KR20050095391A

KR20050095391A - 암로디핀 니코티네이트를 포함하는 약제학적 조성물

Info

Publication number: KR20050095391A
Application number: KR1020040020768A
Authority: KR
Inventors: 김재신; 류종현; 이근혁; 최병선; 김진선; 하문천
Original assignee: 한림제약(주)
Priority date: 2004-03-26
Filing date: 2004-03-26
Publication date: 2005-09-29
Also published as: KR101052280B1

Abstract

본 발명은 치료학적 유효량의 암로디핀 니코티네이트 또는 (S)-암로디핀 니코티네이트를 포함하고, 붕해제로서 전분 글리콜산 나트륨(sodium starch glycolate) 또는 크로스포비돈(crospovidone)을 포함하는 허혈 또는 고혈압 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 배합변화를 최소화시킬 수 있으며, 우수한 화학적 및 광학적 안정성을 유지할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 산성조건하에서 빠른 용출률을 나타내며, 소실반감기가 길게 유지됨으로써 소량의 복용량으로도 약효를 지속적으로 유지할 수 있다.

Description

암로디핀 니코티네이트를 포함하는 약제학적 조성물{A pharmaceutical composition comprising amlodipine nicotinate}

본 발명은 암로디핀 니코티네이트를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

암로디핀은 그 화학명이 3-에틸 5-메틸 2-(2-아미노에톡시메틸)-4-(2-클로로페닐)-1,4-디하이드로-6-메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트로서, 허혈 및 고혈압 치료제로서 유용한 강력하고 장기간에 걸쳐 활성을 나타내는 칼슘 통로 차단제이다 (유럽특허공개 제89,167호 및 미국특허 제4,572,909호).

유럽특허공개 제244,944호 및 미국특허 제4,879,303호는 암로디핀의 벤젠 설포네이트 염(암로디핀 베실레이트)이 암로디핀 말리에이트 염에 비해 (1) 우수한 용해도, (2) 우수한 안정성, (3) 우수한 비흡습성, 및 (4) 정제 제형으로의 가공성과 같은 다수의 유리한 물리화학적 특성을 갖는다고 개시하고 있다.

그러나, 암로디핀 베실레이트는 광안정성 낮고, 포화시의 pH가 혈액의 pH (pH7.4±0.5)에 충분히 근접하지 못하는 문제점이 있다. 이를 개선하기 위한 새로운 암로디핀의 염으로서, 본 발명자들은 암로디핀 니코티네이트 또는 (S)-암로디핀 니코티네이트, 바람직하게는 수화물 형태의 암로디핀 니코티네이트 또는 (S)-암로디핀 니코티네이트를 개발한 바 있다 (대한민국 특허공개 제2003-0081006호 및 국제특허 공개 제WO03/089414호; 대한민국 특허출원 제2002-54809호, 제2003-1260호, 국제특허출원 제PCT/KR03/01850호)

한편, 암로디핀 니코티네이트 또는 (S)-암로디핀 니코티네이트를 제제화하는데 있어서, 사용되는 첨가제 즉, 부형제, 붕해제, 활택제, 결합제 등에 따라 활성성분의 안정성이 변화할 수 있다. 특히, 정제나 캅셀제와 같은 고형제제는 제제설계의 미묘한 차가 유연물질의 생성을 유발하는 경우도 있으며, 붕해나 용출에 영향을 미쳐 약효에도 큰 변화를 가져올 수 있다.

이에, 본 발명자들은 암로디핀 니코티네이트 또는 (S)-암로디핀 니코티네이트의 제제 안정성을 적합한 수준으로 유지함과 동시에, 시험관내 용출 및 생체내 체내동태를 적합하게 유지할 수 있는 조성물 즉, 제제를 개발하고자 예의 연구를 수행한 결과, 특정 붕해제 및 기타 첨가제를 사용하는 경우 물리적 및 화학적 안정성이 우수한 조성물을 얻을 수 있다는 것을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명은 암로디핀 니코티네이트 또는 (S)-암로디핀 니코티네이트를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 일 태양에 따라, 치료학적 유효량의 암로디핀 니코티네이트 또는 (S)-암로디핀 니코티네이트를 포함하고, 붕해제로서 전분 글리콜산 나트륨(sodium starch glycolate) 또는 크로스포비돈(crospovidone)을 포함하는 허혈 또는 고혈압 치료용 약제학적 조성물이 제공된다.

