KR20050110148A - 싸리나무 및/또는 까마중 추출물을 주요 활성성분으로함유하는 화장료 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 식물 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 본 발명의 화장료 조성물은 싸리나무 추출물 또는 까마중 추출물로부터 선택된 1종 이상을 주요 활성성분으로 함유함으로써 우수한 미백효과와 항염증 피부자극 완화효과를 제공한다.
본 발명에 따른 싸리나무 추출물 또는 까마중 추출물은 기미, 주근깨 및 피부 색소 침착의 원인이 되는 물질인 멜라닌 합성에 관련된 신호전달물질의 합성을 억제함으로써 멜라닌 합성을 억제하여 미백효과를 나타낼 뿐만 아니라, 화학물질을 포함하는 화장품 기재에 의해 야기되는 피부세포 사멸을 억제하고, 염증 유발관련 효소 활성억제를 통한 피부자극 완화 및 면역증강작용 효과를 제공한다.
따라서, 이러한 싸리나무 및 까마중 추출물을 함유함으로써 탁월한 피부 미백효과, 항염증, 피부 자극 완화효과를 가지는 화장수, 크림, 유액, 팩, 파우더 등의 화장료 조성물을 제조할 수 있다.
Description
본 발명은 식물 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
인간의 피부는 자외선, 환경오염으로 인한 오존 또는 대기 중에 존재하는 기타 유해한 물질에 반응하여 약하거나 심각한 자극을 받는다. 특히 자극에 의해 방출되는 산소 라디칼 및 비특이적 단백질 분해효소에 의해 피부는 손상되기 쉽다.
피부색을 결정하는 인자로는 기본적으로 인종과 지역, 성별, 나이에 따른 차이를 배제하면 기미, 주근깨와 자외선 노출로 인한 태닝과 같은 부분 또는 전체적인 색소침착, 그 외에 여드름 및 흉터, 각질의 분포 상태와 혈액 순환, 스트레스, 건강상태 등이 있다. 이상의 인자들 가운데에서도 가장 중요한 인자는 색소침착이다.
그러나 과도한 색소침착은 피부미용 관점에서 심각한 정신적 부담을 주어 정상적인 사회활동에 지장을 주기도 하고, 예로부터 동양권의 여성들은 하얗고 고운 피부를 선호해 왔으며 이를 미의 기준으로 삼아왔던 바 이러한 색소침착의 원인을 규명하여 이를 방지하고자 하는 연구가 계속되어 오고 있다.
피부색에 영향을 주는 색소로는 멜라닌, 멜라조이드, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있는데 이중 가장 중요한 것은 멜라닌으로, 멜라닌의 생합성에 영향을 미치는 가장 큰 요인은 자외선과 체내 호르몬 분비를 들 수 있다. 멜라닌은 자외선을 흡수 또는 산란시켜 자외선으로부터 피부가 손상되는 것을 방지하는데 큰 역할을 하는데, 특별한 최대흡수파장이 없으며 전 영역의 빛을 흡수한다. 또한 활성산소종을 제거하는 기능이 탁월하나, 때로는 멜라닌 자체가 활성산소를 발생시키기도 하며, 멜라닌 구조내의 카테콜이나 퀴논에 의하여 다른 물질을 환원시키거나 산화시키고, 멜라닌 자체가 자유라디칼의 성질을 나타내기도 한다.
멜라닌의 생합성은 아미노산의 일종인 티로신이 멜라노사이트의 멜라노좀에서 티로시나제에 의해 산화되어 디하이드록시 페닐알라닌 (dihydroxy phenylalanine)으로 전환되는 것을 시작으로 계속되는 일련의 산화과정을 거쳐 갈색(pheomelanin), 흑색 (eumelanin)의 중합체로 형성된다. 이러한 생합성 과정은 멜라노좀이라는 특수한 형태의 갈색 세포내 소기관에서 진행되며 멜라닌 과립을 포함한 멜라노좀은 핵 주변 부위에서 수지상 돌기 끝부분으로 이동, 케라티노사이트의 식세포작용에 의해 세포질 내로 이동하고 이들은 케라티노사이트의 핵 주변에 축적된다.
