KR20050100718A

KR20050100718A - 상황버섯 자실체로부터 수득한 베타글루칸 및 이를유효성분으로 함유하는 항암용 약학 조성물

Info

Publication number: KR20050100718A
Application number: KR1020040025620A
Authority: KR
Inventors: 박순영; 박준덕; 김동현
Original assignee: 박순영; 박준덕; 김동현
Priority date: 2004-04-14
Filing date: 2004-04-14
Publication date: 2005-10-20

Abstract

본 발명은 상황버섯 자실체를 추출하여 수득한 베타글루칸 및 이를 유효성분으로 함유하는 항암용 약학 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 인공재배된 상황버섯 자실체를 열수추출 및 원심분리하고, 소듐 퍼이오데이트(sodium periodate)로 산화시킨 후, 보로사이드리드(borohydride)로 분류 및 저산화 분해의 재분류 과정을 통해 수득한 신규한 베타-1,3-글루칸 및 이를 유효성분으로 함유하는 항암용 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 의해 제조된 베타-1,3-글루칸은 항암활성이 뛰어난 구조적 특성을 지니면서, 복수암 및 고형암 등의 성장을 억제시키는 효능을 지니고 있으므로 항암용 의약품 및 건강기능식품에 응용될 수 있다.

Description

상황버섯 자실체로부터 수득한 베타글루칸 및 이를 유효성분으로 함유하는 항암용 약학 조성물{The beta-glucan obtained from fruit body of Phellinus linteus and the pharmaceutical composition containing the same for anti-cancer}

본 발명은 상황버섯 자실체를 추출하여 수득한 베타글루칸 및 이를 유효성분으로 함유하는 항암용 약학 조성물에 관한 것이다.

암이란 일반적으로 인체조직을 이루고 있는 세포의 세포주기에 이상이 생겨 정상적으로 분화하지 않고, 성장을 조절할 수 없이 커진 것 중 악성종양인 것을 말한다. 암은 개시(initiation), 촉진(promotion)및 진행 (progression)의 세 단계를 거쳐 발생하며, 충분한 양의 발암물질만으로 발생될 수 있으나 실제적으로는 환경이나 음식물 속에 포함된 소량의 발암개시물질(initiator)에 의해 세포 돌연변이(개시세포)가 일어나고 이렇게 세포들의 수가 기하급수적으로 늘면서 발암촉진물질(tumor promotor)의 자극에 의해 비정상적인 세포분열이 일어났을 때 비로소 암 조직이 형성되기 시작한다고 알려져 있다.

환경의 악화와 노년인구의 증가로 세계 암 발생률이 매년 5%이상 증가하고 있으며, 1997년 암을 원인으로 한 사망자가 600만 명으로 질병 사망률의 12%에 달했다. 국내에서도 매년 10만 명의 암환자가 새롭게 발생하고 5만 여명이 매년 사망하고 있으며, 암환자 증가율도 10%에 이르고 있다. 1999년 국립암센터의 통계에 따르면 환자는 12만 명으로서 남자는 위암(24%), 간암(16%), 폐암(16%), 대장암(10%)의 순서이며, 여자는 위암(16%), 자궁경부암(12%), 유방암(15%), 대장암(10%)의 순서로 암 환자가 발생했다.

이러한 암의 치료를 위해서는 외과적 치료, 화학요법, 생물요법, 방사선요법 등이 이용되고 있다. 화학요법은 흔히 말하는 약물요법으로서 핵산 알킬화제, 대사 길항제, 천연물, 호르몬제 등의 합성된 화학물질을 이용한 것이며, 생물요법은 우리 몸은 원래 가지고 있는 면역 기능을 회복시키거나 증진시켜 암세포의 활동력을 약화시킴으로써 암의 진행을 막는 것으로서, 사이토카인, 면역요법제, 유전자 치료제, 암백신, 신생혈관형성 억제제 등이 있다. 현재까지 이러한 방법들을 단독 혹은 병용하여 치료에 응용하고 있으나 부작용, 약제내성, 재발 등으로 완벽한 치료법이 없는 상태이다.

