KR20060091028A

KR20060091028A - 항 인테그린 항체 코팅스텐트 및 그의 제조방법

Info

Publication number: KR20060091028A
Application number: KR1020050011745A
Authority: KR
Inventors: 장양수; 류용선; 황기철; 정광회; 조동련; 정명호
Original assignee: 휴메드 주식회사; 장양수
Priority date: 2005-02-12
Filing date: 2005-02-12
Publication date: 2006-08-17
Also published as: KR100759130B1; WO2006112597A1

Abstract

본 발명은 스텐트 표면에 인테그린의 항체를 코팅하여, 스텐트 시술에 의하여 손상된 혈관벽의 재생을 촉진하고, 스텐트 시술후의 혈관 재협착을 방지할 수 있는, 항 인테그린 항체 코팅스텐트 및 그의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 항 인테그린 항체 코팅스텐트의 제조방법은 플라즈마 중합반응을 이용하여 스텐트의 표면에 아민기를 결합시키고, 전기 스텐트 표면의 아민기에 항 인테그린 항체를 연결시키는 공정을 포함한다. 본 발명의 항 인테그린 항체 코팅스텐트는 스텐트 시술후에 신생내막 세포가 과다하게 증식되지 않고, 재협착율이 낮으며, 스텐트 주위에서 발생하는 염증의 발생율을 저하시킬 수 있으므로, 보다 안전한 혈관 스텐트 시술에 널리 활용될 수 있을 것이다.

스텐트, 항 인테그린 항체, 플라즈마

Description

항 인테그린 항체 코팅스텐트 및 그의 제조방법{Stent Coated with Anti-integrin Antibody and Process for Preparing the Same}

도 1은 메탄과 암모니아를 사용한 플라즈마 코팅방법을 이용하여, 아민기가 코팅된 스텐트를 작제하는 방법을 모식적으로 나타내는 그림이다.

도 2는 DACH를 사용한 플라즈마 코팅방법을 이용하여, 아민기가 코팅된 스텐트를 작제하는 방법을 모식적으로 나타내는 그림이다.

본 발명은 항 인테그린 항체 코팅스텐트 및 그의 제조방법에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로, 본 발명은 스텐트 표면에 인테그린의 항체를 코팅하여, 스텐트 시술에 의하여 손상된 혈관벽의 재생을 촉진하고, 스텐트 시술후의 혈관 재협착을 방지할 수 있는, 항 인테그린 항체 코팅스텐트 및 그의 제조방법에 관한 것이다.

최근, 관상동맥 질환에서의 스텐트의 이용이 늘어 나면서 관상동맥 중재술 시행시에 70%정도 스텐트 시술이 행하여지고 있으나, 스텐트 시술후에 발생되는 재협착(restenosis)이 중요한 문제로 대두되었다. 실제로, 재협착은 클래스 I 내지 IV의 크게 4종류로 구별되는데, 클래스 I은 10mm 미만의 병변, 클래스 II는 10mm 이상으로 스텐트내에 국한된 병변, 클래스 III는 10mm 이상으로, 스텐트 가장자리 이상을 침범한 병변, 클래스 IV는 완전 폐쇄의 병변으로 분류된다(참조: Mehran R, et al., Circulation, 100:1872-1878, 1998).

이러한 재협착은 당뇨, 만성 염증, 감염, 다른 혈관의 재협착, 앤지오텐신 전환효소(angiotensin converting enzyme), 불안정성 협심증, 혈관의 구경, 반(plaque)의 정도, 입구(ostial) 병변, 시술된 스텐트의 숫자, 스텐트의 길이 등의 다양한 원인에 의하여 유발되는 것으로 알려져 있다. 특히, 풍선(balloon)을 이용한 중재와는 달리, 스텐트 시술후에 발생하는 재협착은 혈관 벽의 기압외상(barotrauma)과 이물질(foreign body)에 지속적인 자극에 의해 신생 내피세포(neointima)의 과증식(hyperplasia)으로 인한 것으로 알려져 있다(참조: Hoffman R, et al., Circulation, 94:1247-1254, 1966; Dussaillant GR, et al., J. Am. Coll. Cardiol., 26:720-724, 1995).

