KR20060023968A

KR20060023968A - 중증 급성 호흡기 증후군(ｓａｒｓ)의 치료를 위한 조성물및 방법

Info

Publication number: KR20060023968A
Application number: KR1020057022091A
Authority: KR
Inventors: 조지 알. 시버
Original assignee: 와이어쓰 홀딩스 코포레이션
Priority date: 2003-05-20
Filing date: 2004-05-20
Publication date: 2006-03-15
Also published as: CN1976720A; WO2005018535A3; US7892563B2; MXPA05012497A; US7722886B2; WO2005018535A2; JP2007525465A; US20040235047A1; IL171972A0; EP1624850A2; AU2004266111B8; CA2526431A1; NO20056073L; AU2004266111A1; RU2005139730A; US20060263847A1; EP1624850A4; RU2411042C2; BRPI0410467A; AU2004266111B2

Abstract

본 발명은 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)의 치료를 위한 조성물 및 방법을 개시한다. 본 발명은 SARS-관련 코로나바이러스 (SARS-CoV) 감염을 비롯한 SARS를 치료하는데 유용한 SARS-관련 염증성 사이토킨의 억제제를 제공한다. 본 발명은 SARS-CoV를 비롯한 SARS를 치료하기 위한 상기 억제제의 TNF의 억제제의 용도이다. 또한, 상기 억제제에 대한 확인 및 스크리닝의 방법을 제공한다.

중증 급성 호흡기 증후군, 코로나바이러스, 스크리닝 방법, ＳＡＲＳ-관련 염증성 사이토킨, 종양 괴사 인자

Description

중증 급성 호흡기 증후군(ＳＡＲＳ)의 치료를 위한 조성물 및 방법{COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATMENT OF SEVERE ACUTE RESPIRATORY SYNDROME (SARS)}

본 발명은 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)의 치료를 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 SARS의 치료에 사용하기 위한 종양 괴사 인자 (TNF)의 억제제, 예컨대 재조합 TNF 수용체, 소분자 및 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.

중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)은 다수의 국가에서 최근 보고되어 온 호흡기 질병이다. SARS는 2002년 말에 인간 건강에 잠재적인 위협으로서 최초로 발병되었다. 이는 유의한 발병률 및 사망률을 갖는 높은 전염성의 새롭게 출현한 감염성 질환으로서 인지된다. 남동 아시아에서 발생된 이 바이러스는 2003년 4월 30일 현재 세계적으로 26개국에서 대략 5,663명의 개체를 감염시켰다. 문헌 [M.M.W.R., 52 (17): 388-90 (May 2, 2003)]. 이들 감염 중, 372명 (대략 6.6%)은 사망하였다. Id. SARS는 전세계 인구의 건강과 복지에의 상당한 위협이며, 상기 질환의 치료를 개발하기 위한 노력이 현재 진행 중이다.

SARS는 일반적으로 감염된 개체가 전형적으로 종종 오한, 두통, 권태감 및 근육통을 동반하는 고열을 나타내는, 전형적으로 2 내지 7일 동안 인큐베이션 기간을 특징으로 한다. 이 질병은 저산소혈증을 동반하거나 저산소혈증으로 진전하는 마른, 가래 없는 기침 또는 호흡곤란을 개시로 진행된다. 증례의 10 내지 20%는 삽관법 및 기계적 환기를 요구한다. 또한, 호흡기 질병의 최고점에서, 감염된 개체의 대략 50%는 백혈구 감소증 및 혈소판 감소증으로 발전된다. 문헌 [M.M.W.R., 52 (12): 255-256 (March 28, 2003)].

SARS가 전파되는 패턴은 바이러스 병원소의 액적 또는 접촉 전달을 제안한다. 문헌 [Poutanen et al., New England Journal of Medicine, published online March 31, 2003, www.nejm.org]. 최근, SARS는 신규한 바이러스인, 감염된 동물 숙주 세포의 세포질에서 복제하는 외피보유 바이러스의 코로나바이러스 족의 구성원인 SARS-관련 코로나바이러스 (SARS-CoV)와 병인학적으로 관련되었다. 코로나바이러스는 일반적으로 대략 30,000개의 뉴클레오티드의 게놈을 갖는 단일 가닥 RNA 바이러스로서 특징지어 진다. 문헌 [Rota, P.A., et al., Sciencexpress, Published online May 01, 2003; 10.1126/science.1085952]. 코로나바이러스는 3개의 공지된 군으로 분류되는데; 처음 2개의 군은 포유류 코로나바이러스 감염을 일으키고; 세번째 군은 조류 코로나바이러스 감염을 일으킨다. Id. 코로나바이러스는 다수의 동물에서의 여러 중증 질환의 원인성 제제인 것으로 여겨지며, 예를 들어, 감염성 기관지염 바이러스, 고양이과 감염성 복막염 바이러스 및 전염성 위장염 바이러스는 유의한 수의학적 병원소이다. 이들 공지된 코로나바이러스는 인간에서는 온건한 증상만을 일으킨다.

SARS-CoV는 11개의 오픈 리딩 프레임 (Open Reading Frame) 및 41% G-C의 게놈 DNA를 함유하는 29,727개의 뉴클레오티드의 게놈을 갖는다. Id. 계통발생적 분석은 SARS-CoV가 이제까지 공지된 3가지 군의 코로나바이러스와는 다른 새로운 군의 코로나바이러스를 나타낸다는 것을 보여준다. Id. 세계 다른 구역에서 감염된 환자들로부터 단리된 SARS-CoV의 서열분석은 이러한 별개의 그룹화를 확인시킨다. 문헌 [Marra, M.A., et al., Sciencexpress, Published online May 01, 2003; 10.1126/science.1085953]. 공지된 3개의 군과는 다르게, SARS-CoV는 상기 기재한 인간에서의 중증 질환을 일으킨다.

최근 연구는 SARS-CoV의 병독성을 시험하여 왔다. 세계 건강 기구에 따르면, SARS-CoV는 실온에서 적어도 1 내지 2일 동안 배설물에서 안정하며, 대략 4일 동안 설사 환자로부터의 대변에서 안정하다. 추가로, 세포-배양 상청액 중에서 SARS-CoV는 4 ℃ 및 -80 ℃에서 21일 후의 바이러스 농도가 최소로 감소하도록 안정하였으며, SARS-CoV는 세포-배양 상청액에서 2 일 동안 실온에서 안정한 바이러스 농도를 단지 1 로그 손실하였다. SARS-CoV는 일반적으로 사용되는 살균제 및 고정액에 감수성인 것으로 입증되었다. SARS의 안정성 및 내성에 대한 WHO 데이타. 그러나, 상기 데이타는 SARS-CoV가 인간 숙주의 외부에서 연장된 기간 동안 병독성을 유지할 수 있다는 것을 강하게 제안한다.

SARS-CoV외에, 다른 감염원이 SARS에 관련되어 있는 것으로 추측된다. 예를 들어, 인간 메타뉴모바이러스 (metapneumovirus)를 또한 SARS를 앓는 환자로부터 단리하였다. 문헌 [Poutanen et al., New England Journal of Medicine, published online March 31, 2003, www.nejm.org]. 병원소의 조합이 SARS의 원인이 될 수 있다. 또한, SARS가 2차 병원소 또는 다중 2차 병원소들에 의한 기회 감염을 포함하는 것이 가능하다.

2003년 3월 25일 현재, 미국의 질환 제어 및 예방을 위한 센터는 "이 시점에서 구체적인 치료 권고사항을 마련할 수 없다"고 진술하였다. [CDC SARS Treatment, www.cdc.gov/ncidod/sars/treatment]. 현재 홍콩에서 투여되는 스테로이드 및 항바이러스 제제인 리바비린 (ribavirin)의 조합물인 하나의 치료제는 비효과적이며, 심지어는 환자에게 위험한 것으로 평가되었다. 문헌 [D. Cyranoski, Nature, 423:4 (2003)]. 다른 시도된 치료법은 항생제 또는 오셀타미비르 (oseltamivir)의 투여를 포함하였다. 문헌 [Poutanen et al., New England Journal of Medicine, published online March 31, 2003, www.nejm.org]. 효과적인 치료의 부재에서, 의료진은 SARS를 앓고 있는 환자를 치료하는데 보조적인 조치, 예컨대 정맥내 (IV) 수액, 산소 및 필요한 경우 기계적 환기 및 삽관법을 사용하는 것을 제한받는다.

다양한 조치가 SARS의 전파를 제어하기 위한 노력으로 시도되어 왔다. 이들 조치는 여행 제한/권고, 검역, 건강 관리 환경에서의 SARS-특이적 스크리닝 및 적절한 감염-제어 절차에 관한 공중 교육 증가를 포함한다. SARS의 전파를 제한하도록, 예방조치, 예컨대 호흡장치, 장갑, 고글 및 수술복을 임상학자 및 의료진에게 권고한다. 소수의 국가에서 이 질환의 전파가 최고점에 이르렀다고 보고된 반면, 그 밖의 나라, 예컨대 중국에서는 SARS가 제어되지 않고 계속해서 전파되고 있다.

전문가들은 이 질환에 대한 백신이 다수의 해 동안 사용가능할 것 같지 않다고 예상한다. 실제로, 미국 정부에 대한 감염성 질환의 최고 과학자들에 따르면, 백신이 일반적으로 사용가능해 지기 위해 "수년"의 가속된 연구가 필요할 것이다. 문헌 [Nesmith, New York Times Syndicate; Published online April 7, 2003; www.nlm.nih.gov/medlineplus/print/news/full story_-12280.html]. 추가로, 코로나바이러스의 빠른 돌연변이 능력이 유효한 백신의 개발에 실질적인 장애물을 제공할 것이다. 또한, 백신이 개발된다 할지하도, 백신은 환자의 면역성을 포함하여, 실질적으로 SARS에의 면역 반응을 악화시킬 수 있다. 따라서, 상기 질환은 세계 인구에 유의한 위협으로 남아있으며 상당한 시간 동안 위협적일 것으로 보인다.

따라서, SARS로 진단받은 환자, SARS와 관련된 감염원으로 감염된 환자, 예컨대 SARS-CoV로 감염된 환자 또는 SARS와 관련된 감염원에 노출되었거나 아마도 가까운 장래에 노출될 개체와 같은, SARS에 걸릴 절박한 위험에 있는 환자에 대한 효과적인 치료에 대한 요구가 존재한다.

<발명의 요약>

본원은 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)을 치료하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다.

본 발명의 하나의 실시양태는 제약상 허용되는 담체 중에 치료 유효량의 SARS-관련 염증성 사이토킨의 억제제를 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명의 또다른 실시양태는 가용성 재조합 SARS-관련 염증성 사이토킨 수 용체, SARS-관련 염증성 사이토킨에 대한 항체, SARS-관련 염증성 사이토킨의 활성에 영향을 미치는 소분자, SARS-관련 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합을 포함하는 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명의 또다른 실시양태는 가용성 재조합 TNF 수용체, TNF에 대한 항체, TNF의 활성에 영향을 미치는 소분자, TNF 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제1 물질; 및 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 억제제, 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 프로세싱에 영향을 미치는 바이러스-코딩된 프로테아제의 억제제, 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 적혈구응집소-에스테라제의 활성에 영향을 미치는 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 특이적 세포 표면 수용체에의 바이러스 결합의 억제제, 바이러스 유입과 관련된 바이러스 돌기 당단백질에 있어서의 수용체-유도된 구조적 변형의 억제제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 물질을 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명의 또다른 실시양태는 후보 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제를 무작위 위약-대조 연구에서 SARS와 관련된 감염원으로 감염된 환자군에 투여하고; 후보 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제의 유효성을 모니터링하고; 이에 따라 확인된 치료적으로 유효한 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제를 제약상 허용되는 담체와의 조성물로 포함시키는 것을 포함하는 방법으로 제조된 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명의 또다른 실시양태는 후보 종양 괴사 인자 (TNF) 억제제를 무작위 위약-대조 연구에서 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)과 관련된 감염원으로 감 염된 환자군에 투여하고; 후보 TNF 억제제의 유효성을 모니터링하고; 이에 따라 확인된 치료적으로 유효한 TNF 억제제를 제약상 허용되는 담체와의 조성물로 포함시키는 것을 포함하는 방법으로 제조된 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명의 또다른 실시양태는 치료 유효량의 SARS-관련된 염증성 사이토킨의 억제제를 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)을 앓는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자의 치료 방법을 제공한다.

또한, 본 발명의 또다른 실시양태는 치료 유효량의 TNF 억제제를 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)을 앓는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자의 치료 방법을 제공한다.

본 발명의 또다른 실시양태는 후보 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제를 무작위 위약-대조 연구에서 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)과 관련된 감염원으로 감염된 환자군에 투여하고; 후보 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제의 유효성을 모니터링하여 치료적으로 유효한 SARS-관련 염증성 사이토킨을 확인하는 것을 포함하는, SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제를 스크리닝하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명의 또다른 실시양태는 후보 종양 괴사 인자 (TNF) 억제제를 무작위 위약-대조 연구에서 SARS와 관련된 감염원으로 감염된 환자군에게 투여하고; 후보 TNF 억제제의 유효성을 모니터링하여 치료적으로 유효한 TNF 억제제를 확인하는 것을 포함하는, SARS 환자의 치료에 유효한 조성물을 스크리닝하는 방법을 제공한다.

본 발명은 SARS의 의심, 추정 및 확인된 증례를 비롯한 SARS와 관련된 병원성 물질로 감염된 인간을 비롯한 환자를 치료하기 위한 화합물, 조성물 및 방법을 제공한다. 본원의 목적을 위해, 용어 "질병", "질환", "의학적 상태", "비정상 상태" 등은 호흡기 곤란, 특히, 코로나바이러스에 의해 유발된 곤란의 경우, 이와 관련된 용어 "의학적 장애"와 교환되어 사용된다.

용어 "TNF 수용체" 및 "TNFR"은 천연 포유류 TNF 수용체와 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 단백질 또는 TNF 분자와 결합하고 TNF가 세포막 결합된 TNFR에 결합하는 것을 억제할 수 있는 아미노산 서열을 갖는 TNF 결합 단백질을 말한다.

TNFR 단백질 또는 단백질 조성물의 순도를 정의하는 본 명세서의 관점에서 사용된 용어 "단리된" 또는 "정제된"은 상기 단백질 또는 단백질 조성물이 자연적인 또는 내인성인 기원의 다른 단백질이 실질적으로 없고, 생성 과정의 단백질 오염물 잔기를 약 1 질량% 미만으로 함유하는 것을 의미한다. 그러나, 이러한 조성물은 안정화제, 카더 (carder), 부형제 또는 공동-치료제로서 다른 단백질을 함유할 수 있다. TNFR은 은 염색법에 의해 폴리아크릴아미드 겔에서 단일 단백질 밴드로서 검출가능한 경우 단리된다.

본원에 사용되는 "재조합"은 단백질이 재조합 (예를 들어, 미생물 또는 포유류) 발현 시스템으로부터 유래된 것을 의미한다. "미생물"은 세균 또는 진균 (예를 들어, 효모) 발현 시스템에서 제조된 재조합 단백질을 말한다. 생성물로서, "재조합 미생물"은 천연 내인성 물질이 본질적으로 없는 미생물 발현 시스템에서 생성된 단백질로 정의한다. 대부분의 세균 배양물, 예를 들어, 이. 콜라이 (E. coli)에서 발현된 단백질은 글리칸이 없을 것이다. 효모에서 발현된 단백질은 포유류 세포에서 발현된 단백질과는 상이한 글리코실화 패턴을 가질 것이다.

TNF 수용체의 특징으로서 명세서 전반에 사용된 "생물학적으로 활성인"은 특정 분자가 본원에 개시한 본 발명의 실시양태와 충분한 아미노산 서열 유사성을 공유하여 검출가능한 양의 TNF를 결합시키고, 예를 들어, 하이브리드 수용체 구축물의 성분으로서의 TNF 자극물을 세포로 이동시킬 수 있거나, 또는 자연적인 (즉, 비-재조합) 공급원으로부터의 TNFR에 대해 증가된 항-TNFR 항체와 가교-반응할 수 있는 것을 의미한다. 바람직하게는, 본 발명의 범주에 속하는 생물학적으로 활성인 TNF 수용체는 표준 결합 분석에서 수용체 nmole 당 TNF를 0.1 nmole 이상, 바람직하게는 수용체 nmole 당 TNF를 0.5 nmole 이상 결합시킬 수 있다.

본원에 사용되는 용어 "항원 결합 영역"은 항원과 상호작용하는 아미노산 잔기를 함유하고, 항체가 항원에 대한 이의 특이성 및 친화성을 갖도록 하는 항체 분자의 일부를 말한다. 항체 영역은 항원-결합 잔기의 적절한 구조를 유지하는데 필요한 "프레임워크" 아미노산 잔기를 포함한다.

본원에 사용되는 용어 "키메라 항체"는 1가, 2가 또는 다가 이뮤노글로불린을 포함한다. 1가 키메라 항체는 키메라 L 쇄와 이황 가교를 통해 연결된 키메라 H 쇄에 의해 형성된 이량체 (HL)이다. 2가 키메라 항체는 1개 이상의 이황 가교를 통해 연결된 2개의 HL 이량체에 의해 형성된 4량체 (H₂L₂)이다. 또한, 다가 키메라 항체는 예를 들어 결집시키는 C_H 영역 (예를 들어, IgM H 쇄 또는 μ 쇄로부터 유래됨)를 사용하여 생성될 수 있다.

본원에 사용되는 표현 "SARS 환자"는 SARS를 앓는 것으로 확인되거나, 역학 인자를 기초로 SARS의 추정 또는 의심 증례로서 분류될 수 있는 인간과 같은 포유류 환자를 말한다. SARS 환자는 SARS로 진단된 환자, SARS와 관련된 감염원 (병원체) (예를 들어, SARS-CoV)으로의 감염에 대해 시험 양성인 환자, 역학 인자를 기초로 SARS를 앓는 것으로 의심되는 환자 또는 SARS에 걸릴 절박한 위험에 있는 환자 (예를 들어, 노출되었거나, 가까운 장래에 SARS에 노출될 가능성이 있는 환자)를 포함한다. 용어 "SARS 환자"는 표현 "SARS를 앓는 환자", "SARS에 감염된 환자", "SARS를 갖는 환자", "SARS를 겪는 환자" 및 그 밖의 표현들과 본원에서 교환적으로 사용된다.

본원에 사용되는 문구 "치료 유효량"은 적어도 치료를 받는 개체에서 감염의 임상적인 충격을 감소시키는 반응을 생성시키는 각각의 단일 투여량 (연속 투여의 일부로서)에서 포유류 숙주 (바람직하게는 인간)에게 투여되는 양을 말한다. 이것은 최소한 병원소 부하의 감소로부터 감염의 예방까지의 범위일 수 있다. 이상적으로는, 치료된 개체는 감염의 보다 심각한 임상 징후를 나타내지 않을 것이다. 투여량은 개체의 구체적인 상태에 따라 다를 수 있다. 투여하는 구체적인 양은 통상적인 시험에서 결정되거나, 다르게는 본원에 제공된 지시를 기초로, 당업자에게 공지된 방법으로 결정될 수 있다.

본원에 사용되는 문구인, 치료제의 "치료 유효량의 투여"는 장애의 중증도를 반영하는 하나 이상의 지표에서 기저선을 초과하는 지속적인 향상을 유도하는데 충분한 양으로, 충분한 시간 동안 환자를 상기 치료제로 치료하는 것을 의미한다. 향상은 환자가 1 주일 이상 이격된 적어도 2회 이상에서의 향상을 나타내는 경우 "지속적"인 것으로 고려된다. 향상의 정도는 징후 또는 증후에 기초로 측정되고, 측정은 환자에게 실시되는 질문서, 예컨대 삶의 질 질문서를 사용할 수 있다. 본원에 사용되는 용어 "종양 괴사 인자" 또는 "TNF"는 TNF-α 및(또는) TNF-β를 말한다.

