0	동공 부분이 세포와 피브린으로 완전히 채워짐
3.0	전방축농*의 형성
4.0	세포, 피브린 및 혈액으로 완전히 채워진 안구 전방
*전방축농 = 안구 전방의 바닥에 백혈구의 침적, 즉, 하얀 호수

제12일에 실험을 종결하고, 각 래트에 대하여 망막 파괴에 대한 조직학적 검사를 실시하였다. 본 명세서에 기재된 조직학적 등급화 기준은, 예를 들어, 문헌[de Smet et al., J. Autoimmune., vol. 6:587(1993)]에 기재된 바와 같이, 처치 후 제9일의 냉동 부검물에 대해 평가한, 망막의 파괴만을 고려한 것이다. 본 실험에서 사용한 조직학적 등급화 기준을 하기 표 B에 나타내었다:

조직학적 등급화 기준
등급	설명
0.0	염증성 질환의 증거 없음
0.5	- 아주 미미한 정도의 염증, 망막의 구조는 전체적으로 손상되지 않음 - 조직 파괴의 증거없이 또는 망막의 4분의 1 미만에서의 외부 광수용체 손상이 있는 망막의 염증성 세포 침윤 - 맥락막, 모양체 및 망막에서의 국소적 비-육아종성 단핵구 침윤
1.0	- 망막의 4분의 1 이상에서의 광수용체 외부 절편 손상 - 광수용체가 현저하게 떨어져나가면서 파괴의 흔적 보임 - 망막 말초혈관 침윤, 초자체에서 단핵구 침윤
2.0	- 병변 부위는 외부 핵층까지 또한 망막의 4분의 1 이상으로 확장됨 - 작은 삼출성 망막 이탈 - 초자체에서 약간 내지 중간 정도 수의 세포 - 포도막 및 망막에서의 육아종 형성 - 심각한 망막 이탈과 광수용체의 손실과 함께 폐쇄성 망막 혈관염
3.0	- 병변 부위는 내부 핵층까지 또한 망막의 4분의 1 이상으로 확장됨 - 망막 구조가 없어지기 시작함, 큰 삼출성 망막 이탈, 초자체에서 중간 내지 다수의 세포 - 달렌-푸흐스(Dalen-Fuchs) 결절의 형성, 망막하 신생 혈관의 생성
4.0	- 망막의 4분의 1 이상에서 망막 두께 전체의 손상 - 망막 구조의 완전한 파괴

본 명세서에 기재된 실험의 제3일에 포도막염의 임상적 신호가 나타나기 시작하였다. 도 1은 PBS를 투여받은 래트(제 1 군) 및 항-CD3 항체를 투여받은 래트(제 2 군)에서 포도막염의 진행에 관한 임상적 및 조직학적 효과(상기 표 A 및 B에 기재된 등급화 기준 사용)를 도시한 그래프이다. 제시된 결과는 총 관찰 시간 동안 군의 모든 안구로부터 얻어진 최대 점수의 평균값이다.

실시예 2: 죽상동맥경화증 치료에 있어서의 항- CD3 항체

죽상동맥경화증의 치료에 있어서의 항-CD3 항체의 효과를 햄스터 항-마우스 CD3 항체를 사용하여 평가하였다. 본 실험은 죽상동맥경화 플라크의 형성에 미치는 항-CD3 요법의 효과, 및 확립된 죽상동맥경화 병변 부위에 미치는 항-CD3 요법의 효과를 평가하도록 설계된 것이다.

마우스 CD3ε(즉, 마우스 CD3 복합체의 엡실론 쇄)에 결합하는 햄스터 145 2C11 모노클로날 항체의 F(ab')₂ 단편을 생산하는 세포주를 사용하여 항-CD3 요법의 효과를 평가하였다. 생체 내 죽상동맥경화증 모델로 10주된 수컷 LDLR-/-C57BL/6 마우스를 사용하였다. 조직학 및 죽상동맥경화 플라크 진행 분석뿐만 아니라 증식 및 사이토카인 분석을 위해, 한 배에서 태어난 마우스에 13주 또는 24 주 동안 고 콜레스테롤 사료(1.25% 콜레스테롤, 0% 콜레이트)를 제공하였다. 항-CD3 F(ab')₂(50 ㎍/마우스/일)를 고 콜레스테롤 사료 공급을 개시하기 1주 전부터 시작하여 연속하여 5일 동안(5 마리의 마우스, 항-CD3 항체가 죽상동맥경화 플라크의 형성에 미치는 효과를 평가하기 위해), 또는 고 콜레스테롤 사료 공급을 개시한 지 13주 후부터 연속하여 5일 동안(9 마리의 마우스, 항-CD3 항체가 확립된 죽상동맥경화 병변 부위에 미치는 효과를 평가하기 위해) 정맥내 투여하였다. 대조 마우스(13주 동안 고 콜레스테롤 사료를 공급한 마우스 5 마리; 24주 동안 고 콜레스테롤 사료를 공급한 마우스 6 마리)에는 동일한 방식으로 PBS를 주사하였다.

