KR20060132704A - 하이퍼브랜치 다당체의 제조 방법 - Google Patents

하이퍼브랜치 다당체의 제조 방법 Download PDF

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KR20060132704A
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클라우스 솜메르메이에르
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프레제니우스 카비 도이치란트 게엠베하
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Abstract

본 발명은 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 제조 방법에 관련되며, 이 물질은 2000 내지 29000돌턴 사이의 평균 분자량과 10% 초과 20% 미만의 분지도를 갖고, 상기 분지도는 분지점을 이동시키는 언하이드로글루코스의 mol%로 표기된다. 본 발명에 따르면, 제1 가수분해 단계에서 플랜트(plant) 아밀로펙틴 또는 아밀로펙틴-리치 녹말의 분자량이 α-아밀라아제 또는 산 가수분해에 의해 60000돌턴 미만의 분자량으로 감소되며, 첫 번째 가수분해 단계에서 제조된 환원된 생성물의 분자량은 제2 가수분해 단계에서 β-아밀라아제 환원제에 의해 환원된다. 본 발명은 약학적 성분을 가진 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 커플링 생성물의 제조에 관련된다.

Description

하이퍼브랜치 다당체의 제조 방법{METHOD FOR THE PRODUCTION OF HYPERBRANCHED POLYSACCHARIDE FRACTIONS}
본 발명은 하이퍼브랜치 아밀로펙틴(hyperbranched amylopectin)의 제조 방법과 활성 약학적 성분을 가진 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 결합제품(coupling)의 제조 방법과 관련이 된다.
비경구적으로 투여되는 활성 약학적 성분의 부작용은 친수성 폴리머와 결합함으로서 감소될 수 있다고 알려져 왔다. 특히 이들 활성성분의 분자량을 증가시켜, 결합제품을 만드는 분자의 크기가 신장의 배제한계보다 큰 경우에 신장의 부작용을 감소시키거나 예방하는 것이 가능하다. 이 결합에서 상기 결합제품을 만드는 분자 크기는 적절히 선택된 폴리머의 분자량에 의해 조절된다.
친수성 폴리머와 활성 약학적 성분의 결합제품의 다른 이점은 치료용 단백질의 항원성이 감소하고, 따라서 거기에 관련된 부작용이 감소하거나 예방된다는 점이다.
또한 약동학적인 반감기를 상당히 연장시킬 수 있고, 따라서 그러한 결합제품을 통한 환자의 혈청에 있는 활성 약학적 성분의 체류시간을 연장시킬 수 있다. 이것은 비경구적 투여에서 치료 간격을 상당히 연장시키는 것을 가능하게 한다.
앞서 언급된 활성 약학적 성분의 결합제품을 위한 적당한 폴리머는 특히 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycols)[herman, S. 등의, 반응 말단기를 가진 폴리(에틸렌글리콜): I. 단백질의 변형, 생체활성 그리고 호환성 폴리머에 대한 잡지, 10. (1995) 145-187] 또는 그 밖의 다당체, 예를 들어 녹말 유도체와 덱스트란(dextrans)을 말한다. 유효성분과 결합하면 적절한 활성이 뒤따르게 된다.
이러한 경우 활성성분은 화학적 방법에 의해서 분자와 결합되는데, 방법은 그 자체로서 알려져 있고 고체상에서 고정 리간드의 기술 또는 단백질 커플링이나 교차결합의 화학으로부터 이미 알려져 있다. 적절한 방법은 G.T.Hermanson 등의, "고정 리간드 친화도 기술", (Academic Press Inc. (1992))과 S.S.Wong의, "단백질 결합과 교차결합의 화학", (CRC Press LLC(1993)) 그리고 C.P.Stowell 등의., "Neoglycoproteins, 합성 글리코단백질의 조제와 적용", (탄수화물 화학과 생화학의 진보, Vol. 37(1980), 225-281)에 설명되어 있다.
이 결합에서 녹말 유도체와 비교한 폴리에틸렌 글리콜의 단점은 체내에서 직접 물질대사를 할 수 없는 점인데, 여기서 녹말 유도체는 내인성 혈청 α-아밀라아제(α-amylase)에 의해 분해된다. 체내에서 녹말 유도체의 분해는 예를 들어 하이드록시에틸기(hydroxyethyl group)를 가진 적절한 대체물로 인해 천천히 지연될 수 있어, 비경구적으로 투여될 수 있는 유효성분 컨쥬게이트의 동역학의 조절을 가능케 한다. [K. Sommermeyer 등의, "Krankenhauspharmazie",( volume 8, no. 8,(1987))].
