CN1613012A - 可溶的cd40l(cd154)作为动脉粥样硬化的疾病的先兆标记 - Google Patents

Abstract

本发明包括特别是在现在没有疾病的信号和症状的个体和在非吸烟者中确定动脉粥样硬化疾病如心肌梗死和中风危险的实验的新用途。本发明包括辅助医生确定哪个危险的个体将优先取益于设计防止第一个或复发心肌梗死和中风或治疗急性和慢性心肌紊乱的一些治疗的实验的新用途。同时叙述了相关的治疗方法。

Description

可溶的CD40L(CD154)作为动脉粥样 硬化的疾病的先兆标记

发明领域

本发明叙述了在没有现在的疾病的信号或症状的个体和在非吸烟者中确定心血管紊乱如心肌梗死和中风的危险的诊断检测的新用途。另外，本发明叙述了辅助医生确定哪个危险个体将优先取益于设计防止或治疗心血管紊乱的一些治疗的诊断检测的新用途。同时叙述了相关的治疗方法。

发明背景

尽管在治疗中有明显的进步，心血管疾病保持了是发达世界中的发病率和死亡率的唯一最普遍的原因。所以，心血管紊乱如心肌梗死和中风的预防是大部分公众健康的重要性的部分。目前，未来心血管紊乱的几个危险因素已经被叙述，并且在检测高危险的个体中有宽广的临床用途。这样的筛选实验包括评估总的和HDL胆固醇水平。但是，大量的心血管紊乱发生在明显低到中等危险方式的个体中，我们鉴定这样的患者的能力是受限制的。另外，积累的数据表明，处于危险中或已知具有心血管紊乱的患者的一些预防和治疗性治疗的有益的效果在不同的患者组中有数量级的不同。但是，在这点上，缺少的是关于确定是否一些治疗可以期望更多或较少有效的诊断实验的数据。

一些心血管紊乱，如心肌梗死和缺血中风是与动脉粥样硬化相关的。动脉粥样硬化的机制没有被很好地理解。CD40配体(也称作是CD40L，CD154，和/或gp39)是261氨基酸，II类型跨膜蛋白质。分子的一个或多个生物活性可溶形式总称为sCD40L是全长形式的蛋白质溶解的裂解产生的，可以发生在细胞内或在细胞表面。

CD40L是多潜力的免疫调节物，与它的受体CD40一起在包括血管内皮(EC)和光滑肌细胞(SMC)，单核巨嗜细胞(MΦ)，和血小板的各种细胞中表达。

在任意的前面的细胞类型上接触CD40受体，已经被报道引发了各种炎症前的介导物如细胞因子IL-1，IL-6，IL-12，TNFα，或IFNγ，趋化因子IL-8，MCP-1，或RANTES，黏附分子ICAM-1，或VCAM-1，基质金属蛋白酶MMP-1/-2/-3/-7/-8/-9/-10/-11/-12/-13以及凝固前的组织因子的表达。这些炎症前的介导物的表达已经被报道是与促进体外预防动脉粥样化的各种功能排列相联系的。这些观察已经表明CD40L是牵涉在动脉粥样化发生的各种时期中的。

在有不稳定的心绞痛的患者中已经叙述了有sCD40L的水平升高。另外，血清或其他体液的sCD40L的浓度已经用于评估人患者的免疫，炎症或恶性状态。这样的患者包括患系统自身免疫或炎症，血管疾病，病毒疾病，或恶性肿瘤的患者，或进行免疫抑制治疗的患者。这些患者不是健康的个体。因为sCD40L的水平在炎症过程中提高，所以，无法确定的是，在研究急性疾病或高危险群体之前的这些中观察到的统计学的关系到底是原因性的，或是由于短期的炎症变化导致的，甚或是归因于与其他危险因素特别是吸烟和高血脂之间的相互关系。

过去已经显示炎症标记的水平升高可以预测未来的不利的心血管紊乱。但是这在过去还没有在sCD40L得到证明，sCD40L是炎症的一些方面的介导物，尽管过去在传统上没有被认为是炎症的系统标记物。

发明概述

本发明在一个方面叙述了新的诊断检测，它广泛地包括(1)预测将来心血管疾病如心肌梗死和中风和周边动脉疾病的危险；和(2)确定一些个体将更大或更小程度取益于所设计的防止和/或治疗心血管紊乱的治疗。这些新的检测部分基于下面的发现。