멜라닌의 합성과 멜라노좀의 수, 주위의 케라티노사이트로의 이동은 부분적으로 호르몬과 자외선 등에 영향을 받고 일차적으로는 유전적인 영향을 크게 받는다. 그 밖에 티로시나제의 발현 및 멜라닌의 합성, 전송에 관여하는 세포내 조절인자인 싸이토카인 (cytokine), 구리, 아연, 철 등의 금속 이온 및 인터페론, 프로스타글란딘, 히스타민 등이 관여하는 것으로 알려져 있다 (박수남 : 대한화장품학회지, 25: 77-127, 1999).
싸이토카인은 세포들간의 신호를 보내는 생물학적 작용에 관여하는 분자로 그 범주는 매우 다양하다. 대부분은 단백질이거나 펩타이드이며 당이 부착되기도하며 대부분 분자량이 작은 단백질 (8~25 kDa)이며 단일 사슬로 이루어져 있다. 싸이토카인은 세포 성장, 세포 활성, 염증, 면역성, 조직 회복, 섬유증 (섬유 형성) 등의 형태 발생과 같은 모든 중요한 생물학적 작용을 조절한다. 싸이토카인의 예로는 인터루킨, 인터페론, 성장 인자 등 여러 가지를 들 수 있다.
이모카와(Imokawa) 등의 연구에 의하면 사람의 케라티노사이트에 UVB를 조사하면 인터루킨-1a (interleukin-1a, IL-1a)와 인터루킨-6 (interleukin-6, IL-6)의 현저한 생성과 관련 유전자의 과발현을 관찰할 수 있는 것으로 알려져 있다. 또한 IL-1a와 IL-6은 다시 케라티노싸이트의 엔도테린-1(endothelin-1, ET-1)의 발현을 유도하는데 이는 인접한 멜라노싸이트에 작용하여 멜라닌의 생합성에 중요한 역할을 한다는 사실이 알려져 있다 (G Imokawa, 외 : J. Biol. Chem., 267: 24675-24680, 1992, G Imokawa, 외: Pigment Cell Res., 10: 218-228, 1997). 따라서 IL-1a와 IL-6와 같은 싸이토카인의 발현을 억제함으로써 보다 근본적인 색소침착의 원인을 제거하여 미백효과를 기대할 수 있다.
이미 아스코르빈산(일본특개평 4-9320), 하이드로퀴논(일본특개평 6-192062), 코직산(일본특개소 56-7710), 알부틴(일본특개평 4-93150) 및 일부의 추출물 등이 티로시나제 저해 활성을 가지고 있어 미백 화장료로 이용되고 있으나 화장품 제형 중에서의 안정성이 나빠 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능, 효과의 불분명 및 안전성 문제 등으로 그 사용이 제한되고 있는 실정이다.
또한 최근 소비자들은 점차 특수한 조성에 따라 고품질의 기능적 특성을 가짐과 동시에 피부보호, 자극억제, 염증억제, 일광차단 등의 최소한의 부작용을 갖는 화장품의 사용을 요구하고 있고, 종래의 화학물질을 함유한 화장품은 미백효과 이외에 피부 자극 경감이라는 다기능적 측면을 충족시킬 수 없다는 문제점이 있었다.
본 발명은 이상과 같은 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로, 본 발명의 목적은 여러 천연물들 중 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 낙엽관목 식물인 싸리나무 추출물 또는 가지과의 일년초 까마중 추출물부터 선택된 1종 이상의 천연물로부터 제조된 추출물을 선택하여, 화장품 원료로서의 효능을 확인하고 그 사용방법을 개발함으로써, 다양한 화장품의 원료의 선택범위를 높이고, 또 이 원료를 사용하여 좀더 자극이 없으면서도 소정의 기능성 효과를 나타내는 화장품을 제조할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.