그렇지만, 하이드록시기를 갖는 녹말 분해의 단점은, 상기 조제 때문에 사슬 을 따라 하이드록시에틸기의 분해가 균일하지 않고, 따라서 카보하이드레이트 사슬 특정한 곳에서 부분적으로 높은 대체도로 인해 내인성 효소로 분해되지 못하는 나머지가 체내에서 분해 도중에 형성된다는 점이다. 이런 부분들은 소위 저장 부분을 형성한다[P.Lawin 등의, "Hydroxyethlstaerke, Eine aktuelle Uebersicht", Georg Thieme Cerlag(1989)].
DE 102 17 994는 활성 약학적 성분과 결합하기 위한 하이퍼브랜치 다당체를 설명한다. 이 발표된 하이퍼브랜치 아밀로펙틴은 내인성 글리코겐(glycogen)의 구조와 유사한 구조를 갖기 때문에, 체내에서 완전히 분해되고 내성을 부여한다. 분자도를 조절함으로써 혈청에서의 바람직한 체류시간이 추가적인 유도체 없이 성취될 수 있는 방식으로 상기 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 분해 반응과정을 조정하는 것이 가능하다.
이러한 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 제조에 관해서, DE 102 17 994는 EP 1 369 432를 참조한다. EP 1 369 432는 녹기 쉬운 하이퍼브랜치 글루코스 폴리머를 발표했는데, 상기 폴리머는 10%보다 크고, 바람직하게 12내지 30%인 α-1,6-글리코시딕 결합의 비율과, 35000내지 200000돌턴 사이인 분자량을 갖는다. EP 1 369 432에 따르면, 이러한 폴리머들은 분지도를 증가시키기 위한 브랜칭 효소를 갖는 녹말의 현탁액이나 녹말 용액을 처리하고, 그 후에 α-아밀라아제(α-amylase), β-아밀라아제(β-amylase), 언하이드로글리코시다아제(anhyd개glycosidase), 그리고 α-트랜스글루코시다아제(α-transglucosidase) 중 선택된 효소를 가수분해함으로서 제조된다. 이러한 목적에 필요한 상기 브랜칭 효소는 유기물 및/또는 미생물로부터 추출되고 글리코겐 브랜칭 효소, 녹말 브랜칭 효소 그리고 이들 효소의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
EP 1 369 432에 설명된 방법의 단점은 복잡하고 비용이 많이 든다는 점이다. 특히 브랜칭 효소의 사용은 각각의 경우에서 유기물 및/또는 미생물로부터 분리할 필요가 있다는 것을 의미하며, 브랜칭 효소는 현재 상업적으로 구매할 수 없다.
따라서 본 발명의 목적은 간단하고 비용 효율적인 하이퍼브랜치 다당체의 제조 방법을 제공하는 것인데, 여기서 하이퍼브랜치 다당체는 활성 약학적 성분을 위한 운반 분자로서 사용될 수 있다.
놀랍게도 청구항 1항에 청구된 방법이 이러한 목적을 성취한다는 사실이 발견되었다. 이 방법은, 베지터블 아밀로펙틴 또는 아밀로펙틴-리치 녹말을 α-아밀라아제 또는 산 가수분해를 이용해 분해하는 60000돌턴 이하의 분자량으로 제1 가수분해 단계와, 제1 단계에서 분해 생성물의 분자량을 β-아밀라아제 분해를 이용해 추가로 분해하는 제2 가수분해 단계를 수반한다.
아밀로펙틴 또는 아밀로펙틴-리치 녹말의 산 가수분해에 의한 60000이하인 무게평균 분자량으로의 분지도에서 눈에 띄는 증가를 얻게 할 수 있다는 사실이 추가로 발견되었다.
본 발명에 상응하는 그러한 하이퍼브랜치 아밀로펙틴은 바람직하게 2000돌턴 이상의 무게평균 분자량과 10%이상의 분지도를 갖는다. 2000돌턴 이상 29000돌턴 이하의 무게평균 분자량과 10%이상 20%이하의 분지도가 특히 선호된다.
