KR20040068544A - 아테롬성 동맥경화증의 예후 표지로서의 가용성 ｃｄ40ｌ(ｃｄ154) - Google Patents

아테롬성 동맥경화증의 예후 표지로서의 가용성 ｃｄ40ｌ(ｃｄ154) Download PDF

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더 브리검 앤드 우먼즈 하스피털, 인크.
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Abstract

본 발명은 심근 경색 및 졸중 같은 아테롬성 동맥경화증 질병의 위험도를 특히 현재 질병의 징후 또는 증상을 보이지 않는 개인 및 비흡연자 중에서 결정하기 위한 진단 시험의 새로운 용도를 포함한다. 더욱이, 본 발명은 위험도 있는 어떤 개인이 첫 번째 또는 재발하는 심근 경색 및 졸중의 예방, 또는 급성 및 만성 심혈관 질병의 치료를 위해 고안된 소정의 치료로부터 우선적으로 이익받게 될 것인지를 의사가 결정하는 것을 도와주는 진단 시험의 새로운 용도를 포함한다. 치료 방법 또한 설명된다.

Description

아테롬성 동맥경화증의 예후 표지로서의 가용성 ＣＤ40Ｌ (ＣＤ154){SOLUBLE CD40L (CD154) AS A PROGNOSTIC MARKER OF ATHEROSCLEROTIC DISEASES}
치료법의 상당한 발전에도 불구하고 심혈관 질병은 선진 세계에서 질병률 및 사망률의 가장 일반적인 하나의 원인으로 남아 있다. 그러므로, 심근 경색 및 졸중 같은 심혈관 질병의 예방은 주된 공중 건강의 중요한 분야이다. 현재 장래의 심혈관 질병의 다수에 대한 위험 인자들이 설명되어 왔고 고위험도의 개인 감지에 임상적으로 널리 사용되고 있다. 이런 감별 시험에는 총 및 HDL 콜레스테롤 농도의 평가를 포함한다. 그러나, 다수의 심혈관 질병은 외관상 저도 내지 중간 정도의 위험도 프로파일을 가진 개인에게서 발생되고, 이런 환자를 구별해 낼 수 있는 우리의 능력은 한정되어 있다. 더욱이, 심혈관 질병에 대한 위험도 있는 또는 심혈관 질병을 가진 것으로 알려진 환자를 위한 소정의 예방적 및 치료적 처치의 유리한 효과가 다른 환자 집단들 사이에서 크기가 다름을 축적되는 데이터는 제시한다. 그러나, 소정의 치료법이 더 또는 덜 효과적일지 예상할 수 있는지 여부를 결정할 수 있는 진단 시험을 설명하는 데이터는 현재 부족하다.
심근 경색 및 허혈성 졸중 같은 소정의 심혈관 질병은 아테롬성 동맥경화증과 연관되어 있다. 아테롬성 동맥경화증의 메커니즘은 잘 이해되고 있지 않다. CD40 리간드 (CD40L, CD154, 및(또는) gp39로도 알려짐)는 261개 아미노산의 II 형 막 통과 단백질이다. 총괄적으로 sCD40L로 지칭된 분자의 하나 이상의 생물적으로 활성인 가용성 형태는 세포내 또는 세포 표면에서 일어날 수 있는, 전장 형태의 단백질 가수분해 절단에 의해 생성된다.
CD40L은 다능의 면역조절자로서 그의 수용체 CD40과 함께 혈관 표피 (EC) 및 평활근 세포 (SMC), 단핵 식세포 (MØ), 및 혈소판을 포함하는 넓고 다양한 세포에서 발현된다.
임의의 상기 세포형에의 CD40 수용체의 도입은 기록에 따르면 전구응고제 조직 인자 뿐만 아니라 시토킨 IL1, IL-6, IL-12, TNFα, 또는 IFNγ, 케모킨 IL-8, MCP-1, 또는 RANTES, 유착 분자 ICAM-1 또는 VCAM-1, 매트릭스 금속단백질 분해효소 MMP-1/-2/-3/-7/-8/-9/-10/-11/-12/-13 같은 다양한 가염증성 매개체의 발현을 촉발한다. 이들 가염증성 매개체의 발현은 기록에 따르면 시험관내 다양한 가아테롬성 기능의 촉진과 연관되어 왔다. 이들 관찰은 아테롬 발생의 다양한 단계에 CD40L을 암시하여 왔다.
sCD40L의 증가된 농도는 불안정한 협심증 환자 중에서 설명되어 왔다. 더욱이, 혈청 또는 다른 체액내 sCD40L 농도는 인간 환자의 면역, 염증, 또는 악성 상황을 조사하는데 사용되어 왔다. 이런 환자는 전신성 자가면역 또는 염증, 혈관 질병, 바이러스성 질병, 또는 악성 종양으로 고생하는 환자, 또는 면역억제 치료를 받는 환자를 포함한다. 이들 환자는 건강한 개체가 아니다. sCD40L의 농도가 염증 동안에 증가하기 때문에, 급성으로 아픈 또는 고위험 집단의 선행 연구에서 관찰된 통계적 연관이 인과관계인지, 단기간의 염증 변화에 기인한 것인지 또는 특히 흡연 및 고지혈증 같은 다른 위험 인자와의 상관관계에 기인한 것인지 불분명하다.
염증 표지의 증가된 농도는 장래 유해 심혈관 질병을 예측한다는 것이 이전에 보여져 왔다. 이는 이전에 전신적 염증 표지로서 통상 간주되지 않았지만 염증의 소정의 측면의 매개체인 sCD40L에 대해서는 이전에 증명되지 않았다.
<발명의 요약>
본 발명은 한 측면에서 (1) 심근 경색 및 졸중 같은 장래 심혈관 질병 및 말초 동맥 질병의 위험도 예측; 및 (2) 심혈관 질병의 예방 및(또는) 치료 위해 고안된 소정의 치료의 사용으로부터 소정의 개인이 더 크게 또는 더 적게 이익 받을 가능성의 결정을 넓게 포함하는 새로운 진단 시험을 설명한다. 이들 새로운 시험은 부분적으로 하기의 발견에 기초한다.
sCD40L의 증가된 농도가 장래 심혈관 질병을 예측함이 발견되었다. 예를 들어 외관상 건강한 비흡연자의 sCD40L의 증가된 농도는 심근 경색의 증가된 위험을 예측한다. 다른 예로는, sCD40L의 증가된 농도는 장래 졸중의 증가된 가능성을 예측한다.
장래 심혈관 질병의 위험을 감소시키는 소정의 치료제의 사용으로부터 소정의 개인이 더 크게 또는 더 적게 이익 받을 가능성은 개인에서의 기준선 농도의 sCD40L로부터 결정될 수 있음도 발견되었다. 본 발명은 부분적으로는 sCD40L이 장래 심혈관 질병의 다른 예측인자와 독립적인 예측 값을 가진다는 놀라운 발견에 기초한다. 특히, sCD40L은 전신성 면역 표지 C-반응성 단백질 (C-Reactive Protein (CRP))과 독립적으로 장래 유해 심혈관 질병을 예측한다. 그러므로, sCD40L은 단독으로 또는 콜레스테롤 및 CRP 같은 선행 기술의 예측인자와 함께 장래 유해 심혈관 질병의 예측인자로서 사용될 수 있다. 그러므로, 본 발명은 다른 예측인자를 사용하여 이전에 만들어질 수 있었던 측정을 단순히 복제하는 것을 포함하지 않는다. 그 대신에, sCD40L의 농도가 선행 기술의 예측인자에 부가된다.
상기한 바와 같이 이 발견은 새로운 진단 시험을 이끌어냈다.
본 발명의 한 측면에 따르면, 장래 심혈관 질병으로 발병될 개인의 위험도 프로파일을 특성화하는 방법이 제공된다. 이 방법은 개인의 sCD40L 농도를 수득하는 것을 포함한다. 이어서, sCD40L의 농도를 이미 결정된 값과 비교한 후 장래 심혈관 질병으로 발병될 개인의 위험도 프로파일을 이미 결정된 값과 비교한 sCD40L의 농도에 기초하여 특성화한다.
이미 결정된 값은 단일 값, 복수개의 값, 단일 범위 또는 복수개의 범위일 수 있다. 그러므로, 한 실시태양에서 이미 결정된 값은 복수개의 이미 결정된 표지 농도 범위이고, 비교 단계는 개인의 농도가 이미 결정된 표지 농도 범위들 중어디에 속하는지 결정하는 것을 포함한다. 한 바람직한 실시태양에서는 바람직한 이미 결정된 sCD40L 값은 약 2.9ng/mL 혈액 또는 그 이상이다. 또다른 바람직한 이미 결정된 sCD40L 값은 약 3.2ng/mL 혈액 또는 그 이상이다. 추가의 바람직한 이미 결정된 sCD40L 값은 약 5.5ng/mL 혈액 또는 그 이상이다. 범위를 사용할 때는 복수개의 범위들 중 하나는 약 2.9ng/mL 혈액 미만이고 다른 범위는 약 2.9ng/mL 혈액을 초과하는 것이 바람직하다.
소정의 실시태양에서는 개인은 외관상 건강한 비흡연자이다. 소정의 실시태양에서는 개인은 달리 심근 경색 또는 졸중의 증가된 위험에 있지 않다.
본 발명의 이 측면의 소정의 실시태양에서는, 심혈관 질병이 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관되어 있다. 소정의 실시태양에서는, 심혈관 질병이 치명적 심근 경색 이외의 것이다. 소정의 실시태양에서는, 심혈관 질병이 졸중이다.
본 발명의 추가의 또다른 측면에 따르면, 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관된 장래 심혈관 질병으로 발병될 개인의 위험도 프로파일을 특성화하기 위한 방법이 제공된다. 개인의 sCD40L 농도를 수득한다. sCD40L의 농도를 이미 결정된 값과 비교한다. 이어서, 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관된 장래 심혈관 질병으로 발병될 개인의 위험도 프로파일을 이미 결정된 값과 비교한 sCD40L의 농도에 기초하여 특성화된다. 이미 결정된 값은 상기한 바와 같을 수 있다. 특성화된 개인은 임의의 개체일 수 있으나, 바람직하게는 외관상 건강한 개체이다. 외관상 건강한 개체는 흡연자 또는 비흡연자가 될 수 있다. 소정의 실시태양에서는, 피검자는 달리 유해 심혈관 질병의 증가된 위험을 가지지 않는다. 소정의 실시태양에서는, 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관된 장래 심혈관 질병은 치명적 심근 경색을 포함하지 않는다. 바람직한 표지 및 이미 결정된 값은 상기한 바와 같다. 한 중요한 실시태양에서는, 심혈관 질병은 졸중이다. 또다른 중요한 실시태양에서는, 심혈관 질병은 심근 경색이다. 또다른 중요한 실시태양에서는, 심혈관 질병은 말초 동맥 질병이다. 추가의 중요한 실시태양에서는, 심혈관 질병은 비치명적 심근 경색이다.
본 발명의 또다른 측면에 따르면, 외관상 건강한 비흡연자의 장래 심근 경색으로 발병될 위험도 프로파일을 특성화하기 위한 방법이 제공된다. 이 방법은 개인의 sCD40L 농도를 수득하는 것을 포함한다. 이어서, sCD40L의 농도를 이미 결정된 값과 비교한 후, 장래 심근 경색으로 발병될 개인의 위험도 프로파일을 이미 결정된 값과 비교한 sCD40L의 농도에 기초하여 특성화한다. 소정의 실시태양에서는, 개인은 달리 유해 심혈관 증후의 증가된 위험을 가지지 않는다.
본 발명의 이전 측면과 같이, 이미 결정된 값은 단일 값, 복수개의 값, 단일 범위 또는 복수개의 범위일 수 있다. 한 실시태양에서, 이미 결정된 값은 복수개의 이미 결정된 표지 농도 범위이고, 비교 단계는 개인의 농도가 이미 결정된 표지 농도 범위들 중 어디에 속하는지 결정하는 것을 포함한다. 바람직한 이미 결정된 sCD40L 값 등은 상기와 같다.
본 발명의 또다른 측면에 따르면, 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관된 장래 심혈관 질병으로 발병될 개인의 위험도 프로파일을 특성화하기 위한 방법이 제공된다. 개인의 sCD40L 농도를 수득한다. sCD40L의 농도를 이미 결정된 값과 비교한다. 이어서, 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관된 장래 심혈관 질병으로 발병될 개인의 위험도 프로파일을 이미 결정된 값과 비교한 sCD40L의 농도에 기초하여 특성화한다. 본 발명의 이전 측면과 같이, 이미 결정된 값은 단일 값, 복수개의 값, 단일 범위 또는 복수개의 범위일 수 있다. 한 실시태양에서, 이미 결정된 값은 복수개의 이미 결정된 표지 농도 범위이고, 비교 단계는 개인의 농도가 이미 결정된 표지 농도 범위들 중 어디에 속하는지 결정하는 것을 포함한다. 바람직한 이미 결정된 sCD40L 값 등은 상기와 같다.
특성화된 개인은 임의의 개체일 수 있으나, 바람직하게는 외관상 건강한 개체이다. 외관상 건강한 개체는 흡연자 또는 비흡연자가 될 수 있다. 소정의 실시태양에서는 피검자는 달리 유해 심혈관 질병의 증가된 위험을 가지지 않는다. 소정의 실시태양에서는, 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관된 장래 심혈관 질병은 치명적 심근 경색을 포함하지 않는다. 바람직한 표지 및 이미 결정된 값은 상기한 바와 같다. 한 중요한 실시태양에서는, 심혈관 질병은 졸중이다. 또다른 중요한 실시태양에서는, 심혈관 질병은 심근 경색이다. 또다른 중요한 실시태양에서는, 심혈관 질병은 말초 동맥 질병이다. 추가의 중요한 실시태양에서는, 심혈관 질병은 비치명적 심근 경색이다.
본 발명의 또다른 측면에 따르면, 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관된 장래 심혈관 질병으로 발병될 개인의 위험도 프로파일을 특성화하기 위해 혈액 sCD40L의 농도와 함께 콜레스테롤 분획물 또는 C-반응성 단백질 (CRP)을 사용하는 방법이 제공된다. 개인의 sCD40L 농도를 수득한다. sCD40L의 농도를 첫 번째 이미 결정된값과 비교하여 첫 번째 위험도 값을 설정한다. 개인의 콜레스테롤 또는 CRP 농도도 또한 수득한다. 개인의 콜레스테롤 또는 CRP 농도를 두 번째 이미 결정된 값과 비교하여 두 번째 위험도 값을 설정한다. 이어서, 심혈관 질병으로 발병될 개인의 위험도 프로파일을 첫 번째 위험도 값 및 두 번째 위험도 값의 조합에 기초하여 특성화하는데, 여기서 첫 번째 위험도 값 및 두 번째 위험도 값의 조합은 첫 번째 및 두 번째 위험도 값과 다른 세 번째 위험도 값을 설정한다. 특히 중요한 실시태양에서, 세 번째 위험도 값은 첫 번째 및 두 번째 위험도 값 중의 어느 하나 보다 크다. 시험에 바람직한 개인, 표지 및 이미 결정된 값은 상기와 같다. 심혈관 질병은 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관된 임의의 심혈관 질병이 될 수 있으나, 소정의 중요한 실시태양에서는 심혈관 질병은 비치명적 심근 경색 또는 허혈성 졸중이다.
본 발명의 또다른 측면에 따르면, 심혈관 질병, 및 특히 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관된 심혈관 질병의 위험을 감소시키는 약제로의 치료로부터 개인이 이익 받을 가능성을 평가하는 방법이 제공된다. 약제는 항염증제, 항혈전제, 항혈소판제, 피브린용해제, 지질 감소제, 직접 트롬빈 저해제, 및 당단백질 IIb/IIIa 수용체 저해제 및 세포 유착 분자에 결합하여 백혈구의 상기 분자에의 부착 능력을 저해하는 약제 (예를 들면 항세포 유착 분자 항체)로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 이 방법의 실시를 위해 개인의 sCD40L 농도를 수득한다. 이어서, 이 농도를 이미 결정된 값과 비교하는데, 여기서 이미 결정된 값과 비교한 sCD40L 농도는 개인이 약제로의 치료로부터 이익 받을 가능성을 표시한다. 이어서, 개인은 약제로의 치료로 수득할 것으로 보이는 순 이익의 면에서 특성화될 수 있다.
상기와 같이, 본 발명은 개인에게서 비치명적 심근 경색을 포함하여 장래 졸중 또는 장래 심근 경색 같은 심혈관 질병의 위험을 감소시키기 위한 약제로의 치료로부터 개인이 우선적으로 이익 받게 될 것인가를 결정하는데 특히 적합하다. 또한, 예를 들어 유해 부작용의 고위험도 프로파일을 가진 공지의 치료 또는 새로운 치료로부터 가장 이익 받기 쉬운 개인을 구별해 냄으로써, 임상 실험 및 후보 약품으로의 치료를 위한 후보 집단의 선택을 가능하게 한다. 그러므로, 본 발명은 후보 환자를 위한 소정의 치료의 가망 있는 순 이익의 평가를 위한 정보를 제공한다.
또한, 본 발명은 장래 심혈관 질병으로의 발병 위험 또는 상기의 다른 환자 기준과, 분석으로 결정된 sCD40L 농도를 상호관련시키기 위한, sCD40L용 분석 및 설명서를 포함하는 패키지, 및 임의적으로 관련된 재료, 예를 들어 수 또는 색상 차트를 포함하는 키트도 예상한다. 중요한 실시태양에서는, 키트는 또한 콜레스테롤용 분석도 포함한다.
본 발명의 또다른 측면에서, 심혈관 질병의 위험을 감소시키기 위한 피검자의 치료 방법이 제공된다. 이 방법은 정상 초과 농도의 sCD40L을 가진 것으로 알려진 피검자에 심혈관 질병의 위험을 감소시키는 약제를 선택 및 투여하는 것을 포함한다. 약제는 항염증제 (아스피린 및 비아스피린 항염증제 포함), 항혈전제, 항혈소판제, 피브린용해제, 지질 감소제, 직접 트롬빈 저해제, 당단백질 IIb/IIIa 수용체 저해제, 세포 유착 분자에 결합하여 백혈구의 상기 분자에의 부착 능력을 저해하는 약제, 칼슘 채널 차단제, 베타-아드레날린 수용체 차단제, 시클로옥시제나제-2 저해제, 안지오텐신계 저해제, 및(또는) 그의 조합일 수 있다. 약제는 장래 심혈관 질병을 발병할 피검자의 위험도를 저하시키는데 유효량으로 투여된다. 바람직한 피검자는 상기 약제들 중 임의의 하나 또는 혼합물로의 치료를 달리 현재 필요로 하지 않는 외관상 건강한 피검자이다. 추가의 중요한 실시태양에서는, 치료된 피검자는 비고지혈증 피검자이다. 또다른 실시태양에서는, 피검자는 증가된 sCD40L의 농도를 가진 것을 제외하고는 유해 심혈관 증후의 증가된 위험에 있지 않다 (예를 들어 이런 증후의 가족 병력이 없는 피검자, 비흡연자인 피검자, 정상적인 농도의 전신성 염증 표지를 가진 비고지혈증 피검자).