사이토킨은 항원에 의해 활성화될 때, 세포에 의해 방출되는 단백질 분자로, 세포-대-세포 통신에 관여하여 백혈구 상의 특이적 세포-표면 수용체와의 상호작용을 통해 면역 반응에 대해 향상 매개자로서 작용하는 것으로 여겨진다. 사이토킨은 인터류킨, 림포킨, 인터페론 및 종양 괴사 인자 (TNF)를 비롯한 여러 상이한 유형이 있다.

단핵구 및 대식세포는 내독소 또는 다른 자극물에 대한 반응에서 종양 괴사 인자-α (TNFα) 및 종양 괴사인자-β (TNFβ)로 공지된 사이토킨을 분비한다. TNF-α는 17 kD의 단백질 서브유닛의 가용성 동종삼량체이다 (문헌 [(Smith, et al., J. Biol. Chem. 262:6951-6954 (1987)]). TNF의 막-결합된 26 kD의 전구체 형태가 또한 존재한다 (문헌 [Kriegler, et al., Cell 53: 45-53 (1988)]). TNF의 검토를 위해, 문헌 [Beutler, et al., Nature 320:584 (1986), Old, Science 230:630 (1986)] 및 [Le, et al., Lab. invest. 56:234]을 참조한다.

단핵구 또는 대식세포 이외의 세포 또한 TNF-α를 생성한다. 예를 들어, 인간 비-단핵구성 종양 세포주는 TNF를 생성하고 (문헌 [Rubin, et al., J. Exp. Med. 164:1350 (1986)]; [Spriggs, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:6563 (1987)]), CD⁴+ 및 CD⁸+ 말초 혈액 T 림프구 및 일부 배양된 T 및 B 세포주 (문헌 [Cuturi, et al., J. Exp. Med. 165:1581 (1987)]; [Sung, et al., J. Exp. Med. 168:1539 (1988)]) 또한 TNF-α를 생성한다.

TNF는 조직 손상을 일으키는 전염증성 작용, 예컨대 혈관 내피 세포에 대한 예비혈액응고 활성 유도 (문헌 [Pober, et al., J. Immunol. 136:1680 (1988)]), 호중구 및 림프구의 부착 증가 (문헌 [Pober, et al., J. Immunol. 138:3319 (1987)]), 및 대식세포, 호중구 및 혈관 내피 세포로부터의 혈소판 활성화 인자의 방출 자극 (문헌 [Camussi, el al., J. Exp. Med. 166:1390 (1987)])을 일으킨다.

최근 증거는 TNF를 감염 (문헌 [Cerami, et al., Immunol. Today 9:28 (1988)]), 면역 장애, 신생물 병리 (문헌 [Oliff, et al., Cell 50: 555 (1987)]), 자가면역 병리 및 이식-대 숙주 병리 (문헌 [Piguet, et al., J. Exp. Med. 166:1280 (1987)])와 관련시킨다. TNF의 암 및 감염성 병리와의 관련이 숙주의 이화성 상태과 종종 관련된다.

또한, TNF는 열, 권태감, 식욕부진 및 악액질을 포함하는 그람-음성 패혈증 및 내독소 쇼크에서 중추적인 역할을 수행한다 (문헌 [Michie, et al., Br. J. Surg. 76:670-671 (1989)]; [Debets, et al., Second Vienna Shock Forum, p.463-466 (1989)]; [Simpson, et al., Crit. Care Clin. 5:27-47 (1989)]). 내독소는 TNF 및 기타 사이토킨의 단핵구/대식세포 생성 및 분비를 강하게 활성화시킨다 (문헌 [Kornbluth, et al., J. Immunol. 137:2585-2591 (1986)]). TNF 및 기타 단핵구-유래된 사이토킨은 내독소에 대한 대사 및 신경호르몬 반응을 매개한다 (Michie, et al., New. Engl. J. Med. 318:1481-1486 (1988)]). 인간 지원자에게의 내독소 투여는 열, 빈맥, 대사율 증가 및 스트레스 호르몬 방출을 비롯한 인플루엔자-유사 증후를 갖는 급성 질병을 발생시킨다 (문헌 [Revhaug, et al., Arch. Surg. 123:162-170 (1988)]). TNF 순환은 그람-음성 패혈증을 앓고 있는 환자에서 증가된다 (문헌 [Waage, et al., Lancet 1:355-357 (1987)]; [Hammerle, et al., Second Vienna Shock Forum p.715-718 (1989)]; [Debets, et al., Crit. Care Med. 17:489-497 (1989)]; [Calandra, et al., J. Infect. Dis. 161:982-987 (1990)]).

hTNF의 추정되는 수용체 결합 위치는 문헌 [Eck and Sprang, J. Biol. Chem. 264(29), 17595-17605 (1989)]에 개시되었는데, 상기 문헌의 저자는 아미노산 11-13, 37-42, 49-57 및 155-157로 이루어진 TNF-α의 수용체 결합 위치를 확인하였다. PCT 공개 번호 제WO 91/02078호 (1991)는 다음의 에피토프를 갖는 모노클로날 항체에 결합할 수 있는 TNF 리간드를 개시하고 있다: 아미노산 1-20, 56-77 및 108-127 중 1개 이상; 1-20, 56-77, 108-127 및 138-149 중 2개 이상; 1-18, 58-65, 115-125 및 138-149 모두; 1-18 및 108-128 모두; 56-79, 110-127 및 135- 또는 136-155 모두; 1-30, 117-128 및 141-153 모두; 1-26, 117-128 및 141-153 모두; 22-40, 49-96 또는 49-97, 110-127 및 136-153 모두; 12-22, 36-45, 96-105 및 132-157 모두; 1-20 및 76-90 둘 다; 22-40, 69-97, 105-128 및 135-155 모두; 22-31 및 146-157 모두; 22-40 및 49-98 모두; 22-40, 49-98 및 69-97 중 1개 이상, 22-40 및 70-87 모두.

TNF-α 및 근접하게 관련된 사이토킨, TNF-β (림프독소)의 다수의 생물학적 효과는 2개의 TNF 막횡단 수용체들 (둘 다가 모두 클로닝됨)에 의해 매개된다. p55 수용체 (또한 TNF-R55, TNF-RI 또는 TNFR-α로 지칭됨)는 신호를 전달하여 TNF-α의 세포독성, 항바이러스성 및 증식성 활성을 일으키는 것으로 보여지는 55 kDa의 당단백질이다. p75 수용체 (또한 TNF-R75, TNF-RII 또는 TNFR-α로서 지칭됨)는 또한 세포독성 및 증식성 신호 뿐 아니라 M-CSF의 분비를 일으키는 신호를 전달하는 것으로 보여지는 75 kDa의 당단백질이다. 추가 논의를 위해, 문헌 [Aderka, et al., lsrl. J. Med, Sci. 28:126-130 (1992)]; [Seckinger, et al., J. Exp. Med. 167:1511-1516 (1988)]; [Engelmann, et al., J. Biol. Chem. 264:11974-11980 (1989)]; [Loetscher, et al., Cell 61:351-359 (Apr. 20, 1990)]; [Schall et al., Cell 61:361-370 (Apr. 20, 1990)]; [Nophar, et al., EMBO J. 9(10):3269-3278 (1990)]; [Engelmann, et al., J. Biol. Chem. 265(3):1531-1536 (1990)]; [Engelmann, et al., J. Biol. Chem. 264(20):11974-11980 (1989)]; 유럽 특허 공개 번호 제0 433 900 A1호; PCT 공개 번호 제WO 92/13095호; 유럽 특허 공개 번호 제0 526 905 A2호; PCT 공개 번호 제WO 92/07076호; 유럽 특허 공개 번호 제0 412 486 A1호; 유럽 특허 공개 번호 제0 398 327 A1호; 유럽 특허 공개 번호 제0 308 378 A2호; 미국 재허여 제36,755호; 및 미국 특허 제5,395,760호 및 동 제5,605,690호를 참조한다.

다양한 질환을 치료하기 위한 TNF의 억제제의 사용이 개시되어 왔다. 특히, 감염성 질환의 영역에서, TNF의 억제제를 사용한 패혈증의 치료가 시도되어 왔다. 이러한 패혈증을 치료하는 시도는 성공하지 못했다, 그러나, TNF의 억제제는 예상치 않게 새롭게 출현한 감염성 질환인 SARS를 치료하는데 효과적이다.

본 발명은 SARS를 치료하는데 효과적인 조성물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 SARS 치료용 화합물 및 조성물, SARS를 치료하는데 유효한 화합물 및 조성물을 확인하는 방법 및 SARS를 치료하기 위한 방법에서의 본 화합물의 용도에 관한 것이다.

실시에 따라, 본 발명은 제약상 허용되는 담체 중에 치료 유효량의 SARS-관련 염증성 사이토킨의 억제제를 포함한다. 바람직하게는, SARS-관련 염증성 사이토킨의 억제제는 가용성 재조합 SARS-관련 염증성 사이토킨 수용체, SARS-관련 염증성 사이토킨에 대한 항체, SARS-관련 염증성 사이토킨의 활성에 영향을 미치는 소분자, SARS-관련 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합이다. 보다 바람직하게는, SARS-관련 염증성 사이토킨의 억제제는 가용성 재조합 수용체이다. SARS-관련 염증성 사이토킨 수용체 억제제는 바람직하게는 하기 기재되는 본 발명의 스크리닝 방법에 따라 확인된다. 본원에서 제공되는 지시를 기초로 하여, 당업자는 본 발명의 실시에 따른 이러한 화합물 또는 조성물을 용이하게 확인할 수 있을 것이다.

본 발명의 실시에 따라, 본 발명의 조성물은 제약상 허용되는 담체 중의 치료 유효량의 염증성 사이토킨의 억제제 및 제약상 허용되는 담체 중의 치료 유효량의 항-바이러스 화합물을 포함하는 조성물을 포함한다.

본 발명의 또다른 실시에 따라, 본 발명의 조성물은 가용성 재조합 TNF 수용체, TNF에 대한 항체, TNF의 활성에 영향을 미치는 소분자, TNF 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제1 물질을 포함한다. 제1 물질은 임의로 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 억제제, 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 프로세싱에 영향을 미치는 바이러스-코딩된 프로테아제의 억제제, 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 적혈구응집소-에스테라제의 활성에 영향을 미치는 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 특이적 세포 표면 수용체에의 바이러스 결합의 억제제, 바이러스 유입과 관련된 바이러스 돌기 당단백질에서의 수용체-유도된 구조적 변형의 억제제 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제2 물질과 합할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 후보 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제를 무작위 위약-대조 연구에서 SARS와 관련된 감염원으로 감염된 환자군에 투여하고; 후보 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제의 유효성을 모니터링하는 것을 포함하는 방법으로 제조된 조성물을 고려한다. 바람직하게는, 무작위 위약-대조 연구는 맹검 위약-대조 연구 또는 이중 맹검 위약-대조 연구이다. 또한, 본 발명은 후보 종양 괴사 인자 (TNF) 억제제를 무작위 위약-대조 연구에서 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)과 관련된 감염원으로 감염된 환자군에 투여하고; 후보 TNF 억제제의 유효성을 모니터링하는 것을 포함하는 방법으로 제조된 조성물을 고려한다.

가용성 재조합 TNF 수용체

실시양태에 따라, 본 발명의 조성물은 가용성 TNF 수용체, 바람직하게는 TNFR-Ig를 포함한다. 제I형 TNFR (TNFRI) 및 제II형 TNFR (TNFRII)인 2개의 상이한 유형의 TNFR가 존재하는 것으로 공지되어 있다. 성숙한 전장 인간 TNFRII는 약 75 내지 80 킬로달톤 (kDa)의 분자량을 갖는 당단백질이다. 성숙한 전장 인간 TNFRI는 약 55 내지 60 킬로달톤 (kDa)의 분자량을 갖는 당단백질이다. 본 발명의 바람직한 TNFR은 가용성 형태의 TNFRI 및 TNFRII 뿐 아니라 가용성 TNF 결합 단백질이다.

가용성 TNFR 분자는 예를 들어 20개 이상의 아미노산을 갖고, 적어도 TNFRI, TNFRII 또는 TNF 결합 단백질과의 공통적인 생물학적 활성을 나타내는 천연 단백질의 유사체 또는 서브유닛을 포함한다. 가용성 TNFR 구축물은 막횡단 영역이 결여되어 있으나 (세포로부터 분비됨), TNF에 결합하는 능력을 보유한다. 다양한 생등가성 단백질 및 아미노산 유사체는 천연 TNFR의 세포외 영역의 전체 또는 일부에 상응하는 아미노산 서열을 갖는다.

등가의 가용성 TNFR은 하나 이상의 치환, 결실 또는 부가에 의해 이들 서열과 다르고, TNF에 결합하는 능력 또는 세포 표면 결합된 TNF 수용체 단백질을 통한 TNF 신호 전달 활성을 억제하는 능력을 보유한 폴리펩티드를 포함한다. 유사한 결실은 muTNFR을 생성할 수 있다. TNF 신호 전달 활성의 억제는 재조합 TNFR DNA를 세포에 형질감염시켜 재조합 수용체 발현을 수득하여 측정할 수 있다. 이어서, 세포를 TNF와 접촉시키고, 생성된 대사성 효과를 평가한다. 효과가 리간드의 작용에 공헌가능한 것인 경우, 재조합 수용체는 신호 전달 활성을 갖는다. 폴리펩티드가 신호 전달 활성을 갖는지 여부를 측정하기 위한 예시적인 절차가 문헌 [Idzerda et. al., J. Exp. Med. 171:861 (1990)]; [Curtis et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:3045 (1989)]; [Prywes et al., EMBO J. 5:2179 (1986)] 및 [Chou et al., J. Biol. Chem. 262:1842 (1987)]에 개시되어 있다. 별법으로, 내인성 TNF 수용체를 발현하고, TNF에 검출가능한 생물학적 반응을 갖는 1차 세포 또는 세포주를 또한 사용할 수 있다.

본원에서 사용되는 TNFR 유사체에 대한 명명법은 hu (인간의 경우) 또는 mu (뮤린의 경우) 둘 다에 의해 접두되고, Δ (결실을 지정하기 위함) 및 C-말단 아미노산의 수가 이어지는 통상의 단백질 (예를 들어, TNFR)의 명명법을 따른다. 예를 들어, huTNFRΔ 235는 C-말단 아미노산으로서 Asp235를 갖는 인간 TNFR을 말한다. 임의의 인간 또는 뮤린 종의 지정이 없는 경우, TNFR은 유전적으로 포유류 TNFR을 말한다. 유사하게, 결실 돌연변이에 대한 임의의 구체적인 지정이 없는 경우, 용어 TNFR은 TNFR 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 및 유사체를 비롯한, 모든 유형의 TNFR을 의미한다.

바람직한 실시양태에서, 본원에 기재된 제약상 허용되는 조성물의 유형으로 투여될 수 있는 TNFR-Ig는 TNFR:Fc이다. 본원에 기재된 질환은 경우에 따라 다른 투여 경로가 사용될 수 있지만, 피하 주사으로 주 1회 이상 TNFR:Fc를 투여하여 치료될 수 있다. 성인 인간 환자를 치료하기 위한 하나의 예시적인 처방에서, TNFR:Fc 25 mg을 피하 주사로 1주 이상, 바람직하게는 4주 이상 주 2회 또는 주 3회 투여한다. 별법으로, 5 내지 12 mg/㎡의 투여량 또는 50 mg의 동일 투여량을 1주 이상 주 1회 또는 2회 피하 주사한다. 다른 실시양태에서, SARS는 서방형인 TNFR:Fc, 예컨대 생적합성 중합체 중에 캡슐화된 TNFR:Fc, 생적합성 중합체 (예를 들어, 국소 적용된 수화겔)와 혼합된 TNFR:Fc 및 반투과성 임플란트 중에 포위된 TNFR:Fc로 치료한다.

본원에 기재된 질환을 치료하는데 사용되는 다양한 그 밖의 의약을 TNF-α 억제제, 예컨대 TNFR:Fc를 포함하는 조성물과 동시에 투여할 수 있다. 이러한 의약은 NSAID; DMARD; 진통제; 국소 스테로이드; 전신 스테로이드 (예를 들어, 프레드니손); 기타 사이토킨; 염증성 사이토킨의 길항제; T 세포 표면 단백질에 대한 항체; 경구 레티노이드; 살리실산; 및 히드록시우레아를 포함한다. 상기 조합물에 적합한 진통제는 아세트아미노펜, 코데인, 프로폭스펜 납실레이트, 옥시코돈 히드로클로라이드, 히드로코돈 비타르트레이트 및 트라마돌을 포함한다. 상기 조합물에 적합한 DMARD는 아자티오프린, 시클로포스파미드, 시클로스포린, 히드록시클로로퀸 술페이트, 메토트렉세이트, 레플루노미드, 미노시클린, 페니실라민, 술파살라진, 경구 금, 금 나트륨 티오말레이트 및 아우로티오글루코스를 포함한다. 본 조합물 치료에 적합한 NSAID는 살리실산 (아스피린) 및 살리실레이트 유도체; 이부프로펜; 인도메타신; 셀레콕시브 (CELEBREX, 파마시아 (Pharmacia) 및 화이자 (Pfizer)); 로폭시브 (VIOXX, 머크 앤 코. 인크. (Merck & Co. Inc.)); 케토롤락; 남부메톤; 피록시캄; 나프록센; 옥사프로진; 술린다크; 케토프로펜; 디클로페나크; 및 기타 COX-1 및 COX-2 억제제, 프로핀산 유도체, 아세트산 유도체, 카르복실산 유도체, 카르복실산 유도체, 부티르산 유도체, 옥시캄, 피라졸 및 피라졸론을 포함한다 (신규 개발된 항 염증제 포함).

염증성 사이토킨에 대한 길항제를 TNFR:Fc와 동시에 투여하는 경우, 상기 길항제에 적합한 표적은 TGFβ, II-6 및 II-8을 포함한다..

추가로, TNFR:Fc는 국소 스테로이드, 전신 스테로이드, 염증성 사이토킨의 길항제, T 세포 표면 단백질에 대한 항체, 메토트렉세이트, 시클로스포린, 히드록시우레아 및 술파살라진과 조합하여 사용할 수 있다.

적절한 투여량을 동물의 체중에 따라 결정할 수 있다. 예를 들어, 0.2 내지 1 mg/kg의 투여량을 사용할 수 있다. 다르게는, 투여량을 동물의 표면 영역에 따라 결정할 수 있는데, 예시적인 투여량의 범위는 0.1 내지 20 mg/㎡, 보다 바람직하게는, 5 내지 12 mg/㎡이다. 작은 동물, 예컨대 개 또는 고양이의 경우, 적합한 투여량은 0.4 mg/kg이고, 바람직한 실시양태에서, TNFR:Fc (바람직하게는, 환자와 동일한 종으로부터 유래된 유전자로부터 구축됨) 또는 또다른 가용성 TNFR 모방체는 동물의 증상이 향상될 때까지 주 1회 이상 주사 또는 그 밖의 적합한 경로로 투여한다.

TNF 길항제 단백질을 SARS를 치료하기 위한 목적으로 포유류, 바람직하게는 인간에 투여한다. 인터류킨, 예를 들어 IL-1, IL-2 및 IL-6은 TNF를 생성하는 일차적인 역할로 인하여, IL-1R 및(또는) IL-2R과 조합하여 TNFR을 사용한 조합 치료법은 TNF-α와 관련된 임상 징후의 치료에 바람직할 수 있다. 인간의 치료에서, 가용성 인간 TNFR이 바람직하다. 제I형 IL-1R 또는 제II형 IL-1R 둘 다 또는 이들의 조합을 본 발명에 따라 사용하여 TNF-의존 염증성 질환, 예컨대 관절염을 치료할 수 있다. 다른 유형의 TNF 결합 단백질을 유사하게 사용할 수 있다.

본 발명은 예를 들어, 생성되는 TNF의 양을 감소시키거나, 또는 TNF가 이의 세포 표면 수용체와 결합하는 것을 방지함으로써 유효량의 내인성의 생물학적으로 활성인 TNF를 감소시킬 수 있는 가용성 TNF 길항제를 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 이러한 결합을 억제시킬 수 있는 길항제는 TNF의 수용체-결합 펩티드 단편, 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 TNF 생성을 억제하는 리보자임, TNF에 대해 직접적인 항체 및 TNF에 대한 수용체의 전체 또는 일부, 또는 유전적으로 변형된 뮤테인을 포함하는 이의 변형된 변이체, 다량체 형태 및 서방성 제형을 포함하는 재조합 단백질을 포함한다.