이러한 스텐트 시술후의 재협착을 방지하기 위하여 다양한 방법이 연구되고 있다. 예를 들어, 대한민국 특허공개 제 1997-61279호에는 혈관 재협착을 억제하는 약물을 서방형으로 방출할 수 있는 스텐트가 개시되어 있고, 대한민국 특허공개 제 1999-7865호에는 측벽 구조물 표면상에 소수성 엘라스토머 물질이 구비되어, 혈관벽의 증식을 저해할 수 있는 스텐트가 개시되어 있으며, 대한민국 특허등록 제 371008호에는 플라즈마 처리에 의하여 혈소판 응집 억제제가 표면에 결합되어, 혈소판응집에 의한 혈관벽의 재협착을 방지할 수 있는 스텐트가 개시되어 있고, 대한민국 특허등록 제 455343호에는 폴리우레탄과 폴리에틸렌글리콜로 구성되어, 스텐트의 표면에 혈관 재협착을 억제하는 약물을 코팅할 수 있는 코팅 조성물이 개시되어 있다. 그러나, 상술한 기술을 이용할 경우, 약물이 작용하는 한시적인 기간 동안 재협착의 발생을 억제할 수 있을 뿐만 아니라, 이물질에 의한 혈소판 응집(thrombosis)을 방지하기 위하여, 6개월 이상의 기간동안 강력한 항혈소판제제를 투여해야 하는 등의 단점이 있어, 이를 해결하려는 노력이 계속되고 있다.

만일, 스텐트 시술 후에 발생되는 혈관 재협착을 근본적으로 방지할 수 있고 이물질에 의한 인체반응을 최소화할 수 있다면, 보다 안전하게 스텐트를 시술할 수 있고, 스텐트 시술의 범위를 확장시킬 수 있을 것으로 예측되고 있으나, 아직까지는 별다른 연구성과가 보고되지 않고 있는 실정이다.

따라서, 스텐트 시술 후에 발생되는 혈관 재협착을 근본적으로 방지할 수 있는 방법을 개발하여야 할 필요성이 끊임없이 대두되었다.

이에, 본 발명자들은 스텐트 시술 후에 발생되는 혈관 재협착을 근본적으로 방지할 수 있는 방법을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 표면에 항 인테그린 항체가 코팅된 스텐트를 시술할 경우, 스텐트 시술후에 발생하는 혈관 재협착의 발생 확률이 급격히 저하됨을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

결국, 본 발명의 주된 목적은 표면에 항 인테그린 항체가 코팅된, 항 인테그린 항체 코팅스텐트를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 전기 항 인테그린 항체 코팅스텐트의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 항 인테그린 항체 코팅스텐트의 제조방법은 플라즈마 중합반응을 이용하여 스텐트의 표면에 아민기를 결합시키고, 전기 스텐트 표면의 아민기에 항 인테그린 항체를 연결시키는 공정을 포함한다. 이때, 스텐트의 표면에 아민기를 결합시키기 위한 플라즈마 중합반응은 특별히 이에 제한되지 않으나, 가스상의 메탄과 암모니아를 스텐트의 표면에 순차적으로 결합시켜서 수행하거나 또는 가스상의 알릴아민(allyl amine), 부틸아민(buthylamine), 에틸렌디아민(ethylenediamine, EDA) 또는 디아미노시클로헥산(diaminocyclohexane, DACH)을 스텐트의 표면에 결합시켜서 수행함이 바람직하고, 항 인테그린 항체는 특별히 이에 제한되지 않으나, 전구내피세포와 내피세포 부착에 관여하는 α1β1, α2β1, α3β1, α4β1, α5β1, α6β1, α8β1, α9β1, αvβ1, αvβ3, αvβ5, α6β4, αvβ8 등의 인테그린의 단클론 항체 또는 다클론 항체를 사용함이 바람직하다.

본 발명자들은 스텐트, 코일, 혈관용 그라프트, 인조혈관 등의 혈관질환의 치료에 사용되는 의료기구를 혈관에 시술한 후에, 발생되는 혈관 재협착을 근본적으로 방지할 수 있는 방법을 개발하고자 다양한 연구를 시도하던 중, 인테그린(integrin)에 주목하게 되었다.

