KR20050072764A - 벤조피라논 화합물, 그것의 조성물 및 암 치료 또는 예방방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 벤조피라논 화합물, 벤조피라논 화합물을 포함하는 조성물 및 유효량의 벤조피라논 화합물을 투여하는 것을 포함하는 암 치료 또는 예방 또는 암 세포 또는 종양 형성 세포의 성장을 저해하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 벤조피라논 화합물들은 R₁은 할로겐, 트리후로우로메틸 또는 C_1-6 알킬인 상기 화학식의 화합물 또는 그것의 약학적으로 수용가능한 염이다.

Description

벤조피라논 화합물, 그것의 조성물 및 암 치료 또는 예방 방법{BENZOPYRANONE COMPOUNDS, COMPOSITIONS THEREOF, AND METHODS FOR TREATING OR PREVENTING CANCER}

본 발명은 벤조피라논 화합물, 벤조피라논 화합물을 포함하는 조성물 및 암 치료 또는 예방하기 위하여 벤조피라논 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다.

2.1 암

암은 주어진 정상 조직으로부터 비정상 세포들의 증가, 이들 비정상 세포들에 의한 인접 조직의 침투 또는 국소적인 림프절 또는 먼 거리까지 악성 세포들의 림프 또는 혈액 확산(전이)로 주로 특징된다. 임상 데이터 및 분자 생물학적 연구는 암은 어떤 조건하에서 종양형성으로 진행될 수 있는 작은 전종양적(preneoplastic) 변화에서 시작하는 다단계 과정이다는 것을 나타낸다. 그 종양형성 소견은 특히 상기 종양형성 세포들이 숙주의 면역 감시를 회피하는 조건하에서 클론적으로 진화할 수 있고 침입, 성장, 전이 및 비균질화에 대한 증가력을 발생한다. Roitt, I., Brostoff, J 및 Kale, D., Immunology, 17.1-17. 12 (3rd ed. , Mosby, St. Louis, Mo. , 1993). 단지 몇 타입의 암들에 대한 기재를 하기에서 제공한다. 다른 타입들의 암에 대한 기술은 당업자에게 주지되어 있고 의학 논문에 기재되어 있다.

2.2 뇌 종양 및 뇌 전이

매년 약 10,000 건의 뇌종양 및 약 4000 건의 척수 종양들이 있다(Kornblith 외(1985), Cancer : Principles and Practice of Oncology, 2"d Ed. , DeVita, V.,Hellman, S. , Rosenberg, S. , eds. , J. B. Lippincott Company, Philadelphia, Chapter 41: Neoplasms of the Central Nervous System). 중추 신경계(CNS) 종양들은 젊은 환자의 고형암들 중 가장 일반적인 군을 구성한다(Id). 신경교종(Glioma)은 전체 일차 CNS 종양들의 약 60%를 구성하고, 성상세포종(astrocytoma), 뇌수막종, 핍지교종 및 조직구 림프종을 갖는 가장 일반적인 뇌 일차 종양들이다(Id). 신경교종은 뇌의 내뇌반구에서 종종 일어나지만 시신경, 뇌 간 또는 소뇌와 같은 다른 지역들에서도 발견될 수 있다(Brain Tumor Society; www/tbts.org/primary. htm).

신경교종들은 그들이 기원하는 아교세포(glial cell)의 타입에 따라 몇개의 군으로 나눈다(Id). 가장 일반적인 타입의 신경교종은 성상세포종(astrocytomas)이다. 이들 종양들은 성상세포라는 별 모양의 아교세포로부터 발생한다. 성상세포종은 그들의 악성에 따라 등급화한다. 낮은 등급, 즉 I 등급 및 II 등급 성상세포종은 가장 덜 악성이고 비교적 천천히 성장하고 종종 수술을 사용하여 완전히 제거될 수 있다. 중급 성상세포종 즉 III 등급 성상세포종은 수술 후에 방사선치료 및 일부 화학요법치료를 수반한다. 상급 성상세포종, 즉 IV 등급 성상세포종은 빠르게 성장하고 인접 조직에 침입하고 매우 악성이다. IV 등급 성상세포종은 종종 수술 후에 방사선치료 및 화학요법치료의 조합을 수반하여 치료된다. 다형성 교종(Glioblastoma multiforme)은 가장 악성이며 치명적인 일차 뇌 종양 중 하나인 IV 등급 성상세포종이다(Id).

전통적으로 성상세포종들의 치료는 종양을 제거하는 수술을 하고 방사선치료를 수반하는 것과 연관된다. 화합요법은 방사선 치료 전 또는 후에 투여될 수 있다(Kornblith 외(1985), Cancer : Principles and Practice of Oncology,2nd Ed. , DeVita, V. , Hellman, S. , Rosenberg, S. , eds. , J. B. Lippincott Company, Philadelphia, Chapter 41: Neoplasms of the Central Nervous System). 같은 수술적 기술 및 원리들이 다형성 교종 및 덜 악성인 뇌종양에 적용될 수 있지만 다형성 교종의 완전한 제거는 달성되기 더욱 어렵다(Id).

IV 등급 성상세포종 뇌종양을 갖는 것으로 진단되는 환자의 예후는 전통적으로 빈약하다. I 등급 성상세포종에 대한 치료를 받은 사람들은 재발없이 10년 또는 그 이상을 일반적으로 생존할 수 있으나 IV 등급 성상세포종을 갖는 환자의 평균 생존 기간은 수술 후 15주이다. IV 등급 성상세포종의 높은 악성 성장력때문에 단지 5%의 환자들이 수술 치료 후 1년동안 생존했고 2년 후에는 거의 0% 생존률을 보였다. 수술 치료와 방사선 치료의 결합은 치료 2년 후 생존률을 약 10%까지 증가시켰으나 5년 이상 생존한 환자는 없었다(Id).

2.3 현재 암 치료

최근에 암 치료는 환자의 종양 세포들을 제거하기 위한 수술, 방사선치료 및/또는 화학요법와 관계있다(예를 들어 Stockdale, 1998, "Principles of Cancer Patient Management", in Scientific American : Medicine, vol. 3, Rubenstein andFederman,eds., Chapter 12, Section IV 참조). 모든 이러한 접급은 환자에게 중요한 문제점을 나타낸다. 예를 들어 수술은 환자의 건강상태로 인하여 금기시 될 수 있고 환자가 수용하지 않을 수 있다. 그 외에도 수술은 종양형성 조직을 완전하게 제거할 수 없을 수 있다. 방사선 요법은 조사된 종양형성 조직이 정상 조직에 비하여 높은 감수성을 나타내는 경우에만 효과적이고 종종 방사선 요법은 심각한 부작용들을 수반할 수 있다(Id.) 화합요법에서는 종양형성 질환을 치료하는데 유용한 많은 화학요법제가 있다. 그러나 다양한 화학요법제의 유용성에도 불구하고 화학요법은 많은 문제점을 갖는다(예를 들어 Stockdale, 1998,"Principles Of Cancer Patient Management"in Scientific American Medicine, vol. 3, Rubenstein and Federman, eds. , ch. 12, sect. 10 참조). 거의 모든 화학요법제는 독성이며 화학요법제는 메스꺼움, 골수 억제, 면역 억제 등을 포함하는 상당하고 종종 위험한 부작용을 야기한다. 그 외에도 많은 종양 세포들은 다중-약제 저항성을 통하여 화학요법제제에 저항성을 가지고 저항성을 발생한다. 나이트로소유레아 화학요법 제제들은 종종 뇌 종양의 치료에 사용된다. 이들 화합물들의 주된 특성은 그들의 혈관 뇌 장벽(blood-brain barrier)을 통과하는 능력이다. 1-3-bis-2-chloroethyl-1-nitrosourea (BCNU, 종종 카르무스틴으로 알려진)이 이들 중 임상적으로 처음 사용된 것이다. 수술 및/또는 방사선 치료와 결합하여 BCNU의 사용은 유익한 효과를 보였지만 다형성 교종 뇌종양을 치료하지는 못하였다. 그 외에도 연장된 나이트로소유레아 치료의 합병증이 보고되었다(Cohen 외, Cancer Treat. Rep. 60,1257-1261 (1976) ). 이들 합병증은 폐 섬유증, 간 독성, 신부전 및 나이트로소유레아 치료와 관련된 이차 종양들의 발생을 포함한다.

암 치료에서 Tamoxifen 및 Raloxifene과 같은 에스트로겐 수용체 조절자가 조사되었다. 타모시펜은 재발성 악성 교종 종양의 치료와 관련하여 인간 임상 시험에서 사용되었다(Couldwell 외, Clin. Cancer Res. 2,619-622 (1996)). 라로시펜은 쥐 모델에서 꼬리 종양의 허파 전이를 저해하는 것을 나타냈다(Neubauer 외, Prostate 27,220-229 (1995)).

수술, 방사선 치료 및 화학요법의 치료 영역은 IV 등급 성상세포종 뇌종양을 갖는 환자에 대한 적당하게 증가된 수명에 대한 기회를 제공하였지만 각 치료 방법과 관련된 위험이 많다. 치료 효과는 적고 치료는 환자의 짧게 남은 수명의 질을 크게 감소시킬 수 있다.

따라서 상기 언급한 전통적인 접근을 극복할 수 있는 항암제 화합물 및 치료방법들이 명백하게 필요하게 된다.

본 명세서의 2절에 어떤 레퍼런스의 인용 또는 동정은 상기 레퍼런스가 본 출원의 선행기술이다라는 것을 인정하는 것이 아니다.

3. 발명의 요약

본 발명은 하기 화학식(I)의 화합물 또는 그것의 약학적으로 수용가능한 염에 관한 것이고, 여기서 R₁은 할로겐, 트리후로우로메틸 또는 C_1-6 알킬이다.

화학식(I)의 화합물 또는 그것의 약학적으로 수용가능한 염(각각은 "벤조피라논 화합물(Benzopyranone Compound)")은 환자의 암 치료 또는 에방에 유용하다.

본 발명은 유효량의 벤조피라논 화합물 또는 그것의 약학적으로 수용가능한 염 및 약학적으로 수용가능한 담체 또는 베히클을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물들은 환자의 암 치료 또는 에방에 유용하다.

본 발명은 또한 유효량의 벤조피라논 화합물 또는 그것의 약학적으로 수용가능한 염을 그것이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는 환자에서 종양을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

또한 본 발명은 유효량의 하기 벤조피라논 화합물 또는 그것의 약학적으로 수용가능한 염을 암 세포 또는 종양 세포와 접촉하는 것을 포함하는 암 세포 또는 종양 세포의 성장을 저해하는 방법에 관한 것이다.