본 발명의 바람직한 실시양태는 TNF 길항제로서 가용성 TNFR을 사용한다. TNF의 가용성 형태는 단량체, 융합 단백질 (또한 "키메라 단백질"로 불림), 이량체, 삼량체 또는 그 이상의 다량체를 포함할 수 있다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 가용성 TNFR 유도체는 환자의 체내에서 TNF와 결합하는 75 kDa의 TNFR 또는 55 kDa의 TNFR을 모방한 것이다. 가용성 TNFR 모방체는 TNFR p55 또는 p75 또는 이의 단편으로부터 유도될 수 있다. 또한, 예를 들어, 제WO 99/04001에 기재된 TNFR과 같은, p55 및 p75가 아닌 TNFR이 본원에 기재된 의학적 장애를 치료하기 위한 가용성 화합물을 유도하는데 유용하다. TNFR 모방체를 구축하는데 사용되는 가용성 TNFR 분자는 예를 들어, 천연 TNFR의 막횡단 영역이 없고, TNF와 결합할 수 있는 적어도 20개 이상의 아미노산을 갖는 천연 TNFR의 유사체 또는 단편을 포함한다. TNFR로부터 유도된 길항제는 세포 표면 상의 수용체와 TNF에 대해 경쟁하여 TNF가 세포와 결합하는 것을 억제하고, 이에 따라 이의 생물학적 활성화를 표시를 하는 것을 방지한다. 가용성 TNFR의 TNF 또는 LT (TNFβ와 교환적으로 사용되는 림프독소-α)에 대한 결합을 ELISA 또는 그 밖의 편리한 검정법을 사용하여 분석할 수 있다. 본 발명은 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서, 가용성 TNF 수용체의 용도를 제공한다.

본 발명의 가용성 TNFR 폴리펩티드 또는 단편은 제2 폴리펩티드와 융합하여 키메라 단백질을 형성할 수 있다. 제2 폴리펩티드는 TNF-α 또는 LT-α 분자와 결합하여 세포-결합된 수용체에의 결합을 방지할 수 있는 이량체, 삼량체 또는 그 이상의 다량체의 키메라 단백질에 의해 자발적인 형성을 촉진할 수 있다. 길항제로서 사용하는 키메라 단백질은 예를 들어, 항체 분자의 불변 영역으로부터 유래된 분자 및 TNFR의 세포외 부분을 포함한다. 이러한 분자는 본원에서 TNFR-Ig 융합 단백질로서 지칭된다. 인간 및 기타 포유류에서 질환을 치료하는 적합한 바람직한 TNFR-Ig 융합 단백질은 재조합 TNFR:Fc이며, 본원에 사용되는 용어 "에타네르셉트(etanercept)"로 지칭되며, 이는 p75 TNF-α 수용체의 세포외 부분의 2개의 분자의 이량체인데, 여기서 각각의 분자는 인간 IgG₁의 235개의 아미노산 Fc 부분으로 이루어진다. 에타네르셉트는 현재 엔브렐^TM (ENBREL^TM) 상표명 하에 이뮤넥스 코포레이션 (Immunex Corporation)에 의해 시판된다. 혼입된 p75 수용체 단백질이 TNF-α 뿐 아니라 염증성 사이토킨 LT-α와 결합하기 때문에, 에타네르셉트는 TNF-α 뿐 아니라 LT-α의 경쟁적 억제제로서 작용할 수 있다. 이것은 LT-α를 억제할 수 없는 TNF-α에 직접적인 항체와 다른 점이다.

또한, 본 발명은 IgG의 Fc 영역과 융합된 55 kDa의 TNFR의 세포외 부분을 포함하는 화합물 및 이러한 분자를 함유하는 조성물 및 조합물을 사용한 치료를 포함한다. 또한, 예를 들어, 상기 TNFR로부터 유래된 가용성 TNFR-Ig를 비롯한 제WO 99/04001호에 기재된 TNFR과 같은 p55 및 p75 TNFR이 아닌 TNF-α 수용체 분자의 세포외 영역으로터 유래된 가용성 TNFR의 투여를 포함하는 치유적 방법을 포함한다. 기타 적합한 TNF-α 억제제는 인간화 항-TNF-α 항체, 애보트 래버러토리즈(Abbott Laboratories)로부터 후미라(HUMIRA)의 상표명 하에 시판되는 아달리무맙 (adalimumab), (크놀 파마슈티칼(Knoll Pharmaceutical)/바스프 (BASF)로부터 D2E7d의 상표명 하에 정식적으로 시판됨)을 포함한다. 본 발명의 조성물은 인플릭시맙 (또한, 레미케이드 (센토코르 인크.(Centocor Inc.)), 트로케이트 (호프만-라 로쉬 (Hoffmann-La Roche), RO-323555), 레플루노미드 (또한, 훽스트 마리언 로우셀(Hoechst Marion Roussel)로부터의 아라바(Arava)로 공지됨), 키네레트 (Kineret) (또한, 암젠, 인크. (Amgen, Inc.)로부터 아나킨라 (Anakinra)로 공지된 IL-1 수용체 길항제)의 하나 이상의 약물을 포함할 수 있다.

본 발명의 하나의 바람직한 실시양태에서, 서방형의 TNFR:Fc를 비롯한 서방형의 가용성 TNFR을 사용한다. 개시된 방법에 사용하는데 적합한 서방형은 서서히 용해되는 생적합성 중합체 (예컨대, 미국 특허 제6,036,978호에 기재된 알기네이트 미세입자 또는 미국 특허 제6,083,534호에 기재된 폴리에틸렌-비닐 아세테이트 및 폴리(락틱-글루콜산) 조성물) 중에 캡슐화된 TNFR, 중합체 (예컨대, 국소 적용된 수화겔)와 혼합된 TNFR 및(또는) 생적합성 반투과 임플란트 중에 포위된 TNFR을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 추가로, 본원에 기재한 치료법에 사용하기 위한 가용성 TNFR 제1형 및 제2형은 폴리에틸렌 글리콜과 접합되어 (PEG화), 이의 혈청 반감기를 연장하거나 단백질 전달을 향상시킬 수 있다.

소분자

본원에 기재된 질환을 치료하기에 적합한 다른 화합물은 소분자, 예컨대 탈리도미드 또는 탈리도미드 유사체, 펜톡시필린, 또는 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP) 억제제, 또는 다른 소분자를 포함한다. 적합한 MMP 억제제로는, 예를 들어 미국 특허 제5,883,131호, 동 제5,863,949호 및 동 제5,861,510호에 기재된 것 뿐만 아니라, 미국 특허 제5,872,146호에 기재된 머캅토 알킬 펩티딜 화합물이 있다. TNF 생산을 감소시킬 수 있는 다른 소분자로는, 예를 들어 미국 특허 제5,508,300호, 동 제5,596,013호 및 동 제5,563,143호에 기재된 분자가 있으며, 이 중 어느 하나를 TNF 억제제, 예컨대 가용성 TNFR 또는 TNF에 대한 항체와 함께 투여할 수 있다. 본원에 기재된 TNF-매개성 질환을 치료하기에 유용한 부가적인 소분자로는, 미국 특허 제5,747,514호, 동 제5,691,382호에 기재된 MMP 억제제 뿐만 아니라, 미국 특허 제5,821,262호에 기재된 히드록삼산 유도체가 있다. 또한, 본원에 기재된 질환은 포스포디에스테라제 IV 및 TNF 생산을 억제하는 소분자, 예컨대 치환된 옥심 유도체 (WO 96/00215), 퀴놀린 술폰아미드 (미국 특허 제5,834,485호), 아릴 푸란 유도체 (WO 99/18095) 및 헤테로비시클릭 유도체 (WO 96/01825; GB 2 291 422 A)를 사용하여 치료할 수 있다. TNF 및 IFNδ를 저해하는 티아졸 유도체 (WO 99/15524) 뿐만 아니라, TNF 및 다른 전염증성 사이토킨을 저해하는 크산틴 유도체 (예를 들어, 미국 특허 제5,118,500호, 동 제5,096,906호 및 동 제5,196,430호 참조)도 유용하다. 본원에 기재된 증상을 치료하기에 유용한 부가적인 소분자로는 미국 특허 제5,547,979호에 개시된 것이 있다.

안티센스 올리고뉴클레오티드

또한, 본 발명의 TNF 억제제는 표적화된 mRNA에 혼성화되어 폴리펩티드 번역을 방지함으로써 mRNA의 번역을 직접 차단하는 작용을 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 단독으로, 다른 TNF 억제제와 함께, 또는 동일한 증상을 치료하는데 사용되는 다른 제제와 함께, 본원에 개시된 임의의 의학적 장애를 치료하는데 사용하기 적합하다. 본 발명의 안티센스 분자는 TNF, TNF 수용체, 또는 TNF의 합성을 위한 대사 경로에서 작용하는 효소의 번역을 방해할 수 있다. 절대 상보성이 바람직하기는 하지만, 반드시 필요하지는 않다. 핵산의 일부분에 대해 "상보적인" 서열은, 본원에 나타낸 바와 같이, 핵산과 혼성화될 수 있을 정도로 충분한 상보성을 가져 안정한 이합체 (또는, 적절하게는 삼합체)를 형성하는 서열을 의미한다. 혼성화 능력은 상보성의 정도 및 안티센스 핵산의 길이 둘 모두에 따라 달라질 것이다. 메세지의 5' 말단 서열 (예를 들어, 5'의 번역되지 않은 서열까지)에 상보적이며 AUG 개시 코돈을 포함하는 올리고뉴클레오티드가 번역을 가장 효율적으로 억제해야 한다. 그러나, 표적화된 전사체의 5' 또는 3'의 번역되지 않은 비-코딩 영역에 상보적인 올리고뉴클레오티드도 사용할 수 있다. mRNA의 5'에서 번역되지 않은 영역에 상보적인 올리고뉴클레오티드는 AUG 출발 코돈의 보체를 포함해야 한다.

안티센스 핵산은 길이가 뉴클레오티드 6개 이상이어야 하며, 바람직하게는 길이가 뉴클레오티드 6 내지 약 50개의 범위인 올리고뉴클레오티드이다. 특정 측면에서, 올리고뉴클레오티드의 길이는 뉴클레오티드 10개 이상, 뉴클레오티드 17개 이상, 뉴클레오티드 25개 이상 또는 뉴클레오티드 50개 이상이다. 가장 바람직하게는, 이들은 18 내지 21개의 뉴클레오티드를 함유할 것이다.

안티센스 올리고뉴클레오티드의 주쇄는 체내에서 화학적으로 변형되어 올리고뉴클레오티드의 반감기를 연장시킬 수 있다. 상기 목적에 적합한 변형법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 상기 목적을 위해 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포트리에스테르, 아미노알킬포스포트리에스테르, 메틸 및 다른 알킬 포스포네이트, 다양한 포스포네이트, 포스피네이트 및 포스포라미데이트 등을 사용하는 방법을 기재하고 있는 미국 특허 제114,517호에 개시된 방법이 있다.

올리고뉴클레오티드는 단일-가닥 또는 이중-가닥 DNA 또는 RNA, 또는 이들의 키메라 혼합물 또는 유도체, 또는 변형된 유형일 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 염기 잔기, 당 잔기 또는 포스페이트 주쇄에서 변형되어, 예를 들어 분자의 안정성, 혼성화 등을 개선시킬 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 다른 부속된 군, 예컨대 펩티드 (예를 들어, 생체내에서 숙주 세포 수용체를 표적화시키는데 사용됨), 또는 세포막을 통한 수송을 용이하게 하는 제제 (예를 들어, 문헌 [Letsinger et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:6553-6556]; [Lemaitre et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. 84:648-652]; 1998년 12월 15일에 공개된 PCT 공개번호 WO 88/09810 참조), 또는 혼성화-유도된 절단제 또는 개재제 (예를 들어, 문헌 [Zon, 1988, Pharm. Res. 5:539-549] 참조)를 포함할 수 있다. 안티센스 분자는 표적화된 전사체를 발현하는 세포로 전달되어야 한다.

안티센스 올리고뉴클레오티드는 정맥내 또는 피하 주사를 비롯한 비경구 경로에 의해 투여될 수 있거나, 또는 경구 투여하기에 적합한 제제에 혼입시킬 수 있다. 안티센스 DNA 또는 RNA를 세포로 전달하기 위한 다수의 방법이 개발되었다. 예를 들어, 안티센스 분자를 조직 또는 세포 유도 부위에 직접 주입할 수 있거나, 또는 원하는 세포를 표적화시키도록 고안된 변형된 안티센스 분자 (예를 들어, 표적 세포 표면 상에서 발현된 수용체 또는 항원에 특이적으로 결합하는 펩티드 또는 항체에 연결된 안티센스 분자)를 전신 투여할 수 있다. 그러나, 내인성 mRNA의 번역을 저해하기에 충분한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 세포내 농도를 달성하기 어려운 경우도 있다. 따라서, 바람직한 접근법은 안티센스 올리고뉴클레오티드가 강한 중합효소 III 및 중합효소 II 프로모터에 의해 제어되는 재조합 DNA 구조물을 사용한다. 환자에서 표적 세포를 형질감염시키기 위해 상기 구조물을 사용하면 내생 표적 유전자 전사체와의 상보적 염기 결합이 형성되어 표적화된 mRNA의 번역을 방지하기에 충분한 양의 단일 가닥 RNA가 전사된다. 예를 들어, 이와 같은 벡터는 생체내에 도입되면 세포에 의해 흡수되어 안티센스 RNA의 전사를 유도할 수 있다. 이와 같은 벡터는 전사되어 원하는 안티센스 RNA를 생산할 수 있는 기간 동안 에피솜에 잔류하거나 염색체에 통합될 수 있다. 상기 벡터는 당업계의 표준 재조합 DNA 기술 방법에 의해 구축될 수 있다. 벡터는 포유동물 세포에서의 복제 및 발현에 사용되는 플라스미드, 바이러스, 또는 당업계에 공지된 기타의 것일 수 있다. TNF 상승과 연관된 질환을 치료하기에 적합한 안티센스 올리고뉴클레오티드는, 예를 들어 진성 당뇨병, 류마티스성 관절염, 접촉 민감증, 크론병, 다발성 경화증, 췌장염, 감염을 앓고 있는 동물 및 심장 이식한 동물 모델을 치료하기 위한 후보로서 올리고뉴클레오티드를 사용하는 것을 목적으로 하는 미국 특허 제6,080,580호에 기재된 항-TNF 올리고뉴클레오티드를 포함한다.

mRNA 전사체가 촉매에 의해 절단되도록 고안된 리보자임 분자는 또한 TNF, TNF 수용체, 또는 TNF 또는 TNFR 합성과 연관된 효소를 코딩하는 mRNA의 번역을 방지하는데 사용될 수 있다 (예를 들어, PCT WO 90/11,364; 미국 특허 제5,824,519호 참조). 상기 목적에 유용한 리보자임으로는 해머헤드 (hammerhead) 리보자임 (문헌 [Haseloff and Gerlach, 1988, Nature, 334:585-591]), RNA 엔도리보뉴클레아제 (이하, "세치-타입 (Cech-type) 리보자임"), 예컨대 테트라히메나 테르모필라 (Tetrahymena thermophila)에서 자연 발생되는 것 (IVS 또는 L-19 IVS RNA로 공지되어 있음) (예를 들어, WO 88/04300; 문헌 [Been and Cech, 1986, Cell, 47:207-216] 참조)이 있다. 리보자임은 (예를 들어, 안정성, 표적화 등을 개선시키기 위해) 변형된 올리고뉴클레오티드로 구성될 수 있으며, 표적 펩티드를 생체내에서 발현시키는 세포로 전달되어야 한다. 바람직한 전달 방법은, 강한 구성적 중합효소 III 또는 중합효소 II 프로모터의 제어하에 리보자임을 코딩하는 DNA 구조물을 사용함으로써, 형질감염된 세포가 내생 표적 mRNA를 파괴하기에 충분한 양의 리보자임을 생산하여 그의 번역을 억제하는 방법과 연관되어 있다.

본 발명의 실시에 따라, 안티센스 분자는 표적 바이러스의 유전자 서열에 상보적인 올리고데옥시뉴클레오티드 구조물을 함유한다. 바이러스 RNA에 상보적인 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드는 세포 배양물에서의 바이러스 복제를 억제하는 것으로 입증되었다. ISIS 2922는 CMV에 대한 잠재적인 항바이러스 활성을 갖는 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드로서, CMV 최초 전사 단위의 영역 2의 RNA에 상보적이며 단백질 합성을 억제한다. 이는 CMV 망막염에 대한 초자체내 (intravitre) 치료제로서 연구 중이다. 부작용으로는 유리체염 및 망막 색소 상피 반점이 있다.

별법으로, 표적 유전자의 조절 영역 (즉, 표적 유전자의 프로모터 및(또는) 인헨서)에 상보적인 데옥시리보뉴클레오티드 서열을 표적화시켜 표적 유전자의 전사를 방지하는 삼중 나선 구조를 형성함으로써, TNF 또는 TNFR 생산과 연관된 유전자의 발현을 감소시킬 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Helene, 1991, Anticancer Drug Des., 6(6), 569-584]; [Helene, et al., 1992, Ann. N.Y. Acad. Sci., 660, 27-36]; 및 [Maher, 1992, Bioassays 14(12), 807-815] 참조).

본 발명의 안티센스 RNA 및 DNA, 리보자임, 삼중 나선형 분자 등은, 예를 들어 고상 포스포라미디트 화학적 합성법을 비롯한 DNA 및 RNA 분자의 합성에 대해 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 당업계에 공지된 표준 방법, 예를 들어 자동 DNA 합성기 (예컨대, 바이오서치 (Biosearch), 어플라이드 바이오시스템즈 (Applied Biosystems) 등으로부터 시판되는 기기)를 이용하여 합성할 수 있다. 예시한 바와 같이, 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드는 문헌 [Stein et al., 1988, Nucl. Acids Res. 16:3209]에 기재된 방법에 의해 합성될 수 있으며, 메틸포스포네이트 올리고뉴클레오티드는 문헌 [Sarin et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:7448-7451]에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 별법으로, RNA 분자는 안티센스 RNA 분자를 코딩하는 DNA 서열의 시험관내 및 생체내 전사에 의해 생성될 수 있다. 상기 DNA 서열은 적합한 RNA 중합효소 프로모터, 예컨대 T7 또는 SP6 중합효소 프로모터가 혼입된 매우 다양한 벡터에 혼입될 수 있다. 별법으로, 안티센스 RNA를 구성적으로 또는 유도적으로 합성하는 안티센스 cDNA 구조물은 사용되는 프로모터에 따라 세포주에 안정하게 도입될 수 있다.

또한, 내생 표적 유전자의 발현은 표적화된 상동성 재조합을 이용하여 표적 유전자 또는 그의 프로모터를 비활성화시키거나 또는 "넉아웃 (knocking out)"시킴으로써 감소시킬 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Smithies, et al., 1985, Nature 317, 230-234]; [Thomas and Capeechi, 1987, Cell, 51, 503-512]; [Thompson, et al., 1989, Cell, 5, 313-321] 참조). 예를 들어, 내생 표적 유전자 (또는, 표적화 유전자의 코딩 영역 또는 조절 영역)에 대해 상동성인 DNA의 측면에 위치한 돌연변이, 비기능성 표적 유전자 (또는, 완전하게 관련되지 않은 DNA 서열)를 선별가능한 마커 및(또는) 역으로 선별가능한 마커와 함께 사용하거나 또는 이러한 마커없이 사용하여 표적 유전자를 생체내에서 발현시키는 세포를 형질감염시킬 수 있다. 표적화된 상동성 재조합을 통해 DNA 구조물을 삽입하면 표적 유전자가 비활성화된다. 상기 접근법은, ES (배아 줄기) 세포에 대한 변형법이 비활성 표적 유전자를 갖는 동물 자손을 생성하는데 사용될 수 있는 농업 분야 (예를 들어, 토마스 및 카페치 (Thomas and Capecchi; 1987) 및 톰슨 (Thompson; 1989)의 상기 문헌) 또는 "RNA 간섭 (RNA interference)" ("RNAi") 기술 (문헌 [Grishok A, Tabara H, and Mello C C, 2000, Science 287 (5462):2494-2497]), 또는 트랜스유전자의 도입 (문헌 [Dernburg et al., 2000, Genes Dev. 14(13):1578-1583])이 특정 표적 유전자의 발현을 억제하는데 사용되는 미생물 모델, 예컨대 꼬마선충 (Caenorhabditis elegans)에 특히 적합하다. 이러한 접근법은 재조합 DNA 구조물을 적절한 벡터, 예컨대 바이러스 벡터를 사용하여 생체내에서 필요한 부위에 직접 투여하거나 표적화시킴으로써 인간에서 사용가능하도록 개조시킬 수 있다.

