CN109988226A - 一种奥利万星的纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种奥利万星的纯化方法，包括以下步骤：步骤(1)，将奥利万星粗品溶解于乙腈水溶液中，然后上聚合物微球层析柱进行柱层析，收集奥利万星含量大于98.5％的层析液；步骤(2)，收集的层析液脱除溶剂后浓缩，得到奥利万星浓缩液；步骤(3)，过滤后冷冻干燥，得到奥利万星粉末。本发明的一种奥利万星的纯化方法：通过聚合物微球层析，得到最终高纯度的奥利万星，杂质含量大大下降；该方法仅通过一步层析即可达到奥利万星含量大于98.5％的目标，方法简易；该方法采用磷酸盐、甲醇/乙醇/乙腈作为层析的流动相，易于后续处理和溶剂回收，可以通过纳滤膜进行浓缩处理，操作方便；该纯化方法不仅提高了产品品质，而且适合于扩大的商业化生产。
Description
技术领域
本发明属于化学提纯技术领域，具体涉及一种高纯度奥利万星的纯化方法。
背景技术
奥利万星(oritavancin，LY333328)是在第一代糖肽抗生素万古霉素的基础上开发的第二代糖肽抗生素，最早由Lilly公司研究开发，是由微生物Amycolatopsisorientalis发酵产生的A82846B与4’-联苯甲醛反应产生的衍生物。2014年8月6日，FDA已批准奥利万星注射液用于由敏感革兰氏阳性菌(包括耐甲氧西林黄色葡萄球菌，MRSA)导致的急性细菌性皮肤和皮肤结构感染(ABSSSIs)成人患者的治疗。
由于半衰期较万古霉素大大延长，奥利万星是FDA批准用于ABSSSIs治疗的首个和唯一一种单剂量治疗方案的抗生素。患者仅接受一次奥利万星输液，整个治疗方案便已结束。
奥利万星化合物专利CN1119649中公开了奥利万星及其类似物的纯化方法：利用C18反相制备HPLC，并以含三乙胺(以磷酸调节pH值至3.0)的乙腈水溶液梯度洗脱，分步收集样品后再经层析柱脱盐得到奥利万星样品。该专利所涉及的工艺操作比较复杂，而且使用C18制备不适宜于工业化操作。
奥利万星生产工艺专利WO2016/011245A1也公开了奥利万星的纯化方法：经衍生化反应后得到奥利万星与铜的复合物，复合物经聚苯乙烯-二乙烯基苯树脂吸附，以含磷酸二氢铵(以磷酸调节pH值)的乙腈水溶液洗脱，收集样品后经膜过滤、脱盐、干燥得到色谱纯度95％左右的奥利万星样品。经该专利生产得到的奥利万星样品纯度还是不够高，杂质含量达到4％以上。
鉴于奥利万星的用药安全性，需要提供高纯度的奥利万星产品。然而，从目前的文献资料看，由于存在种种的缺陷，还没有一种制备高纯度(色谱纯度达到98.5％以上)的适用于商业化生产的奥利万星生产方法。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术中的不足，提供一种高纯度(色谱纯度达到98.5％以上)、低杂质、高效率的适用于商业化生产的奥利万星的纯化方法。
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案实现：
一种奥利万星的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤(1)，将奥利万星粗品溶解于乙腈水溶液中，然后上聚合物微球层析柱进行柱层析，收集奥利万星含量大于98.5％的层析液；
步骤(2)，收集的层析液脱除溶剂后浓缩，得到奥利万星浓缩液；
步骤(3)，过滤后冷冻干燥，得到奥利万星粉末。
根据本发明的优选实施例，所述步骤(1)的聚合物微球层析柱的固定相为苯乙烯Uni PS、甲基丙烯酸酯Uni PMM或苯乙烯和甲基丙烯酸酯共聚物Uni PSN或KBsphere PSM为基质的聚合物填料。
根据本发明的优选实施例，所述步骤(1)的柱层析包括上样、洗脱的步骤；其中洗脱是用含有磷酸盐或三氟乙酸TFA的甲醇、乙醇或乙腈水溶液进行梯度洗脱。
根据本发明的优选实施例，在洗脱之前还包括用甲醇、乙醇或乙腈水溶液预洗的步骤，以洗去未反应的原料A82846B。
根据本发明的优选实施例，所述步骤(2)中脱除溶剂是采用纳滤膜。
根据本发明的优选实施例，所述步骤(2)中的浓缩是浓缩至透析液的电导率低于300μs/cm。
与现有技术相比，本发明的一种奥利万星的纯化方法具有如下有益效果：
1)通过聚合物微球层析，得到最终高纯度的奥利万星，杂质含量大大下降；
2)该方法仅通过一步层析即可达到奥利万星含量大于98.5％的目标，方法简易；