已经发现，sCD40L的水平升高预测了未来的心血管紊乱。例如，在表面健康的非吸烟者中sCD40L的水平升高预示了心肌梗死的危险升高。正如另一个例子，sCD40L的水平升高预示了未来的中风的可能性升高。

同样已经发现，一些个体将更大或更小程度取益于一些降低未来的心血管紊乱的治疗试剂的使用的可能性可以从个体中的基线水平sCD40L来确定。本发明部分是根据sCD40L具有独立于其他未来的心血管紊乱的预示物的预测值的惊人发现。特别是，sCD40L预测了独立于系统炎症标记C反应蛋白质(CRP)的未来的不利的心血管紊乱。所以，sCD40L可以单独用作未来不利的心血管紊乱的预示物或结合过去本领域的预示物如胆固醇和CRP。所以，本发明不包括简单地增倍过去可以用其他预示物制造的测量值。相反，sCD40L的水平是过去本领域中的预示物以外的。

如上提到，这些发现已经导致了新的诊断检测。

根据本发明的一个方面，提供了一种方法，鉴定未来发展成心血管紊乱的个体的危险的轮廓。该方法包括在个体中得到sCD40L的水平。然后，将sCD40L的水平与预定的值比较，然后，根据与预定值的比较中的sCD40L的水平鉴定未来发展成心血管紊乱的个体的危险轮廓。

预定的值可以是单个的值，多个值，单个范围或多个范围。所以，在一个实施方案中，预定的值是多个预定的标记的水平范围，比较的步骤包括确定个体的水平落在哪个预定的标记的水平范围。在优选地实施方案中，优选的预定sCD40L值约是血液的2.9ng/mL或以上。其他优选的预定的sCD40L值约是血液的3.2ng/mL或以上。其他优选的预定的sCD40L的值约是血液的5.5ng/mL或以上。当利用多个范围时，优选地，选用范围是低于约血液的2.9ng/mL中的一个，另一个范围选择是约血液的2.9ng/mL以上中的一个。

在一些实施方案中，个体是表面健康的，非吸烟个体。在一些实施方案中，个体心肌梗死或中风的危险并没有因为另外的原因而升高。

在本发明的这一方面的一些实施方案中，心血管紊乱是与动脉粥样硬化疾病相关的。在一些实施方案中，心血管紊乱并不是致命的心肌梗死。在一些实施方案中，心血管紊乱是中风。

仍然根据本发明的另一方面，提供了一个鉴定未来发展成与动脉粥样硬化疾病相关的心血管紊乱的个体的危险轮廓的方法。获取个体中的sCD40L的水平。将sCD40L的水平与预定的值比较。然后，根据与预定值比较中的sCD40L的水平，鉴定未来发展成与动脉粥样硬化疾病相关的心血管紊乱的个体危险的轮廓。预定值可以如上所述。鉴定的个体可以是任何个体，但优选地是表面健康的个体。表面健康的个体可以是吸烟者或非吸烟者。在一些实施方案中，受试者没有其他的不利的心血管紊乱的危险升高。在一些实施方案中，与动脉粥样硬化疾病有关的未来的心血管紊乱不包括致命的心肌梗死。优选的标记和预定值如上所述。在一个重要的实施方案中，心血管紊乱是中风。在另一个重要的实施方案中，心血管紊乱是心肌梗死。在另一个重要的实施方案中，心血管紊乱是周边动脉疾病。在另一个重要的实施方案中，心血管紊乱是非致命的心肌梗死。

根据本发明的另一方面，提供了一个鉴定未来发展成心肌梗死的表面健康的、非吸烟个体得到危险轮廓的方法。该方法包括在个体中获得其sCD40L的水平。然后，将sCD40L的水平与预定值比较，再根据与预定的值的比较中的sCD40L的水平鉴定未来发展成心肌梗死的个体的危险轮廓。在一些实施方案中，个体没有其他的不利的心血管事件的危险升高。

正如在本发明的前面的方面所述，预定的值可以是单个的值，多个的值，单个的范围或多个的范围。在一个实施方案中，预定的值是多个预定的标记水平范围，比较的步骤包括确定个体的水平落在哪个预定的标记的水平范围。SCD40L的优选的预定值等如上所述。