소정의 실시태양에서는, 약제는 알클로페낙; 알클로메타손 디프로피오네이트; 알제스톤 아세토니드; 알파 아밀라제; 암시나팔; 암시나피드; 암페낙 소듐; 아미프릴로스 히드로클로리드; 아나킨라; 아니롤락; 아니트라자펜; 아파존; 발살라지드 디소듐; 벤다작; 베녹사프로펜; 벤지다민 히드로클로리드; 브로멜라인스; 브로페라몰; 부데소니드; 카르프로펜; 시클로프로펜; 신타존; 클리프로펜; 클로베타솔 프로피오네이트; 클로베타손 부티레이트; 클로피락; 클로티카손 프로피오네이트; 코르메타손 아세테이트; 코르토독손; 데플라자코르트; 데소니드; 데속시메타손; 덱사메타손 디프로피오네이트; 디클로페낙 포타슘; 디클로페낙 소듐; 디플로라손 디아세테이트; 디플루미돈 소듐; 디플루니살; 디플루프레드네이트; 디프탈론; 디메틸 술폭시드; 드로시노니드; 엔드리손; 엔리모맙; 에놀리캄 소듐; 에피리졸; 에토돌락; 에토페나메이트; 펠비낙; 페나몰; 펜부펜; 펜클로페낙; 펜클로락; 펜도살; 펜피팔론; 펜티아작; 플라잘론; 플루아자코르트; 플루페남산; 플루미졸; 플루니솔리드 아세테이트; 플루닉신; 플루닉신 메글루민; 플루오코르틴 부틸; 플루오로메톨론 아세테이트; 플루쿠아존; 플루르비프로펜; 플루레토펜; 플루티카손 프로피오네이트; 푸라프로펜; 푸로부펜; 할시노니드; 할로베타솔 프로피오네이트; 할로프레돈 아세테이트; 이부페낙; 이부프로펜; 이부프로펜 알루미늄; 이부프로펜 피코놀; 일로니다프; 인도메타신; 인도메타신 소듐; 인도프로펜; 인독솔; 인트라졸; 이소플루프레돈 아세테이트; 이속세팍; 이속시캄; 케토프로펜; 로페미졸 히드로클로리드; 로르녹시캄; 로테프레드놀 에타보네이트; 메클로페나메이트 소듐; 메클로페남산; 메클로리손 디부티레이트; 메페남산; 메살라민; 메세클라존; 메틸프레드니솔론 술레프타네이트; 모르니플루메이트; 나부메톤; 나프록센; 나프록센 소듐; 나프록솔; 니마존; 올살라진 소듐; 오르고테인; 오르파녹신; 옥사프로진; 옥시펜부타존; 파라닐린 히드로클로리드; 펜토산 폴리술페이트 소듐; 펜부타존 소듐 글리세레이트; 피르페니돈; 피록시캄; 피록시캄 신나메이트; 피록시캄 올라민; 피르프로펜; 프레드나제이트; 프리펠론; 프로돌산; 프로쿠아존; 프록사졸; 프록사졸 시트레이트; 리멕솔론; 로마자리트; 살콜렉스; 살나세딘; 살살레이트; 산구이나리움 클로리드; 세클라존; 세르메타신; 수독시캄; 술린닥; 수프로펜; 탈메타신; 탈니플루메이트; 탈로살레이트; 테부펠론; 테니다프; 테니다프 소듐; 테녹시캄; 테시캄; 테시미드; 테트리다민; 티오피낙; 틱소코르톨 피발레이트; 톨메틴; 톨메틴 소듐; 트리클로니드; 트리플루미데이트; 지도메타신; 글루코코르티코이드 또는 조메피락 소듐으로 구성된 군으로부터 선택된 항염증제이다.
본 발명은 또한 심혈관 질병을 방지하기 위해 지질 감소제로 피검자를 치료하는 방법을 포함한다. 이 약제는 정상 초과의 sCD40L 농도를 가지는 것을 기초로 선택된 피검자에 투여된다. 약제는 장래 심혈관 질병을 발병할 피검자의 위험을 저하시키는데 유효량으로 투여된다. 한 실시태양에서, 피검자는 이미 심장 마비 또는 혈관형성 같은 심혈관 증후를 가졌었다. 이 실시태양에서, 지질 감소제는 추가의 손상을 제한하거나 재협착, 심근 경색 후 또는 혈관형성 후 손상을 예방하는 것을 돕는다. 또다른 중요한 실시태양에서, 피검자는 지질 감소제의 치료를 달리 현재 필요로 하지 않는 외관상 건강한 피검자이다. 중요한 실시태양들에서는, 피검자는 증가된 sCD40L의 농도를 가진 것을 제외하고는 유해 심혈관 증후의 증가된 위험에 있지 않다. 추가의 중요한 실시태양에서는, 치료된 피검자는 비고지혈증 피검자이다. 상기의 임의의 실시태양에서, 지질 감소제는 젬피브로질, 콜리스티라민, 콜레스티폴, 니코틴산, 프로부콜 로바스타틴, 플루바스타틴, 심바스타틴, 아토르바스타틴, 프라바스타틴, 또는 세리바스타틴일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 바람직한 실시태양에서, 지질 감소제는 프라바스타틴이다.
본 발명은 또한 심혈관 질병을 예방하기 위해 세포 유착 분자에 결합하여 백혈구의 상기 분자에의 부착 능력을 저해하는 약제로 피검자를 치료하는 방법을 포함한다. 이 약제는 정상 초과의 sCD40L 농도를 가지는 것을 기초로 선택된 피검자에 투여된다. 약제는 장래 심혈관 질병을 발병할 피검자의 위험도를 저하시키는데 유효량으로 투여된다. 한 실시태양에서, 피검자는 이미 심장 마비 또는 혈관형성 같은 심혈관 증후를 가졌었다. 이 실시태양에서, 세포 유착 분자에 결합하여 백혈구의 상기 분자에의 부착 능력을 저해하는 약제는 추가의 손상을 제한하거나 재협착, 심근 경색 후 또는 혈관형성 후 손상을 예방하는 것을 도울 수 있다. 또다른 중요한 실시태양에서, 피검자는 세포 유착 분자에 결합하여 백혈구의 상기 분자에의 부착 능력을 저해하는 약제로의 치료를 달리 현재 필요로 하지 않는 외관상 건강한 피검자이다. 중요한 실시태양에서는, 피검자는 증가된 sCD40L의 농도를 가진 것을 제외하고는 유해 심혈관 증후의 증가된 위험에 있지 않다. 추가의 중요한 실시태양에서는, 치료된 피검자는 비고지혈증 피검자이다.
본 발명은 또한 심혈관 질병을 예방하기 위해 칼슘 채널 차단제로 피검자를 치료하는 방법을 포함한다. 이 약제는 정상 초과의 sCD40L 농도를 가지는 것을 기초로 선택된 피검자에 투여된다. 약제는 장래 심혈관 질병을 발병할 피검자의 위험도를 저하시키는데 유효량으로 투여된다. 한 실시태양에서, 피검자는 이미 심장 마비 또는 혈관형성 같은 심혈관 증후를 가졌었다. 또다른 중요한 실시태양에서, 피검자는 칼슘 채널 차단제의 치료를 달리 현재 필요로 하지 않는 외관상 건강한 피검자이다. 중요한 실시태양에서는, 피검자는 증가된 sCD40L의 농도를 가진 것을 제외하고는 유해 심혈관 증후의 증가된 위험에 있지 않다. 추가의 중요한 실시태양에서는, 치료된 피검자는 비고지혈증 피검자이다. 상기의 임의의 실시태양에서, 칼슘 채널 차단제는 디히드로피리딘, 페닐 알킬 아민, 및(또는) 벤조티아제핀일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 바람직한 실시태양에서, 본 발명에 따라 유용한 칼슘 채널 차단제는 암리논, 암로디핀, 벤시클란, 딜티아젬, 펠로디핀, 펜딜린, 플루나리진, 이스라디핀, 니카르디핀, 니페디핀, 니모디핀, 페르헥실렌, 갈로파밀,티아파밀 및 티아파밀 유사체 (예를 들어 1993RO-11-2933), 베라파밀, 페니토인, 바르비투레이트, 및 펩티드 디노르핀, 오메가-코노톡신, 및 오메가-아가톡신 등 및(또는) 그의 제약학상 허용되는 염을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명은 또한 심혈관 질병을 예방하기 위해 베타-아드레날린 수용체 차단제로 피검자를 치료하는 방법을 포함한다. 상기 약제는 정상 초과의 sCD40L 농도를 가지는 것을 기초로 선택된 피검자에 투여된다. 약제는 장래 심혈관 질병을 발병할 피검자의 위험도를 저하시키는데 유효량으로 투여된다. 한 실시태양에서, 피검자는 이미 심장 마비 또는 혈관형성 같은 심혈관 증후를 가졌었다. 또다른 중요한 실시태양에서, 피검자는 베타-아드레날린 수용체 차단제의 치료를 달리 현재 필요로 하지 않는 외관상 건강한 피검자이다. 중요한 실시태양에서는, 피검자는 증가된 sCD40L의 농도를 가진 것을 제외하고는 유해 심혈관 증후의 증가된 위험에 있지 않다. 추가의 중요한 실시태양에서는, 치료된 피검자는 비고지혈증 피검자이다. 상기의 임의의 실시태양에서, 베타-아드레날린 수용체 차단제는 아테놀롤, 아세부톨롤, 알프레놀롤, 베푸놀롤, 베탁솔롤, 부니트롤롤, 카르테올롤, 셀리프롤롤, 헤드록살롤, 인데놀롤, 라베탈롤, 레보부놀롤, 메핀돌롤, 메티프라놀, 메틴돌, 메토프롤롤, 메트리조라놀롤, 옥스프레놀롤, 핀돌롤, 프로프라놀롤, 프라크톨롤, 프라크톨롤, 소탈롤나돌롤, 티프레놀롤, 토말롤롤, 티몰롤, 부프라놀롤, 펜부톨롤, 트리메프라놀, 2-(3-(1,1-디메틸에틸)-아미노-2-히드록시프로폭시)-3-피리덴카르보니트릴 HCl, 1-부틸아미노-3-(2,5-디클로로페녹시)-2-프로판올, 1-이소프로필아미노-3-(4-(2-시클로프로필메톡시에틸)페녹시)-2-프로판올, 3-이소프로필아미노-1-(7-메틸인단-4-일옥시)-2-부탄올, 2-(3-t-부틸아미노-2-히드록시-프로필티오)-4-(5-카르바모일-2-티에닐)티아졸, 7-(2-히드록시-3-t-부틸아민프로폭시)프탈리드일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명은 또한 심혈관 질병을 예방하기 위해 시클로옥시제나제-2 저해제로 피검자를 치료하는 방법을 포함한다. 상기 약제는 정상 초과의 sCD40L 농도를 가지는 것을 기초로 선택된 피검자에 투여된다. 약제는 장래 심혈관 질병을 발병할 피검자의 위험도를 저하시키는데 유효량으로 투여된다. 한 실시태양에서, 피검자는 이미 심장 마비 또는 혈관형성 같은 심혈관 증후를 가졌었다. 또다른 중요한 실시태양에서, 피검자는 시클로옥시제나제-2 저해제의 치료를 달리 현재 필요로 하지 않는 외관상 건강한 피검자이다. 중요한 실시태양에서는, 피검자는 증가된 sCD40L의 농도를 가진 것을 제외하고는 유해 심혈관 증후의 증가된 위험에 있지 않다. 추가의 중요한 실시태양에서는, 치료된 피검자는 비고지혈증 피검자이다. 상기의 임의의 실시태양에서, 시클로옥시제나제-2 저해제는 페닐 헤테로환, 디아릴 비시클릭 헤테로환, 아릴 치환된 5,5 융합된 방향족 질소 화합물, N-벤질인돌-3-일 프로판산 및(또는) 그의 유도체, 5-메탄술폰아미도-1-인다논, N-벤질인돌-3-일 부탄산 및(또는) 그의 유도체, 디페닐-1,2-3-티아디아졸, 디아릴-5-산소화된-2- (5H)-푸라논, 3,4-디아릴-2-히드록시-2,5-디히드로푸란, 스틸벤 및(또는) 그의 유도체, 디페닐 스틸벤, 알킬화된 스티렌, 비스아릴 시클로부텐 및(또는) 그의 유도체, 치환된 피리딘, 피리디닐-2-시클로펜텐-l-온, 및(또는) 치환된 술포닐페닐헤테로환일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명은 또한 심혈관 질병을 예방하기 위해 안지오텐신계 저해제로 피검자를 치료하는 방법을 포함한다. 상기 약제는 정상 초과의 sCD40L 농도를 가지는 것을 기초로 선택된 피검자에 투여된다. 약제는 장래 심혈관 질병을 발병할 피검자의 위험도를 저하시키는데 유효량으로 투여된다. 한 실시태양에서, 피검자는 이미 심장 마비 또는 혈관형성 같은 심혈관 증후를 가졌었다. 또다른 중요한 실시태양에서, 피검자는 안지오텐신계 저해제의 치료를 달리 현재 필요로 하지 않는 외관상 건강한 피검자이다. 중요한 실시태양에서는, 피검자는 증가된 sCD40L의 농도를 가진 것을 제외하고는 유해 심혈관 증후의 증가된 위험에 있지 않다. 추가의 중요한 실시태양에서는, 치료된 피검자는 비고지혈증 피검자이다. 상기의 임의의 실시태양에서, 안지오텐신계 저해제는 안지오텐신-전환 효소 (ACE) 저해제, 안지오텐신 II 길항제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 안지오텐신 II의 이화작용을 활성화시키는 약제, 및(또는) 안지오텐신 I의 합성을 예방하는 약제일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 또다른 측면에 따르면, 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관된 심혈관 질병의 위험을 감소시키는 약제로의 치료로부터 개인이 이익 받을 가능성을 평가하기 위한 방법이 제공된다. 약제는 항염증제, 항혈전제, 항혈소판제, 피브린용해제, 지질 감소제, 직접 트롬빈 저해제, 당단백질 IIb/IIIa 수용체 저해제, 세포 유착 분자에 결합하여 백혈구의 상기 분자에의 부착 능력을 저해하는 약제 (예를 들면 항세포 유착 분자 항체), 칼슘 채널 차단제, 베타-아드레날린 수용체 차단제, 시클로옥시제나제-2 저해제, 안지오텐신계 저해제, 및(또는) 상기 약제들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 이 방법의 실시를 위해 개인의 sCD40L 농도를 수득한다. 이어서, 이 농도를 이미 결정된 값과 비교하는데, 여기서 이미 결정된 값과 비교한 sCD40L 농도는 개인이 약제로의 치료로 이익 받을 가능성을 표시한다. 이어서, 개인은 약제로의 치료로 수득할 것으로 보이는 순 이익의 면에서 특성화될 수 있다.
이미 결정된 값은 상기와 같을 수 있다.
상기와 같이, 본 발명은 개인에게서 비치명적 심근 경색을 포함하여 장래 졸중 또는 장래 심근 경색 같은 심혈관 질병의 위험을 감소시키기 위한 약제로의 치료로부터 개인이 우선적으로 이익 받게 될 것인가를 결정하는데 특히 적합하다. 또한, 예를 들어 유해 부작용의 고위험도 프로파일을 가진 공지의 치료 또는 새로운 치료로부터 가장 이익 받기 쉬운 개인을 구별해 냄으로써, 임상 실험 및 후보 약품으로의 치료를 위한 후보 집단의 선택을 가능하게 한다. 그러므로, 본 발명은 후보 환자를 위한 소정의 치료의 가망 있는 순 이익의 평가를 위한 정보를 제공한다.
본 발명의 또다른 측면에 따르면, 유해 심혈관 질병의 위험을 저하시키기 위해 피검자의 sCD40L 농도를 감소시키는 방법을 제공한다. 이 방법은 증가된 sCD40L 농도를 가진 피검자에 피검자의 sCD40L 농도를 감소시키는데 유효량으로 sCD40L 농도를 감소시키는 약제를 선택 및 투여하는 것을 포함한다. 한 실시태양에서, 약제는 지질 감소제이다. 바람직한 피검자는 외관상 건강한 피검자이다. 몇몇 실시태양에서는, 피검자는 달리 유해 심혈관 증후의 증가된 위험에 있지 않다. 소정의 실시태양에서는, 피검자는 증가된 C-반응성 단백질 (CRP) 농도를 가진다. 본 발명의 이 측면의 몇몇 실시태양에서는, 피검자는 달리 지질 감소제로의 치료를 요구하는 표시는 없다.
본 발명의 추가의 측면에 따르면, 심혈관 질병의 발병 위험 있는 개인에게서 혈관 플라크내 지질 축적의 가능성을 평가하기 위한 방법이 제공된다. 이 방법은 개인의 sCD40L 농도를 수득한 후, sCD40L의 농도를 이미 결정된 값과 비교하고, 혈관 플라크내 지질 축적에 대한 개인 위험도 프로파일을 이미 결정된 값과 비교한 sCD40L의 농도에 기초하여 특성화하는 것을 포함한다. 이미 결정된 값은 복수개의 이미 결정된 sCD40L 농도 범위일 수 있고 상기 비교 단계는 상기 개인의 sCD40L 농도가 상기 이미 결정된 sCD40L 농도 범위들 중 어디에 속하는지 결정하는 것을 포함한다. 소정의 실시태양에서는, 이미 결정된 값은 약 2.5ng/mL 혈액 또는 그 보다 높다. 몇몇 실시태양에서는, 이미 결정된 값은 약 3.0ng/mL 혈액 또는 그 보다 높다. 중요한 실시태양에서는, 이미 결정된 값은 복수개의 이미 결정된 sCD40L 농도 범위이고 상기 복수개 중 하나는 약 2.5ng/mL 혈액 미만이고 상기 다른 범위는 약 2.5ng/mL 혈액이며, 상기 비교 단계는 상기 개인의 sCD40L 농도가 상기 복수개의 이미 결정된 sCD40L 농도 범위들 중 어디에 속하는지 결정하는 것을 포함한다. 추가의 중요한 실시태양에서는, 혈관 플라크내 지질 축적은 경동맥에서 일어난다. 다른 바람직한 범위 및 중요한 실시태양은 상기 및 하기와 같다.
본 발명의 추가의 측면에 따르면, 심혈관 상태의 치료에 유용한 약물의 제조 방법이 제공된다.
본 발명의 이들 및 다른 측면은 발명의 상세한 설명과 연관하여 하기에서 더 자세히 설명되어질 것이다.
본 발명은 심근 경색 및 졸중 같은 심혈관 질병의 위험도를 특히 현재 질병의 징후 또는 증상을 보이지 않는 개인 및 비흡연자 중에서 결정하기 위한 진단 시험의 새로운 용도를 설명한다. 더욱이, 본 발명은 위험도 있는 어떤 개인이 심혈관 질병을 예방 또는 치료하기 위해 고안된 소정의 치료로부터 우선적으로 이익받게 될 것인지를 의사가 결정하는 것을 도와주는 진단 시험의 새로운 용도를 설명한다. 치료 방법 또한 설명된다.
도 1은 sCD40L 혈액 농도에 따른 연구 집단에서의 심혈관 증후의 상대적 위험도를 증명하는 그래프이다. 점선은 대조군 분포의 99%의 컷오프 (cut-off)점을 그린다.
본 발명의 주된 근거는 어떠한 심혈관 질병 또는 암의 병력이 없는 28,263명의 중년 미국 여성에서의 비타민 E 및 적은 아스피린 투여량의 효능을 평가하는 진행중인 주요 예방 실험인 여성 건강 연구 (Women's Health Study (WHS))의 참가자 중에서 예기되는 가장 좁혀진 환자 대조군 분석으로부터의 입증이다. 이 실험에서 염증 매개체 sCD40L의 기준선 농도는 많은 일련의 지질 및 비지질 위험 인자와 독립적으로, 및 전신성 염증 표지를 포함하여 다른 예측인자와 독립적으로 심근 경색 및 졸중의 장래 위험을 결정하는 것으로 발견되었다 (예를 들면, 미국 특허 6,040,147 참조). 특히, 가장 높은 sCD40L 기준선 농도를 가진 개인이 장래 심혈관 증후의 발병 위험이 3배 이상 증가됨이 발견되었다 (도 1).
더욱이, 여성 건강 연구에서의 데이터에서, sCD40L과 연관된 장래 심근 경색 및 졸중의 위험은 총 콜레스테롤 및 HDL 콜레스테롤의 통상의 평가에 의해 달리 결정될 수 있는 것에 부가적인 것으로 보인다. 이 실험에서, sCD40L의 예상 값은 치명적 증후 뿐만 아니라 비치명적인 것에 대해서도 제공되었고, 장기간에 걸쳐 안정했고, 흡연자 뿐만 아니라 비흡연자에 대해서도 제공되었다. 추가적으로, 이 실험에서의 데이터는 외관상 건강한 개인이 아테롬성 동맥경화증의 예방 및 치료에 사용되는 치료제로부터 예상할 수 있는 이익의 크기를 표시한다.
본 발명의 한 측면은 현재 질병의 증거가 없는 개인 중에서 아테롬성 동맥경화증과 연관된 심혈관 질병, 예를 들어 심근 경색 및 졸중의 위험을 예측하기 위한 sCD40L의 사용을 설명한다. 그러므로, 이 데이터는 이미 확인된 고위험 집단 또는 징후적인 허혈성 환자, 예를 들면 불안정한 협심증을 가진 환자 중에서 위험을 예측하기 위한 sCD40L의 사용에 관한 선행 관찰을 크게 확장시킨다. 실로, sCD40L의 농도가 급성 허혈증 후에 증가하기 때문에, 급성으로 아픈 또는 고위험 집단의 선행 연구에서 관찰된 통계적 연관이 우연한 것인지, 단기간의 염증 변화에 기인한 것인지, 또는 특히 흡연 및 고지혈증 같은 다른 위험 인자와의 상관관계에 기인한 것인지 불분명하다.