지금까지 항암제 연구는 암세포처럼 세포분열이 왕성한 조직에 대한 세포증식 억제를 근거로 하여 행하여지기 때문에 세포분열이 빠른 피부, 점막, 골수 같은 정상조직 세포에도 독성을 나타나게 된다. 따라서 효과적인 항암제 개발을 위해서는 암세포에만 특이적으로 작용하고 정상세포에 대해 세포 독성이 적은 항암 활성물질의 탐색이 이루어져야 하는바, 인체에 안전한 천연물질로부터 얻기 위한 노력들이 이루어지고 있다.

그중에서, 항암활성이 있는 다당체는 고등식물, 곰팡이, 효모(yeast), 세균(bacteria) 등 천연자원에서 계속 분리되고 있다(Takeda, T., et al., Chem. Pharm. Bull., 17, pp1910-1916, 1969; Kao, I., et al., Gann, 72, pp517-523, 1981). 이 다당체들 중에서 담자균류의 항암활성이 가장 광범위하게 연구되고 있으며, 레니트러스 에도데스(Lenitnus edodes)의 자실체로부터 사코마(sarcoma) 180에 강력한 저지력을 지닌 고분자 β-1,3-글루칸인 렌티난(lentinan)을 분리하였다(Chihara, G., et al., Nature, 222, 678-687, 1969).

한편, 한국산 담자균류의 항암성분에 관한 연구로서 구름버섯, 표고버섯, 느타리버섯 등의 자실체의 열수 추출물이 사코마(sarcoma) 180에 강한 저지력이 있음이 보고된 바 있고(Kim, et al., Arch. Pharm. Res., 2, pp145-149, 1979), 상황버섯에 항암활성이 있다는 보고가 있다(Kim, et al., Immunopharmacology, 41, pp157-164, 1999).

이때, 담자균류의 일종인 펠리누스 린테우스는 한방에서는 상황(桑黃)으로 불리우며, 펠리누스 린테우스 균주가 생산하는 항암활성 다당류와 관련된 기존의 발명으로는 대한민국 특허등록 제0174433호, 대한민국 특허공개번호 제2003-0034604호, 대한민국 특허공개번호 제1999-0081593호등이 있다. 그러나, 상기 다당류는 본 발명의 다당류와는 그 물리화학적 특성 및 구성당의 성분 등이 완전히 상이하며, 본 발명의 자실체 추출물이 아닌 펠리누스 린테우스 균주의 균사체의 추출분말을 이용한 것이다.

즉, 상황버섯은 자연계에 널리 분포하지 않는 희귀종으로서, 자실체의 입수가 어려울 뿐만 아니라, 균사체의 분리 및 배양도 용이하지 않은바, 대부분의 연구가 펠리누스 린테우스 균주의 균사체의 대량배양에 중점을 두고 있으며, 상기 균주 균사체로부터 추출된 다당류의 용도를 개시하고 있다.

따라서, 본 발명자들은 상황버섯 자실체의 비닐포트를 이용하여 상황버섯 자실체를 인공으로 대량 배양하기 위한 고체배지 조성물 및 비닐포트 재배법에 관해 특허등록을 받은 바 있으며(특허등록 제0179725호), 상기와 같이 인공재배된 상황버섯 자실체 추출물의 항암제로서의 용도(특허공개 제2001-000326호), 당뇨병의 예방 및 치료용 조성물(특허공개 제2001-0000327호) 및 항산화 활성(특허공개 제2000-0072608호)을 밝힌 바 있다.