즉 본 발명의 목적은 기미, 주근깨 및 피부 색소 침착의 원인이 되는 물질인 멜라닌 합성을 억제하여 미백효과를 나타낼 뿐만 아니라, 화장품 기재에 의해 야기되는 피부 자극을 경감시키는 피부세포 사멸 억제 효과, 염증 유발관련 효소 활성억제 효과 등의 피부자극 완화효과와 면역증강작용 효과를 나타내는 천연 추출물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 싸리나무 및 까마중 추출물을 함유함으로써 피부 미백 효과, 항염증, 피부 자극 완화효과 등 우수한 효과를 나타내는 화장수, 크림, 유액, 팩, 파우더 등의 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
이와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명은 싸리나무 추출물, 까마중 추출물 및 이들의 혼합물로 이루어지는 군에서 선택된 성분을 주요 활성성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
싸리나무는 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 낙엽관목 식물로서 학명은 Lespedeza bicolor turczaninow var 이다. 산과 들에 흔히 자라며 턱잎은 가늘고 길며 짙은 갈색이고 길이 약 5mm이다. 작은잎은 달걀 모양이거나 달걀을 거꾸로 세워놓은 모양이다. 겉면은 짙은 녹색이며 뒷면에 눈털이 나고 가장자리가 밋밋하다. 꽃은 7∼8월에 붉은 자줏빛으로 피고 잎겨드랑이에 총상꽃차례로 달린다. 꽃받침은 얕게 4개로 갈라지고 뒤쪽의 1개는 다시 2개로 갈라지며 끝이 뾰족하다. 한방에서는 무좀, 습진, 마른버짐 등 갖가지 피부병 등에 사용하였다.
까마중은 가지과의 일년초로서 학명은 Solanum nigrum L 이다. 저지대의 길가나 밭 주의에 자라며 높이 20~90cm이고 가지가 옆으로 많이 퍼지며 원줄기에 능선이 약간 나타난다. 잎은 호생하고 란형이며 예저 또는 둔두이고 원저 또는 넓은 예저이다. 긴 엽병의 윗부분까지 흐르고 길이 6~10cm, 폭 4~6cm로서 거치가 없거나 피상거치가 있다. 꽃은 5~7월에 피며 지름 6~7mm로서 백색이고, 화서는 잎보다 위에서 나오며 길이 1~3cm의 화경이 갈라지고 길이 3~8mm의 화경에 길이 7~12mm의 소화경이 있는 꽃이 산형으로 달린다. 꽃받침과 화관은 5개로 갈라지고 옆으로 퍼지며, 1개의 암술과 5개의 수술이 있다. 삭과는 둥글고 지름 6~7mm이며 흑색으로 익는다. 한방에서는 부인병, 치질, 악창, 만성 기관지염 등에 사용하였다.
상기와 같은 천연식물은 이전에는 미백효과가 있다고 알려져 있지 아니하였고 나아가 상기 천연식물의 추출물을 미백효과를 위해 응용한 예도 없었으며, 비로소 본 발명을 통하여 피부 미백, 항염증 및 피부 자극 완화 효과를 나타낸다는 것이 밝혀지게 된 것이다.
본 발명에 사용된 싸리나무 추출물 또는 까마중 추출물은 싸리나무 또는 까마중으로부터 침출, 전출하여 얻은 침출액, 또는 그 침출액을 다시 일부 또는 전부 농축하여 얻은 농축물, 또는 다시 그 농축물을 건조시켜 제조한 추출 엑기스 및 추출액 중에 함유되고 있는 주효과를 발휘하는 화학물질 그 자체를 포함한다.
또한, 본 발명에 따른 싸리나무 추출물 또는 까마중 추출물 또는 이들의 혼합물의 함량은 화장료 조성물 전체에 대해서 동결건조중량 기준 0.001 내지 30.0 중량%인 것이 바람직하다. 상기 추출물의 함량이 0.001중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 거의 없으며, 30.0중량% 이상인 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하여 경제적이지 못하기 때문이다.
또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기의 추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 주효과를 손상시키지 않는 범위내에서 바람직하게는 주효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하다.