두드러지게 대조적으로, 여성 건강 연구에서의 데이터는 처음으로 현재 건강하고 달리 저위험의 개인 중에서의 위험도의 예측, 치명적 뿐 아니라 비치명적 증후의 예측, 비흡연자 중에서의 위험도 예측, 및 총 및 HDL 콜레스테롤의 감별과 연관된 것을 넘어선 그 이상의 위험도를 예측하는 sCD40L의 유용성을 나타낸다. 또한, 여성 건강 연구에서의 데이터는 처음으로 심근 경색 및 졸중 같은 아테롬성 동맥경화증 증후의 위험을 감소시키기 위해 고안된 중재안이 효능을 가질 가능성이 sCD40L 혈장/혈액 농도의 측정에 기초한 크기와 다름을 나타낸다. 본 발명은 하기의 간단한 용어의 설명을 참조하여 더 잘 이해될 것이다.
"심혈관 심근 허혈증, 질병"은 심근 경색, 졸중, 심근 허혈증, 협심증 및 말초 동맥 질병을 포함한다. 심혈관 질병은 정맥 혈전증을 포함하지 않는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "외관상 건강한"은 심근 경색 같은 급성 유해 심혈관 증후를 이전에 가지지 않았던 개인 (즉, 1차 유해 심혈관 증후에 기인한 2차 유해 심혈관 증후의 증가된 위험이 없는 개인)을 의미한다. 외관상 건강한 개인은 또한 달리 질병의 증상을 보이지 않는다. 환언하면, 의학 전문인에 의해 진료되면 이런 개인은 건강 및 질병의 증상이 없는 것으로 특성화될 것이다.
중요한 실시태양에서는, 피검자는 달리 유해 심혈관 증후의 증가된 위험을 가지지 않는다. 이런 증가된 위험을 갖는 피검자는 심혈관 질병의 가족 병력, 증가된 지질, 흡연자, 이전의 급성 심혈관 증후 등을 가진 피검자를 포함한다 (예를 들어 문헌 [Harrison's Principles of Experimental Medicine, 15th Edition, McGraw-Hill, Inc., N. Y.] 참조- 이하, "Harrison's"). 본 발명의 한 중요한 측면에 따르면, 심혈관 질병의 위험을 감소시키는 피검자 치료법이 제공된다. 이 방법은 정상 초과의 sCD40L 농도를 가진 것으로 알려진 피검자에 심혈관 질병의 위험을 감소시키는 약제의 선택 및 투여를 포함한다. 약제는 항염증제, 항혈전제, 항혈소판제, 피브린용해제, 지질 감소제, 직접 트롬빈 저해제, 당단백질 IIb/IIIa 수용체 저해제 및 세포 유착 분자에 결합하여 백혈구의 상기 분자에의 부착 능력을 저해하는 약제, 칼슘 채널 차단제, 베타-아드레날린 수용체 차단제, 시클로옥시제나제-2 저해제, 안지오텐신계 저해제, 및(또는) 그의 혼합물일 수 있다. 약제는 장래 심혈관 질병을 발병할 피검자의 위험도를 저하시키는데 유효량으로 투여된다.
바람직한 피검자는 본 발명에 따라 처방된 약제로의 치료를 달리 현재 필요로 하지 않는 외관상 건강한 피검자이다. 예를 들면, 특정 약제로의 치료가 sCD40L의 증가된 농도에 기초하여 일어난다면, 환자는 증가된 농도의 sCD40L을 갖는 증상 이외에 그 약제 (또는 그 약제가 포함되는 약제의 분류)로의 치료를 요구하는 증상이 없는 환자가 바람직하다. 몇몇 실시태양에서는, 피검자는 상기 약제 분류내의 모든 약제 또는 임의의 혼합물 중 어느 하나로의 치료를 요구하는 증상이 달리 없다. 예를 들면, 항염증제에 관해 루마티스성 관절염, 만성 요통, 자가면역 질병, 혈관 질병, 바이러스성 질병, 악성 종양 등의 증상이 없다. 추가의 중요한 실시태양에서는, 치료된 피검자는 비고지혈증 피검자이다. 또다른 실시태양에서는, 피검자는 증가된 sCD40L의 농도를 갖는 것을 제외하고는 유해 심혈관 증후의 증가된 위험에 있지 않다 (예를 들어 이런 증후의 가족 병력이 없는 피검자, 비흡연자인 피검자, 비고지혈증인 피검자, 전신성 염증 표지의 증가된 농도를 가지지 않은 피검자). 몇몇 실시태양에서, 피검자는 상기 약제 분류의 임의의 하나, 임의의 혼합물 또는 모두로의 치료를 요구하는 증상이 달리 없다.
몇몇 실시태양에서는, 피검자는 상기 약제 분류의 임의의 하나, 임의의 혼합물 또는 모두로의 치료를 요구하는 증상이 달리 없다. 추가의 중요한 실시태양에서는, 치료된 피검자는 비고지혈증 피검자이다. "비고지혈증"은 비고콜레스테롤증 및(또는) 비고중성지방증인 피검자이다. "비고콜레스테롤증" 피검자는 고콜레스테롤증 피검자에 대해 설정된 현재 기준에 맞지 않는 피검자이다. "비고중성지방증" 피검자는 고중성지방증 피검자에 대해 설정된 현재 기준에 맞지 않는 피검자이다 (예를 들어 문헌 [Harrison's Principles of Experimental Medicine, 15th Edition, McGraw-Hill, Inc. , N. Y.] 참조- 본 명세서에서 "Harrison's"). 고콜레스테롤 피검자 및 고중성지방 피검자는 조기 관상 동맥 심장 질병의 증가된 발병과 연관되어 있다. 고콜레스테롤 피검자는 LDL 농도 >160mg/dL, 또는 >130mg/dL을 가지고 남성, 조기 관상 동맥 심장 질병의 가족 병력, 담배 흡연 (하루 10개 초과), 고혈압, 낮은 HDL (<35 mg/dL), 당뇨병, 과인슐린증, 복부 비만, 고지질단백질 (a), 및 뇌혈관 질병 또는 폐쇄성 말초 혈관 질병의 개인 병력으로 구성된 군으로부터 선택된 둘 이상의 위험 인자를 갖는다. 고중성지방 피검자는 중성지방 (TG) 농도 >250mg/dL을 갖는다. 그러므로, 비고지혈증 피검자는 그의 콜레스테롤 및 중성지방 농도가 고콜레스테롤 피검자 및 고중성지방 피검자 모두에 대해 상기와 같이 설정된 한계 미만인 피검자로 정의된다.
몇몇 실시태양에서는, 피검자는 정상 농도의 전신성 염증 표지를 가진다. 본 발명의 목적을 위해, 정상 농도란 증가된 농도의 부재와 같은 것을 의미한다. 정상 농도는 특정 전신성 염증 표지에 의존할 것이다 (본 명세서에서 전체가 참고 문헌으로 인용된, 미국 특허 6,040,147 참조).
본 명세서에서와 같이, "비흡연자"는 평가 당시에 흡연자가 아닌 개인을 의미한다. 이는 과거에 흡연하였으나 지금 더이상 흡연하지 않는 개인 뿐만 아니라 전혀 흡연하지 않은 개인을 포함한다.
심혈관 질병의 위험도를 감소시키는 약제는 항염증제, 항혈전제, 항혈소판제, 피브린용해제, 지질 감소제, 직접 트롬빈 저해제, 당단백질 IIb/IIIa 수용체저해제, 세포 유착 분자에 결합하여 백혈구의 상기 분자에의 부착 능력을 저해하는 약제 (예를 들면 항세포 유착 분자 항체), 칼슘 채널 차단제, 베타-아드레날린 수용체 차단제, 시클로옥시제나제-2 저해제, 안지오텐신계 저해제, 및(또는) 그의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
"항염증제"는 알클로페낙; 알클로메타손 디프로피오네이트; 알제스톤 아세토니드; 알파 아밀라제; 암시나팔; 암시나피드; 암페낙 소듐; 아미프릴로스 히드로클로리드; 아나킨라; 아니롤락; 아니트라자펜; 아파존; 발살라지드 디소듐; 벤다작; 베녹사프로펜; 벤지다민 히드로클로리드; 브로멜라인스; 브로페라몰; 부데소니드; 카르프로펜; 시클로프로펜; 신타존; 클리프로펜; 클로베타솔 프로피오네이트; 클로베타손 부티레이트; 클로피락; 클로티카손 프로피오네이트; 코르메타손 아세테이트; 코르토독손; 데플라자코르트; 데소니드; 데속시메타손; 덱사메타손 디프로피오네이트; 디클로페낙 포타슘; 디클로페낙 소듐; 디플로라손 디아세테이트; 디플루미돈 소듐; 디플루니살; 디플루프레드네이트; 디프탈론; 디메틸 술폭시드; 드로시노니드; 엔드리손; 엔리모맙; 에놀리캄 소듐; 에피리졸; 에토돌락; 에토페나메이트; 펠비낙; 페나몰; 펜부펜; 펜클로페낙; 펜클로락; 펜도살; 펜피팔론; 펜티아작; 플라잘론; 플루아자코르트; 플루페남산; 플루미졸; 플루니솔리드 아세테이트; 플루닉신; 플루닉신 메글루민; 플루오코르틴 부틸; 플루오로메톨론 아세테이트; 플루쿠아존; 플루르비프로펜; 플루레토펜; 플루티카손 프로피오네이트; 푸라프로펜; 푸로부펜; 할시노니드; 할로베타솔 프로피오네이트; 할로프레돈 아세테이트; 이부페낙; 이부프로펜; 이부프로펜 알루미늄; 이부프로펜 피코놀; 일로니다프; 인도메타신;인도메타신 소듐; 인도프로펜; 인독솔; 인트라졸; 이소플루프레돈 아세테이트; 이속세팍; 이속시캄; 케토프로펜; 로페미졸 히드로클로리드; 로르녹시캄; 로테프레드놀 에타보네이트; 메클로페나메이트 소듐; 메클로페남산; 메클로리손 디부티레이트; 메페남산; 메살라민; 메세클라존; 메틸프레드니솔론 술레프타네이트; 모르니플루메이트; 나부메톤; 나프록센; 나프록센 소듐; 나프록솔; 니마존; 올살라진 소듐; 오르고테인; 오르파녹신; 옥사프로진; 옥시펜부타존; 파라닐린 히드로클로리드; 펜토산 폴리술페이트 소듐; 펜부타존 소듐 글리세레이트; 피르페니돈; 피록시캄; 피록시캄 신나메이트; 피록시캄 올라민; 피르프로펜; 프레드나제이트; 프리펠론; 프로돌산; 프로쿠아존; 프록사졸; 프록사졸 시트레이트; 리멕솔론; 로마자리트; 살콜렉스; 살나세딘; 살살레이트; 살리실레이트; 산구이나리움 클로리드; 세클라존; 세르메타신; 수독시캄; 술린닥; 수프로펜; 탈메타신; 탈니플루메이트; 탈로살레이트; 테부펠론; 테니다프; 테니다프 소듐; 테녹시캄; 테시캄; 테시미드; 테트리다민; 티오피낙; 틱소코르톨 피발레이트; 톨메틴; 톨메틴 소듐; 트리클로니드; 트리플루미데이트; 지도메타신; 글루코코르티코이드; 조메피락 소듐을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"항혈전" 및(또는) "피브린용해제"는 플라스미노겐 (프레칼리크레인, 키니노겐, 인자 XII, XIIIa, 플라스미노겐 전구활성제, 및 조직 플라스미노겐 활성제 [TPA]의 상호작용을 통해 플라스민으로) 스트렙토키나제; 우로키나제; 아니소일화된 플라스미노겐-스트렙토키나제 활성제 복합체; 전구-우로키나제; (Pro-UK); rTPA (알테플라제 또는 활성 효소; r은 재조합을 표시한다); rPro-UK; 압보키나제; 에미나제; 스레프타제 아나그렐리드 히드로클로리드; 비발리루딘; 달테파린 소듐; 다나파로이드 소듐; 다족시벤 히드로클로리드; 에페가트란 술페이트; 에녹사파린 소듐; 이페트로반; 이페트로반 소듐; 틴자파린 소듐; 레타플라제; 트리페나그렐; 와르파린; 덱스트란을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"항혈소판제"는 클로프리도그렐; 술핀피라존; 아스피린; 디피리다몰; 클로피브레이트; 피리디놀 카르바메이트; PGE; 글루카곤; 항세로토닌 약품; 카페인; 테오필린 펜톡시필린; 티클로피딘; 아나그렐리드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"지질 감소제"는 젬피브로질, 콜리스티라민, 콜레스티폴, 니코틴산, 프로부콜 로바스타틴, 플루바스타틴, 심바스타틴, 아토르바스타틴, 프라바스타틴, 세리바스타틴, 및 다른 HMG-CoA 환원제 저해제일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
HMG-CoA (3-히드록시-3-메틸글루타릴-조효소 A) 환원제는 콜레스테롤 생합성 (HMG-CoA6메발로네이트)에서 속도 제한 반응을 촉매하는 과립체 효소이다. HMG-CoA 환원제 저해제는 HMG-CoA 환원제를 저해하고, 결과로 콜레스테롤 합성을 저해한다. 다수의 HMG-CoA 환원제 저해제가 고콜레스테롤 개인을 치료하기 위해 사용되어 왔다. 더 최근에는 HMG-CoA 환원제 저해제가 졸중의 치료에 유리한 것으로 나타났다 (Endres M, et al.,Proc Natl Acad Sci USA, 1998, 95:8880-5).
본 발명에 따라 유용한 HMG-CoA 환원제 저해제는 심바스타틴 (미국 특허 번호 4,444,784), 로바스타틴 (미국 특허 번호 4,231,938), 프라바스타틴 소듐 (미국 특허 번호 4,346,227), 플루바스타틴 (미국 특허 번호 4,739,073), 아토르바스타틴 (미국 특허 번호 5,273,995), 세리바스타틴, 및 미국 특허 번호 5,622,985, 미국특허 번호 5,135,935, 미국 특허 번호 5,356,896, 미국 특허 번호 4,920,109, 미국 특허 번호 5,286,895, 미국 특허 번호 5,262,435, 미국 특허 번호 5,260,332, 미국 특허 번호 5,317,031, 미국 특허 번호 5,283,256, 미국 특허 번호 5,256,689, 미국 특허 번호 5,182,298, 미국 특허 번호 5,369,125, 미국 특허 번호 5,302,604, 미국 특허 번호 5,166,171, 미국 특허 번호 5,202,327, 미국 특허 번호 5,276,021, 미국 특허 번호 5,196,440, 미국 특허 번호 5,091,386, 미국 특허 번호 5,091,378, 미국 특허 번호 4,904,646, 미국 특허 번호 5,385,932, 미국 특허 번호 5,250,435, 미국 특허 번호 5,132,312, 미국 특허 번호 5,130,306, 미국 특허 번호 5,116,870, 미국 특허 번호 5,112,857, 미국 특허 번호 5,102,911, 미국 특허 번호 5,098,931, 미국 특허 번호 5,081,136, 미국 특허 번호 5,025,000, 미국 특허 번호 5,021,453, 미국 특허 번호 5,017,716, 미국 특허 번호 5,001,144, 미국 특허 번호 5,001,128, 미국 특허 번호 4,997,837, 미국 특허 번호 4,996,234, 미국 특허 번호 4,994,494, 미국 특허 번호 4,992,429, 미국 특허 번호 4,970,231, 미국 특허 번호 4,968,693, 미국 특허 번호 4,963,538, 미국 특허 번호 4,957,940, 미국 특허 번호 4,950,675, 미국 특허 번호 4,946,864, 미국 특허 번호 4,946,860, 미국 특허 번호 4,940,800, 미국 특허 번호 4,940,727, 미국 특허 번호 4,939,143, 미국 특허 번호 4,929,620, 미국 특허 번호 4,923,861, 미국 특허 번호 4,906,657, 미국 특허 번호 4,906,624 및 미국 특허 번호 4,897,402 (이들 특허의 내용은 본 명세서에서 참고문헌으로 인용된다)에 설명된 다수의 다른 것을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"직접 트롬빈 저해제"는 히루딘, 히루젠, 히룰로그, 아가트로반, PPACK, 트롬빈 앱타머를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"당단백질 IIb/IIIa 수용체 저해제"는 항체 및 비항체 모두이고, 레오프로 (ReoPro (앱식사맙)), 라미피반, 티로피반을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"칼슘 채널 차단제"는 다수의 심혈관 질병, 예를 들면 고혈압, 협심증, 및 심장 부정맥을 포함하는 다양한 질병의 억제에 중요한 치료적 가치를 가진 화학적으로 다양한 화합물의 한 분류이다 (Fleckenstein,Cir. Res. v. 52, (suppl. 1), p. 13-16 (1983); Fleckenstein,Experimental Facts and Therapeutic Prospects, John Wiley, New York (1983); McCall, D.,Curr Pract Cardiol, v. 10, p. 1-11 (1985)). 칼슘 채널 차단제는 세포 칼슘 채널을 조절함으로써 세포 내로 칼슘의 출입을 예방 또는 감속시키는 이종 군의 약품이다 (Remington,The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Edition, Mack Publishing Company, 펜실베니아주 이톤시 소재, p. 963 (1995)). 현재 이용할 수 있고 본 발명에 따라 유용한 칼슘 채널 차단제의 대부분은 디히드로피리딘, 예를 들면 니페디핀, 페닐 알킬 아민, 예를 들면 베라파밀, 및 벤조티아제핀, 예를 들면 딜티아젬의 세가지 중요한 화학적 약품의 군들 중 하나에 속한다. 본 발명에 따라 유용한 다른 칼슘 채널 차단제는 암리논, 암로디핀, 벤시클란, 펠로디핀, 펜딜린, 플루나리진, 이스라디핀, 니카르디핀, 니모디핀, 페르헥실렌, 갈로파밀, 티아파밀 및 티아파밀 유사체 (예를 들어 1993RO-11-2933), 페니토인, 바르비투레이트, 및 펩티드 디노르핀, 오메가-코노톡신, 및 오메가-아가톡신 등 및(또는) 그의 제약학상 허용되는 염을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
베타-아드레날린 수용체 차단제는 협심증, 고혈압, 심장 부정맥에서 카테콜아민의 심혈관 효과를 길항하는 약품의 한 분류이다. 베타-아드레날린 수용체 차단제는 아테놀롤, 아세부톨롤, 알프레놀롤, 베푸놀롤, 베탁솔롤, 부니트롤롤, 카르테올롤, 셀리프롤롤, 헤드록살롤, 인데놀롤, 라베탈롤, 레보부놀롤, 메핀돌롤, 메티프라놀, 메틴돌, 메토프롤롤, 메트리조라놀롤, 옥스프레놀롤, 핀돌롤, 프로프라놀롤, 프라크톨롤, 프라크톨롤, 소탈롤나돌롤, 티프레놀롤, 토말롤롤, 티몰롤, 부프라놀롤, 펜부톨롤, 트리메프라놀, 2-(3-(1,1-디메틸에틸)-아미노-2-히드록시프로폭시)-3-피리덴카르보니트릴 HCl, 1-부틸아미노-3-(2,5-디클로로페녹시)-2-프로판올, 1-이소프로필아미노-3-(4-(2-시클로프로필메톡시에틸)페녹시)-2-프로판올, 3-이소프로필아미노-1-(7-메틸인단-4-일옥시)-2-부탄올, 2-(3-t-부틸아미노-2-히드록시-프로필티오)-4-(5-카르바모일-2-티에닐)티아졸, 7-(2-히드록시-3-t-부틸아민프로폭시)프탈리드일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기한 화합물은 이성질체 혼합물, 또는 각각의 좌선성 또는 우선성 형태로서 사용될 수 있다.
시클로옥시제나제-2 (COX-2)는 시클로옥시제나제의 최근 동정된 새로운 형태이다. "시클로옥시제나제"는 아라키돈산으로부터 다양한 프로스타글란딘 및 트롬복산을 생성하는 거의 모든 조직에 존재하는 효소 복합체이다. 비스테로이드, 항염증성 약품은 거의 모든 항염증, 진통 및 해열 활성을 발휘하고 시클로옥시제나제 (프로스타글란딘 G/H 합성효소 및(또는) 프로스타글란딘-엔도퍼록시드 합성효소로도 알려짐)의 저해를 통해 호르몬 유도된 자궁 수축 및 특정 유형의 암 성장을 저해한다. 초기에는, 시클로옥시제나제의 단지 한 형태, "구성 효소" 또는 시클로옥시제나제-1 (COX-1)만이 알려져 있었다. 원래 소 정액 소낭에서 동정되었다.