이 결합에서 아밀로펙틴 수단은 언하이드로글루코스 유닛 사이에서 α-(1-4) 그리고 α-(1-6)결합을 갖는 매우 일반적인 브랜치 녹말 또는 녹말 생성물을 의미한다. 이러한 경우에서 사슬에서 상기 브랜치는 α-(1-6)결합을 통해 일어난다. 이들 분기점은 자연히 발생한 아밀로펙틴에서 각 15에서 30의 글루코스 요소마다 불규칙적이다. 천연 아밀로펙틴의 분자량은 107 내지 2 ×108돌턴의 범위로 매우 높다. 아밀로펙틴은 또한 특정 한계 내에서 나선형을 형성하는 것으로 간주된다.
분지도는 아밀로펙틴에 대해 정의될 수도 있다. 분지의 측정은 아밀로펙틴의 언하이드로글루코스 유닛의 총수에 대한 분지점[α-(1-6)결합]을 갖는 언하이드로글루코스 수의 비율이다. 이 비율은 mol%로 표기한다. 자연적으로 발생하는 아밀로펙틴은 약 4mol%의 분지도를 갖는다. 하이퍼브랜치 아밀로펙틴은 자연 상에서 발생한 아밀로펙틴 분지도와 비교시 뚜렷이 증가된 분지도를 갖는다. 모든 경우의 이 결합에서 분지도가 평균(분지도의 평균)인 이유는 아밀로펙틴이 다당류의 대체물이기 때문이다.
본 발명의 내용 중, 하이퍼브랜치 아밀로펙틴은 10mol% 이상의 평균 분지도를 갖는 아밀로펙틴을 의미하는 것으로 의도된다.
α-아밀라아제 또는 산 가수분해에 의한 베지터블 아밀로펙틴이나 아밀로펙틴 녹말의 분해는 가수분해 생성물 각각의 가수분해도에 따라 각각의 경우에 유사한 분지도를 갖는 아밀로펙틴을 초래한다. 이 결합에서, 산 가수분해에 의한 분해는 수행하기가 더 용이하고 α-아밀라아제를 사용한 효모 분해보다 저렴하다. 산 가수분해를 통해 공정 중의 HPGPC에 의해 가수분해 과정 동안에 가수분해도를 따르고 가수분해도를 의도적으로 조절하는 것이 추가로 가능하다. 따라서 산 가수분해에 의한 분해는 α-아밀라아제에 의한 분해보다 특히 바람직하다.
제1 가수분해 단계에서 얻은 생성물의 β-아밀라아제 처리는 생성물을 α-1,6-글리코시딕 언하이드로글루코스(α-1,6-glycosidic anhydroglucose) 상에서 선택적으로 분해시킨다. 이 분해에서 환원이 없는 사슬 끝인 바깥쪽에서 말토오스가 제거되는데, α-1,6-글리코시딕 가지는 연결해제 되지 않는다. 이 경우 분해는 글루코스 유닛에 대해 바깥쪽 사슬에서부터 처음 발생하는 분지점 바로 앞까지 일어난다. 이것은 소위 β-젠즈덱스트린( β-genzdextrins)을 초래하고 상기 아밀로펙틴의 1,6-글리코시딕 결합을 풍부하게 하고, 따라서 분지도가 증가된다.
본 발명의 내용 중, 녹말을 포함하는 모든 아밀로펙틴은 개시물질로 사용될 수 있다. 왁시 콘 녹말과 카사바 녹말은 이번 결합에서 특히 더 선호된다.
높은 분지도로 인해, 다당류를 분해하는 α-아밀라아제가 우세하기 때문에 β-젠즈덱스트린은 혈청에서 천천히 분해된다. 따라서 본 발명의 방법으로 얻은 생성물은 활성 약학적 성분과 결합하는데 적합하다.
분지도의 매개변수와 아밀로펙틴의 분자량은 목적으로 했던 영향과 바람직한 약동학의 조정도 허용하며, 특히 바람직한 α-아밀라아제 분해의 달성을 허용한다. 아밀로펙틴의 분지도는 이 결합에서 중요한 기능을 갖는데, 분자량 또한 앞서 언급된 반응과정에 영향을 준다. 게다가 브랜칭 생성물의 분포를 통해 바람직한 방향에서 아밀로펙틴의 분해 반응과정에 영향을 준다.
본 발명의 방법에서 바람직하게 5000돌턴 미만, 바람직하게 1000돌턴 미만의 절대 분자량을 갖는 저분자량의 불순물은, 바람직하게 1000돌턴 미만, 첫 번째 가수분해 단계 및/또는 두 번째 가수분해 단계 이후에 제거된다. 이러한 제거는 바람직하게 한외여과에 의해 생기는데, 이는 5000돌턴 또는 1000돌턴을 차단하는 막을 사용한다. 제거된 불순물은 주로 아밀로펙틴, 녹말, 그리고 하이드로클로릭 산의 저분자량 분해 생성물이다.