나아가, 본 발명자들은 인공재배된 상황버섯 자실체의 열수추출 및 재분류를 통해 수득한 신규한 베타-1,3-글루칸이 우수한 항암활성을 지님을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 인공재배된 상황버섯 자실체의 열수추출 및 재분류를 통해 수득한 신규한 베타-1,3-글루칸 및 이를 유효성분으로 함유하는 항암용 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 인공재배된 상황버섯 자실체를 열수추출 및 원심분리하고, 소듐 퍼이오데이트(sodium periodate)로 산화시킨 후, 보로하이드리드(borohydride)에 의한 분류 및 저산화 분해 공정을 포함하는 재분류 과정을 통해 수득되는 19% 글루코스 및 5% 만노스의 당 함량 특성을 갖는 베타-1,3-글루칸을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 베타-1,3-글루칸을 유효성분으로 함유하는 항암용 약학 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 인공재배된 상황버섯 자실체를 열수추출 및 원심분리하고, 소듐 퍼이오데이트(sodium periodate)로 산화시킨 후, 보로하이드리드(borohydride)에 의한 분류 및 저산화 분해 공정을 포함하는 재분류 과정을 통해 수득되는 19% 글루코스 및 5% 만노스의 당 함량 특성을 갖는 베타-1,3-글루칸을 제공한다.

이때, 상기 인공재배는 비닐포트 재배인 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 참나무 톱밥 또는 뽕나무 톱밥 70~75%, 미강 25~30%로 혼합한 후 가수하여 수분함량 50~70%로 하고, 여기에 탄산칼슘 2~3%를 투입하여 pH 5.5~7.5로 조절하여 제조된 고체배지를 비닐포트에 투입하여 120℃에서 90분간 멸균하고, 이 고체배지에 별도의 액체배지에서 배양한 액체종균 균사체 스타터를 크린배치에서 접종한 후, 비닐하우스내 재배실의 환경을 3~4주까지는 온도를 15~18℃, 상대습도는 60~70℃로 하고, 그 후 3개월까지는 18~23℃, 상대습도 70~80%, 3개월 이후 자실체 형성기에는 온도를 25~28℃, 상대습도 80~90℃로 3단계 조작으로 수행하고 통풍 환기하는 비닐포트 재배이다.

본 발명에서는 상기 비닐포트 재배에 의해 인공재배된 상황버섯 자실체 분말을 사용한다. 상기 상황버섯 자실체 분말에 80~100℃의 물에서 1시간 내지 3시간 가열하여 열수추출한 후, 잔여물과 추출물을 원심분리에 의해 분리한다. 이후, 상기 잔여물과 추출물에 함유된 베타-글루칸을 용해시켜 재분류한다. 이때, 재분류는 소듐 퍼이오데이트(sodium periodate)로 산화시킨 후, 보로사이드리드(borohydride)로 분류 및 저산화 분해시키는 단계를 포함한다. 이후, 베타-1,3-글루칸을 제외한 글루칸 조각들을 투석에 의해 제거하여 순수한 베타-1,3-글루칸을 정제한다.

본 발명의 베타-1,3-글루칸은 암 조직세포 배양시 첨가되었을 때 암세포의 증식을 현저히 억제하였으며, 기존의 항암제와 비교하여 탁월한 암세포 증식 억제 효과를 나타내고 생존율을 증가시킨다.

상기의 항암활성을 갖는 조성물은, 전체 조성물 총 중량에 대하여 상기 복합생약을 0.01 내지 80%, 바람직하게는 1 내지 50% 중량비를 갖는 약학 조성물을 제공한다. 이때, 상기 항암활성을 갖는 조성물은 위암, 대장암, 직장암 등의 소화기계통의 암, 유방암, 자궁암, 난소암, 식도암, 폐암, 방광암, 비소세포성폐암, 결장암, 골암, 췌장암, 피부암, 두부 또는 경부 암, 피부 또는 안구내 흑색종, 항문부근암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병(Hodgkin's disease), 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 신장 또는 수뇨관 암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, 중추신경계(CNS; central nervous system) 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종 등의 암질환의 치료에 사용할 수 있다.