시클로옥시제나제-2 (COX-2)는 처음에 닭, 쥐 및 인간 공급원에서 클로닝, 서열화 및 특성화되어 왔었다 (예를 들면, 머크 프로스트 캐나다, 인크. (Merck Frosst Canada, Inc.)(캘리포니아주 커크랜드 소재)에 양도된 제목 "인간 시클로옥시제나제-2 cDNA 및 시클로옥시제나제-2 활성을 평가하는 분석"의 1996년 8월 6일 크롬리쉬 (Cromlish) 등에 허여된 미국 특허 5,543,297 참조). 이 효소는 COX-1과 구별된다. COX-2는 유사분열촉진제, 내독소, 호르몬, 시토킨 및 성장 인자를 포함하는 다수의 약제에 의해 빨리 및 즉시 유도될 수 있다. 프로스타글란딘이 생리적 및 병리적 역할을 모두 가진 것처럼, 구성 효소 COX-1이 프로스타글란딘의 내인성 기초 방출을 대부분 맡고 있고 그래서 위장 일체성 및 신장 혈액 흐름의 유지 같은 생리적 기능에 중요한 것으로 믿어진다. 대조적으로, 유도될 수 있는 형태 COX-2는 염증제, 호르몬, 성장 인자 및 시토킨 같은 약제에 반응하여 효소의 빠른 유도가 일어날 수 있는 프로스타글란딘의 생리적 효과를 주로 맡고 있는 것으로 믿어진다. 그러므로, COX-2의 선택적 저해제는 종래의 비스테로이드 항염증 약품과 유사한 항염증, 진통 및 해열 성질을 가지고, 부가적으로 호르몬 유도된 자궁 수축을 저해하며 또한 잠재적인 항암 효과를 갖지만 부작용으로 감소된 것으로 믿어진다. 특히, 이런 COX-2의 저해제는 위장 독성의 감소된 가능성, 신장 부작용의 감소된 가능성, 출혈 시간에 미치는 감소된 효과 및 아마도 아스피린 민감성 천식 피검자의 천식 발작의 유발의 감소된 가능성을 가진 것으로 믿어지며, 그러므로 본 발명에 따라 유용하다.
다수의 선택적 "COX-2의 저해제"는 당업계에 공지되어 있다. 이것은 미국 특허 5,474,995 "COX-2 저해제로서의 페닐 헤테로환"; 미국 특허 5,521,213의 "시클로옥시제나제-2 저해제로서의 디아릴 비시클릭 헤테로환"; 미국 특허 5,536,752의 "COX-2 저해제로서의 페닐 헤테로환"; 미국 특허 5,550,142의 "COX-2 저해제로서의 페닐 헤테로환"; 미국 특허 5,552,422의 "항염제로서의 아릴 치환된 5,5 융합된 방향족 질소 화합물"; 미국 특허 5,604,253의 "시클로옥시제나제 저해제로서의 N-벤질인돌-3-일 프로판산 유도체"; 미국 특허 5,604,260의 "시클로옥시제나제-2 저해제로서의 5-메탄술폰아미도-1-인다논"; 미국 특허 5,639,780의 "시클로옥시제나제 저해제로서의 N-벤질인돌-3-일 부탄산 유도체"; 미국 특허 5,677,318의 "항염제로서의 디페닐-1,2-3-티아디아졸"; 미국 특허 5,691,374의 "COX-2 저해제로서의 디아릴-5-산소화된-2-(5H)-푸라논"; 미국 특허 5,698,584의 "COX-2 저해제의 전구약품으로서의 3,4-디아릴-2-히드록시-2,5-디히드로푸란"; 미국 특허 5,710,140의 "COX-2 저해제로서의 페닐 헤테로환"; 미국 특허 5,733,909의 "COX-2 저해제의 전구약품으로서의 디페닐 스틸벤"; 미국 특허 5,789,413의 "COX-2 저해제의 전구약품으로서의 알킬화된 스티렌"; 미국 특허 5,817,700의 "시클로옥시제나제 저해제로서의 비스아릴 시클로부텐"; 미국 특허 5,849,943의 "시클로옥시제나제-2 저해제로 유용한 스틸벤 유도체"; 미국 특허 5,861,419의 "선택적 시클로옥시제나제-2 저해제로서의 치환된 피리딘"; 미국 특허 5,922,742의 "선택적 시클로옥시제나제-2 저해제로서의 피리디닐-2-시클로펜텐-l-온"; 미국 특허 5,925,631의 "COX-2 저해제의 전구약품으로서의 알킬화된 스티렌" (이들은 모두머크 프로스트 캐나다, 인크.(캘리포니아주 커크랜드 소재) 일반 양도됨)에 기재된 COX-2 저해제들을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 부가적 COX-2 저해제는지. 디. 시얼리 앤 캄파니(G. D. Searle & Co. (일리노이주 스코키 소재))에 양도된 제목 "시클로옥시제나제-2 및 5-리폭시제나제 저해제로서의 치환된 술포닐페닐헤테로환"의 미국 특허 5,643,933에 기술되어 있다.
다수의 상기한 COX-2 저해제는 선택적 COX-2 저해제의 전구약품이고, 활성 및 선택적 COX-2 저해제로의 생체내 전환에 의해 작용한다. 상기한 COX-2 저해제 전구약품으로부터 형성된 활성 및 선택적 COX-2 저해제는 1995년 1월 5일 공개된 WO 95/00501, 1995년 7월 13일 공개된 WO 95/18799, 1995년 12월 12일 허여된 미국 특허 5,474,995에 자세히 설명되어 있다. 제목 "인간 시클로옥시제나제-2 cDNA 및 시클로옥시제나제-2 활성을 평가하는 분석"의 미국 특허 5,543,297의 가르침에 따르면 당업자는 약제가 선택적 COX-2 저해제 또는 COX-2 저해제의 전구체인지, 및 따라서 본 발명의 일부분인지를 결정할 수 있을 것이다.
"안지오텐신계 저해제"는 안지오텐신 II의 합성 및 분해 같은 기능을 방해하는 약제이다. 이 약제는 안지오텐신-전환 효소 (ACE) 저해제, 안지오텐신 II 길항제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 안지오텐신 II의 이화작용을 활성화시키는 약제, 및 안지오텐신 II가 최종적으로 유도되는 안지오텐신 I의 합성을 예방하는 약제일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 레닌-안지오텐신계는 혈류역학의 조절 및 물 및 전해질의 평형에 관계되어 있다. 혈액량, 신장 관류 압력, 또는 혈장내 나트륨의 농도를 저하시키는 인자는 그 계를 활성화시키는 경향이 있는 반면, 이들변수를 증가시키는 인자는 그 기능을 억제하는 경향이 있다.
안지오텐신 I 및 안지오텐신 II는 효소적 레닌-안지오텐신 경로에 의해 합성된다. 합성 과정은 효소 레닌이 데카펩피드 안지오텐신 I을 생성하기 위해 혈액 혈장내 가성글로불린인 안지오텐시노겐에 작용하여 개시된다. 안지오텐신 I은 안지오텐신-전환 효소 (ACE)에 의해 안지오텐신 II (안지오텐신-[1-8]옥타펩티드)로 전환된다. 후자는 다양한 포유류 종, 예를 들어 인간에서 고혈압의 여러 형태의 원인제로서 암시되어 온 활성 혈압 증진 물질이다.
안지오텐신 (레닌-안지오텐신) 체계 저해제는 안지오텐시노겐 또는 안지오텐신 I으로부터의 안지오텐신 II의 생성을 방해하거나 또는 안지오텐신 II의 활성을 방해하는 작용의 화합물이다. 이런 저해제는 당업자에 잘 알려져 있고 레닌 및 ACE을 포함한 안지오텐신 II의 최종적인 생성에 관계된 효소를 억제하는 작용의 화합물을 포함한다. 이들은 또한 일단 생성되면 안지오텐신 II의 활성을 방해하는 화합물을 포함한다. 이런 화합물 군의 예로는 항체 (예를 들어 레닌에 대한), 아미노산 및 그의 유사체 (더 큰 분자에 포접된 것 포함), 펩티드 (안지오텐신 및 안지오텐신 I의 펩티드 유사체 포함), 전구 레닌 관련 유사체 등을 포함한다. 가장 강하고 유용한 레닌-안지오텐신계 저해제는 레닌 저해제, ACE 저해제, 및 안지오텐신 II 길항제이다. 본 발명의 바람직한 실시태양에서 레닌-안지오텐신계 저해제는 레닌 저해제, ACE 저해제, 및 안지오텐신 II 길항제이다.
"안지오텐신 II 길항제"는 안지오텐신 II 수용체와 결합하여 그의 활성을 방해함으로써 안지오텐신 II의 활성을 방해하는 화합물이다. 안지오텐신 II 길항제는 잘 알려져 있고 펩티드 화합물 및 비펩티드 화합물을 포함한다. 안지오텐신 II 길항제의 거의 모두는 조금 변형된 동족으로 작동질 활성이 위치 8의 페닐알라닌의 다른 아미노산으로의 치환에 의해 약해지고; 안정성은 생체내 분해를 감속시키는 다른 치환에 의해 높일 수 있다. 안지오텐신 II 길항제의 예로는 하기를 포함한다: 펩티드 화합물 (예를 들면 사랄라신, [(San1)(Val5)(Ala8)] 안지오텐신-(1-8) 옥타펩티드 및 관련된 유사체); N-치환된 이미다졸-2-온 (미국 특허 번호 5,087,634); 2-N-부틸-4-클로로-1-(2-클로벤질)이미다졸-5-아세트산 (Long et al.,J. Pharmacol. Exp. Ther. 247(1), 1-7 (1988) 참조)을 포함하는 이미다졸 아세테이트 유도체; 4,5,6,7-테트라히드로-lH-이미다조[4,5-c]피리딘-6-카르복실산 및 유사체 유도체 (미국 특허 번호 4,816,463); N2-테트라졸 베타-글루쿠로니드 유사체 (미국 특허 번호 5,085,992); 치환된 피롤, 피라졸, 및 트리아졸 (미국 특허 번호 5,081,127); 페놀 및 헤테로환 유도체, 예를 들면 1,3-이미다졸 (미국 특허 번호 5,073,566); 이미다조-융합된 7-원 고리 헤테로환 (미국 특허 번호 5,064,825); 펩티드 (예를 들면, 미국 특허 번호 4,772,684); 안지오텐신 II 항체 (예를 들면, 미국 특허 번호 4,302,386); 및 아랄킬 이미다졸 화합물, 예를 들면 비페닐-메틸 치환된 이미다졸 (예를 들면, EP 번호 253,310, 1월 20일, 1988); ES8891 (N-모르폴리노아세틸-(-l-나프틸)-L-알라닐-(4, 티아졸릴)-L-알라닐(35,45)-4-아미노-3-히드록시-5-시클로-헥사펜타노일-N-헥실아미드, 산교 캄파니, 리미티드. (Sankyo Company, Ltd.), 일본 토쿄 소재); SKF108566 (E-알파-2-[2-부틸-1-(카르복시페닐)메틸]1H-이미다졸-5-일[메틸란]-2-티오페네프로판산, 스미스 클라인 비참 파마슈티칼즈 (Smith Kline Beecham Pharmaceuticals) (펜실베니아주 소재)); 로사르탄 (DUP753/MK954, 듀퐁 머크 파마슈티칼 캄파니 (DuPont Merck Pharmaceutical Company)); 레미키린 (R042-5892, 에프. 호프만 라로쉐 AG (F. Hoffman LaRoche AG)); A2작동질 (마리온 메릴 다우 (Marion Merrill Dow)) 및 특정의 비펩티드 헤테로환 (지. 디. 시얼리 앤 캄파니).
"안지오텐신-전환 효소 (ACE)"는 안지오텐신 I의 안지오텐신 II로의 전환을 촉진하는 효소이다. ACE 저해제는 아미노산 및 그의 유도체, 디 및 트리펩티드를 포함한 펩티드 및 ACE의 항체를 포함하는데 이들은 ACE의 활성을 억제하여, 압력 증진 물질 안지오텐신 II의 형성을 감소 또는 제거함에 의해 레닌-안지오텐신계를 방해한다. ACE 저해제는 고혈압, 충혈성 심장 정지, 심근 경색 및 신장 질병에서 의학적으로 사용되어 왔다. ACE 저해제로서 유용한 화합물 군은 아실머르캅토 및 머르캅토알카노일 프롤린, 예를 들어 캅토프릴 (미국 특허 번호 4,105,776) 및 조페노프릴 (미국 특허 번호 4,316,906), 카르복시알킬 디펩티드, 예를 들면 에날라프릴 (미국 특허 번호 4,374,829), 리시노프릴 (미국 특허 번호 4,374,829), 쿠이나프릴 (미국 특허 번호 4,344,949), 라미프릴 (미국 특허 번호 4,587,258), 및 페린도프릴 (미국 특허 번호 4,508,729), 카르복시알킬 디펩티드 모조물, 예를 들면 실라자프릴 (미국 특허 번호 4,512,924) 및 베나자프릴 (미국 특허 번호 4,410,520), 포스피닐알카노일 프롤린, 예를 들면 포시노프릴 (미국 특허 번호4,337,201) 및 트란돌로프릴을 포함한다.
"레닌 저해제"는 레닌의 활성을 방해하는 화합물이다. 레닌 저해제는 아미노산 및 그의 유도체, 펩티드 및 그의 유도체, 및 레닌의 항체를 포함한다. 미국 특허들의 주제인 레닌 저해제의 예로는 하기가 있다: 펩티드의 우레아 유도체 (미국 특허 번호 5,116,835); 비펩티드 결합으로 연결된 아미노산 (미국 특허 번호 5,114,937); 디 및 트리펩티드 유도체 (미국 특허 번호 5,106,835); 아미노산 및 그의 유도체 (미국 특허 번호 5,104,869 및 5,095,119); 디올 술폰아미드 및 술피닐 (미국 특허 번호 5,098,924); 변형된 펩티드 (미국 특허 번호 5,095,006); 펩티딜 베타-아미노아실 아미노디올 카르바메이트 (미국 특허 번호 5,089,471); 피롤이미다졸론 (미국 특허 번호 5,075,451); 펩티드 함유 불소 및 염소 스타틴 또는 스타톤 (미국 특허 번호 5,066,643); 펩티딜 아미노 디올 (미국 특허 번호 5,063,208 및 4,845,079); N-모르폴리노 유도체 (미국 특허 번호 5,055,466); 펩스타틴 유도체 (미국 특허 번호 4,980,283); N-헤테로환 알코올 (미국 특허 번호 4,885,292); 레닌에 대한 모노클론 항체 (미국 특허 번호 4,780,401); 및 다양한 다른 펩티드 및 그의 유사체 (미국 특허 번호 5,071,837, 5,064,965, 5,063,207, 5,036,054, 5,036,053, 5,034,512, 및 4,894,437).
세포 유착 분자에 결합하여 백혈구의 상기 분자에의 부착 능력을 저해하는 약제는 폴리펩티드 약제를 포함한다. 이런 폴리펩티드는 종래의 방법에 따라 제조된 폴리클론 및 모노클론 항체를 포함한다. 이런 항체는 이미 공지되어 있고 다른 상기 항체 뿐만 아니라 항-ICAM 1 항체를 포함한다. 두드러지게, 이미 선행 기술에 잘 알려진 것처럼, 항체 분자의 단지 작은 부분인 파라트로프가 그의 에피토프에 대한 항체의 결합에 관계되어 있다 (일반적으로, Clark, W. R. (1986)The Experimental Foundations of Modern Immunology, Wiley & Sons, Inc., New York; Roitt, I. (1991)Essential Immunology, 7th Ed., Blackwell Scientific Publications, Oxford 참조). 예를 들면, pFc' 및 Fc 영역은 보체 케스케이드의 작용인자이나 항원 결합에는 관계되지 않는다. F(ab')2단편으로 지칭된, pFc' 영역이 효소적으로 절단된 항체, 또는 pFc' 영역 없이 제조된 항체는 무상 항체의 항원 결합 부위를 모두 보유한다. 유사하게, Fab 단편으로 지칭된, Fc 영역이 효소적으로 절단된 항체, 또는 Fc 영역 없이 제조된 항체는 무상 항체의 항원 결합 부위 중 하나를 유지한다. 추가로 나아가면, Fab 단편은 공유적으로 결합된 항체 경쇄 및 Fd로 표시되는 항체 중쇄의 일부분으로 구성된다. Fd 단편은 항체 특이성의 주된 결정자이고 (단일 Fd 단편은 항체 특이성을 바꾸지 않고 10개 까지의 다른 경쇄와 연관될 수 있다) Fd 단편은 단리시 에피토프-결합 능력을 유지한다.
선행 기술에 잘 알려진 것처럼, 항체의 항원-결합 부분 내에는 항원의 에피토프와 직접 상호 작용하는 상보성 결정 영역 (complementarity determining regions (CDR)) 및 파라토프의 3차 구조를 유지하는 뼈대 영역 (Fr)이 있다 (일반적으로, Clar, 1986; Roitt, 1991 참조). 중쇄 Fd 단편 및 IgG 면역글로불린의 경쇄의 모두에서, 각각 3개의 상보성 결정 영역 (CDR1 내지 CDR3)에 의해 분리된 4개의 뼈대 영역 (FR1 내지 FR4)이 있다. CDR, 특히 CDR3 영역, 및 더 특히 중쇄CDR3이 대체로 항체 특이성을 책임지고 있다.
포유류 항체의 비-CDR 영역이 원 항체의 에피토프 특이성을 유지하면서 비특이적 또는 이종특이적 항체의 유사 영역으로 대체될 수 있음이 지금 선행 기술에서 잘 알려져 있다. 기능적 항체를 제조하기 위해 비인간 CDR이 인간 FR 및(또는) Fc/pFc' 영역에 공유적으로 연결된 "인간화된" 항체의 개발 및 용도에서 이는 가장 명백히 드러난다. 그러므로, 예를 들면 PCT 국제 공개 번호 WO 92/04381은 쥐 FR 영역의 일부분 이상이 인간 유래의 FR 영역으로 대체된 인간화된 쥐 RSV 항체의 제조 및 용도를 가리킨다. 항원-결합 능력을 가진 무상 항체의 단편을 포함하는 이런 항체는 "키메라" 항체로서 종종 지칭된다.
그러므로, 당업자에 명백할 것처럼, 본 발명은 F(ab')2, Fab, Fv 및 Fd 단편; Fc 및(또는) Fr 및(또는) CDR1 및(또는) CDR2 및(또는) 경쇄 CDR3 영역이 동종 인간 또는 비인간 서열에 의해 대체된 키메라 항체; FR 및(또는) CDR1 및(또는) CDR2 및(또는) 경쇄 CDR3 영역이 동종 인간 또는 비인간 서열에 의해 대체된 키메라 F(ab')2단편 항체; FR 및(또는) CDR1 및(또는) CDR2 및(또는) 경쇄 CDR3 영역이 동종 인간 또는 비인간 서열에 의해 대체된 키메라 Fab 단편 항체; FR 및(또는) CDR1 및(또는) CDR2 영역이 동종 인간 또는 비인간 서열에 의해 대체된 키메라 Fd 단편 항체를 또한 제공한다. 본 발명은 또한 소위 단쇄 항체를 포함한다.
그러므로, 본 발명은 세포 유착 분자에 특이적으로 결합하는 다수의 크기 및 유형의 폴리펩티드를 포함한다. 이들 폴리펩티드는 항체 기술 외의 다른 공급원으로부터 또한 유도될 수 있다. 예를 들면, 이런 폴리펩티드 결합제는 용액에서 즉시 제조될 수 있는 변성 (degenerate) 펩티드 라이브러리에 의해 고정된 형태 또는 파지 디스플레이 라이브러리로 제공될 수 있다. 조합적 라이브러리는 하나 이상의 아미노산을 함유하는 펩티드로 또한 합성될 수 있다. 추가로 라이브러리는 펩토이드 및 비-펩티드 합성 잔기로 합성될 수 있다.
