KR20040081428A - 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트,테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트및 그의 혼합물을 사용 및 제조하는 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈-3,3'-디갈레이트의 혼합물을 제조하는 방법, 상기 테아플라빈의 혼합물의 약학적 조성물, 상기 테아플라빈 혼합물의 다이어트 보충 조성물 및 다양한 질병을 치료 또는 예방하기 위한 상기 테아플라빈의 혼합물 및 그의 약학적 조성물을 사용하는 방법을 개시한다. 본 발명은 또한 별개의 화합물로서의 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트, 상기 화합물의 약학적 조성물, 상기 화합물의 다이어트 보충 조성물을 제조하는 방법, 및 다양한 질병을 치료 또는 예방하기 위해 상기 화합물을 사용하는 방법을 개시한다.

Description

테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트 및 그의 혼합물을 사용 및 제조하는 방법 {METHODS OF MAKING AND USING THEAFLAVIN, THEAFLAVIN-3-GALLATE, THEAFLAVIN-3'-GALLATE AND THEAFLAVIN 3,3'-DIGALLATE AND MIXTURES THEREOF}
물 이외에 세계에서 가장 널리 소비되는 음료인 차 (Tea)는 까멜리아 시넨시스 (Camellia Sinensis)의 잎으로부터 생산되고, 상당한 양의 플라보노이드 화합물을 함유한다. 도 1에 도시된 바와 같이, 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 포함하는 테아플라빈은 전형적으로 녹차에서 홍차로의 발효동안 녹차 폴리페놀 (즉, 플라보노이드)의 중합을 거쳐 형성된다. 전형적으로 홍차에서의 테아플라빈의 농도는 약 0.4 중량% 내지 약 1.8 중량%이고, 녹차에서의 테아플라빈 농도는 대개 상기에 훨씬 못 미친다.
테아플라빈은 홍차의 특징적인 색 (즉, 밝기) 및 향미 (상쾌함)의 원인이다. 플라보노이드는 효과적인 항-산화제이고 [Leung 등,J Nutr 2001, 131(9):2248-51; Sarkar 등,Biochem Biophys Res Commun 2001, 284(1):173-8; Yoshino 등,Biol. Pharm Bull.1994, 17(1) 146-149], 암, 심혈관 및 뇌혈관 질병, 당뇨병 등과 같은 다양한 질병에 대해 효과적일 수 있다. 더욱이, 플라보노이드는 상당한 소염 항미생물 활성 및 항바이러스 활성을 가질 수 있다.
그러나, 다양한 질병을 치료 또는 예방하기 위해 테아플라빈을 사용함에 있어서의 중요한 문제점은 경제적인 방법을 사용하여 천연 원료로부터, 혼합물 또는 개별 화합물로서의 테아플라빈을 충분한 양으로 분리하는 것이다. 따라서, 혼합물로서 또는 개별 화합물로서 테아플라빈을 다양한 질병을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위하여는, 혼합물로서 또는 개별 화합물로서 테아플라빈을 비용 효율적인 방식으로 충분한 양으로 분리하는 방법이 요구된다.
본 발명은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈-3,3'-디갈레이트의 혼합물을 제조하는 방법, 상기 테아플라빈의 혼합물의 약학적 조성물, 상기 테아플라빈 혼합물의 다이어트 보충 조성물 및 다양한 질병을 치료 또는 예방하기 위한 상기 테아플라빈의 혼합물 및 그의 약학적 조성물을 사용하는 방법을 개시한다. 본 발명은 또한 별개의 화합물로서의 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트, 상기 화합물의 약학적 조성물, 상기 화합물의 다이어트 보충 조성물을 제조하는 방법, 및 다양한 질병을 치료 또는 예방하기 위해 상기 화합물을 사용하는 방법을 개시한다.
도 1은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 화학 구조를 나타낸다.
도 2는 에피카테킨, 에피카테킨 갈레이트, 에피갈로카테킨 및 에피갈로카테킨 갈레이트의 화학 구조를 나타낸다.
정의
"완충액"은 수소 이온과 가역적으로 결합함으로써 산 또는 염기의 첨가시 pH의 변화에 저항하는 물질을 지칭한다. 완충액의 예로는, 단백질, 중탄산염, 탄산염, 카르복실레이트(예컨대, 아세테이트, 프로피오네이트 등), 술포네이트, 포스페이트(예컨대, 나트륨 포스페이트), 시트레이트, 보레이트, 아미노산(예컨대, 글리신, 알라닌 등) 및 아민(예컨대, 메틸아민, 에틸아민, 트리스(Tris) 등)을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다.
"본 발명의 화합물"은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트 각각 뿐만 아니라 테아플라빈의 임의의혼합물을 지칭한다. 본 발명의 화합물은 그의 화학 구조 및/또는 화학 명칭으로 확인될 수 있다. 화학 구조와 화학 명칭이 불일치할 경우, 화학 구조로 화합물을 확인한다. 본 발명의 화합물은 또한 에놀형, 케토형 및 그의 혼합물을 포함하는 수개의 토토머 형태로 존재할 수 있다. 따라서, 여기에 묘사된 화학 구조는 예시된 화합물의 모든 가능한 토토머 형태를 포함한다. 본 발명의 화합물은 또한 하나 이상의 원자가 자연에서 전통적으로 발견되는 원자량과 상이한 원자량을 가진 동위원소로 표지된 화합물도 포함한다. 본 발명의 화합물에 통합될 수 있는 동위원소의 예로는,2H,3H,13C,14C,18O 및17O를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 본 발명의 화합물은 수화 형태를 포함하는 용매화 형태 뿐만 아니라 비용매화 형태로 존재할 수 있다. 통상적으로, 수화 및 용매화 형태는 본 발명의 범위내에 속한다. 본 발명의 특정 화합물은 다층 결정 또는 무정형 형태로 존재할 수 있다. 통상적으로, 모든 물리적 형태는 본 발명이 의도하는 사용과 동등한 것으로서, 본 발명의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다.
"녹차 잎" 은 산화(즉, 발효)과정을 방지하기 위해 시들게(withered) 하여 가열(예컨대, 팬 프라이, 또는 증기)된 다음, 자연적으로 건조된 상록종인 까멜리아 시넨시스 (Camellia Sinensis)의 잎을 지칭한다.
"약학적으로 허용가능한 염"은 약학적으로 허용가능하며, 모 화합물의 목적하는 약리 활성을 갖는 본 발명의 화합물의 염을 지칭한다. 그러한 염으로는 하기를 포함한다: (1) 염산, 브롬산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산과 형성되거나; 혹은 아세트산, 프로피온산, 헥산산, 시클로펜탄프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일)벤조산, 신남산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 1,2-에탄-디술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 벤젠술폰산, 4-클로로벤젠술폰산, 2-나프탈렌술폰산, 4-톨루엔술폰산, 캄포술폰산, 4-메틸비시클로〔2.2,2〕-옥트-2-엔-1-카르복실산, 글루코헵톤산, 3-페닐프로피온산, 트리메틸아세트산, t-부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 히드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산 등과 같은 유기산과 형성된 산부가염, 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 양성자가 암모늄 이온, 금속 이온, 예컨대 알칼리 금속이온 (예컨대, 나트륨 또는 칼륨), 알칼리 토금속 이온(예컨대, 칼슘 또는 마그네슘) 또는 알루미늄 이온으로 치환되어 형성된 염; 혹은 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, N-메틸글루카민, 모르폴린, 피페리딘, 디메틸아민, 디에틸아민 등과 같은 유기 염기로 배위된 염. 또한, 아르기네이트 등과 같은 아미노산의 염, 및 글루쿠론산 또는 갈락투론산 등과 같은 유기산의 염을 들 수 있다(예컨대 Berge 등,1977, J. Pharm. Sci, 66:1-19 참고)
"약학적으로 허용가능한 비히클" 은 본 발명의 화합물이 투여되는 희석제, 보조제, 부형제 또는 담체를 지칭한다.
