KR20050047473A

KR20050047473A - 감압에서 스팀을 사용하여 감온 거대망상 중합체로 부터포로겐을 제거하는 방법

Info

Publication number: KR20050047473A
Application number: KR1020040092950A
Authority: KR
Inventors: 로젠바움브루스
Original assignee: 롬 앤드 하스 캄파니
Priority date: 2003-11-17
Filing date: 2004-11-15
Publication date: 2005-05-20
Also published as: BRPI0404806A; CN1626566A; EP1531168A1; US20050107581A1; CA2486752A1; JP2005146249A; TW200523278A

Abstract

본 발명은 진공하에서 중합체로 부터 포로겐을 스팀 스트리핑하는 단계를 포함하는 수지의 개선된 제조방법에 관한 것이다. 임의로, 상기 방법은 공정조제를 제거하기 위해 희석하는 단계 및 포로겐이 제거되도록 감압 스팀 스트리핑하는 단계를 포함한다. 본 발명에 의해 흡착성 수지 및 동물 유래된 산물이 없는 흡착성 수지가 제조된다. 다른 견지에서, 본 발명에 의하면 개선된 방법으로 제조된 수지 및 생성물 제조에 사용되는 제조공정에서 수지를 사용하여 제조된 다운스트림 생성물이 제공된다. 다운 스트림 생성물은 약제 혹은 이의 전구체이며, 임의로 세파로스포린 C 및 인슐린이다.

Description

감압에서 스팀을 사용하여 감온 거대망상 중합체로 부터 포로겐을 제거하는 방법{Process for the Removal of Porogens from Temperature Sensitive Macroreticular Polymers Using Steam at Reduced Pressure}

본 발명은 감압에서 감온성 혹은 온도에 안정한 거대망상 중합체로 부터 포로겐을 제거하는 방법 및 포로겐을 제거하기 위한 시스템에 관한 것이다. 또한, 상기 개선된 방법으로 제조된 수지 및 이로써 한정하는 것은 아니나, 다양한 제약공정단계에서 상기 수지를 사용하여 제조된 약제를 포함하는 다운스트림 생성물에 관한 것이다.

다양한 거대망상 수지가 제약 약품 공정에 사용된다. 이들 거대망상 수지는 약품공정적용에 수지를 사용하기 전의 제조도중에 수지에서 제거된 포로겐(porogen)을 갖는다. 거대망상 중합체에서 포로겐을 제거하는 현재의 방법은 중합완료 후, 수성 반응혼합물에서 중합체를 증류한 다음, 용매로 세척하거나 혹은 탈수된 중합체를 용매로 세척하는 것이다. 현재의 방법은 몇몇 결점을 갖는다. 결점중 하나는 수지에서 포로겐을 제거하도록 수지를 세척하기 위해 메탄올과 같은 용매를 다량 사용하여야하는 것이다. 이는 용매구입 그리고 그 후, 용매의 처분 및/또는 재생 모두로 인하여 수지제조공정에 현저한 비용이 수반된다. 다른 결점으로는 반응기에서 포로겐의 증류(<5%); 메탄올 세척에 의한 잔류 포로겐의 제거(<600ppm); 포로겐을 제거하기 위한 다량의 메탄올의 사용(폐기= 3.5kg 메탄올/수지 1 kg); 제한된 포로겐 회수/재순환(포로겐 폐기=0.25kg 포로겐 폐기물/수지 1 kg);및 최종 산물에 바람직하지 않은 동물 바이러스 혹은 다른 미생물을 도입할 수 있는 동물에서 유래된 성분(겔라틴)의 사용을 포함한다.

포로겐을 제거하기 위해 스팀 스트리핑을 사용하려는 종래의 시도는 대기압 혹은 이 보다 높은 기압에서 포화 스팀 혹은 과열된 스팀을 사용하여야 함으로 실패하였다. 그 결과, 스팀의 온도가 중합체가 연화(soften) 혹은 변형되는 온도를 초과하게되며, 이에 따라 물질의 표면이 손상되고 다공성이 감소된다. 이들 손상된 표면 및 다공성의 손실로 인하여 수지는 의도하는 목적에 적합하지 않게 되거나, 및/또는 성능특성이 현저하게 감소된다. 본 발명의 방법은 원하는 중합체의 연화점(softening point) 혹은 수지의 중합온도보다 낮은 공정조건을 사용하여 상기 문제를 제거한다.