본 발명의 베타-1,3-글루칸을 유효성분으로 함유하는 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 제제는 경고제, 과립제, 로션제, 리니멘트제(liniments), 리모나데제(limonades), 방향수제, 산제, 시럽제, 안연고제, 액제, 엑스제, 엘릭시르제(elixier), 연고제, 유당제, 유동엑스제, 에멀션제, 현탁제, 점안제, 정제, 좌제, 주사제, 주정제, 침제, 전제, 파스타제(pasta), 카타플라스마제(cataplasma), 캡슐제, 트로키제(troches), 팅크제(tincture) 또는 환제(丸劑)가 바람직하나, 상기 제제에 한정되지 않으며, 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 비경구투여하거나 경구투여할 수 있으며, 하루에 유효성분으로서 체중 1kg당 0.001 내지 10g, 바람직하게는 0.01 내지 5g의 양을 1 내지 수회에 나누어 음용할 수 있다. 특정인에 대한 음용용량 수준은 그 사람의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 음용방법, 배설율, 증상의 중증도에 따라 변화 될 수 있으며, 상기 음용량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 상황버섯 자실체의 성분분석

본 발명에서는 경기도 여주군 금사면에 소재하는 금사상황버섯 농원에서 상황버섯 자실체의 비닐포트 인공재배한 자실체를 구입하여 사용하였다. 이후, AOAC법에 따라 성분분석을 하였다.

구체적으로, 수분측정은 적당히 세절한 금사상황버섯 1.0g을 105℃의 드라이 오븐(dry oven)에서 건조하여 수분함량을 측정하는 상압 가열건조법을 사용하였다. 회분의 측정은 금사상황버섯 0.5g을 회화용 도가니에 넣고 전기 회화로에서 500℃로 2시간 회화시킨 후, 데시케이터로 옮기어 항량이 될 때까지 처리한 후, 정량하여 회분량을 구하였다. 조섬유소의 측정은 금사상황버섯 2g을 황산-수산화나트륨(H₂SO₄-NaOH) 분해법으로 측정하였다. 환원당의 측정은 금사상황버섯 3g을 물로 추출한 다음 글루코스 옥시다제(glucose oxidase)를 사용하여 효소법으로 측정하였다. 조지방의 측정은 금사상황버섯 1g을 석실레이트(Soxhlet) 추출법으로 측정하였다. 조단백질의 측정으로 금사상황버섯 0.23g을 세미마이크로 킬달(Semimicro Kjeldahl)법으로 측정하고 측정된 질소량에 질소계수 6.25를 곱하여 산출하였다. 그 결과를 하기 표 1에 기재하였다.

금사 상황버섯 자실체의 성분

화학성분	함량(%)
pH	5 ~ 6
수분	6.35 ± 0.21
환원당	1.02 ± 0.02
조섬유소	71.37 ± 0.65
조지방	1.28 ± 0.12
조단백질	13.43 ± 1.21
회분	5.05 ± 0.03

실시예 2. 상황버섯 자실체 글리칸의 성분 분석

상황버섯 자실체의 총 글리칸(glycan) 함량을 통상적인 상황버섯 균사체와 비교하여 살펴보았다.

구체적으로, 10g의 상기 실시예 1의 상황버섯 자실체 및 상황버섯 균사체 를 각각 분쇄기로 분쇄하고, 에탄올 추출한 후, 아세톤으로 건조하여 9.6g의 분말을 수득하였다. 총 글리칸 함량은 메탄올 분해이후 트리메틸실릴(trimethylsilyl) 파생물로서의 단당류 함량을 가스 크로마토그래피에 의해 측정하였다(표 2 참조).

글리칸 함량(중량%)

당 종류	상황버섯 자실체	상황버섯 균사체
글루코스	19%	15.4%
만노스	5%	4.6%
총 글리칸	24%	20%

그 결과, 본 발명의 상황버섯 자실체에 함유된 총 글리칸은 24 중량%인 바, 상업적으로 판매되는 상황버섯 균사체에서의 20 중량%보다 높은 함량을 지님을 확인하였다. 그러나, 상기와 같은 많은 양의 글리칸이 용해되는 형태로서 추출 및 재분류 과정 없이는 추출되지 않을 수 있고, 모든 글리칸이 항암작용을 하는 구조적 형태를 가지고 있지 않을 수 있는 바, 본 발명에서는 하기와 같은 추출 및 재분류 과정을 통해 항암활성이 우수한 베타-1,3-글루칸을 분리하였다.