본 발명에 따라 분해된 생성물은 바람직하게 동결 건조되어 분리된다.
α-아밀라아제와 β-아밀라아제는 상업적으로 구입이 가능하고, 값이 효율적인 효소이다. 따라서 이러한 분자를 가지고 가수분해를 하면 간단하고 저렴하게 수행할 수 있다. 산 가수분해도 마찬가지로 적용된다. 한외여과와 동결 건조를 이용하는 작업은 간단하지만 저렴하지는 않다. 따라서 본 발명의 생성물은 비용을 절감하고 간단하게 제조될 수 있다.
제2 가수분해 단계의 가수분해 생성물은 바람직하게 활성 약학적 성분과 결합된다. 활성 약학적 성분은 바람직하게 단백질 또는 폴리펩티드(polypeptide)이다.
본 발명에 따라 생성된 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 활성 약학적 성분과의 결합은 알려진 방식대로 일어날 수 있다. 활성 약학적 성분과 다당류의 그러한 결합은 예를 들어 WO 02/08 0979, PCT/EP 02/06 764, WO 03/07 4088, WO 03/07 4087, PCT/EP 03/13 622, DE 102 54 754.9, PCT/EP 04/00 488에 설명되어있다.
활성 약학적 성분은 유리 아미노 기능을 통해 하이퍼브랜치 아밀로펙틴 환원 사슬 말단부의 언하이드로글루코스와 바람직하게 결합된다. 이러한 목적으로, 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 환원 말단부는 특히 바람직하게 활성화된다. 이 결합에서 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 환원 말단부를 알돈산으로 산화시키고, 알돈산기를 알돈산 에스테르기로 활성화시키고, 그리고 알돈산 에스테르기를 통해 하이퍼브랜치 아밀로펙틴과 활성 약학적 성분을 결합하는 것이 선호된다. 또한 카르보닉산 디에스테르를 갖는 언하이드로에서 본 발명에 따라 제조된 생성물을 반응시키는 것이 선호되며, 이는 카르보닉산 디에스테르에 하이퍼브랜치 아밀로펙틴을 주고 유효성분과 하이퍼브랜치 아밀로펙틴을 결합하기 위함이다.
본 발명은 예와 비교예를 통해 아래에서 더 자세히 설명되는데 이러한 예에는 본 발명을 한정하려는 의도는 없다.
측정방법
분자량과 평균 분자량은 종래의 방법으로 측정했다. 이들 방법은 예를 들어 수성 GPC, HPGPC, HPLC, 광산란 등을 포함한다.
분지도는 1H NMR을 사용하여 측정했다.
예1
저점도(thin-boiling) 왁시 콘 녹말 55g을 탈이온수 1000㎖에 넣은 뒤, 그 현탁액을 환류시키면서 비등시켰다. 상기 왁시 콘 녹말은 완전히 용해되었다. 용해시킨 후, 1N 염산으로 pH를 2.0으로 맞추고 혼합물은 1시간 동안 가열했다. 식힌 후, 탈이온수에서 5000돌턴의 공칭 분자량 컷-오프(cut-off)값을 갖는 막을 사용하여 한외여과를 수행하였다. 이렇게 정화한 상기 물질은 동결 건조하여 분리했다. 상기 수득률은 60%였다. 특징은 무게평균 분자량이 42000돌턴(HPGPC로 측정됨)이고 분지도는 7mol%( 1H NMR로 측정됨)로 나타났다.
예2
예1에서 분해된 부분 왁시 메이즈 녹말 10g은 pH 4.2, 0.15molar 아세테이트 완충제 1000㎖에서 용해되었고 10units/㎖ β-아밀라아제(감자로부터 시그마, β-아밀라아제 타입 I-B, Art. No. A7005)가 첨가되었다. 상기 혼합물은 25℃에서 12시간 동안 반응시켰다. 그런 다음 상기 효소는 100℃에서 10분 동안 가열하면서 비활성으로 만들었다. 냉각이후 무게비가 약 2%인 활성 탄소가 상기 반응 혼합물에 첨가되고 여과되었다. 그 후, 1000돌턴의 분자량 컷-오프값을 갖는 막을 사용하여 반응 생성물을 한외여과 함으로서 말토오스와 완충제를 제거한다. 상기 수득률은 60%였다. 특징은 분지도가 14mol%(1H NMR로 측정됨)이고, 무게평균 분자량은 28000돌턴으로 나타났다.