본 발명은 거대망상 수지비드를 제조하는 개선된 방법을 제공하는 것이다. 이들 개선은 진공하에서 수지비드로 부터 포로겐을 스팀 스트리핑하는 단계 및 스팀 스트리핑 공정전에 수지비드를 포함하는 모액으로 부터 공정조제를 제거하기 위해 임의로 희석(일련으로(serially) 혹은 연속하여(continuously))하는 단계를 포함한다. 본 발명에 의해 제거되는 다양한 공정조제는 예를들어, 소우프(soaps), 염 및 분산제를 포함한다. 상기 방법은 진공을 사용하여 중합온도보다 낮은 온도로 유지하는 것을 포함한다.

나아가, 본 명세서에 기술된 수지를 사용하여 제조된 다운스트림 생성물이 또한 제공되는 것으로 이해된다. 다운스트림 생성물로는 예를들어, 약제 혹은 이들의 전구체를 포함한다. 예시적인 약제로는 셀파로스포린 C가 예인 락탐 항생제; 인슐린이 예인 항-고혈당제(anti-hyperglycemia drugs); 반코마이신이 예인 아미노글리코사이드; 및 비타민 B12 및 이들의 유도체를 포함한다. 포로겐 및 다른 물질이 효과적으로 제거되어 다운 스트림 생성물 공정을 저해할 수 있거나 혹은 수지를 사용하기 전에 약제 제조자에 의한 부가적인 세척단계를 필요로하는 잔류 메탄올 혹은 다른 용매가 없는 보다 깨끗한 수지가 남게된다.

중합 흡착제 수지가 포착(caputre)/방출(release) 및 발효 배지 스트림의 정제공정에 또한 사용될 수 있다. 상기 공정은 세포 수확(cell harvest)단계 및 그 후의 한외여과(ultrafiltration)를 포함할 수 있다. 그 후, 상기 스트림은 중합 흡착제 수지로 더욱 정제 혹은 깨끗하게된다. 발효 배지를 깨끗하게한 후, 목적 분자를 포착하기 위해 수지의 고정상 혹은 수지의 모의 이동상에서 중합 흡착제 수지에 통과시킨다. 그 후, 흡착제, 예를들어, 목적 분자는 수성 버퍼, 유기 용매 혹은 이들의 배합을 사용하여 흡착 수지로 부터 선택적으로 용리(elute)된다. 상기 목적 분자는 60-70%의 출발순도로 부터 >85-99%의 목적순도로 전형적으로 정제된다. 다른 경우에, 중합 흡착제 수지는 발효배지를 기초로 하지 않는 약제 스트림의 후속적인 정제에 사용된다. 이러한 경우에, 예를들어, 반-합성 항생물질이 상기한 바와 같이 정제된다.

본 발명의 예지치못한 부가적인 발견은 상기한 방식으로 포로겐이 제거된 후, 상기 중합체는 건조되고 흐름이 자유(free-flowing)롭다는 것이다. 이는 그 후, 건조 중합체가 원하는 입자크기 범위로 후속적으로 공기에 의해 운반될 수 있다는 점에서 매우 이로운 것이다. 상기 본 발명을 사용함으로써 젖은, 흐름이 자유롭지 못한 중합체를 건조시킨 다음 건조 중합체에 다른 공정 단계를 행하여야 하는 장시간이 요구되며, 에너지 집약적인 공정단계가 제거된다. 본 발명의 모노-분산된 수지는 다양한 적용처에 사용되는 경우 저하된 압력감소를 포함하는 부가적인 제조상의 잇점을 또한 제공한다.

본 명세서에 기재된 방법을 사용함으로써 폐수처리설비에서 유출물을 생물학적으로 처리할 필요가 없다. 이로 인하여 연간 수 많은 달러의 실질적인 비용이 절감될 수 있다. 통상의 방법은 제조 배치마다 몇 만 킬로그램의 폐 MeOH 혹은 다른 포로겐을 배출한다. 이들 물질은 그 후, 고가의 폐기처분을 필요로 한다. 본 발명을 사용하므로써 각 배치마다 폐수처리 설비에 대한 폐 MeOH 혹은 다른 포로겐 용매가 제로("0")로 된다. 상기 결과는 친환경적인 공정이다.

중합체로 부터 포로겐을 스팀 스트리핑하기 전에, 중합체 비드는 비드 슬러리를 하부 스크린이 장착된 스트립 컬럼에 운반하여 반응 슬러리로 부터 중합체 비드를 분리하며, 이와 동시에 희석수가 운반 파이프에 첨가된다. 상기 인-라인(in-line) 희석단계는 반응 슬러리를 효과적으로 희석하며 용액의 점도가 감소되어 슬러리에서 액체가 보다 쉽게 배출되도록 한다.