상기 싸리나무 추출물 또는 까마중 추출물 또는 이들의 혼합물은 조성물 전체에 대하여 동결건조중량기준 0.001 내지 30.0 중량% 로 조성물 내에 존재할 수 있다. 만약 상기 식물추출물이 추출물을 함유하는 용액의 형태로 존재한다면 당업자는 상기 농도 범위 내에서 본 발명에 따른 조성물 내에 이 용액의 양을 조절할 수 있을 것이다.
본 발명인 화장료 조성물은 추출용매로서 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄,헥산 및 그의 혼합물로부터 선택된 것을 사용한다.
또한 본 발명의 주제는 피부 미백제, 항염증제, 피부 자극 완화제로 사용되는 화장료 조성물의 용도이다.
본 발명의 조성물은 수성, 수성-알콜성 또는 오일성 용액, 수중유 또는 유증수 또는 다중 에멀전, 수성 또는 오일성 겔, 액체, 페이스트성 또는 고체 무수 생성물, 소구체를 사용한 수성 상에서의 오일분산물의 형태일 수 있으며 보다 바람직하게는 이온성 및/또는 비이온성 형태의 지질 소포체의 형태일 수 있다.
본 조성물은 다소 유체일수 있으며,백색 또는 유색크림, 연고, 밀크로션, 유액(serum), 에센스, 페이스트 또는 무스의 외관을 가질 수 있다. 이는 선택적으로 에어로졸 형태로 피부에 적용될 수도 있고, 고체 형태 예컨대, 스틱의 형태일 수도 있다. 이는 피부용 케어 제품 및/또는 메이크업 제품으로서 사용될 수도 있다.
공지된 방식으로 본 발명에 따른 조성물은 또한 화장 분야에서 통상적인 보조제 예컨대 친수성 또는 친지성 겔화제, 친수성 또는 친지성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제 및 염료를 함유할 수 있다. 이들 다양한 보조제의 양은 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 양이며, 예턴대 조성물 총중량에 대해 0.01 중량% 내지 20중량%이다. 그 성질에 따라 이러한 보조제는 지방상, 수성상, 지질 소포체 및/또는 나노입자에 도입될 수 있다. 어떠한 경우라도 보조제 및 그 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 악영향을 미치지 않도록 선택될 것이다.
본 발명은 이제 하기의 실시예를 통하여 예증될 것이다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.
실시예 1: 싸리나무 추출물 제조
세절하여 음건한 싸리나무를 95%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결건조하였다. 감압농축물 및 동결건조물이 0.001 내지 30.0 중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 분산/용해하여 싸리나무 추출물을 제조하였다.
실시예 2: 까마중 추출물 제조
세절하여 음건한 까마중을 95%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결건조하였다. 감압농축물 및 동결건조물이 0.001 내지 30.0중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 분산/용해하여 까마중 추출물을 제조하였다.
실시예 3: B16F1 멜라닌형성세포를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정 실험
본 실시예는 실시예 1 내지 2에서 수득한 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라닌형성세포에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백효과를 평가한 것이다.
본 실시예에 사용된 B16F1 멜라닌형성세포는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양 중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실시예에 사용된 B16F1 멜라닌형성세포는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호 : 6323)로부터 분양받아 사용하였다.
B16F1 멜라닌형성세포의 멜라닌 생합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다.
B16F1 멜라닌형성세포를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2 X 106 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어 낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan : Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라닌형성세포의 멜라닌 생성저해율(%)은 수학식 1에 의하여 계산하였으며, IC50값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양
B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양
B16F1 멜라닌형성세포의 멜라닌 생성 억제효과는 싸리나무 추출물의 IC50값은 0.1%로 나타났으며, 까마중 추출물의 IC50값은 0.15%로 나타나, 기존의 미백제인 하이드로퀴논, 알부틴, 유용성 감초 추출물, 상백피 추출물 등에 비해 유사하거나 우수한 효과를 나타내었다(표 1).