실시예 3. 상황버섯 자실체 추출물의 제조 및 재분류

항암활성이 우수한 베타-1,3-글루칸을 추출, 분리하기 위해 본 발명의 추출 및 재분류 방법을 통상적으로 사용된 추출, 분리방법과 비교하였다.

비교 실시예 3-1. 물 추출 및 글리칸의 용해

상기 실시예 1의 상황버섯 자실체 분말 20㎎을 2㎖의 물에서 100℃로 2시간동안 가열하여 글리칸을 추출하였다. 추출된 글리칸을 포화시키기 위해 에탄올 침전법을 이용하였다. 그 결과, 9.9㎎/g(건조중량)의 글리칸이 용해된 바, 약 4.2 중량%의 글리칸을 수득하였다.

비교 실시예 3-2. 수성 염화수산화물을 이용한 글리칸의 용해

상기 실시예 1의 상황버섯 자실체 분말 20㎎을 2㎖의 물에서 100℃로 2시간동안 가열하여 글리칸을 추출하였다. 이후, 수성 염화수산화물인 가성소다를 이용한 추출 및 겔 여과에 의해 색소(pigment)를 분해하였다. 그 결과, 37.3㎎/g(건조중량)의 글리칸이 용해된 바, 총 16 중량%의 글리칸을 수득하였다.

비교 실시예 3-3. 구아니딘(guanidine)을 이용한 글리칸의 용해

상기 실시예 1의 상황버섯 자실체 분말 20㎎을 2㎖의 물에서 100℃로 2시간동안 가열하여 글리칸을 추출하였다. 추출된 글리칸을 실온에서 하룻밤동안 4 M의 구아니딘(guanidine)에 교반하면서 배양하였다. 그 결과, 19.5㎎/g(건조중량)의 글리칸이 용해된 바, 약 8 중량%의 글리칸을 수득하였다.

실시예 3-4. 본 발명의 베타-글루칸의 용해

상기 실시예 1의 상황버섯 자실체 분말 및 통상적인 상황버섯 균사체 분말 50㎎을 각각 5㎖의 물에서 100℃로 2시간동안 가열하여 글리칸을 추출하였다. 이후, 추출물과 잔여물을 원심분리에 의해 분리시킨 후, 물 추출물과 잔여물에 함유된 베타-글루칸을 용해시키기 위해 하기의 방법을 수행하였다. 구체적으로, 소듐 퍼이오데이트(sodium periodate)로 산화시킨 후, 보로하이드리드(borohydride)에 의한 분류 및 저산화 분해의 재분류 과정을 수행하였다. 이후, 0.02 M의 염화중탄산염으로 투석한 후, DEAE-트리스아크릴(trisacryl) 칼럼으로 여과하여 버섯색소를 제거하여 순수한 베타-글루칸을 분리하였다(표 3 참조).

분획물	상황버섯 자실체에서 수득한 베타-글루칸	상황버섯 균사체에서 수득한 베타-글루칸
물 추출물	2.8 중량%	2.5 중량%
잔여물	16.1 중량%	9.2 중량%
총	18.9 중량%	11.7 중량%

그 결과, 상황버섯 균사체에서 수득한 추출물 및 잔여물에서는 29.0 ㎎/g(건조중량)의 베타-글루칸이 용해된 바, 총 11.7 중량%의 베타-글루칸을 수득할 수 있었다. 그러나, 본 발명의 상황버섯 자실체에서는 35.0 ㎎/g(건조중량)의 베타-글루칸이 용해된 바, 가장 우수한 총 18.9 중량%의 베타-글루칸을 수득하였다.