파지 디스플레이는 본 발명에 따라 유용한 결합 펩티드의 동정에 특히 효과적일 수 있다. 간단히, 종래 과정을 사용하여 4 내지 약 80 아미노산 잔기의 삽입물을 디스플레이하는 파지 라이브러리를 제조한다 (예를 들면 ml3, fd, 또는 람다 파지를 사용). 예를 들면, 삽입물은 완전히 변성 또는 바이어스된 배열을 나타낼 수 있다. 이어서, 세포 유착 분자에 결합하는 파지-보유 삽입물을 선택할 수 있다. 이 과정은 세포 유착 분자에 결합하는 파지 재선택의 다수의 주기를 통해 반복될 수 있다. 반복된 작업은 파지 보유 특정 서열의 풍부로 이어진다. DNA 서열 분석이 발현된 폴리펩티드의 서열 확인을 위해 수행될 수 있다. 세포 유착 분자에 결합하는 서열의 최소 일직선 부분을 결정할 수 있다. 모든 최소 일직선 부분의 일부 및 그의 상류 또는 하류의 한개 이상의 부가적인 변성 잔기를 함유하는 삽입물을 함유하는 바이어스된 라이브러리를 사용하여 이 과정을 반복할 수 있다. 효모 두-하이브리드 스크리닝 방법을 또한 세포 유착 분자에 결합하는 폴리펩티드의 동정을 위해 사용할 수 있다. 그러므로, 세포 유착 분자, 또는 그 단편은 세포 유착 분자의 펩티드 결합 파트너를 인지 및 선택하기 위해 파지 디스플레이 라이브러리를 포함하여 펩티드 라이브러리를 스크리닝하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 방법의 실시에서, 개인의 sCD40L 농도를 수득하는 것이 필요하다. 가용성 sCD40L은 당업자에 잘 알려져 있다. 개인 sCD40L 농도는 선행 기술의 알려진 방법에 의해 수득할 수 있다. 통상적으로, 농도는 예를 들면 혈액, 림프, 침, 뇨 등과 같은 체액 중에서의 표지의 농도 측정에 의해 결정된다. 농도는 ELISA, 또는 면역분석 또는 표지의 존재 결정하는 다른 종래 기술에 의해 결정될 수 있다. 종래 방법은 측정을 위해 상업적 실험실에 환자의 체액 샘플을 보내는 것을 포함한다.
본 발명은 또한 개인의 sCD40L 농도를 이미 결정된 값과 비교하는 것을 포함한다. 이미 결정된 값은 다양한 형태일 수 있다. 중간치 또는 평균 같은 1개의 컷오프 값일 수 있다. 한 한정된 군에서의 위험도가 또다른 한정된 군에서의 위험도 보다 두배인 것처럼, 비교군에 기초하여 설정될 수 있다. 예를 들면, 시험될 집단이 예를 들면 저위험군, 중간위험군 및 고위험군과 같은 군들로 동등하게 (또는 비동등하게) 나누어지거나, 또는 사분등되어 가장 낮은 부분은 가장 낮은 위험을 갖는 개인이고 가장 높은 부분은 가장 높은 위험을 갖는 개인이 되는 범위일 수 있다.
이미 결정된 값은 선택된 특정 집단에 의존할 수 있다. 예를 들면, 감지되는 질병이 없고 심혈관 질병의 선행 병력이 없는 외관상 건강한, 비흡연자 집단은 흡연 집단 또는 선행 심혈관 질병을 가졌던 구성원의 집단과 다른 sCD40L의 '정상' 범위를 가질 것이다. 따라서, 선택된 이미 결정된 값은 개인이 속하는 군을 고려해야 할 것이다. 적절한 범위 및 군은 당업자에 의해 일상적인 수준을 넘지 않는실험으로써 선택될 수 있다.
바람직한 체액은 혈액이다. 외관상 건강한, 비흡연자의 집단에 대한 sCD40L의 중요한 컷오프점은 2.9ng/mL 또는 그 미만이다. 또다른 sCD40L에 대한 중요한 컷오프점은 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0, 10.5 또는 11.0ng/mL이다. 위험도를 특성화하는데, 다수의 이미 결정된 값이 설정될 수 있다.
현재 sCD40L에 대한 분석용 시약을 제조하는 상업적인 공급원이 있다. 이는 벤더메드시스템스 (BenderMed Systems)(오스트리아 비엔나 소재), 및 에보트 파마슈티칼즈 (Abbott Pharmaceuticals)(일리노이주 에보트 파크 소재)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
바람직한 실시태양에서, 본 발명은 본 발명에 기초하여 선택된 이미 결정된 값을 위해 특이적인, 및 이에 관해 적절한 감응성을 가진 신규한 키트 또는 분석을 제공한다. 그러므로, 바람직한 키트는 예를 들면, 분석 결과에 기초한 위험도의 특성화를 위한 설명서 또는 다른 인쇄물 뿐만 아니라 다른 컷오프점, 특정의 컷오프점에서의 다른 감응성을 포함함으로써, 현재 상업적으로 이용 가능한 것과 다를 것이다.
상기와 같이 본 발명은 장래 심혈관 질병의 위험도를 감소시키기 위한 약제로의 치료로부터 개인이 이익 받게 될 가능성을 평가하는 방법을 제공한다. 이 방법은 환자 치료 및 또한 새로운 치료법의 임상적 개발을 위해 중요한 암시를 가진다. 의사는 환자의 예상되는 순 이익에 기초해 환자 치료를 위한 치료적 섭생법을 선택한다. 순 이익은 위험도 대 이익의 비로부터 유도된다. 본 발명은 중재안에 의해 더 이익 받기 쉬운 개인을 선택할 수 있게 하여, 의사가 치료적 섭생법을 선택하는 것을 돕는다. 이는 예상되는 이익의 가능성이 증가된 더 고도의 위험도 프로파일을 가진 약품의 사용을 포함한다. 동일하게, 임상적 연구자는 순 이익을 수득할 수 있는 높은 가능성을 가진 집단을 임상적 실험을 위해 선택하기를 원한다. 본 발명은 이런 개인을 임상적 연구자가 선택하는 것을 도울 수 있다. 임상적 연구자는 이제 임상적 실험의 참가 기준의 결정을 위해 본 발명을 사용할 것이다.
본 발명의 또다른 놀라운 측면은, sCD40L이 장래 유해 심혈관 질병의 다른 공지의 예측인자와 독립적으로 예상 값을 가짐을 발견하였다. 그러므로, 본 발명은 다른 예측인자를 사용하여 이전에 만들어질 수 있었던 측정을 단순히 복제하는 것을 포함하지 않는다. 그 대신에, sCD40L의 농도는 선행 기술의 예측인자에 부가적이다. 선행 기술의 예측인자는 전신성 염증의 표지, 예를 들면 C-반응성 단백질, 시토킨, 및 세포 유착 분자를 포함한다. 시토킨은 당업자에 잘 알려져 있고 인간 인터루킨 1-17을 포함한다. 세포 유착 분자는 당업자에 잘 알려져 있고 인테그린, ICAM-1, ICAM-3, BL-CAM, LFA-2, VCAM-1, NCAM, 및 PECAM을 포함한다. 선행 기술의 예측인자는 또한 콜레스테롤을 포함한다.
본 발명의 추가의 놀라운 측면에서, sCD40L이 심혈관 질병을 발병할 증가된 위험에 있는 개인에게서 혈관 플라크내 지질 축적의 존재에 대한 예측 값을 가짐을 발견하였다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "심혈관 질병의 발병 위험에 있는"개인은 종래 의학 관례에 따라 결정된 피검자의 분류이다 (예를 들면, Harrison's Principles of Experimental Medicine, 15th Edition, McGraw-Hill, Inc., New York 참조). 통상적으로, 심혈관 질병을 발병할 위험에 있는 개인은 심혈관 질병과 연관된 하나 이상의 위험 인자를 가진다. 이런 위험 인자는 심혈관 질병의 가족 병력, 고혈압, 고콜레스테롤, 당뇨병, 흡연, 아테롬성 동맥경화증 등을 포함한다. 또한, 동맥 섬유성 연축, 또는 최근의 졸중 및(또는) 심근 경색은 중요한 위험 인자이다. 이전에는, 심혈관 질병을 발병할 위험 있는 개인에서의 혈관 플라크내 지질 축적의 결정은 고비용, 및 소정의 증후에선 한정된, 기술을 사용하여서만 수행될 수 있었다 (예를 들면, MRI).
관상동맥 혈전증을 유발하는 주된 인자가 아테롬성 동맥경화증의 플라크의 파열임이 당 업계에 공지되어 있다. 본 명세서의 다른 곳에서 설명된 것처럼, 심혈관 질병을 발병할 위험 있는 개인에서의 플라크내 지질 축적의 결정은 플라크의 취약점 (예를 들면, 파열 위험이 있는 플라크)의 결정, 및 따라서 혈전증 증후의 장래 발생의 위험도 평가의 중요한 단계이다. 무상 및 파열된 플라크를 비교하는 연구는 취약점이 있는 플라크의 특성을 규정하는데 사용되어 왔다. 특성은 총 플라크 부피의 50%를 차지하는 지질 코어, 얇은 플라크 캡, 대식세포의 거대 절대수 및 밀도, 및 플라크의 평활근 함량의 감소이다. 그러므로, 본 발명의 방법에 따라 심혈관 질병을 발병할 위험 있는 개인에서의 플라크내 지질 축적의 결정 후, 당업자는 플라크가 취약점이 있는지 평가할 수 있고 및 개인의 수반되는 혈전증 증후의 발생을 예방하기 위한 적절한 치료/중재안 섭생법을 고안할 수 있었다.
본 발명은 또한 심혈관 질병을 예방하기 위해 치료법과 함께 피검자를 치료하는 방법을 포함한다. 항염증제, 항혈전제, 항혈소판제, 피브린용해제, 지질 감소제, 직접 트롬빈 저해제, 당단백질 IIb/IIIa 수용체 저해제, 또는 세포 유착 분자에 결합하여 백혈구의 상기 분자에의 부착 능력을 저해하는 약제, 및(또는) 그의 임의의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 약제는 전신성 염증 표지의 정상 초과 농도 가진 피검자에 투여된다. 약제는 장래 심혈관 질병을 발병할 피검자의 위험도를 저하시키는 유효량으로 투여된다. 어떤 실시태양에서, 약제는 비-아스피린 항염증제이다. 약제는 본 명세서의 다른 곳에 설명된다.
유효량은 의학적으로 원하는 결과, 예를 들면 위험도의 감소를 제공하기에 충분한 약제의 투여량이다. 유효량은 치료되는 특정 상태, 치료되는 피검자의 연령 및 체력적 상태, 상태의 심각도, 치료의 기간, 수반되는 치료의 본성 (만약 있다면), 투여의 특정 경로 등의 인자에 따라 의료 종사자의 지식 및 전문적 지식 내에서 변한다. 예를 들면, 유효량은 개인이 sCD40L의 비정상적으로 증가된 농도를 가진 정도에 의존할 수 있다. 본 발명에 따라 사용된 약제는 심혈관 질병의 위험도를 저하시키기 위한 것, 즉 예방적으로 사용됨은 물론이다. 그러므로, 유효량은 심혈관 질병 발병의 위험도의 저하, 감속 또는 아마도 예방 모두를 할 수 있는 양이다.
일반적으로, 활성 화합물의 투여량은 하루 약 0.01mg/kg 내지 1000mg/kg일 수 있다. 바람직하게는 경구로 및 하루 1회 또는 수회 투여로 50-500mg/kg 범위의 투여량이 적절할 것으로 예상된다. 더 낮은 투여량은 다른 형태의 투여, 예를 들면 정맥 투여로부터 기인할 것이다. 피검자의 반응이 초기 투여량 적용시 불충분한 경우에는, 더 높은 투여량 (또는 다른 더 국소화된 전달 경로에 의해 효과적으로 더 높은 투여량)이 환자의 내성이 허용하는 정도로 사용될 수 있다. 하루 중 다수회의 투여가 화합물의 적절한 전신 농도를 달성하기 위해 고려된다.
투여될 때, 본 발명의 제약적 제제는 제약학상 허용되는 양 및 제약적 허용되는 조성물로 적용된다. 이런 제제는 일상적으로 염, 완충제, 보존제, 혼화성 담체, 및 임의적으로 다른 치료제를 함유할 수 있다. 의약으로 사용되는 때에는, 염은 제약학상 허용되는 것이라야 하나, 제약학상 허용되지 않는 염은 그의 제약학상 허용되는 염을 제조하기 위해 편리하게 사용될 수 있어 본 발명의 범위에서 배제되지 않는다. 이런 약리학상 및 제약학상 허용되는 염은 하기 산으로부터 제조된 것을 포함하나, 이에 한정되지 않는다: 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 말레산, 초산, 살리실산, 구연산, 개미산, 말론산, 숙신산 등. 또한, 제약학상 허용되는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속, 예를 들면 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염으로서 제조될 수 있다.
항염증제는 임의적으로 제약학상 허용되는 담체와 함께 혼합될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 것 같이, 용어 "제약학상 허용되는 담체"는 하나 이상의 혼화성 고체 또는 액체 충전제, 희석제 또는 인간으로의 투여에 적절한 캡슐화 물질을 의미한다. 용어 "담체"는 적용을 촉진시키기 위해 활성 성분과 혼합되는 천연 또는 합성의 유기 또는 무기 성분을 표시한다. 제약 조성물의 성분은 또한 원하는 제약적 효능을 실질적으로 손상시키는 상호작용이 없는 방식으로, 본 발명의 분자들과,및 서로 섞일 수 있다.
제약 조성물은 하기를 포함하는 적절한 완충제를 함유할 수 있다: 염 형태의초산; 염 형태의 구연산; 염 형태의 붕산; 염 형태의 인산.
제약 조성물은 임의적으로 적절한 보존제인 하기를 또한 함유할 수 있다: 벤즈알코니움 클로리드; 클로로부탄올; 파라벤스 및 티메로살.
비경구 투여에 적절한 조성물은 편리하게 항염증제의 멸균된 수성 제제, 바람직하게는 수용자의 혈액과 등장성인 것을 포함한다. 이 수성 제제는 적절한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 공지된 방법에 따라 제제화될 수 있다. 멸균 주사 가능한 제제는 또한 비독성 비경구적으로-허용되는 희석제 또는 용매 중에서의 멸균 주사 가능한 용액 또는 현탁액, 예를 들면 1,3-부탄 디올 중에서의 용액일 수 있다. 허용되는 부형제 및 용매 중에서 사용될 수 있는 것은 물, 링거 용액, 및 등장성 염화 나트륨 용액이다. 또한, 멸균 고착된 기름은 종래적으로 용매 또는 현탁 매질로서 사용된다. 이 목적을 위해 합성 모노- 또는 디-글리세리드를 포함하여 임의의 독성 없는 고착 기름이 사용될 수 있다. 또한, 지방산, 예를 들면 올레산은 주사제의 제조에 사용될 수 있다. 경구, 피하, 정맥내, 근육내 등의 투여에 적절한 담체 제제는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., 펜실베니아주 이스톤 소재]에서 찾을 수 있다.
다양한 투여 경로가 이용될 수 있다. 선택된 특정 방식은 물론 선택된 특정 약품, 치료되는 상태의 심각도 및 치료적 효능을 위해 필요한 투여량에 의존할 것이다. 본 발명의 방법을 일반적으로 말해서 의학적으로 허용되는 임의의 투여 방식을 사용하여 실시될 수 있는데, 이는 임상적으로 허용되지 않는 유해 효과를 일으킴이 없이 활성 화합물의 효과적 농도를 생성할 수 있는 임의의 방식을 의미한다. 이런 투여의 방식은 경구, 직장, 국부, 비강내, 피부내, 또는 비경구 경로를 포함한다. 용어 "비경구"는 피하내, 정맥내, 근육내, 또는 주입법을 포함한다. 정맥내 또는 근육내 경로는 장기간의 치료 및 예방을 위해서는 특히 적절하지 않다. 그러나, 이들은 응급 상황에서는 바람직할 수 있다. 경구 투여가 투여 스케쥴 뿐만아니라 환자에의 편리성 때문에 예방적 치료에 바람직할 것이다.
제약 조성물은 편리하게 단위 투여량 형태로 제공될 수 있고 약학 업계에서 잘 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 모든 방법은 항염증제를 하나 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 결합하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 조성물은 항염증제를 균일하게 및 밀접히 액체 담체, 미분된 고체 담체, 또는 양자 모두와 결합한 다음, 이어서 필요하다면 제품을 성형하여 제조된다.
경구 투여에 적절한 조성물은 별도의 단위, 예를 들면 캡슐, 정제, 로젠지로서 제시될 수 있고, 각각은 이미 결정된 양의 항염증제를 함유한다. 다른 조성물은 시럽, 엘릭시르 또는 에멀젼과 같은 수성액 또는 비수성액 중에서의 현탁액을 포함한다.
다른 전달계는 시간-방출, 지연된 방출 또는 서방형 전달계를 포함할 수 있다. 이 계는 피검자 및 의사에 편리성을 증가시키면서 본 발명의 약제의 반복된 투여를 방지할 수 있다. 많은 방출 전달계가 이용될 수 있고 당업자에 알려져 있다. 이는 중합체 기재계, 예를 들면 폴리 (락티드-글리콜리드), 코폴리옥살레이트, 폴리카프롤락톤, 폴리에스테르아미드, 폴리오르토에스테르, 폴리히드록시부티르산, 및 폴리안히드리드를 포함한다. 약품 함유 상기 중합체의 소형캡슐은 예를 들면 미국 특허 5,075,109에 설명되어 있다. 전달계는 또한 하기의 비중합체계를 포함한다: 스테롤, 예를 들면 콜레스테롤을 포함하는 지질, 콜레스테롤 에스테르 및 지방산 또는 중성 지방, 예를 들면 모노- 디- 및 트리-글리세리드; 히드로젤 방출 체계; 실라스트 (sylastic)계; 펩티드 기재 체계; 왁스 코팅; 종래의 결합제 및 첨가제를 사용한 압착된 정제; 부분적으로 융합된 이식물 등. 구체적 예는 (a) 본 발명의 약제가 미국 특허 번호 4,452,775, 4,675,189, 및 5,736,152에서 설명된 것 같은 매트릭스내의 한 형태로 함유되어 있는 침식 (erosional)계, 및 (b) 활성 성분이 미국 특허 번호 3,854,480, 5,133,974 및 5,407,686에서 설명된 것 같은 중합체로부터 조절된 속도로 투과되는 확산계를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 펌프-기재 하드웨어 전달계가 사용될 수 있고, 이중 어떤 것은 이식에 적합하다.
장기간 서방형 이식물은 만성 상태의 치료에 특히 적절할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 장기간의 방출은 이식물이 30일 이상, 및 바람직하게는 60일 이상 동안 활성 성분의 치료량을 전달할 수 있게 구성 및 배열된 것을 의미한다. 장기간 서방형 이식물은 당업자에 잘 알려져 있고 상기의 방출계 중 다수를 포함한다.
본 발명은 하기의 실시예를 참조하여 더 완전히 이해될 것이다. 그러나, 이 실시예는 본 발명의 실시태양을 단지 설명하기 위한 것이고 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 간주되어서는 안된다.
실시예 1 :sCD40L의 고혈장 농도는 외관상 건강한 여성의 증가된 혈관 위험도와 연관되어 있다.
본 발명자들은 심혈관 질병 또는 암의 병력이 없는 28,263명의 중년 미국 여성에서의 비타민 E 및 낮은 투여량의 아스피린의 효능을 평가하는 진행중인 주요 예방 실험인 여성 건강 연구 (WHS)의 참가자 중에서 예기되는 가장 좁혀진 환자 대조군 분석을 수행하였다.11혈액 샘플을 EDTA 중에서 모으고 분석 시까지 액체 질소에서 저장했다. 이 연구를 위해, 초기 4년의 추적 기간 동안 급성 심혈관 증후로부터 비치명적 심근 경색 또는 졸중을 발병하였거나, 또는 이로부터 사망한 130명의 여성을 '환자' 대상으로서 선택했다. 의사 위원회가 표준화된 과정을 사용하여 종점을 분류했다. 각 확인된 경우에 대해, 같은 연령 (±2년), 유사한 흡연 상태 (이전, 현재, 전무) 및 보고된 심혈관 질병이 없이 유지된 '대조군' 참가자를 선택했다.
기준선 혈장 sCD40L 농도의 측정은 ELISA (벤더메드시스템; 오스트리아 비엔나 소재)를 사용했다. 간단히, 희석된 (1:5) 혈장 샘플을 쥐-항인간 CD40L 항체로 이미 코팅된 96-웰 플레이트에 3개씩 가하고 호스래디쉬-퍼록시다제-표지된 2차 쥐-항인간 CD40L 항체와 (2시간) 혼합했다 (1:2). 이어서, 플레이트를 세척하고 TMB 기질을 사용하여 비색법으로 항체 결합을 결정했다. 650 nm에서 흡광도를 측정하고 sCD40L의 혈장 농도를 재조합 인간 CD40L의 일련의 희석액과의 비교로 결정했다. 분석은 블라인드 (blinded) 방식으로 수행했다. 모든 샘플에 대한 3개의 시험편들 사이에서의 분석내 편차는 15 퍼센트 미만이었다. 지질 농도는 질병 통제 센터의 표준화에 참가한 실험실에서 측정했다.