예3
예3은 예1과 유사한 방법으로 수행했는데, 가수분해 시간을 4시간으로 연장시켰다. 이러한 경우에, 15000돌턴 미만의 평균 분자량을 가진 생성물을 얻기 위해서, 상기 가수분해 방법에 되이어 공정 중의 HPGPC가 수행되었다. 한외여과에 의한 정화에서 예1과는 달리 1000돌턴의 분자량 컷-오프값을 사용하는 막을 이용했다. 상기 수득률은 25%였다. 상기 물질의 특징은 무게평균 분자량이 10000돌턴, 분지도는 10.3mol%로 나타났다.
예4
β-젠즈덱스트린은 예2와 유사한 방법으로 제조할 수 있으며, 예3의 가수분해 생성물을 사용했다. 상기 수득률은 60%였다. 상기 물질의 특징은 무게평균 분자량이 7000돌턴, 분지도가 15mol%로 나타났다.
예5
카사바 녹말 토산물 55g을 1000㎖의 탈이온수에서 젤라틴화 하고 환류 시키면서 가열했다. 그런 뒤 1N 염산 11㎖를 첨가해 pH를 1.9로 맞췄다. 30분 후에, 상기 젤은 낮은 점도상태가 되었고 혼합물은 환류 시키면서 추가적으로 7시간 더 가열했다. 식힌 후에, 침전물과 혼탁물은 필터로 걸러내고, 탈이온수에서 1000돌턴의 공칭 분자량 컷-오프값을 사용하는 막으로 한의여과를 했다. 상기 수득률은 24.4%였다. 상기 물질의 특징은 무게평균 분자량이 10000돌턴, 분지도가 9.6mol%로 나타났다.
예6
β-젠즈덱스트린은 예2와 유사한 방법으로 제조되며, 차이점은 예5에서 얻은 가수분해 물질을 사용하는 것이다. 상기 수득률은 55%였다. 상기 물질의 특징은 무게평균 분자량 5000돌턴, 분지도가 16mol%로 나타났다.
예7
예2로부터의 상기 왁시 콘 녹말의 분해 부분은 무게비가 1%인 pH 7.2의 이소 토닉 포스페이트(isotonic phosphate) 완충액에서 용해되었다. 상기 용액은 37.0℃에서 가열되었고, 돼지의 췌장절제술(from Roche; AS, Art. No. 102 814)에서 얻은 0.5 I.U./㎖의 α-아밀라아제가 첨가되었다. 샘플은 1시간과 3시간 후에 취해졌고, 효소는 열에 의해 활성화되지 않으며, 남아있는 고분자량의 분자량은 HPGPC로 측정했다. 이러한 경우에는, 초기 무게평균 분자량이 28000돌턴이었고, 1시간 동안 가수분해를 한 이후의 무게평균 분자량은 11000돌턴, 그리고 3시간 동안 가수분해를 한 이후의 무게평균 분자량은 7000돌턴이었다.
예8
예4의 분해 부분을 사용하여 예7의 방법을 반복했다. 이러한 경우에는, 초기 평균 분자량이 7000돌턴, 1시간 동안 가수분해를 한 이후의 평균 분자량은 5500돌턴, 그리고 3시간 동안 가수분해를 한 이후의 평균 분자량은 4600돌턴이었다.
비교실험1
비교실험1은 예7과 유사한 방법으로 수행되며, 예2에서 분해 부분 대신에 상업적으로 구매 가능한 하이드록시에틸(hydroxyethyl) 녹말(130/0.4, 상표명 "Voluven")을 사용했다. 초기 무게평균 분자량은 140200돌턴, 1시간 동안 가수분해를 한 이후의 무게평균 분자량은 54700돌턴, 그리고 3시간 동안 가수분해를 한 이후의 무게평균 분자량은 33700돌턴이었다.
따라서 비교실험1의 α-아밀라아제를 갖는 하이드록시에틸 녹말에 기초하고 상업적으로 구매 가능한 플라즈마 엑스팬더(plasma expander)의 분해 속도는 예7의하이퍼브랜치 아밀로펙틴 부분의 분해 속도와 필적한다.
예9
환원 말단부에서 예4의 하이퍼브랜치 아밀로펙틴 부분의 알돈산으로의 산화.