실시예 4. 본 발명의 베타-글루칸의 화학적 특성

상기 실시예 3-4에서 수득한 본 발명의 베타-글루칸을 디스크 편광계(disc polarimeter)와 소듐 램프 소스(sodium lamp source)를 사용하여 편광측정한 결과, 물 추출물의 글리칸은 +2°의 최적 회전을 나타냈다. 이는 배당체 연결물들의 대부분이 β-아노머릭(anomeric) 형태를 지니고 있음을 의미한다.

또한, 표준시료인 커들란(Curdlan)(β-1,3 결합, Sigma 사), 푸스툴란(Pustulan)(β-1,6 결합, Calbiochem 사), 효모 글루칸(β-1,3 및 β-1,6 결합, Sigma 사)을 각각 5㎎씩 0.5㎖의 DMSO-d6에 녹여 70℃에서 하루동안 두어 용해시켰으며, β-글루칸을 에탄올에 넣어 하루간 4℃에서 방치한 후, 원심분리를 통해 가라앉은 글루칸 결정을 건조시켜 5㎎을 취한 후, 상기와 동일한 방법으로 용해시켜 NMR 시료를 조제하였다. NMR 분석을 70℃에서 500MHz 배리안 유니티 플러스 스펙트로미터(Varian Unity Plus Spectrometer)(Varian 사)로 분석하였고, 이때 트리메틸실란(Trimethylsilane, TMS)을 표준물질로 사용하였다. 그 결과, 본 발명의 베타-글루칸은 표준시료로 사용된 커들란과 유사한 화학결합 구조를 지니고 있는 것으로 확인되었는 바, 중성의 베타-1,3-글루칸임을 확인할 수 있었다.

실험예 1. 본발명의 베타-1,3-글루칸의 항암활성

상기 실시예 3-4에서 수득한 본 발명의 베타-1,3-글루칸의 항암활성을 조사하였다.

구체적으로, 실험동물로 사용한 SPF ICR 마우스는 대한동물(주)에서 분양받아 경희대학교 청정실험동물시설에서 온도 22± 0.5℃, 습도 55± 5%, 배기 10~20회/시간, 형광등 명암 12h 사이클, 조도 300~500 룩스의 환경으로 조절하여 1주일간 순화시킨 후 사용하였다. 상기 마우스에 사코마(sarcoma) 180을 이식(2× 10⁷ 세포/㎖)하여 복수암을 유발시켰다. 즉, 마우스의 복수액을 취하여 생리식염수에 현탁하고, 2000rpm으로 원심분리하여 세포를 회수한 다음 이를 2회 반복하여 세척하고, 0.4% 트리판 블루(trypan blue)로 염색하여 2×10⁷ 세포/㎖가 되도록 제조하였다. 상기 조작은 모두 4℃에서 실시하였다.

상기에서 제조한 사코마 180을 ICR계 생쥐(웅성 25g) 50마리에 0.1 ㎖씩 복강투여하고, 한 군을 10마리씩 5군으로 나누었다. 사코마 180의 대조군으로 1군에는 생리식염수를 복강내에 투여하였고, 2군에는 상기 실시예 4에서 확인된 베타-1,3-글루칸 10 ㎎을 투여하였고, 3군에는 상기 실시예 4에서 확인된 베타-1,3-글루칸 50 ㎎을 투여하였고, 4군에는 상기 실시예 3-4에서 제조된 상황버섯 균사체에서 추출된 베타-글루칸 10 ㎎을 투여하였고, 5군에는 상기 실시예 3-4에서 제조된 상황버섯 균사체에서 추출된 베타-글루칸 50 ㎎을 투여하였다. 그 후, 40일 동안 사육하면서 생존율을 비교한 다음, 그 결과를 표 4에 나타내었다.

