JPS5843385B2 - シジミの薬効成分及びその製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は、脂質代謝改善作用を有する、従来未知のα
、β−不飽和脂肪酸のジグリセライド、シジミよりこの
化合物を含有する薬効成分を分離する方法、並びにこの
化合物を有効成分として含有する医薬組成物に関する。

古来よりシジミは肝臓病に効くとされ、シジミの薬効成
分について種々の研究がなされている。

たとえばシジミエキスに関して、その胸管淋巴催進作用
や、肝機能亢進作用、胆汁酸の分泌促進作用等が報告さ
れている。

更にこのような薬理作用を示す有効成分についても研究
が行なわれているが、シジミ中のメナオニン、システン
、シスナン酸等のアミノ酸が肝機能亢進作用を示す物質
であるとした報告もある。

しかしながら、シジミよりの抽出成分について脂質代謝
の改善作用といった面からのアプローチは全くなされ°
Ｃいなかった。

これは、貝類には一般的にコレステロールが多く、シジ
ミについても例外ではないと考えられていたためと思わ
れる。

この発明の発明者らは、上記のような情況の下において
、脂質代謝の改善に寄与し、ひいては肝臓への過剰な脂
肪蓄積を防止あるいは除去して肝機能の改善に寄与する
物質があるのではないかとの着想に基き、シジミを熱時
水で抽出処理し、次いで水浸液の濃縮物及び殻より分離
された肉質部から分離される物資の薬効を調べた。

その結果、前記水浸液の濃縮物及び水で熱時抽出処理さ
れた肉質部の乾燥物を非プロトン化溶媒で抽出し、抽出
液より溶媒を除去して得られる物質が脂質代謝改善作用
（高脂血症の予防・治療作用、抗脂肝作用並びに動脈硬
化症の予防作用）を有していることを見出した。

更に、研究を進めた結果、前記の物質より特定の二種の
α、β−不飽和脂肪酸のジグリセライドが単離され、こ
れが上記の薬理作用を発現する有効成分であることをつ
きとめ、この発明に到達したものである。

この発明で提供する上記薬理作用を示す化合物は、式（
■）： この発明においては、上記式（１）の化合物をシジミよ
り抽出分離することからなる製造法も提供される。

まず、この発明のシジミとしては淡水産および海水産の
学名コルビキュラ・サンダイ（Ｃｏｒｂｉ ｃｕ−１ａ
５ａｎｄａｉ ）に属するものが用いられるが、その
うちセタシジミ〔学名コルビキュラ・サンダイ・ライン
ハルト（Ｃｏｒｂｉｃｕｌａ ５ａｎｄａｉ Ｒｅ１ｎ
ｈａｒｄｔ）、ｌの使用が好ましい。

この発明の製造法においては、上記のシジミの全体もし
くは肉質部をそのまま又は細切し、１）中性付近で熱時
水で抽出処理し、その水浸液を濃縮し、次いでその濃縮
物及び／又は分離された肉質部を非プロトン化溶媒で抽
出処理するか、 １１）非プロトン化溶媒で抽出するか、何れかの工程で
得られた抽出液から溶媒を除去し、必要に応じて精製し
て式（Ｉ）： まず、（ｉ）のルートで行う場合、水による熱時抽出処
理に当って、水は煮沸状態であるのが好ましい。

また、シジミは、肉質部と貝殻とは分離しないで抽出処
理するのが好ましい。

この抽出処理に轟り、水はシジミの２〜１０倍量（重量
）、好ましくは４〜５倍量用いられる。

またこの抽出処理は３〜１０時間、好ましくは４〜５時
間行なわれる。

水による熱時抽出処理後、水浸液は濃縮して濃縮物とし
、次いでこの濃縮物と抽出処理された肉質部とを非プロ
トン化溶媒で抽出する。

この抽出操作に使用できる非プロトン化溶媒としては、
直鎖または分枝した飽和鎖式炭化水素、脂環式炭化水素
、芳香族炭化水素等の炭化水素類；ジクロロメタン、ク
ロロホルム、四塩化炭素等のようなハロゲン化炭化水素
類の他、ジメナルスルホキシド、ジメナルホルムアミド
、アセトニトリル、アセトン、メチルエチルケトン、ジ
エチルエーテル等が用いられる。