항- TNF 항체

임의의 공지된 기술, 예컨대 효소에 의한 절단, 펩티드 합성 또는 재조합 기술 등에 의해 제공된, 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체 (mAb), 키메라 항체, 항-이디오타입 (항-Id) 항체, 가용성 또는 결합된 형태에서 표지될 수 있는 항체 뿐만 아니라 이들의 단편, 영역 또는 유도체가 본 발명에서 고려된다. 상기 본 발명의 항-TNF 항체는 TNF가 TNF 수용체와 결합하는 것을 억제하는 TNF의 일부분에 결합할 수 있다.

폴리클로날 항체는 항원으로 면역화시킨 동물의 혈청으로부터 유래된 항체 분자의 이종 집단이다. 모노클로날 항체는 항원에 대해 특이적인 항체의 실질적으로 동종인 집단을 함유하며, 이 집단은 실질적으로 유사한 에피토프 결합 부위를 함유한다. mAb는 당업자에게 공지된 방법에 의해 수득할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Kohler and Milstein. Nature 256:495-497 (1975)]; 미국 특허 제4,376,110호; 문헌 [Ausubel et al., eds., CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1987,1992)]; 및 [Harlow and Lane ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL Cold Spring Harbor Laboratory(1988)]; [Colligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1992,1993)] (상기 문헌들의 내용은 전부 본원에 참고로 포함된 것으로 간주함)을 참조한다. 상기 항체는 IgG, IgM, IgE, IgA, GILD, 및 이들의 임의의 하위군을 비롯한 임의의 이뮤노글로불린 군일 수 있다. 본 발명의 mAb를 생산하는 하이브리도마는 시험관내, 계내 또는 생체내에서 배양할 수 있다. 현재에는, 생체내 또는 계내에서 고 역가의 mAb를 생산하는 것이 바람직한 방법 또는 생산법이다.

키메라 항체는 상이한 동물 종으로부터 유래된 상이한 부분들을 갖는 분자, 예컨대 뮤린 mAb로부터 유래된 가변 영역 및 인간 이뮤노글로불린 불변 영역을 갖는 분자로, 일차적으로는 투여되었을 때 면역원성을 감소시키고 생상 수율을 증가시키기 위해 사용되며, 예를 들어 뮤린 mAb가 하이브리도마로부터 보다 많이 생성되지만 인간에서 보다 높은 면역원성을 갖는 경우에 인간 뮤린 키메라 mAb가 사용된다. 키메라 항체 및 이들의 생산 방법은 당업계에 공지되어 있다 (문헌 [Cabilly et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:3273-3277 (1984)]; [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (194)]; [Boulianne et al., Nature 312:643-646 (1984)]; [Cabilly et al., European Patent Application 125023 (published Nov. 14, 1984)]; [Neuberger et al., Nature 314:268-270 (1985)]; [Taniguchi et al., European Patent Application 17/496 (published Feb. 19, 1985)]; [Morrison et al., European Patent Application 173494 (published Mar. 5, 1986)]; [Neuberger et al., PCT Application WO 86/01533, (published Mar. 13, 1986)]; [Kudo et al., European Patent Application 184187 (published Jun. 11, 1986)]; [Morrison et al., European Patent Application 173494 (published Mar. 5, 1986)]; [Sahagan et al., J. Immunol. 137:1066-1074 (1986)]; [Robinson et al., International Patent Publication #PCT/US86/02269 (published May 7, 1987)]; [Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-3443 (1987)]; [Sun et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:214-218 (1987)]; [Better et al., Science 240:1041-1043 (1988)]; 및 [Harlow and Lane ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL Cold Spring Harbor Laboratory (1988)]).

TNF에 대한 폴리클로날 뮤린 항체는 문헌 [Cerami et al (EPO Patent Publication 0212489, Mar. 4, 1987)]에 개시되어 있다.

문헌 [Rubin et al. (EPO Patent Publication 0218868, Apr. 22, 1987)]은 인간 TNF에 대한 뮤린 모노클로날 항체, 상기 항체를 분비하는 하이브리도마, 상기 뮤린 항체를 생산하는 방법, 및 상기 뮤린 항체의 TNF 면역분석에 있어서의 용도를 개시하고 있다.

문헌 [Yone et al. (EPO Patent Publication 0288088, Oct. 26, 1988)]은 mAb를 비롯한 항-TNF 뮤린 항체, 및 병리학, 특히 가와사끼 (Kawasaki) 병리학, 및 박테리아 감염의 면역분석 진단에서의 이들의 유용성을 개시하고 있다.

다른 조사자들은 시험관내에서 중성화 활성을 갖는 재조합 인간 TNF에 특이적인 설치류의 mAb 또는 통상적인 mAb를 기재하고 있다 (문헌 [Liang, et al., (Biochem. Biophys. Res. Comm. 137:847-854 (1986)]; [Meager, et al., Hybridoma 6:305-311 (1987)]; [Fendly et al., Hybridoma 6:359-369 (1987)]; [Bringman, et al., Hybridoma 6:489-507 (1987)]; [Hirai, et al., J, Immunol. Meth. 96:57-62. (1987)]; [Moiler, et al., Cytokine 2:162-169 (1990)]).

TNF에 대한 중성화 항혈청 또는 mAb는 사람보다는 포유동물에서 불리한 생리학적 변화를 제거하고, 내독소혈증 및 균혈증 실험에서 치명적인 면역성 시험을 수행한 후의 사멸을 방지한다는 것이 밝혀졌다. 이러한 효과는, 예를 들어 설치류 치명성 분석 및 영장류 병리학 모델 시스템에서 입증되었다 (문헌 [Mathison, et al., J. Clin. Invest. 81:1925-1937 (1988)]; [Beutler, et al., Science 229:869-871 (1985)]; [Tracey, et al., Nature 330:662-664 (1987)]; [Shimamoto, et al., Immunol. Lett. 17:311-318 (1988)]; [Silva, et al., J. Infect. Dis. 162:421-427 (1990)]; [Opal et al., J. Infect. Dis. 161:1148-1152 (1990)]; [Hinshaw, et al., Circ. Shock 30:279-292 (1990)]).

본 발명의 항-TNF 항체는 하나 이상의 중쇄 불변 영역 (H_c), 중쇄 가변 영역 (H_v), 경쇄 가변 영역 (L_v) 및 경쇄 불변 영역 (L_c)을 포함할 수 있으며, 여기서 폴리클로날 Ab, 모노클로날 Ab, 이들의 단편 및(또는) 영역은 TNF의 일부분에 결합하여 하나 이상의 TNF 생물학적 활성을 억제하고(하거나) 중성화시키는 하나 이상의 중쇄 가변 영역(H_v) 또는 경쇄 가변 영역 (L_v)을 포함한다.

항원은, 부가적으로 상기 항원의 에피토프와 결합할 수 있는 항체를 생산하도록 동물을 유도할 수 있는 항체에 의해 결합될 수 있는 분자 또는 그의 일부분이다. 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다.

상기 언급된 특이적 반응은 항원이 그의 상응하는 항체와 고도로 선택적인 방식으로 반응하며, 다른 항원에 의해 재현될 수 있는 다수의 다른 항체와는 반응하지 않는다는 것을 나타낸다. 본 발명의 항-TNF 항체의 항체, 단편 및 영역과 결합하는 바람직한 항원은 hTNF-α (서열 1)의 아미노산 잔기 87 내지 108 중 하나 이상, 또는 잔기 59 내지 80 및 8 내지 108 중 둘 모두를 포함하는 아미노산 5개 이상을 포함한다. 본 발명의 항-TNF 항체의 항체, 단편 및 영역과 결합하는 바람직한 항원은 hTNF-α (서열 1)의 아미노산 11 내지 13, 37 내지 42, 49 내지 57 또는 155 내지 157의 아미노산을 포함하지 않는다.

에피토프는 하나 이상의 Ab의 항원 결합 영역에서 항체에 의해 인식되어 결합될 수 있는 임의의 분자의 특정 부분이다. 에피토프는 통상적으로 화학적으로 활성인 표면 분자 그룹, 예컨대 아미노산 또는 당 측쇄로 이루어져 있으며, 특정 삼차원 구조의 특징 뿐만 아니라 특정 하전 특징을 갖는다. "억제 및(또는) 중성화 에피토프"는 생체내, 시험관내 또는 계내에서, 바람직하게는 생체내에서, 항체에 의해 결합되었을 때 에피토프를 함유하는 분자 또는 미생물의 생물학적 활성 (예를 들어, TNF가 TNF 수용체와 결합되는 것)이 손실되는 에피토프를 나타낸다. 예를 들어, 상기 에피토프는 미국 특허 제6,277,969호 (그의 전문이 본원에 참고 문헌으로 포함된 것으로 간주함)에 개시된 것을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "키메라 항체"는 1가, 2가 또는 다가의 이뮤노글로불린을 포함한다. 1가 키메라 항체는 이황 가교를 통해 키메라 L 쇄와 연결된 키메라 H 쇄에 의해 형성된 이량체 (HL)이다. 2가 키메라 항체는 하나 이상의 이황 가교을 통해 연결된 2개의 HL 이량체에 의해 형성된 4량체 (H₂L₂)이다. 다가 키메라 항체는 또한, 예를 들어 응집하는 (예를 들어, IgM H 쇄 또는 μ 쇄로부터의) C_H 영역을 사용함으로써 생산될 수 있다.

본 발명의 뮤린 및 키메라 항체, 단편 및 영역은 각각의 이뮤노글로불린 중쇄 (H) 및(또는) 경쇄 (L)를 포함한다. 키메라 H 쇄는 TNF에 특이적인 비-인간 항체의 H 쇄로부터 유래된 항원 결합 영역을 포함하는데, 이는 적어도 인간 H 쇄 C 영역 (C_H), 예컨대 CH₁ 또는 CH₂의 일부분에 연결된다.

본 발명에 따른 키메라 L 쇄는 적어도 인간 L 쇄 C 영역 (C_L)의 일부분에 연결된 TNF에 특이적인 비-인간 항체의 L 쇄로부터 유래된 항원 결합 영역을 포함한다.

동일하거나 상이한 가변 영역 결합 특이성을 갖는 키메라 H 쇄 및 L 쇄를 포함하는 항체, 단편 또는 유도체는 또한 공지된 방법 단계, 예를 들어 오수벨 (Ausubel), 할로우 (Harlow) 및 콜리간 (Colligan)의 상기 문헌의 방법에 따라 각각의 폴리펩티드 쇄를 적절하게 연결함으로써 제조될 수 있다.

항- TNF 면역수용체 펩티드

본 발명의 면역수용체 펩티드는 TNF-α 및(또는) TNF-β와 결합할 수 있다. 면역수용체는 적어도 TNF 수용체의 일부분에 공유 결합에 의해 부착된 이뮤노글로불린 중쇄 또는 경쇄를 하나 이상 포함한다. 특정 바람직한 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 적어도 CH₁의 일부분을 포함한다. 특히, 경쇄가 면역수용체 펩티드와 함께 포함된 경우, 중쇄는 경쇄 불변 영역과 결합하는 것을 담당하는 CH₁ 영역을 포함해야 한다.

본 발명의 면역수용체 펩티드는 하나 이상의 이뮤노글로불린 쇄에 공유 결합에 의해 부착된 수용체 분자와 함께, 바람직하게는 하나 이상의 중쇄 불변 영역을 포함할 수 있으며 특정 실시양태에서는 하나 이상의 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 또는 중쇄 가변 영역은 특정 실시양태에 포함된다. 수용체 분자가 이뮤노글로불린 쇄의 내부에서 연결될 수 있기 때문에, 단일 쇄는 가변 영역 및 수용체 분자에 융합된 영역을 가질 수 있다.

이뮤노글로불린 분자에 연결된 TNF 수용체의 한 부분은 TNF-α 및(또는) TNF-β와 결합할 수 있다. TNF 수용체의 세포외 영역이 TNF와 결합하기 때문에, 면역수용체의 이뮤노글로불린 분자에 부착된 부분은 적어도 NF 수용체의 세포외 영역의 일부분으로 이루어져 있다.

이뮤노글로불린 유전자는 임의의 척추 동물 공급원, 예컨대 뮤린으로부터 수득할 수 있으며, 바람직하게 실질적으로 면역수용체 펩티드의 최후 수혜자와 동일한 기원의 서열을 갖는 이뮤노글로불린을 코딩한다. 예를 들어, 본 발명의 분자를 사용하여 인간을 치료하는 경우, 이뮤노글로불린은 인간으로부터 유래되는 것이 바람직하다.

중쇄에 정렬된 TNF 수용체 구조물은, 예를 들어 수용체의 세포 도메인에 존재하는 DNA 코딩 아미노산을 사용하여 합성될 수 있다. 추정되는 hTNF의 수용체 결합 위치는 문헌 [Eck and Sprange, J. Biol. Chem. 264(29), 17595-17605 (1989)]에서 밝혀내었으며, 상기 문헌의 저자는 아미노산 11 내지 13, 37 내지 42, 49 내지 57 및 155 내지 157로 이루어진 TNF-α의 수용체 결합 위치를 확인하였다. PCT 출원 WO 91/02078 (우선일:1989년 8월 7일)은 하기 아미노산 중 하나 이상의 에피토프를 갖는 모노클로날 항체와 결합할 수 있는 TNF 리간드를 개시하고 있다 (아미노산 1 내지 20, 56 내지 77 및 108 내지 127 중 하나 이상; 아미노산 1 내지 20, 56 내지 77, 108 내지 127 및 138 내지 149 중 2개 이상; 아미노산 1 내지 18, 58 내지 65, 115 내지 125 및 138 내지 149 모두; 아미노산 1 내지 18 및 108 내지 128 모두; 아미노산 56 내지 79, 110 내지 127 및 135 또는 136 내지 155 모두; 아미노산 1 내지 30 및 117 내지 128 및 141 내지 153 모두; 아미노산 1 내지 26, 117 내지 128 및 141 내지 153 모두; 아미노산 22 내지 40, 49 내지 96 또는 97, 11 내지 127 및 136 내지 153 모두; 아미노산 12 내지 22, 36 내지 45, 96 내지 105 및 132 내지 157 모두; 아미노산 1 내지 20 및 76 내지 90 둘 모두; 아미노산 22 내지 40, 69 내지 97, 105 내지 128 및 135 내지 155 모두; 아미노산 22 내지 31 및 146 내지 157 모두; 아미노산 22 내지 40 및 49 내지 98 모두; 아미노산 22 내지 40, 9 내지 98 및 69 내지 97 중 하나 이상, 아미노산 22 내지 40 및 70 내지 87 둘 모두). 따라서, 본 발명의 개시 내용을 숙지한 당업자는 TNF와 결합하는 것으로 공지된 수용체의 부분들을 이용하여 TNF 수용체 융합 단백질을 생성할 수 있다.

본 발명의 이뮤노글로불린 융합 단백질 (면역수용체 펩티드)을 사용하면, (1) 생성된 2가의 이량체화된 융합 단백질에 의해 다가의 리간드에 대한 결합성 (avidity)이 증가할 수 있는 점, (2) 연장된 혈청 반감기, (3) Fc 도메인을 통해 이펙터 세포를 활성화시키는 능력, (4) 정제의 용이함 (예를 들어, 단백질 A 크로마토그래피에 의해 정제함), (5) TNF-α 및 TNF-β에 대한 친화성, 및 (6) TNF-α 또는 TNF-β의 세포독성을 차단하는 능력 중 하나 이상의 이점을 얻는다.

이것은 일반적으로 Ig 경쇄의 부재하에 융합 단백질의 분비를 허용하지만, 본 발명의 주요 실시양태는 (1) TNF에 대한 친화성을 증가시키는, 2 가지 수용체 분자 사이의 증가된 거리 및(또는) 가요성, (2) 서로 모여 이량체화됨으로써 4가 (이중 융합) 수용체 분자를 형성하는 중쇄 융합 단백질 및 경쇄 융합 단백질을 생성하는 능력, 및 (3) 4가 융합 단백질의 TNF에 대한 친화성 및(또는) 중성화 능력이 2가 (단일 융합) 분자보다 증가하는 것과 같은 이점을 제공할 수 있는 CH₁ 도메인을 포함한다.

항-이디오타입 Ab

모노클로날 또는 키메라 항-TNF 항체 이외에도, 본 발명은 또한 본 발명의 항-TNF 항체에 특이적인 항-이디오타입 (항-Id) 항체에 관한 것이다. 항-Id 항체는 일반적으로 다른 항체의 항원 결합 영역에 연결된 독특한 결정자를 인식하는 항체이다. TNF에 특이적인 항체를 이디오타입 또는 Id 항체로 언급한다. 항-Id는 Id 항체 공급원으로서의 종 및 유전형이 동일한 동물 (예를 들어, 마우스 계통)을 Id 항체 또는 그의 항원-결합 영역으로 면역화시킴으로써 제조할 수 있다. 면역화된 동물은 면역화된 항체의 이디오타입 결정자를 인식하고 이에 반응하여, 항-Id 항체를 생산할 것이다. 또한, 항-Id 항체는 또다른 동물에서의 면역 반응을 유도하는 "면역원"으로 사용될 수 있으며, 이는 소위 항-항-Id 항체를 생산한다. 항-항-Id는 항-Id를 유도하는 본래 항체와 에피토프 측면에서 동일할 수 있다. 따라서, mAb의 이디오타입 결정자에 대한 항체를 사용함으로써, 동일한 특이성을 갖는 항체를 발현시키는 다른 항체를 동정할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,699,880호 (그 전문이 본원에 참고문헌으로 포함된 것으로 간주함)를 참조한다.

항-이디오타입 (항-Id) 항체는 일반적으로 항체의 항원-결합 부위와 연결된 독특한 결정자를 인식하는 항체이다. 항-Id 항체는 mAb의 공급원으로서의 종 및 유전형이 동일한 동물 (예를 들어, 마우스 계통)을 항-Id가 제조되는 mAb로 면역화시킴으로써 제조할 수 있다. 면역화된 동물은 상기 이디오타입 결정자 (항-Id 항체)에 대한 항체를 생산함으로써 면역화된 항체의 이디오타입 결정자를 인식하고 이에 반응할 것이다.

따라서, 본 발명에 따라 TNF에 대해 생성된 mAb는 적합한 동물, 예컨대 BALB/c 마우스에서 항-Id 항체를 유도하는데 사용할 수 있다. 상기 면역화된 마우스로부터 수득한 비장 세포는 항-Id mAb를 분비하는 항-Id 하이브리도마를 생산한는 데 사용할 수 있다. 또한, 항-Id mAb는 캐리어 (carrier), 예컨대 키홀 리미트 헤모시아닌 (keyhole limit hemocyanin; KLH)에 커플링시켜 부가적인 BALB/c 마우스를 면역화시키는 데 사용할 수 있다. 이는 마우스로부터 수득한 혈청은 TNF 에피토프에 특이적인 본래 mAb의 결합 특성을 갖는 항-항-Id 항체를 함유할 것이다.