본 발명은 희석수를 반응 슬러리에 배치방식으로 첨가하여 중합체가 표면에 부유되도록 한 다음, 희석된 반응모액이 비드 수준으로 감소되도록 배출시키는 현재 실시되는 방법과 다르다. 현재의 기술은 비드에서 액체가 배출될 수 있도록 원하는 액체 비드 계면(interface)을 얻기 위해 비드가 전형적으로 12시간을 필요로함으로 많은 시간이 소요되는 문제가 있다. 더욱이, 본 발명을 사용함으로써 상기 모액 희석 단계에 대한 24시간 이상의 순환시간이 단지 약 5시간의 순환시간으로 단축된다. 스팀 스트리핑을 사용함으로써 증류 및 용매 세척에 대한 30시간의 순환시간이 단지 약 5시간으로 단축되며 또한, 수지 제조공정에서 아세톤 및/또는 메탄올 세척("용매세척")의 필요가 감소 혹은 제거된다.

상기 결과 에너지 소비가 현저하게 감소되고 또한, 위험한 폐기물의 양이 현저하게 감소된다.

다른 문제는 어떠한 타입의 공정없이 모액이 직접 필터로 이송되면, 필터가 막히게된다는 것이다. 본 발명의 다른 변형에서, 수지비드를 제조하는 개선된 방법은 필터의 막힘없이 수지 비드에서 공정조제가 제거되도록 모액을 희석제로 연속적으로 희석하여 모액에서 공정조제를 제거하는 단계를 포함한다.

생성물 및 반응 혼합물에 따라, 용매 세척 준비시 필터에서 탈수되도록 잔류 슬러리가 충분히 희석되기전에 상기 배치-방식의 희석 단계가 수회 반복될 수 있다. 상기 인-라인 희석의 사용은 공정시간을 현저하게 단축시키며, 생산성이 증대된다. 예를들어, 통상의 공정은 다음 단계를 포함한다: 중합 -> 부유(floatation) -> 여과 -> 건조 -> 체(sieve) -> 재수화(rehydration).

인-라인 희석 단계를 사용함으로써, 부유단계가 제거되어 총단계가 6단계에서 5단계로 감소된다: 중합 -> 여과 -> 건조 -> 체(sieve) -> 재수화(rehydration). 용매("예를들어, 아세톤") 세척단계의 제거 및 스팀 스트리핑에 의한 건조로 인하여 6단계가 다음 하나 또는 그 이상의 4단계의 조합으로 감소된다: 중합 -> 스팀 스트리핑 -> 체(sieve) -> 재수화(rehydration).

본 발명의 부가적인 잇점으로는 향상된 생성물의 품질, 향성된 공정성능, 및 개선된 수율, 예를들어, 흡착제 수지의 개선된 수율을 포함한다.

본 발명은 일 변형으로 스팀을 사용하여 진공하에서 행하여진다. 상기 공정 단계는 본 발명의 일 변형으로, 온도가 100℃보다 낮은 온도로 유지되도록 한다. 이는 온도가 100℃이상인 경우 발생하는 수지비드에 대한 손상을 방지한다. 상기 방지되는 손상으로는 잔류 단량체의 제어되지 않는 후중합 및 연화 및/또는 수지비드의 흡착성을 방해하는 수지 비드에 대한 손상을 포함한다. 본 발명을 사용함으로써 제거되는 다른 문제로는 스팀 적용후 공극(pore)의 붕괴 및 중합체 의한 비드의 결합으로 인한 비드와 비드의 응집에 의한 클럼프(clump)의 형성 혹은 하나의 커다란 바람직하지 않은 비드의 형성이 제거 혹은 실질적으로 감소됨을 포함한다. 코어 붕괴 및 비드 응집 모두는 성능 특성이 저조한 수지생성물이 형성되도록 한다.

진공은 통상의 방법으로 실험적으로 측정된 주어진 중합체의 중합온도보다 높지 않은 작동 온도가 되도록 조절된다. 예를들어, 압력은 60℃의 온도가 유지되도록 약 Hg 150mm의 절대압력일 수 있다. 다른 예로서, 압력은 80℃의 온도가 유지되도록 약 Hg 350mm의 절대압력일 수 있다. 이 기술분야의 기술자는 주어진 중합체의 중합온도보다 높지 않은 온도가 유지되도록 압력을 조절할 수 있으며, 원하는 범위는 실험적으로 얻어질 수 있으며, 예를들어, 50-90℃범위일 수 있다. 공극 붕괴 및/또는 비드 응집이 발생하지 않도록 조작하는 다른 변형이 의도될 수 있는 것으로 이해된다.