본 발명의 조성물에 있어서, 상기 암로디핀 니코티네이트 또는 (S)-암로디핀 니코티네이트는 수화물 형태가 바람직하며, 2수화물(dihydrate) 형태가 더욱 바람직하다.

상기 암로디핀 니코티네이트 또는 (S)-암로디핀 니코티네이트의 치료학적 유효량은 선행기술(예를 들어, 대한민국 특허공개 제2003-0081006호 및 국제특허 공개 제WO03/089414호; 대한민국 특허출원 제2002-54809호, 제2003-1260호, 국제특허출원 제PCT/KR03/01850호)에서 개시한 범위 내에서 선택할 수 있으며, 당업자는 환자의 질병상태, 나이 등에 따라 적절히 선택할 수 있다.

본 발명자들은 암로디핀 니코티네이트 또는 (S)-암로디핀 니코티네이트를 포함하는 조성물이 우수한 물리적, 화학적, 및 광학적 안정성을 가질 수 있도록 약제학적으로 사용되는 다양한 첨가제를 대상으로 제제화 시험을 행하였다. 특히, 우수한 물리적 안정성을 가진 조성물을 얻기 위하여, 다양한 첨가제를 대상으로 배합변화시험을 실시하였으며, 화학적 안정성을 확인하기 위하여 각 첨가제와 함께 제제화할 경우 발생할 수 있는 불순물(impurities)을 분석하였다. 상기 불순물 분석은 대한민국 특허공개 제2003-70594호에서 "암로-피리딘"으로 명명된 "유연물질 D"를 중심으로 분석하였으며, 기타 유연물질들은 그 생성량이 많지 않으므로 총 유연물질(유연물질 D 포함)로 하여 분석하였다.

상기 물리적 및 화학적 안정성 시험을 통해, 예기치 못하게, 붕해제의 선택이 매우 중요한 것이 발견되었다. 즉, 통상의 붕해제인 카르복시 메칠 셀룰로오스 칼슘, 탄산수소나트륨, 크로스카멜로오스 소듐 등은 암로디핀 니코티네이트와 함께 혼합하여 제제화할 경우, 각각 갈색, 황색, 및 진한 갈색으로 변화하여 배합부적으로 판명된 반면, 전분 글리콜산 나트륨(sodium starch glycolate) 또는 크로스포비돈(crospovidone)을 배합할 경우 거의 색깔의 변화가 없거나 미황색의 색깔 변화만이 관찰되어, 물리적인 배합변화가 없음을 확인하였다 (표1 참조).

따라서, 본 발명의 조성물은 붕해제로서 전분 글리콜산 나트륨(sodium starch glycolate) 또는 크로스포비돈(crospovidone)을 포함하며, 이들의 함량은 조성물 총 중량에 대하여, 2 내지 10 중량%, 바람직하게는 3 내지 8 중량%, 더욱 바람직하게는 약 5 중량% 일 수 있다.

본 발명의 조성물은 또한 미결정 셀룰로오즈(예를 들어, 아비셀(avicel) 102 등), 옥수수 전분, 유당(또는 무수 유당), 무수 인산수소 칼슘(단, 20중량% 수성 슬러리의 pH가 pH 6 내지 7, 바람직하게는 약 pH 6.8), 전호화분 전분(예를 들어, 스타치 1500 등), 만니톨, 감자 전분, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 부형제(또는 희석제); 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈로 이루어진 결합제; 및 스테이린산, 스테아린산 마그네슘, 및 탈크로 이루어진 군으로부터 선택된 활택제를 더욱 포함할 수 있다.