"환자"는 인간 및 기타 포유류를 포함한다.
"예방"(preventing또는prevention)은 임의의 질병(disease) 또는 장애(disorder)(예컨대, 질병에 노출되거나 혹은 예비 노출되었지만, 아직 그 질병의 증상을 경험하지 않았거나 그러한 증상이 발생하지 않은 환자에 있어서, 전개되지 않은 질병의 하나 이상의 임상적 증상의 원인이 되는 것)가 생기는 위험을 저감시키는 것을 지칭한다.
"테아플라빈"은 카테킨 퀴논(예컨대, 에피카테킨)과 갈로카테킨 퀴논(예컨대, 에피갈로카테킨)의 산화 축합, 즉 효소 폴리페놀 옥시다아제에 의해 촉매화될 수 있는 반응에 의해 형성된 화합물을 지칭한다. 테아플라빈은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트를 포함한다. 테아플라빈은 뜨거운 물, 에틸 아세테이트, 부탄올 및 메탄올 등에 용해되며, 전형적으로 염기성 용액에서 산화에 민감하다.
"차 폴리페놀"은 약 90%의 혼합물을 함유하고 있는 카테킨과 녹차잎으로부터 추출된 폴리페놀의 혼합물을 지칭한다. 차 폴리페놀은 상업적인 공급원(예컨대, Wuzhou International Co., LTD., Ningbo Free Trade Zone, Nignbo, China)으로부터 입수가능하다. 카테킨은 갈로카테킨, 에피카테킨("EC"), 에피갈로카테킨("EGC"), 에피카테킨 갈레이트("ECG"), 에피갈로카테킨 갈레이트("EGCG")를 포함한다. 전형적으로 EGCG는 카테킨을 약 50% 내지 약 60% 의 함량으로 함유한다.
임의 질병 또는 장애의 "치료"(treating또는treatment)는 한 구현예에서, 질병 또는 장애를 개선하는 것 (예컨대, 질병 또는 그의 적어도 하나의 임상학 증상을 저지하거나 저감시키는 것)을 지칭한다. 다른 구현예에서, "치료"는 환자가 의식하지 못할 수도 있는 하나 이상의 물리적 변수를 개선하는 것을 지칭한다.또 다른 구현예에서, "치료"는 물리적으로(예컨대, 의식할 수 있는 증상의 안정화), 생리적으로(예컨대, 물리적 변수의 안정화) 혹은 이들 모두에서 질병 또는 장애를 억제하는 것을 지칭한다. 또 다른 구현예에서, "치료"는 질병 또는 장애의 발병을 지연시키는 것을 지칭한다.
"치료학적 유효량"이란 질병을 치료 또는 예방하기 위해 환자에게 투여되었을 때, 질병의 그러한 치료 또는 예방하기에 충분한 양의 화합물을 의미한다. "치료학적 유효량"은 화합물, 질병 및 그의 가혹도, 치료할 환자의 연령, 체중 등에 따라 변할 수 있다.
테아플라빈 혼합물 및 개별 테아플라빈의 제조 방법
한 양상에서, 본 발명은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물의 제조 방법을 제공한다. 우선, 녹차 잎을 수성 완충액과 접촉시켜 반응 혼합물을 형성시킨다. 녹차 잎은 시판되는 것을 구입(예컨대, Far Tea Leaves, Berkeley, CA; SOTA Instant Japanese Green Tea, Reno, Nevada; FML Tea Trading Co., Ltd., Xiamen, China)할 수 있으며, 공급자에 의해 제공된 것을 그대로 사용하거나, 또는 완충액과 접촉하기 전에 절단될 수 있다.
바람직하게는, 수성 완충액은 약 5.0 내지 약 7.0 (보다 바람직하게는, 약 6.3 내지 약 6.5) 의 pH 를 가질 수 있다. 완충제의 몰량은 수성 용액을 완충화하기에 충분한 양이어야 하며, 당업자에 의해 용이하게 추정될 수 있다. 한 구현예에서, 완충제는 약 0.1 M 내지 약 0.3 M 이다. 상기 완충제는 원하는 pH의 반응 혼합물이 되도록 조절될 수 있는 임의의 완충제로부터 선택될 수 있다. 적당한 완충제의 선택 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다. 바람직한 완충제는 포스페이트이다. 한 구현예에서, 완충제는 pH 6.4에서 0.15 M 포스페이트이다. 또 다른 구현예에서, 녹차잎 대 수성 완충액의 비는 리터당 킬로그램을 기준으로 약 1:0.5 내지 약 1:20 이다.
몇몇 경우, 녹차잎은 카테킨을 테아플라빈으로 전환하기에 충분한 잔류 폴리페놀 옥시다아제를 함유할 수 있다. 또 다른 상황에서, 폴리페놀 옥시다아제(Worthington Biochemical Corporation, Lakewood, NJ) 는 상기 반응 혼합물에 첨가되어 카테킨으로부터 테아플라빈의 형성을 보조해 줄 수 있다. 전형적으로, 폴리페놀 옥시다아제 대 녹차잎의 비는 약 0.1:1 내지 약 2:1 (w/w) 로 변할 수 있다.
이어서, 반응 혼합물은 산소와 접촉하여 발효가 시작된다. 전형적으로 상기 반응물은 진탕 및 바람직하게는 교반된다. 반응 혼합물 중의 산소의 양은 약 20 % 내지 약 25 % (w/v) 로 변할 수 있다. 반응 혼합물을 통과하는 적당한 산소의 유속은 반응 부피에 따라 변할 것이며 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 한 구현예에서, 반응 혼합물 중의 산소의 양은 약 22 % (w/v) 이다. 반응 혼합물의 온도는 약 15 ℃ 내지 약 80 ℃ 로 변할 수 있다. 한 구현예에서, 온도는 약 30 ℃ 이다. 또 다른 구현예에서, 반응 혼합물 중의 산소의 양은 약 22 % (w/v) 이며, 반응 혼합물을 통과하는 산소의 유속은 약 20 L/sec 이고, 반응 혼합물의 부피는 약 1000 L 내지 약 1200 L 이며, 온도는 약 30 ℃이고 반응혼합물은 교반된다.
이어서, 상기 반응 혼합물은 발효되어 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 형성한다. 전형적으로, 반응 혼합물은 약 0.5 시간 내지 약 1.5 시간동안 발효된다. 한 구현예에서, 상기 반응 혼합물은 약 1 시간 동안 발효된다. 반응 혼합물의 온도 및 산소 농도는 발효하는 동안 대략적으로 유지된다는 점을 유의하여야 한다. 바람직하게는, 반응 혼합물은 발효하는 동안 진탕되며, 더 바람직하게는 반응 혼합물은 발효하는 동안 교반된다.
마지막으로 상기 반응 혼합물은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물로부터 분리된다. 바람직하게는, 반응 혼합물 중에 있는 모든 고형분이 제거된다. 반응 혼합물을 여과하여 고형분을 제거할 수 있다. 보다 바람직하게는, 반응 혼합물을 원심분리하여 고형분을 제거한다. 보다 더 바람직하게는, 반응 혼합물을 원심분리 및 여과하여 고형분을 제거한다.
이어서, 여과된 반응 혼합물은 유기 용매와 접촉시켜 발효를 중단시킨다. 상기 유기 용매는 테아플라빈을 적당량 용해하여야 하며(즉, 테아플라빈은 선택된 용매 내에서 난용성이지 않아야 한다) 적어도 수용액과 부분적으로 비혼화성이어야 한다 (즉, 수성상 및 유기상은 혼합 후 두 상을 형성 하여야 한다.) 상기 유기 용매는 상기 기준에서 당업자에 의해 과도한 실험 없이 선택될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 유기 용매는 에틸 아세테이트이다. 유기 용매의 혼합물은 추출 방법에서 사용될 수 있으며, 단, 제공된 용매 혼합물은 상기 기준을 만족하여야 한다는 것을 유의하여야 한다.