실시예 1

입자크기를 조절하기 위해 톨루엔을 포로겐으로 그리고 겔라틴을 분산제로서 사용하여 구형의, 명목상 650미크롱의 조화평균크기를 갖는 거대망상 디비닐 벤젠/에틸 비닐 벤젠 공중합체를 용액중합으로 제조하였다. 수성상은 DI 수 (97.4%), 겔라틴 250A 30(0.3%) 붕산 (0.3%), Padmac A(1.2%), 염화칼슘 (0.7%) 및 수산화나트륨 (0.1%)로 이루어진다. 유기상은 80% 디비닐벤젠(29.9%), Trigonox 21S 촉매(0.3%) 및 톨루엔 (69.8%) 포로겐으로 이루어진다. 수성 대 유기의 비는 1.3이었다. 상기 혼합물을 질소 분위기에서 70℃로 가열하고 12시간동안 유지하였다. 중합후, 상기 혼합물을 대기압에서 가열하고 88℃에서 12시간동안 유지하여 대부분의 톨루엔을 톨루엔/물 공비물로 제거하였다. 증류후 공중합체에 남아있는 톨루엔은 공중합체 건조 중량기준으로 3%였다.

공중합체 및 모액을 80℃ 재킷된 필터 하부 용기로 운반하였으며, 여기서 모액이 배출되도록 하였다. 용기중의 압력은 Hg 380mm의 절대압력으로 감압하였다. Hg 2311 mm의 절대압력에서 포화 스팀을 용기의 상부에 도입하였다. 스팀을 8시간동안 1시간당 1의 베드 볼륨(volume)으로 공급하였다. 용기에서 배출되는 증기 스트림을 응축 및 수집하였다. 유기층이 응축물에서 관찰되었다.

비교예로서, 증류후 공중합체 샘플을 취하고 물, 메탄올 그 후, 물로 다시 순차적으로 세척하였다.

공중합체 샘플을 메탄올 추출/불꽃 이온화 검출기(FID)가 장착된 가스 크로마토그래피(GC)("GC-FID")로 잔류 톨루엔에 대하여 분석하였다. 상기 기술은 공중합체를 메탄올과 혼합하고, 메탄올을 인출하고, 메탄올을 GC에 주입하는 단계로 구성되었다. 얻어진 피크 면적을 표준 톨루엔 용액에서 얻어진 피크 면적과 비교하였다. 부가적으로, 공중합체 샘플을 칭량하고 그 후, 105℃에서 밤새 건조하고 재칭량하여 건조 감량을 측정하였다. 이를 기초로, 1 건조 그램 공중합체당 200ppm 보다 적은 양의 톨루엔이 두 샘플 모두에 존재하는 것으로 측정되었다.

동적 세파로스포린 C 시험은 알려진 농도의 세파로스포린 C를 시험 공중합체가 충진된 컬럼을 통해 고정된 비율로 펌핑하고 유출물에 대한 UV 응답을 시간에 대하여 검출하여 행한다. 1% 누출에서의 시간 및 상응하는 용량은 비드-내 산란 문제(intra-bead diffusion problems)(표면 스킨 혹은 거대망상 구조의 압축(compression) 혹은 손상)와 관련된 문제의 검출에 유용하다. 이들 문제는 프로브 분자가 중합체 구조로 확산되는데 장시간이 소요되는 총 용량을 단지 관찰함으로써 간과될 수 있다.

50cc의 시험 공중합체가 플런저(plunger)를 갖는 재킷된 2.54cm 직경의 유리 컬럼에서 사용하여 프리보드(freeboard)를 최소화하도록 혼합되었다. pH 2.8, 5℃에서 세파로스포린 C 용액 10,000ppm을 1베드 볼륨/hr로 컬럼에 공급하였다. 유출물을 100ppm의 세파로스포린 C가 검출되는 지점으로 정의되는 1% 돌파점(breakthrough)로 연속적으로 분석하였다. 그 후, 1% 동적 용량은 1% 돌파점이 관찰될 때까지 시험 공중합체 체적에 공급된 세파로스포린의 총중량으로 정의하였다.