흉-복 동맥 및 동맥동 내의 죽상동맥경화 병변 부위를 지질 침적에 대하여 수단 IV 염색에 의해 분석하였다(도 2 및 3). 각 동맥근에 대하여 서로 50 ㎛씩 떨어져 있는 6개의 부위(5 ㎛)로부터의 평균 지질 침적을 계산하였다. 지질 침적의 정량화는 메타모프 6(MetaMorph 6) 소프트웨어(Zeiss 제조)를 사용하여 컴퓨터 영상 분석에 의해 수행되었다. 본 명세서에 제시된 결과는 평균 ± 표준 오차 한계이다. 측정치의 차이는 양측 스튜던트 T-검정(Two-tailed Student's T-test)에서 P가 0.05 미만이면 유의적인 것으로 간주된다.

도 2에서 볼 수 있는 바와 같이, 항-CD3 요법은 마우스에서 죽상동맥경화 플라크 형성을 억제하였다. 도 3은 항-CD3 요법이 또한 확립된 병변 부위에서 플라크 형성의 진행을 감소(즉, 억제)시킨다는 것을 보여준다.

다른 실시 태양

본 발명을 발명의 구체적인 실시 태양과 관련하여 기술하였지만, 상기 기재는 첨부된 특허 청구 범위에 의해 정의되는 본 발명을 설명하기 위한 것이지 그의 범위를 한정하려는 것이 아니다. 다른 관점, 장점 및 변형법이 첨부된 특허 청구의 범위 내에 든다.

Claims

염증성 질환을 앓고 있거나 염증성 질환 발병의 위험이 있는 개체를 확인하는 단계 및 상기 개체에 항-CD3 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환의 증상을 치료 또는 완화하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 항-CD3 항체를 염증성 사이토카인의 발현을 억제하거나 항-염증성 사이토카인의 발현을 증가시키기에 충분한 양으로 투여하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 항-CD3 항체를 면역학적 억제를 유도하기에 충분한 양으로 투여하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 항-CD3 항체를 면역학적 내성을 유도하기에 충분한 양으로 투여하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 항체가 모노클로날 항체인 방법.
제5항에 있어서, 상기 모노클로날 항체가 완전한 인간 모노클로날 항체인 방법.
제1항에 있어서, 상기 염증성 질환이 만성 염증성 질환 또는 급성 염증성 질환인 방법.
제1항에 있어서, 상기 염증성 질환이 자가면역 질환인 방법.
제1항에 있어서, 상기 염증성 질환이 포도막염, 혈관염 또는 죽상동맥경화증인 방법.
제1항에 있어서, 상기 개체가 사람 또는 말인 방법.
제1항에 있어서, 상기 개체에 소염제 또는 면역억제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제11항에 있어서, 상기 소염제 또는 면역억제제가 코르티코스테로이드, 스타틴, 인터페론 베타. 비-스테로이드계 소염제(NSAID), 메토트렉세이트, 사이클로스포린 A 또는 질병-조정 항-류마티스제(DMARD)인 방법.
제12항에 있어서, 상기 사이클로스포린 A가 사이클로스포린 마이크로에멀션 또는 타크로리무스인 방법.
개체에 항-CD3 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 동맥 상의 죽상동맥경화 플라크의 형성을 감소시키는 방법.
제14항에 있어서, 상기 항-CD3 항체를 상기 동맥 조직에서 염증성 사이토카인의 발현을 억제하거나 항-염증성 사이토카인의 발현을 증가시키기에 충분한 양으로 투여하는 것인 방법.
제15항에 있어서, 상기 항체가 모노클로날 항체인 방법.
제16항에 있어서, 상기 모노클로날 항체가 완전한 인간 모노클로날 항체인 방법.
염증이 있는 조직을 항-CD3 항체에 노출시키는 단계를 포함하는, 조직 염증을 억제하는 방법.
제18항에 있어서, 상기 항-CD3 항체를 상기 염증이 있는 조직에서 염증성 사이토카인의 발현을 억제하거나 항-염증성 사이토카인의 발현을 증가시키기에 충분한 양으로 투여하는 것인 방법.
제18항에 있어서, 상기 항체가 모노클로날 항체인 방법.
제20항에 있어서, 상기 모노클로날 항체가 완전한 인간 모노클로날 항체인 방법.
제18항에 있어서, 상기 조직이 혈관 조직 또는 안 조직인 방법.