따라서, 임의의 적합한 TNF 중성화 화합물은 본 발명에 따른 방법에 사용할 수 있다. 상기 TNF 중성화 화합물의 예는 TNF, p55 수용체, p75 수용체, 또는 이들의 복합체의 중성화 에피토프에 특이적인 항체 또는 그의 일부분, TNF와 결합하는 TNF 수용체의 일부분, TNF와 결합하는 펩티드, TNF와 결합하는 펩티도 유사 약물 및 TNF를 차단하는 임의의 유기물 유사 약물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

상기 TNF 중성화 화합물은 관련 분야의 당업자가 본원에 기재된 교시 및 지시 내용에 기초하여 통상적인 실험을 이용하여 결정할 수 있다.

항- TNF 항체 및 항- TNF 펩티드의 구조적 유사체

본 발명의 항-TNF Ab (그의 단편 및 영역 포함)의 구조적 유사체 및 상기 Ab를 생성하는 항원 (본원에서 "펩티드"로도 언급됨)은 본원에 포함된 교시 및 지시 내용에 기초하여 공지된 방법 단계에 의해 제공될 수 있다.

단백질의 삼차원 구조에 대한 지식은 이들이 기능하는 방법을 이해하는데 중요하다. 현재 400 개가 넘는 단백질의 삼차원 구조에 대한 정보를 단백질 구조 데이타베이스에서 찾아볼 수 있다 (반면, 서열 데이타베이스에는 대략 15,000개의 공지된 단백질 서열이 저장되어 있음). 상기 구조 분석 결과는 이들이 인식가능한 모티프 군에 포함된다는 것을 나타낸다. 따라서, 구조가 공지되어 있는 관련 단백질에 상동성인 단백질의 구조에 기초하여 단백질의 삼차원 구조를 모델링할 수 있다. 상대적으로 서열 상동성이 낮은 두 가지 단백질이 매우 유사한 삼차원 구조 또는 모티프를 가질 수 있는 다수의 예가 공지되어 있다.

최근, 핵 자기 공명법 (NMR)에 의해 분자량이 약 15 kDa인 단백질까지 삼차원 구조를 결정할 수 있게 되었다. 이 기술은 단지 순수한 단백질의 농축된 용액만을 필요로 한다. 결정 또는 동형의 유도체는 요구되지 않는다. 다수의 단백질 구조가 이 방법에 의해 결정되었다. NMR 구조 결정과 관련된 상세한 내용은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Wuthrich., NMR of Proteins and Nucleic Acids, Wiley, New York, 1986]; [Wuthrich, K. Science 243:45-50 (1989)]; [Clore et at., Crit, Rev. Bioch, Molec. Biol. 24:479-564 (1989)]; [Cooke et a., Bioassays 8:52-56 (1988)] 참조).

상기 접근법 적용시, 본 발명의 항-TNF Ab 및(또는) 항-TNF 펩티드에 대한 다양한 ¹H NMR 2D 데이타 세트를 수집한다. 이들은 크게 두 가지 유형으로 구분된다. 한 가지 유형인 COSY (코네테이티드 (Conetated) 분광계)로 화학적 결합에 의해 연결된 양성자 공명을 확인한다. 상기 스펙트럼은 3개 이하의 공유 결합에 의해 연결된 양성자에 대한 정보를 제공한다. NOESY (핵 오버하우저 (Overhauser) 증강 분광계)는 공간에서 근접해 있는 (0.5 nm 미만) 양성자를 확인한다. 완전 회전 시스템을 지정한 후에, NOESY에 의해 이차 구조가 정의된다. 교차 피크 (핵 오버하우저 효과 또는 NOE)는 펩티드의 일차 서열 중에 인접해 있는 잔기 사이에서 발견되며, 0.5 nm 미만의 거리만큼 떨어져 있는 양성자를 관찰할 수 있다. 이차 구조에 인접하는, 아미드 양성자 커플링 상수와 조합된 NOE에 이어 비-인접 아미노산으로부터의 NOE로부터 수집한 데이타 이용하여 폴리펩티드의 이차 구조를 특성화한다. 이차 구조에 대한 예상 결과로부터, NOE는 일차 아미노산 서열 및 이차 구조 둘 모두에서 양성자 사이의 공간 거리를 나타낸다. 삼차 구조 예상 결과는, 모든 데이타를 고려한 후에 "베스트 피트 (best fit)" 외삽법에 의해 결정된다.

아미노산의 유형은 우선 결합 통과 연결성을 이용하여 확인한다. 제2 단계에서는 공지된 아미노산 서열과 함께 이웃하는 잔기에 대한 공간 통과 연결성을 이용하여 특정 아미노산을 지정한다. 이어서, 구조적 정보를 표로 정리하는데, 크게 3가지로 나누어진다. NOE는 공간에서 근접해 있는 양성자쌍을 확인하고, 커플링 상수는 상반각에 대한 정보를 제공하고, 서서히 교환되는 아미드 양성자는 수소 결합의 위치에 대한 정보를 제공한다. 구속성은 거리 기하학 유형의 산출법을 이용한 후에 억제된 분자 동력을 이용하여 보정함으로써 구조를 추정한다. 상기 컴퓨터 프로그램의 출력물은 실험 데이터로 호환가능한 구조물의 일종이다 (즉, 한 쌍의 세트가 0.5 nm 미만의 거리 구속성을 가짐). 데이타에 의한 구조의 정의가 양호할수록, 구조물 족이 보다 양호하게 중첩될 수 있다 (즉, 구조물의 분할이 양호해짐). NMR을 이용하여 보다 양호하게 정의된 구조물에서, 분자의 중심부에 함입된 상기 아미노산의 대다수의 주쇄 (즉, 아미드, C-α 및 카르보닐 원자) 및 측쇄의 위치는 결정 분석에 의해 수득한 구조에서와 같이 명확하게 정의될 수 있다. 그러나, 표면 상에 노출된 아미노산 잔기의 측쇄는 잘 정의되지 않는 경우도 종종 있다. 이는 상기 표면 잔기가 보다 이동상이어서 특정 위치에 고정될 수 없다는 사실을 반영하는 것일 수 있다 (결정 구조에서, 이는 확산 전자 밀도로 관찰될 수 있다).

따라서, 본 발명에 있어서, NMR 분광 데이타를 컴퓨터 모델링과 함께 이용하여 토포그래피 (topography)에 의한 구조적 이해를 바탕으로 적어도 일부 항-TNF Ab 및 펩티드의 구조적 유사체를 달성한다. 상기 정보를 이용하여, 당업자는 TNF 결합 친화성이 예상되는 분자의 치료 또는 진단적 사용의 필요성, 바람직하게는 TNF 결합에 대한 보다 높은 특이성의 달성 여부에 따라 조절되는 펩티드의 생산을 허용하는 합리적 방식의 아미노산 치환을 이용하는 방법과 같은, 항-TNF Ab 및(또는) 펩티드의 구조적 유사체를 달성하는 방법을 알 것이다.

별법으로, 항-TNF 치료 및 진단제로서 적합한 구조적 및 화학적 특징을 갖는 화합물은 선택적인 TNF 친화성을 갖는 구조적 유사체를 제공한다. 프로그램, 예컨대 마크로모델 (MACROMODEL; 스트뢰딩거 엘엘씨 (Stroedinger LLC)), 인사이트 (INSIGHT; 악셀리스 인크.) Accelrys Inc.)) 및 디스커버 (DISCOVER; 악셀리스 인크.)를 이용하는 TNF 결합 화합물, 예컨대 TNF 수용체, 항-TNF 항체, 또는 다른 TNF 결합 분자에 대한 분자 모델링 연구는 위와 같은 본 발명에 따른 항-TNF Ab 및(또는) 펩티드의 공간적 필요성 및 방위를 제공한다. 따라서, 상기 본 발명의 구조적 유사체는 시험관내, 계내 및(또는) 생체내에서 선택적인 정성 및 정량적 항-TNF 활성을 제공한다.

항-바이러스 화합물

추가의 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 항-바이러스 화합물을 포함한다. 바람직하게는, 항-바이러스 화합물은 항-코로나바이러스 화합물이다. 항-코로나바이러스 화합물은, 바람직하게는 항체 (예를 들어, 모노클로날, 폴리클로날, 키메라 항체 등), 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 억제제, 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 프로세싱에 영향을 미치는 바이러스-코딩된 프로테아제의 억제제, 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 예컨대 적혈구응집소-에스테라제의 활성에 영향을 미치는 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 특이적 세포 표면 수용체에의 바이러스 결합의 억제제 (예를 들어, HCoV-229E에의 hAPN 결합의 억제제) 또는 바이러스 유입과 관련된 바이러스 돌기 당단백질에서의 수용체-유도된 구조적 변형의 억제제, 또는 이들의 조합이다. 보다 바람직하게는, 항-바이러스 화합물은 SARS-관련 바이러스, 예컨대 SARS-CoV에 대한 모노클로날 항체이다. 본 발명의 한 실시양태에 있어서, 본 발명의 모노클로날 항체 (반감기가 약 20 일임)는 SARS 감염 예방제로서 대상체에게 투여된다.

항-바이러스 화합물은 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사효소 억제제 (NRTI), 비-뉴클레오시드 역전사효소 억제제 (NNRTI), 및(또는) 프로테아제 억제제 (PI)를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 조성물과 함께 투여될 수 있는 NRTI로는 RETROVIR (글락소 스미스클라인 인크. (Glaxo SmithKline Inc.), 아지도부딘/AZT), VIDEX (브리스톨-마이어스 스큅 인크. (Bristol-Myers Squibb Inc.), 디다노신/ddI), HIVID (호프만-라 로쉬) (잘시타빈/ddC), ZERIT (브리스톨-마이어스 스큅, 스타부딘/d4T), EPIVIR (글락소 스미스클라인, 라미부딘/3TC) 및 COMBIVIR (글락소 스미스클라인, 지도부딘/라미부딘)이 있으나, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 조성물과 함께 투여될 수 있는 NNRTI로는 VIRAMUNE (뵈링거 잉겔하임 파마슈티칼스 인크. (Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc.), 네비라핀), RESCRIPTOR (파마시아/업존 (Pharmacia/Upjohn), 델라비르딘) 및 SUSTIVA (듀폰 파마 코. (Dupont Pharma Co.), 에파비렌즈)가 있으나, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 조성물과 함께 투여될 수 있는 프로테아제 억제제로는 CRIXIVAN (머트 앤트 코. (Merck ＆ Co.), 인디나비르), NORVIR (에보트 랩스. (Abbott Labs.), 리토나비르), INVIRASE (호프만-라 로쉬, 사퀴나비르) 및 VIRACEPT (아구론 파마 인크 (Agouron Pharma Inc.), 넬피나비르)가 있으나, 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 항레트로바이러스제, 뉴클레오시드 역전사효소 억제제, 비-뉴클레오시드 역전사효소 억제제 및(또는) 프로테아제 억제제는 AIDS 치료 및(또는) HIV 감염 예방 또는 치료를 위해 본 발명의 조성물과 임의로 조합하여 사용할 수 있다.

NRTI로는 LODENOSINE (F-ddA; 산-안정한 아데노신 NRTI, 트라이앵글/에보트 (Triangle/Abbott)); COVIRACIL (엠트리시타빈/FTC); 라미부딘 (3TC)과 구조적으로 관련되어 있으나 시험관내 활성은 3 내지 10배 높음; 트라이앵글/에보트); dOTC (BCH-10652, 이 또한 라미부딘과 구조적으로 관련되어 있으나 타미부딘-내성 단리물의 실질적인 비율에 대한 활성을 유지함; 바이오켐 파마 (Biochem Pharma)); 아데포비르 (Adefovir) (FDA가 항-HIV 치료로서 승인하기를 거부함; 길리드 사이언시즈 (Gilead Sciences)); PREVEON (길리드 사이언시즈 인크.) (아데포비르 디피복실 (Adefovir Dipivoxil), 아데포비르의 활성 전구약물; 그의 활성 형태는 PMEA-pp임); TENOFOVIR (비스-POC PMPA, PMPA 전구약물; 길리드); DAPD/DXG (DAPD의 활성 대사산물; 트라이앵클/에보트); DD4FC (3TC와 관련되어 있으며, AZT/3TC-내성 바이러스에 대한 활성을 가짐); GW420867X (글락소 웰컴 (Glaxo Wellcome)); ZIAGEN (아바카비르/159U89: 글락소 웰컴 인크.); CS-87 (3'아지도-2',3'-디데옥시우리딘: WO 99/66936); 및 S-아실-2-티오에틸 (SATE)-보유 전구약물 형태의 β-L-FD4C 및 β-L-FddC (WO 98/17281)가 있다.

다른 NNRTI로는 COACTINON (에미비린/MKC-442, HEPT 군의 효능있는 NNRTI; 트라이앵클/에보트); CAPRAVIRINE (AG-1549/S-1153, K103N 돌연변이를 함유하는 바이러스에 대한 활성을 갖는 다음 세대의 NNRTI; 아구론); PNU-142721 (이전에 사용되던 델라비르딘보다 20 내지 50배 활성이 높으며 K103N 돌연변이에 대해 활성임; 파마시아 앤드 업존); DPC-961 및 DPC-963 (에파비렌즈의 제2-세대 유도체, K103N 돌연변이를 갖는 바이러스에 대해 활성을 갖도록 고안됨; 듀폰); GW-420867X (HBY097보다 25배 활성이 높으며, K103N 돌연변이체에 대해 활성임: 글락소 웰컴); CALANOLIDE A (고무 나무로부터 자연 발생되는 제제; Y11C 및 K103N 돌연변이 중 하나 또는 둘 모두를 함유하는 바이러스에 대해 활성임); 및 프로폴리스 (WO 99/49830)가 있다.

부가적인 프로테아제 억제제로는 LOPINAVIR (ABT378/r; 애보트 레버러토리즈); BMS-232632 (아자펩티드; 브리스톨 마이어스 스큅); TIPRANAVIR (PNU-140690, 비-펩티드성 디히드로피론; 파마시아 앤드 업존); PD-178390 (비-펩티드성 디히드로피론; 파크-데이비스 (Parke-Davis)); BMS 232-632 (아자펩티드; 브리스톨-마이어스 스큅); L-756,423 (인디나비르 유사체; 머크); DMP-450 (고리형 우레아 화합물; 아비드 앤드 듀폰 (Avid ＆ DuPont) 7: AG-1776 (프로테아제 억제제-내성 바이러스에 대해 시험관내 활성을 갖는 펩티도 유사체; 아구론); VX-175/GW-433908 (암프레나비르의 포스페이트 전구약물; 버텍스 앤드 글락소 웰컴 (vertex ＆ Glaxo Welcome)); CGP61755 (시바; Ciba); 및 AGENERASE (암프레나비르; 글락소 웰컴 인크.)가 있다.

부가적인 항레트로바이러스제는 융합억제제/gp41 결합제를 포함한다. 융합 억제제/gp41 결합제로는 T-10 (휴지 상태에서 gp41에 결합하고 방추유전자 상태에서 형질전환을 방지하는 gp41에 결합하는 HIVgp41 막횡단 단백질 엑토도메인의 643 내지 678 잔기로부터의 펩티드; 트리머리스 (Trimeris)) 및 T-1249 (제2-세대 융합 억제제; 트리머리스)가 있다.

부가적인 항레트로바이러스제는 융합 억제제/케모킨 수용체 길항제를 포함한다. 융합 억제제/케모킨 수용체 길항제로는 CXCR4 길항제, 예컨대 AMD 3100 (비시클람), SDF-1 및 그의 유사체, 및 ALX40-4C (양이온성 펩티드), T22 (18 아미노산 펩티드; 트리머리스), T22 유사체 T134 및 T140; CCR5 길항제, 예컨대 RANTES (9-68), AOP-RANTES, NNY-RANTES 및 TAK-779; 및 CCR5/CXCR4 길항제, 예컨대 NSC 651016 (디스타마이신 유사체)이 있다. 또한, FUZEON (일반명: 에우푸비르티드; 호프만-라 로쉬사로부터 시판됨; HIV가 건강한 CD4 세포를 감염시키는 능력을 차단함)이 포함된다. 또한, CCR2B, CCR3 및 CCR6 길항제도 포함된다. 케모킨 수용체 효능제, 예컨대 RANTES, SDF-1, MIP-1α, MIP-1β 등도 융합을 억제할 수 있다.

부가적인 항레트로바이러스제는 인테그라제 억제제를 포함한다. 인테그라제 억제제로는 디카페오일퀸산 (DFQA): L-치코르산 (디카페오일타르타르산 (DCTA)); 퀴날리자린 (QLC) 및 관련 안트라퀴논; ZINTEVIR (아로넥스 파마슈티칼스 인크. (Aronex Pharmaceuticals Inc.)) (AR 177, 본래의 인테그라제 억제제보다 세포 표면에서 작용할 수도 있는 올리고뉴클레오티드: 아론덱스 (Arondex)); 및 WO 98/50347에 개시된 것과 같은 나프톨이 있다.

부가적인 항레트로바이러스제로는 히드록시우레아-유사 화합물, 예컨대 BCX-34 (바이오크리스트 파마. 인크. (Biocryst Pharma. Inc.), 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라제 억제제); 리보뉴클레오티드 리덕타제 억제제, 예컨대 DIDOX (몰레큘스 포 헬쓰 인크. (Molecules for Health Inc.)); 이노신 모노포스페이트 데히드로게나제 (IMPDH) 억제제, 예컨대 VX-497 (버텍스 파마슈티칼스 인크. (Vertex Pharmaceutical Inc.)); 및 미코폴산, 예컨대 CellCept (호프만-라 로쉬, 미코페놀레이트 모페틸)가 있다.

다른 항레트로바이러스제로는 바이러스 인테그라제 억제제, 바이러스 게놈 핵 전위 억제제, 예컨대 아릴렌 비스(메틸케톤) 화합물; HIV 유입 억제제, 예컨대 AOP-RANTES, NNY-RANTES, RANTES-IgG 융합 단백질, RANTES와 글리코사미노글리칸 (GAG)의 가용성 복합체 및 AMD-3100 (아노르메드 인크. (AnorMed Inc.)); 뉴클레오캡시드 아연 핑거 (nucleocapsid zinc finger) 억제제, 예컨대 디티안 화합물; HIV Tat 및 Rev의 표적; 중간 약물 인헨서, 예컨대 ABT-378이 있다.

한 실시양태에 있어서, 본 발명의 조성물은 사이토킨 및 림포킨, 예컨대 MIP-1α, MIP-1β, SDF-1α, IL-2, PROLEUKIN (치론 코포레이션 (Chiron Corp.)) (알데스류킨/L2-7001; 치론), IL-4, IL-10, IL-12 및 IL-13; 인터페론, 예컨대 IFN-α2a; TNF, NF 카파 B, GM-CSF, M-CSF 및 IL-10의 길항제; 면역 활성을 조절하는 제제, 예컨대 시클로스포린 및 프레드니손; 백신, 예컨대 레뮨 (Remune) (HIV 면역원), 재조합 gp120 및 단편, 2가 (B/E) 재조합 외피 당단백질, rgp120CM235, MN rgp120, SF-2 rgp 120, gp 120/가용성 CD4 복합체, 델타 JR-FL 단백질, gp120 C3/C4으로부터 비연속적으로 유래된 분지형 합성 펩티드, 융합-경쟁 면역원, 및 Gag, Pol, Nef 및 Tat 백신; 유전자-기재 요법, 예컨대 유전자 저해제 요소 (GSE; WO 98/54366), 및 인트라킨 (ER에 표적화되어 새로이 합성된 CCR5의 표면 발현을 차단하는, 유전적으로 변형된 CC 케모킨 (문헌 [Yang et al., PNAS 94:11567-72 (1997)]; [Chen et al., Nat. Med. 3:111-16 (1997)])); 항체, 예컨대 항-CXCR4 항체 12G5, 항-CCR5 항체 2D7, 5C7, PA8, PA9, PA10, PA11, PA12 및 PA14, 항-CD4 항체 Q4120 및 RPA-T4, 항-CCR3 항체 7B11, 항-gp120 항체 17b, 48d, 447-52D, 257-D, 268-D 및 50-1, 항-Tat 항체, 항-TNF-α 항체 및 모노클로날 항체 33A; 아릴 탄화수소 (AH) 수용체 효능제 및 길항제, 예컨대 TCDD, 3,3',4,4',5-펜타클로로비페닐, 3,3',4,4'-테트라클로로비페닐 및 a-나프토플라본 (WO 98/30213); 및 항산화제, 예컨대 감마-L-글루타밀-L-시스테인 에틸 에스테르 (γ-GCE; WO 99/56764)를 비롯한 다른 항레트로바이러스 화합물을 포함할 수 있다.