인테그린은 조혈모세포와 백혈구를 포함하는 다양한 세포가 외세포질의 단백질과 내피세포에 부착하도록 매개한다고 알려진 단백질로서, α₁β₁, α₂β₁, α₃β₁, α₄β₁, α₅β₁, α₆β₁, α₈β₁, α₉β₁, α_vβ₁, α_vβ₃, α_vβ₅, α6β₄, α_vβ₈ 등의 다양한 인테그린이 알려져 있다(참조: Springer TA, Cell, 76:301-314, 1994), 이중에서도, β₂-인테그린(CD18/CD11)과 α₄β₁-인테그린에 대한 연구가 활발히 진행되고 있는데, β₁-인테그린은 내피세포와 조혈모세포를 포함하는 다양한 세포에 의해 발현되고, β₂-인테그린은 조혈모세포에서 주로 발견된다고 보고되었다(참조: Soligo D. et al., Br. J. Haematol., 76:323-332, 1990).

이러한 인테그린은 줄기세포의 혈관신생과 연관되고, 조혈모 전구세포의 이동 및 분화에 영향을 미치며, 상호 보완적인 기능을 수행한다고 알려져 있다((참조: Vajkoczy P., et al., J. Exp. Med., 197:1755-1765, 2003; Kollet O. et al., Blood, 97:3283-3291, 2001; Bowden RA, et al., Circ. Res., 90:562-569, 2002). 또한, 인테그린을 제거한 경우에는 상기 혈관신생, 조혈모 전구세포의 이동 및 분화 등의 현상이 발생되지 않음이 보고 되었으므로, 인테그린은 혈류를 통한 세포의 이동과 관련이 있을 것으로 예측되고 있다(참조: Scott LM, et al., Mol. Cell Biol., 23:9349-9360, 2003). 아울러, 항 인테그린 항체를 이용하여 인테그린의 작용을 억제할 경우에도, 골수에서 유래된 CD34^-/CD14⁺ 단핵세포와 내피세포와의 결합을 직접적으로 매개하는 MCP-1의 기능이 영향을 받지 않음이 보고되었기 때문에, 인테그린은 상기 혈관신생, 조혈모 전구세포의 이동 및 분화 등의 현상에 직접적인 영향을 미치는 것이 아니라, 세포간의 이동에 있어 목적을 설정하는(targeting) 기능을 수행할 것으로 예측되기도 하였다(참조: Fujiyama S. Circ. Res., 93:980-989, 2003).

한편, 금속재질의 혈관질환의 치료에 사용되는 의료기구인 스텐트, 코일 등에 항 인테그린 항체를 직접적으로 결합시킬 수는 없기 때문에, 본 발명자들은 항 인테그린 항체를 의료기구의 표면에 보다 효과적으로 결합시키기 위하여, 다양한 방법을 모색하였다. 지금까지는, 금속과 단백질을 연결할 수 있는 매개체로서 PEG와 같은 고분자 중합체를 사용하여, 금속의 표면에 항 인테그린 항체와 같은 단백질을 결합시키는 방법을 이용하였다. 그러나, 혈관의 내부에 시술될 의료기구의 표면에 고분자 중합체가 코팅되면, 고분자 중합체와 비특이적으로 결합하는 단백질 등의 이물질에 의하여, 오히려 혈관이 봉쇄되는 현상이 발생됨을 확인하였다. 전기 고분자 중합체는 항 인테그린 항체를 의료기구에 코팅시키기 위하여 사용되는, 매개체에 불과한 역할을 수행함에도 불구하고, 이로 인하여 의료기구의 시술에 치 명적인 위험이 발생되기 때문에, 의료기구의 시술을 저해하지 않으면서도 의료기구의 표면에 효과적으로 항 인테그린 항체를 결합시킬 수 있는 방법을 개발하기 위하여 다양한 연구를 수행하던 중, 플라즈마 코팅방법에 주목하게 되었다.

플라즈마 코팅방법은 진공하에서 기체상의 목적 화합물을 플라즈마 상태로 변화시켜서, 이를 금속의 표면에 코팅시키는 방법이며, 전기 플라즈마 코팅방법은 스텐트, 코일 등의 의료기구에 적용될 수 있다. 즉, 진공하에서 의료기구와 기체상의 목적 화합물을 넣고, 전기 목적화합물을 플라즈마 상태로 전환시키면, 높은 에너지 준위를 가지는 플라즈마 상태의 목적 화합물에 의하여, 의료기구 표면의 화학결합이 파괴되고, 이처럼 파괴된 의료기구의 표면부분은 플라즈마 상태의 목적 화합물과 결합하여, 에너지 준위를 저하시키게 되므로, 결과적으로는 표면이 목적 화합물로 코팅된 의료기구가 제조된다.