| 시료명 | 처리농도(%) | 멜라닌 합성 저해효과(IC50) |
| 싸리나무 추출물(실시예 1) | 0.1 | 0.1% |
| 까마중 추출물(실시예 2) | 0.1 | 0.15% |
| 하이드로퀴논 | 0.1 | 0.03% |
| 알부틴 | 0.1 | 0.2% |
| 상백피 추출물 | 0.1 | 5% |
| 유용성 감초 추출물 | 0.1 | 0.03% |
실시예 4: 케라티노싸이트를 이용한 멜라닌 합성에 관련된 세포신호전달물질 저해 효과 측정
본 실시예는 실시예 1 내지 2에서 수득한 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물이 UVB에 의해 케라티노싸이트에서 분비가 촉진되어 멜라노싸이트의 멜라닌 형성을 촉진하는 물질인 인터루킨-1α, 인터루킨-6을 그 타겟으로 하는 것을 확인하기 위한 것이다. 인터루킨-1α, 인터루킨-6의 활성을 저해하면 이들의 멜라닌 합성 역시 저해된다. 이는 일상생활 속에 외부 자외선에 노출된 피부에서의 자외선에 의한 멜라닌 합성을 저해하는 것으로 미백제를 평가하기 위한 방법이다.
본 실시예는 사람의 피부로부터 분리된 케라티노싸이트 세포주로서 HaCaT (Boukamp P., et al., The Journal of Cell Biology, 106:761-771, 1988)을 사용하였으며, 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물에 의한 세포의 신호 전달 물질인 싸이토카인 저해 효과는 다음과 같이 측정하였다.
HaCaT을 24웰 플레이트에 각 웰당 1X105농도로 분주하고 하루동안 세포를 부착시켰다. 다음날 세포배양배지를 제거하고 PBS로 세척한 후 6.8 mJ UVB를 세포에 조사하여 싸이토카인 분비를 촉진시키고, 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물 10ppm을 세포에 처리하고 5시간 동안 배양하였다. 이때 사용한 세포배양배지에는 소의 혈청을 첨가하지 않았다. 5시간 후에 세포 배양 배지를 150㎕씩 96 웰 플레이트에 넣고 4℃에서 하루동안 코팅하였다. 배지를 제거하고 PBS-T(0.2% Tween20이 첨가된 PBS)로 3회 세척한 후 블록킹버퍼(3% Bovine Serum Albumin를 PBS-T에 녹인 것)를 두 시간 처리하였다. 버퍼를 제거하고 1차 항체인 항IL-1α, 항IL-6를 각각 블록킹버퍼로 희석하여 처리하였다. 90분 동안 37℃에서 반응시킨 후 3회 세척하고, 2차 항체인 항레빗-IgG를 처리한 후 90분 동안 37℃에서 반응시켰다. 5회 세척 후 기질 반응용액(833 mM 소듐 시트레이트, 385 mM 소듐 포스페이트, 0.1% H2O2, 0.0005% O-페닐렌디아민)을 웰당 150ul씩 넣고 37℃에서 40분 동안 반응시킨다. 2NH2SO4를 웰당 50㎕씩 넣어 반응을 중지하고, 490nm 에서 흡광도를 측정한 후 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물의 인터루킨에 대한 저해 효과(%)를 수학식 2에 의해서 계산하였다.
A : UVB를 처리한 후 시료를 처리하지 않은 웰의 흡광도
B : UVB를 처리한 후 시료를 처리한 웰의 흡광도
HaCaT 케라티노싸이트의 싸이토카인 합성 억제효과를 측정한 결과, 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물의 IC50값은 인터루킨-1α에 대해 0.005-0.01%, 인터루킨-6 에 대해 0.001-0.008%로 나타나 기존에 알려진 미백제인 알부틴에 비해 우수한 효과를 나타내었다(표 2).