4.1 정의들

본 명세서에서 사용된 "C_l-6 알킬"이란 용어는 탄소수 1에서 6의 탄소 원자들을 갖는 직쇄 또는 곁가지 비-고리형(non-cyclic) 탄화수소를 의미한다. 대표적인 직쇄 C_l-6 알킬은 -메틸,-에틸,-n-프로필,-n-부틸,-n-펜틸 및 -n-헥실을 포함한다. 대표적인 곁가지 C_l-6 알킬은 이소프로필,-sec-부틸,-이소부틸,-tert-부틸,-이소펜틸,-네오펜틸, 1-메틸부틸, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, 1,1-디메틸프로필, 1,2- 디메틸프로필, 1-메틸펜틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 1-에틸부틸, 2-에틸부틸, 3-에틸부틸, 1,1-디메틸부틸, 1,2-디메틸부틸, 1,3-디메틸부틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸부틸을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 "C_l-4 알킬"이란 용어는 탄소수 1에서 4의 탄소 원자들을 갖는 직쇄 또는 곁가지 비-고리형(non-cyclic) 탄화수소를 의미한다. 대표적인 직쇄 C_l-4 알킬은 -메틸,-에틸,-n-프로필,및 -n-부틸을 포함한다. 대표적인 곁가지 C_l-4 알킬은 이소프로필,-sec-부틸,-이소부틸, 및 -tert-부틸을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 "할로겐"이란 용어는 불소, 염소, 불소 또는 요오드를 의미한다.

본 명세서에서 사용된 "예방하다","예방하는" 및 "예방"이란 용어는 환자에서 암의 발생, 확산 또는 재발의 예방을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 "치료하다","치료하는" 및 "치료"란 용어는 일차, 국소 또는 전이 암 조직의 근절, 제거, 변형 또는 조절 또는 암의 확산의 지연을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 "환자"라는 용어는 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 또끼 또는 귀니아 피그를 포함하나 이에 한정되지 아니하는 동물을 의미하고 일 실시예에서는 포유류를 또 다른 실시예에서는 인간을 의미한다. 일부 실시예들에서 상기 환자는 유아, 청소년 또는 성인일 수 있다.

본 명세서에서 벤조피라논 화합물과 결합하여 사용된 "유효량"이란 용어는 암을 치료 또는 예방하는데 유효한 벤조피라논 화합물의 양을 의미한다.

본 명세서에서 사용된 "약학적으로 수용가능한 염"이란 구는 화학식(I)의 화합물의 산성 또는 염기성 군들의 염들을 포함하나 이에 한정되지 아니한다. 자연계에서 염기성인 본 발명의 방법들 및 조성물들에 포함된 화합물들은 여러 무기 및 유기 산들과 다양한 염들을 형성할 수 있다. 그러한 염기성 화합물들의 약학적으로 수용가능한 산 부가 염들 제조에 사용될 수 있는 산들은 비독성 산 부가 염들 즉 황산, 구연산, 말레익산,초산, 옥살산, 염산, 하이드로부로마이드, 하이드로아오다이드, 질산, 설페이트, 바이설페이트, 인산, 산 인산, 이소니코티네이트, 아세테이트, 젖산, 살리실레이트, 사이트레이트, 산 사이트레이트, 타르테이트, 오레이트, 탄네이트, 판토테네이트, 바이타르테이트, 아스코르베이트, 석시테이트, 말레이트, 젠티시네이트, 후마레이트, 글루코네이트, 글루카로네이트, 사카레이트, 포메이트, 벤조에이트, 글루타메이트,메탄설포네이트,에탄설포네이트,벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트 및 파모에이트(즉 ,1,1'-메틸렌-비스-(2-하이드록시-3-나프토에이트))염들을 포함하나 이에 한정되지 아니하는 약학적으로 수용가능한 음이온들을 포함하는 염들을 형성하는 것들이다. 아미노 부위를 포함하는 본 발명의 방법들 및 조성물들에 포함된 화합물들은 상기 언급한 산들 외에도 여러 아미노산들과 약학적 또는 화장류적으로 수용가능한 염들을 형성할 수 있다. 자연계에서 산성인 본 발명의 방법들 및 조성물들에 포함된 화합물들은 여러 약학적 또는 화장류적으로 수용가능한 양이온과 염기성 염들을 형성할 수 있다. 그러한 염들의 예는 알카리 금속, 알카리 토금속 및 특히 칼슘, 마그네슘, 나트륨 리튬, 아연, 칼륨 및 철 염들을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 약어 "DMAP"는 4-dimethylaminopyridine을 의미한다.

본 명세서에서 사용된 약어 "DMF"는 dimethylformamide를 의미한다.

본 명세서에서 사용된 약어 "NBS"는 N-bromosuccinimide를 의미한다.

본 명세서에서 사용된 약어 "AIBN"는 2,2'-azobisisobutyronitrile을 의미한다.

본 명세서에서 사용된 약어 "DME"는 dimethylether를 의미한다.

본 명세서에서 사용된 약어 "DIAD"는 diisopropylazo-dicarboxylate를 의미한다.

본 명세서에서 사용된 약어 "CDI"는 1,1'-carbonyldiimidazole을 의미한다.

본 명세서에서 사용된 약어 "MTBE"는 methyltertbutylether를 의미한다.

본 발명은 본 발명의 비한정적인 실시예들을 예시하기 위한 발명의 상세한 설명 및 실시예들에 레퍼런스에 의하여 더 완전하게 이해될 수 있다.

4.2 벤조피라논 화합물들

상기에서 언급한 바와 같이 본 발명은 하기 화학식(I)의 화합물 또는 그것의 약학적으로 수용가능한 염에 관한 것이고, 여기서 R₁은 할로겐, 트리후로우로메틸 또는 C_1-6 알킬이다.

일 실시예에서 상기 R₁은 할로겐이다.

또 다른 일 실시예에서 상기 R₁은 트리후로우로메틸이다.

또 다른 일 실시예에서 상기 R₁은 C_1-6 알킬이다.

또 다른 일 실시예에서 상기 R₁은 C_1-4 알킬이다.

예시적인 벤조피라논 화합물들은 하기 표1에 나타낸다.

화합물	R1
A	불소
B	염소
C	브롬
D	요오드
E	메틸
F	에틸
G	n-프로필
H	이소프로필
I	sec-부틸
J	n-부틸
K	이소부틸
L	t-부틸
M	n-펜틸
N	n-헥실
O	트리후루로메틸

4.3. 벤조피라논 화합물들을 얻는 방법들

벤조피라논 화합물들은 본 명세서에 기재된 합성 경로 뿐 아니라 공지된 기술들을 사용하여 당업자에 의하여 제조될 수 있다. 예를 들어 벤조피라논 화합물들은 하기 반응식 1 또는 반응식 2에 의하여 합성될 수 있다.

반응식 1

반응식 1은 R₁이 불소인 화학식(I)의 벤조피라논 화합물을 낸다.

반응식 2

반응식 2는 R₁이 불소가 아닌 화학식(I)의 벤조피라논 화합물을 얻는 방법들을 나타낸다.

일부 벤조피라논 화합물들은 물 또는 다른 유기 용매들과 수화물(solvate)들을 형성할 수 있다. 그러한 수화물들은 유사하게 본 발명의 범위 내에 포함된다.

일 실시예에서, 용어 "약학적으로 허용가능한(pharmaceutically acceptable)"은 동물, 특히 인간에서 사용되도록 연방 또는 주 정부의 허가 기간에서 승인을 받았거나 미국약전 또는 다른 일반적으로 인정되는 약전에 등재된 것을 의미한다. 용어 "운반체(carrier)"는 벤조피라논 화합물과 함께 투여되는 부형제, 애주번트(adjuvant), 첨가제, 또는 비히클을 의미한다. 그러한 약학 운반체는 땅콩 오일, 대두 오일, 미네랄 오일, 참깨 오일 및 이와 유사한 것과 같은 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것을 포함하는 물 및 오일과 같은 액상일 수 있다. 약학 운반체는 생리식염수, 아카시아 검, 젤라틴, 전분 페이스트, 탈크, 케라틴, 콜로이달 실리카, 우레아 및 이와 유사한 것일 수 있다. 첨가적으로, 보조, 안정화, 농후, 활택 및 착색 성분이 사용될 수도 있다. 환자에게 투여될 때, 벤조피라논 화합물 및 약학적으로 허용가능한 운반체는 멸균될 수 있다. 물은 벤조피라논 화합물이 정맥으로 투여될 때 유용한 운반체이다. 생리식염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액 또한 액상 운반체, 특히 주사용 용액으로 적용될 수 있다. 적당한 약학 운반체는 또한 전분, 글루코스, 락토스, 슈크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 초크, 실리카 겔, 소디움 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 소디움 클로라이드, 건조 탈지 우유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 및 이와 유사한 것과 같은 첨가제를 포함할 수 있다. 본 조성물은, 바람직하다면, 또한 소량의 습윤 또는 유화 성분, 또는 pH 완충 성분을 포함할 수 있다.

본 조성물은 용액, 현탁액, 유제, 정제, 필제, 펠렛, 캅셀, 액체를 함유한 캅셀, 파우더, 방출-지연 제제, 좌제, 유제, 에어로솔, 스프레이, 현탁액, 또는 사용하기에 편리한 다른 형태를 취할 수 있다. 일 실시예에서, 약학적으로 허용가능한 운반체는 캅셀이다(예를 들어, 미국특허 제5,698,155호 참조). 적당한 약학적 운반체의 다른 예들은 E. W. Martin의 "Remington's Pharmaceutical Sciences" 에 개시되어 있다.

일 실시예에서, 벤조피라논 화합물은 인간에게 정맥 투여하도록 적용된 약학 조성물로서의 일반적인 절차에 따라 제제화될 수 있다. 전형적으로, 정맥투여를 위한 벤조피라논 화합물은 멸균 등장 수용성 완충액이다. 필요한 경우, 조성물은 가용화 성분을 또한 포함할 수 있다. 정맥투여를 위한 조성물은 선택적으로 주사 부위의 통증을 줄이기 위하여 리그노카인과 같은 국소 마취제를 포함할 수 있다. 일반적으로, 성분들은 예를 들어 활성 성분의 양을 표시하는 앰플 또는 사케테(sachette)와 같은 밀폐 밀봉 용기로 예를 들어 건조 동결건조 파우더 또는 물이 없는 농축액과 같은 형태로, 분리되어 또는 유닛 투여 형태로 함께 혼합되어 공급된다. 벤조피라논 화합물이 주입(infusion)에 의하여 투여될 때, 그들은 예를 들어 멸균 약학 등급 물 또는 생리식염수를 함유하는 주입 병으로 분배될 수 있다. 벤조피라논 화합물이 주사에 의하여 투여될 때, 주사용 멸균 증류수 또는 생리식염수의 앰플이 제공되어 성분들이 투여 전에 혼합되도록 할 수 있다. 경구 전달을 위한 조성물은 예를 들어 정제, 로젠즈(lozenge), 수성 또는 오일상 현탁액, 과립제, 파우더, 유제, 캅셀, 시럽 또는 에릭실제의 형태일 수 있다. 경구 투여된 조성물은 약학적으로 맛이 좋은 제제를 제공하기 위하여 예를 들어 프럭토즈, 아스파탐 또는 사카린과 같은 감미제; 페퍼민트, 윈터그린 오일, 또는 체리와 같은 향료 성분; 착색제; 및 보존 성분과 같은 하나 또는 그 이상의 성분들을 추가로 함유할 수 있다. 게다가, 정제 또는 필의 형태인 경우, 조성물은 위장관 내에서 붕해 및 흡수를 지연시키기 위해 코팅될 수 있고, 그것에 의하여 증가한 시간 동안 지연된 활성을 제공할 수 있다. 삼투압적 활성(osmotically active) 유도 화합물을 둘러싸는 선택적으로 투과 가능한 막이 또한 경구적으로 투여된 벤조피라논 화합물에 대하여 적합하다. 이러한 후자의 플랫폼에서, 캅셀을 둘러싸는 환경의 액이 유도 화합물에 의하여 침투되고, 이것이 구멍을 통하여 상기 성분 또는 성분 조성물을 대체하기 위하여 팽창한다. 이러한 전달 플랫폼은 속방형 제제의 피크 형 프로파일과 대비되는 실질적으로 0-차 속도 전달 프로파일을 제공할 수 있다. 글리세롤 모노스테아레이트 또는 글리세롤 스테아레이트와 같은 시간-지연 물질이 또한 사용될 수 있다. 경구 조성물은 만니톨, 락토즈, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 소디움 사카린, 셀룰로오스 또는 마그네슘 카보네이트와 같은 표준 운반체를 포함할 수 있다. 일 실시예에서, 운반체는 약학 등급이다.