감압 스팀 스트리핑으로 제거되는 잔류 포로겐을 갖는 공중합체를 동적 세파로스포린 C 업테이크(uptake)에 대하여 시험하였으며, 44g/l의 1% 돌파점 용량을 갖는 것으로 확인되었다. 비교하기 위해, 메탄올 세척으로 제거되는 잔류 포로겐을갖는 공중합체를 동적 세파로스포린 C 업테이크(uptake)에 대하여 시험하였으며, 44g/l의 1% 돌파점 용량을 갖는 것으로 확인되었다.

실시예 2

실시예 1에서와 같이 입자크기를 조절하도록 톨루엔을 포로겐으로 그리고 겔라틴을 분산제로서 사용하여 구형의, 명목상 650미크롱의 조화평균크기를 갖는 거대망상 디비닐 벤젠/에틸 비닐 벤젠 공중합체를 용액중합으로 제조하였다. 중합후에 공중합체에 남아있는 톨루엔은 공중합체 건조 중량을 기준으로 45%였다.

공중합체 및 모액을 80℃ 재킷된 필터 하부 용기로 운반하였으며, 여기서 모액이 배출되도록 하였다. 용기중의 압력을 Hg 380mm 절대압력으로 감압하였다. Hg 2311 mm의 절대압력에서 포화 스팀을 용기의 상부에 도입하였다. 스팀을 5시간동안 1시간당 1의 베드 볼륨(volume)으로 공급하였다. 용기에서 배출되는 증기 스트림을 응축 및 수집하였다. 유기층이 응축물에서 관찰되었다.

비교예로서, 중합후 공중합체 샘플을 취하고 물, 메탄올 그 후, 다시 물로 순차적으로 세척하였다. 공중합체 샘플을 메탄올 추출/불꽃 이온화 검출기(FID)가 장착된 가스 크로마토그래피(GC)("GC-FID")로 잔류 톨루엔에 대하여 분석하였다. 1 건조 그램 공중합체당 200ppm 보다 적은 양의 톨루엔이 두 샘플 모두에 존재하였다.

감압 스팀 스트리핑으로 제거되는 포로겐을 갖는 공중합체를 동적 세파로스포린 C 업테이크(uptake)에 대하여 시험하였으며, 68g/l의 1% 돌파점 용량을 갖는 것으로 확인되었다. 비교하기 위해, 메탄올 세척으로 제거되는 포로겐을 갖는 공중합체를 동적 세파로스포린 C 업테이크에 대하여 시험하였으며 40g/l의 1% 돌파점 용량을 갖는 것으로 관찰되었다.

실시예 3

입자크기를 조절하기 위해 포로겐으로 o-자일렌 및 메틸 이소부틸 카르비놀("MIBC")을 그리고 분산제로 셀룰로스를 사용하여 구형의, 명목상 75미크롱 조화평균크기를 갖는 거대망상 디비닐 벤젠/에틸 비닐 벤젠 공중합체를 용액중합으로 제조하였다. 수성상은 DI 수 (98.9%), 메틸 히드록시 셀룰로스(0.5%), 붕산 (0.4%), 소디움 라우릴 술페이트(0.01%) 및 수산화나트륨 (0.2%)로 이루어진다. 유기상은 80% 디비닐벤젠(35.4%), 벤조일 퍼옥사이드 촉매(0.7%) 및 o-자일렌(29.0%) 및 메틸 이소부틸 카르비놀(34.9%) 포로겐으로 이루어진다. 수성 대 유기의 비는 1.3이었다. 상기 혼합물을 질소 분위기에서 80℃로 가열하고 12시간동안 유지하였다. 12시간 후, 혼합물을 100℃로 가열하고 5시간동안 유지하였다.

공중합체와 모액을 큰 용기로 옮기고, 혼합물을 물로 희석 및 혼합하고, 교반을 중단하여, 공중합체가 부유되도록 하고, 용기의 하부에서 액체 부분을 배출하고 목적하는 메틸 히드록시 셀룰로스 농도가 달성될 때까지 상기 공정을 반복하여 전형적으로 0.025%의 메틸 히드록시 셀룰로스 농도(액체가 필터를 통해 용이하게 배출되도록 하는)가 후속적으로 달성되었다. 그러나, 우수한 대안으로, 본 실시예에서, 공중합체와 모액은 희석 및 혼합(0.025% 메틸 히드록시 셀룰로스)되도록 물이 또한 펌프되는 곳으로 파이프를 통해 공중합체/모액 슬러리를 펌핑하여 80℃ 재킷된 필터 하부 용기로 운반하였다. 이는 희석된 모액이 배출되도록 한다.