이러한 플라즈마 코팅방법을 이용하여, 의료기구와 항 인테그린 항체를 결합시킬 수 있는 매개체(주로 아민기)를 의료기구 표면에 코팅할 수 있다. 이때, 아민기를 의료기구에 코팅시키기 위하여, 1 내지 2개의 아민기를 가지는 탄화수소 화합물(allyl amine, buthylamine, EDA, DACH 등)을 목적 화합물로 사용하여, 1회의 플라즈마 반응으로 의료기구의 표면에 아민기를 코팅하거나 또는 메탄 등의 저분자 탄화수소를 사용하여 의료기구 표면에 1차 코팅한 다음, 암모니아 등의 아민기를 포함하는 저분자 화합물로 다시 코팅하는 방법을 사용할 수 있다. 이처럼 의료기구 표면에 아민기를 코팅시킨 다음, 항 인테그린 항체의 카르복시기를 전기 아민기와 결합시켜서, 항 인테그린 항체가 코팅된 의료기구를 제조할 수 있었다.

실제적으로, 본 발명자들은 의료기구의 일종인 스텐트에 메탄과 암모니아를 사용한 플라즈마 코팅방법을 적용하여, 항 인테그린 항체 코팅스텐트, DACH를 사용한 플라즈마 코팅방법으로 제조된 항 인테그린 항체 코팅스텐트 및 인테그린 항체가 결합되지 않은 스텐트를 각각 제조하고, 이를 돼지에 시술한 다음, 4주가 경과된 시점에서 스텐트가 시술된 혈관의 두께 및 신생내막 면적을 비교하였다. 그 결과, 혈관의 두께는 항 인테그린 항체가 코팅된 코팅스텐트를 시술한 혈관이 항 인테그린 항체가 코팅되지 않은 스텐트를 시술한 혈관보다 얇았으며, 신생내막 면적도 항 인테그린 항체가 코팅된 코팅스텐트를 시술한 혈관이 항 인테그린 항체가 코팅되지 않은 스텐트를 시술한 혈관보다 적은 면적을 차지함을 알 수 있었다. 아울러, 코팅스텐트 중에서도, 메탄과 암모니아를 사용하여 제조된 코팅스텐트를 시술한 혈관이 DACH를 사용하여 제조된 코팅스텐트를 시술한 혈관보다, 혈관의 두께가 얇고, 신생내막 면적도 적은 면적을 차지함을 알 수 있었다.

한편, 본 발명의 항 인테그린 항체 코팅스텐트는 스텐트의 표면에 아민기가 결합되고, 전기 아민기에 항 인테그린 항체를 연결된 형태이다. 이때, 항 인테그린 항체는 특별히 이에 제한되지 않으나, 전구내피세포와 내피세포 부착에 관여하는 α₁β₁, α₂β₁, α₃β₁, α₄β₁, α₅β₁, α₆β₁, α₈β₁, α₉β₁, α_vβ₁, α_vβ₃, α_vβ₅, α6β₄, α_vβ₈ 등의 인테그린의 단클론 항체 또는 다클론 항체를 사용함이 바 람직하다.

본 발명의 항 인테그린 항체 코팅스텐트는 스텐트 시술후에 신생내막 세포가 과다하게 증식되지 않고, 재협착율이 낮으며, 스텐트 주위에서 발생하는 염증의 발생율을 저하시킬 수 있으므로, 보다 안전한 혈관 스텐트 시술에 널리 활용될 수 있을 것이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 지닌 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 플라즈마 코팅방법을 이용한 코팅스텐트의 제조

실시예 1-1: 항 인테그린 항체의 작제

α₃β₁ 인테그린(Centocor Inc., USA) 2㎖(10㎎/㎖)과 애주번트 2㎖을 혼합하고, 전기 혼합물을 7주령 웅성 토끼에 1주간 격으로 3회 주사한 다음, 2주간격으로 2회 주사하였다. 이어, 토끼의 혈액을 일부 채취하여, α단량체에 대한 역가를 측 정한 다음, 심장천공법을 이용하여 토끼의 혈액을 모두 채취하였다. 전기 채취한 혈액은 상온에서 24시간 동안 방치하여, 상층액인 혈장부분만을 수득하였다. 이어, 전기 혈장을 12% 아크릴아미드 겔을 이용한 전기영동법에 적용하여, 전기영동하고, 헵토글로빈의 α단량체를 이용한 웨스턴 블롯을 수행하여, 항체부분의 분자량을 확인하였다.