통상적으로 사용되는 부형제(또는 희석제) 중, 20중량% 수성 슬러리의 pH가 pH 6 미만(약 pH 5.0-5.1)인 무수 인산수소칼슘(A-Tab)은 갈색의 색깔 변화를 나타내어 배합변화가 클 뿐 아니라, 유연물질 D를 포함한 불순물이 발생한다. 그러나, 20중량% 수성 슬러리의 pH가 pH 6 내지 7인 무수 인산수소칼슘(예를들어, 달채화학사 제품)은 배합변화 또는 불순물을 유발하지 않는다. 셀룰로오즈 M 80, 루디프레스, 감자전분, 및 셀락토오즈(cellactose) 80 등은 장기간(예를 들어, 가혹조건에서 약 45일) 보관시 불순물이 유발되었으며, 솔비톨 분말의 경우에는 진한 황색으로의 색변화 및 장기간 보관시에 불순물이 관찰된다. 그러나, 전분류와 같이 상대적으로 높은 흡습성이 있는 부형제의 경우에도, 유연물질의 생성 및 함량에는 큰 영향을 미치지 않으므로, 바람직하게 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 결합제로서 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈를 바람직하게 사용할 수 있으며, 활택제로서 스테이린산, 스테아린산 마그네슘, 또는 탈크를 바람직하게 사용할 수 있다. 상기 활택제 중, 상대적으로 흡습성이 높은 편이나 흡습 후 더 안정한 모노, 디, 트리 수화물(hydrate)를 형성하는 것으로 알려져 있는 스테아린산 마그네슘의 경우, 흡수된 수분이 스테아린산 마그네슘의 분자간 결합 힘으로 인해 활성성분 즉, 암로디핀 니코티네이트의 안정성(배합변화 및 유연물질 발생여부)에는 영향을 주지 않는 것으로 확인되었다.

본 발명의 조성물은 상기 부형제, 결합제, 및 활택제를 조성물 총 중량에 대하여 각각 80 ∼ 90 중량%, 5 ∼ 8 중량%, 및 0.5 ∼ 2 중량%로 포함할 수 있다. 더욱 바람직하게는 본 발명의 조성물은 암로디핀 니코티네이트 3.2525 중량%; 미결정 셀룰로오즈 41.7475 중량%; 옥수수 전분 10 중량%; 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈 7.5 중량%; 무수 인산수소 칼슘 31.5 중량%; 전분 글리콜산 나트륨 5 중량%; 및 스테이린산 마그네슘 1 중량%로 이루어질 수 있다.

본 발명의 조성물의 제형은 특별히 한정된 것은 아니나, 바람직하게는 정제 또는 캅셀제 형태일 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.

실시예 1. 배합변화 및 유연물질 발생 시험

다양한 부형제(또는 희석제), 결합제, 붕해제, 활택제, 용출개선제를 대상으로 배합변화 및 유연물질 발생시험을 행하였다. 시험에 사용된 각 첨가제는 다음과 같다.

부형제(희석제): 미결정 셀룰로오즈(avicel 102), 옥수수 전분, 유당, 무수인산수소칼슘(A-Tab 및 달재화학), 전호화분 전분(스타치 1500), 셀룰로오즈 M 80, 루디프레스, 만니톨, 무수유당, 감자전분, cellactose 80, 솔비톨분말, SiO₂.

결합제: 저치환도히드록시프로필셀룰로오스

붕해제: 전분 글리콜산 나트륨, 크로스포비돈, 카르복시 메칠 셀룰로오스 칼슘, 탄산수소나트륨, 크로스카멜로오스

활택제 : 스테아린산, 스테아린산 마그네슘, 탈크

용출개선제 : 라우릴황산나트륨

우선, 상기 첨가제들의 자체 pH를 20중량% 수성 슬러리로 하여 먼저 측정한 다음, 암로디핀 니코티네이트와 1:1의 중량비로 혼합한 후의 pH를 측정하였다. 가혹시험은 40℃의 온도 및 75%의 상대습도 하에서, 빛을 조사하면서 실시하였으며, 9일 및 45일 경과후 유연물질 D 및 총 유연물질(유연물질 D 포함)을 HPLC로 분석하였다. 또한, 45일 경과 후, 색변화를 관찰하였다.

배합변화 및 유연물질 발생시험 결과는 표 1과 같다.

[표 1]