용기중의 압력은 Hg 380mm 절대압력으로 감압되었다. Hg 2311mm의 절대압력에서 포화 스팀이 상기 용기의 상부에 도입되었다. 스팀이 1시간당 1 베드 볼륨으로 5시간동안 공급되었다. 상기 제거된 공중합체는 건조되고 흐름이 자유로웠다. 상기 물질은 전형적으로 물로 헹구워지고 그 후, 건조되어 크기 분류되는 아세톤-세척되는 물질에 비하여 이로운 것이다.

상기 공중합체 샘플은 디클로로메탄 추출("DCM")/불꽃 이온화 검출기(FID)가 장착된 가스 크로마토그래피(GC)("GC-FID")로 잔류 o-자일렌 및 MIBC에 대하여 분석하였다. 상기 기술은 공중합체를 DCM과 혼합하고, DCM을 회수하고, DCM을 GC에 주입하는 것으로 이루어진다. 얻어진 피크의 면적을 표준용액에 대하여 얻어진 피크 면적과 비교하였다. 나아가, 공중합체 샘플을 칭량한 후, 105℃에서 밤새 건조하고 다시 칭량하여 건조 손실을 측정하였다. 1 건조 그램 수지당 0.5% 미만의 o-자일렌 및 0.1ppm 미만의 MIBC가 존재하였다.

동적 인슐린 용량 시험은 알려진 농도의 인슐린을 시험 중합체가 충진된 컬럼을 통해 일정한 비율로 펌핑하고 유출물에 대한 UV 응답(280nm)을 시간에 대하여 검출하여 행한다. 1% 누출에서의 시간 및 상응하는 인슐린 용량은 비드-내 산란 문제(표면 스킨 혹은 거대망상 구조의 압축(compression) 혹은 손상)와 관련된 문제의 검출에 유용하다. 이들 문제는 프로브 분자가 중합체 구조로 확산되는데 장시간이 소요되는 총 인슐린 용량을 단지 관찰함으로써 간과될 수 있다. 상세한 시험은 다음과 같다:

시험에 사용된 시약

· Milli-Q 물 혹은 등가물

· 트리플루오로아세트산(TFA)(Sigma #T-6508) 혹은 등가물

·소의 인슐린(Sigma #I 5500)

· 0.8-1.8사이의 비대칭 시험 컬럼, 효율 > 2500 plates/보유되지 않은(unretained) 프로브(probe) 분자를 갖는 M등급 수지에 대한 미터(meter).(>1000 plates/ C 등급 수지에 대한 미터(meter) 및 > 5000 plates/ S 등급 수지에 대한 미터

사용된 장치

·Varian ProStar™210 용매 이송 모듈(혹은 시판되는 동일한 펌프)

·Spectraflow™783 흡광도 측정기(혹은 시판되는 동일물)

·Agilent Chemstation™Interface 및 데이타를 얻고 분석하는 소프트웨어(혹은(시판되는 동일물)

·Agilent Digital Liquid Flowmeter Optiflow ™1000 (Bodman H1000) 혹은 동일물

전형적인 정면(frontal) 흡착 커브 및 샘플 계산을 다음과 같이 행하였다: 물/TFA 용액은 테플론 리드가 장착된 1/2 갈론 앰버(amber) 유리 용기에서 TFA 1 cc 앰플을 Milli-Q™물(눈금이 매겨진 실린더)에 혼합하여 제조하였다. 인슐린 용액은 칭량 페이퍼에서 인슐린 1.25g을 칭량하고 1ℓ용기로 옮겼다. 물/TFA 용액 250g을 첨가하여 용해시켰다. 분광광도계를 291nm로 세팅하고 5.0mg/cc 용액의 UV 흡수를 측정 및 기록하였다: INF=AU, 291에서 5.0mg/cc. 이 값은 INF 값으로서 총 용량계산에 사용되었다.