3)该方法采用磷酸盐、甲醇/乙醇/乙腈作为层析的流动相，易于后续的处理和溶剂的回收，可以通过纳滤膜进行浓缩处理，操作方便；
4)该纯化方法不仅提高了产品品质，而且适合于扩大的商业化生产。
附图说明
图1为本发明涉及的奥利万星的分子结构图。
图2为奥利万星合成粗品色谱图，奥利万星含量70.1％。
图3为实施例1中奥利万星浓缩液色谱图，奥利万星含量99.2％。
图4为实施例2中奥利万星浓缩液色谱图，奥利万星含量98.6％。
图5为实施例3中奥利万星浓缩液色谱图，奥利万星含量98.7％。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限制本发明的范围。
以下实施例中所使用的聚合物微球Uni PS 40-300、Uni PS 25-300、Uni PSN 40-300、Uni PSN 30-300、Uni PMM 40-300均购自苏州纳微科技有限公司，KBsphere40PSM购自无锡知益微球科技有限公司。
以下实施例中所述的奥利万星粗品，是由A82846B与4'-氯联苯-4-甲醛的还原烷基化反应制得。
除非特别说明，以下实施例中所涉及的各物质配比均为质量比。
以下实施例中，用于分析奥利万星含量的HPLC分析条件如下：
分析柱：TOSOH TSK-gel ODS-100V，规格4.6*150mm，填料粒径3μm。
流动相：A——磷酸：水：四氢呋喃＝1：1000：10；B——磷酸：水：乙腈：四氢呋喃＝1：1000：1500：25。洗脱梯度见表1。
表1HPLC洗脱梯度
| Time(min) | A％ | B％ |
| 0 | 80 | 20 |
| 25 | 40 | 60 |
| 30 | 0 | 100 |
(Post time：5min，柱温：40℃，流速：1.0ml/min，检测波长：240nm)
实施例1：利用Uni PSN制备高纯度奥利万星成品
取80ml Uni PSN 40-300聚合物微球装柱，层析柱规格为1.8cm*50cm，待微球自由沉降后以300ml 0.5％NaOH水溶液：乙腈＝1：1(体积比)再生微球，以300ml 5％乙腈水溶液平衡柱子。取奥利万星粗品3.2g，加入100ml 5％乙腈水溶液，以4M HCl调节pH值至2.1，震荡溶解，粗品溶液中奥利万星的色谱含量为70.1％(如图2所示)，上样，上样速度为300ml/hr。以200ml的10％乙腈水溶液预洗，以去除未反应的原料A82846B；以18％～25％乙腈水溶液(含5mM KH2PO4，磷酸调pH值至3.3)梯度洗脱，洗脱速度400ml/hr，80ml/瓶收集馏分，HPLC检测主组分的含量及纯度。
合并奥利万星色谱含量大于98.5％的馏分，将合并的馏分以1M NaOH调节pH值至6.2，并通过孔径为400分子量的纳滤膜进行脱溶剂，待透出液没有溶剂产生则开始浓缩，加水预洗、浓缩至透析液的电导率低于300μs/cm。收集浓缩液，然后将浓缩液经过0.45μm滤膜进行过滤，放入冷冻干燥机进行冻干，得到奥利万星冻干粉成品0.70g，收率为44.9％，色谱纯度99.2％(见图3)。
实施例2：利用Uni PS制备高纯度奥利万星成品
取80ml Uni PS 40-300聚合物微球装柱，层析柱规格：1.8cm*50cm，待微球自由沉降后以300ml 0.5％NaOH水溶液：乙腈＝1：1(体积比)再生微球，以300ml 5％乙腈水溶液平衡柱子。取奥利万星粗品2.0g，加入100ml 5％乙腈水溶液，以4M HCl调节pH值至2.1，震荡溶解，粗品溶液中奥利万星的色谱含量为70.3％，上样，上样速度为300ml/hr。以200ml的10％乙腈水溶液预洗，以去除未反应的原料A82846B；以15％～20％乙腈水溶液(含5mMKH2PO4，磷酸调pH值至3.3)梯度洗脱，洗脱速度400ml/hr，80ml/瓶收集馏分，HPLC检测主组分的含量及纯度。
合并奥利万星色谱含量大于98.5％的馏分，将合并的馏分以1M NaOH调节pH值至6.2，并通过孔径为400分子量的纳滤膜进行脱溶剂，待透出液没有溶剂产生则开始浓缩，加水预洗、浓缩至透析液的电导率低于300μs/cm。收集浓缩液，然后将浓缩液经过0.45μm滤膜进行过滤，放入冷冻干燥机进行冻干，得到奥利万星冻干粉成品0.61g，收率为39.1％，色谱纯度98.6％(见图4)。
实施例3：利用Uni PMM制备高纯度奥利万星成品