종류	첨가제	20 중량% 혼합 시 pH		40℃, 75% 상대습도, 빛 조사
		20 중량% 혼합 시 pH		45일후	9일 경과후(%)		45일 경과후(%)
		혼합전	혼합후	색변화관찰*	유연물질 D	전체불순물	유연물질 D	전체불순물
부형제	미결정셀룰로오즈	6.096	6.199	미황색	0.00	0.04	0.01	0.05
	옥수수전분	5.788	5.962	미황색	0.00	0.04	0.00	0.03
	유당	4.110	6.143	미황색	0.00	0.06	0.00	0.07
	무수인산수소칼슘(A-tab)	5.160	5.532	갈색	0.19	0.28	0.26	0.41
	무수인산수소칼슘(달재화학)	6.823	6.660	미황색	0.00	0.04	0.02	0.05
	전호화분 전분	5.735	5.974	미황색	0.00	0.04	0.00	0.04
	셀룰로오스 M 80	5.437	6.159	미황색	0.00	0.46	0.00	0.05
	루디프레스	3.805	6.094	미세변화	0.00	0.10	0.00	0.19
	만니톨	5.511	6.545	미세변화	0.00	0.04	0.00	0.04
	무수유당	3.853	6.175	미세변화	0.00	0.07	0.00	0.10
	감자전분	6.204	6.255	미황색	0.00	0.04	0.00	0.06
	cellactose 80	5.533	6.276	미황색	0.00	0.09	0.00	0.18
	솔비톨분말	6.274	6.490	진한황색	0.00	0.04	0.04	0.19
	SiO₂	4.312	5.505	미황색	0.15	0.22	0.38	0.61
1	저치환도히드록시프로필셀룰로오스	6.772	6.590	미황색	0.00	0.04	0.01	0.06
붕해제	전분글리콘산나트륨	5.870	6.277	미황색	0.00	0.04	0.00	0.03
	크로스포비돈	4.406	6.137	미황색	0.00	0.05	0.01	0.09
	카르복시 메틸셀룰로오스 칼슘	5.902	6.290	갈색	0.00	0.04	0.01	0.05
	탄산수소나트륨	8.319	8.210	황색	0.00	0.04	0.00	0.06
	크로스카멜로오스	4.670	5.563	진한갈색	0.00	0.04	0.00	0.04
활택제	스테아린산 마그네슘	-	8.019	미세변화	0.00	0.04	0.01	0.04
	스테아린산	4.529	4.855	미황색	0.00	0.05	0.01	0.05
	탈크	9.283	7.710	미황색	0.00	0.04	0.01	0.05
2	소듐 라우릴 술페이트	9.490	7.823	진한갈색	0.01	0.05	0.01	0.06
3	암로디핀 니코티네이트	5.833	-	백색	0.00	0.03	-	-

1: 결합제

2: 용출개선제

3: 주약

*: 혼합물(1:1)의 초기 성상은 모두 백색이었음.

실시예 2 내지 5. 암로디핀 니코티네이트를 함유하는 정제의 제조

실시예 1의 결과를 근거로, 하기 표2의 성분 및 함량을 갖는 정제를 제조하였다. 즉, 암로디핀 니코티네이트와 전분글리콘산 나트륨을 혼합하고, 미결정셀룰로오스, 유당(옥수수전분), 저치환도히드록시프로필 셀룰로오스, 무수인산수소 칼슘을 추가하여 20분간 더블 콘 믹서(Double Con Mixer; ERWEKA 제품, 모델번호 DKM))에서 혼합한 후, 스테아린산 마그네슘을 혼합한 후 타정(금성사제품, 모델번호 KT-3736)하여, 정제를 제조하였다.

[표 2]

성 분	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5
암로디핀 니코티네이트	6.505 mg(암로디핀으로 5mg)	6.505 mg(암로디핀으로 5mg)	13.01 mg(암로디핀으로 10mg)	13.01 mg(암로디핀으로 10mg)
미결정셀룰로오스	66.495mg	83.495mg	59.99mg	76.99mg
유 당	40 mg	-	40 mg	-
옥수수 전분	-	20 mg	-	20 mg
저치환도히드록시 프로필 셀룰로오스	15 mg	15 mg	15 mg	15 mg
무수인산수소칼슘	60 mg	63 mg	60 mg	63 mg
전분글리콜산나트륨	10 mg	10 mg	10 mg	10 mg
스테아린산 마그네슘	2 mg	2 mg	2 mg	2 mg
1정 중량 (총 계)	200 mg	200 mg	200 mg	200 mg
20 중량 % 슬러리 pH	7.19	7.15	7.25	7.12

실시예 6 내지 9. 암로디핀 니코티네이트를 함유하는 캅셀제의 제조

하기 표3의 성분 및 함량을 갖는 캅셀제를 제조하였다. 즉, 암로디핀 니코티네이트와 전분글리콘산 나트륨을 혼합하고, 미결정셀룰로오스, 유당(옥수수전분), 무수인산수소 칼슘을 추가하여 20분간 더블 콘 믹서(Double Con Mixer; ERWEKA 제품, 모델번호 DKM))에서 혼합한 후, 스테아린산 마그네슘을 혼합한 후, 캅셀충전기(세종기계 제품, 모델번호 SM-35)에서 3 호 경질캅셀에 충진하였다.