상기 수용액으로부터 테아플라빈의 추출에 필요한 유기 용매의 부피에 대한 계산은 당업자의 능력 범위 내에서 잘 해낼 수 있다. 바람직하게는 수용액으로부터 테아플라빈을 추출하기 위해 사용된 유기 용매의 부피는 수용액의 부피의 약 1/3 내지 약 3 배이다. 보다 바람직하게는 수용액으로부터 테아플라빈을 추출하기 위해 사용된 유기 용매의 부피는 수용액의 부피와 대략적으로 동일한 양이다.
상기 수용액은 실질적으로 모든 테아플라빈을 유기상으로 추출하기 위해 필요한 많은 양의 유기 용매와 접촉될 수 있다. 수용액으로부터 테아플라빈을 완전히 추출하기 위해 필요한 유기 용매의 양은 과도한 실험 없이 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
통상적으로, 분액 깔대기 (separatory funnel) 에서 유기 용매와 수성 용액을 접촉하는 것은, 테아플라빈을 수성 용액으로부터 유기 용매로 추출하기에 충분하다. 그러나, 어떤 경우, 유기 용매 및 수성 용액은 자기적 교반, 기계적 교반, 초음파 등과 같은 당업자에게 공지된 기타 방법에 의해 접촉될 수 있다.
이어서, 테아플라빈을 함유하는 유기 용매는 묽은 염기성 수용액과 접촉시킨다. 바람직하게는, 상기 염기는 히드록시드, 탄산염 또는 중탄산염이다. 한 구현예에서, 묽은 염기성 수용액은 5 % NaHCO3이며, 이것은 분액 깔대기에서 유기 용매와 접촉된다. 이론에 속박되지 않는 한, 유기 용매와 묽은 염기의 접촉에 의해, 테아플라빈 혼합물로부터 염기 가용성 불순물이 제거될 것으로 여겨진다. 다음으로, 상기 용매는, 바람직하게는 분액 깔대기를 사용하여, 묽은 염기성 수용액으로부터 분리된다.
한 구현예에서, 추출 종료 후 반응 혼합물 중의 테아플라빈 혼합물의 농도는 비휘발성 물질의 총 질량의 약 5 % 내지 약 90 % 를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 추출 종료 후 반응 혼합물 중의 테아플라빈 혼합물의 농도는 비휘발성 물질의 총 질량을 기준으로 약 10 % 내지 약 80 % 를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 추출 종료 후 반응 혼합물중의 테아플라빈 혼합물의 농도는 비휘발성 물질의 총 질량의 약 20 % 내지 약 70 % 를 포함한다.
이어서, 분리된 유기상은 크로마토그래피 매질 (chromatographic media) 과 접촉하여 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 제공한다. 바람직하게는, 유기 용액은 크로마토그래피 매질와 접촉하기 전에 농축된다. 크로마토그래피 매질는 당업계에 공지된 임의의 크로마토그래피 지지체일 수 있다. 한 구현예에서, 크로마토그래피 매질은 실리카겔이다. 바람직하게는 테아플라빈의 혼합물을 함유하는 유기 용매는 컬럼 내에 패킹된 크로마토그래피 매질에 로딩하고, 제 2 유기 용매로 용출하여 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 제공한다. 한 구현예에서, 테아플라빈의 혼합물을 함유하는 유기 용매를 실리카겔 컬럼에 로딩하고 헥산중의 40 % 에틸 아세테이트로용출한다. 어떤 상황하에서는, 크로마토그래피 매질의 뱃치 사용이 바람직할 수 있다. 크로마토그래피 매질의 형태 및 양의 선택, 용출 용매의 선택, 컬럼의 길이 등은 당업자의 범주에 속한다.
한 구현예에서, 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물은 크로마토그래피 매질로부터 용출 후에는 실질적으로 순수(즉, 다른 물질이 없음)하다. 바람직하게는, 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물은 당업자에게 공지된 통상적인 분석 방법에 의해 측정하여, 95 % 초과, 더 바람직하게는 97 % 초과 및 가장 바람직하게는 99 % 초과의 순도를 나타낸다.
테아플라빈 혼합물 중 개별 테아플라빈의 비율은 녹차잎내의 개별 테아플라빈의 비율을 반영하는 것이므로, 따라서, 녹차잎의 원료에 따라 변한다. 한 구현예에서, 테아플라빈의 혼합물은 약 40 % 및 약 50 % 테아플라빈, 약 15 % 내지 약 25 % 의 테아플라빈-3-갈레이트, 약 10 % 내지 약 14% 의 테아플라빈-3'-갈레이트, 및 약 15 % 내지 약 25 % 의 테아플라빈-3,3'-디갈레이트를 함유한다. 한 구현예에서, 테아플라빈의 혼합물은 약 47 % 테아플라빈, 약 19 % 의 테아플라빈-3-갈레이트, 약 14 % 의 테아플라빈-3'-갈레이트, 및 약 20 % 의 테아플라빈-3,3'-디갈레이트를 함유한다.
두번째 구현예에서, 본 발명은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트를 각각 개별 화합물로써 제조하는 방법을 제공한다. 우선, 차 폴리페놀을 수성 완충액과 접촉시켜 반응 혼합물을 형성한다. 차 폴리페놀은 시판되는 것을 구입(Yuan Xiang Biopharm Company, Ltd., Shanghai, China)할 수 있으며, 공급자에 의해 제공된 것을 사용할 수 있다. 폴리페놀 옥시다아제(Worthington Biochemical Corporation, Lakewood, NJ) 를 상기 반응 혼합물에 첨가한다. 전형적으로, 폴리페놀 옥시다아제 대 차 폴리페놀의 비는 약 0.5:1 내지 약 1:1 (w/w 기준) 으로 변한다. 나머지 방법은 크로마토그래피 매질 상에서의 최종 정제를 제외하고 녹차잎으로부터 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 형성하기 위하여 상술한 것과 같은 방법으로 수행될 수 있다. 바람직하게는 테아플라빈의 혼합물은 다수의 다른 분획으로 분할되고, 이것은 개별적으로 크로마토그래피 매질의 컬럼에 공급되어 화합물의 혼합물이 아닌 각각 개별 단일 화합물로서 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트가 제공된다. 테아플라빈의 혼합물을 개별 단일 화합물인 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트로 분해하기 위해 필요한 파라미터의 선택 (즉, 분획수, 크로마토그래피 매질의 형태 및 양의 선택, 용출 용매의 선택, 컬럼의 길이, 등) 은 당업자의 재량에 속한다.
치료 용도
본 발명의 화합물은, 각종 질병 및 장애 치료에 사용 가능하며, 고지혈증, 관상 동맥 질환, 중풍, 죽상경화심혈관 질환, AIDS, 당뇨병, 산화된 저밀도 지단백질 수준, 폰 빌레브란트(von Willebrand) 병, 백혈구 감소증, 뇌경색증, 치매 및신체적 장애, 지방간을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 이들 질병 및 장애 증상의 기재는 문헌에서 찾을 수 있다 (예컨대, Merck Manual, 16판). 바람직한 구현예에서, 본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물은, 고지혈증을 앓는 환자, 바람직하게는 인간에게 투여된다.
또한, 한 구현예에서, 본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물은 바람직하게는 인간인 환자에게, 상기 질병 또는 조건에 대항하는 예방책으로 투여된다. 따라서, 본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물은 임의의 상기 질병 또는 장애 소인을 갖는 환자에게 예방책으로 투여된다. 따라서, 본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물은 하나의 질병 및 장애의 치료 및 예방 그리고 동시에 다른 질병의 치료 및 예방에 사용된다 (예컨대, 뇌경색증을 치료하며 고지혈증을 예방).
본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물의 상기한 각종 질병 및 장애의 치료 및 예방에 대한 적절성은 당업계 공지의 방법으로 측정할 수 있다. 따라서, 상기 질병 및 장애의 치료 및 예방을 위해 본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물을 검정하고 사용하는 것은 당업자가 능히 실시할 수 있다.