이와 같은 결과로 볼 때, 본 발명의 싸리나무와 까마중 추출물의 경우에는 기존의 미백제가 단순히 티로시나제 효소의 활성만을 저해하는 것과는 달리 멜라닌 생합성에 관여하는 세포 신호전달물질의 합성을 저해하여 미백효과를 나타내는 것을 알 수 있다.
| 시료 | 싸이토카인 합성 저해효과(IC50) | |
| 인터루킨-1α | 인터루킨-6 | |
| 알부틴 | 0 | 0 |
| 싸리나무 추출물 | 0.01% | 0.008% |
| 까마중 추출물 | 0.005% | 0.001% |
실시예 5: 염증유발관련 효소 (hyaluronidase) 활성 억제효과 측정 실험
본 실시예는 실시예 1 내지 2에서 수득한 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물의 항염증 효과를 확인하기 위해 염증유발관련 효소인 히아루로니디아제의 효소 활성을 측정하여 판단한 것이다.
히아루로니디아제는 히아루론산을 가수분해하는 효소로 염증을 유발하는 기능을 가지고 있다. 본 실시예에서는 이 효소의 활성을 억제하여 항염증효과를 측정하는 방법(Kakegawa Y., Japanese J. of Inflammantion, 4:437-438, 1984)을 응용해 항염증효과를 판정하였다.
컴프리, 시소, 삼백초, 유용성 감초 추출물, 싸리나무 및 까마중 추출물을 시료로 사용하여 히아루로니디아제 활성 억제 효과를 조사하였다.
각 시료들의 히아루로니디아제에 대한 저해활성은 다음과 같이 행하였다.
시료 100㎕와 히아루로니디아제 용액(type Ⅳ-S, Sigma사, 400 U/ml) 50㎕를 넣고 37℃ 에서 20분간 반응시킨 후, 효소활성화용액(compound 48/80 CaCl2??2H2O, Sigma 사, 0.1 mg/ml)을 100㎕를 첨가하고 다시 37℃에서 20분간 반응시킨다. 히아루론산(hyaluronic acid) 용액(0.4 mg/ml)을 250㎕ 넣고 37℃에서 40분간 반응시키고, 0.4N NaOH 100㎕를 넣어 반응을 종결시킨다. 포타슘보레이트 용액을 100㎕를 첨가하여 95℃에서 3분간 반응시키고 냉각시킨 다음 ρ-디메틸아미노벤즈알데히드 용액을 3㎖ 넣고 다시 20분간 37℃에서 반응시켜 발색시킨다. 585nm에서 흡광도를 측정하여 히아루로니디아제에 대한 저해율을 측정하였다. 히아루로니디아제에 대한 저해율(%)은 수학식 3에 의하여 계산하였으며, IC50값은 히아루로니디아제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 효소활성
B : 시료를 첨가한 웰의 효소 활성
히아루로니디이제 효소활성 억제효과를 시험한 결과 싸리나무 추출물 과 까마중 추출물의 IC50값은 0.08 내지 0.1%로 나타나 히아루로니디아제 저해효과가 뛰어나다고 알려진 기존의 항염증제인 유용성 감초 추출물, 컴프리 추출물, 삼백초 추출물, 시소 추출물 등에 비해 비슷하거나 우수한 효과를 나타내었다(표 3).
| 시료명 | 멜라닌 합성저해효과(IC50) |
| 싸리나무 추출물 | 0.1% |
| 까마중 추출물 | 0.08% |
| 컴프리추출물 | 0.22% |
| 시소 추출물 | 0.58% |
| 유용성 감초추출믈 | 0.08% |
| 삼백초 추출물 | 0.3% |
실시예 6: 세포 배양기술을 이용한 자극완화 효과 평가
본 실시예는 실시예 1 내지 2에서 수득한 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물의 자극완화 효과를 평가하기 위하여 세포 배양 기술을 이용하여 피부 자극을 유발하는 물질인 소듐라우릴썰페이트(Sodium Lauryl Sulfate; SLS)에 의한 세포 사멸을 저해시키는 정도로 자극완화 효과를 평가한 것이다.
SLS는 화장품 기재의 피부 자극 평가의 기준이 되는 물질로 세포막에 결합되어 세포대사 억제와 세포막을 파괴하여 피부자극을 유발하는 물질이다.