연구 참가자의 기준선 임상적 특성의 평균 및 비는 스튜던트의 T 검정 (Student's T-test) 또는 카이-자승 (chi-square) 통계를 사용하여 연산 및 비교했다. 이어서, 기준선에서의 sCD40L의 증가된 농도와 연관된 장래 심혈관 증후를 발병할 상대적인 위험도를 sCD40L의 대조군 분포의 50번째, 75번째, 90번째, 95번째, 및 99번째 퍼센트 컷오프점에 따라 연구 샘플을 나눈, 일련의 논리적 회귀 분석으로 연산했다. 모든 p 값은 양쪽 꼬리 (two-tailed) 값이고 모든 신뢰 구간은 95% 수준에서 연산했다.
<결과>
표 1은 연구 참가자의 기준선 임상적 특성을 보여준다. 예상한 것처럼, 추적 동안에 심혈관 질병을 발병할 여성은 질병이 없이 유지된 여성과 비교하여 연구 개시시 비만, 고혈압, 당뇨병, 또는 조기 아테롬성 동맥경화증의 가족 병력을 가질 가능성이 더 많았다. LDL 콜레스테롤 및 트리글리세리드 농도는 환자 중의 기준선에서 더 높은 반면, HDL 콜레스테롤 농도는 더 낮았다 (모두 p≤0.01). 호르몬 대체 요법의 사용은 두 군 사이에서 유의하게 다르지 않았다.
전반적으로, 환자간의 기준선에서의 sCD40L의 혈장 농도는 대조군의 것을 초과하였다 (2.86 ±0.35 대 2.09 ±0.19ng/mL; p≤0.02). 이 차이는 거의 완전히 환자 중에서 특히 높은 값의 초과로부터 기인한다. 환자 및 대조군 피검자의 대부분은 연구 개시시 유사한 sCD40L 농도를 가졌다 (도 1). 그러나, 대조군에서 단지 1명의 연구 피검자과 비교하여, 11명의 환자는 대조군 분포를 위한 99 퍼센트 컷오프점 초과의 sCD40L 기준선 농도를 가졌다 (p≤0.01).
연구 대조군의 분포에 의해 규정된 이미 구체화된 컷오프점에 따르면, 장래 심혈관 증후를 발병할 상대적 위험도는 sCD40L의 증가하는 농도와 같이 올라가고 95번째 및 99번째 퍼센트 컷오프점을 초과하는 sCD40L 농도와 통계적으로 유의하게 되었다 (RR: 각각 3.29 (p≤0.02) 및 11.83 (p≤0.01)) (표 II).
추가의 이후 분석을 더 낮은 농도의 248명의 참가자의 99번째 퍼센트 컷오프점을 초과하는 sCD40L 농도를 가진 12명의 참가자 중에서 임상적 특성을 비교하여 수행했다. 연령, 흡연, 체중 지수, LDL, 및 HDL 콜레스테롤 농도 및 호르몬 대체 요법은 두 연구 군 사이에 유사했다 (표 III). 특히 증가된 sCD40L 농도를 가진 연구 참가자는 고혈압의 어느 정도 더 높은 비율 및 조기 관상 동맥 질병의 가족 병력을 가지나, 이들 차이의 어떤 것도 통계적 유의를 달성하지 못했다. 현저히 증가된 기준선 sCD40L 농도를 가진 12명의 여성 모두 당뇨병을 가지지 않았다. 더욱이, 극한 sCD40L 농도를 가진 11명의 환자 및 더 낮은 sCD40L을 가진 나머지 환자 사이에 무작위화의 시간 내지 심혈관 증후의 시간에 중요한 차이가 없었다 (15.9 대 19.5 개월, p=0.3). 가장 높은 sCD40L 농도를 보인 12명의 피검자의 군 내에서 여섯은 무작의적으로 아스피린에 할당되고 여섯은 위약에 할당되었기 때문에, 아스피린 대 위약의 할당은 아마 본 발명자들의 관찰에 영향을 주지 않았다. 또한, sCD40L에 대해 분석된 혈액은 무작위화 전에 얻었다.
이 일단에 대한 이전의 보고는 C-반응성 단백질, IL-6, 혈청 아밀로이드 A 및 ICAM-1의 혈장 농도와 증가된 심혈관 위험도 사이의 연관을 기록하였다12. 그러나, 본 발명자들은 이들 매개 변수 및 sCD40L 사이에 중요한 상관관계를 발견하지 못했다.
<검토>
외관상 건강한 중년 여성의 예기되는 가장 좁혀진 환자 대조군 연구에서, 기준선에서 sCD40L의 현저히 증가된 혈장 농도 (≥5.5ng/mL)는 장래 심혈관 증후의 상당히 증가된 위험을 예기했다. 이전 연구들은 불안정한 협심증을 가진 환자가 안정한 협심증 환자 및 대조군과 비교될 때 상당히 증가된 sCD40L 혈장 농도를 가짐을 증명했다.10이 상황에서 활성화된 혈소판 및(또는) T 림프구는 sCD40L을 2차적으로 방출할 수 있다. 그러나, 본 발명은 급성 혈전증으로부터 기인할 수 있는 증후 전에 어떤 여성에서의 sCD40L 농도의 증가를 증명한다.
CD40L의 가용성 형태의 방출을 야기하는 메커니즘에 관한 것은 거의 알려져 있지 않다. 혈장의 sCD40L을 위한 잠재적인 공급원(들)은 단핵 식세포 및 내피 세포 뿐만 아니라 혈소판 및 T 림프구를 포함한다.1-5증가된 sCD40L 혈장 농도와 상호 관련시키기 위한 심혈관 질병의 가족 병력의 경향은 유전적 인자가 본 발명자들의 관찰에 조력할 수 있음을 제시한다. 본 발명자들은 sCD40L 및 C-반응성 단백질, IL-6, 및 ICAM-1 농도 사이에 어떠한 연관도 찾지 못했다. 그러므로, CD40/CD40L-독립적 메커니즘이 낮은 sCD40L 농도에도 불구하고 심혈관 합병증을 발병하는 여성에 잘 해당함을 암시한다. 본 발명자들의 발견은 sCD40L의 높은 혈장 농도가 다른 염증 표지에 의해 평가된 것과 다른 위험도 측면을 반영함을 시사한다.
<실시예 1에 인용된 참고문헌>
1. Alderson MR, Armitage RJ, Tough TW, et al.J Exp Med. 1993;178:669-74.
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11. Buring JE, Hennekens CH. J.Myocard. Ischemia. 1992;4:19-27.
12. Ridker PM, Hennekens CH, Buring JE, et al.N Engl J Med. 2000;342:836-43.
<도면의 자세한 설명>
도 1은 심혈관 증후가 없이 유지 (대조군, n=130) 또는 발병 (환자, n=130) 한 중년 건강한 여성들 중에서의 sCD40L의 기준선 혈청 농도이다. 샘플들을 3개씩 분석하여, 평균 값을 나타낸다. 점선은 대조군 분포의 99번째 퍼센트 컷오프점을 표시한다.
표 1. 연구 참가자의 기준선 특성
대조군 (N=130) 환자 (N=130) P-값
연령, 년 60.3 60.3 기준 동일흡연 상태 (%) 기준 동일현재 26.9 26.9이전 31.6 31.6전무 41.5 41.5체중 지수 (kg/m2) 25.7 27.6 0.004고혈압 (%) 34.9 56.9 0.001CAD의 가족 병력 (%)* 10.8 22.7 0.01당뇨병 (%) 3.1 10.8 0.02현재 HRT** (%) 40.0 44.6 0.1LDL (mg/dL) 118.4 128.5 0.02HDL (mg/dL) 48.4 42.6 0.01트리글리세리드 (mg/dL) 136.5 161.0 0.01sCD40L (ng/dL) 2.09 2.86 0.02
*연령 60 이전; **HRT, 호르몬 대체 요법
표 2. 연구 참가자의 기준선 특성
컷오프점 sCD40L 대조군 환자 RR 95% CI P-값(퍼센트) (ng/mL) % (N) % (N)
50번째 >1.76 50.4 (65) 50.8 (66) 1.02 0.62-1.65 0.9575번째 >2.15 24.9 (32) 30.8 (40) 1.35 0.78-2.33 0.2990번째 >2.92 10.1 (13) 17.7 (23) 1.92 0.93-3.98 0.0895번째 >3.71 5.0 (6) 13.9 (18) 3.29 1.26-6.59 0.0299번째 >5.54 0.8 (1) 8.5 (11) 11.83 1.50-93.0 0.01
표 3. 대조군 분포의 99번째 퍼센트 초과의 sCD40L 농도 (≥5.54ng/mL sCD40L)를 가진 연구 참가자의 임상적 특성
sCD40L, >99번째 sCD40L, ≤99번째 P-값(N=12) (N=248)
연령, 년 63.1 60.2 0.3흡연 상태 (%) 0.7현재 25.0 27.1이전 33.3 47.7전무 41.7 31.2체중 지수 (kg/m2) 27.3 26.7 0.7고혈압 (%) 58.3 45.1 0.4CAD의 가족 병력 (%)* 30.0 16.0 0.2당뇨병 (%) 0 7.3 0.9현재 HRT** (%) 50.0 41.7 0.8LDL (mg/dL) 126.9 127.7 0.9HDL (mg/dL) 49.8 48.4 0.7트리글리세리드 (mg/dL) 165.5 174.3 0.8
*연령 60 이전; **HRT, 호르몬 대체 요법
실시예 2 :HMG-CoA 환원제 저해제는 인간 혈관 세포에서의 CD40 및 CD40L 발현을 한정한다.
본 발명은 HMG-CoA 환원제 저해제 (스타틴)가 생체내 sCD40L 혈장 농도 뿐만 아니라 시험관내 이들 세포에의 수용체/리간드 양자의 발현을 줄일 수 있고, 산화적으로 변형된 LDL이 아테롬성 동맥경화증에 관계된 세포, 즉 인간 혈관 EC 및 SMC 뿐만 아니라 MØ상에서의 CD40/CD40L의 발현을 유도한다는 가설을 시험했다.
<재료 및 방법>
재료
천연 및 산화된 (5μM CuS04, 37℃, 24시간) LDL (TBARS: 각각 0.4 및 8.3nM MDA/mg 단백질)은 바이오메디칼 테크놀로지, 인크. (Biomedical Technologies, Inc.)(메사추세츠주 스토톤 소재)에서 수득했다. 인간 재조합 IL-lβ, TNFα, 및 IFNγ는 엔도젠 (Endogen)(메사추세츠주 우번 소재)에서 수득했다.
세포 단리 및 배양
인간 혈관 EC 및 SMC는 정맥으로부터 단리하고 상기와 같이 배양했다.4,26단핵 식세포 (MØ)는 밀도 구배 원심에 의해 림프구 분리 매질 (오르가논-테크니카 (Organon-Teknika), 노스 캐롤라이나주 두르헴 소재)을 사용해 림프구 농축물로부터 단리하고 2% 인간 혈청 (시그마 (Sigma), 미주리주 세인트 루이스 소재)을 함유하는 RPMI 1640 (바이오위타커 (BioWhittaker), 메릴랜드주 워커스빌 소재)에서 배양했다 (10일간).26모든 세포형을 실험 이전 및 동안에 혈청이 없는 배지에서 24시간 배양했다. 배양의 생존력은 올리고뉴클레오솜 형성 분석 (세포 사멸 감지 ELISA, 베링거 맨하임 (Boehringer Mannheim), 독일) 뿐만 아니라 트리판 블루 (시그마, 미주리주 세인트 루이스 소재) 배제 계수에 의해 결정했다.
역전사-중합효소 연쇄 반응 (RT-PCR)
RNA졸 (텔-테스트 (Tel-Test), 텍사스주 프렌드스우드 소재)을 사용하여 배양된 EC, SMC, 또는 MØ로부터 단리된 총 RNA를 분광적으로 순도 및 수율을 평가하고 (2100 바이오애널라이저, 아질런트 테크놀로지 (Agilent Technologies), 델라웨어주 윌밍톤 소재) 수퍼스크립트 II 역전사 효소 (라이프 테크놀로지 (LifeTechnologies), 캘리포니아주 칼스바드 소재)를 사용해 역전사 했다 (2㎍ 총 RNA; 50분, 42℃). PCR은 고온의 시작 후 95℃ (120초), 62℃ (120초), 및 72℃ (180초, 주기당 2초 지속)에서 상기 CD40 또는 CD40L용 프라이머를 사용해 35 주기로 수행했다.420, 25, 30, 35, 및 40 주기를 사용한 반정량적 PCR 연구는 사용된조건이 증폭의 지수 범위 내에서 PCR 생성물을 야기하고 신호 대 배경 비에 대해 최적화 되었음을 증명했다. PCR 생성물을 이티디움 브로마이드-함유 1.3% 아가로스 젤에서 분석하고 UV 투시로 가시화했다. 동일한 양의 템플레이트의 로딩은 GAPDH의 RT-PCR에 의해 증명했다. 역전사 효소의 부재 또는 템플레이트로서 H2O을 사용한 모의 RT 반응은 수득된 신호의 특이성을 증명했다.
웨스턴 블로트
배양 용해물 (50㎍ 총 단백질/레인) 및 상청액을 SDS-PAGE에 의해 분리하고 반-건조 블로트 기구 (3mA/cm2, 30분; 바이오-래드 (Bio-Rad), 캘리포니아주 허쿨레스 소재)를 사용해 폴리비닐리덴 디플루오리드 막 (바이오-래드, 캘리포니아주 허쿨레스 소재)에 블로팅했다. 블로트를 블록하고 1차 (쥐-항인간 CD40 또는 CD40L; 양자 모두 1:1,000; 파르민젠 (PharMingen), 캘리포니아주 샌디에고 소재) 항체를 5% 탈지 건조 우유/PBS/0.1% 트윈 20에 가했다. 1시간 후, 블로트를 3번 세척하고 (PBS/0.1% 트윈 20) 2차, 퍼록시다제-연결된, 염소-항쥐 항체 (잭슨 이무노리서치 (Jackson Immunoresearch), 펜실베니아주 웨스트 그로브 소재)를 가했다 (1시간). 최종적으로, 블로트를 세척하고 웨스턴 블로트 화학 발광성 시스템 (NENTM, 메사추세츠주 보스턴 소재)을 사용해 면역단백질을 가시화했다. 데이터를 산타 쿠르즈 ((Santa Cruz), 캘리포니아주 산타 쿠르즈 소재)로부터의 항 CD40/-CD40L 항체를 사용해 증명했다.
유세포 분석기 (Flow Cytometry)
인간 혈관 EC, SMC, 또는 MØ를 얼음-냉각 PBS로 세척하고, 트립신 처리에 의해 채취하고, 고정했다 (PBS/4% 파라포름알데히드, 15분). 이어서, 세포를 완충액 단독 또는 FITC-연결된 대조군 IgG, 쥐 항인간 CD40, 또는 쥐 항인간 CD40L 항체 (l㎍/ml; 파르민젠, 캘리포니아주 샌디에고 소재)와 인큐베이션 (1시간, 4℃) 하기 전에 PBS/2% BSA로 한번 세척했다. 최종적으로, 세포를 PBS/2% BSA로 세척하고 벡톤 디킨슨 (Becton Dickinson) FACSCAN (등록상표) 유세포 분석기에서 CELLQUEST (등록상표) 소프트웨어 (벡톤 디킨슨, 캘리포니아주 산 호세 소재)를 사용해 분석했다. 조건당 20,000 이상의 생존 가능한 세포를 분석했다.
환자 연구
한 관상 동맥에 30% 이상의 협착을 가진 관상 동맥촬영을 위한 27명의 환자로부터 전체 혈액 (lOmL)을 EDTA에 모았다. 일단을 도관 당시 임의의 스타틴으로 치료된 또는 치료되지 않은 환자로 나누었다. 혈액을 기준선 (0달) 및 최종 추적 방문 (6달)에 채취하고, 혈장을 -70℃에 저장했다. 모든 피검자를 절식 상태에서 연구했다. 서류의 동의서를 모든 피검자로부터 수득하고 연구는 브리검 앤드 우먼스 하스피탈의 인간 연구 위원회에 의해 승인 받았다. IL-lβ, IL-6, TNFα, IFNγ, sVCAM, C-반응성 단백질 (CRP), 및 sCD40L을 ELISA (시그마, 미주리주 세인트 루이스 소재; 엔도젠, 메사추세츠주 우번 소재; 벤더메드시스템, 오스트리아 비엔나 소재)에 의해 측정했다. 두 군은 연령, 성, 당뇨병, 흡연, 트리글리세리드, 또는 HDL에서 상당히 다르지 않았다 (표 1). 스타틴-치료 군은 상당히 낮은 총 콜레스테롤 및 LDL을 예상한 바와 같이 가졌다.
생체외 피브린 응혈 형성
혈액을 역-오르비탈 출혈에 의해 0.1 부피의 0.13M 트리소듐 구연산 내로 비코팅된 모세관을 사용해 쥐로부터 모았다. 혈소판-풍부 혈장 (PRP)을 원심 분리로 준비하고 (500xg, 5분, 20℃) 피브린 응혈 형성을 상기된 미크로티터-플레이트 응혈 용해 분석의 변형을 사용해 검사했다.27응혈을 2.94μM 피브리노겐, 0.24μM 플라스미노겐, 36pM t-PA, 3.8nM 트롬빈, 및 5.3mM CaCl2(모두 최종 농도)로 제조했다. PRP (최종 농도 10% (v/v))를 응혈에 넣었다. 응혈 형성을 405nm에서 15분 까지 모니터 했다.
통계 분석
데이터는 평균±SD으로 나타내고 군들은 스튜던트 t-검정을 사용해 비교했다. p≤0.05의 값은 유의한 것으로 간주되었다.
<결과>
HMG-CoA 환원제 저해제가 시험관내 대식 세포 뿐만 아니라 인간 혈관 표피 및 평활근 세포의 CD40 및 CD40L의 발현을 감소시킨다
HMG-CoA 환원제 저해제에의 노출은 인간 혈관 EC, SMC, 및 MØ에서의 CD40 및 CD40L 모두의 발현을 농도-의존적으로 감소시켰다. 세리바스타틴의 ≥2nM 농도에서 EC에서의 수용체의 IL-1β/TNFα/IFNγ-유도된 발현 뿐만 아니라 구조적 발현도 감소시켰다. 최대 저해는 10-5OnM 세리바스타틴으로 달성했다. 메발로네이트는 스타틴에 의한 CD40 및 CD40L의 감소된 발현을 역전시켰다. oxLDL을 자극으로또는 SMC 또는 MØ를 세포형으로 사용한 유사 연구는 유사한 결과를 야기했다. CD40/CD40L의 발현의 조절이 다른 스타틴으로 확장되는지 결정하기 위해, 유사 연구는 아토르바스타틴 또는 심바스타틴을 사용했다. 이들 HMG-CoA 환원제 저해제는 유사하게 CD40/CD40L의 발현을 감소시키나, 더 높은 농도 (lOOnM)를 필요로 했다. 블로트에 걸쳐 유사한 밴드-강도를 제공하는, 웨스턴 블로트의 쥐 항인간 GAPDH 항체로의 재처리는 레인 간의 동등한 로딩을 증명하고, 또한 스타틴 처리 그 자체로는 웨스턴 블로트의 분석에 영향주지 않음을 제시했다. 주목할 것은, 스타틴이 모노/올리고뉴클레오솜 형성 뿐만 아니라 트리판 블루 배제 세포 계수에 의해 결정된, 분석된 농도 (250nM 까지)에서의 세포 수 또는 생존력에 영향을 주지 않았다.
더욱이, HMG-CoA 환원제 저해제는 가-염증성 시토킨 (IL-1β/TNFα/IFNγ) 또는 oxLDL로 자극된 인간 혈관 EC 및 MØ에서의 CD40 및 CD40L mRNA 발현을 감소시켰다. 아토르바스타틴 또는 심바스타틴은 유사한 결과를 야기했다. 메발로네이트는 CD40 및 CD40L 전사체의 감소된 발현을 역전시켰다. GAPDH 전사체의 발현을 분석하는 유사한 연구는 각 반응에 역전사된 mRNA의 동등한 양의 적용을 증명하고 추가로 스타틴으로의 치료 그 자체는 RT-PCR에 영향 주지 않음을 제시했다.