好ましいのは飽和鎖式炭化水素であり、最も好ましいの
はｎ−ヘキサンである。

抽出に当り、上記水浸液の濃縮物は粉末状であるのが好
ましく、抽出処理された肉質部は、乾燥され、できるだ
け細切されているのが好ましい。

また、抽出に当り、これらの被抽出物質は、溶媒に良好
に分散され、溶媒との接触効率の高いことが好ましく、
例えば、超音波浴中で抽出するのが好ましい。

（１１）のルートで行う場合は、非プロトン化溶媒とし
ては（１）の場合と同様のものが用いられる。

抽出に当り被抽出物は乾燥され、細切されているのが好
ましい。

上記非プロトン化溶媒抽出液より溶媒を除去して得られ
る物質は、式（１）で示される化合物の含量が高められ
た混合物であり、この混合物は、このような粗製物の段
階で前記したような脂質代謝改善作用を有している。

上記のような粗製物は、必要＆Ｓじて更に精製される。

このような精製に当ってはカラムクロマトグラフィーが
有用である。

カラムクロマトグラフィーのカラムに充填する担体とし
てはシリカゲルが好ましい。

また、溶離溶媒としては、ヘキサン、ベンゼン、エチル
エーテル、メタノール、ベンゼン−メタノール混合溶媒
が好適に使用される。

好ましい精製方法は、上記非プロトン化溶媒抽出液を濃
縮して得られる濃縮物をカラムに注入し、ヘキサン、ベ
ンゼン、エチルエーテル、メタノールで順次溶離する方
法である。

式（１）の化合物はエチルエーテル溶離液に精製されて
溶出してくる。

従って、このようなカラムクロマトグラフィーを繰り返
せば式（Ｉ）の化合物の含有率を高めることができる。

上記のようなカラムクロマトグラフィーによりある程度
分離が進んでくるとエチルエーテル分画に不純物として
含有されているステロール類が結晶化しやすくなるので
、これを結晶化させて分離することにより、脱ステロー
ル油分が得られる。

この脱ステロール油分は、更にベンセン−メタノール混
合溶媒を用いたカラムクロマトグラフィーを行えば更に
式（１）の含有率が上昇する。

式（１）の化合物の純品を単離するには、更にヘキサン
、ベンゼン、エチルエーテル、メタノールで順次溶離す
るクロマトグラフィーを行うのが望ましい。

式（１）の化合物は最終的には上記のエチルエーテル分
画に溶出する。

更に、エチルエーテルの前半から式（１）におけるＲ１
が水素原子で、Ｒ２が上記非プロトン化溶媒抽出物を更
に精製する工程で得られる物質は、いずれも脂質代謝改
善作用を示すものであり、従っていずれの精製段階のも
のもこの発明の医薬組成物中に含めることができる。

この発明におけるシジミの薬効成分〔式（Ｉ）の化合物
と、これらを含有する混合物である非プロトン化溶媒抽
出物との両方の場合を意味する。

〕の投与量は、症状の軽重あるいは投与されるヒトの体
重等に応じて異なるが、成人に対する内服の場合、１回
当り式（Ｉ）の化合物の量で５０〜５００■、好ましく
は１００〜３００■が１日２〜３回投与材柘。

この発明における医薬組成物は、この発明のシジミ薬効
成分学体、またはシジミ薬効成分と液体もしくは固体の
賦形剤とからなるものである。

そして投与法並びに投与の剤型としては、錠剤、カプセ
ル剤（顆粒状の薬剤を充てんした通常のカプセル剤およ
び液状物を充てんして密封した軟カプセル剤を含む）、
液剤などの内服の形がある。

また、注射剤や点滴剤のごとく体内注入する形であって
もよい。

式（Ｉ）の化合物は加水分解や酸化を受けやすいので、
いずれの剤形にするにしても外界とこれらの化合物とが
接触しないようにするのが好ましい。

また水やアルコールは加水分解を促進するので使用に適
さない。

このようなことから、液体の賦形剤としては無水で油性
のものが好ましく、オレイン酸、リノール酸、リルン酸
等が好適に用いられる。

好ましい剤形の具体例としては、上記リノール酸と薬効
成分との液状混合を充填し、密封したカプセル剤（軟カ
プセル剤）がある。

錠剤もまた好ましい剤形の一つである。

錠剤とするには、薬効成分単体または薬効成分とリノー
ル酸との混合物を適当な固体状の賦形剤に吸着させ、圧
縮成形する。

必要であれば、他の適当なコーティング剤でコートした
錠剤とすることができる。

上記固体の賦形剤としては、例えば乳糖、澱粉、カルボ
キシメチルセルロース、デキストリン、リン酸カルシウ
ム、炭酸カルシウム、合成および天然のケイ酸カルシウ
ム、酸化マグネシウム、乾燥水酸化アルミニウム、ステ
アリン酸マグネシウム、重炭酸ナトリウム、乾燥酵母な
どが挙げられる。