본 실시예는 사람 섬유아세포에 SLS와 싸리나무, 까마중 추출물을 동시에 첨가하였을 때 SLS에 의한 세포 사멸을 감소시키는 효과를 평가한 것이다.
본 실시예에 사용된 Hs68 섬유아세포는 사람의 피부 진피세포로 ATCC (American Type Culture Collection, 기탁번호 1635)에서 분양받아 사용하였다.
세포배양기술을 이용한 자극완화 평가 실험은 다음과 같이 행하였다.
사람 유래의 섬유아세포를 96웰 플레이트에 각 웰당 1X105 농도로 분주하고, 24시간 동안 배양한 후 0.01% SLS 단독, 0.01% SLS와 싸리나무 및 까마중 추출물을 각각 0.01%(w/w)를 동시에 처리하고 24시간 동안 추가배양하였다. 배양 후 MTT(Sigma사) 시약을 첨가하고 4시간 동안 배양한 후, 배양액을 제거하고 1N NaOH/이소프로판올용액을 첨가하여 20분간 교반한 후 마이크로플레이트 판독기로 565 nm에서 흡광도를 측정하여 싸리나무와 까마중 추출물이 SLS에 의한 세포사멸을 저해하는 효과를 측정하였다.
실험결과 싸리나무 추출물과 까마중 추출물이 SLS에 의해서 유발되는 세포사멸을 억제시킴으로써 화장료 기재와 함께 처방하였을 때 화장료 기재로 일어날 수 있는 피부 자극을 감소시키는 자극완화 물질임이 밝혀졌다(표 4).
| 시료 | 섬유아세포 생존율(%) |
| 0.01% SLS | 25 |
| 0.01% SLS ＋ 0.01% 싸리나무 추출물 | 57 |
| 0.01% SLS ＋ 0.01% 까마중 추출물 | 54 |
실시예 7 내지 8 및 비교예 1
본 실시예는 실시예 1, 2에서 수득한 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 미백효과를 비교예 1과 비교실험을 행하여 평가하였다.
비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 5에 나타낸 바와 같다. 우선 표 5에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존한다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림 (실시예 7, 8, 비교예 1)을 제조한다. 실험자 (20세-35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 7 내지 8에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 시험 완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 피부색의 변화를 크로마메타(Minolta CR300)를 이용하여 색의 밝기변화(ΔL)를 측정하고, 복수의 숙련자에 의한 객관적 육안 관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 실시하여 하기 등급 분류에 따라 효과를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다. 이때 미백효능 정도를 다음의 7등급으로 분류하여 평가하였다.
미백효능 평가기준 :
-3: 매우 악화, -2: 악화, -1: 약간 악화,
0: 변화 없음, 1: 약간 개선, 2: 개선, 3: 매우 개선
표 5에서 나타낸 바와 같이 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 미백효과가 우수함을 알 수 있다.
| 원료 | 실시예 7 | 실시예 8 | 비교예 1 | |
| 가 | 스테아릴 알콜 | 8 | 8 | 8 |
| 스테아린산 | 2 | 2 | 2 | |
| 스테아린산 콜레스테롤 | 2 | 2 | 2 | |
| 스쿠알란 | 4 | 4 | 4 | |
| 2-옥틸도데실알콜 | 6 | 6 | 6 | |
| 폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르 | 3 | 3 | 3 | |
| 글리세릴모노스테아린산아스테르 | 2 | 2 | 2 | |
| 나 | 싸리나무 추출물(실시예1) | 1 | - | - |
| 까마중 추출물(실시예2) | - | 1 | - | |
| 프로필렌글리콜 | 5 | 5 | 5 | |
| 적량 | 적량 | 적량 | 적량 | |
주)단위: 중량%
| 피부색의 밝기 변화( L) | 숙련자의 객관적 평가 | 피검자의 주관적 평가 | |||||||
| 실시예7 | 실시예8 | 비교예1 | 실시예7 | 실시예8 | 비교예1 | 실시예7 | 실시예8 | 비교예1 | |
| 평균값 | 5.32 | 4.82 | 2.03 | 2.9 | 2.3 | 1.9 | 2.7 | 2.2 | 1.7 |
이하 그 외의 실시예를 나타내었다. 즉, 실시예 1, 2에서 수득한 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액을 실시예 9 내지 14에서 제조하였다.