전체 세포 용해물의 결과와 같이, 세리바스타틴은 MØ 뿐만 아니라 인간 혈관 EC에서의 CD40 및 CD40L 모두의 세포 표면 발현을 농도-의존적으로 감소시켰다. 주목할 것은, CD40 및 CD40L의 표면 발현의 최소 및 최대 감소를 위해 필요한 세리바스타틴 농도는 RT-PCR 연구 뿐만 아니라 웨스턴 블로트에서의 전체 세포 용해물에 대해 관찰된 것과 닮았다. 세 스타틴 모두 유사하게 작용하나, CD40/CD40L 발현의 동등한 감소를 달성하기 위해서는 다른 농도를 필요로 했다 (세리바스타틴 > 심바스타틴 = 아토르바스타틴).
CD40L은 또한 생물적으로 활성인 가용성 형태인 sCD40L로 방출될 수 있으므로, 본 발명자들은 HMG-CoA 환원제 저해제와의 EC, SMC, 및 MØ의 처리가 sCD40L의 분비에 영향을 주는지 검사했다. 실로, 세리바스타틴 처리는 배양액에서 현저히 sCD40L 농도를 저하시켰다.
조합된, RT-PCR, 웨스턴 블로트, 및 FACS 연구는 세포내 전위가 아닌 유전자 활성의 조절에 의해 CD40 또는 CD40L의 세포 표면 발현 및(또는) 방출을 oxLDL은 유도하고 및 스타틴은 감소시킴을 제시했다.
HMG-CoA 환원제 저해제는 인간에서 sCD40L 혈장 농도를 감소시킨다
이들 시험관내 결과의 잠재적인 임상적 관련성을 평가하기 위해, HMG-CoA 환원제 저해제로의 환자 치료가 sCD40L 혈장 농도를 감소시키는지 결정하는 예비 조사를 수행했다. 스타틴 치료된 아테롬성 동맥경화증 피검자의 혈장은 비치료된 환자와 비교하여 상당히 더 낮은 sCD40L 농도를 가졌다 (8.3±3.1ng/ml (n=11) 대 13.1±2.5ng/ml (n=16); p<0.05). 기준선 및 6개월 추적된 환자의 치료 상태가 변하지 않으면, 개인의 sCD40L 농도는 상당히 변하지 않았다. 그러나, 6개월 추적에서의 sCD40L 혈장 농도는 스타틴 치료로 전환된 환자에서 현저히 감소했다 (13.1±5.74ng/ml 대 5.21±2.36ng/ml (n=4); p<0.05). IL-lβ, IL-6, TNFα, IFNγ, 및 sVCAM-1의 혈장 농도는 스타틴 치료로 변하지 않았다. 차이가 통계적 의미를 달성하지는 않으나, C-반응성 단백질 (CRP)의 혈장 농도는 스타틴 치료 집단에서 낮았다.
산화된 LDL은 인간 혈관 세포에서 CD40 및 CD40L의 발현을 유도한다
산화적으로 변형된 LDL (oxLDL)은 인간 혈관 EC 및 MØ에서의 CD40 및 CD40L 단백질의 약한 구조적 발현을 농도-의존적으로 강화시켰다. 두 세포형에서의 기초 CD40/CD40L 발현의 증대는 l-3㎍ oxLDL/ml을 필요로 했다. CD40 (비자극 대조군의 5.1±1.1배; n=4) 및 CD40L (4.2±2.2배; n=3) 면역반응 단백질의 최대 발현은 10-30㎍ oxLDL/ml로 달성되었다. 천연 LDL은 또한 수용체 (2.8±1.1배; n=2) 및 리간드 (2.2±0.8배; n=2)의 발현을 덜한 정도이나 유도했다. 추가로, oxLDL은 인간 혈관 EC 및 MØ에서의 CD40 및 CD40L mRNA의 발현을 농도-의존적으로 증대시켰다. GAPDH 전사체의 발현을 분석하는 유사한 연구는 각 반응에 역전사된 mRNA의 동등한 양의 적용을 증명하고 추가로 oxLDL 자극 그 자체는 RT-PCR에 영향 주지 않음을 제시했다.
CD40L의 결핍은 생체외에서 쥐 혈액의 응고 시간을 지연한다
CD40L의 혈전증에서의 암시 및 스타틴-매개의 sCD40L 혈장 농도의 저하에 대한 상기의 최근의 데이터에 따라, 본 발명자들은 CD40L의 감소된 발현이 혈액 응고에 영향을 준다는 가설을 시험했다. 실로, CD40L-결핍 쥐로부터의 혈소판-풍부 혈장은 야생형 쥐 표본과 비교해 피브린 응혈 형성 분석에서 지연된 응고를 보여, 혈액 응고에서의 CD40L의 역할을 지지하였다. 혈액 응고성에서의 CD40L의 역할에 대한 관찰은 HMG-CoA 환원제 저해제를 통한 CD40 시그널링의 감소가 아테롬성 동맥경화증의 혈전 합병증을 감소시킬 수 있는 경로를 제공한다.
<검토>
평균 또는 평균 미만의 LDL 농도 및 일관된 일련의 이전 임상적 실험에서의 LDL-저하의 정도에 독립적인 감소된 심혈관 위험도를 가진 환자의 임상적 이점은 스타틴의 추정 "다면발현성 (pleiotropic)" 효과의 잠재적인 임상적 관련성을 강조하여 왔다.21-24,28지질-저하 효과에 부가하여, 다수의 임상적 및 실험적 연구는 스타틴의 항염증성 경로, 예를 들면 산화 질소의 증대된 발현 뿐만 아니라 케모킨, 면역적합성 항원 II 분자, 매트릭스-분해 효소, 및 전구응고 조직 인자의 감소된 발현을 제시하여 왔다.22,23,25,28더욱이, 와타나베 유전성 고지혈증 토끼의 HMG-CoA 환원제 저해제로의 치료는 생체내 다양한 가-아테롬성 염증 매개체의 발현을 감소시킨다.29,30LDL 수용체가 없는 이 토끼에서 스타틴이 단지 약간 지질을 저하시키더라도, 이 생체내 관찰은 지질단백질에의 어떤 효과가 관찰된 항염증성 효과를 설명하는지가 결론적으로 구별될 수 없었다. 본 발명은 스타틴이 지질-저하에 의존적 및 독립적으로 작용하는 새로운 항염증 경로의 증거를 제공한다. 이 약품 군의 세 구성원 (세리바스타틴, 아토르바스타틴, 또는 심바스타틴)은 아테롬성 동맥경화증에 암시된 세포 유형, 즉 인간 혈관 EC, SMC, 및 MØ에서의 CD40 및 CD40L 단백질 및 전사체의 시토킨-유도된 발현 뿐만 아니라 구조적 발현도 상당히 감소시키는데, 이는 스타틴의 지질-저하에의 독립적 기능을 주장한다. 그러나, 이런 세포 유형에서의 CD40 및 CD40L의 유도체로서의 oxLDL의 확인은 스타틴이 또한 최소 부분적으로, 그의 지질-저하 성질을 통해 CD40/CD40L의 발현에 영향을 줄 수 있음을 추가로제시한다. 주목되는 것은, 이전 연구가 초기 인간 아테롬성 동맥경화증 손상내에서 CD40 및 CD40L과 함께 oxLDL을 같이 위치화하여 왔고,31이 결과는 oxLDL이 아테롬성 동맥경화증의 플라크에서 CD40 수용체/리간드 양자의 발현의 초기 신호를 제공한다는 본 발명자들의 가설과 일치된다.
스타틴으로 치료된 환자가 감소된 sCD40L 농도를 가진 예비 관찰은 본 발명의 시험관내 관찰의 임상적 관련성을 지지한다. 여러 세포 유형이 sCD40L을 발생 시킬 수 있다. 혈소판은 생체내 혈전 형성시에 뿐만 아니라 시험관내 트롬빈 수용체의 연결시에 sCD40L을 방출한다.32,33그러나, 본 발명자들 및 다른 이전 연구에 의해 제시된 것 처럼, EC, MØ, 및 T 림프구를 포함하는 다른 세포 유형은 또한 sCD40L을 발생시킬 수 있다.11,12,17,18
CD40L-결핍 혈소판-풍부 혈장이 야생형 쥐로부터의 제제 보다 더 느리게 응혈한다는 본 관찰은 CD40L이 막-결합 및(또는) 가용성 형태로 심혈관 위험도의 중요한 결정자인 혈전증을 조절함을 제시한다. CD40L이 αIIbβ3리간드로서 기능함으로써 혈소판을 활성화시킬 수 있다는 결과는 이 가설을 추가로 지지한다.35
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실시예 3 :가용성 CD40 리간드 농도는 경동맥 아테롬에서 지질 축적을 표시한다
관상동맥 혈전증을 유발하는 주된 인자는 아테롬성 동맥경화증 플라크의 파열이다. 원형의 및 파열된 플라크의 비교 연구는 취약한 플라크, 즉 파열의 위험에 있는 것의 특성을 정의하는데 사용되어 왔다. 특성은 총 플라크 부피의 50%를 차지하는 지질 코어, 얇은 플라크 캡, 대식세포의 거대 절대수 및 밀도, 및 플라크의 평활근 함량의 감소이다. 이런 취약한 플라크는 거의 모든 개인에 존재하는 모든 플라크의 조그마한 비율을 차지한다. 그러나, 혈관 조영법에 의한 협착은 협착을 가진 코어 크기 및 플라크 크기 사이에 관련이 없기 때문에 취약성을 예측하지 못한다. 대부분의 파열 경우는 혈전이 허혈을 일으키도록 내강에 충분히 침입하지 않기 때문에 임상적으로 인지되지 않고 지나간다. 그러나, 이들 하위임상적 경우가 플라크의 성장을 유발할 것이다. 플라크 파열에는 혈관형성 후 일어나는 것과 유사한 평활근 증식적인 회복 반응이 뒤따른다. 양 상황에서, 넘치는 회복은 증후 발생 후 협착으로 이어진다. 검시시의 관상동맥 손상의 재활은 고도 협착의 70% (혈관 조영 > 직경의 50%)가 치유된 파열의 경우였음을 보여준다. 이런 데이터는 급성 임상적 증후가 일어났는지와 무관하게 진전된 협착 손상의 생성에 있어서의 플라크 파열의 역할을 강조한다.
요약하면, 협착의 심각도가 아닌 아테롬의 구조 및 유동 생물학이 심혈관 증후의 대부분을 결정한다. 거대 지질 풀 및 얇은 섬유성 캡이 취약한 플라크를 특성화하고, 염증 메커니즘이 플라크 안정성 결정에 중추의 역할을 한다.1,2불안정한 아테롬에 대한 본 발명자들의 지식 거의는 사후 부검에서 유도되고, 생체내 염증 메커니즘 및 손상 구조의 관련성에 대해서는 거의 알려진 것이 없다.
동물 연구의 증거는 CD40 리간드의 중요성을 지지하는데, 아테롬성 동맥경화증-경향이 있는 쥐에서의 CD40 시그널링의 저해가 동맥 손상의 크기 및 지질 함량을 감소시키고, 평활근 함량 및 섬유성 콜라겐의 상대적 증가를 야기한다.9더욱이, 본 명세서의 다른 곳에서 논의된 것 같이 (실시예 1 참조), 기준선에서의 가용성 CD40 리간드의 증가된 혈장 농도는 외관상 건강한 여성 중에서 심혈관 증후를 전망적으로 예측한다.
자기 공명 영상 (MRI)에서의 최근 발전은 경동맥 플라크 조성의 비침투적 평가를 가능하게 했다.ll~l3구체적으로, 맞춤 제작된 위상 배열 (phased array) 경동맥 코일의 사용은 경동맥 내막 절제술을 수행받는 22명의 환자 중에서의 경동맥 MRI 결과 및 조직학 결과 (89% 일치; 카파 = 0.83; 95% 신뢰 구간 0.67-1.0) 사이에 고도의 일치를 증명하여 왔다.14더욱이, 고해상 경동맥 MRI는 플라크내 지질-풍부 코어를 정확히 감지한다.12,13,15,16
본 발명은 가용성 CD40 리간드의 증가된 혈장 농도가 고해상 경동맥 MRI상의 지질-풍부 코어를 암시하는 특징과 상호관련된다는 가설을 시험했다.
<방법>
본 발명자들은 경동맥 초음파에 의해 내부 또는 공통의 경동맥에서 30 퍼센트 이상의 협착을 가진 남성 및 여성을 본 발명에 참가시키기 위해 2001년 1월 내지 2002년 1월에 초대했다. 수술적 결찰술 또는 관상동맥 스탠트를 이전 2달내에 받은 환자 뿐만 아니라 심장박동기 또는 삽입형 제세동기를 가진 임의의 환자도 배제했다. 전신성 염증 상태를 위해 전신성 코르티코스테로이드를 필요로 하는 환자도 또한 배제했다. 연구 집단은 본 발명에 참가하기 위한 서면 동의서를 준 49명의 연속적인 환자를 포함했다. 이 연구는 브리검 앤드 우먼스 하스피탈의 인간 연구 위원회에 의해 승인되었다.
선행 심혈관 병력, 위험인자, 및 약품 사용을 포함하는 자세한 의학력을 각 참가자의 연구 의사가 기록했다. 혈액 샘플은 비외상 정맥 천자에 의해 얻고, 원심분리하고, 혈장은 -80℃에서 EDTA에 저장했다.
MRI 프로토콜: 경동맥의 고해상 MRI를 1.5T 시그마 CV/i MRI 스캐너 (GE 메디칼 시스템스 (GE Medical Systems), 위스컨신주 밀워키 소재)에 제공된 위상 배열 경동맥 코일 (IGC 사)을 사용하여 환자에 수행했다. 3D 시간차 (time-of-flight) 영상, 적정 양자 밀도 가중 영상, 및 지방-억제된 적정 T2 가중 영상을 수득했다. 3D 시간차 순서를 위해, 매개변수는 하기와 같았다: 하나의 여기에서 에코 시간 (TE) 3.5ms, 반복 시간 (TR) 33-40ms, 플립 각도 25도, 대역폭 15.63kHz, 시야각 12-14cm, 1mm에 삽입된 슬라이스 두께 2mm, 32 슬라이스, 획득한 매트릭스 256X256, 재건된 매트릭스 512X512. 적정 양자 밀도 가중 순서를 위해 21-22ms의 TE를 사용했고, 적정 T2 가중 획득을 위해 53-58ms의 TE를 화학물-선택적 지방-억제와 함께 사용했다. 이들 스캔을 위한 매개변수는 다음과 같다: 하나의 여기에서, TR 2 R-R 간격, 에코 트레인 길이 16, 대역폭 62.5kHz, 시야각 14cm, 슬라이스두께 3mm, 획득한 매트릭스 256x256, 재건된 매트릭스 512x512. 슬라이스 부위를 각 환자의 경동맥 분기점에 집중했다. 다른 모든 정보의 무지 속에서 두 명의 전문 방사선 의사가 3D 시간차 영상에서 동일한 강도의 신호를 가진, 양자 밀도 가중 영상 및 지방-억제된 적정 T2 가중 고속 스핀 에코 영상 사이의 신호의 손실에 기초하여, 플라크내의 지질의 존재 또는 부재를 결정했다.15협착의 직경 퍼센트는 3D 시간차 축 영상에서의 참조 및 협착 직경 사이의 차이를 참조 직경으로 나누어 100으로 곱한 것으로써 계산했다. 영상은 오프라인에서 독립적으로 읽었다. 관찰자간 편차는 <10% 이었다.
기준선 혈장 가용성 CD40 리간드 농도는 ELISA에 의해 상기와 같이 측정했다.10간단히, 1:5 희석된 혈장 샘플을 쥐-항인간 CD40 리간드 항체로 코팅된 96-웰 플레이트에 3개씩 적용하고 호스래디쉬-퍼록시다제-표지된 2차 쥐-항인간 CD40 리간드 항체로 2시간 동안 혼합했다 (1:2). 이어서, 플레이트는 세척하고 3,3’-5,5’테트라메틸 벤지딘 기질을 사용하여 비색법으로 항체 결합을 결정했다. 650nm에서 흡광도를 측정하고 가용성 CD40 리간드의 혈장 농도를 재조합 인간 CD40 리간드의 순차적 희석액과의 비교로 결정했다. 모든 샘플에 대한 3개의 시험편 중에서의 분석내 편차는 10% 미만이고 분석간 편차는 7.4%이었다.
본 발명자들은 연구 참가자를 두 군, 즉 경동맥 MRI에서의 플라크내 지질의 증거가 있는 자, 및 플라크내 지질의 증거가 없는 자로 나누었다. 가용성 CD40 리간드의 중간치 농도를 윌콕손 (Wilcoxon)의 순위 합계 검정을 사용해 두 군 사이에서 연산 및 비교했다. 플라크내 지질의 증거가 없는 자 중에서 가용성 CD40 리간드의 중간치 농도에 따라 연구 샘플을 나눈 논리적 회귀 분석 모델의 사용에 의해 증가된 가용성 CD40 리간드 농도와 연관된 플라크내 지질을 가질 상대적 위험도를 연산했다.
<결과>
명부에 올려진 49명의 환자 중에서, 경동맥 MRI 영상을 밀실공포증 때문에 3명의 환자로부터 수득하지 못했다. 본 발명자들은 나머지 46명의 분석에 대한 관찰을 이용했다. 환자의 기준선 임상적 특성 (표 4)은 전체 연구 일단에서의 고혈압, 당뇨병, 및 고지혈증 병력의 높은 우세를 드러냈다. 46명의 환자 중 13명 (28.3%)은 선행의 단기 허혈 발병 (TIA)(n=8) 또는 졸중 (n=6) 병력을 가졌다; 한 환자는 TIA 및 졸중 모두를 가졌다. 나머지 33명의 환자 (71.7%)는 증상이 없었다.
14명의 환자는 플라크내 지질을 가졌고 32명은 가지지 않았다. 플라크내 지질의 증거를 가진 환자는 플라크내 지질의 증거가 없는 환자 보다 당뇨병을 더 가졌다 (p=0.02). 또한, 플라크내 지질을 가진 군에서는 증가된 여성 비율 (p=0.1), 고혈압의 병력 가진 환자 (p=0.16), 및 현재 흡연자 (p=0.13)의 경향이 있었다. 평균 퍼센트 경동맥 직경 협착 (58%±20 대 56%±24)은 플라크내 지질 가진 및 가지지 않은 자 사이에 다르지 않았다.
플라크내 지질 가진 피검자는 지질 축적이 없는 자 중에서 보다 더 높은 기준선 가용성 CD40 리간드 농도를 가졌다 (중간치 2.54ng/ml [4분위수간 범위(interquartile range (IQR)) 1.85-3.52] 대 중간치 1.58ng/ml [IQR 1.21-2.39]; p =0.02). 이와 대조적으로, 가용성 CD40 리간드 농도는 퍼센트 직경 협착 (r=-0.19; p=0.21)과 상호관련되지 않았다. 중간치 초과의 가용성 CD40 리간드 농도와 연관된 플라크내 지질의 상대적 위험도는 6.0 (95% 신뢰 구간 1.15-31.23; p=0.03)이었다. 성별, 당뇨병, 고혈압, 현재 흡연, 퍼센트 협착, 및 총 콜레스테롤 대 고밀도 지질단백질 콜레스테롤의 비의 효과를 조절하는 다중편차 모델에 의해 분석했을 때 예측 효과의 크기는 실질적으로 변하지 않았다 (상대 위험도 5.12, 95% 신뢰 수준 0.78-33.73; p=0.09).