치료/예방 투여
본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물은 인간 및 동물용 의약에 유리하게 사용될 수 있다. 상기 4.3 섹션에 기재된 바와 같이, 본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물은, 상기한 각종 질병 및 장애의 치료 및 예방에 유용하다.
상기 각종 질병 및 장애의 치료 또는 예방에 사용시, 본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물은 단독으로 또는 다른 시약과 조합으로 투여 또는 적용된다. 본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물은 또한 단독 또는, 본 발명의 다른 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물을 포함하는 기타 약학적 활성제와 조합되어 투여 또는 적용된다.
본 발명은, 본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 환자에게 투여하는 치료 및 예방법을 제공한다. 환자는 바람직하게는 포유류, 가장 바람직하게는 인간이다.
본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물은 바람직하게는 경구 투여되며, 이는 본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물이 혈류 내로 배출되게 한다. 본 발명의 화합물 및/또는 그의 약학적 조성물은 경구 서방성 시스템을 통해 전달 가능하다. 한 구현예에서, 중합성 물질을 경구 서방성 전달에 사용한다. 바람직한 중합체는 소듐 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스 및 히드록시에틸셀룰로오스를 포함한다 (가장 바람직하게는 히드록시프로필메틸셀룰로오스임). 다른 바람직한 셀룰로오스 에테르가 문헌에 공지되어 있다 (Alderman,Int. J. Pharm. Tech. & Prod. Mfr.1984, 5(3) 1-9). 약물 방출에 영향을 끼치는 인자는 당업자에게 공지이며, 문헌에 공지되어 있다 (Bamba 등, Int. J. Pharm. 1979, 2, 307).
다른 구현예에서, 장 코팅된(entric-coated) 제제를 서방성 경구 투여에 사용 가능하다. 바람직한 코팅 물질은, pH 의존 용해도를 가진 중합체 (즉, pH조절 방출), 느린 또는 pH 의존성 팽창 속도를 가지는 중합체, 용해 또는 분해 (즉, 시간 조절 방출), 효소에 의해 분해되는 중합체 (즉, 효소 조절된 방출), 및 압력의 증가에 의해 분해되는 단단한 층을 형성하는 중합체 (즉, 압력 조절된 방출)를 포함한다.
다른 구현예에서, 삼투 전달 시스템을 서방성 경구 투여에 이용한다 (Verma 등,Drug Dev. Ind. Pharm.,2000, 26:695-708). 또 다른 구현에서는, OROSTM삼투 장치를 경구 서방성 방출 전달 장치에 이용한다 (Theeuwes 등, 미국특허 제 3,845,770 호; Theeuwes 등, 미국 특허 제 3,916,899 호).
약학적 조성물
본 발명의 조성물은 일반적으로 바람직하게는 정제 형태로, 약학적으로 허용가능한 비히클 적절량과 함께 본 발명의 화합물의 치료학적 유효량을 함유하며, 환자에게 투여 적절한 형태를 제공한다. 본 발명의 화합물은 약 5% 내지 약 50% (w/w), 바람직하게는 약 11% 수준으로 약학적 조성물 내에 존재할 수 있다. 투여량 (dose) 당 본 발명의 화합물의 총량은 약 70 내지 약 210mg 이다.
환자에게 투여시, 본 발명의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 비히클은 바람직하게는 무균성이다. 물, 식염수 및 수성 덱스트로오스 및 글리세롤 용액을 액체 비히클로 사용한다. 다른 적절한 약학적 비히클은, 전분, 락토스, 슈크로오스, 젤라틴, 몰트(malt), 쌀, 밀가루, 쵸크, 실리카젤, 소듐 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 소듐 클로라이드, 건조 스킴 밀크(dried chimmilk), 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물 및 에탄올 등을 포함한다. 본 발명의 약학적 조성물은, 필요시, 또한 소량의 습윤제 또는 유화제 또는 pH 완충제를 포함 가능하다. 또한, 보조제, 안정화제, 점증제, 윤활제 및 착색제를 사용할 수 있다. 약학적 조성물 제조에 관한 일반 내용은 공지이다 (Remington, "The Science and Practice of Pharmacy" 19 판).
본 발명의 화합물을 함유하는 약학적 조성물은, 전통적인 혼합, 용해, 과립화, 드래지 (dragee) 형성, 레비게이션 (levigation), 유화, 캡슐화, 트래핑화 또는 동결 건조 과정에 의해 제조 가능하다. 약학적 조성물은, 하나 이상의 생리적으로 허용가능한 담체, 희석제, 부형제 및 보조제를 사용하여 통상의 방법으로 제형화되며, 이는 약학적으로 사용가능한 제제로 본 발명의 화합물을 가공하는 것을 보조한다.
본 발명의 약학적 조성물은, 용액, 현탁액, 유액, 정제, 환제, 펠릿, 캡슐 함유 액체, 분말, 서방성 제형물, 에멀젼 또는 기타 경구 투여에 적당한 임의의 형태를 가질 수 있다. 한 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 비히클은 캡슐이다 (Grosswald 등, 미국 특허 5,698,155 참조). 적절한 약학적 비히클의 다른예는 당업계 공지이다 (Remington, "The Science and Practice of Pharmacy", 19판 1995). 경구 투여되는 약학적 조성물은, 하나 이상의 임의 약제, 예컨대 프룩토스, 아스파탐 또는 사카린과 같은 감미제, 페퍼민트과 같은 향미제, 윈터그린 오일 또는 체리 착색제 및 보존제를 함유하여, 먹기 좋은 약학적 조성물을 제조할 수 있다. 또한, 정제 또는 환제의 경우, 약학적 조성물을 코팅함으로써, 위장관내에서의 분해 및 흡수를 지연시켜, 장기간에 걸친 지속적 활성을 제공할 수 있다. 삼투 활성 드라이빙 화합물을 감싼 선택 투과성 막 또한 본 발명의 화합물의 경구 투여에 적절하다. 이들 후자의 플랫폼에서, 캡슐을 감싼 환경에서 방출되는 유체는 드라이빙 화합물에 의해 흡수되는데, 이는 팽창함에 따라 구멍을 통하여 시약 또는 시약 조성물을 대치하는 것이다. 이러한 전달 플랫폼은, 즉각 방출 제제의 스파이크 프로필과 비교하여, 본질적으로 0 차의 전달 프로필을 제공한다. 글리세롤 모노스테아레이트 또는 글리세롤 스테아레이트와 같은 시간 지연 물질을 또한 사용 가능하다. 경구용 조성물은, 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 사카린, 셀룰로오스, 마그네슘 카보네이트 등의 표준 비히클을 함유 가능하다. 이들 비히클은 바람직하게는 약학 등급품이다.
예컨대, 현탁액, 엘릭셔 및 용액과 같은 경구 액체 제제를 위해, 적절한 부형제 또는 희석제는 물, 식염수, 알킬렌글리콜 (예컨대, 프로필렌 글리콜), 폴리알킬렌글리콜 (예컨대, 폴리에틸렌 글리콜) 오일, 알콜, pH 4 내지 6의 약산성 완충액 (예컨대, 약 5.0mM 내지 약 50.0mM의 아세테이트, 시트레이트, 아스코르베이트) 등을 포함한다. 추가로, 향미제, 보존제, 착색제, 담즙산염, 아크릴카르니틴 등을 첨가 가능하다. 볼 협측 (buccal) 투여를 위해서는, 약학적 조성물은 정제, 마름모형 정제 등 형태로 전통적 방식으로 제형화된 형태일 수 있다.
본 발명의 화합물이 산성 또는 염기성인 경우, 자유 산 또는 자유 염기, 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 수화물로서 임의의 상술한 제형물에 포함될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 염은, 자유 산 또는 염기의 활성을 실질적으로 유지한 것으로, 산 또는 염기와의 반응에 의해 제조될 수 있으며, 해당 자유산 또는 염기 형태에 비해 수성 또는 기타 양자성 용매에 보다 가용성인 경향을 가진다.