암을 치료 또는 예방하기에 효과적인 벤조피라논 화합물의 양은 표준 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 추가로, in vitro 또는 in vivo 분석이 최적의 투여 범위를 확인하는 것을 돕기 위하여 선택적으로 적용될 수 있다. 유효량은 또한 투여 경로, 및 질병 또는 장애의 경중에 달려 있으며, 전문의의 판단 및 각 환자의 상태에 따라 결정되어야 한다. 그러나 벤조피라논 화합물 경구 투여 유효량의 일반적 범위는 약 0.5 mg/일 내지 약 5000 mg/일이고, 일 실시예에서 약 500 mg/일 내지 약 3500 mg/일이고, 다른 일 실시예에서 약 1000 mg/일 내지 약 3000 mg/일이고, 다른 일 실시예에서 약 1500 mg/일 내지 약 2500 mg/일이고 다른 일 실시예에서 약 2000 mg/일이다. 다른 실시예에서, 정맥 투여의 유효량은 경구 투여량의 약 10%이고 전달(convection)-촉진 약물 투여의 유효량은 경구 투여량의 약 1%이다. 물론 종종 하루의 다양한 시점에 화합물의 일일 투여량을 분할하여 투여하는 것이 실용적이다. 그러나, 어떤 경우에 있어 투여되는 벤조피라논 화합물의 양은 활성 성분의 용해도, 사용된 제제 및 투여 경로와 같은 인자들에 달려 있다. 좌제(Suppository)는 일반적으로 벤조피라논 화합물의 유효량을 중량 대비 약 0.5% 내지 약 10%의 범위로 함유하고 있다. 경구 조성물은 벤조피라논 화합물의 약 10% 내지 약 95%을 함유하고 있다. 본 발명의 일정 실시예에서, 경구 투여의 적절한 유효 투여량은 일반적으로 체중 킬로그램 당 벤조피라논 화합물 약 10-500 mg이다. 다른 실시예에서, 경구 유효 투여량은 체중 킬로그램 당 약 10-100, 100-300, 300-900, 또는 900-1500 mg이다. 다른 실시예에서, 유효 경구 투여량은 약 체중 킬로그램 당 약 100-200, 200-300, 300-400 또는 400-500 mg이다. 본 발명의 다른 실시예에서, 경구 투여의 유효 투여량은 일반적으로 체중 킬로그램 당 벤조피라논 화합물 1-7500 마이크로그램이다. 다른 실시예에서, 유효 경구 투여량은 체중 킬로그램 당 약 1-10, 10-30, 30-90, 또는 90-150 마이크로그램이다. 다른 실시예에서, 유효 경구 투여량은 체중 킬로그램 당 약 150-250, 250-325, 325-450, 450-1000 또는 1000-7500 마이크로그램이다. 유효 투여량은 in vitro 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유래한 용량-반응 커브에 외삽하여 얻어질 수 있다. 그러한 동물 모델 및 시스템은 본 발명이 속한 분야에서 잘 알려져 있다.

본 발명은 또한 하나 또는 그 이상의 벤조피라논 화합물을 함유하는 하나 또는 그 이상의 컨테이너를 포함하는 약학 팩(pack) 또는 키트를 제공한다. 선택적으로 그러한 컨테이너와 관련하여 약학 또는 생물학적 프로덕트의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 작성된 형태의 게시(notice)가 있을 수 있고, 그러한 게시는 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매에 대한 상기 기관의 허가를 나타낸다. 일정 실시예에서, 키트는 또한 벤조피라논 화합물의 투여 전에, 벤조피라논 화합물 투여와 연속하여 또는 동시에 투여될 수 있는 하나 또는 그 이상의 다른 화학요법 성분을 함유할 수 있다.

벤조피라논 화합물은 인간에게 사용하기에 앞서 in vitro 분석될 수 있고, 그 후 바람직한 치료 또는 예방 활성에 대하여 in vivo 분석될 수 있다. 예를 들어, in vitro 분석은 특정 벤조피라논 화합물 투여 또는 벤조피라논 화합물의 병용 투여가 바람직한지 여부를 결정하기 위하여 사용될 수 있다.

일 실시예에서, 환자 조직 샘플은 배양으로 키워질 수 있고, 벤조피라논 화합물로 접촉되거나 또는 그렇지 않다면 벤조피라논 화합물로 투여될 수 있고, 조직 샘플에 대한 벤조피라논 화합물의 효과가 관측되고 비-접촉 조직과 비교될 수 있다. 다른 실시예에서, 세포 배양 모델이 사용되며, 그 모델에서 세포 배양액의 세포가 벤조피라논 화합물로 접촉되거나 또는 그렇지 않다면 벤조피라논 화합물로 투여될 수 있고, 조직 샘플에 대한 벤조피라논 화합물의 효과가 관측되고 비-접촉 조직과 비교될 수 있다. 일반적으로, 비-접촉 세포와 비교하여 접촉된 세포가 낮은 레벨로 증식 또는 생존하는 것은 벤조피라논 화합물이 암을 가진 환자를 치료하는데 효과적이라는 것을 나타낸다. 그러한 벤조피라논 화합물은 또한 동물 모델 시스템을 사용하여 효과적이고 안전하다는 것이 증명될 수 있다.

벤조피라논 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태일 수 있다. 약학적으로 허용가능한 염은 일반적으로, 유기 화학 분야에서 통상적인 것과 같이, 벤조피라논 화합물의 유리-염기 형태를 위에서 설명한 것과 같은 적당한 산과 반응시켜 형성된다. 염은 알맞은 온도에서 고효율로 형성될 수 있고, 합성의 마지막 단계에서 벤조피라논 화합물의 염 형태를 적당한 산성 세척으로 분리하여 제조될 수 있다. 염-형성 산은 메탄올, 에탄올, 이소프로판올과 같은 알카놀; 아세톤과 같은 케톤; 또는 에틸 아세테이트와 같은 에스터 같은 무수 또는 물-함유 유기 용매에 용해될 수 있다. 한편, 벤조피라논 화합물의 유리-염기 형태가 바람직하다면, 그것은 염기성 최종 세척 단계로부터 분리될 수 있다. 염화수소 염을 제조하는 일반적인 기술은 유리 염기를 적당한 용매에 녹이고 분자 체(molecular sieve) 상에서 용액을 철저히 건조한 후 그것을 통하여 염화수소 가스를 버블링(bubbling)하는 것이다.

4.5 추가 치료제(ADDITIONAL THERAPIES)

벤조피라논 화합물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 암을 치료 또는 예방하는 방법은 다른 치료제의 유효량의 투여를 더 포함할 수 있다. 다른 치료는 화학요법, 방사선 치료, 호르몬 치료, 골수 이식, 줄기-세포 대체 치료, 다른 생물학적 치료 및 면역치료를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.

일 실시예에서, 본 발명의 방법은 안지오스타틴(Angiostatin) (플라스미노겐 절편); 항-안지오제닉 항트롬빈 Ⅲ; 안지오자임(Angiozyme); ABT-627; Bay 12- 9566; 베네핀(Benefin); 베바시주마브(Bevacizumab); BMS-275291; 연골-유래 억제제(cartilage-derived inhibitor, CDI); CAI; CD59 보체 절편; CEP-7055; Col 3; 콤브레타스타틴(Combretastatin) A-4; 엔도스타틴(Endostatin) (콜라겐 ⅩⅧ 절편); 피브로넥틴 절편; Gro-beta; 할로퓨리논(Halofuginone); 헤파리나제; 헤파린 헥사사카라이드 절편; HMV833; 인간 융모막 고나도트로핀(hCG); IM-862; 인터페론 알파/베타/감마; 인터페론 유도 단백질 (IP-10); 인터루킨-12; 크린글(Kringle) 5 (플라즈미노겐 절편); 마리마스타트(Marimastat); 덱사메타손을 포함하나 이에 한정되지 않는 항 염증 스테로이드; 메탈로프로테인아제(Metalloproteinase) 억제제 (TIMP); 2-메톡시에스트라디올; MMI 270 (CGS 27023A); MoAb IMC-1C11; 네오바스타트(Neovastat); NM-3; 판젬(Panzem); PI-88; 태반 리보뉴클레아제 억제제; 플라즈미노겐 활성화제 억제제; 혈소판 인자-4 (PF4); 프리노마스타트(Prinomastat); 프로락틴 16kD 절편; 프로리페린(Proliferin)-관련 단백질 (PRP); PTK 787/ZK 222594; 레티노이드 소리마스타트; 스쿠알라민; SS 3304; SU 5416; SU6668; SU11248; 테트라하이드로코티솔-S; 테트라티오모리브데이트(tetrathiomolybdate); 탈리도마이드; 트롬보스폰딘(Thrombospondin)-1 (TSP-1); TNP-470; 형질전환(Transforming) 성장 인자-베타 (TGF-b); 바스큐로스타틴(Vasculostatin); 바소스타틴 (칼레티큘린(calreticulin) 절편; ZD6126; ZD6474; 파네실(farnesyl) 트랜스페라제 억제제 (FTI); 및 비스포스포네이트 (예를 들어, 알렌드로네이트, 에티드로네이트(etidronate), 파미드로네이트, 리세드로네이트, 이반드로네이트, 졸레드로네이트(zoledronate), 올파드로네이트(olpadronate), 이칸드로네이트 또는 네리드로네이트(neridronate))를 포함하나 이에 한정되지 않는 혈관신생 억제제의 투여를 더 포함할 수 있다.