[표 3]

성 분	실시예 6	실시예 7	실시예 8	실시예 9
암로디핀니코티네이트	6.505 mg(암로디핀: 5mg)	6.505 mg(암로디핀: 5mg)	13.01 mg(암로디핀: 10mg)	13.01 mg(암로디핀: 10mg)
미결정셀룰로오스	81.495mg	78.495mg	74.99mg	71.99mg
유 당	40 mg	-	40 mg	-
옥수수 전분	-	40 mg	-	40 mg
무수인산수소칼슘	60 mg	63 mg	60 mg	63 mg
전분글리콜산나트륨	10 mg	10 mg	10 mg	10 mg
스테아린산 마그네슘	2 mg	2 mg	2 mg	2 mg
1캅셀 내용물 중량(총 계)	200 mg	200 mg	200 mg	200 mg

실시예 10. 암로디핀 니코티네이트를 함유하는 정제 및 캅셀제의 안정성 시험

실시예 2 내지 9에서 제조한 정제 및 캅셀제를 50℃; 40℃ 및 75%의 상대습도; 및 광조사, 40℃, 및 75%상대습도의 조건으로 가혹시험을 실시하였으며, 그 결과는 다음 표 4a 및 4b와 같다. 비교예로서 노바스크정 (암로디핀 : 5mg, 한국화이자, 제조번호 3390032A32)을 사용하였다.

[표 4a]

정제의 가혹시험

조 건	유연물질	실시예 2		실시예 3		실시예 4		실시예 5		노바스크정
		경과시간		경과시간		경과시간		경과시간		경과시간
		9일	45일	9일	45일	9일	45일	9일	45일	9일	45일
50℃	유연물질 D	0.03	0.09	0.04	0.11	0.04	0.12	0.05	0.10	0.09	0.08
50℃	총 유연물질	0.10	0.30	0.09	0.26	0.12	0.33	0.10	0.25	0.16	0.32
광조사	유연물질 D	0.10	0.25	0.08	0.23	0.11	0.27	0.09	0.25	0.21	0.51
광조사	총 유연물질	0.17	0.45	0.13	0.41	0.16	0.49	0.15	0.45	0.31	0.80
40℃/75%상대습도/광 조사	유연물질 D	0.41	0.63	0.37	0.57	0.39	0.67	0.33	0.54	0.49	1.16
40℃/75%상대습도/광 조사	총 유연물질	0.58	1.51	0.55	1.32	0.60	1.55	0.56	1.38	0.72	2.05

[표 4b]

캅셀의 가혹시험

조 건	유연물질	실시예 6		실시예 7		실시예 8		실시예 9
		경과시간		경과시간		경과시간		경과시간
		9일	45일	9일	45일	9일	45일	9일	45일
50℃	유연물질 D	0.03	0.07	0.03	0.11	0.04	0.08	0.04	0.10
50℃	총 유연물질	0.10	0.25	0.08	0.20	0.11	0.27	0.09	0.21
광조사	유연물질 D	0.07	0.20	0.05	0.15	0.08	0.22	0.06	0.18
광조사	총 유연물질	0.15	0.37	0.11	0.30	0.17	0.40	0.11	0.27
40℃/75%상대습도/광 조사	유연물질 D	0.30	0.41	0.30	0.45	0.34	0.58	0.33	0.44
40℃/75%상대습도/광 조사	총 유연물질	0.47	1.24	0.49	1.21	0.51	1.32	0.50	1.24

실시예 11. 암로디핀 니코티네이트를 함유하는 정제의 용출시험

실시예 3에서 제조한 정제를 대상으로 다음의 조건에서 용출시험을 실시하였으며, 그 결과를 표 5와 도 1로 나타내었다. 표5 및 도1에 나타낸 값은 12회 시험의 평균값을 나타낸다.