이들 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액은 탁월한 피부 미백효과 및 자외선에 의한 피부손상 억제 또는 자극완화 기능 등 피부개선에 우수한 효과를 나타내었다. 이들 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형에 첨가하여 화장료를 제조할 수 있으며, 이는 당업자가 속한 기술분야에서 용이하게 적용할 수 있으며, 본 발명의 내용이 여기에 한정되지는 않는다.
실시예 9: 실시예 1에서 수득한 싸리나무 추출물을 함유한 화장수의 제조
95% 에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합 용해한다. 실시예 1에서 수득한 싸리나무 추출물 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 피부개선효과가 있는 화장수를 얻었다.
실시예 10: 실시예 2에서 수득한 까마중 추출물을 함유한 화장수의 제조
95% 에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합용해 한다. 실시예 2에서 수득한 까마중 추출물 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 피부개선효과가 있는 화장수를 얻었다.
실시예 11: 실시예 1에서 수득한 싸리나무 추출물을 함유한 유액의 제조
세틸알콜 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g 및 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고, 실시예 1에서 수득한 싸리나무 추출물 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해시킨다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 피부개선효과가 있는 유액을 얻었다.
실시예 12: 실시예 2에서 수득한 까마중 추출물을 함유한 유액의 제조
세틸알콜 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g 및 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고, 실시예 2에서 수득한 까마중 추출물 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해시킨다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 피부개선효과가 있는 유액을 얻었다.
실시예 13: 실시예 1에서 수득한 싸리나무 추출물을 함유한 미용액의 제조
95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히야론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 1에서 수득한 싸리나무 추출물 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 피부개선 효과가 있는 미용액을 얻었다.
실시예 14: 실시예 2에서 수득한 까마중 추출물을 함유한 미용액의 제조
95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히야론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 2에서 수득한 까마중 추출물 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 피부개선효과가 있는 미용액을 얻었다.
이상에서 설명된 바와 같이, 본 발명은 기미, 주근깨 및 피부 색소 침착의 원인이 되는 물질인 멜라닌 합성에 관련된 신호전달물질의 합성을 억제함으로써 멜라닌 합성을 억제하여 미백효과를 나타낼 뿐만 아니라, 화장품 기재에 의해 야기되는 피부 자극을 경감시키는 피부세포 사멸 억제 효과, 염증 유발관련 효소 활성억제 효과 등의 피부자극 완화효과와 면역증강작용 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하게 된다.
이상에서는 본 발명의 바람직한 실시예에 대해 설명하였으나 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본원 발명의 요지를 벗어남이 없이 다양한 변형실시가 가능할 것이며, 이러한 변형실시는 본원발명의 보호범위에 속하는 것으로서 본원발명의 보호범위는 특허청구범위에 기재된 바에 따라 해석되어야 할 것이다.
Claims (8)
- 싸리나무 추출물, 까마중 추출물 및 이들의 혼합물로 이루어지는 군에서 선택된 성분을 주요 활성성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,상기 싸리나무 추출물 또는 까마중 추출물을 조성물 전체에 대하여 동결건조중량기준 0.001 내지 30.0 중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,상기 싸리나무 추출물 및 까마중 추출물의 혼합물은 조성물 전체에 대하여 동결건조중량기준 0.001 내지 30.0 중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느하나의 항에 있어서,추출용매로 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄,헥산 및 그의 혼합물로부터 선택된 것을 사용하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,피부 미백용으로 사용되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,항염증용으로 사용되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,피부 자극 완화용으로 사용되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W) 또는 유중수(W/O) 에멀전, 연고의 제형 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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