그룹	투여량(㎎/㎏)	생존율(%)	생존기간(일)
1	0	0	14± 2.4
2	10	24	23± 3.8
3	50	38	24± 4.2
4	10	12	21± 2.5
5	50	19	22± 3.4

그 결과, 복수암을 유발시킨 대조군의 그룹 1에서는 모두 30일 이내에 사망했으며, 생존기간도 짧았다. 또한, 상황버섯 균사체에서 분리한 베타-글루칸의 투여군에서도 비교적 낮은 생존율과 생존기간을 나타내었으나, 본 발명의 상황버섯 자실체에서 분리한 베타-1,3-글루칸의 투여군에서는 우수한 생존율 및 생존기간을 나타내는 바, 항암활성이 우수함을 확인하였다.

실험예 2. 독성 실험

본 발명의 베타-1,3-글루칸의 독성을 시험하기 위하여, 동물실험을 수행하였다.

25± 5g의 ICR계 마우스(중앙실험동물)와 235±10g의 특정병원부재(SPF) 스프라그-도올리(Sprague Dawley, Biogenomics사) 래트를 각각 3마리씩 3군으로 나누어 상기 실시예 3-4에서 수득한 베타-1,3-글루칸을 각각 1000 mg/㎏, 500 mg/㎏, 100 mg/㎏의 용량으로 복강투여한 후 14일 동안 독성여부를 관찰하였다.

실험 결과, 3군 모두에서 사망한 예를 전혀 관찰할 수 없었고, 체중 증가, 사료 섭취량 등에서 외견상 대조군과 별다른 증상을 찾아볼 수 없었다. 따라서 본 발명의 베타-1,3-글루칸이 안전한 물질임을 확인할 수 있었다.

본 발명의 베타-1,3-글루칸을 포함한 약학 조성물은 아래와 같은 제형으로 투여할 수 있으며, 아래의 제제 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 이에 의해 본 발명의 내용이 제한되는 것은 아니다.

제제예 1. 주사제제의 제조

실시예 3-4의 베타-1,3-글루칸.................1.0㎎

소디움 메타비설파이트........................3.0㎎

메틸파라벤...................................0.8㎎

프로필파라벤.................................0.1㎎

주사용 멸균증류수...........................적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 방법으로 2㎖로 한 후, 2㎖ 용량의 앰플에 충전하고 멸균하여 주사제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

실시예 3-4의 베타-1,3-글루칸................20㎎

유당........................................100㎎

전분........................................100㎎

스테아린산 마그네슘.........................적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캡슐제의 제조

실시예 3-4의 베타-1,3-글루칸................10㎎

유당........................................50㎎

전분........................................50㎎

탈크........................................2㎎

스테아린산마그네슘......................... 적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 액제의 제조

실시예 3-4의 베타-1,3-글루칸..............100㎎

설탕........................................20ｇ

이성화당....................................20ｇ

레몬향......................................적량

정제수를 가하여 전체........................100㎖

상기의 성분을 통상의 액제의 제조방법에 따라서 혼합하고 100㎖의 갈색병에 충전하고 멸균시켜서 액제를 제조한다.

상기에 언급한 바와 같이, 본 발명의 베타-1,3-글루칸은 항암활성이 뛰어난 구조적 특성을 지니면서, 복수암 및 고형암 등의 성장을 억제시키는 효능을 지니고 있으므로 항암용 의약품 및 건강기능식품에 응용될 수 있다.

Claims

인공재배된 상황버섯 자실체를 열수추출 및 원심분리하고, 소듐 퍼이오데이트(sodium periodate)로 산화시킨 후, 보로하이드리드(borohydride)에 의한 분류 및 저산화 분해 공정을 포함하는 재분류 과정을 통해 수득되는 19% 글루코스 및 5% 만노스의 당 함량 특성을 갖는 베타-1,3-글루칸.
제 1항에 있어서, 상기 인공재배는 비닐포트 재배인 것을 특징으로 하는 베타-1,3-글루칸.
제 1항의 베타-1,3-글루칸을 유효성분으로 함유하는 항암용 약학 조성물.