다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 부가적으로 항-기회(2차) 감염제를 포함한다. 항-기회(2차) 감염제로는 TRIMETHOPRIM-SULFAMETHOXAZOLE (호프만-라 로쉬), DAPSON (자코부스 파마슈티칼스 (Jacobus Pharmaceuticals)), PENTAMIDINE (아메리칸 파마슈티칼스 파트너스 (American Pharmaceuticals Partners)), ATOVAQUONE (글락소 스미스클라인), ISONIAZID (벡톤 디킨슨 마이크로바이올로지 시스템 (BectonDickinson Microbiology System)), RIFAMPIN (베드포드 랩스 (Bedford Labs)), PYRAZINAMIDE (파마사이언스 인크. (Pharmascience Inc.)), ETHAMBUTOL (카딜라 파마 인크 (Cadila Pharma Inc.)), RIFABUTIN (아드리아 랩스 인크. (Adria Labs Inc.)), CLARITHROMYCIN (인드-스위프트 랩스, 리미티드 (Ind-Swift Labs, Ltd.)), AZITHROMYCIN (화이자 인크. (Pfizer, Inc.)), GANCICLOVIR, FOSCARNET (아스트라 파마슈티칼스 인크. (Astra Pharmaceuticals Inc.)), CIDOFOVIR (길리드 사이언시즈 인크.), FLUCONAZOLE (화이자 인크.), ITRACONAZOLE (얀센 파마안티카 (Jansseen Pharmaantica)), KETOCONAZOLE (노보팜 리미티드 (Novopharm Ltd.)), ACYCLOVIR (글락소 웰컴), FAMCICOLVIR, PYRIMETHAMINE (글락소 웰컴 인크.), LEUCOVORIN (이뮤넥스/암젠 인크.), NEUPOGEN (암젠 인크.) (필그라스팀/G-CSF) 및 LEUKINE (버렉스 랩스 인크.) (사르그라모스팀/GM-CSF)이 있으나, 이에 제한되지 않는다.

한 실시양태에 있어서, 본 발명의 조성물은 주폐포자층 폐렴 (Pneumocystis carinii pneumonia)의 기회(2차) 감염을 예방적으로 치료하거나 예방하기 위해 TRIMETHOPRIM-SULFAMETHO-XAZOLE (호프만-라 로쉬), DAPSON (자코부스 파마슈티칼스), PENTAMIDINE (아메리칸 파마슈티칼스 파트너스) 및(또는) ATOVAQUONE (글락소 스미스클라인)을 포함한다. 또다른 특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 마이코박테리아 아비움 (Mycobacterium avium) 복합체의 기회(2차) 감염을 예방적으로 치료하거나 예방하기 위해 ISONIAZID (벡톤 디킨슨 마이크로바이올로시 시스템), RIFAMPIN (브레드포드 랩스), PYRAZINAMIDE (파마사이언스 인크.) 및(또는) ETHAMBUTOL (카딜라 파마 인크.)과 임의로 조합하여 사용할 수 있다. 또다른 특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 마이크로박테리아 결핵의 기회(2차) 감염을 예방적으로 치료하거나 예방하기 위해 RIFABUTIN (아드리아 랩스 인크.), CLARITHROMYCIN (인드-스위프트 랩스, 리미티드.) 및(또는) AZIRTHROMYCIN (화이자 인크.)과 임의로 조합하여 사용할 수 있다. 또다른 특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 사이토메갈로바이러스의 기회(2차) 감염을 예방적으로 치료하거나 예방하기 위해 GANCICLOVIR, FOSCARNET (아스트라 파마슈티칼스 인크.) 및(또는) CIDOFOVIR (길리드 사이언시즈 인크.)와 임의로 조합하여 사용할 수 있다. 또다른 특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 진균의 기회(2차) 감염을 예방적으로 치료하거나 예방하기 위해 FLUCONAZOLE (화이자 인크.), ITRACONAZOLE (얀센 파마안티카) 및(또는) KETOCONAZOLE (노보팜 리미티드)과 임의로 조합하여 사용할 수 있다. 또다른 특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 허피스 단순 바이러스 제I형 및(또는) 제II형의 기회(2차) 감염을 예방적으로 치료하거나 예방하기 위해 ACYCLOVIR (글락소 웰컴) 및(또는) FAMCICOLVIR와 임의로 조합하여 사용할 수 있다. 또다른 특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 톡소플라스마 곤디 (Toxoplasma gondii)의 기회(2차) 감염을 예방적으로 치료하거나 예방하기 위해 PYRIMETHAMNE 및(또는) LEUCOVORIN (이뮤넥스/암젠 인크.)과 임의로 조합하여 사용할 수 있다. 또다른 특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 박테리아의 기회(2차) 감염을 예방적으로 치료하거나 예방하기 위해 LEUCOVORIN (이뮤넥스/암젠 인크.) 및(또는) NEUPOGEN (암젠 인크.)과 임의로 조합하여 사용할 수 있다.

추가의 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 항생제를 포함한다. 투여될 수 있는 항생제로는 아목시실린, β-락타마제, 아미노글리코시드, 베타락탐(글리코펩티드), β-락타마제, 클린다마이신, 클로르암페니콜, 세팔로스포린, 시프로플록사신, 에리트로마이신, 플루오로퀴놀론, 마크롤리드, 메트로니다졸, 페니실린, 퀴놀론, 라파마이신, 리팜핀, 스트렙토마이신, 술폰아미드, 테트라사이클린, 트리메토프림, 트리메토프림-술파메톡사졸 및 반코마이신이 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 실시에 따라, 본 발명의 조성물은 면역자극제를 포함한다. 본 발명의 치료제와 함께 투여될 수 있는 면역자극제로는 레바미졸 (예를 들어, ERGAMISOL), 이소프리노신 (예를 들어, OSIPLEX), 인터페론 (예를 들어, 인터페론α) 및 인터루킨 (예를 들어, IL-2)이 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 실시에 따라, 본 발명의 조성물은 면역저해제를 포함한다. 본 발명의 조성물과 조합하여 투여될 수 있는 면역저해제에는 스테로이드, 시클로스포린, 시클로스포린 유사체, 시클로포스파미드 메틸프레드니손, 프레드니손, 아자티오프린, FK-506, 15-데옥시스페르구알린, 및 반응하는 T 세포의 기능을 저해함으로써 작용하는 기타 면역저해제가 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 조성물과 조합하여 투여될 수 있는 기타 면역저해제에는 프레드니솔론, 메토트렉세이트, 탈리도미드, 메톡스살렌, 라파마이신, 레플루노미드, 미조리빈 (BREDNIN) (베링거-인겔하임 인크.), 브레퀴나르, 데옥시스페르구알린, 및 아자스피란 (SKF105685), ORTHOCLONE OKT (오르토바이오텍 프로덕츠 엘.피.(OrthoBiotech Products L.P.)) 3 (무로모납-CD3), SANDIMMUNE, NEORAL (노바티스 인크.(Novartis Inc.)), SANGDYA (상그스타트 메디칼 코포레이션(Sangstat Medical Corp.)) 시클로스포린), PROGRAF (후지사와 헬쓰케어 인크.(Fujisawa Healthcare Inc.)) (FK506, 타크롤리무스), CELLCEPT (호프만-라 로쉬) (미코페놀레이트 모테필, 그의 활성 대사산물은 미코페놀산임), IMURAN (글락소 스미스클라인) (아자티오프린), 글루코코르티코스테로이드, 부신피질 스테로이드, 예컨대 DELTASONE (업존/파마시아) (프레드니손) 및 HYDELTRASOL (듀폰, 머크 앤 코. 인크.) (프레드니솔론), FOLEX (아드리아 래버러토리즈, 인크.(Adria Laboratories, Inc.) 및 MEXATE (레데를레 래버러토리즈 인크. (Lederle Laboratories Inc.) 메토트렉세이트), OXSORALEN-ULTRA (아이씨엔 파마슈티칼즈, 인크.(ICN Pharmaceuticals, Inc.)) (메톡스살렌) 및 RAPAMUNE (와이어쓰 인크.(Wyeth Inc.))(시롤리무스)이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 면역저해제는 기관 또는 골수 이식 거부를 예방하기 위해 사용할 수 있다.

본 발명의 실시에 따라, 본 발명의 조성물은 정맥내 면역 글로불린 제제를 포함한다. 투여될 수 있는 정맥내 면역 글로불린 제제에는 GAMMAR, IVEEGAM (박스터 인크.(Baxter Inc.)), SANDOGLOBULIN (노바티스, 인크.) GAMMAGARD (박스터 코포레이션) S/D, ATGAM (파마시아/업존/화이자), (항흉선세포 글로불린), 및 GAMIMUNE (바이엘 인크.(Bayer Inc.))이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 이식 치료법 (예컨대, 골수 이식)에서 정맥내 면역 글로불린 제제와 조합하여 투여한다.

내인성 인터페론-α의 재조합 형태는 모발상 세포 백혈병, 카포시육종, 인간 유두종바이러스, 및 호흡기 바이러스를 앓는 선택된 환자에서 연구된다. 이는 B 및 C형 간염에 대해 우선적으로 사용된다. 검출가능한 바이러스 부하 및 비정상 간 기능 시험 결과를 갖는 활성 HBV 또는 C형 간염 바이러스 (HCV)를 앓고 있는 환자는 치료법으로부터 이익을 얻을 수 있다.

적절한 판단조건에 부합된 HBV를 앓고 있는 환자에서, 4 내지 6개월 동안의 250만 내지 500만 U sc 또는 IM은 혈청으로부터의 HBV DNA 및 B형 간염 e 항원 (HBeAg)의 청소를 유도하고, 25 내지 40％의 환자에서 간 기능 시험 비정상 및 간 조직구조를 개선할 수 있다. 만성 델타 간염의 경우에, 900만 내지 1000만 U 3회/주 범위의 고투여량이 요구되고, 재발이 매우 통상적이다. HCV의 경우에, 6 내지 12개월 동안의 300만 내지 600만 U 3회/주의 3 내지 6개월은 전형적으로 HCV RNA 수준 중간을 저하시켜 간 기능 시험 및 간 조직학을 10 내지 25％로 개선시킨다. 부작용은 전형적으로 제1 주사 7 내지 12시간후에 시작하여 12시간 이하까지 지속하는 열, 오한, 허약, 및 근육통을 포함한다. HCV에 사용되는 저투여량은 덜 심한 부작용을 유도하지만, 간염의 악화가 보고되고 있다. HCV에 대해 인터페론에 리바비린을 추가하는 것이 가망성을 보인다.

치료적 투여

주 방법은 환자에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 본 발명의 실시양태에 따라, SARS-관련 염증 사이토킨 억제제를 SARS 환자에게 투여한다. 추가 실시양태에 따라, TNF 억제제를 SARS 환자에게 투여한다. 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 항-TNF 재조합 수용체, mAb, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 펩티드, 단편 및 그의 유도체, 및 소분자는 개개의 치료제로 또는 다른 치료제와 조합하여 투여할 수 있다. 이들은 단독으로 투여될 수 있지만, 투여 및 표준 제약 실무의 선택된 경로에 기초하여 선택된 제약 담체와 일반적으로 투여한다.

투여된 투여량은 물론 공지된 요인, 예컨대 특정 제제의 약역학 특징, 및 그의 투여 방식 및 경로; 피투여자의 연령, 건강 및 체중; 증상의 특성 및 정도, 공동 치료의 종류, 치료 회수, 및 목적하는 효과에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 활성 성분의 일일 투여량은 체중 1 kg당 약 0.01 내지 100 mg일 수 있다. 1일 1 내지 6회로 나누어진 투여로 또는 서방형으로 주어지는 경우에 통상적으로 1 kg당 1.0 내지 5, 바람직하게는 1 내지 10 mg이 목적하는 결과를 얻기에 유효하다.

비제한적 예로서, SARS의 치료는 단일 또는 매 24, 12, 8, 6, 4 또는 2시간으로 나누어진 투여량, 또는 이들의 임의의 조합을 사용하여 본 발명의 항-TNF 펩티드, 모노클로날 키메라 및(또는) 통상의 항체의 1일 투여량으로서 0.1 내지 100 mg/kg, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40일 중 하나, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20주 중 하나, 또는 이들의 임의의 조합 시간당 0.5, 0.9, 1.0, 1.1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 mg/kg을 제공할 수 있다.

TNF의 순환 농도가 비-패혈증 개체에서 약 10 pg/ml의 범위에서 극히 낮은 경향이 있고, 패혈증 환자에서는 약 50 pg/ml 및 패혈증 증후군에서는 100 pg/ml 초과에 달하거나 (문헌 [Hammerle, A.F. et al, 1989, 하기문헌]) 또는 TNF-매개 병리의 부위에서만 검출가능하기 때문에, TNF 면역분석 및 TNF-매개 병리의 치료법 모두에 대해 고친화성 및(또는) 효능 있는 생체내 TNF-억제 및(또는) 중화 항체, 그의 단편 또는 영역을 사용하는 것이 바람직하다. 이러한 항체, 단편, 또는 영역은 hTNF-α에 대한 친화성을 Ka로 나타내어 바람직하게는 10⁸ M^-1 이상, 더 바람직하게는, 10⁹ M^-1 이상, 예컨대 10⁸ 내지 10¹⁰ M^-1, 5 x 10⁸ M^-1, 8 x 10⁸ M^-1, 2 x 10⁹ M^-1, 4 x 10⁹ M^-1, 6 x 10⁹ M^-1, 8 x 10⁹ M^-1, 또는 이들 중의 임의의 범위 또는 값을 가질 것이다.

TNF-유도 IL-6 분비를 차단하는 본 발명에 따른 효능 있는 생체내 TNF-α-억제 및(또는) 중화 활성을 갖는 고친화성 뮤린 및 키메라 항체, 및 단편, 영역 및 유도체가 인간 치료 용도에 바람직하다. 세포 부착 분자, 예컨대 ELAM-I 및 ICAM-I의 TNF-유도 발현 차단 및 생체내, 계내, 및 시험관내 TNF 분열촉진 활성 차단을 포함하는 TNF-유도 전응고성 활성을 차단하는 이러한 고친화성 뮤린 및 키메라 항-TNF-α 항체, 및 단편, 그의 영역 및 유도체도 인간 치료 용도에 바람직하다.

본 발명의 조성물은 바람직하게는 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 적합한 제약상 허용되는 담체 및(또는) 희석제에는 임의의 모든 통상적 용매, 분산 매체, 충전제, 고형 담체, 수용액, 코팅제, 항균제 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연 제제 등이 포함된다. 적합한 제약상 허용되는 담체에는 예를 들어 1종 이상의 물, 염수, 인산염 완충 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등, 뿐만 아니라 이들의 조합물이 포함된다. 제약상 허용되는 담체는 조성물의 보존성 또는 유효성을 강화하는 보조 물질, 예컨대 습윤제 또는 에멀젼화제, 보존제 또는 완충제를 소량으로 추가로 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 담체의 제제 및 용도는 당업계에 잘 공지되어 있다. 임의의 통상적 매체 또는 제제가 활성 성분과 상용성이 아닌 것을 제외하고는, 본 발명의 조성물에 이들을 사용하는 것이 고려된다.

본 발명의 조성물은 예컨대 피하 또는 근내 주사에 의한 비경구 뿐만 아니라 경구 또는 비내를 포함하는 임의의 통상적 경로에 의해 투여할 수 있다. 근내 주사 방법은 울프(Wolff) 등 및 세데가흐(Sedegah) 등에 의해 기재되어 있다. 다른 투여 방식은 예를 들어 제한 없이 경구 제제, 폐 경유 제제, 좌제, 및 경피 투여를 사용한다. 경구 제제에는 예를 들어 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 사카린, 셀룰로스, 마그네슘, 카르보네이트 등과 같은 일반적으로 사용되는 부형제가 포함되지만 이에 제한되지 않는다.

내부 투여에 적합한 투여 형태 (조성물)는 일반적으로 단위당 약 0.1 mg 내지 약 500 mg의 활성 성분을 함유한다. 이들 제약상 조성물에서, 활성 성분은 조성물의 총중량을 기준으로 약 0.5 내지 95 중량％의 양으로 통상적으로 존재할 것이다.

비경구 투여의 경우에, 항-TNF 펩티드 또는 항체는 제약상 허용되는 비경구 비히클과 함께 액제, 현탁액제, 에멀젼제 또는 동결건조 산제로서 제형화할 수 있다. 이러한 비히클의 예에는 물, 염수, 링거액, 덱스트로스 용액, 및 5％ 인간 혈청 알부민이 있다. 리포솜 및 비수성 비히클, 예컨대 고정 오일도 사용할 수 있다. 비히클 또는 동결건조 분말은 등장력 (예컨대, 염화나트륨, 만니톨) 및 화학적 안정성 (예컨대, 완충액 및 보존제)을 유지하기 위해 첨가제를 함유할 수 있다. 제제는 통상적으로 사용하는 기술로 멸균한다.

적합한 제약 담체는 당업계에 표준 참고서인 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol]의 최신판에 기재되어 있다. 본 발명의 조성물 및 방법은 예를 들어 본 발명의 실시에 따라 기타 치료법, 예컨대 지지 요법과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 실시에 따라, 본 발명의 조성물은 환자에게 정맥내 (IV) 수액과 함께 투여할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 정맥내 (IV) 백 내에 함유될 수 있거나 또는 정맥내 (IV) 라인의 고정장치 내로 주사될 수 있다.

본 발명의 또다른 실시에서, 본 발명의 조성물은 산소 또는 기타 상기 치료와 함께 환자에게 투여할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 연무기를 통해 투여할 수 있다.

예를 들어, 주사 투여에 적합한 비경구 조성물은 0.9％ 염화나트륨 용액 중의 1.5 중량％의 활성 성분을 용해시킴으로써 제조한다.

임의의 유효한 투여 경로는 TNF 억제제를 치료적으로 투여하기 위해 사용할 수 있다. 주사하는 경우에, 억제제는 일시 주사 또는 연속 주입에 의해 예를 들어 관절내, 정맥내, 근내, 병변내, 복막내 또는 피하 경로를 통해 투여할 수 있다. 다른 적합한 투여 수단에는 이식물로부터의 지속 방출제, 에어로졸 흡입, 점안제, 환제, 시럽제, 로젠지제 또는 츄잉 검을 포함하는 경구 제제, 및 국소 제제, 예컨대 로션, 겔, 스프레이, 연고 또는 다른 적합한 기술이 포함된다. 달리, 단백질성 TNF 억제제, 예컨대 가용성 TNFR은 단백질을 발현하는 배양된 세포를 이식함으로써 투여할 수 있다. 억제제를 1종 이상의 다른 생물학적 활성 화합물과 조합하여 투여하는 경우에, 이들은 동일 또는 상이한 경로에 의해 투여할 수 있고, 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여할 수 있다.

TNFR:Fc 또는 다른 가용성 TNFR 또는 다른 TNF 억제제는 바람직하게는 정제한 재조합 단백질을 생리학상 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제와 함께 포함하는 생리학상 허용되는 조성물 형태로 투여된다. 이러한 담체는 사용되는 투여량 및 농도에서 피투여자에게 무독성이다. 통상적으로, 이러한 조성물의 제제는 TNF-α 길항제를 완충액, 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 저분자량 폴리펩티드 (예컨대, 10개보다 소수의 아미노산을 갖는 것), 단백질, 아미노산, 탄수화물, 예컨대 글루코스, 수크로스 또는 덱스트린, 킬레이트제, 예컨대 EDTA, 글루타티온 및 기타 안정화제 및 부형제와 합하는 것을 수반한다. 중성 완충 염수 또는 동종 혈청 알부민과 혼합한 염수가 적절한 희석제의 예이다. 적절한 산업 기준에 따라, 보존제, 예컨대 벤질 알콜을 또한 첨가할 수 있다. 바람직하게는 TNFR:Fc는 적절한 부형제 용액 (예컨대, 수크로스)을 희석제로서 사용하여 동결건조물로서 제제화하였다. 적합한 성분은 사용되는 투여량 및 농도에서 피투여자에게 무독성이다. 제약 제제에 사용할 수 있는 성분의 추가 예는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 16^th Ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1980]에 기재되어 있다.