용출액: pH 1.2, 4.0, 및 6.8의 완충용액, 물

회전수: 50 rpm

HPLC 조건:

Capcell Pak C18 컬럼, 유속 1.0mL/min, 검출파장 237nm

이동상 : 아세토니트릴/메탄올/pH 3.0 버퍼 = 15/30/50

(트리에틸아민 7.0mL + 물 1L → pH 3.0 (인산으로))

[표 5]

용출시험 결과

완충액

5분

10분

15분

30분

45분

60분

90분

120분

180분

240분

300분

360분

pH 1.2

88.9±3.3

89.7±2.7

pH 4.0

66.3±2.5

77.9±3.6

81.1±3.8

85.6±1.4

pH 6.8

36.2±1.3

53.7±1.7

60.3±2.3

67.4±1.7

70.5±1.4

74.6±1.5

80.5±1.1

83.1±1.2

84.9±1.6

물

44.4±2.5

54.2±2.4

62.7±3.0

69.3±1.7

71.8±1.2

74.2±1.5

76.5±1.9

79.3±2.3

81.8±2.4

82.6±2.1

83.3±2.0

83.6±1.7

상기, 표5 및 도1에서 알 수 있는 바와 같이, 산성조건에서 아주 빠른 용출 결과를 나타내었다. 즉, pH 1.2에서는 10분에 89.7%의 용출률을 나타내었으며, pH 4.0 에서는 30분에 85.6%의 용출율을 유지하였다. 이는 강한 산성을 나타내는 위에서 빠른 용출률을 가져올 수 있는 장점을 나타내었다.

실시예 12. 암로디핀 니코티네이트를 함유하는 정제의 약물동태 시험

1. 서론

본 발명에 따른 조성물의 생물학적 약물 동태를 검토하기 위해 비글견(beagle dog)을 이용하여 5mg/kg 용량으로 경구투여 후 약물동태 시험을 수행하였다.

2. 실험방법

(1) 시약

니코틴산 암로디핀(M.W. 531.0)의 주성분 50mg으로 하는 제제(실시예 3의 부형제를 포함하는 정제)를 분쇄한 후 정밀하게 필요량의 무게를 칭량 후 경구투여용 젤라틴 캅셀(11 size, 공급처 Torpac Inc)에 넣은 후 실험에 사용하였다. 1차 투약 후 2차 투여시 까지는 약 3주간의 휴약 시간을 두었다.

(2) 실험동물

약물동태 실험에 풍부한 시험기초자료가 있는 실험동물인 개(beagle dog)를 사용하였다. 약 1년령의 6-10kg 사이의 실험동물을 선택하였다. 체중 측정은 전동물에 대하여 투약 개시 전 및 투여개시 후 주 1회 빈도로 실시하였다.

(3) 사육환경

본 시험은 온도 23± 3℃, 상대습도 55±15%, 환기횟수 10-20회/hr, 조명시간 12시간(08:00 점등 - 20:00 소등) 및 조도 150-300 Lux로 설정된 사육시설에서 실시하였다. 사료는 견용 고형사료 DS-A(오리엔탈효모사)를 1일 300g 씩 제한 급여 하였으며 물은 상수도수를 미세여과기와 자외선 유수살균기로 소독시킨 후 자유 섭취시켰다.

(4)혈액시료 채취 및 전처리

채혈은 전 동물에 대하여 투약직전, 투약 후 2, 4, 6, 8, 12 및 24시간째 그리고 투여 후 2, 3, 5, 6 및 7일 차에 실시하였으며 1차 및 2차 투여시 채혈요령은 동일하게 진행 하였다. 각각의 채혈시간에 맞게 요측피정맥에서 매회 1mL 정도 채혈하였다. 채혈관은 항응고제 소듐 헤파린(Sodium heparin)이 처리된 것을 이용하였으며, 원심분리법을 이용하여 혈장을 분리하여 분석시까지 deep freezer(-80℃)에 냉동보관하였다. 혈장시료의 전처리는 단백질 침전 여과기(protein precipitation filter)와 진공 매니폴드(vacuum manifold)를 이용하였고 자세한 과정은 다음과 같다.

① 단백질 침전 여과기(protein precipitation filter)(96well, Whatman, USA)의 각 웰(well)에 비글견 혈장 50㎕를 취하여 넣었다.

② 메탄올 200㎕를 취하여 혈장 샘플이 들어있는 웰에 넣었다.

③ 보르텍스 혼합기(Vortex mixer)(EYELA, Japan)를 이용하여 단백질 침전 여과기(protein precipitation filter)를 1500 rpm에서 7분간 시료를 추출하였다.