전기 확인된 분자량을 분리할 수 있는 젤여과 크로마토그래피에 전기 혈장을 적용하여, 활성분획을 수득하여, 인테그린 항체인 항 α₃β₁항체를 수득하였다.

실시예 1-2: 다양한 플라즈마 코팅방법을 이용한 아민기가 코팅된 스텐트의 작제

메탄과 암모니아를 사용하거나 또는 DACH를 사용한 플라즈마 코팅방법으로 아민기가 코팅된 스텐트를 각각 작제하였다.

실시예 1-2-1: 메탄과 암모니아를 사용한 플라즈마 코팅방법을 이용한 아민기가 코팅된 스텐트의 작제

플라즈마 반응기의 내부에 스텐트를 안치시키고, 플라즈마 반응기의 내부를 1mtorr의 진공 상태로 유지한 다음, 메탄가스 및 암모니아가스를 순차적으로 주입 하였으며, 13.56Hz의 라디오 여기파장을 이용한 플라즈마 처리를 수행하여 아민기가 코팅된 스텐트를 작제하였다. 이때, 메탄가스를 이용한 플라즈마 처리방법은 플라즈마 반응기의 내부에 메탄가스의 압력이 20mtorr을 유지하도록 메탄가스를 5sccm의 유속으로 유입시키고, 100W의 전력으로 10분간 플라즈마 처리를 수행하였다. 또한, 암모니아가스를 이용한 플라즈마 처리방법은 플라즈마 반응기의 내부에 암모니아가스의 압력이 20mtorr을 유지하도록 암모니아가스를 5sccm의 유속으로 유입시키고, 300W의 전력으로 10분간 플라즈마 처리를 수행하였다(참조: 도 1). 도 1은 메탄과 암모니아를 사용한 플라즈마 코팅방법을 이용하여, 아민기가 코팅된 스텐트를 작제하는 방법을 모식적으로 나타내는 그림이다. 도 1에서 보듯이, 먼저 메탄가스를 이용하여 스텐트의 표면에 탄화수소층을 형성시킨 다음, 암모니아가스로 플라즈마 처리함으로써 표면에 아민기가 코팅된 스텐트를 작제하였다.

실시예 1-2-1: DACH를 사용한 플라즈마 코팅방법을 이용한 아민기가 코팅된 스텐트의 작제

플라즈마 반응기의 내부에 스텐트를 안치시키고, 플라즈마 반응기의 내부를 1mtorr의 진공 상태로 유지한 다음, DACH가스를 주입하였으며, 13.56Hz의 라디오 여기파장(radio frequency)을 이용한 플라즈마 처리를 수행하여 아민기가 코팅된 스텐트를 작제하였다. 이때, 플라즈마 처리방법은 플라즈마 반응기의 내부에 DACH가스의 압력이 20mtorr을 유지하도록 DACH가스를 10sccm의 유속으로 유입시키고, 100W의 전력으로 5분간 플라즈마 처리를 수행한 다음, 동일한 DACH가스 조건에서 60W의 전력으로 15분간 플라즈마 처리를 수행하였다(참조: 도 2). 도 2는 DACH를 사용한 플라즈마 코팅방법을 이용하여, 아민기가 코팅된 스텐트를 작제하는 방법을 모식적으로 나타내는 그림이다. 도 2에서 보듯이, 기체상의 DACH를 반응기내에 주입하여 플라즈마 상태를 발생시키면 이온 또는 래디칼이 형성되어, 연쇄적으로 중합 반응이 일어나개 되므로, 결과적으로는 스텐트 표면에 층을 형성하며 그 사슬의 말단에는 아민기가 존재하게 된다.