치료적 투여량
본 발명의 화합물 및/또는 이의 약학 조성물은 통상적으로 의도하는 목적 달성에 충분한 양으로 사용될 것이다. 상기 질병 또는 장애를 치료 또는 예방하는데 사용하기 위해, 본 발명의 화합물 및/또는 이의 약학 조성물은 치료에 유효한 양으로 투여 또는 적용된다.
본원에 기재된 특정 질병 또는 상태의 치료에 효과적일 본 발명의 화합물 및/또는 이의 약학 조성물의 양은 질병 또는 상태의 성질에 따라 달라질 것이며, 당업계에 공지된 표준 임상적 기법에 의해, 그리고 특정 질병 또는 장애를 치료 또는 예방하는데 숙련된 의사에 의해 결정될 수 있다. 또한, 시험관 내 또는 생체 내 분석이 임의로 최적 투여량 범위의 확인에 일조하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물 및/또는 이의 약학 조성물의 투여량은 물론, 다른 인자중에서, 치료되는 환자, 환자의 체중, 통증의 심각성, 투여 방식 및 처방 의사의 판단에 따라 달라질 것이다.
예를 들면, 투여물은 단일 투여, 복합 적용 또는 제어된 방출에 의해 약학 조성물에 전달될 수 있다. 한 구현예에 있어서, 본 발명의 화합물은 서방성 경구 투여에 의해서 전달된다. 바람직하게는, 상기 구현예에 있어서, 본 발명의 화합물은 1 일 2 회 (더욱 바람직하게는, 1 일 1 회) 투여된다. 투여는 간헐적으로 반복될 수 있고, 단독으로 또는 다른 약물과의 배합물로 제공될 수 있으며, 질환 상태 또는 질병의 효과적 치료에 요구되는 한 계속될 수 있다.
경구 투여에 적합한 투여량 범위는 투여되는 본 발명의 화합물의 성질에 따라 달라지지만 (예를 들면, 테아플라빈을 함께 투여하거나, 또는 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 또는 테아플라빈-3,3'-디갈레이트를 각각 별도의 화합물로서 투여하는 경우), 통상적으로 체중 1 ㎏ 당 본 발명의 화합물 약 0.001 ㎎ 내지 약 200 ㎎ 이다. 한 구현예에 있어서, 투여량 범위는 약 0.1 ㎎/㎏ 내지 약 5 ㎎/㎏ 이다. 투여량 범위는 당업자에게 공지된 방법에 의해서 용이하게 결정될 수 있다. 유효 투여량은 시험관 내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유도되는 투여량-응답 곡선으로부터 외삽될 수 있다. 상기 동물 모델은 및 시스템은 당업계에 충분히 공지되어 있다.
본 발명의 화합물은 바람직하게는 사람에게 사용하기 전에, 원하는 치료 또는 예방 활성에 대해, 시험관 내 및 생체 내에서 분석된다. 예를 들면, 생체외 분석은 본 발명의 특정 화합물 또는 본 발명의 화합물의 배합물의 투여가 바람직한지 여부를 결정하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 동물 모델 시스템을 이용하여 효과적이고 안전한 것으로 증명될 수 있다.
바람직하게는, 본원에 기재된 본 발명의 화합물 및/또는 이의 약학 조성물의 치료적 유효 투여량은 실질적 독성없이 치료적 잇점을 제공할 것이다. 본 발명의 화합물 및/또는 이의 약학 조성물의 독성은 표준 약학 과정을 사용하여 결정될 수 있으며, 당업자에 의해서 용이하게 확인될 수 있다. 독성 효과와 치료 효과간의 투여량 비가 치료 지수이다. 본 발명의 화합물 및/또는 이의 약학 조성물은 바람직하게는 질병 및 장애 치료에서 특히 높은 치료 지수를 나타낼 것이다. 본원에 기재된 본 발명의 화합물 및/또는 이의 약학 조성물의 투여량은 바람직하게는 독성이 거의 없거나 전혀 없는 유효 투여량을 포함하는 순환 농도 범위내일 것이다.
병용 치료
본 발명의 특정 구현예에 있어서, 본 발명의 화합물 및/또는 이의 약학 조성물은 하나 이상의 다른 치료제와의 배합 치료에 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물 및/또는 이의 약학 조성물 및 치료제는 부가적으로 또는, 더욱 바람직하게는 상승적으로 작용할 수 있다. 바람직한 구현예에 있어서, 본 발명의 화합물 및/또는 이의 약학 조성물은 또다른 치료제의 투여와 동시에 투여된다. 또 다른 구현예에 있어서, 본 발명의 화합물 및/또는 이의 약학 조성물은 또다른 치료제의 투여전 또는 투여후에 투여된다.
특히, 한가지 바람직한 구현예에 있어서, 본 발명의 화합물 및/또는 이의 약학 조성물은 고지혈증, 관상 동맥 심장 질환, 죽상경화심혈관 질환, AIDS, 당뇨병, 산화된 저밀도 지단백질 수준, 폰 빌레브란트(von Willebrand) 병, 백혈구 감소증, 뇌경색증, 치매 및 신체적 장애, 지방간을 치료 또는 예방하는데 사용되는 다른 치료제와의 병용 치료에 사용될 수 있다.
식이요법 보충 조성물
본 발명의 식이요법 보충 조성물은 전형적으로 사용자에게 적절한 투여 형태를 제공하기 위해서, 적합한 양의 식이요법 보충 비히클와 함께, 바람직하게는 정제된 형태의 본 발명의 화합물을 하나 이상 함유한다.
발명의 요약
본 발명은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 제조하는 방법 및 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트, 각각을 별개의 화합물로서 제조하는 방법, 다양한 질병을 치료 또는 예방하기 위해 테아플라빈 혼합물 또는 개별의 테아플라빈을 사용하는 방법을 개시한다. 중요하게는, 상기 방법은 최소의 비용으로 대규모로 효과적으로 수행된다.
한 면에서, 본 발명은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 제조하는 방법을 제공하고 있다. 녹차 잎을 수성 완충액과 접촉시켜 반응 혼합물을 형성시킨다. 다음으로, 상기 반응 혼합물을 산소와 접촉시켜 발효를 개시하고, 충분한 시간동안 발효시켜 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 형성시킨다. 다음으로, 발효를 종료시키고, 상기 반응 혼합물을 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물로부터 분리한다.
다른 면에서, 본 발명은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 상기 약학적 조성물은 통상 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물, 및 적합한 부형제(exipient), 담체(carrier) 또는 희석제를 포함한다. 조성물은 수의학용 또는 인체용으로 제형화될 수 있다.
또 다른 면에서, 본 발명은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 포함하는 다이어트 보충 조성물을 제공한다. 상기 다이어트 보충 조성물은 통상 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물, 및 적합한 다이어트 보충 비히클을 포함한다.
또 다른 면에서, 본 발명은, 이에 제한되지는 않으나, 고지혈증, 관상 동맥 심장 질환 (coronary haear disease), 중풍, 죽상경화심혈관 질환, 당뇨병, 루코페니아 (leucopenia), 뇌경색증, 치매 또는 신체적 장애(disorder)를 포함하는 다양한 질병을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 그러한 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 대안적으로, 상기 방법은 상기 테아플라빈 혼합물의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 그러한 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다.
또 다른 면에서, 본 발명은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 또는 테아플라빈 3,3'-디갈레이트을 각각 별개의 화합물로서 제조하는 방법을 제공한다. 차 폴리페놀을 수성 완충액 및 폴리페놀 옥시다아제와 접촉하여 반응 혼합물을 형성시킨다. 다음으로, 상기 반응 혼합물을 산소와 접촉시켜 발효를 개시하고, 충분한 시간동안 발효시켜 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 형성시킨다. 다음으로 발효를 종료시키고, 상기 반응 혼합물을 분리하여, 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트 각각을 별개의 화합물로 제공한다.