④ 단백질 침전 여과기(protein precipitation filter)를 진공 매니폴드(vacuum manifold)(Whatman, USA)에 옮긴 후 추출 용액이 완전히 여과될 때까지 진공을 유지하였다.

⑤ 여과가 끝난 여과 액을 LC 코니칼 바이알(LC conical vial)(PP, 200㎕)에 옮겼다.

⑥ 20㎕ 주입(injection) 하였다.

(5) 약물분석

혈장중의 약물 분석은 LC/MS/MS system을 이용하였다.

HPLC set-up은 다음과 같다.

Binary pump (Agilent 1100 series, Agilent, USA), Tempostatted autoasmpler (Agilent 1100 series, Agilent, USA), Tempostatted series, Agilent, USA).

분석용 컬럼은 C18 (ZORBAX Eclipse XDB-C18, 3.5㎛, 100x2.1mm I.D., Agilent, USA)을 이용하였다.

이동상은 포름산(formic acid)과 아세토니트릴의 혼합액 (60:40, v/v)을 이용하였고 유속은 0.2ml/min로 하였다.

컬럼 온도는 30℃를 유지하였고 주입량은 20㎕로 하였다.

MS/MS set-up은 다음과 같다.

API ESI positive probe(micromass, UK), Capillary voltage는 3.12kV, corn vortage는 5.0V, desolvation gas flow는 500L/hr, desolvation temperature는 150℃를 이용하였다. 또한 정량 분석에 이용된 MS 방법은 MRM(multiple reaction monitoring)을 이용하였다.

검량선의 작성은 시험 물질인 니코틴산 암로디핀을 메탄올에 용해시킨 후 1, 2, 5, 10, 20, 50, 100, 200, 500, 1000, 2000, 5000 ng/ml의 농도로 첨가 후 혈장시료의 전처리 과정과 동일하게 실시하였다.

(6) 약물동태해석

약물동태해석은 혈중농도 데이터에 근거하여 단일-컴파트먼트 개방형 모델(one-comparrtment open model)을 이용하여 흡수 및 배설은 1차(first order)로 적용하였으며, lag time은 고려하지 않았다. 약물동태 파라메터로는 최고혈중농도(C_max), 최고혈중농도도달시간(T_max), 농도곡선하면적 (AUC), k_a(흡수속도상수), k_el (소실속도상수), t_1/2,a(흡수반감기) 및 t_1/2,b (소실반감기)등 일반적인 체내 약물동태 파라메터를 산출하여 약물동태를 해석하였다.

(7) 데이터의 통계처리

동태파라메터값에 대해서는 t-test를 이용해 통계학적 유의성을 검토하였으며 체중변화, 약물동태파라메터 및 약물혈중농도값은 Mean ± S.D.로 나타내었다.

3. 실험결과

(1) 일반증상 및 체중측정

1차 투여시 및 2차 투여시 니코틴산 암로디핀을 투여한 모든 동물에서 특이적 임상소견 및 체중변화는 관찰되지 않았다.

(2) 약물분석

대상시험물질 니코틴산 암로디핀에 대한 분석크로마토그램은 도2와 같다. 암로디핀 니코티네이트 표준용액의 용출시간(retention time)과 비교해 볼 때 투약 후 채취된 혈액시료중의 용출시간이 일치되게 나타났다.

분석농도에 대한 검량선(직선성) 검토를 위해 수행한 결과 2 - 5000ng/ml의 농도에서 양호한 직선성을 나타내었다 (y=31.5x -1149.6, r=0.997)

(3) 약물동태

비글견에 1, 2차에 걸쳐 5mg/kg 용량으로 경구투여하였을 때, 혈중에서 분석한 혈중농도 프로파일은 도3과 같다. 혈중농도변화에 대한 동태해석 결과 단일-컴파트먼트 개방형 모델 (one-compartment open model)로 해석이 적합하였으며 산출된 동태 파라메터는 표6과 같다. 암로디핀 니코티네이트의 혈중농도변화는 도3에서와 같이 1차(first-order) 소실상을 나타내며 1주일 이상 혈중에 지속적으로 검출되었다.

암로디핀 니코티네이트의 암로디핀의 흡수 및 소실 반감기는 (t_1/2,a , t_1/2,b)는 각각 0.95시간 및 22.4시간이었다. 최고혈중농도도달시간(T_max)는 4.5시간이었다. 컴파트먼트 모델해석에서 얻은 혈중농도곡선하면적(AUC) 및 최고혈중농도(C_max)값은 662 ± 291 ng·day/ml 및 446 ± 247 ng/ml이었다.