다른 치료는 항-암 성분의 투여일 수 있다. 유용한 항-암 성분은 아시비신(acivicin); 아클라루비신(aclarubicin); 아코다졸 하아이드로클로라이드(acodazole hydrochloride); 아크로닌(acronine); 아도젤레신(adozelesin); 알데스루킨(aldesleukin); 알트레트아민(altretamine); 암보마이신(ambomycin); 아메탄트론 아세테이트(ametantrone acetate); 아미노그루테티미드; 암사크린(amsacrine); 아나스트로졸(anastrozole); 안트라마이신(anthramycin); 아스파라기나제(asparaginase); 아스페린(asperlin); 아자시티딘(azacitidine); 아제테파(azetepa); 아조토마이신(azotomycin); 바티마스타트(batimastat); 벤조데파(benzodepa); 비칼루트아미드(bicalutamide); 비산트렌 하이드로클로라이드(bisantrene hydrochloride); 비스나피드 디메실레이트(bisnafide dimesylate); 바젤레신(bizelesin); 블레오마이신 설페이트(bleomycin sulfate); 브레퀴나 소디움(brequinar sodium); 브로피리민(bropirimine); 부술판(busulfan); 칵티노마이신(cactinomycin); 칼루스테론(calusterone); 카라세마이드(caracemide); 카베티머(carbetimer); 카보플라틴(carboplatin); 카무스틴(carmustine); 카루비신 하이드로클로라이드(carubicin hydrochloride); 카젤레신(carzelesin); 세데핀골(cedefingol); 클로암부실(chlorambucil); 시롤레마이신(cirolemycin); 시스플라틴(cisplatin); 글라드리빈(cladribine); 크리스나톨 메실레이트(crisnatol mesylate); 시클로포스파미드(cyclophosphamide); 시타라빈(cytarabine); 다카바진(dacarbazine); 닥티노마이신(dactinomycin); 다우노루비신 하이드로클로라이드(daunorubicin hydrochloride); 데시타빈(decitabine); 덱소마플라틴(dexormaplatin); 데자구아닌(dezaguanine); 데자구아닌 메실레이트(dezaguanine mesylate); 디아지쿠온(diaziquone); 도세탁셀(docetaxel); 독소루비신(doxorubicin); 독소루비신 하이드로클로라이드(doxorubicin hydrochloride); 드롤록시펜(droloxifene); 드롤록시펜 시트레이트(droloxifene citrate); 드로모스타놀론 프로피오네이트(dromostanolone propionate); 두아조마이신(duazomycin); 에다트렉세이트(edatrexate); 에플로니틴 하이드로클로라이드(eflornithine hydrochloride); 엘사미드루신(elsamitrucin); 엔로플라틴(enloplatin); 엔프로메이트(enpromate); 에피프로피딘(epipropidine); 에피루비신 하이드로클로라이드(epirubicin hydrochloride); 에루불로졸(erbulozole); 에르비툭스(erbitux); 에소루비신 하이드로클로라이드(esorubicin hydrochloride); 에스트라무스틴(estramustine); 에스트라무스틴 포스페이트 소디움(estramustine phosphate sodium); 에타니다졸(etanidazole); 에토포시드(etoposide); 에토포시드 포스페이트(etoposide phosphate); 에토프린(etoprine); 파드로졸 하이드로클로라이드(fadrozole hydrochloride); 파자라빈(fazarabine); 펜레티니드(fenretinide); 플록수리딘(floxuridine); 플루다라빈 포스페이트(fludarabine phosphate); 플루오로우라실(fluorouracil); 플로오로시타빈(flurocitabine); 포스퀴돈(fosquidone); 포스트리에신 소디움(fostriecin sodium); 젬시타빈(gemcitabine); 젬시타빈 하이드로클로라이드(gemcitabine hydrochloride); 히드록시우레아; 이다루비신 하이드로클로라이드(idarubicin hydrochloride); 이포스파미드(ifosfamide); 일모포신(ilmofosine); ImiDs™; 인터루킨 Ⅱ (재조합 인터루킨 Ⅱ 또는 rIL2 포함), 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 인테페론 알파-n1; 인테페론 알파-n3; 인터페론 베타-Ia; 이프로플라틴(iproplatin); 이리노테칸(irinotecan); 이리노테칸 하이드로클로라이드(irinotecan hydrochloride); 란레오티드 아세테이트(lanreotide acetate); 레트로졸(letrozole); 류프롤리드 아세테이트(leuprolide acetate); 리아로졸 하이드로클로라이드(liarozole hydrochloride); 로메트렉솔 소디움(lometrexol sodium); 로무스틴(lomustine); 로속산트론 하이드로클로라이드(losoxantrone hydrochloride); 마소프로콜(masoprocol); 마이탄신(maytansine); 메크로레타민 하이드로클로라이드(mechlorethamine hydrochloride); 메게스트롤 아세테이트(megestrol acetate); 멜렌게스트롤 아세테이트(melengestrol acetate); 멜파란(melphalan); 메노가릴(menogaril); 메캡토퓨린(mercaptopurine); 메토트렉세이트(methotrexate); 메토트렉세이트 소디움(methotrexate sodium); 메토프린(metoprine); 메투레데파(meturedepa); 미틴도미드(mitindomide); 미토카신(mitocarcin); 미토크로민(mitocromin); 미토길린(mitogillin); 미토말신(mitomalcin); 미토마이신(mitomycin); 미토스퍼(mitosper); 미토테인(mitotane); 미토잔트론 하이드로클로라이드(mitoxantrone hydrochloride); 미코페놀릭 애시드(mycophenolic acid); 노코다졸(nocodazole); 노갈라마이신(nogalamycin); 오마플라틴(ormaplatin); 옥시수란(oxisuran); 파클리탁셀(paclitaxel); 페가스파가제(pegaspargase); 펠리오마이신(peliomycin); 펜타무스틴(pentamustine); 페플로마이신 설페이트(peplomycin sulfate); 퍼포스파미드(perfosfamide); 피포브로만(pipobroman); 피포술판(piposulfan); 피로잔트론 하이드로클로라이드(piroxantrone hydrochloride); 플리카마이신(plicamycin); 플로메스탄(plomestane); 포피머 소디움(porfimer sodium); 포피로마이신(porfiromycin); 프레드니무스틴(prednimustine); 프로카바진 하이드로클로라이드(procarbazine hydrochloride); 푸로마이신(puromycin); 푸로마이신 하이드로믈로라이드(puromycin hydrochloride); 피라조푸린(pyrazofurin); 리보프린(riboprine); 로그레티미드; 사핀골(safingol); 사핀골 하이드로클로라이드(safingol hydrochloride); SelCid™; 세무스틴(semustine); 심트라젠(simtrazene); 스파포세이트 소디움(sparfosate sodium); 스파소마이신(sparsomycin); 스피로게르마늄 하이드로클로라이드(spirogermanium hydrochloride); 스피로무스틴(spiromustine); 스피로플라틴(spiroplatin); 스트렙토니그린(streptonigrin); 스트렙토조신(streptozocin); 술로페너(sulofenur); 탈리소마이신(talisomycin); 테코갈란 소디움(tecogalan sodium); 테갈퍼(tegafur); 텔로잔트론 하이드로클로라이드(teloxantrone hydrochloride); 테모포르핀(temoporfin); 테니포시드(teniposide); 테록시론(teroxirone); 테스토락톤(testolactone); 티아미프린(thiamiprine); 티오구아닌(thioguanine); 티오테파(thiotepa); 티아조푸린(tiazofurin) ; 티라파자민(tirapazamine); 토레미펜 시트레이트(toremifene citrate); 트레스톨론 아세테이트(trestolone acetate); 트리시리빈 포스페이트(triciribine phosphate); 트리메트렉세이트(trimetrexate); 트리메트렉세이트 글루쿠로네이트(trimetrexate glucuronate); 트리프토렐린(triptorelin); 투불로졸 하이드로클로라이드(tubulozole hydrochloride); 우라실 머스타드(uracil mustard); 우레데파(uredepa); 바프레티드(vapreotide); 베르테포르핀(verteporfin); 빈블라스틴 설페이트(vinblastine sulfate); 빈크리스틴 설페이트(vincristine sulfate); 빈데신(vindesine); 빈데신 설페이트(vindesine sulfate); 빈에피딘 설페이트(vinepidine sulfate); 빈글리시네이트 설페이트(vinglycinate sulfate); 빈루로신 설페이트(vinleurosine sulfate); 빈오렐빈 타르트레이트(vinorelbine tartrate); 빈로시딘 설페이트(vinrosidine sulfate); 진졸리딘 설페이트(vinzolidine sulfate); 보로졸(vorozole); 제니플라틴(zeniplatin); 지노스타틴(zinostatin); 및 조루비신 하이드로클로라이드(zorubicin hydrochloride)를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 다른 항-암 성분은 20-에피-1,25 디히드록시비타민 D3; 5-에티닐우라실(ethynyluracil); 아비라테론(abiraterone); 아클라루비신(aclarubicin); 아실풀벤(acylfulvene); 아데시페놀(adecypenol); 아도젤레신(adozelesin); 알데스루킨(aldesleukin); ALL-TK 대항제; 알트레타민(altretamine); 암바무스틴(ambamustine); 아미독스(amidox); 아미포스틴(amifostine); 아미노레불리닉 애시드(aminolevulinic acid); 암루비신(amrubicin); 암사크린(amsacrine); 아나그레리드(anagrelide); 아나스트로졸(anastrozole); 안드로그라폴리드(andrographolide); 혈관신생 억제제; 대항제 D; 대항제 G; 안타렐릭스(antarelix); 안티-도살라이징 형태발생 단백질-1(anti-dorsalizing morphogenetic protein-1); 안티안드로겐(antiandrogen), 전립샘 암종(prostatic carcinoma); 안티에스트로겐(antiestrogen); 안티네오플라스톤(antineoplaston); 안티센스 올리고뉴클레오티드(antisense oligonucleotides); 아피디콜린 글리시네이트(aphidicolin glycinate); 아포프토시스 유전지 조정자(apoptosis gene modulators); 아포프도시스 조절자(apoptosis regulators); 아푸리닉 애시드(apurinic acid); 아라(ara)-CDP-DL-PTBA; 아르기닌 디아미나제(arginine deaminase); 아술아크린(asulacrine); 아타메스탄(atamestane); 아트리무스탄(atrimustine); 악시나스타틴 1(axinastatin 1); 악시타스타틴 2(axinastatin 2); 악시나스타틴 3(axinastatin 3); 아자세트론(azasetron); 아자톡신(azatoxin); 아자티로신(azatyrosine); 박카틴 III 유도체(baccatin III derivatives); 발라놀(balanol); 바티마스타트(batimastat); BCR/ABL 대항제; 벤조클로린(benzochlorins); 벤조일스타우로스포린(benzoylstaurosporine); 베타락탐 유도체(beta lactam derivatives); 베타-알레틴(beta-alethine); 베타클라마이신 B(betaclamycin B); 베툴리닉 애시드(betulinic acid); bFGF 억제제; 비칼루타미드(bicalutamide); 비스안트렌(bisantrene); 비스아지리디닐스퍼민(bisaziridinylspermine); 비스나피드(bisnafide); 비스트라텐 A(bistratene A); 비젤레신(bizelesin); 브레플레이트(breflate); 브로피리민(bropirimine); 부도티탄(budotitane); 부티오닌 설폭시민(buthionine sulfoximine); 칼시포트리올(calcipotriol); 칼포스틴 C(calphostin C); 캄프토테신 유도체(camptothecin derivatives); 카나리폭스 IL-2(canarypox IL-2); 카페시타빈(capecitabine); 카르복스아미드-아미노-트리아졸; 카르복시아미노트리아졸; CaRest M3; CARN 700; 연골 유래 억제제(cartilage derived inhibitor); 카젤레신(carzelesin); 카제인 키나제 억제제(casein kinase inhibitors) (ICOS); 카스타노스퍼민(castanospermine); 세크로핀 B(cecropin B); 세트로렐릭스(cetrorelix); 클로른(chlorlns); 클로로퀴녹살린 술폰아미드(chloroquinoxaline sulfonamide); 시카프로스트(cicaprost); 시스-포르피린(cis-porphyrin); 클라드리빈(cladribine); 클로미펜 유사물(clomifene analogues); 클로트리마졸(clotrimazole); 콜리스마이신 A(collismycin A); 