실시예 1-3: 항 인테그린 항체가 코팅된 스텐트의 제조

전기 실시예 1-2에서 각각 수득한 아민기가 코팅된 스텐트의 표면에 전기 실시예 1-1에서 수득한 항 α₃β₁항체를 코팅하여, 항 α₃β₁항체가 코팅된 스텐트를 제조하였다.

즉, 코팅완충용액(0.1M ㄴodium citrate, pH 5.0) 20㎖에 전기 실시예 1-1에서 수득한 항 α₃β₁항체 2.5㎎을 용해시키고, 250ppM의 농도로 카보디이미드(carbodiimide)를 가하고, 4℃에서 2시간 동안 반응시켜서, 항 인테그린 항체 분자내의 카르복시기를 활성화시켰다. 이어, 전기 완충용액에 전기 실시예 1-2에서 각각 수득한 아민기가 코팅된 스텐트를 침지하고, 10℃에서 5시간 동안 반응시킨 다음, 세척하고 상온에서 건조시켜서, 항 α₃β₁항체가 코팅된 각각의 스텐트를 제조 하였다.

실시예 2: 항 인테그린 항체가 코팅된 스텐트의 시술 및 시술후의 혈관재협착 정도의 확인

전기 실시예 1-3에서 수득한 메탄과 암모니아를 사용한 플라즈마 코팅방법으로 제조된 항 α₃β₁항체 코팅스텐트(실험군 1), DACH를 사용한 플라즈마 코팅방법으로 제조된 항 α₃β₁항체 코팅스텐트(실험군 2) 및 항 α₃β₁항체가 결합되지 않은 스텐트(대조군)를 각각 30개씩 돼지 관상동맥 혈관에 삽입하여 4주 추적 관상동맥 조영술을 시행하고, 돼지로부터 스텐트가 삽입된 관상동맥을 적출한 다음, 스텐트 시술전·후의 돼지 및 관상동맥 혈관의 조직 병리학적 특징을 관찰하고, 비교하였다. 비교항목은 시술된 스텐트의 수, 사망한 개체수, 시술전 돼지의 체중(㎏), 4주경과후 돼지의 체중(㎏), 내경비(시술시 스텐트의 내경/시술시 관상동맥의 내경), 시술전 관상동맥의 내경(㎜), 4주 경과후 관상동맥의 내경(㎜), 4주 경과후 재협착율, 신생내막 면적(intima area)(㎟) 및 4주 경과후 스텐트 주위에서 발생된 염증세포수이다. 이때, 재협착율은 스텐트가 시술된 돼지 중에서 재협착이 발생한 돼지의 비율로 산출하였다(참조: 표 1).

스텐트 시술전·후의 돼지 및 관상동맥 혈관의 조직 병리학적 특징비교

검사항목	대조군	실험군 1	실험군 2
시술된 스텐트의 수	30	30	30
사망한 개체수	0	0	0
시술전 돼지의 체중(㎏)	29.4±0.5	29.4±0.8	29.0±1.3
4주경과후 돼지의 체중(㎏)	40.0±2.5	40.8±1.5	41.3±2.3
내경비	1.19±0.02	1.15±0.04	1.10±0.03
시술전 관상동맥의 내경(㎜)	2.9±0.1	2.9±0.2	2.9±0.1
4주 경과후 관상동맥의 최소내경(㎜)	1.8±0.6	2.2±0.7	2.7±0.8
재협착율(%)	38±16	25±10	10±5
신생내막 면적(㎟)	1.96±0.68	1.28±0.47	0.89±0.25
염증세포수	15±4	8±3	3±2

상기 표 1에서 보듯이, 스텐트 시술후 4주가 경과하여도. 사망한 돼지는 없었으며, 돼지의 체중역시 실험군별로 동등한 수준을 유지하였으므로, 대조군 및 각 실험군에서 스텐트 시술은 성공적으로 수행되었음을 확인하였다.

한편, 항 α₃β₁항체가 결합되지 않은 스텐트(대조군)가 시술된 관상동맥 혈관은 항 α₃β₁항체가 결합된 코팅스텐트(실험군 1 및 실험군 2)가 시술된 관상동맥 혈관보다도 4주 경과후 관상동맥의 최소내경이 두텁고, 재협착율이 높았으며, 신생내막 면적이 넓고 염증세포수가 증가됨을 확인하였다.