[표 6]

비글견에서의 약물동태 파라메터

Parameters	Male(n=2)	Female(n=2)	평 균
Vd/F(L/kg)	0.011±0.005	0.010±0.004	0.011±0.004
k_a(hr^-1)	3.260±3.517	0.719±0.088	1.990±2.505
k_el(hr^-1)	0.032±0.006	0.031±0.008	0.031±0.006
AUC(ng*Day/ml)	657±156	764±474	711±294
t_1/2,a(hr)	0.509±0.549	0.971±0.119	0.740±0.420
t_1/2,b(hr)	22.234±4.509	23.309±6.316	22.772±4.523
SL/F(L/Day/kg)	0.008±0.002	0.008±0.005	0.008±0.003
T_max(Day)	0.106±0.002	0.192±0.003	0.149±0.074
C_max(ng/ml)	463±161	453±190	458±144

4. 결론

장기간 복용을 하여야 하는 고혈압 치료제는 소량의 복용량으로 빠른 효능과 장시간의 지속효과를 가지는 것이 매우 유리하다. 암로디핀 니코티네이트의 혈중농도변화는 1차(first-order) 소실상을 나타내며 1주일 이상 혈중에 지속적으로 검출되었다. 니코틴산 암로디핀의 암로디핀의 흡수 및 소실 반감기는 (t_1/2,a , t_1/2,b)는 각각 0.95시간 및 22.4시간이었다. 최고혈중농도도달시간(T_max)는 4.5시간이었다.

흡수반감기가 짧으며, 최고혈중농도도달시간은 4.5시간이며, 소실반감기가 22.4시간으로 아주 길다. 따라서 과량으로 복용할 필요가 없이 소량으로 복용하여도 혈중에서 22.4시간의 반감기를 가짐으로써, 고혈압 치료제로서 매우 유익하게 사용할 수 있다.

도1은 실시예 3에서 제조한 암로디핀 니코티네이트를 포함하는 정제의 용출시험 결과를 나타낸다.

도2는 암로디핀 니코티네이트에 대한 분석크로마토그램을 나타낸다.

도3은 본 발명의 정제를 비글견에 경구투여하였을 때의 혈중농도 프로파일을 나타낸다.

Claims

치료학적 유효량의 암로디핀 니코티네이트 또는 (S)-암로디핀 니코티네이트를 포함하고, 붕해제로서 전분 글리콜산 나트륨(sodium starch glycolate) 또는 크로스포비돈(crospovidone)을 포함하는 허혈 또는 고혈압 치료용 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 암로디핀 니코티네이트 또는 (S)-암로디핀 니코티네이트가 수화물 형태인 것을 특징으로 하는 조성물.
제2항에 있어서, 상기 암로디핀 니코티네이트 또는 (S)-암로디핀 니코티네이트가 2수화물(dihydrate) 형태인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 붕해제의 함량이 조성물 총 중량에 대하여 2 내지 10 중량%인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,

미결정 셀룰로오즈, 옥수수 전분, 유당(또는 무수 유당), 무수 인산수소 칼슘(단, 20중량% 수성 슬러리의 pH가 pH 6 내지 7), 전호화분 전분, 만니톨, 감자 전분, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 부형제;

저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈로 이루어진 결합제; 및

스테이린산, 스테아린산 마그네슘, 및 탈크로 이루어진 군으로부터 선택된 활택제를 더욱 포함하는 조성물.
제5항에 있어서, 상기 부형제, 결합제, 및 활택제의 함량이 조성물 총 중량에 대하여 각각 각각 80 ∼ 90 중량%, 5 ∼ 8 중량%, 및 0.5 ∼ 2 중량% 인 것을 특징으로 하는 조성물.
제6항에 있어서,

암로디핀 니코티네이트 3.2525 중량%;

미결정 셀룰로오즈 41.7475 중량%;

옥수수 전분 10 중량%;

저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈 7.5 중량%;

무수 인산수소 칼슘 31.5 중량%;

전분 글리콜산 나트륨 5 중량%; 및

스테이린산 마그네슘 1 중량%

로 이루어진 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 또는 캅셀제 형태인 것을 특징으로 하는 조성물.