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에플로니틴(eflornithine); 엘레멘(elemene); 에미테퍼(emitefur); 에피루비신(epirubicine); 에피스테리드(episteride); 에스트라무스틴 유사물(estramustine analogue); 에스트로겐 대항제; 에타니다졸(etanidazole); 에토포시드 포스페이트(etoposide phosphate); 엑서메스탄(exemestane); 파드로졸(fadrozole); 파자라빈(fazarabine); 펜레티니드(fenretinide); 필그라스팀(filgrastim); 피나스테리드(finasteride); 플라보피리돌(flavopiridol); 플레젤라스틴(flezelastine); 플루아스테론(fluasterone); 플루다라빈(fludarabine); 플루오로다우노루니신 하이드로클로라이드(fluorodaunorunicin hydrochloride); 포페니멕스(forfenimex); 포메스탄(formestane); 포스트레신(fostrecin); 포테무스틴(fotemustine); 가돌리늄 텍사피린(gadolinium texaphyrin); 갈륨 니트레이트(gallium nitrate); 갈로시타빈(galocitabine); 가니렐릭스(ganirelix); 젤라티나제 억제제(gelatinase inhibitors); 젬시타빈(gemcitabine); 글루타치온 억제제(glutathione inhibitors); 헤프술감(hepsulgam); 헤레굴린(heregulin); 헥사메틸렌 비스아세트아미드; 하이페리신(hypericin); 이반드로닉 애시드(ibandronic acid); 이다루비신(idarubicin); 이독시펜(idoxifene); 이드라만톤(idramantone); 일모포신(ilmofosine); 일로마스타트(ilomastat); 이미다조아크리돈(imidazoacridone); 이미퀴모드(imiquimod); 면역자극 펩타이드; 인슐린 유사 성장인자-1 수용체 억제제(insulin-like growth factor-1 receptor inhibitor); 인터페론 작용제; 인터페론; 인터루킨; 아이오벤구안(iobenguane); 아이오도독소루비신(iododoxorubicin); 이포미아놀(ipomeanol), 4-; 이로플락트(iroplact); 이르소글라딘(irsogladine); 이소벤가졸(isobengazole); 이소호모할리콘드린 B(isohomohalicondrin B); 이타세트론(itasetron); 자스플라키놀리드(jasplakinolide); 카할랄리드 F(kahalalide F); 라멜라린-N 트리아세테이트(lamellarin-N triacetate); 란레오티드(lanreotide); 레이나마이신(leinamycin); 레노그라스팀(lenograstim); 렌티난 설페이트(lentinan sulfate); 렙톨스타틴(leptolstatin); 레트로졸(letrozole); 루케미아 억제 인자(leukemia inhibiting factor); 루코사이트 알파 인터페론(leukocyte alpha interferon); 루프롤리드(leuprolide)+에스트로겐+프로게스테론; 루프로렐린(leuprorelin); 레바미솔(levamisole); 리아로졸(liarozole); 선형 폴리아민 유사물; 친유성 디사카라이드 펩타이드(lipophilic disaccharide peptide); 친유성 플라티눔 화합물(lipophilic platinum compounds); 리소클린아미드(lissoclinamide) 7; 로바플라틴(lobaplatin); 롬브리신(lombricine); 로메트렉속(lometrexol); 로니다민(lonidamine); 로속잔트론(losoxantrone); 로바스타틴; 록소리빈(loxoribine); 루토테칸(lurtotecan); 루테티움 텍사피린(lutetium texaphyrin); 리소필린(lysofylline); 리틱 펩타이드(lytic peptides); 마이탄신(maitansine); 만노스타틴 A(mannostatin A); 마리마스타트(marimastat); 마소프로콜(masoprocol); 마스핀(maspin); 마트리리신 억제제(matrilysin inhibitors); 매트릭스 메탈로프로테인나제 억제제(matrix metalloproteinase inhibitors); 메노가릴(menogaril); 메르바론(merbarone); 메테렐린(meterelin); 메티오니나제(methioninase); 메토클로프라미드(metoclopramide); MIF 억제제; 미페프리스톤(mifepristone); 밀테포신(miltefosine); 미리모스팀(mirimostim); 불일치 이중 나선 RNA(mismatched double stranded RNA); 미토구아존(mitoguazone); 미토락톨(mitolactol); 미토마이신 유사물(mitomycin analogues); 미토나피드(mitonafide); 미토톡신 피브로블라스트(mitotoxin fibroblast) 성장인자-사포린(saporin); 미토잔트론(mitoxantrone); 모파로텐(mofarotene); 몰그라모스팀(molgramostim); 단일클론 항체, 인간 융모막 고나도트로핀(human chorionic gonadotrophin); 모노포스포릴 리피드(monophosphoryl lipid) A+미오박테리움 세포벽 sk(myobacterium cell wall sk); 모피다몰(mopidamol); 다중 약물 저항성 유전자 억제제(multiple drug resistance gene inhibitor); 다발성 종양 억제자 1-기초 요법(multiple tumor suppressor 1-based therapy); 머스타드 항암제; 미카페록사이드 B(mycaperoxide B); 미코박테이라 세포벽 추출물(mycobacterial cell wall extract); 미리아포론(myriaporone); N-아세틸디날린; N-치환 벤즈아미드; 나파렐린(nafarelin); 나그레스팁(nagrestip); 날록손(naloxone)+펜타조신(pentazocine); 나파빈(napavin); 나프테르핀(naphterpin); 나토그라스팀(nartograstim); 네다플라틴(nedaplatin); 네모루비신(nemorubicin); 네리드로닉(neridronic) 산; 중성 엔도펩티다제; 닐루트아미드(nilutamide); 니사마이신(nisamycin); 니트릭 옥사이드 조정자(nitric oxide modulators); 니트록사이드 항산화제(nitroxide antioxidant); 니트룰린(nitrullyn); 06-벤질구아닌; 옥트레오티드(octreotide); 오키세논(okicenone); 올리고뉴클레오티드(oligonucleotides); 오나프리스톤(onapristone); 온단세트론(ondansetron); 온단세트론(ondansetron); 오라신(oracin); 경구 사이토카인 유발인자; 오마플라틴(ormaplatin); 오사테론(osaterone); 옥살리플라틴(oxaliplatin); 옥사우노마이신(oxaunomycin); 파클리탁셀(paclitaxel); 파클리탁셀 유사물(paclitaxel analogues); 파클리탁셀 유도체(paclitaxel derivatives); 팔라우아민(palauamine); 팔미토일리족신(palmitoylrhizoxin); 팔미드로닉(pamidronic) 애시드; 파낙시트리올(panaxytriol); 파노미펜(panomifene); 파라박틴(parabactin); 파젤립틴(pazelliptine); 페가파가제(pegaspargase); 펠데신(peldesine); 펜토산 폴리설페이트 소디움(pentosan polysulfate sodium); 펜토스타틴(pentostatin); 펜트로졸(pentrozole); 퍼플루브론(perflubron); 퍼포스파미드(perfosfamide); 페릴릴 알코올(perillyl alcohol); 페나지노마이신(phenazinomycin); 페닐아세테이트; 포스파타제 억제제(phosphatase inhibitors); 피시바닐(picibanil); 필로카핀 하이드로클로라이드(pilocarpine hydrochloride); 피라루비신(pirarubicin); 피리트렉심(piritrexim); 플라세틴(placetin) A; 플라세틴 B; 플라스미노겐 활성자 저해제(plasminogen activator inhibitor); 플라티눔 복합체(platinum complex); 플라티눔 화합물(platinum compounds); 플라티눔-트리아민 복합체(platinum-triamine complex); 포르피머 소디움(porfimer sodium); 포르피로마이신(porfiromycin); 프레드니손(prednisone); 프로필 비스-아크리돈(propyl bis-acridone); 프로스탄글란딘 J2; 프로테아좀 억제제; 단백질 A-기초 면역 조절자; 단백질 키나제 C 억제제; 단백질 키나제 C 억제제, 마이크로알갈; 단백질 티로신 포스파타제 억제제; 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라제 억제제; 퓨르퓨린(purpurin); 피라졸로아크리딘; 피리독실레이티드 헤모글로빈 폴리옥시에틸렌 컨쥬게이트; 라프(raf) 대항제; raltitrexed; 라모세트론; 라스 파네실 단백질 트랜스퍼라제 억제제; 라스 억제제; 라스-GAP 억제제; 레텔리프틴 디메틸레이티드; 레늄 Re 186 에티드로네이트(rhenium Re 186 etidronate); 리족신(rhizoxin); 리보자임; RⅡ 레티나미드; 로그레티미드(rogletimide); 로히투킨; 로무티드(romurtide); 로퀴니멕스(roquinimex); 루비기논(rubiginone) B1; 루복실; 사핀골; 사인토핀; SarCNU; 사르코피톨 A; 사르그라모스팀(sargramostim); Sdi 1 유사체(mimetics); 세무스틴; 노화 유래 억제제 1(senescence derived inhibitor 1); 센스 올리고뉴클리오티드(sense oligonucleotides); 신호전달 억제제(signal transduction inhibitors); 신호전달 조절물질(modulator); 단일 체인 항원 결합 단백질; 시조피란(sizofiran); 소부족산; 소디움 보로캅테이트; 소디움 페닐아세테이트; 솔베롤; 소마토메딘 결합 단백질; 소네르민(sonermin); 스파르포식(sparfosic) 애시드; 스피카마이신(spicamycin) D; 스피로무스틴(spiromustine); 스플레노펜틴(splenopentin); 스폰지스타틴(spongistatin) 1; 스쿠알아민(squalamine); 줄기 세포 억제제; 줄기-세포 분열 억제제; 스티피아미드(stipiamide); 스트로멜리신(stromelysin) 억제제; 술피노신(sulfinosine); 수퍼액티브 바소액티브 인테스티날 펩타이드(superactive vasoactive intestinal peptide) 대항제; 수라디스타(suradista); 수라민(suramin); 스웨인소닌(swainsonine); 합성 글리코스아미노글리칸(glycosaminoglycan); 탈리무스틴(tallimustine); 타목시펜 메티오디드(tamoxifen methiodide); 타우로무스틴(tauromustine); 타자로텐(tazarotene); 테코갈란 소디움(tecogalan sodium); 테카푸르(tegafur); 텔루라피릴륨(tellurapyrylium); 텔로머라제 억제제(telomerase inhibitors); 테모포르핀(temoporfin); 테모졸로미드(temozolomide); 테니포시드(teniposide); 테트라클로로데카옥사이드(tetrachlorodecaoxide); 테트라조민(tetrazomine); 탈리블라스틴(thaliblastine); 티오코랄린(thiocoraline); 트롬보포이에틴(thrombopoietin); 트롬보포이에틴 유사체(thrombopoietin mimetic); 티말파신(thymalfasin); 티모포이에틴 수용체 작용제(thymopoietin receptor agonist); 티모트리난(thymotrinan); 티로이드 자극 호르몬(thyroid stimulating hormone); 틴 에틸 에티오푸푸린(tin ethyl etiopurpurin); 티라파자민(tirapazamine); 티타노센 비클로라이드(titanocene bichloride); 토프센틴(topsentin); 토레미펜(toremifene); 토티포텐트 줄기 세포 인자(totipotent stem cell factor); 번역 저해제(translation inhibitors); 트레티노인(tretinoin); 트리아세틸우리딘(triacetyluridine); 트리시리빈(triciribine); 트리메트렉세이트(trimetrexate); 트리프토렐린(triptorelin); 트로피세트론(tropisetron); 투로스테라이드(turosteride); 티로신 키나제 억제제(tyrosine kinase inhibitors); 티르포스틴(tyrphostins); UBC 억제제; 유베니멕스(ubenimex); 비뇨생식굴-유래 성장 억제 인자(urogenital sinus-derived growth inhibitory factor); 유로키나제 수용체 (urokinase receptor) 대항제; 바프레오티드(vapreotide); 바리올린(variolin) B; 벡터 시스템; 적혈구 유전자 치료; 베라레솔(velaresol); 베라민(veramine); 베르딘(verdins); 베르테포르핀(verteporfin); 비노렐빈(vinorelbine); 빈잘틴(vinxaltine); 비탁신(vitaxin); 보로졸(vorozole); 자노테론(zanoterone); 제니플라틴(zeniplatin); 질라스코릅(zilascorb); 및 지노스타틴 스티말라머(zinostatin stimalamer)를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 일 실시예에서, 항-암 성분은 탈리도마이드 또는 토포아이소머라제 억제제의 유효량의 투여 전에, 투여에 연속하여 또는 투여와 동시에 투여될 수 있는 5-플루오로우라실 또는 루코보린(leucovorin)이다.