적절한 투여량은 표준 투여량 시험으로 측정될 수 있고, 선택된 투여 경로에 따라 달라질 수 있다. 투여의 양 및 회수는 치료할 징후의 특성 및 중증도, 목적하는 반응, 환자의 연령 및 상태 등과 같은 요인에 따라 달라질 것이다.

TNFR:Fc는 본원에 개시된 각종 의학적 장애를 치료하기 위해 본 발명의 한 실시양태에서는 주 1회, 또다른 실시양태에서는 주 2회 이상, 또다른 실시양태에서는 주 3회 이상 투여된다. 성인 환자는 연령이 18세 이상의 사람이다. 주사하는 경우에, 성인당 유효량의 TNFR:Fc의 투여 범위는 1 내지 20 mg/㎡, 바람직하게는 약 5 내지 12 mg/㎡이다. 달리, 양이 5 내지 100 mg/투여 범위일 수 있는 균일한 투여량을 투여할 수 있다. 피하 주사에 의해 투여될 균일한 투여량에 대한 실례적인 투여량 범위는 5 내지 25 mg/투여, 25 내지 50 mg/투여 및 50 내지 100 mg/투여이다. 본 발명의 한 실시양태에서, 하기에 기재하는 각종 징후는 TNFR:Fc를 25 mg/투여, 또는 달리 투여당 50 mg을 함유하는 주사에 허용되는 제제를 투여함으로써 치료된다. 25 mg 또는 50 mg 투여량은 반복적으로 투여할 수 있다. 주사 이외의 투여 경로를 사용하는 경우에, 투여량은 표준 의학적 실무에 따라 적절하게 조정된다. 다수의 예에서, 환자 증상에서의 개선은 3주 이상의 기간에 걸쳐 주 1 내지 3회 약 25 mg의 TNFR:Fc의 투여량, 또는 3주 이상 동안 주 1 또는 2회 약 50 mg의 TNFR:Fc의 투여량을 주사함으로써 얻을 것이지만, 더 장기간의 치료가 목적하는 개선 정도를 유도하기 위해 필요할 수 있다.

소아과 환자 (4 내지 17세)의 경우에, 임의의 적합한 처방을 사용할 수 있다. 바람직하게는, 처방은 주 1회 이상의 피하 주사에 의해 투여되는 TNFR:Fc 25 mg의 최대 투여량 이하로 0.4 mg/kg의 피하 주사를 포함한다.

본 발명은 추가로 가용성 TNFR와 조합하여 동일 환자에게 투여되는 1종 이상의 다른 약물과 공동으로 가용성 TNFR, 예컨대 TNFR:Fc를 투여하는 것을 포함하며, 각 약물은 그 의약에 적합한 처방에 따라 투여된다. "공동 투여"는 약물이 교체되거나, 또는 한 성분이 장기간 투여되고 다른 성분(들)은 간헐적으로 투여되는 조합물 뿐만 아니라 처방의 성분을 동시 또는 순차적 처리하는 것을 포함한다. 성분은 동일 또는 개별적 조성물에 동일하거나 또는 상이한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다. 공동 투여될 약물의 예에는 항바이러스제, 항생제, 진통제, 코르티코스테로이드, 염증 사이토킨의 길항제, DMARD 및 비-스테로이드성 항-염증제가 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 주요 TNF-α 억제제, 예컨대 TNFR:Fc와 조합하여 투여할 수 있는 DMARD에는 아자티오프린, 시클로포스파미드, 시클로스포린, 히드록시클로로퀸 술페이트, 메토트렉세이트, 레플루노미드, 미노시클린, 페니실라민, 술파살라진 및 금 화합물, 예컨대 경구 금, 금 나트륨 티오말레이트 및 아우로티오글루코스가 포함된다. 또한, TNFR:Fc는 TNF-α 또는 TNFR에 대한 항체를 포함하는 제2 TNF-α 길항제, TNF-α의 경쟁적 억제제로서 작용하는 TNF-α 유래 펩티드 (예컨대, 미국 특허 제5,795,859호 또는 동 제6,107,273호에 기재된 것), 에타네르셉트 이외의 TNFR-IgG 융합 단백질, 예컨대 p55 TNF-α 수용체의 세포외 부분을 함유하는 것, IgG 융합 단백질 이외의 가용성 TNFR, 또는 내인성 TNF-α 수준을 감소시키는 기타 분자, 예컨대 TNF-α 전환 효소의 억제제 (예컨대, 미국 특허 제5,594,106호 참조), 또는 펜톡시필린 또는 탈리도미드를 포함하는 상기 기재한 임의의 소분자 또는 TNF-α 억제제와 조합할 수 있다.

TNF-α에 대한 항체가 TNF-α 억제제로서 사용되는 경우에, 바람직한 투여량 범위는 0.1 내지 20 mg/kg, 더 바람직하게는 1 내지 10 mg/kg이다. 항-TNF-TNF-α 항체에 대한 또다른 바람직한 투여량의 범위는 체중 1 kg 당 0.75 내지 7.5 mg이다. 인간화 항체, 즉 항체 분자의 항원-결합 부분만 비-인간원으로부터 유래된 항체가 바람직하다. 본원에 기재된 질환을 치료하기 위한 실례적인 인간화 항체는 대략 분자량이 149,100 달톤인 키메라 IgG1.카파. 모노클로날 항체인 인플릭시맙 (REMICADE (센토코르 인크.(Centocor Inc.)로서 센토코르에 의해 판매됨)이며, 인플릭시맙은 인간 불변성 및 뮤린 가변성 영역으로 이루어져 있고, 구체적으로 인간 TNF-α에 결합한다. 다른 적합한 항-TNF-α 항체에는 인간화 항체 D2E7 및 CDP571, 및 EP 0 516 785 B1, 미국 특허 제5,656,272호, EP 0 492 448 A1에 기재된 항체가 포함된다. 이러한 항체는 정맥내로 투여 또는 주사될 수 있다.

본 발명의 한 바람직한 실시양태에서, TNF-α의 억제제로 치료가능한 것으로 본원에 개시된 각종 의학적 장애는 또다른 사이토킨 또는 사이토킨 억제제와 조합하여 치료된다. 예를 들어, 가용성 TNFR, 예컨대 TNFR:Fc는 다른 염증 사이토킨과 그의 수용체와의 상호작용을 억제하는 화합물을 또한 함유하는 조성물로 투여될 수 있다. TNFR:Fc와 조합하여 사용하는 사이토킨 억제제의 예에는 예를 들어 TGF-β, II-6 또는 II-8의 길항제가 포함된다. TNF-α 억제제, 예컨대 TNFR:Fc는 또한 사이토킨 GM-CSF, IL2 및 단백질 키나제 A 유형 1의 억제제와 조합하여 투여하여 항-레트로바이러스 치료법을 받는 HIV-감염 환자에서 T 세포 증식을 강화시킬 수 있다. 또한, TNF-α 억제제는 IL-13의 억제제와 조합하여 호즈킨병을 치료한다.

본원에 기재된 질환을 치료하기 위한 다른 조합물에는 항바이러스제인 화합물과 공동으로 투여되는 TNFR:Fc가 포함된다.

또한, 본 발명은 치료가 필요한 인간 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료 유효량의 TNF-α 억제제 및 IL-6 억제제를 투여하는 것을 포함한다.

본 발명은 또한 SARS의 예방 또는 치유 치료용 의약의 제조에서 개시된 TNF-α 억제제, 예컨대 TNFR:Fc의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 인간 종양 괴사 인자-α(hTNF-α) 및(또는) 인간 종양 괴사 인자 β(hTNF-β)의 에피토프를 중화시키는 것과 특정하게 관련된 시험관내, 계내 및(또는) 생체내 TNF 생물학적 활성을 억제 및(또는) 중화하는 항-TNF 항체 (Ab) 및(또는) 항-TNF 펩티드를 포함하는 항-TNF 화합물 및 조성물을 제공한다. 이러한 항-TNF Ab 또는 펩티드는 SARS 치료에 사용하기 위한 용도를 가진다.

본 발명의 항-TNF 화합물 및 조성물은 표면과 회합된 TNF를 갖는 세포에 대한 항체-의존 세포적 세포독성 (ADCC) 및(또는) 보체-의존 세포독성 (CDC)을 매개하는 그의 능력에 의해 치료 효능에 적합하게 될 것이다. 이들 활성의 경우에, 이펙터 세포 (ADCC의 경우) 또는 보체 성분 (CDC의 경우)의 내인성원 또는 외인성원을 사용할 수 있다. 본 발명의 뮤린 및 키메라 항체, 단편 및 영역, 그의 단편, 및 유도체는 이뮤노컨쥬게이트로서 치료학적으로 사용될 수 있다 (검토를 위해 문헌 [Dillman, R.O., Aun. Int. Med. 111: 592-603 (1989)]을 참조함). 펩티드 또는 Ab는 리신-A, 슈도모나스 독소 및 디프테리아 독소를 포함하지만 이에 제한되지 않는 세포독성 단백질에 커플링될 수 있다. 항체 또는 다른 리간드 또는 펩티드에 접합된 독소는 당업계에 잘 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Olsnes, S. et al., Immunol. Today 10:291-295 (1989)] 참조). 식물 및 박테리아 독소는 단백질 합성 장치를 붕괴시킴으로써 전형적으로 세포를 사멸시킨다.

본 발명의 항-TNF 화합물 및 조성물은 방사성핵종, 치료제, 세포독성제 및 약물을 포함하지만 이에 제한되지 않는 치료 성분의 추가 유형에 접합될 수 있다. 항체에 커플링되고, 항원 부위로 생체내 유도될 수 있는 방사성핵종의 예에는 ²¹²Bi, ¹³²I, ¹⁸⁶Re, 및 ⁹⁰Y이 포함되며, 이 목록은 모두 망라할 의도는 아니다. 방사성핵종은 방사성치료 업계에 공지되어 있는 바와 같이 세포를 국소적으로 조사하여 각종 세포내 손상을 유도함으로써 그의 세포독성 영향을 발휘한다.

항-TNF 펩티드 및(또는) 항체에 접합될 수 있고, 그후에 생체내 치료법에 사용될 수 있는 세포독성 약물에는 다우노루비신, 독소루비신, 메토트렉세이트, 및 미토마이신 C가 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 세포독성 약물은 DNA, RNA, 및 단백질 합성을 포함하는 중요한 세포 프로세스를 간섭한다. 당업계에 잘 공지되어 있는 이들 부류의 약물 및 그의 작용 메카니즘에 대한 설명에 대해서는 문헌 [Goodman, et al., Goodman and Gilman's THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, 8th Ed., Macmillan Publishing Co., 1990]을 참고한다.

본 발명의 항-TNF 화합물 및 조성물, 예컨대 펩티드 및(또는) 항체는 유리하게는 기타 모노클로날 또는 통상적 mad 키메라 항체, 단편 및 영역, 또는 림포킨 또는 조혈 성장 인자 (항체와 상호작용하는 이펙터 세포의 수 또는 활성을 증가시키기 위해 제공됨)등과 조합하여 사용할 수 있다.

본 발명의 항-TNF 화합물 및 조성물, 예컨대 펩티드 및(또는) 항체, 단편 또는 유도체는 TNF의 원치않는 부작용을 차단하는 TNF 치료법과 병용하여 사용할 수도 있다. 암 치료법에 대한 최근 접근법은 TNF를 암 환자에게 직접 투여하는 것 또는 림포킨 활성화 킬러 (LAK) 세포 (문헌 [Rosenberg et al., New Eng. J. Med. 313: 1485-1492 (1985)]) 또는 종양 침윤 림프구 (TIL) (문헌 [Kurnick et al. (Clin. Immunol Immunopath. 38:367-380 (1986)]; [Kradin et al., Cancer Immunol. Immunother. 24:76-85 (1987)]; [Kradin et al., Transplant. Proc. 20:336-338 (1988)])를 사용하는 암 환자의 면역치료법을 포함하고 있다. 대량의 TNF를 생산하기 위해 TNF 유전자로 형질감염시킨 개질 LAK 세포 또는 TIL을 사용하는 시험은 현재 진행 중이다. 이러한 치료 접근법은 본원에 기재되고, 관련 업계에 공지된 바와 같이 TNF의 다면성발현 작용에 의해 유발하는 다수의 원치않는 부작용과 관련되는 것으로 간주된다. 본 발명에 따라, 이들 부작용은 TNF 또는 대량의 TIL을 생산하는 세포를 본 발명의 항체, 단편 또는 유도체와 함께 투여되는 대상체의 공동 치료에 의해 감소될 수 있다. 유효 투여량은 상기 기재한 바와 같다. 투여량 수준은 TNF의 주요 항-종양 영향을 차단하는 것 없이 부작용을 차단하기 위해 TNF 또는 투여된 TNF-생산 세포의 투여량에 따라 조정을 요구할 것이다. 당업자는 부당한 실험 없이 이러한 투여량을 측정하는 방법을 알 것이다.

스크리닝 방법

본 발명은 SARS-관련 염증 사이토킨 억제제를 확인하는 스크리닝 방법을 고려한다. 본 발명의 실시에 따라, 스크리닝 방법은 후보 SARS-관련 염증 사이토킨 억제제를 무작위 위약-대조 연구에서 SARS와 관련된 감염원에 의해 감염된 환자군에 투여하고; 후보 SARS-관련 염증 사이토킨 억제제의 유효성을 모니터링하는 것을 포함한다. 바람직하게는, 후보 SARS-관련 염증 사이토킨 억제제는 가용성 재조합 SARS-관련 염증 사이토킨 수용체, SARS 관련 염증 사이토킨에 대한 항체, SARS-관련 염증 사이토킨의 활성에 영향을 미치는 소분자, SARS-관련 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합이다. 당업자는 본원에 제공된 지침에 기초하여 본 방식으로 이러한 화합물을 통상적으로 용이하게 확인할 수 있을 것이다.

본 발명의 또다른 실시에 따라, SARS 환자의 치료에 유효한 조성물에 대한 스크리닝 방법은 후보 TNF 억제제를 무작위 위약-대조 연구에서 SARS와 관련된 감염원에 의해 감염된 환자군에 투여하고; 후보 TNF 억제제의 유효성을 모니터링하는 것을 포함한다. 바람직하게는, 후보 TNF 억제제는 가용성 재조합 TNF 수용체, TNF에 대한 항체, TNF의 활성에 영향을 미치는 소분자, TNF 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합이다. 당업자는 본원에 제공된 지침에 기초하여 본 방식으로 TNF 억제제를 통상적으로 용이하게 확인할 수 있을 것이다.

본 발명의 또다른 실시에 따라, SARS 환자의 치료에 유효한 조성물에 대한 스크리닝 방법은 후보 항-바이러스 화합물을 무작위 위약-대조 연구에서 SARS와 관련된 감염원에 의해 감염된 환자군에 투여하고; 후보 항-바이러스 화합물의 유효성을 모니터링하는 것을 포함한다. 바람직하게는, 후보 항-바이러스 화합물은 후보 항-코로나바이러스 화합물이다. 후보 항-코로나바이러스 화합물은 바람직하게는 바이러스에 대한 항체 (예컨대, 모노클로날, 폴리클로날, 키메라 등), 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 억제제, 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 프로세싱에 영향을 미치는 바이러스-코딩된 프로테아제의 억제제, 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 예컨대 적혈구응집소-에스테라제의 활성에 영향을 미치는 억제제, 특이적 세포 표면 수용체에 대한 바이러스 결합의 억제제 (예컨대, HcoV-229E에 대한 hAPN의 결합 억제제), 바이러스 유입과 관련된 바이러스 돌기 당단백질에서의 수용체-유도된 구조적 변형의 억제제 또는 이들의 조합이다. 더 바람직하게는, 후보 항-바이러스 화합물은 SARS-관련 바이러스, 예컨대 SARS-CoV에 대한 모노클로날 항체이다. 당업자는 본원에 제공된 지침에 기초하여 이러한 방식으로 SARS 치료에서의 항-바이러스 화합물의 유효성을 통상적으로 용이하게 확인할 수 있을 것이다.

특정 실시양태의 설명은 본 발명의 전반적 취지로부터 벗어남 없이 다른 실시양태가 부당한 실험 없이 당업계의 기술 내의 지식 (본원에 인용된 참조문헌의 내용을 포함함)에 의해 이러한 특정 실시양태의 각종 응용을 위해 용이하게 변경되고(거나) 개작될 수 있는 본 발명의 일반적 특성을 충분히 나타낼 것이다. 따라서, 이러한 개작 및 변경은 본원에 나타낸 교시 및 지침에 기초하여 개시된 실시양태의 동등물의 의미 및 범위 내에 속하는 것으로 의도된다. 본원에서의 어구 또는 용어는 설명을 목적으로 하는 것이지 제한하려는 것이 아니기 때문에 본원 명세서의 용어 또는 어구는 당업자의 지식과 함께 본원에 나타낸 교시 및 지침 면에서 당업자에 의해 해석되어야 하는 것으로 이해되어야 한다.

당업자는 본원에 제공된 지침을 기초로 하여 본원에 기재된 본 발명의 특정 실시양태에 대한 다수의 동등물을 다만 통상적 실험으로 알거나 또는 확인할 수 있을 것이다. 하기 실시예는 본 발명의 바람직한 실시양태를 설명하기 위해 포함된다. 본 발명자들에 의해 발견된 대표적 기술을 따르는 실시예에 개시된 기술은 본 발명의 실시에 잘 기능하는 것으로 당업자에게 인정되어야 하며, 이에 따라 본 발명의 실시에 바람직한 방식을 구성하는 것으로 간주될 수 있다. 그러나, 당업자는 본 발명의 개시 내용에 비추어 개시된 특정 실시양태가 다양하게 변화할 수 있으며, 이 변화가 본 발명의 취지 및 범주에서 벗어나지 않으면서 동일하거나 유사한 결과를 나타낼 수 있다는 것을 인정하여야 한다. 하기 실시예는 설명을 위해 제공되는 것이지 제한을 위해 제공되는 것이 아니다.

실시예 I: SARS 치료에서의 가용성 재조합 TNFR 의 생체내 효능

가용성 재조합 TNFR을 무작위 대조 연구로 시험하였다. SARS-CoV에 의해 감염된 것을 실험실에서 확인한 50명의 성인 환자 (즉, 18세 이상)에게 TNFR:Fc 1, 5, 12 또는 20 mg/㎡의 단일 투여량을 투여하였다. 또다른 60명의 환자에게 TNFR:Fc 100 mg을 투여한 후에, 위약 또는 TNFR:Fc 1, 5, 12 또는 20 mg을 투여하였다. TNFR:Fc는 단일 주사로서 투여하였다. 임상 평가, 활력 징후, 및 실험적 파라미터를 주입 이전, 동안 및 이후 28일 동안 정기적으로 측정하였다.

임상 모니터링

환자를 혈류역학 변화, 열 또는 기타 부작용 현상에 대해 주입 후 24시간 동안 모니터링하였다. 임상 반응 연구는 하기 파라미터로 이루어졌다:

활력 징후를 15 내지 30분 마다 주입 동안 및 이후 간격에서 기록하였다. 완전한 물리적 조사를 처리 과정의 스크리닝 및 종결시에 수행하였다. 또한, 환자를 전혈구검사, 보체의 C3 및 C4 성분, IgG, IgM 및 IgA, 혈청 전해질, 크레아티닌, 우레아, 알칼리 포스파타제, 아스파르테이트 트랜스아미나제 및 총 빌리루빈을 포함하는 표준 실험실 시험에 의해 모니터링하였다. 존재하는 TNF 및(또는) SARS-CoV의 수준을 측정하기 위해 각 평가 지점에서 요 분석 및 배양을 또한 수행하였다.