표 4. 연구 집단에서의 기준선 임상적 특성
총 일단 플라크내 지질 없는 플라크내 지질 있는 P-값 (군 1(N=46) 군 1 (N=32) 군 2 (N=14) 대 군 2)
연령 (년) 70.5±8.1 71.0±7.9 69.4±8.8 0.5평균±SD남성 31/46 24/32 (75%) 7/14 (50%) 0.10(67.4%)당뇨병의 15/46 7/32 (21.9%) 8/14 (57.1%) 0.02병력 (32.6%)고혈압의 37/46 24/32 (75%) 13/14 (92.9%) 0.16병력 (80.4%)현재 흡연자 5/46 2/32 (6.3%) 3/14 (21.4%) 0.13(10.9%)고콜레스테롤의 34/46 23/32 (71.9%) 11/14 (78.6%) 0.6병력 (73.9%)선행 TIA 또는 13/46 8/32 (25%) 5/14 (35.7%) 0.46졸중 (28.3%)스타틴 사용 31/46 20/32 (62.5%) 11/14 (78.6%) 0.28(67.4%)퍼센트 직경 57%±23 56%±24 58%±20 0.6협착가용성 CD40 1.89 1.58 2.54 0.02리간드 (nglml)중간치 [4분위수간 [1.35-2.64] [1.21-2.39] [1.85-3.52]범위]
TIA = 단기 허혈 발병
<검토>
본 명세서의 다른 곳에서 논의된 것 같이 (실시예 1), 기준선에서의 가용성 CD40 리간드의 혈장 농도는 외관상 건강한 여성 중에서 심혈관 증후를 전망적으로 예측한다. 본 데이터는 가용성 CD40 리간드의 증가된 농도가 인간에서의 장래의 심혈관 위험도를 반영할 수 있음을 통해 메커니즘으로서의 새로운 식견을 제공한다. 본 발명자들은 가용성 CD40 리간드의 증가된 혈장 농도 및 협착의 심각도에 관련 없는 고위험도의 특성을 가진 경동맥 플라크 사이의 연관을 발견했다. 이 데이터는 CD40 시그널링의 방해가 아테롬성 동맥경화증-경향이 있는 쥐에서 동맥 손상의 크기 및 지질 함량을 감소시키는 것을 보여주는 연구로부터의 증거와 일치한다.9
유사한 위상 배열 경동맥 코일을 사용해, 고해상 경동맥 MRI는 경동맥 내막절제술 후의 지질 풀의 조직학적 결과를 정확히 예측할 수 있음을 이전 연구는 발견하였다15; 본 발명자들의 MRI 프로토콜은 T2-가중 프로토콜에 더 의존하는데, 다른 연구는 이것이 지질 풀을 정확히 구별할 수 있다는 것을 보여주어 왔다.12,13,16CD40 연결이 지질 풀 형성에서의 공통의 인과관계의 경로를 나타내는 것으로 보이는 것에서 예상할 수 있는 것 처럼, 신뢰구간이 조정된 분석에서 넓어졌으나 가용성 CD40 리간드의 예측 효과는 전통적인 심혈관 위험 인자에 대한 조정 후에 유지되었다.
결론적으로, 본 발명자들은 이러한 연구가 플라크 취약성의 잠재적인 중요한표지의 하나를 나타내는, CD40 리간드의 혈장 농도 및 플라크내 지질 사이의 연결을 확정한다고 생각한다.
<실시예 3에 인용된 참고문헌>
1. Davies MJ,Circulation1996;94:2013-20.
2. Libby P,Circulation1995;91:2844-50.
3. Karmann K, et al.Proc Natl Acad Sci USA1995;92:4342-6.
4. Kornbluth RS, et al.Proc Natl Acad Sci USA1998;95:5205-10.
5. Mach F, et al.J Clin Invest1999;104:1041-50.
6. Denger S, et al.Atherosclerosis1999;144:15-23.
7. Mach F, et al.Circulation1997;96:396-9.
8. Schoenbeck U,Am J Pathol2000;156:7-14.
9. Schoenbeck U,J Exp Med1999;189:843-53.
10. Schoenbeck U,Circulation2001;104:2266-8.
11. Fayad ZA, Fuster V.Circ Res2001;89:305-16.
12. Shinnar M, et al.Arterioscler Thromb Vasc Biol1999;19:2756-61.
13. Serfaty JM, et al.Radiology2001;219:403-10.
14. Hatsukami TS, et al.Circulation2000;102:959-64.
15. Yuan C, et al.Circulation2001;104:2051-6.
16. Toussaint JF, et al.Arterioscler Thromb Vasc Biol1995;15:1533-42.
등가물
당업자는 일상적 수준을 넘지 않는 실험을 사용해 본 명세서에서 설명된 발명의 구체적인 실시태양의 많은 등가물을 인식, 또는 확인할 수 있을 것이다. 이런 등가물은 하기 청구항에 의해 포함되는 것으로 의도된다.
본 명세서에서 개시한 모든 참고 문헌은 그 전체가 참고 문헌으로 인용된다.

Claims (76)

  1. 개인의 sCD40L 농도를 수득하는 단계,
    sCD40L 농도를 이미 결정된 값과 비교하는 단계, 및
    이미 결정된 값과 비교한 sCD40L 농도에 기초하여, 장래 심혈관 질병을 발병할 개인의 위험도 프로파일을 특성화하는 단계
    를 포함하는, 장래 심혈관 질병을 발병할 개인의 위험도 프로파일을 특성화하는 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 이미 결정된 값이 복수개의 이미 결정된 sCD40L 농도 범위이고 상기 비교 단계가 상기 이미 결정된 sCD40L 농도 범위들 중 개인의 sCD40L 농도가 속하는 범위를 결정하는 것을 포함하는 방법.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 개인이 외관상 건강한 비흡연 개인인 방법.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 개인이 달리 심근 경색 또는 졸중의 증가된 위험에 있지 않은 방법.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 심혈관 질병이 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관된 것인 방법.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 심혈관 질병이 치명적 심근 경색 이외의 것인 방법.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 이미 결정된 값이 약 2.9ng/mL 혈액 또는 초과인 방법.
  8. 제 1항에 있어서, 상기 이미 결정된 값이 약 3.2ng/mL 혈액 또는 초과인 방법.
  9. 제 1항에 있어서, 상기 이미 결정된 값이 약 5.5ng/mL 혈액 또는 초과인 방법.
  10. 제 1항에 있어서, 상기 이미 결정된 값이 복수개의 이미 결정된 sCD40L 농도 범위이고, 상기 복수개 중 하나가 약 2.9ng/mL 혈액 미만이고 상기 다른 범위가 약 2.9ng/mL 혈액이며, 및 상기 비교 단계가 상기 복수개의 이미 결정된 sCD40L 농도 범위들 중 개인의 sCD40L 농도가 속하는 범위를 결정하는 것을 포함하는 방법.
  11. 제 1항 내지 10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 심혈관 질병이 졸중인 방법.
  12. 개인의 sCD40L 농도를 수득하는 단계,
    sCD40L 농도를 첫 번째 이미 결정된 값과 비교하여 첫 번째 위험도 값을 설정하는 단계,
    개인의 콜레스테롤 또는 C-반응성 단백질 (CRP) 농도를 수득하는 단계,
    콜레스테롤 또는 C-반응성 단백질 (CRP) 농도를 두 번째 이미 결정된 값과 비교하여 두 번째 위험도 값을 설정하는 단계, 및
    첫 번째 위험도 값 및 두 번째 위험도 값의 조합이 첫 번째 및 두 번째 위험도 값과 다른 세 번째 위험도 값을 설정하고, 첫 번째 위험도 값과 두 번째 위험도 값의 조합에 기초하여, 심혈관 질병을 발병할 개인의 위험도 프로파일을 특성화하는 단계
    를 포함하는, 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관된 장래 심혈관 질병을 발병할 개인의 위험도 프로파일을 특성화하는 방법.
  13. 제 12항에 있어서, 상기 개인이 외관상 건강한 비흡연 개인인 방법.
  14. 제 12항에 있어서, 상기 첫 번째 이미 결정된 값이 약 2.9ng/mL 혈액인 방법.
  15. 제 12항에 있어서, 상기 첫 번째 이미 결정된 값이 약 3.2ng/mL 혈액인 방법.
  16. 제 12항에 있어서, 상기 첫 번째 이미 결정된 값이 약 5.5ng/mL 혈액인 방법.
  17. 제 12항에 있어서, 상기 첫 번째 이미 결정된 값이 복수개의 이미 결정된 sCD40L 농도 범위이고, 상기 복수개 중 하나가 약 2.9ng/mL 혈액 미만이고 상기 다른 범위가 약 2.9ng/mL 혈액이며, 및 상기 비교 단계가 상기 복수개의 이미 결정된 sCD40L 농도 범위들 중 개인의 sCD40L 농도가 속하는 범위를 결정하는 것을 포함하는 방법.
  18. 제 12항 내지 17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 심혈관 질병이 졸중인 방법.
  19. 제 12항 내지 17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 심혈관 질병이 비치명적 심근 경색인 방법.
  20. 제 12항 내지 17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세 번째 위험도 값이 첫 번째 및 두 번째 위험도 값 중 어느 하나 보다 큰 방법.
  21. 개인의 sCD40L 농도를 수득하는 단계, 및
    sCD40L 농도를 이미 결정된 값과 비교하여 이미 결정된 값과 비교한 sCD40L 농도가 개인이 약제로의 치료로부터 이익받게 될지 여부를 표시하는 단계, 및
    상기 비교에 기초하여 개인이 상기 치료로부터 이익받기 쉬운지 여부를 특성화하는 단계
    를 포함하는, 항염증제, 항혈전제, 항혈소판제, 피브린용해제, 지질 감소제, 직접 트롬빈 저해제, 및 당단백질 IIb/IIIa 수용체 저해제로 구성된 군으로부터 선택되는, 아테롬성 동맥경화증 질병과 연관된 심혈관 질병의 위험을 감소시키는 약제로의 치료로부터 개인이 이익받게 될 가능성을 평가하는 방법.
  22. 제 21항에 있어서, 상기 이미 결정된 값이 복수개의 이미 결정된 sCD40L 농도 범위이고 상기 비교 단계가 상기의 이미 결정된 sCD40L 농도 범위들 중 상기 개인의 농도가 속하는 범위를 결정하는 것을 포함하는 방법.
  23. 제 21항에 있어서, 상기 개인이 외관상 건강한 비흡연 개인인 방법.
  24. 제 21항에 있어서, 상기 이미 결정된 값이 약 2.9ng/mL 혈액 또는 초과인 방법.
  25. 제 21항에 있어서, 상기 이미 결정된 값이 약 3.2ng/mL 혈액 또는 초과인 방법.
  26. 제 21항에 있어서, 상기 이미 결정된 값이 약 5.5ng/mL 혈액 또는 초과인 방법.
  27. 제 21항에 있어서, 상기 이미 결정된 값이 복수개의 이미 결정된 sCD40L 농도 범위이고, 상기 복수개 중 하나가 약 2.9ng/mL 혈액 미만이고 상기 다른 범위가 약 2.9ng/mL 혈액이며, 및 상기 비교 단계가 상기 복수개의 이미 결정된 sCD40L 농도 범위들 중 개인의 sCD40L 농도가 속하는 범위를 결정하는 것을 포함하는 방법.
  28. 제 21항 내지 27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 심혈관 질병이 졸중인 방법.
  29. 제 21항 내지 27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 심혈관 질병이 심근 경색인 방법.
  30. 정상 초과 농도의 sCD40L을 가진 것으로 알려진 피검자에, 항염증제, 항혈전제, 항혈소판제, 피브린용해제, 지질 감소제, 직접 트롬빈 저해제, 당단백질 IIb/IIIa 수용체 저해제, 세포 유착 분자에 결합하여 백혈구의 상기 분자에의 부착 능력을 저해하는 약제, 칼슘 채널 차단제, 베타-아드레날린 수용체 차단제, 시클로옥시제나제-2 저해제, 또는 안지오텐신계 저해제인 심혈관 질병의 위험을 감소시키는 약제를 장래 심혈관 질병을 발병할 피검자의 위험도를 저하시키는 유효량으로 선택 및 투여하는 단계
    를 포함하는, 심혈관 질병의 위험도를 감소시키기 위한 피검자의 치료 방법.
  31. 제 30항에 있어서, 상기 피검자가 달리 상기 약제로의 치료를 요구하는 증상이 없는 방법.
  32. 제 30항에 있어서, 상기 피검자가 외관상 건강하고 유해 심혈관 증후의 증가된 위험을 가지지 않은 방법.
  33. 제 30항에 있어서, 상기 피검자가 비고지혈증인 방법.
  34. 제 30항에 있어서, 상기 약제가 비아스피린, 항염증제인 방법.
  35. 제 30항에 있어서, 상기 약제가 항염증제이고 상기 항염증제가 알클로페낙; 알클로메타손 디프로피오네이트; 알제스톤 아세토니드; 알파 아밀라제; 암시나팔; 암시나피드; 암페낙 소듐; 아미프릴로스 히드로클로리드; 아나킨라; 아니롤락; 아니트라자펜; 아파존; 발살라지드 디소듐; 벤다작; 베녹사프로펜; 벤지다민 히드로클로리드; 브로멜라인스; 브로페라몰; 부데소니드; 카르프로펜; 시클로프로펜; 신타존; 클리프로펜; 클로베타솔 프로피오네이트; 클로베타손 부티레이트; 클로피락;클로티카손 프로피오네이트; 코르메타손 아세테이트; 코르토독손; 데플라자코르트; 데소니드; 데속시메타손; 덱사메타손 디프로피오네이트; 디클로페낙 포타슘; 디클로페낙 소듐; 디플로라손 디아세테이트; 디플루미돈 소듐; 디플루니살; 디플루프레드네이트; 디프탈론; 디메틸 술폭시드; 드로시노니드; 엔드리손; 엔리모맙; 에놀리캄 소듐; 에피리졸; 에토돌락; 에토페나메이트; 펠비낙; 페나몰; 펜부펜; 펜클로페낙; 펜클로락; 펜도살; 펜피팔론; 펜티아작; 플라잘론; 플루아자코르트; 플루페남산; 플루미졸; 플루니솔리드 아세테이트; 플루닉신; 플루닉신 메글루민; 플루오코르틴 부틸; 플루오로메톨론 아세테이트; 플루쿠아존; 플루르비프로펜; 플루레토펜; 플루티카손 프로피오네이트; 푸라프로펜; 푸로부펜; 할시노니드; 할로베타솔 프로피오네이트; 할로프레돈 아세테이트; 이부페낙; 이부프로펜; 이부프로펜 알루미늄; 이부프로펜 피코놀; 일로니다프; 인도메타신; 인도메타신 소듐; 인도프로펜; 인독솔; 인트라졸; 이소플루프레돈 아세테이트; 이속세팍; 이속시캄; 케토프로펜; 로페미졸 히드로클로리드; 로르녹시캄; 로테프레드놀 에타보네이트; 메클로페나메이트 소듐; 메클로페남산; 메클로리손 디부티레이트; 메페남산; 메살라민; 메세클라존; 메틸프레드니솔론 술레프타네이트; 모르니플루메이트; 나부메톤; 나프록센; 나프록센 소듐; 나프록솔; 니마존; 올살라진 소듐; 오르고테인; 오르파녹신; 옥사프로진; 옥시펜부타존; 파라닐린 히드로클로리드; 펜토산 폴리술페이트 소듐; 펜부타존 소듐 글리세레이트; 피르페니돈; 피록시캄; 피록시캄 신나메이트; 피록시캄 올라민; 피르프로펜; 프레드나제이트; 프리펠론; 프로돌산; 프로쿠아존; 프록사졸; 프록사졸 시트레이트; 리멕솔론; 로마자리트; 살콜렉스; 살나세딘; 살살레이트; 산구이나리움 클로리드; 세클라존; 세르메타신; 수독시캄; 술린닥; 수프로펜; 탈메타신; 탈니플루메이트; 탈로살레이트; 테부펠론; 테니다프; 테니다프 소듐; 테녹시캄; 테시캄; 테시미드; 테트리다민; 티오피낙; 틱소코르톨 피발레이트; 톨메틴; 톨메틴 소듐; 트리클로니드; 트리플루미데이트; 지도메타신; 글루코코르티코이드 또는 조메피락 소듐으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  36. 제 31항에 있어서, 상기 약제가 비아스피린, 항염증제인 방법.
  37. 제 32항에 있어서, 상기 약제가 비아스피린, 항염증제인 방법.
  38. 제 33항에 있어서, 상기 약제가 비아스피린, 항염증제인 방법.
  39. 제 30항에 있어서, 상기 약제가 지질 감소제인 방법.
  40. 제 39항에 있어서, 상기 지질 감소제가 젬피브로질, 콜리스티라민, 콜레스티폴, 니코틴산, 프로부콜 로바스타틴, 플루바스타틴, 심바스타틴, 아토르바스타틴, 프라바스타틴, 또는 세리바스타틴인 방법.
  41. 제 40항에 있어서, 상기 지질 감소제가 프라바스타틴인 방법.
  42. 제 31항에 있어서, 상기 약제가 지질 감소제인 방법.
  43. 제 42항에 있어서, 상기 지질 감소제가 젬피브로질, 콜리스티라민, 콜레스티폴, 니코틴산, 프로부콜 로바스타틴, 플루바스타틴, 심바스타틴, 아토르바스타틴, 프라바스타틴, 또는 세리바스타틴인 방법.
  44. 제 43항에 있어서, 상기 지질 감소제가 프라바스타틴인 방법.
  45. 제 32항에 있어서, 상기 약제가 지질 감소제인 방법.
  46. 제 45항에 있어서, 상기 지질 감소제가 젬피브로질, 콜리스티라민, 콜레스티폴, 니코틴산, 프로부콜 로바스타틴, 플루바스타틴, 심바스타틴, 아토르바스타틴, 프라바스타틴, 또는 세리바스타틴인 방법.
  47. 제 46항에 있어서, 상기 지질 감소제가 프라바스타틴인 방법.
  48. 제 33항에 있어서, 상기 약제가 지질 감소제인 방법.
  49. 제 48항에 있어서, 상기 지질 감소제가 젬피브로질, 콜리스티라민, 콜레스티폴, 니코틴산, 프로부콜 로바스타틴, 플루바스타틴, 심바스타틴, 아토르바스타틴,프라바스타틴, 또는 세리바스타틴인 방법.
  50. 제 49항에 있어서, 상기 지질 감소제가 프라바스타틴인 방법.
  51. 제 30항에 있어서, 상기 약제가 세포 유착 분자에 결합하여 백혈구의 상기 분자에의 부착 능력을 저해하는 약제인 방법.
  52. 제 51항에 있어서, 상기 피검자가 외관상 건강한 방법.
  53. 제 51항에 있어서, 상기 피검자가 비고지혈증인 방법.
  54. 제 51항에 있어서, 상기 피검자가 달리 상기 약제로의 치료를 요구하는 증상이 없는 방법.
  55. 제 30항에 있어서, 상기 약제가 칼슘 채널 차단제인 방법.
  56. 제 55항에 있어서, 상기 피검자가 외관상 건강한 방법.
  57. 제 55항에 있어서, 상기 피검자가 비고지혈증인 방법.
  58. 제 55항에 있어서, 상기 피검자가 달리 상기 약제로의 치료를 요구하는 증상이 없는 방법.
  59. 제 30항에 있어서, 상기 약제가 베타-아드레날린 수용체 차단제인 방법.
  60. 제 59항에 있어서, 상기 피검자가 외관상 건강하고 유해 심혈관 증후의 증가된 위험을 가지지 않은 방법.
  61. 제 59항에 있어서, 상기 피검자가 비고지혈증인 방법.
  62. 제 59항에 있어서, 상기 피검자가 달리 상기 약제로의 치료를 요구하는 증상이 없는 방법.
  63. 제 30항에 있어서, 상기 약제가 시클로옥시제나제-2 저해제인 방법.
  64. 제 63항에 있어서, 상기 피검자가 외관상 건강한 방법.
  65. 제 63항에 있어서, 상기 피검자가 비고지혈증인 방법.
  66. 제 63항에 있어서, 상기 피검자가 달리 상기 약제로의 치료를 요구하는 증상이 없는 방법.
  67. 제 30항에 있어서, 상기 약제가 안지오텐신계 저해제인 방법.
  68. 제 67항에 있어서, 상기 피검자가 외관상 건강하고 유해 심혈관 증후의 증가된 위험을 가지지 않은 방법.
  69. 제 67항에 있어서, 상기 피검자가 비고지혈증인 방법.
  70. 제 67항에 있어서, 상기 피검자가 달리 상기 약제로의 치료를 요구하는 증상이 없는 방법.
  71. 증가된 sCD40L 농도를 가진 피검자에 sCD40L 농도를 감소시키는 약제를 피검자의 sCD40L 농도를 감소시키는 유효량으로 선택 및 투여하는 것을 포함하는, 유해 심혈관 질병의 위험을 저하시키기 위해 피검자의 sCD40L 농도를 감소시키는 방법.
  72. 제 71항에 있어서, 상기 약제가 지질 저하제인 방법.
  73. 제 71항에 있어서, 상기 피검자가 외관상 건강한 방법.
  74. 제 71항에 있어서, 상기 피검자가 달리 유해 심혈관 증후의 증가된 위험이 없는 방법.
  75. 제 71항에 있어서, 상기 피검자가 증가된 C-반응성 단백질 (CRP) 농도를 가진 방법.
  76. 제 71항에 있어서, 상기 피검자가 달리 상기 지질 감소제로의 치료를 요구하는 증상이 없는 방법.
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