その他、酸化防止剤を配合することもできるし、また、
当該分野で用いられる崩壊剤、嬌味剤、甘味剤、着色剤
等を、この発明の有効成分の加水分解や酸化を促進する
ことがなければ宜便添加してもよい。

次に実施例、動物実験、臨床例を挙げてこの発明を説明
する。

実施例 １ シジミ８００ｋｇを熱煮処理し、水溶液部はスプレード
ライで乾燥し、水性エキス粉末６．４ ｋｇを得た。

一方、処理後のシジミの肉質部は貝殻と分離し、熱風乾
燥して１１．７ｋｇを得た。

これらを超音波浴でｎ−ヘキサン抽出し、粘稠な黒褐色
油分Ａ１、４ ｋｇを得た。

動物実験 Ｉ ＳＤ系雄性体重約２０（Ｂｉ’のラットを用いコレステ
ロール負荷群とコレステロールを負荷しない群との二つ
の群について、上記（４）の効果を調べた。

コレステロール負荷群については、粉末飼料（オリエン
タル酵母）に２％コレステロール＋０．３％コール酸ナ
トリウムを混合した飼料を１日１５ｇ与え、コレステロ
ールを負荷しない群には例も加えない粉末飼料のみを１
日１５ｇ与えた。

コレステロール負荷群と無負荷群をさらに上記抽出物（
４）投与群と投与しない対照群に分け、投与群には、上
記粉末飼料中に（４）を混合しラット−匹当り一日２９
．８■を投与した。

投与開始２週間目にラットは断頭採血し、血清総コレス
テロールを測定した。

コレステロール無負荷群では、対照群（６８，７■／１
ｒＬｌ）に対し、（４）投与群（６１，４■／ｍＡ）で
は１０．６％の血中総コレステロール低下がみられ、コ
レステロール負荷群においては対照群（２６４ｒｎ９／
縦）ニ対し、（４）投与群（２０８７ＦＩＩＰ／ｙｄ）
では２１．２％の低下が認められ、血中総コレステロー
ルの高い群に対してより強いコレステロール低下作用を
認めた。

なお、上記試験ラットの肝臓の組織を検討したところ、
肉眼による観察では、コレステロール負荷群における対
照群では明白な白色状の脂肪肝所見に対し、（４）投与
群では全く異常が認められず、肝臓における脂肪沈着が
防止できた。

これにより、この発明で提供するシジミ薬効成分が抗脂
肝性物質であることがわかる。

さらに胆汁酸の分泌に関する影響について下記の結果を
得た。

胆汁分析値（コレステロール負荷群） コレステロール負荷ラットでは対照群に比ベヘキサン抽
出物（４）投与群では胆汁量及び胆汁酸の分泌量が増加
し、コール酸系胆汁酸の減少を認め、脂質代謝改善の一
因と考えられる。

実施例 ２ ＳｌおよびＳ２の単離 シジ１００ｋｇを熱煮処理し、水溶液部はスプレードラ
イで水性エキス粉末６．４ｋｇを得、肉質部は貝殻と分
離し、熱風乾燥して１１．７ｋｇを得た。

これらを超音波浴でｎ−ヘキサン抽出し、粘稠な黒褐色
油分１．４ｋｇを得た。

この油分をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０
〜８０メツシユの７００９を直径５（１７７１゜長さ１
００ｃｒｒＬのガラス管に充填したカラムを使用）に付
した。

溶離溶媒としては各ＩＡのヘキサン、ベンゼン、エチル
エーテル、メタノール’ｊｔコノ順で用いた。

エチルエーテル溶離液を濃縮し、９００ｇの油分を得、
これを上記と同様に同じ量と種類の溶離溶媒を用いてカ
ラムクロマトグラフィーに付し、エチルエーテル溶離液
から５００ｇの油分を得た。

この油分からステロール類を結晶としてできるだけ除去
した。

更にこの油分を再びヘキサン、ベンゼン、エチルエーテ
ル、メタノールの順でカラムクロマトグラフィーを行な
い、エチルエーテル分画の前半と後半の溶出分画に紫外
線で発色する（ＴＬＣでの観察）化合物を含む油分をそ
れぞれ、１８．０ｇと５８．’ｌを得た。

前半に溶出し、紫外線で発色する化合物を８１．後半に
溶出したそれを８２とする。

Ｓｌ は先と同様なカラムを用い、ベンゼンで溶出させ
て精製品〔式（Ｉ）におけるＲ１が水素原子で、なお、
Ｓｌ及びＳ２は室温（２６℃）では粘性の高い淡黄色の
液体であるが、低温では両者とも固溶体となる。