다른 치료는 암 세포를 파괴하는 x-레이, 감마 레이 및 다른 소스의 방사선의 사용을 포함하는 방사선 치료일 수 있다. 몇몇 실시예에서, 방사선 치료는 외부 빔 방사선(external beam radiation) 또는 원격치료법(teletherapy)으로 투여되고 여기에서 방사선은 멀리 떨어진 소스로부터 나온다. 다른 실시예에서, 방사선 치료는 내부 치료 또는 근접치료(brachytherapy)로 투여되고 여기에서 방사활성 소스는 암 세포 또는 종양 덩어리에 근접한 신체 내부에 놓인다.

4.6. 암과 종양형성 세포와 질병의 억제

본 발명이 속하는 기술분야에 알려져 있거나 본 명세서에서 언급된 다양한 분석을 사용하여 벤조피라논 화합물이 인 비트로 및 인 비보 종양 세포증식, 세포형질전환 및/또는 종양발생을 억제하는 것이 설명되어질 수 있다. 그러한 활성은 본 발명의 벤조피라논 화합물을 종양 세포와 접촉시킴으로써 인 비트로 분석으로 설명되어질 수 있다. 일반적으로 종양 세포는 벤조피라논 화합물의 농도를 다양화한 다음 대조군과 비교하여 세포 생존을 측정하여 알려진다. 그러한 분석은 암세포 주(line)의 세포 또는 환자의 세포를 사용할 수 있다. 본 발명이 속하는 기술분야에서 잘 알려진 많은 분석들은 그러한 생존 및/또는 성장을 평가하는데 사용될 수 있다; 예를 들면, 세포 증식은 (³H)-티미딘 포함(incorporation)을 측정함으로써, 직접적인 세포 수를 계산함으로써, 원암유전자들(예를 들면 fos, myc) 또는 세포 주기 마커(marker)(Rb, cdc2, 사이클린 A, D1, D2, D3 또는 E 등)와 같이 알려진 유전자들의 전사, 번역 또는 활성의 변화를 조사함으로써 분석될 수 있다. 이러한 단백질과 mRNA의 레벨 및 활성은 본 발명이 속하는 기술분야에서 잘 알려진 방법에 의해 결정될 수 있다. 예를 들면, 단백질은 상업적으로 이용 가능한 항체들(예를 들면, 산타 크루즈 주식회사(Santa Cruz, Inc)에서 제조된 많은 세포-주기 마커 항체들)을 사용하여 웨스턴 블라팅(Western blotting) 또는 면역침전(immunoprecipitation)과 같이 알려진 면역 진단법에 의해 정량화될 수 있다. mRNA는 본 발명이 속하는 기술분야에서 잘 알려지고 일상적인 방법들에 의해, 예를 들면, 노던 분석(northern analysis), RN아제 보호, 또는 역전사와 관련된 중합효소 연쇄 반응 등을 사용하여 정량화될 수 있다. 세포 생존력은 본 발명이 속하는 기술분야에서 알려진 트리판-블루 착색 또는 다른 세포 사멸 또는 생존력 마커를 사용함으로서 평가될 수 있다. 분화는 예를 들면 형태학에서의 변화에 기초하여 시각적으로 평가될 수 있다.

또한 본 발명이 속하는 기술분야에 알려져 있거나 본 명세서에서 언급된 다양한 분석을 사용하여 벤조피라논 화합물이 인 비트로 및 인 비보 신경교종(glioma) 종양 세포증식, 세포형질전환 및 종양발생을 억제하는 것이 설명되어질 수 있다. 그러한 활성은 벤조피라논 화합물을 신경교종 종양 세포과 접촉시킴으로써 인 비트로 분석으로 설명되어질 수 있다(Haroun, R. I. et al., J. Neurooncol. 58: 115-23 (2002); Sharma A. et al., J. Mol. Neurosci. 17: 331-9(2001); Iwadate Y. et al., Int.J. Mol. Med. 10:187-92 (2002))

본 발명은 본 발명이 속하는 기술분야에서 알려진 다양한 기술에 의해 세포주기와 세포증식 분석에 대해 제공하는데, 다음의 실시예들을 포함하되 이에 한정되지는 않는다:

하나의 실시예로서, 브로모디옥시우리딘(bromodeoxyuridine(BRDU)) 포함(incorporation)은 증식하는 세포들을 확인하기 위한 분석으로서 사용될 수 있다. BRDU 분석은 새롭게 합성된 DNA내에 BRDU 포함에 의해 DNA 합성을 진행하는 세포 군을 확인한다. 그러면, 새롭게 합성된 DNA는 항-BRDU 항체를 사용함으로써 검출될 수 있다(Hoshino et al, Int. J. Cancer 38:369(1986); Campana et al, J. Immunol. Meth. 107:79 (1988) 참조).

세포 증식은 또한 (³H)-티미딘 포함을 사용함으로써 조사될 수 있다(예를 들면, Chen, J., Oncogene 13:1395-403(1996); Jeoung, J., J. Biol. Chem. 270: 18367- 73(1995) 참조). 이 분석은 S-상(S-phase) DNA 합성의 정량적 특성화를 가능케한다. 이 분석에서 DNA를 합성하는 세포는 새로 합성된 DNA 내에 (³H)-티미딘을 포함할 것이다. 포함은 신틸레이션 계수기(예를 들면, Beckman LS 3800 Liquid Scintillation Counter)에서 방사성 동위 원소의 계수에 의해서와 같이 본 발명이 속하는 기술분야의 표준 기술에 의해 측정될 수 있다.

증식하는 세포 핵 항원(PCNA)의 검출은 또한 세포 증식을 측정하는데 사용될 수 있다. PCNA는 증식하는 세포(proliferating cell) 내에서, 특히 세포주기의 초기 G1과 S 상인 증식하는 세포에서 발현이 상승되는 36 킬로달톤의 단백질이고, 따라서 증식하는 세포에 대한 마커로서 역할을 할 수 있다. 양성 세포들은 항-PCNA 항체를 사용하여 면역염색 함으로써 확인된다(Li et al, Curr. Biol. 6:189-199(1996); Vassilev et al., J. Cell Sci. 108: 1205-15(1995) 참조).

세포 증식은 세포증식 시간에 따른 세포 군의 샘플을 계수(예를 들면, 매일 세포를 계수)함으로써 측정될 수 있다. 세포들은 혈구계(hemacytometer)와 광현미경(예를 들면, HyLite hemacytometer, Hausser Scientific)을 사용하여 계수될 수 있다. 세포 수는 관심있는 군의 성장 곡선을 얻기 위해서 시간에 대해 플럿될 수 있다. 바람직한 실시예에서, 이러한 방법에 의해 계수된 세포는 먼저 트리판-블루(Trypan-blue)(Sigma) 염색제와 혼합되고, 살아 있는 세포는 상기 염색제를 배제하며, 그 군의 생존 구성원으로서 계수된다.

세포들의 DNA 함량 및/또는 유사분열지수는, 예를 들면, 세포의 DNA 배수성 값에 근거하여 측정될 수 있다. 예를 들면, 세포 주기의 G1 상 내 세포들은 일반적으로 2N DNA 배수성 값을 포함한다. DNA가 복제되지만 유사분열(예를 들면, S 상 내 세포들)을 통해 진행되지 않는 세포들은 2N 보다 높고 4N DNA 함량까지의 배수성 값을 나타낼 것이다. 또한, 배수성 값과 세포-주기 동력학(kinetics)은 프로피듐 아이오다이드(propidum iodide) 분석을 사용하여 측정될 수 있다(예를 들면, Turner, T., et al, Prostate 34:175-81(1998) 참조). 대안적으로, DNA 배수성은 컴퓨터화된 마이크로덴시토메트리스테이닝(microdensitometrystaining) 시스템에서 DNA 포일겐 염색 (Feulgen staining)(DNA에 화학량론적인 방법으로 결합)의 정량화함으로써 결정될 수 있다(예를 들면, Bacus, S., 1989, Am. J. Pathol.135 :783-92). 다른 실시예에서, DNA 함량은 염색체 확산의 제조에 의해 분석될 수 있다(Zabalou, S., Hereditas 120:127-40(1994); Pardue, Meth. Cell Biol. 44:333- 351(1994)).

세포-주기 단백질(예를 들면, CycA. CycB, CycE, CycD, cdc2, Cdk4/6, Rb, p21, p27 등)의 발현은 세포 또는 세포 군의 증식 상태와 관계있는 중요한 정보를 제공한다. 예를 들면, 항-증식 신호전달경로에서 식별은 p21^cip1의 유도에 의해 나타내어질 수 있다. 세포에서 p21 발현의 증가된 레벨은 세포 주기의 G1 내 지연된 진입이 결과로서 생긴다(Harper et al., Cell 75:805-816(1993);Li et al.,Curr. Biol. 6: 189-199(1996)). p21 유도는 상업적으로 이용 가능한 특정 항-p21 항체(예를 들면, Santa Cruz 주식회사)을 사용하여 면역염색함으로써 확인될 수 있다. 마찬가지로, 세포-주기 단백질은 상업적으로 이용 가능한 항체를 사용하여 웨스턴 블럿 분석에 의해 조사될 수 있다. 다른 실시예에서, 세포 군은 세포주기 단백질의 검출 전에 동기화된다. 세포-주기 단백질은 또한 관심있는 단백질에 대한 항체를 사용하여 FACS(fluorescence-activated cell sorter)분석에 의해 검출될 수 있다.