반응 평가

환자에서 시험 1, 2, 3, 4, 6 및 8주에 처리에서의 대한 반응을 평가하였다. 0700와 13시간 간에 동일한 관찰자에 의해 평가하였다. 하기 임상 평가는 온도, 호흡 곤란의 주관적 느낌, 호흡 상태의 객관적 분석 (즉, 폐 평가), 설정 시간에 걸친 기침 회수, 방사능 조사, 및 혈청 조사를 포함하였다. 또한, 환자에서의 반응의 전체적 평가를 5지점 척도 (악화, 무반응, 적정한 반응, 양호한 반응, 탁월한 반응)로 기록하였다. 면역형광에 의한 혈청 양성을 항체에 대해 스크리닝하였다.

사이토킨 분석

생활성 TNF는 WEHI 164 클론 13 세포독성 분석 (문헌 [Espevik et al., J. Imm. Methods 95: 99-105 (1986)])을 사용하여 혈청에서 측정하였다. 총 IL-6은 상업적 면역분석법 (벨기에 소재의 메드게닉스 디아그노스틱스, 에스에이(Medgenix Diagnostics, SA))을 사용하여 모노클로날 항체를 사용하는 샌드위치 ELISA에 의해 혈청에서 측정하였다. 미량역가 플레이트를 3 ㎍/ml의 농도에서 18시간 동안 4 ℃에서 모노클로날 항체 LNI 314-14로 코팅하고, 0.1 M 인산염 완충 염수 (pH 7.2) 중의 3％ 소 혈청 알부민으로 블로킹하였다. 희석하지 않은 혈청 또는 기준물 (재조합 hIL 6, 0 내지 8.1 ㎍/ml)을 웰에 2벌로 첨가하고, 18시간 동안 4 ℃에서 인큐베이션하였다. 결합한 IL-6은 모노클로날 항체 LNI 110-14와 37 ℃에서 인큐베이션 90분 후에, 비오틴 표지된 염소 항-뮤린 IgG2b와 90분 동안 37 ℃에서 인큐베이션에 의해 검출하여야 한다 (미국 앨라배마주 버밍엄 소재의 써던 바이오테크놀로지(Southern Biotechnology)). 분석은 기질로서 스트렙타비딘-알칼리 포스파타 제(써던 바이오테크놀로지) 및 p-니트로페닐포스페이트를 사용하여 현상하고, 광학 밀도를 405 nm에서 판독하였다.

질환 활성

질환 활성의 각 임상 평가에 대한 반응의 패턴을 SARS에 대한 전형적 임상 평가에 따라 평가하였다. 임상 평가는 치료 후의 개선을 입증하였다. 호흡 곤란은 유입 2일 중간부터 6주까지 저하되었다. 유사하게, 온도 및 다른 인플루엔자 유사 증상은 24시간 내지 3주 기간에 걸쳐 개선되었다.

반응 데이타를 개개의 각 환자에 대해 분석하였다. 본 연구는 TNF 억제 치료의 단기 효과를 평가하기 위해 우선적으로 디자인하였지만, 충분한 시간 후에 이들 환자에 대해 후속 임상적 및 실험적 데이타가 작성가능하였다. 이들 환자 중의 반응 지속은 선택된 활성 측정에서 20％ (또는 초과) 평균 개선의 지속으로서 정의하였다. 4개 주입물 (5 mg/kg에서 각각)로 처리한 것에 비해 TNFR:Fc의 주입물 (10 m/kg에서 각각)로 치료한 환자에 대한 임상적 및 실험적 데이타의 비교를 사용하여 반응의 신속성 또는 정도에서의 차이를 나타냈다. TNF 억제제의 적절한 투여량을 투여한 환자에서, 적절한 환자 내성과 함께 만성 폐 기능, 확산능 및 폐탄성 각각을 포함하는 성인 호흡 곤란 증후군 (ARDS)에서의 약 20％ 이상의 저하를 관찰하였다. 사망률에서는 약 20％ 저하를 또한 관찰하였다.

면역학적 조사 및 사이토킨

또한, WEHI 164 클론 13 세포독성 분석 (문헌 [Espevik et al., J. Imm. Methods 95: 99-105 (1986)])을 사용하여 환자로부터의 혈청을 생활성 TNF의 존재 에 대해 시험하였다. 또한, CRP 및 SAA의 생성이 IL-6에 의해 많은 부위에서 조절되는 것으로 간주되기 때문에, 이 사이토킨의 혈청 수준을 2개의 상이한 분석인 메드게닉스 분석 및 ELISA (총 IL-6을 측정함)로 측정하였다.

실시예 II: SARS의 치료에 대한 소분자 억제제의 생체내 효능

위약-대조 연구에서, SARS를 앓고 있는 환자 (실험적으로 확인된 SARS-CoV에 의해 감염됨)에게 하기 제안된 치료를 수행하였다. SARS-CoV에 감염된 50명의 환자에게 탈리도미드 100, 200, 300 또는 400 mg의 단일 투여량을 투여하였다. 60명의 또다른 환자에게 체중 1 kg당 탈리도미드 100 mg을 투여하고, 이어서 위약 또는 100, 200, 300 또는 400 mg의 탈리도미드를 투여하였다. 탈리도미드를 경구 투여하였다. 임상 평가, 활력 징후, 및 실험적 파라미터를 주입 이전, 동안, 및 이후에 28일 동안 정기적으로 측정하였다.

임상 모니터링

환자를 혈류역학 변화, 열 또는 기타 부작용 현상에 대해 주입 후 24시간 동안 모니터링하였다. 임상 반응 연구는 하기 파라미터로 이루어졌다. 활력 징후를 15 내지 30분 마다 투여 동안 및 이후 간격에서 기록하였다. 완전한 물리적 조사를 처리 과정의 스크리닝 및 종결시에 수행하였다. 또한, 환자를 전혈구검사, 보체의 C3 및 C4 성분, IgG, IgM 및 IgA, 혈청 전해질, 크레아티닌, 우레아, 알칼리 포스파타제, 아스파르테이트 트랜스아미나제 및 총 빌리루빈을 포함하는 표준 실험실 시험에 의해 모니터링하였다. 존재하는 TNF 및(또는) 코로나바이러스의 수준을 측정하기 위해 각 평가 지점에서 요 분석 및 배양을 또한 수행하였다.

반응 평가

환자에서 시험 1, 2, 3, 4, 6 및 8주에 처리에서의 대한 반응을 평가하였다. 0700와 1300시간 간에 동일한 관찰자에 의해 평가하였다. 하기 임상 평가는 온도, 호흡 곤란의 주관적 느낌, 호흡 상태의 객관적 분석 (즉, 폐 평가), 설정 시간에 걸친 기침 회수, 방사능 조사, 및 혈청 조사를 포함하였다. 또한, 환자에서의 반응의 전체적 평가를 5지점 척도 (악화, 무반응, 적정한 반응, 양호한 반응, 탁월한 반응)로 기록하였다. 면역형광에 의한 혈청 양성을 항체에 대해 스크리닝하였다.

사이토킨 분석

생활성 TNF는 WEHI 164 클론 13 세포독성 분석 (문헌 [Espevik et al., J. Imm. Methods 95: 99-105 (1986)])을 사용하여 혈청에서 측정하였다. 총 IL-6은 상업적 면역분석법 (벨기에 소재의 메드게닉스 디아그노스틱스, 에스에이)을 사용하여 모노클로날 항체를 사용하는 샌드위치 ELISA에 의해 혈청에서 측정하였다. 미량역가 플레이트를 3 ㎍/ml의 농도에서 18시간 동안 4 ℃에서 모노클로날 항체 LNI 314-14로 코팅하고, 0.1 M 인산염 완충 염수 (pH 7.2) 중의 3％ 소 혈청 알부민으로 블로킹하였다. 희석하지 않은 혈청 또는 기준물 (재조합 hIL 6, 0 내지 8.1 ㎍/ml)을 웰에 2벌로 첨가하고, 18시간 동안 4 ℃에서 인큐베이션하였다. 결합한 IL-6은 모노클로날 항체 LNI 110-14와 37 ℃에서 인큐베이션 90분 후에, 비오틴 표지된 염소 항-뮤린 IgG2b와 90분 동안 37 ℃에서 인큐베이션에 의해 검출하여야 한다 (미국 앤라배마주 버밍엄 소재의 써던 바이오테크놀로지). 분석은 기질로서 스트렙타비딘-알칼리 포스파타제(써던 바이오테크놀로지) 및 p-니트로페닐포스 페이트를 사용하여 현상하고, 광학 밀도를 405 nm에서 판독하였다.

질환 활성

질환 활성의 각 임상 평가에 대한 반응의 패턴을 SARS에 대한 전형적 임상 평가에 따라 평가하였다. 임상 평가는 탈리도미드를 사용하는 치료 후의 개선을 입증하였다. 호흡 곤란은 유입 2일 중간부터 6주까지 저하되었다. 유사하게, 온도 및 다른 인플루엔자 유사 증상은 24시간 내지 3주 기간에 걸쳐 개선되었다.

반응 데이타를 개개의 각 환자에 대해 분석하였다. 본 연구는 TNF 억제 치료의 단기 효과를 평가하기 위해 우선적으로 디자인하였지만, 충분한 시간 후에 이들 환자에 대해 후속 임상적 및 실험적 데이타가 작성가능하였다. 이들 환자 중의 반응 지속은 선택된 활성 측정에서 20％ (또는 초과) 평균 개선의 지속으로서 정의하였다. 4개 주입물 (5 mg/kg에서 각각)로 처리한 것에 비해 탈리도미드의 주입물 (10 m/kg에서 각각)로 치료한 환자에 대한 임상적 및 실험적 데이타의 비교를 사용하여 반응의 신속성 또는 정도에서의 차이를 나타냈다. TNF 억제제의 적절한 투여량을 투여한 환자에서, 적절한 환자 내성과 함께 만성 폐 기능, 확산능 및 폐탄성 각각을 포함하는 성인 호흡 곤란 증후군 (ARDS)에서의 약 20％ 이상의 저하를 관찰하였다. 사망률에서는 약 20％ 저하를 또한 관찰하였다.

면역학적 조사 및 사이토킨

또한, WEHI 164 클론 13 세포독성 분석 (문헌 [Espevik et al., J. Imm. Methods 95: 99-105 (1986)])을 사용하여 환자로부터의 혈청을 생활성 TNF의 존재에 대해 시험하였다. 또한, CRP 및 SAA의 생성이 IL-6에 의해 많은 부위에서 조절 되는 것으로 간주되기 때문에, 이 사이토킨의 혈청 수준을 2개의 상이한 분석인 메드게닉스 분석 및 ELISA (총 IL-6을 측정함)로 측정하였다.

본 발명을 충분히 기재함으로 인해 본원에 상술한 바와 같이 본 발명의 취지 또는 범위로부터 벗어남 없이 본 발명에 대해 다수의 변화 및 변경이 만들어질 수 있다는 것이 당업자에게 명백할 것이다. 상기는 본 발명의 바람직한 실시양태를 다수의 가능한 변경과 함께 기재하였다. 그러나, 이들 실시양태는 단지 예이지 본 발명은 이에 제한되지 않는다.

Claims

치료 유효량의 SARS-관련 염증성 사이토킨의 억제제를 제약상 허용되는 담체 중에 포함하는 조성물.
제1항에 있어서, SARS-관련 염증성 사이토킨의 억제제가 가용성 재조합 SARS-관련 염증성 사이토킨 수용체, SARS-관련 염증성 사이토킨에 대한 항체, SARS-관련 염증성 사이토킨의 활성에 영향을 미치는 소분자, SARS-관련 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합인 조성물.
제2항에 있어서, SARS-관련 염증성 사이토킨의 억제제가 종양 괴사 인자 (TNF)의 억제제인 조성물.
제3항에 있어서, 종양 괴사 인자 (TNF)의 억제제가 TNF 재조합 수용체 (TNFR)인 조성물.
제3항에 있어서, 종양 괴사 인자 (TNF)의 억제제가 TNF에 대한 항체인 조성물.
제3항에 있어서, 종양 괴사 인자 (TNF)의 억제제가 TNF-α의 억제제인 조성 물.
제3항에 있어서, 종양 괴사 인자 (TNF)의 억제제가 TNF-β의 억제제인 조성물.
제1항에 있어서, SARS-관련 염증성 사이토킨의 억제제가 가용성 재조합 수용체인 조성물.
제1항에 있어서, 억제제가 SARS-관련 염증성 사이토킨에 대한 항체인 조성물.
제9항에 있어서, 항체가 모노클로날 항체인 조성물.
제9항에 있어서, 항체가 폴리클로날 항체인 조성물.
제9항에 있어서, 항체가 키메라 항체인 조성물.
제1항에 있어서, 종양 괴사 인자의 억제제가 TNF의 활성에 영향을 미치는 소분자인 조성물.
제1항에 있어서, 소분자가 TNF의 TNFR과의 결합을 방해하여 종양 괴사 인자 (TNF)의 활성에 영향을 미치는 것인 조성물.
제1항에 있어서, 항-바이러스 화합물을 제약상 허용되는 담체 중에 추가로 포함하는 조성물.
제1항에 있어서, 항-바이러스 화합물이 항-코로나바이러스 화합물인 조성물.
제16항에 있어서, 항-코로나바이러스 화합물이 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 억제제, 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 프로세싱에 영향을 미치는 바이러스-코딩된 프로테아제의 억제제, 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 적혈구응집소-에스테라제의 활성에 영향을 미치는 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 특이적 세포 표면 수용체에의 바이러스 결합의 억제제, 바이러스 유입과 관련된 바이러스 돌기 당단백질에서의 수용체-유도된 구조적 변형의 억제제 또는 이들의 조합인 조성물.
제16항에 있어서, 항-코로나바이러스 화합물이 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 억제제인 조성물.
제16항에 있어서, 항-코로나바이러스 화합물이 바이러스 RNA-의존 RNA 중합 효소의 프로세싱에 영향을 미치는 바이러스-코딩된 프로테아제의 억제제인 조성물.
제16항에 있어서, 항-코로나바이러스 화합물이 감염된 세포로부터의 코로나바이러스의 출아 또는 방출의 억제제인 조성물.
제20항에 있어서, 감염된 세포로부터 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제가 적혈구응집소-에스테라제의 활성에 영향을 미치는 것인 조성물.
제16항에 있어서, 항-코로나바이러스 화합물이 특이적 세포 표면 수용체에의 바이러스 결합의 억제제로서 작용하는 것인 조성물.
제16항에 있어서, 항-코로나바이러스 화합물이 hAPN의 HCoV-229E에의 결합을 억제하는 것인 조성물.
제16항에 있어서, 항-코로나바이러스 화합물이 바이러스 유입과 관련된 바이러스 돌기 당단백질에서의 수용체-유도된 구조적 변형의 억제제로서 작용하는 조성물.
가용성 재조합 SARS-관련 염증성 사이토킨 수용체, SARS-관련 염증성 사이토킨에 대한 항체, SARS-관련된 염증성 사이토킨의 활성에 영향을 미치는 소분자, SARS-관련 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합을 포함하는 조성물.
제25항에 있어서, 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 억제제, 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 프로세싱에 영향을 미치는 바이러스-코딩된 프로테아제의 억제제, 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 적혈구응집소-에스테라제의 활성에 영향을 미치는 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 바이러스 유입과 관련된 바이러스 돌기 당단백질에서의 수용체-유도된 구조적 변형의 억제제 또는 이들의 조합을 추가로 포함하는 조성물.
가용성 재조합 TNF 수용체, TNF에 대한 항체, TNF의 활성에 영향을 미치는 소분자, TNF 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제1 물질; 및

바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 억제제, 바이러스 RNA-의존 RNA 중합효소의 프로세싱에 영향을 미치는 바이러스-코딩된 프로테아제의 억제제, 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 적혈구응집소-에스테라제의 활성에 영향을 미치는 감염된 세포로부터의 코로나바이러스 출아 또는 방출의 억제제, 특이적 세포 표면 수용체에 결합는 바이러스의 억제제, 바이러스 유입과 관련된 바이러스 돌기 당단백질에 있어서의 수용체-유도된 구조적 변형의 억제제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 제2 물질

을 포함하는 조성물.
후보 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제를 무작위 위약-대조 연구에서 SARS와 관련된 감염원으로 감염된 환자군에 투여하고;

후보 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제의 유효성을 모니터링하고;

이에 따라 확인된 치료적으로 유효한 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제를 제약상 허용되는 담체와의 조성물로 포함시키는 것

을 포함하는 방법으로 제조된 조성물.
제28항에 있어서, 무작위 위약-대조 연구가 맹검 위약-대조 연구인 조성물.
제28항에 있어서, 무작위 위약-대조 연구가 이중 맹검 위약-대조 연구인 조성물.
제28항에 있어서, 후보 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제가 가용성 재조합 SARS-관련 염증성 사이토킨 수용체, SARS-관련 염증성 사이토킨에 대한 항체, SARS-관련 염증성 사이토킨의 활성에 영향을 미치는 소분자, SARS-관련 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합인 조성물.
후보 종양 괴사 인자 (TNF) 억제제를 무작위 위약-대조 연구에서 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)과 관련된 감염원으로 감염된 환자군에 투여하고;

후보 TNF 억제제의 유효성을 모니터링하고;

이에 따라 확인된 치료적으로 유효한 TNF 억제제를 제약상 허용되는 담체와의 조성물로 포함시키는 것

을 포함하는 방법으로 제조된 조성물.
제32항에 있어서, 무작위 위약-대조 연구가 맹검 위약-대조 연구인 조성물.
제32항에 있어서, 무작위 위약-대조 연구가 이중 맹검 위약-대조 연구인 조성물.
제32항에 있어서, 후보 TNF 억제제가 가용성 재조합 TNF 수용체, TNF에 대한 항체, TNF의 활성에 영향을 미치는 소분자, TNF 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합인 조성물.
중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)에 대해 효과적인 의약에서의 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
SARS-관련 코로나바이러스 (SARS-CoV)에 대해 효과적인 의약에서의 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
치료 유효량의 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)-관련된 염증성 사이토킨의 억제제를 SARS를 앓는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자의 치료 방법.
제38항에 있어서, SARS-관련 염증성 사이토킨의 억제제가 가용성 재조합 SARS-관련 염증성 사이토킨 수용체, SARS-관련 염증성 사이토킨에 대한 항체, SARS-관련 염증성 사이토킨의 활성에 영향을 미치는 소분자, SARS-관련 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합인 방법.
치료 유효량의 TNF 억제제를 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)을 앓는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자의 치료 방법.
제40항에 있어서, TNF 억제제가 가용성 재조합 TNF 수용체, TNF에 대한 항체, TNF의 활성에 영향을 미치는 소분자, TNF 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합인 방법.
후보 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제를 무작위 위약-대조 연구에서 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS)과 관련된 감염원으로 감염된 환자군에 투여하고;

후보 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제의 유효성을 모니터링하여 치료적으로 유효한 SARS-관련 염증성 사이토킨을 확인하는 것

을 포함하는, SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제의 스크리닝 방법.
제42항에 있어서, 후보 SARS-관련 염증성 사이토킨 억제제가 가용성 재조합 SARS-관련 염증성 사이토킨 수용체, SARS-관련 염증성 사이토킨에 대한 항체, SARS-관련 염증성 사이토킨의 활성에 영향을 미치는 소분자, SARS-관련 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합인 방법.
후보 종양 괴사 인자 (TNF) 억제제를 무작위 위약-대조 연구에서 SARS와 관련된 감염원으로 감염된 환자군에게 투여하고;

후보 TNF 억제제의 유효성을 모니터링하여 치료적으로 유효한 TNF 억제제를 확인하는 것

을 포함하는, SARS 환자의 치료에 효과적인 조성물의 스크리닝 방법.
제44항에 있어서, 후보 종양 괴사 인자 (TNF) 억제제가 가용성 재조합 TNF 수용체, TNF에 대한 항체, TNF의 활성에 영향을 미치는 소분자, TNF 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 조합인 방법.
제44항에 있어서, 무작위 위약-대조 연구가 맹검 위약-대조 연구인 방법.
제44항에 있어서, 무작위 위약-대조 연구가 이중 맹검 위약-대조 연구인 방법.