또 다른 면에서, 본 발명은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 또는 테아플라빈 3,3'-디갈레이트을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 상기 약학적 조성물은 통상 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트, 테아플라빈 3,3'-디갈레이트, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물, 및 적합한 비히클, 담체 또는 희석제를 포함한다. 상기 약학적 조성물은 수의학용 또는 의약용으로 제형화될 수 있다.
또 다른 면에서, 본 발명은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 또는 테아플라빈 3,3'-디갈레이트를 포함하는 다이어트 보충 조성물을 제공한다. 상기 다이어트 보충 조성물은 통상 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트, 테아플라빈 3,3'-디갈레이트 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물, 및 적합한 다이어트 보충 비히클을 포함한다.
또 다른 면에서, 본 발명은, 이에 제한되지는 않으나, 고지질혈증, 관상 동맥 심장 질환, 중풍, 죽상경화심혈관 질환, 당뇨병, 루코페니아, 뇌경색증, 치매 또는 신체적 장애를 포함하는 다양한 치료학적 증상을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트, 테아플라빈 3,3'-디갈레이트, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 그러한 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 대안적으로, 상기 방법은 상기 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 또는 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 약학적 조성물의 치료학적으로 유효량을 그러한 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다.
본 발명은 상세히 기술되는 하기 실시예, 본 발명의 화합물의 제조 및 생물학적 활성의 분석 방법에 의해 추가로 정의된다. 당업자는 본 발명의 범위를 벗어나지 않고서, 물질 및 방법에 다양한 변경이 이루어질 수 있음은 자명할 것이다.
실시예 1: 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈-3,3'-디갈레이트의 혼합물의 제조 및 분리
FML Tea Trading Co., Ltd. (Xiamen, China) 에서 입수한 녹차잎 (100 ㎏) 및 0.15 M 포스페이트 완충액 (1000 L, pH 6.4) 을 30 ℃ 에서 유지하는 슬러리 발효기에 첨가하였다. 전체 산소 농도가 22 % 가 될 때까지 산소를 20 L/초의 유속으로 발효기에 첨가하여 발효를 개시하였다. 반응 혼합물을 교반하고, 22 % 산소 분위기하에서 약 1 시간 동안 발효시켰다.
반응 혼합물을 원심분리하고, 상청액을 기울여따랐다. 상청액을 여과하여 고체를 제거하였다. 에틸 아세테이트 약 1000 L 를 발효가 종료된 수성 여과액에 첨가하고, 층을 분리하였다. 유기층을 5 % NaHCO31000 L 로 3 회 세정하고, 진공에서 에틸 아세테이트를 제거하였다. 이어서, 잔류물을 40 % 에틸 아세테이트/헥산 소량에 용해시키고, 실리카 겔 150 ㎏ 을 함유한 컬럼에 로딩하고, 40 % 에틸 아세테이트/헥산으로 용출시켜 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈-3,3'-디갈레이트의 혼합물 (전형적으로 약 50 ㎏ 내지 60 ㎏) 을, 역상 고압 역상 크로마토그래피 (HPLC) 로 측정한 순도 99.3 % 로 생성하였다. 테아플라빈의 혼합물은 HPLC-MS 로 측정하여, 46.8 % 테아플라빈, 18.5 % 테아플라빈-3-갈레이트, 13.7 % 테아플라빈-3'-갈레이트 및 20.3 % 테아플라빈-3,3'-디갈레이트를 포함하였다.
실시예 2: 각각 별개의 화합물로서의 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈-3,3'-디갈레이트의 제조 및 분리
98.6 % 카테킨 (45.6 % 에피갈로카테킨 갈레이트) 를 함유하는 차 폴리페놀 (100 ㎏) (Yuan Xiang Biopharm Company, Ltd. Shanghai, China), 0.15 M 포스페이트 완충액 (pH 6.4) 1000 L 및 폴리페놀 옥시다아제 10 ㎏ 을 25 ℃ 에서 교반하면서 슬러리 발효기에 첨가하였다. 전체 산소 농도가 22 % 가 될 때까지 산소를 20 L/초의 유속으로 발효기에 첨가하여 발효를 개시하였다. 반응 혼합물을 교반하고, 22 % 산소 분위기하에서 약 40 분간 발효시켰다.
반응 혼합물을 원심분리하고, 상청액을 기울려따랐다. 상청액을 여과하여 고체를 제거하였다. 에틸 아세테이트 약 1000 L 를 발효가 종료된 수성 여과액에 첨가하고, 층을 분리하였다. 유기층을 5 % NaHCO31000 L 로 3 회 세정하고, 진공에서 에틸 아세테이트를 제거하였다. 이어서, 잔류물을 40 % 에틸 아세테이트/헥산 소량에 용해시키고, 20 개의 별도 분획으로 나누었다. 이어서, 각각의 분획을 실리카 겔 150 ㎏ 을 함유하는 컬럼에 로딩하고, 40 % 에틸 아세테이트/헥산으로 용출시켜 테아플라빈 (25 ㎏), 테아플라빈-3-갈레이트 (9 ㎏), 테아플라빈-3'-갈레이트 (6 ㎏) 및 테아플라빈-3,3'-디갈레이트 (10 ㎏) 을 각각 별도의 화합물로서 생성하였다. 이어서, 상기 테아플라빈들을 에탄올로부터 재결정화하여 추가로 정제하였다. HPLC 로 측정한 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈-3,3'-디갈레이트의 최종 순도는 각각 99.1 %, 98.7 %, 97.8 % 및 99.3 % 였다. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈-3,3'-디갈레이트의 구조를 HPLC-MS 로 측정하였다.
실시예 3: 테아플라빈 연질 젤의 제조
밀랍 (2 ㎏)을 80℃에서 30 분간 교반하면서 올리브유 (500 ㎏)에 첨가하고, 40℃로 냉각시켰다. 실시예 1의 방법을 통해 제조된 테아플라빈의 혼합물 (100 ㎏)을 상기 밀랍과 올리브유의 혼합물 내에서 완전히 혼합하였다. 수득한 테아플라빈, 밀랍 및 올리브유의 혼합물을 젤라틴 분말로 이루어진 젤에 넣어, 연질 젤 캡슐을 제조하였다. 각각의 연질 젤 캡슐은 700 ㎎이고, 그 중 약 75 ㎎이 테아플라빈의 혼합물이다.
실시예 4: 래트에서 지질 프로파일을 상승시키기 위한 테아플라빈의 용도
체중이 100 g 내지 130 g 인 수컷 Sprague-Dawley 래트를 10 마리씩 9 개 군으로 나누었다. 상기 동물을, 22 ℃ 내지 24℃에서 유지되는 실내에서 바닥이 망사로 된 스테인리스 강철 우리 안에 개별적으로 가두었다. 이들을 하기 표 1에기재된 바와 같이 똑같은 먹이 및 물을 먹였다. 또한, TF1-1, TF1-2 또는 TF1-3 군의 래트에게는 순수한 테아플라빈을 각각 1 ㎎/㎏/일, 2 ㎎/㎏/일 및 4 ㎎/㎏/일의 투여량으로 먹였다. TF2A-2, TF2B-2 또는 RF3-2 군의 동물에게는 순수한 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈-3,3'-디갈레이트를 각각 2 ㎎/㎏/일의 투여량으로 먹였다. CA-1 및 CA-2 군의 동물에게는 카테킨을 각각 1 ㎎/㎏/일 또는 2 ㎎/㎏/일의 투여량으로 먹였다.
샘플링하기 전에 Sprague-Dawley 래트에게 상기 규정식을 8 주간 공급하였다. 샘플링 전에는 래트를 12 시간 동안 먹이지 않았다. 혈액 샘플을 채취하기 1 시간 전에 래트에게 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트, 테아플라빈-3,3'-디갈레이트 또는 카테킨을 투여하였다.