取80ml Uni PMM 40-300聚合物微球装柱，层析柱规格：1.8cm*50cm，待微球自由沉降后以300ml 0.5％NaOH水溶液：乙腈＝1：1(体积比)再生微球，以300ml 5％乙腈水溶液平衡柱子。取奥利万星粗品2.0g，加入100ml 5％乙腈水溶液，以4M HCl调节pH值至2.1，震荡溶解，粗品溶液中奥利万星的色谱含量为70.3％，上样，上样速度为300ml/hr。以200ml的10％乙腈水溶液预洗，以去除未反应的原料A82846B；以22％～30％乙腈水溶液(含5mMKH2PO4，磷酸调pH值至3.3)梯度洗脱，洗脱速度400ml/hr，80ml/瓶收集馏分，HPLC检测主组分的含量及纯度。
合并奥利万星色谱含量大于98.5％的馏分，将合并的馏分以1M NaOH调节pH值至6.2，并通过孔径为400分子量的纳滤膜进行脱溶剂，待透出液没有溶剂产生则开始浓缩，加水预洗、浓缩至透析液的电导率低于300μs/cm。收集浓缩液，然后将浓缩液经过0.45μm滤膜进行过滤，放入冷冻干燥机进行冻干，得到奥利万星冻干粉成品0.56g，收率为35.9％，色谱纯度98.7％(见图5)。
实施例4-10：不同条件制备奥利万星成品
取80ml Uni PSN 40-300聚合物微球或KBsphere 40PSM聚合物微球装柱，层析柱规格：1.8cm*50cm，待微球自由沉降后以300ml 0.5％NaOH水溶液：乙腈＝1：1(体积比)再生微球，以300ml 5％乙腈水溶液平衡柱子。取奥利万星粗品2.0g，加入100ml 5％乙腈水溶液，以4M HCl调节pH值至2.1，震荡溶解，粗品溶液中奥利万星的色谱含量为70.3％，上样，上样速度为300ml/hr。以10％甲醇、乙醇或乙腈溶液预洗，以去除未反应的原料A82846B；以不同溶度的含TFA或5mM KH2PO4(磷酸调pH值至3.3)的甲醇、乙醇或乙腈溶液梯度洗脱，洗脱速度400ml/hr，80ml/瓶收集馏分，HPLC检测主组分的含量及纯度。各实施例所选取的纯化方法见表2
合并奥利万星色谱含量大于98.5％的馏分，将合并的馏分以1M NaOH调节pH值至6.2，并通过孔径为400分子量的纳滤膜进行脱溶剂，待透出液没有溶剂产生则开始浓缩，加水预洗、浓缩至透析液的电导率低于300μs/cm。收集浓缩液，然后将浓缩液经过0.45μm滤膜进行过滤，放入冷冻干燥机进行冻干，得到奥利万星冻干粉成品，并对获得的奥利万星精纯产品进行检测，各纯化步骤对应的检测结果、收率如表3所示。
表2实施例4-10纯化方法
表3实施例4-10所得产物的产量、纯度及收率
| 实施例 | 产量(g) | 纯度(％) | 收率(％) |
| 4 | 0.49 | 98.5 | 31.4 |
| 5 | 0.61 | 98.7 | 39.1 |
| 6 | 0.53 | 98.8 | 34.0 |
| 7 | 0.67 | 99.0 | 43.0 |
| 8 | 0.59 | 98.7 | 37.8 |
| 9 | 0.75 | 99.4 | 48.1 |
| 10 | 0.64 | 99.1 | 41.1 |
实施例11：利用盐酸-甲醇体系洗脱制备奥利万星
取80ml Uni PS 25-300聚合物微球装柱，层析柱规格：1.8cm*50cm，待微球自由沉降后以300ml 0.5％NaOH水溶液：甲醇＝1：1(体积比)再生微球，以300ml 5％甲醇水溶液平衡柱子。取奥利万星粗品2.0g，加入100ml 5％甲醇水溶液，以4MHCl调节pH值至2.1，震荡溶解，粗品溶液中奥利万星的色谱含量为70.3％，上样，上样速度为300ml/hr。以200ml的10％甲醇水溶液预洗，以去除未反应的原料A82846B；以50％-60％甲醇水溶液(含0.03％HCl)梯度洗脱，洗脱速度400ml/hr，一倍柱体积/瓶收集馏分，HPLC检测主组分的含量及纯度。本实施例用于分析奥利万星含量的HPLC分析条件与实施例1所述的相同。检测发现通过此方法只能将奥利万星的色谱含量提高到88.9％。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对该发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
Claims (6)
1.一种奥利万星的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤(1)，将奥利万星粗品溶解于乙腈水溶液中，然后上聚合物微球层析柱进行柱层析，收集奥利万星含量大于98.5％的层析液；