예4에서 제조된 하이퍼브랜치 분해 부분이 탈이온화수에서 25%의 무게비로 제조되었다. 0.05molar 요오드 용액의 환원 말단기에 기초한 3.5배 몰 초과는 이 용액에 천천히 첨가되었고, 0.1N NaOH으로 각각의 경우에 제거되었다(요오드에 기초한 분자량의 3배). 첨가 이후에, 반응은 상온에서 밤새 계속되었고, 결과물 용액은 1000돌턴의 명목상 분자량 컷-오프값을 갖는 막을 이용해 투석하면서 pH를 모니터했다. 투석 중 pH가 6에 도달하고 요오드화 나트륨을 첨가하면서 산화시켜 요오드의 자유도를 검토한 후, 상기 혼합물은 0.1N 염산으로 pH를 2.5로 맞췄고 한의여과로 pH 5가 될 때까지 투석했다. 상기 생성물은 동결 건조하면서 분리되었다. 상기 수득률은 이론적인 수득률의 80%였다. 환원 말단기를 통해 측정한 산화도는 90%보다 컸다.
예10
예9의 알돈산 66g을 0.5㎖의 건조DMF에서 용해시켰고, N,N'-disuccinimidyl carbonate 3.4㎎가 첨가되었고 상온에서 2시간동안 반응시켰다. 보빈 세럼 알부민(BSA)(bovine serum albumin) 무게비가 1%인 0.5㎖를 1molar의 비카르보네이트 용액 180㎖와 섞은 후 활성화된 알돈산 100㎕ 두 부분이 BSA용액에 첨가되었고 30분 동안 각각 반응시켰다. 그리고 나서 상기 혼합물은 하이드로클로릭 산을 이용해 pH 7.4로 맞췄다. HPGPC에 의한 반응물의 조사 결과 BSA를 이용한 커플링 생산물의 수득률은 95%보다 컸다.
상술한 바와 같이, 본 발명은 하이퍼브랜치 아밀로펙틴과 활성 약학적 성분을 가진 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 커플링을 제조하는데 사용된다.

Claims (8)

  1. 2000돌턴이상 30000돌턴이하인 무게평균 분자량을 갖고 10%초과 20%이하인 평균 분지도(degree of branching)를 갖는 언하이드로글루코스(anhydroglucose)의 mol%로 표기되고, 평균 분지도를 갖는 하이퍼브랜치 아밀로펙틴(hyperbranched amylopectin)의 제조 방법으로서, 베지터블(vegetable) 아밀로펙틴 또는 아밀로펙틴-리치 녹말의 분자량이 α-아밀라아제 또는 산 가수분해에 의해 60000돌턴 이하의 분자량으로 분해되는 제1 가수분해 단계와, 상기 제1 가수분해 단계의 분해 생성물의 분자량이 β-아밀라아제 분해에 의해 추가로 분해되는 제2 가수분해 단계를 수반하는, 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 제조 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 5000돌턴 미만의, 바람직하게 1000돌턴 미만, 절대 분자량을 가지는 저분자량의 불순물은 상기 제1 가수분해 단계 및/또는 상기 제2 가수분해 단계 이후에 제거되는, 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 제조 방법.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 베지터블 아밀로펙틴 또는 아밀로펙틴-리치 녹말의 분자량은 상기 제1 가수분해 단계에서 산 가수분해에 의해 분해되는 것을 특징으로 하는, 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 제조 방법.
  4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 가수분해 단계의 가 수분해 생성물은 활성 약학적 성분과 결합하는 것을 특징으로 하는, 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 제조 방법.
  5. 제 4항에 있어서, 활성 약학적 성분은 단백질 또는 폴리펩티드인 것을 특징으로 하는, 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 제조 방법.
  6. 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 상기 제2 가수분해 단계의 가수분해 생성물의 상기 활성 약학적 성분에 대한 결합제품은 가수분해 생성물의 언하이드로글루코스 말단에서 일어나는 것을 특징으로 하는, 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 제조 방법.
  7. 제 6항에 있어서, 상기 제2 단계의 가수분해 생성물의 환원 말단기는 알돈산으로 산화되며, 이 알돈산기는 알돈산 에스테르기로 활성화되고, 활성 약학적 성분과 결합되는 것을 특징으로 하는, 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 제조 방법.
  8. 제 6항에 있어서, 상기 제2 가수분해 단계의 가수분해 생성물과 활성 약학적 성분의 결합제품은 카르보닉산 에스테르기를 통해 일어나는 것을 특징으로 하는, 하이퍼브랜치 아밀로펙틴의 제조 방법.
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