세포 주기의 길이 또는 세포주기의 속도에서의 변화의 검출은 벤조피라논 화합물에 의해 세포증식 억제를 측정하는데 사용될 수 있다. 일 실시예에서, 세포 주기 길이는 세포군의 배가 시간에 의해 결정된다(예를 들면 하나 이상의 본 발명의 벤조피라논 화합물과 접촉되거나 접촉되지 않은 세포를 사용하여). 다른 실시예에서, FACS 분석은 세포 주기 과정의 상을 분석하거나 Gl, S, 및 G2/M 분획을 정제하기 위해 사용된다(Delia, D. et al, Oncogene 14: 2137-47(1997)).

세포 주기 체크포인트의 경과, 및/또는 세포주기 체크포인트의 유도는 본 명세서에 기술된 방법들에 의해 또는 본 발명이 속하는 기술분야에서 알려진 어떠한 방법에 의해 조사될 수 있다. 제한없이, 세포-주기 체크포인트는 특정한 세포적 사건이 특정한 순서로 발생한다는 것을 보증하는 메커니즘이다. 체크포인트 유전자들은 초기 사건의 선 완결되지 않고 후기 사건이 발생하는 것을 가능케하는 돌연변이로 정의된다(Weinert, T. , 및 Hartwell, L. , Genetics, 134: 63-80(1993)). 세포 주기 체크포인트 유전자의 유도 또는 억제는 예를 들면, 웨스턴 블럿 분석에 의해 또는 면역염색에 의해 분석될 수 있다. 또한 세포-주기 체크포인트의 경과는 특정 사건들의 선 발생없이 체크포인트를 통한 세포의 진행에 의해 평가될 수 있다(예를 들면, 유전자 DNA의 완전한 복제없이 유사분열로 진행).

특정한 세포-주기 단백질의 발현의 효과뿐 아니라, 세포-주기에 포함된 단백질의 활성과 번역-후 변형(post-translational modifications)은 세포의 조절과 증식상태에서의 중요한 역할을 할 수 있다. 본 발명은 본 발명이 속하는 기술분야에 알려진 어떠한 방법에 의해 검출된 번역-후 변형(post-translational modifications)(예를 들면, 인산화)가 포함된 분석을 제공한다. 예를 들면, 인산화된 티로신 잔기를 검출하는 항체는 상업적으로 이용가능하고, 그러한 변형을 갖는 단백질을 검출하기 위한 웨스턴 블럿 분석에 사용될 수 있다. 다른 실시 예에서, 미리스틸레이션(myristylation)과 같은 변형은 박막 크로마토그래피 또는 역상 h.p.l.c 상에서 검출될 수 있다(Glover, C. , Biochem. J. 250: 485-91(1988); Paige, L. , Biochem J. 250: 485-91(1988)).

신호 및 세포 주기 단백질 및/또는 단백질 복합체의 활성은 키나아제 활성에 의해 종종 매개된다. 본 발명은 히스톤 H1 분석과 같은 분석에 의해 키나아제 활성의 분석을 제공한다(예를 들면, Delia, D. et al, Oncogene 14: 2137- 47(1997)).

또한, 본 발명이 속하는 기술분야에서 잘 알려진 방법들을 사용하여 벤조피라논 화합물이 인 비트로 배양된 세포에서 세포증식을 변경하는 것이 설명되어질 수 있다. 제1차 뇌암 및 뇌 전이에 대한 세포 배양 모델의 특정 예들은 다음의 미국 특허에서 찾아질 수 있는 것들을 포함하되 이에 한정되는 것은 아니다:6,194,158호; 6,051,376호; 6,071,696호.

또한, 벤조피라논 화합물이 인 비트로 세포 전환(transformation) (또는 악성 표현형으로 진행)을 억제하는 것이 설명되어질 수 있다. 이 실시예에서, 전환된 세포 표현형을 갖는 세포는 하나 이상의 벤조피라논 화합물과 접촉되고, 전환된 표현형과 연관된 특징에서의 변화에 대해 조사되는데(인 비보 발암성 능력과 연관된 일련의 인 비트로 특징들)이 관찰되는데, 예를 들면, 소프트 아가에서 콜로니 형성, 보다 둥근 세포 형태, 더 느슨한 기저(substratum) 흡착, 접촉 억제의 손실, 고정 의존의 손실, 플라스미노겐(plasminogen)활성화제와 같은 프로테아제의 분비, 증가된 당 수송, 감소된 혈청 요구량, 또는 태아 항원의 발현 등이 있는데 이에 한정되지는 않는다(Luria et al, 1978, General Virology, 3d Ed., John Wiley & Sons, New York, pp. 436-446).

또한 침습성의 손실 또는 감소된 부착은 벤조피라논 화합물의 항암 효과를 설명하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 전이암의 형성에 중대한 측면은 질병의 제1차 부위로부터 떨어져서 제2차 부위에 새로운 콜로니의 성장을 성립시키는 전암 또는 암세포의 능력이다. 말초 부위를 침범하는 세포의 능력은 암의 상태에 대한 가능성을 반영한다. 침습성의 손실은, 예를 들면, E-카드헤린-매개 세포-세포 부착(E-cadherin-mediated cell-cell adhesion)의 유도를 포함하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 알려진 다양한 기술에 의해 측정된다. 이러한 E-카드헤린-매개 세포-세포 부착은 표현형 복귀와 침습성의 손실의 결과를 초래할 수 있다(Hordijk et al, Science 278: 1464-66(1997)).

침습성의 손실은 세포 이동의 억제에 의해 더 조사될 수 있다. 다양한 2차원 및 3차원 세포 메트릭스는 상업적으로 이용가능하다(Calbiochem-Novabiochem Corp. San Diego, CA). 메트릭스를 가로질러 또는 메트릭스 내로의 세포 이동은 현미경, 시간-경과된 사진술 또는 비디오그래피에 의해, 또는 세포 이동의 측정을 가능케하는 본 발명이 속하는 기술분야에서의 어떠한 방법에 의해 조사될 수 있다. 관계된 일 실시예에서, 침습성의 손실은 간세포 성장인자(HGF)에 반응에 의해 조사된다. HGF-유도된 세포 산란은 Madin-Darby 캐닌 신장(MDCK)세포와 같은 세포의 침습과 관련있다. 이 분석은 HGF에 반응하는 세포 분산 활성을 잃은 세포군을 식별한다(Hordijk et al, Science 278: 1464-66(1997)).

대안적으로, 침습성의 손실은 화학주성 챔버를 통한 세포 이동에 의해 측정될 수 있다(Neuroprobe/Precision Biochemicals Inc. Vancouver, BC). 이러한 분석에서, 화학-친화성 물질은 챔버의 한쪽 부분에 배양되고(예를 들면, 바닥 챔버(bottom chamber)), 세포들은 반대편을 분리하는 필터 상에 평판배양 된다(예를 들면 탑 챔버(top chamber)). 세포들이 탑 챔버로부터 바닥 챔버까지 통과하기 위하여, 세포들은 필터에 있는 작은 구멍을 통해 활동적으로 이동해야 한다. 이 때 이동한 많은 세포 수의 바둑판식 분석은 침습성과 연관될 수 있다(예를 들면,Ohnishi, T., Biochem. Biophys. Res. Commun.193 : 518-25(1993)참조).

또한 벤조피라논 화합물이 인비보 종양 형성을 억제하는 것이 설명될 수 있다. 종양 발생과 전이 확장을 포함한 과증식 장애의 동물 모델의 많은 수가 본 발명이 속하는 기술분야에 잘 알려져 있다.(Table 317-1, Chapter 317,"Principals of Neoplasia," in Harrison's Principals of Internal Medicine,13th Edition, Isselbacher et al, eds. , McGraw-Hill, New York, p. 1814, 및 Lovejoy et al, 1997, J. Pathol. 181: 130-135). 제1차 뇌암 및 뇌 전이에 대한 특정 예들은 다음의 미국특허에서 찾아질 수 있다:5,894,018호; 6,028,174호 및 6,203,787호. 이들은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 또한, 많은 종류의 암에 적용될 수 있는 일반적인 동물 모델들이 기술되었는데, p53-결핍 마우스 모델 (Donehower, 1996, Semin. Cancer Biol. 7: 269-278), 민 마우스(Min mouse) (Shoemaker et al. , Biochem. Biophys. Acta, 1332: F25-F48 (1997)), 및 쥐에서 암에 대한 면역반응(Frey, Methods, 12: 173-188 (1997))을 포함하되 이에 한정되지는 않는다.

예를 들면, 벤조피라논 화합물은 시험용 동물, 바람직하게는 종양을 진행하기 쉽게 된 시험용 동물에 투여될 수 있고, 이어서 상기 실험 동물은 벤조피라논 화합물을 투여하지 않은 대조군과 비교하여 종양형성의 감소된 발생수에 대해 조사한다. 대안적으로 벤조피라논 화합물은 종양을 가진 시험용 동물(예를 들면, 악성, 신생 또는 변형된 세포의 도입에 의해 또는 발암 물질의 투여에 의해 유도된 종양을 가진 동물)에 투여될 수 있고, 이어서 벤조피라논 화합물을 투여하지 않은 대조동물과 비교하여 종양 퇴화에 대한 시험용 동물을 조사한다.

다음의 예시적인 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것으로 본 명세서에서 기술되고 청구된 발명을 제한하는 것은 아니다.

다음의 실시예들은 본 발명의 비-제한적인 일면이다.

5. 실시예

실시예 1 및 2는 예시적인 벤조피라논 화합물의 합성에 관한 것이다.

실시예 1

3-(4-클로로-페닐)-7-플루오로-4-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)- 벤질]-크로멘-2-온

DMF (100 mL) 내 4-클로로페닐아세트산(11.05 g, 64.8 mmol) 용액은 약 15분이상 여러 부분으로 CDI (13.13 g, 81 mmol)로 처리되었고, 이 혼합물은 가스 발생이 멈출 때 까지 교반되었다. 4-플루오로-2-하이드록시아세토페논 (5.0 g, 32.4 mmol)이 추가된 다음 포타슘 카보네이트(15.7 g, 113.6 mmol) 및 4- DMAP (약 1 g)이 추가되었다. 이 반응 혼합물은 약 80 ℃에서 약 10시간 동안 데위진 다음 상온으로 냉각되었다. 물(200 mL)이 첨가되었고, 수용액 층이 에틸 아세테이트로 추출되었다. 합쳐진 유기층은 농축되었고, 조(crude) 결과물은 플래시 크로마토그래피(에틸 아세테이트/헥산)에 의해 정제되어 벤조피라논 중간체 약 3.5 g (38%)의 수율을 얻었다.

CCl₄ (20 mL) 내 상기 벤조피라논 중간체(1.85 g, 6.8 mmol) 용액은 NBS (1.33 g, 7.5 mmol) 및 AIBN (0.09 g, 0.5 mmol)로 처리되고, 혼합물은 약 15시간 동안 환류로 가열되었다. 반응 혼합물은 농축되었고, 조(crude) 결과물은 플래시 크로마토그래피(에틸 아세테이트/헥산)로 정제되어 브로모메틸-벤조피라논 약 2.6 g (92%)을 얻었다.