また、両者とも加水分解や酸化を受けやすく、不安定な
化合物である。

動物実験 ２ 動物：ＳＤ系雄性ラット 体重ａｏｏｇ（１群８匹） 実験方法 低コレステロール食（レギュラーダイエツト）及び高コ
レステロール食投与下におけるＳｌ、Ｓ２画分の効果を
検討した。

高コレステロール負群はあらかじめ２週間前より２％コ
レステロール＋０．３％コール酸ナトリウムを含有する
粉末飼料（オリエンタル酵母）を投与し、採血の上血清
脂質を測定し、１群の平均血清コレステロール値がほぼ
等しくなるように３群に分類した。

Ｓ１画分は１００■、８２両分は１５０■をリノール酸
でＩＴｒＬｌとし、ラットの体重１００ｇあたり０．１
１ｒｌｌ（Ｓｌは体重ＩＪあたり１００■、Ｓ２は１５
０１ｒＩ９）を金属性胃ゾンデで連日６日間、早朝に経
口投与した。

対照群には体重１ｋｇあたり１−のリノール酸を経口投
与した。

投与開始７日目にラットは断頭採血し、血清総コレステ
ロール、リン脂質、トリグリセライド、ＨＤＬコレステ
ロール、クリセロールを測定した。

結果 （１）体重増加 表２に食餌摂取量と体重増加量についての結果果を示す
。

レギュラーダイエツト（低コレステロール食）Ｓ２投与
群で体重の増加が少なかった。

しかし、体重減少を来たした１例を除くと括弧内に示し
たように１０．２ｇとなる。

また高コレステロール群では、対照のリノール酸投与例
で体重増加が少ないが、これも体重減少を来たした１例
を除くと１３．９ｇの増加となる。

低コレステロールの対照群のみ体重増加が著しいのは１
ケージ中の四散が少なかったため（死亡して）と考えら
れる。

（２）血清コレステロール値 表３に試料投与前後の血清コレステロール値とその差を
示す。

死亡例があったため、高コレステロール−８２群、低コ
レステロール一対照群が投与前高値を示す結果となった
。

高コレステロール食一対照群（リノール酸投与）では処
置により３０９．３■／ｄｌから２３５．２ｍｔ；）／
ｄｌに減少した（７４．１ ｍ９／ｄ、ｌ、 １６．１
％の減少）。

Ｓ１投与群では、コレステロールの減少が１０２．１■
／ｄｉ（−２５，０％）、Ｓ２投与群では９８．６１１
１９／ｄｌの低下（−２６，５％）と、かなりの落差で
あった。

投与後における血清コレステロールは対照２３５．２■
／ｄｌ、 Ｓ１投与群２０１．３■／ｄｉであり、Ｓ１
投与群で３３．９１１１９／ｄｌ （１４，４％ ）低
値であった。

血清コレステロール値の高い群では、リノール酸などの
投与による血清値の変化が大きいと思われるので、各群
を投与前の血清コレステロ−ル値３００Ｔｎ９／ｄ１以
上の群（良応答群）と３００ｒｒ１ｇ以下の群（貧応答
群）に便宜上分類した。

その結果も表３に併せて示す。良応答群ではリノール酸
投与により血清コレステロールは１０６．５■／ｄｌ低
下し、Ｓ１投与群では２２９．３ ｍ９７ｄｌ減少し、
Ｓ２投与群テハ１４９、５ ｍ９７ｄｌ減少した。

また、投与後の血清を比較すると対照の ２９１．５■／ｄｉに対し、Ｓ１投与群では２２８．３
゜ゅ ■／ｄｌと低値を示した。

貧応答群では試料の投与による血清コレステロールの減
少は少なかった。

また、低コレステロール負群では顕著な変化はみられな
かった。

（３）血清リン脂質 血清リン脂質の値を表４に示す。

いずれの群でも血清リン脂質は投与後に低下または低下
傾向を示した。

（４）血清トリグリセライド 表５に血清トリグリセライドの成績を示す。

いずれの群でも血清トリグリセライドは投与後に低下し
た。

Ｓｌ、Ｓ２投与群で対照群よりも低下が大きい。

また、コレステロールに対する良応答群、貧応答群でも
金側の場合と同様の傾向がみられ、血清トリグリセライ
ド値は血清コレステロール値のいかんには関係がないよ
うである。