정면 시험(Frontal Testing)을 다음과 같이 행하였다: 펌핑/시험 시스템에서 제 1 저장조를 물/TFA 용액으로 채웠다. 제 2 저장조를 인슐린 용액으로 채웠다. 준비된 시험 컬럼을 펌프에 부착하였다. 상기 시험 컬럼을 물/TFA 용액 20cc를 2cc/min으로 사용하여 헹구웠다. 상기 펌프를 정지시키고 펌프 공급을 인슐린 용액으로 바꾸었다. 유속은 2cc/min으로 하였다. 플로우(flow)하기전에, 물/TFA 용액을 유입 라인에서 시험 컬럼으로 옮기고 이를 인슐린 용액으로 대체하였다. Spectraflow™783 검출기를 291nm에서 컬럼 유출물을 모니터하도록 세팅하고 검출기를 제로로 하였다. 상기 펌프 및 Chemstation™데이타 입수 시스템을 동시에 세팅하였다. 시험용액 200cc를 시험 컬럼을 통해 200cc의 메스 플라스크(volumetric flask)로 운반하였다. 200cc에 대한 수집시간은 98.5에서 101.5분 사이였다. 상기 컬럼의 연결을 해제하고 시스템을 세척하였다. 동적 용량(dynamic capacity) 혹은 1% 누출 용량을 다음과 같이 측정하였다: UV프로파일에 대한 mAU。및 mAU를 다음과 같이 측정하였다. mAU。가 측정되었으며, 이는 분석시작과 현저한 편향(deflection)이 발생하기 직전의 사이로 정의되는 프로파일 베이스라인의 3점 평균이었다. mAUmax는 시그널의 변화가 1%미만인 프로파일에서의 부동점(plateau)이였다. 1% 누출(leakage)까지의 시간(t1%)는 검출기 반응이 1%수준에 도달하는 시간으로 정의되며, 이는 식 [(mAUmax-mAU。)x0.01]+mAU。로 계산된다. 그 후, 동적 용량은 [t1% x 5(mg/cc)x 2(cc/min)]/(컬럼중 수지의 cc)로 계산된다.

총 용량은 다음과 같이 측정하였다: 스펙트로포토미터에서 컬럼 시험으로 부터 수집된 유출물의 흡광도를 다음 식으로 측정하였다: 총 용량은 [1-EFF/INF)x1000]/(컬럼중 수지 cc)로 나타내어 진다. 동적 용량의 샘플 계산은 다음과 같다: mAU。= 45.7mAUmax=506.2; 1% 누출에서의 검출기 반응 [(506.2-45.7)x0.01]+45.7=50.3; 1% 반응이 발생되는 시간 = 33.8min(커브에서 읽음); 동적 용량 = : [33.8 x 5(mg/cc) x 2(cc/min)]/컬럼중 4.8cc수지 = 70mg/cc. 샘플의 총 용량은 다음과 같이 측정되었다: INF = 0.57 AU, 291EFF에서 5.0mg/cc = 291nm INF에서 0.275AU; 총 용량 =:[(1-0.275/0.57)x1000]/(컬럼중 수지 4.8cc)=108mg/cc. 실시예 공중합체의 동적 용량은 73mg/cc였다. 비교하고자, 상기와 같이 제조되나, 물로 연속적으로 희석되고, 아세톤과 물로 세척된 샘플은 68mg/cc의 동적 용량을 갖음을 나타내었다.

본 발명은 용매를 필요로 하지 않으나, 생성물의 특성은 유지 혹은 개선된다. 다음 표는 실시예 1 및 2의 물질의 공극 크기분포를 나타낸다. 진공 스팀 스트리핑의 사용은 공극의 붕괴를 초래하지 않으며, 바람직한 직경의 공극 체적이 증가되어 공극 크기 분포가 개선된다.

[표 1]

공극 체적 (cc/g) 공극 크기 세척만 증류&세척 증류&스트리핑 스트리핑만 0-150A 0.853 0.842 0.768 0.830 150-250A 0.799 0.701 0.591 0.497 250-350A 0.009 0.159 0.355 0.515

[표 2]

스팀 스트리핑 연구에 대한 Ceph C 결과를 얻었다. 결과를 다음에 나타내었다:

샘플 1% 누출 용량 MeOH만으로 세척된 DVB/EVB 650미크롱 40증류/MeOH세척된 DVB/EVB 650미크롱 44증류/스팀 스트립된 DVB/EVB 650미크롱 44스팀 스트립만된 DVB/EVB 650미크롱 68

표 2는 진공 스팀 스트립된 물질의 세파로스포린(Cephalosporin) C 대 대부분의 포로겐을 제거하기 위해 먼저 증류되고 그 후, 나머지 포로겐을 제거하기 위해 메탄올로 세척된 전형적인 생성물의 세파로스포린(Cephalosporin) C에 대한 우수한 동적 용량을 나타낸다. 이는 또한, 단지 진공 스팀 스트립만된 공중합체의 예기치 못한 높은 Ceph C 용량을 나타낸다.