표 2 에 나타난 바와 같이, 테아플라빈 군에 속한 래트는 대조군과 비교했을 때, 총 콜레스테롤 ("TC"), 저밀도 지질단백질-콜레스테롤 ("LDL-C") 및 트리글리세라이드 ("TG")의 투여량 의존성 혈장 수준이 크게 감소했다. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트, 테아플라빈-3,3'-디갈레이트는 TC, LDL-C 및 TG의 혈장 수준을 감소시키는 데 있어서 카테킨보다 더 효과적이었다.
실시예 5: 가볍거나 중간 정도의 고지혈증이 있는 대상에 대한 테아플라빈 혼합물의 효과
Choleve™ 은 실시예 1에 기재된 대로 제조한 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈-3,3'-디갈레이트의 혼합물이다. 임상 시험은 이중맹검, 무작위, 위약대조, 유사-그룹 시험이었고, 12 주간 지속되었다.
환자는 저지방 규정식을 하는, 가볍거나 중간 정도의 고지혈증 (LDL-C 130-190 ㎎/㎗)이 있는 19 세 이상으로서, 중국의 6 개 병원의 외래 진료소로부터 모집하였다. 트리글리세라이드의 기선(baseline)이 350 ㎎/㎗ 이거나 통제되지 않는 고혈압 (≥160/95 ㎜Hg)이 있는 환자는 제외되었다. 폐, 혈액, 간, 위장관 또는 신장 질환이 진행 중이거나, 전암 또는 암 질환, 당뇨병, 갑상선 기능장애가 있거나, 관상 동맥 심장 질환 또는 기타 죽상동맥경화성 질환의 병력이 있는 환자도 또한 제외되었다. 통상적 임상 화학 또는 혈액학적 파라미터 중에서 병리학적 수치를 나타냈거나, 32% 초과의 일상 에너지를 지방으로부터 섭취했거나, 신체질량지수가 35 이상인 환자 또한 제외되었다. 지질 대사작용을 방해할 수도 있는 임의의 지질 강하 의약품 또는 약물, 혈압강하 약물을 포함한 심장 또는 혈관작용 의약품, 갑상선 호르몬, 경구용 피임약, 순환 호르몬 대체요법, 식품보조제 (예를 들면, 어유, 투여량 400 ㎎/일 초과의 니아신, 식이섬유 보충제), 또는 항산화제를 복용하는 경우의 대상 또한 제외되었고, 연구 과정 중에는 상기 의약품을 복용하지 않도록 금지시켰다. 환자들은 12-주 연구 중에 일정량의 규정식 및 신체활동 수준을 유지하도록 요구되었다.
상기 포함 및 제외 기준은 240 명의 환자에 의해 충족되었다. 무작위 추출 후, 진료소 방문 일정을 제 4 주, 제 8 주 및 제 12 주째 아침 시간으로 12 시간 동안 금식한 후로 잡았다. 각각의 방문에서 측정한 파라미터는 체중, 혈압 및 심장박동수를 포함하였다. 대상들은 복용한 연구용 캡슐의 수, 동시에 복용한 의약품 및 대상의 일상에서의 좋지 못한 경험 등을 기록하도록 요구되었다. 연구용 캡슐은 기선, 제 4 주 및 제 8 주째에 공급되었다. 영양 섭취에 대해서는, 기선 전에 그리고 치료 8 주 후에 대상에 의해 작성된 3일치 식단 기록을 사용하여 분석하였다. 지질 및 지질단백질 농도는 -2 주, 0 주, 4 주 및 12 주 째에 측정하였다. 지질 및 지질단백질을 표준 실험실 절차에 따라 효소 분석하였다. 혈청 화학 및 혈액학적 시험을 포함한 시험결과를 자동 생화학 장치 (Sybchron Clinical system LX 20, Beckman Coulter, Inc., Shanghai Representative Office Room 3203-3205, Hong Kong Plaza, South Building, 283 Huai Hai Zhong Road, Shanghai, China 200021) 상에서 시험하였다. 아데노신 디포스페이트로써 혈소판 응집을 유도하였고, 혈소판 응집률은 915 ㎚에서의 광학 밀도에 의해 측정하였다.
240 명의 대상을 무작위 추출하여 연구에 참여시켰고, 220 명의 대상이 실험을 마쳤다. 기선 특성은 표 1 에 나타내었다. 모든 대상들은 아시아인이었고, 치료군 내 대상의 95% 및 위약군 내 대상의 88%가 연구를 완료하였다. 14 명의 대상은 재방문하지 않았고, 5 명의 대상은 요구에 따라 연구를 중단했으며, 1 명의 대상은 프로토콜을 어겨서 중단되었다.
Choleve™를 경구 투여한지 4 주 및 12 주 후에, 대상의 혈청 LDL-C 수준이 시작 시 (P=0.0001)의 기선에 비해 9.6% (4.08 mmol/ℓ- 3.68 mmol/ℓ) 및 16.4% (4.08 mmol/ℓ-3.40 mmol/ℓ)만큼 감소하였다 (표 3 및 4 참조). 동시에, Choleve™은 혈청 TC 수준 (P=0.0001)을 6.7% 및 11.3% 만큼 감소시켰다. 한편, 위약군의 LDL-C 및 TC 수준은 4 주 및 12 주 후에도 별다른 변화를 보이지 않았다.그러나, 12 주의 치료 후에 Choleve™와 위약군 사이의 TG 및 고밀도 지질단백질 ("HDL") 수준에는 별다른 변화가 없었다.
표 5 는 Choleve™가 혈소판 응고에 영향이 없음을 나타낸다.
Choleve™를 경구 투여한지 12 주 후에, 추출물은 혈청 총 콜레스테롤 및 LDL-C를 상기에 나타난 바와 같이 각각 11.3% 및 16.4% 만큼 감소시켰고, 이는 관상 동맥 심장 질환의 치료 및 예방에서의 Choleve™의 잠재력을 나타낸다. 상기 임상 시험 중에 Choleve™에 대한 불리한 반응은 일어나지 않았으며, 이는 Choleve™의 안전성을 입증한다.

Claims (62)

  1. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈-3,3'-디갈레이트의 혼합물을 제조하는 방법으로서, 하기 단계를 포함하는 방법:
    녹차 잎을 수성 완충액과 접촉시켜 반응 혼합물을 형성하는 단계;
    상기 반응 혼합물을 산소와 접촉시켜 발효를 개시하는 단계;
    상기 반응 혼합물을 충분한 시간동안 발효시켜, 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 형성하는 단계;
    발효를 종료시키는 단계; 및
    상기 반응 혼합물을 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물로부터 분리하는 단계.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 분리 단계가 추가로 하기를 포함하는 방법:
    상기 반응 혼합물을 유기 용매와 접촉시켜 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 용해시키는 단계;
    상기 용매를 묽은 염기성 수용액과 접촉시키는 단계;
    상기 용매를 상기 염기로부터 분리하는 단계;
    상기 용매를 크로마토그래피 매질과 접촉시키는 단계; 및
    상기 크로마토그래피 매질로부터 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 용출하는 단계.
  3. 제 2 항에 있어서, 유기 용매와 접촉하기 전에 상기 반응 혼합물로부터 고체를 제거하는 방법.
  4. 제 2 항에 있어서, 상기 매질이 실리카겔인 방법.
  5. 제 1 항에 있어서, 녹차잎 대 수성 완충액의 비가 리터당 킬로그램을 기준으로 약 1:0.5 내지 약 1:20 인 방법.
  6. 제 1 항에 있어서, 수성 완충액은 pH 6.4 에서 0.15 M 포스페이트 완충액인 방법.
  7. 제 1 항에 있어서, 상기 반응 혼합물은 약 15 ℃ 내지 약 80 ℃ 에서 발효되는 방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 상기 반응 혼합물은 약 30 ℃ 에서 발효되는 방법.