（５） コレステロール／リン脂質比 表６にコレステロール／リン脂質比の値を示す。

血清コレステロール／リン脂質比については各群で投与
前後で低下がみられ、リン脂質よりコレステロールの変
動が大きいことを示唆する。

（６）ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬ−ＶＬＤＬコレス
テロール、グリセロールについての結果を表７に示す。

表７かられかるように、ＨＤＬコレステロールは各群間
でとくに顕著な差はみられなかった。

しかし、良応答群ではＨＤＬ−コレステロールが低い値
であった。

また、良応答群ではＬＤＬ−ＶＬＤＬコレステロールの
増加が顕著であった。

このＬＤＬ−ＶＬＤＬコレステロールは良応答群ではＳ
１投与群で低値であり、血清コレステロールの変動はこ
れらの画分の変化を反映することが示された。

実施例１で得られた粘稠な黒褐色油分Ａおよび実施例２
で得られた本願発明の化合物Ｓ１と８２について、ｄｄ
Ｙ−Ｎ系雄および雌のマウスを用いて急性毒性テストを
行い、プロビット法でＬＤ、ｏを算出した結果、いずれ
もＬＤ、ｏは＞１２，０００ｒＩＩＩｌ／ｋｇであった
。

実施例 ３ 上記Ｓ１もしくはＳ・２を用いて下記のような製剤を常
法で作製した。

錠剤１ この発明の化合物８１ １０ｇリノール酸
１０ｇ水酸化アルミニウム
５０９ステアリン酸マグネシウム
４０ｇこの発明の化合物８１１０ｇにリノニル酸
１０ｇとデンプンの一部を加えてよく練合し、これに残
りの成分を加え、混合して粉砕する。

約１５メツシユの粒状として、これを圧縮して１００錠
の錠剤とした。

この発明の化合物８２１０ｇにリルン酸２ｇとデンプン
の一部を加えよく練合し、これに残りの組成成分を加え
、混合して粉砕する。

約１５メツシユの粒状とし、これを圧縮して１００錠の
錠剤とした。

顆粒 この発明の化合物８１ ５０ｇ乳糖
６０ｇ ゼラチン２１を精製水２０（ｌに加え加熱溶解し、冷却
後かき混ぜながらエタノール２０ＣＢｉ／を加えてゼラ
チン液とする。

この発明の化合物Ｓ１に乳糖デンプンを加えて混合し、
粉砕する。

これに予め作製しておいたゼラチン液を加え、練合し、
乾燥して整粒し顆粒とした。

この発明の化合物８２５ｇとリノール酸５ｇタルク４０
ｇを加えて充分に混合し、充填機を使用してカプセルに
５００■ずつ充填した。

この発明の化合物Ｓ□とリノール酸を充分に混合し軟カ
プセルに充填し、カプセル剤１０個を作製した。

なお、これらの製剤には保存剤、抗酸化剤、矯味矯臭剤
等を適宜加えてもよい。

臨床試験 血中総コレステロールの高い健康人（年令４３才、男）
でリノール酸と８１の脂質代謝に与える効果と肝機能に
与える影響を検討した。

投与薬剤：Ｌカプセル（１カプセル中リノール酸３００
７ｒＬｌ含有） Ｓ１カプセル（Ｓ１１００Ｔｎ９をリノール酸に加え３
００−と じた） 初めにＬカプセルを１日２回、１回１カプセルを２０日
間投与し、その後Ｓ１カプセルを１日２回、１回１カプ
セルを１０日間投与した。

Ｌカプセル ２１１日目び３１１日目各検査を行なった。

結果を表８に示す。

Ｓ１カプセル投与により総コレステロールの低下が認め
られ、肝機能等に対しても悪影響は認められず、むしろ
好影響があると考えられる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式（Ｉ）： ３ シジミの全体もしくは肉質部をそのまま又は細切し
   、 １）中性付近において水で熱時抽出処理し、その水浸液
   を濃縮し、次いでその濃縮物及び／又は分離された肉質
   部を非プロトン化溶媒で抽出処理するか、 ｉ［）非プロトン化溶媒で抽出処理するか、倒れかの工
   程で得られた抽出液から溶媒を除去し、精製して式（Ｉ
   ）： ４ 非プロトン化溶媒抽出液の溶媒を除去した後の精製
   をカラムクロマトグラフィーで行う特許請求の範囲第３
   項記載の方法。 ５ カラムクロマトグラフィーが、ヘキサン、ベンゼン
   、エチルエーテルおよびメタノールの順に溶離して行な
   われる特許請求の範囲第４項記載の方法。