[표 3]

샘플의 총 다공성을 질소 다공도측정법(porosimetry)로 측정하였다. 결과를 다음에 나타내었다:

샘플 다공성(g당㎤) MeOH만으로 세척된 DVB/EVB 650미크롱 1.685증류/MeOH세척된 DVB/EVB 650미크롱 1.727증류/스팀 스트립된 DVB/EVB 650미크롱 1.741스팀 스트립만된 DVB/EVB 650미크롱 1.866

표 3은 진공 스팀 스트리핑의 사용 결과가 공중합체의 공극 구조에 악영향을 미치지 않으며, 놀랍게도 진공 스팀 스트리핑만의 사용이 보다 우수한 성능 특성을 나타내도록 공중합체의 공극 구조를 우호적으로 개질시킴을 나타낸다.

[표 4]

인-라인 희석 및 진공 스팀 스트리핑 연구에 대한 인슐린 결과를 나타낸다:

샘플 1% 누출 용량 인-라인 희석 진공 스팀 스트립된 DVB/EVB 75미크롱 73mg/ccstd 배치식 희석 아세톤 세척된 DVB/EVB 75미크롱 69mg/cc

표 4는 배치식 희석에 비하여 인-라인 희석의 사용이 인슐린에 대한 우수한 동적 용량을 그리고 배치-식 희석 및 아세톤 세척에 비하여 인-라인 희석 및 진공 스팀 스트리핑 모두를 사용하는 경우 인슐린에 대한 우수한 동적 용량을 나타내는 것이다.

본 발명의 다른 변형에서, 수지는 흡착성 수지이며, 임의로 동물에서 유래된 생성물이 사용되지 않고, 예를들어 겔라틴 없이 제조된다. 겔라틴이 없다는 것은 궁극적인 약제를 제조하기 위한 미생물 오염의 잠재적인 위험을 제거하는 것이며, 동물에서 유래되는 병원균의 어떠한 위험에 대한 노출없이 우수한 성능 특성을 갖는 매우 바람직한 생성물을 형성할 수 있다는 것이다. 이 기술분야의 기술자는 본 발명의 구현은 본 발명의 기술적 사상의 범위내에서 개질 및 변형가능함을 알 수 있을 것이다.

본 발명의 방법으로 포로겐 및 다른 물질이 효과적으로 제거되어 다운스트림 생성물 공정을 저해할 수 있거나 혹은 수지를 사용하기 전에 약제 제조자에 의한 부가적인 세척단계를 필요로하는 잔류 메탄올 혹은 다른 용매가 없는 보다 깨끗한 수지가 제조된다.

Claims

진공하에서 수지비드로 부터 포로겐을 스팀 스트리핑하는 거대망상조직 수지비드의 개선된 제조방법.
제 1항에 있어서, 나아가 상기 스팀 스트리핑전에 상기 수지비드를 포함하는 모액으로 부터 공정조제를 제거하기 위해 희석하는 단계를 포함함을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 진공을 사용하여 중합온도보다 낮은 온도로 유지하는 단계를 포함함을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 공정조제는 소우프(soaps), 염(salts) 및 분산제로 구성되는 그룹으로 부터 선택됨을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 수지는 흡착제 수지임을 특징으로 하는 방법.
제 5항에 있어서, 상기 방법은 동물 유래된 생성물이 없음을 특징으로 하는 방법.
청구항 1항의 개선된 방법을 사용하여 제조된 수지.
상기 생성물 제조공정시 청구항 7항의 수지를 이용하여 제조된 다운스트림 생성물.
제 8항에 있어서, 상기 다운스트림 생성물은 약제 혹은 이들의 전구체임을 특징으로 하는 다운스트림 생성물.
제 9항에 있어서, 상기 약제 및 이들의 전구체는 세파로스포린 C 및 인슐린으로 구성되는 그룹으로 부터 선택됨을 특징으로 하는 다운스트림 생성물.
필터가 막히지 않고 수지 비드에서 공정조제가 제거되도록 연속적으로 모액을 희석제로 희석하여 모액에서 공정조제를 제거하는 단계를 포함하는 수지비드의 개선된 제조방법.
진공을 사용하여 수지비드가 변형되는 온도보다 낮은 온도에서 상기 수지 비드에서 포로겐을 스트리핑하는 단계를 포함하는 거대망상 수지 비드의 개선된 제조방법.