步骤(2)，收集的层析液脱除溶剂后浓缩，得到奥利万星浓缩液；
步骤(3)，过滤后冷冻干燥，得到奥利万星粉末。
2.根据权利要求1所述的一种奥利万星的纯化方法，其特征在于，所述步骤(1)的聚合物微球层析柱的固定相为苯乙烯Uni PS、甲基丙烯酸酯Uni PMM或苯乙烯和甲基丙烯酸酯共聚物Uni PSN或KBsphere PSM为基质的聚合物填料。
3.根据权利要求1或2所述的一种奥利万星的纯化方法，其特征在于，所述步骤(1)的柱层析包括上样、洗脱的步骤；其中洗脱是用含有磷酸盐或三氟乙酸TFA的甲醇、乙醇或乙腈水溶液进行梯度洗脱。
4.根据权利要求3所述的一种奥利万星的纯化方法，其特征在于，在洗脱之前还包括用甲醇、乙醇或乙腈水溶液预洗的步骤，以洗去未反应的原料A82846B。
5.根据权利要求1所述的一种奥利万星的纯化方法，其特征在于，所述步骤(2)中脱除溶剂是采用纳滤膜。
6.根据权利要求1所述的一种奥利万星的纯化方法，其特征在于，所述步骤(2)中的浓缩是浓缩至透析液的电导率低于300μs/cm。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN113563426A (zh) * | 2021-08-05 | 2021-10-29 | 丽珠集团福州福兴医药有限公司 | 奥利万星母核a82846b的分离纯化方法 |
| CN117362397A (zh) * | 2023-10-09 | 2024-01-09 | 江苏惠利生物科技有限公司 | 一种奥利万星的纯化方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105001309A (zh) * | 2015-06-23 | 2015-10-28 | 苏州纳微科技有限公司 | 一种达巴万星的分离纯化方法 |
| WO2016004848A1 (zh) * | 2014-07-09 | 2016-01-14 | 浙江海正药业股份有限公司 | 一种纯化非达霉素的方法 |
| CN105669789A (zh) * | 2016-02-23 | 2016-06-15 | 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 | 一种去甲万古霉素的制备方法 |
| CN106928323A (zh) * | 2017-03-02 | 2017-07-07 | 重庆乾泰生物医药有限公司 | 一种高纯度奥利万星关键中间体a82846b的制备方法 |
-
2017
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016004848A1 (zh) * | 2014-07-09 | 2016-01-14 | 浙江海正药业股份有限公司 | 一种纯化非达霉素的方法 |
| CN105001309A (zh) * | 2015-06-23 | 2015-10-28 | 苏州纳微科技有限公司 | 一种达巴万星的分离纯化方法 |
| CN105669789A (zh) * | 2016-02-23 | 2016-06-15 | 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 | 一种去甲万古霉素的制备方法 |
| CN106928323A (zh) * | 2017-03-02 | 2017-07-07 | 重庆乾泰生物医药有限公司 | 一种高纯度奥利万星关键中间体a82846b的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 邓佩佩;谢新宇;王晶珂;郑学丽;李梅;李敏;王小连;: "聚合物纳米微球分离纯化米卡芬净母核的方法研究" * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113563426A (zh) * | 2021-08-05 | 2021-10-29 | 丽珠集团福州福兴医药有限公司 | 奥利万星母核a82846b的分离纯化方法 |
| CN117362397A (zh) * | 2023-10-09 | 2024-01-09 | 江苏惠利生物科技有限公司 | 一种奥利万星的纯化方法 |
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