아울러, 항 α₃β₁항체가 결합된 코팅스텐트 중에서도, 메탄과 암모니아를 사용한 플라즈마 코팅방법으로 제조된 항 α₃β₁항체 코팅스텐트(실험군 1)가 시술된 관상동맥 혈관은 DACH를 사용한 플라즈마 코팅방법으로 제조된 항 α₃β₁항체 코팅스텐트(실험군 2)가 시술된 관상동맥 혈관보다도, 4주 경과후 관상동맥의 최소내경이 얇고, 재협착율이 낮았으며, 즐식된 신생내막의 면적이 협소하고, 염증세포수가 감소됨을 확인하였다. 특히, 메탄과 암모니아를 사용한 플라즈마 코팅방법으로 제조된 항 α₃β₁항체 코팅스텐트는 신생내막 세포의 과다한 증식을 억제하여, 관상동맥의 내경이 필요이상으로 비후되는 것을 방지하는 효과를 나타내는 것으로 유추되었다.

상기 결과를 종합하면, 메탄과 암모니아를 사용한 플라즈마 코팅방법으로 제조된 항 α₃β₁항체 코팅스텐트가 4주 경과후 관상동맥의 최소내경, 재협착율, 신생내막 면적 및 염증세포수의 면에서 가장 우수함을 확인할 수 있었다.

이상에서 상세히 설명하고 입증하였듯이, 본 발명은 스텐트 표면에 인테그린의 항체를 코팅하여, 스텐트 시술에 의하여 손상된 혈관벽의 재생을 촉진하고, 스텐트 시술후의 혈관 재협착을 방지할 수 있는, 항 인테그린 항체 코팅스텐트 및 그의 제조방법을 제공한다. 본 발명의 항 인테그린 항체 코팅스텐트는 스텐트 시술후에 신생내막 세포가 과다하게 증식되지 않고, 재협착율이 낮으며, 스텐트 주위에서 발생하는 염증의 발생율을 저하시킬 수 있으므로, 보다 안전한 혈관 스텐트 시술에 널리 활용될 수 있을 것이다.

Claims

플라즈마 중합반응을 이용하여 스텐트의 표면에 아민기를 결합시키고, 전기 스텐트 표면의 아민기에 항 인테그린 항체를 연결시키는 공정을 포함하는 항 인테그린 항체 코팅스텐트의 제조방법.
제 1항에 있어서,

스텐트 표면에 아민기를 결합시키는 방법은 플라즈마 중합반응을 이용하여 가스상의 메탄과 암모니아를 스텐트의 표면에 순차적으로 결합시켜서 수행하는 것을 특징으로 하는

항 인테그린 항체 코팅스텐트의 제조방법.
제 1항에 있어서,

스텐트 표면에 아민기를 결합시키는 방법은 플라즈마 중합반응을 이용하여 가스상의 알릴아민(allyl amine), 부틸아민(buthylamine), 에틸렌디아민(ethylenediamine, EDA) 또는 디아미노시클로헥산(diaminocyclohexane, DACH)을 스텐트의 표면에 결합시켜서 수행하는 것을 특징으로 하는

항 인테그린 항체 코팅스텐트의 제조방법.
제 1항에 있어서,

항 인테그린 항체는 α₁β₁, α₂β₁, α₃β₁, α₄β₁, α₅β₁, α₆β₁, α₈β₁, α₉β₁, α_vβ₁, α_vβ₃, α_vβ₅, α6β₄ 및 α_vβ₈로 구성된 그룹으로부터 선택되는 1종의 인테그린 단백질의 단클론 항체 또는 다클론 항체인 것을 특징으로 하는

항 인테그린 항체 코팅스텐트의 제조방법.
제 1항의 방법으로 제조되어, 스텐트의 표면에 항 인테그린 항체가 연결된 항 인테그린 항체 코팅스텐트.
제 5항에 있어서,

항 인테그린 항체는 α₁β₁, α₂β₁, α₃β₁, α₄β₁, α₅β₁, α₆β₁, α₈β₁, α₉β₁, α_vβ₁, α_vβ₃, α_vβ₅, α6β₄ 및 α_vβ₈로 구성된 그룹으로부터 선택되는 1종의 인테그린 단백질의 단클론 항체 또는 다클론 항체인 것을 특징으로 하는

항 인테그린 항체 코팅스텐트.