THF (30 mL) 내 브로모메틸-벤조피라논 (1.0 g, 2.72 mmol) 및 4- 하이드록시페닐붕소산 (0.56 g, 4.1 mmol) 용액은 2 M 소디움 카보네이트(5 mL) 및 (1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센)-디클로로팔라듐(II) 디클로로메탄 복합체 (0.1 g, 0.14 mmol)로 처리되었다. 이 반응 혼합물은 환류로 약 6시간 동안 가열된 다음 상온으로 냉각되었다. 조(crude) 결과물은 플래시 크로마토그래피(에틸 아세테이트/헥산)로 정제되어 페놀벤조피라논 약 0.30 g (30%)을 얻었다.

THF/CH₂Cl₂ (1:1, 8 mL) 내 페놀벤조피라논 (0.28 g, 0.74 mmol), 트리페닐포스핀 (0.28g, 1.1 mmol), 및 1-(2-하이드록시에틸) 피롤리딘 (0.13 g, 1.1 mmol) 용액은 DIAD (0.22 g, 1.1 mmol)로 처리되었고, 이 반응 혼합물은 상온에서 6시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 농축되었고, 조(crude) 결과물은 플래시 크로마토그래피(메틸렌 클로라이드/메탄올)로 정제되어 13-(4-클로로페닐)-7-플루오로-4- [4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-벤질]-크로멘-2-온 약 35 mg (10%)을 얻었다.

실시예 2

7-치환된 3-(4-클로로페닐)-4-[4-(2-피롤리딘-1-일-에톡시)-벤질]-크로멘-2-온 유사체들

N₂ 분위기 하에서 상기 정의된 R₁으로 그것의 3-위치에 치환된 페놀 및 4-하이드록시페닐아세트산 (1.2 당량)이 클로로벤젠에 현탁된다. 보론 트리플루오라이드 디에틸 이터레이트(Boron trifluoride diethyl etherate) (3당량)은 약 20 내지 25℃에서 약 5분동안 첨가된다. 이 현탁액은 약 80℃로 가열되고 약 4 - 5시간동안 교반된 다음 하룻밤 냉각되도록 방치된다.

침전된 고체는 N₂-압으로 걸러지고, 여과액은 찬 물(약 0 내지 5 ℃)에 부어짐으로써 직접적으로 식혀진다(quenched)(약간 발열성). 결과로서 생성된 필터 케이크는 CH₂Cl₂로 세척된다. 포화 소디움 카보네이트 수용액은 약 10 내지 약 15분 내에 상기 여과액에 첨가되고, 거품형성이 관찰된다. 결과로서 생성된 고체는 약 20℃에서 하룻밤 교반된다. 이 현탁액은 여과되고, H₂0 및 MTBE (3X)로 세척되고, N₂-압 하에서 하룻밤 건조된다. 결과로서 생성된 결과물은 진공에서 약 40℃에 건조되어 일정량 얻는다.

4-클로로페닐아세트산(2 당량)은 DMF 내에 용해되고, 약 18℃에서 교반된다. 이 투명한 녹색/황색 용액에 CDI (2 당량)이 약 15분 내로 천천히 첨가된다. CDI 첨가 중 기체 발생(CO₂)이 관찰된다. 이 혼합물은 약 55℃로 가열되고, 이 온도에서 약 25분간 교반되고, 약 10℃로 냉각된다. K₂CO₃ (2 당량), DMAP (0.2 당량), 및 직전 단락의 결과물이 이 황색/갈색 현탁액에 첨가되고, 이 현탁액은 94 내지 96℃로 데워지며, 약 1시간 동안 교반된다.

상기 K₂CO₃는 걸러지고 DMF로 세척된다. 여과액은 격렬하게 교반하면서 차가운 H2O로 부어지고 혼합물은 별도의 약 1 내지 2시간 동안 교반된다. 현탁액은 약 0 내지 약 5℃로 냉각되고 고체는 여과된다. 필터 케이크는 MTBE와 1.5 M HCl 사이에 분배된다. 물층은 MTBE로 추출된다. 합쳐진 유기층은 포화 NaHC0₃ 수용액으로 세척된다. 유기상은 약 1.5 내지 1.7 M 용액(0.6 내지 0.65 L/mol)으로 농축되고 EtOAc로 희석된다. 결과로서 생성된 현탁액은 약 55℃로 가열되고 약 15분간 교반되며, 약 0℃에서 3 내지 4시간 이상 냉각된다. 결과로서 생성된 결과물은 여괴되고 차가운 MTBE/EtOAc 5:1 (약 -20 내지 -25 ℃)로 세척되며, N₂ 흐름 하에서 하룻밤 건조된다.

THF/CH₂Cl₂ 내 직전 단락의 결과물(1 당량), 트리페닐포스핀 (2 당량), 및 1- (2-하이드록시에틸) 피롤리딘 (3 당량) 용액은 DIAD (1.8 당량)으로 처리되고, 반응 혼합물은 상온에서 6시간 동안 교반된다. 용매는 제거되고, 조 결과물은 플래시 크로마토그래피에 의해 정제되어 7-치환된 3-(4-클로로페닐)-4-[4-(2-피페리딘-1-일-에톡시)-벤질]-크로멘-2-온 화합물을 얻는다.

본 발명은 본 발명의 일부 측면을 예시하도록 의도된 실시예에서 개시된 특정 실시예에 의하여 그 범위가 제한되지 않고, 기능적으로 균등한 어떠한 실시예들도 본 발명의 범위 내이다. 정말로 본 명세서에서 보여지고 설명된 것들에 더하여 본 발명의 다양한 변형은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명백하고 첨부되는 청구항 이내이도록 의도된다.

많은 인용문헌이 언급되었으며, 그러한 문헌의 전체 개시내용은 인용에 의하여 그 전체가 본 명세서에 포함된다.

Claims (39)

1. R₁은 할로겐, 트리후로우로메틸 또는 C_1-6 알킬인 하기 화학식의 화합물 또는 그것의 약학적으로 수용가능한 염.
2. 제1항에 있어서, 상기 R₁은 할로겐인 것을 특징으로 하는 화합물.
3. 제2항에 있어서, 상기 할로겐은 불소인 것을 특징으로 하는 화합물.
4. 제1항에 있어서, 상기 R₁은 C_1-6 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
5. 제4항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 메틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
6. 제4항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 에틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
7. 제4항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 n-프로필인 것을 특징으로 하는 화합물.
8. 제4항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 이소프로필인 것을 특징으로 하는 화합물.
9. 제4항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 t-부틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
10. 제1항에 있어서, 상기 R₁은 트리후로우로메틸인 것을 특징으로 하는 화합물.
11. 제1항의 화합물 또는 그것의 약학적으로 수용가능한 염 및 약학적으로 수용가능한 담체 또는 베히클을 포함하는 약학 조성물.
12. R₁은 할로겐, 트리후로우로메틸 또는 C_1-6 알킬인 유효량의 하기 화학식의 화합물 또는 그것의 약학적으로 수용가능한 염을 그것이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는 환자에서 종양을 치료 또는 예방하는 방법.
13. 제12항에 있어서, 상기 R₁은 할로겐인 것을 특징으로 하는 방법.
14. 제13항에 있어서, 상기 할로겐은 불소인 것을 특징으로 하는 방법.
15. 제12항에 있어서, 상기 R₁은 C_1-6 알킬인 것을 특징으로 하는 방법.
16. 제15항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 메틸인 것을 특징으로 하는 방법.
17. 제15항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 에틸인 것을 특징으로 하는 방법.
18. 제15항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 n-프로필인 것을 특징으로 하는 방법.
19. 제15항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 이소프로필인 것을 특징으로 하는 방법.
20. 제15항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 t-부틸인 것을 특징으로 하는 방법.
21. 제12항에 있어서, 상기 R₁은 트리후로우로메틸인 것을 특징으로 하는 방법.
22. 제12항에 있어서, 상기 종양은 일차 뇌종양인 것을 특징으로 하는 방법.
23. 제12항에 있어서, 상기 종양은 머리, 목, 눈, 입, 목구멍, 식도, 가슴, 뼈, 허파, 대장, 결장, 위, 전립선, 가슴, 난소, 고환 또는 다른 생식기관, 피부, 갑상선, 혈액, 림파구, 신장, 간, 췌장, 뇌 또는 중추신경계의 종양인 것을 특징으로 하는 방법.
24. 제12항에 있어서, 상기 종양은 일차 두개내(intracranial) 중추 신경계 종양인 것을 특징으로 하는 방법.
25. 제24항에 있어서, 상기 일차 두개내(intracranial) 중추 신경계 종양은 다형성 교종, 악성 성상세포종(astrocytoma), 핍지교종, 상의세포종, 양성성상세포종, 뇌수막종, 간엽 종양, 뇌하수체 종양, 쉬반노마(schwannoma)와 같은 신경초종, 중추신경계 림포마, 수모세포종, 원시 신경외배엽 종양, 뉴런 및 뉴런/신경교세포(glial) 종양, 두개인두종, 배세포 종양 또는 맥락총 종양인 것을 특징으로 하는 방법.
26. 제12항에 있어서, 상기 종양은 일차 척수(spinal) 종양인 것을 특징으로 하는 방법.
27. 제26항에 있어서, 상기 일차 척수(spinal) 종양은 쉬반노마(schwannoma), 뇌수막종, 상의세포종, 육종, 성상세포종, 신경아교종, 혈관종양, 척삭종 또는 표피양낭인 것을 특징으로 하는 방법.
28. 제12항에 있어서, 상기 종양은 전이되는 것을 특징으로 하는 방법.
29. 제28항에 있어서, 상기 전이된 종양은 허파(작은 세포 또는 비작은 세포), 가슴, 비공지된 일차 종양, 흑색종 또는 대장으로부터 기원한 것을 특징으로 하는 방법.
30. R₁은 할로겐, 트리후로우로메틸 또는 C_1-6 알킬인 유효량의 하기 화학식의 화합물 또는 그것의 약학적으로 수용가능한 염을 암 세포 또는 종양 세포와 접촉하는 것을 포함하는 암 세포 또는 종양 세포의 성장을 저해하는 방법.
31. 제30항에 있어서, 상기 R₁은 할로겐인 것을 특징으로 하는 방법.
32. 제31항에 있어서, 상기 할로겐은 불소인 것을 특징으로 하는 방법.
33. 제30항에 있어서, 상기 R₁은 C_1-6 알킬인 것을 특징으로 하는 방법.
34. 제33항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 메틸인 것을 특징으로 하는 방법.
35. 제33항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 에틸인 것을 특징으로 하는 방법.
36. 제33항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 n-프로필인 것을 특징으로 하는 방법.
37. 제33항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 이소프로필인 것을 특징으로 하는 방법.
38. 제33항에 있어서, 상기 C_1-6 알킬은 t-부틸인 것을 특징으로 하는 방법.
39. 제30항에 있어서, 상기 R₁은 트리후로우로메틸인 것을 특징으로 하는 방법.