  9. 제 1 항에 있어서, 상기 반응 혼합물은 발효 동안 진탕되는 방법.
  10. 제 9 항에 있어서, 상기 반응 혼합물은 교반되는 방법.
  11. 제 1 항에 있어서, 상기 시간이 약 0.5 시간 내지 약 1.5 시간인 방법.
  12. 제 1 항에 있어서, 상기 시간이 약 1 시간인 방법.
  13. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물, 및 약학적으로 허용가능한 비히클(vehicle)을 포함하는 약학적 조성물.
  14. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물, 및 적합한 다이어트 보충 비히클을 포함하는 다이어트 보충 조성물.
  15. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 고지혈증의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 고지혈증의 치료 또는 예방 방법.
  16. 제 13 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 고지혈증의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 고지혈증의 치료 또는 예방 방법.
  17. 용기, 제 13 항의 약학적 조성물을 포함하고, 상기 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 고지혈증의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여함으로써 고지혈증을 치료 또는 예방하는 것에 대한 사용 설명서가 상기 용기에 기재된 제품.
  18. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 관상 동맥 심장 질환 (coronary haear disease)의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 관상 동맥 심장 질환의 치료 또는 예방 방법.
  19. 제 13 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 관상 동맥 심장 질환의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 관상 동맥 심장 질환의 치료 또는 예방 방법.
  20. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 중풍(apoplexy)의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 중풍의 치료 또는 예방 방법.
  21. 제 13 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 중풍의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 중풍의 치료 또는 예방 방법.
  22. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 죽상경화심혈관 질환의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 죽상경화심혈관 질환의 치료 또는 예방 방법.
  23. 제 13 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 죽상경화심혈관 질환의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 죽상경화심혈관 질환의 치료 또는 예방 방법.
  24. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 AIDS의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, AIDS의 치료 또는 예방 방법.
  25. 제 13 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 AIDS의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, AIDS의 치료 또는 예방 방법.
  26. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 당뇨병의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 당뇨병의 치료 또는 예방 방법.
  27. 제 13 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 당뇨병의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 당뇨병의 치료 또는 예방 방법.
  28. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 혈장 내 증가된 산화된 저밀도 지단백질 수준의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 혈장 내 증가된 산화된 저밀도 지단백질 수준의 치료 또는 예방 방법.
  29. 제 13 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 플라즈마 내 산화된 저밀도 지단백질 수준의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 플라즈마 내 산화된 저밀도 지단백질 수준의 치료 또는 예방 방법.
  30. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 폰 빌레브란트(von Willebrand) 병의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 폰 빌레브란트 병의 치료 또는 예방 방법.
  31. 제 13 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 폰 빌레브란트 병의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 폰 빌레브란트 병의 치료 또는 예방 방법.
  32. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 백혈구 감소증의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 백혈구 감소증의 치료 또는 예방 방법.
  33. 제 13 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 백혈구 감소증의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 백혈구 감소증의 치료 또는 예방 방법.
  34. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 지방간의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 지방간의 치료 또는 예방 방법.
  35. 제 13 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 지방간의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 지방간의 치료 또는 예방 방법.
  36. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 뇌경색증의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 뇌경색증의 치료 또는 예방 방법.
  37. 제 13 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 뇌경색증의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 뇌경색증의 치료 또는 예방 방법.
  38. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 신체적 장애의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 신체적 장애의 치료 또는 예방 방법.
  39. 제 13 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 신체적 장애의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 신체적 장애의 치료 또는 예방 방법.
  40. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈-3,3'-디갈레이트를 각각 별개의 화합물로서 제조하는 방법으로서, 하기 단계를 포함하는 방법:
    차 폴리페놀을 수성 완충액 및 폴리페놀 옥시다아제와 접촉하여 반응 혼합물을 형성시키는 단계;
    상기 반응 혼합물을 산소와 접촉시켜 발효를 개시하는 단계;
    상기 반응 혼합물을 충분한 시간동안 발효시켜, 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트의 혼합물을 형성하는 단계;
    발효를 종료시키는 단계; 및
    상기 반응 혼합물을 분리하여, 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 또는 테아플라빈 3,3'-디갈레이트 각각을 별개의 화합물로 제공하는 단계.
  41. 제 40 항에 있어서, 상기 분리 단계가 추가로 하기를 포함하는 방법:
    상기 반응 혼합물을 유기 용매와 접촉시키는 단계;
    상기 용매를 묽은 염기성 수용액과 접촉시키는 단계;
    상기 용매를 상기 염기로부터 분리하는 단계;
    상기 용매를 크로마토그래피 매질과 접촉시키는 단계; 및
    상기 크로마토그래피 매질로부터 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트 각각을 별개의 혼합물로서 용출하는 단계.
  42. 제 41 항에 있어서, 유기 용매와 접촉하기 전에 상기 반응 혼합물로부터 고체를 제거하는 방법.
  43. 제 41 항에 있어서, 상기 매질이 실리카겔인 방법.
  44. 제 40 항에 있어서, 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 또는 테아플라빈 3,3'-디갈레이트가 각각 약 97 % 초과의 순도를 갖는 방법.
  45. 제 40 항에 있어서, 차 폴리페놀 대 폴리페놀 옥시다아제의 비는 약 1:0.1 내지 약 1:2 (w/w) 인 방법.
  46. 제 40 항에 있어서, 녹차잎 대 수성 완충액의 비가 리터당 킬로그램을 기준으로 약 1:0.5 내지 약 1:20 인 방법.
  47. 제 40 항에 있어서, 완충액은 pH 6.4 에서 0.15 M 포스페이트 완충액인 방법.
  48. 제 40 항에 있어서, 상기 반응 혼합물은 약 15 ℃ 내지 약 80 ℃ 에서 발효되는 방법.
  49. 제 40 항에 있어서, 상기 반응 혼합물은 약 35 ℃ 에서 발효되는 방법.
  50. 제 40 항에 있어서, 상기 반응 혼합물은 발효 동안 진탕되는 방법.
  51. 제 48 항에 있어서, 상기 반응 혼합물은 교반되는 방법.
  52. 제 40 항에 있어서, 상기 시간이 약 0.5 시간 내지 약 1.5 시간인 방법.
  53. 제 50 항에 있어서, 상기 시간이 약 40 분인 방법.
  54. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 또는 테아플라빈 3,3'-디갈레이트, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물, 및 약학적으로 허용가능한 비히클을 포함하는 약학적 조성물.
  55. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 또는 테아플라빈 3,3'-디갈레이트, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 또는 용매화물의 치료학적 유효량을 고지혈증의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 고지혈증의 치료 또는 예방 방법.
  56. 제 54 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 고지혈증의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 고지혈증의 치료 또는 예방 방법.
  57. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트, 테아플라빈 3,3'-디갈레이트 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 수화물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물 2종 또는 3종, 및 약학적으로 허용가능한 비히클을 포함하는 약학적 조성물.
  58. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트, 테아플라빈 3,3'-디갈레이트 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 수화물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물 2종 또는 3종을 함유하는 혼합물의 치료학적 유효량을 고지혈증의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는,고지혈증의 치료 또는 예방 방법.
  59. 제 57 항의 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 고지혈증의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 고지혈증의 치료 또는 예방 방법.
  60. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트 또는 테아플라빈 3,3'-디갈레이트 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 수화물, 및 적합한 다이어트 보충 비히클을 포함하는 다이어트 보충 조성물.
  61. 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트, 테아플라빈-3'-갈레이트, 테아플라빈 3,3'-디갈레이트 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 수화물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물 2종 또는 3종, 및 적합한 다이어트 보충 비히클을 포함하는 다이어트 보충 조성물.
  62. 용기, 제 54 항 또는 제 57 항의 약학적 조성물을 포함하고, 상기 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 고지혈증의 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 투여함으로써 고지혈증을 치료 또는 예방하는 것에 대한 사용 설명서가 상기 용기에 기재된 제품.
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