根据本发明的另一方面，提供了鉴定未来发展成与动脉粥样硬化疾病相关的心血管紊乱的个体的危险轮廓的方法。在个体中得到其sCD40L的水平。将sCD40L的水平与预定的值比较。然后根据比较中的预定值的sCD40L的水平鉴定未来发展成与动脉粥样硬化疾病相关的未来的心血管紊乱的个体的危险轮廓。正如在本发明的前面所述的那样，预定值可以是单个值，多个值，单个范围或多个范围。在一个实施方案中，预定的值是多个预定的标记水平范围，比较的步骤包括确定个体的水平落在哪个预定的标记的水平范围。SCD40L的优选的预定值等如上所述。

鉴定的个体可以是任何个体，但优选地是表面健康的个体。表面健康的个体可以是吸烟者或非吸烟者。在一些实施方案中，受试者没有其他方面的心血管事件的危险升高。在一些实施方案中，与动脉粥样硬化疾病相关的未来的心血管紊乱不包括致命的心肌梗死。优选的标记和预定值如上所述。在一个重要的实施方案中，心血管紊乱是中风。在另一个重要的实施方案中，心血管紊乱是周边动脉疾病。在另外的重要的实施方案中，心血管紊乱是非致命的心肌梗死。

仍然根据本发明的另一方面，提供了利用血液sCD40L水平和胆固醇梗死或C-反应蛋白质(CRP)一起鉴定未来发展成与动脉粥样硬化疾病相关的心血管紊乱的个体的危险轮廓的方法。获取了个体中的sCD40L的水平。将sCD40L的水平与第一个预定的值比较确定第一个危险的值。也得到了个体中的胆固醇或CRP的水平。将个体中的胆固醇或CRP水平与二级预定值比较确定第二个危险值。然后，根据第一个危险值和第二个危险值的结合鉴定发展成心血管紊乱的个体得到危险的轮廓，其中第一个危险值和第二个危险值的结合确定了不同于第一个和第二个危险值的第三个危险值。在特别重要的实施方案中，第三个危险值是大于第一个和第二个危险值的。测试的优选的个体，标记和预定的值如上所述。心血管紊乱可以是与动脉硬化疾病相关的任何心血管紊乱，尽管在一些重要的实施方案中，心血管紊乱是非致命的心肌梗死或缺血中风。

根据仍然是本发明的另一方面，提供了一种评估个体将取益于用降低心血管紊乱，特别是与动脉粥样硬化疾病相关的心血管紊乱的危险的试剂的治疗的可能性。可以从包括抗炎症试剂，抗凝血试剂，抗血小板试剂，纤维蛋白溶解试剂，降脂试剂，直接的凝血酶抑制剂，糖蛋白IIb/IIIa受体抑制剂和结合细胞黏附分子和抑制白血细胞附着于这样的分子(例如，抗细胞黏附分子抗体)的能力的试剂的组选择该试剂。为了实施本方法，获取了个体中的sCD40L的水平。然后，将这一水平与预定的值比较，其中与预定的值比较中的sCD40L的水平预示了个体将取益于该试剂的治疗的可能性。然后，该个体可以在有可能通过用该试剂治疗得到的净益处的关系中得到鉴定。

正如上面提到的，本发明特别适用于确定哪个个体将优先取益于该试剂的治疗，降低心血管紊乱的个体中的危险，如将来的中风或将来的心肌梗死，包括非致命的心肌梗死。同时允许通过鉴定例如个体最可能取益于用不利的副作用的高危险方式的新治疗或已知治疗选择临床实验的候选群体和候选药物的治疗。所以，本发明提供了评估可能的候选患者的一些治疗的净效果的信息。

本发明也关注试剂盒，其包括对sCD40L的检测包以及说明，并且可以还含有相关物质，如数字和颜色的图表，用于将检测所确定的sCD40L的水平与未来心血管紊乱或如上所述的其他患者标准的危险相联系。在重要的实施方案中，该试剂盒也包括胆固醇的检验。

在本发明的另一方面，提供了一种治疗受试者降低心血管紊乱的危险的方法。该方法包括对已知具有上面的正常水平的sCD40L的受试者选择和给药降低心血管紊乱的危险的试剂。该试剂可以是抗炎症试剂(包括阿斯匹林，和非阿斯匹林抗炎症试剂)，抗凝血试剂，抗血小板试剂，纤维蛋白溶解试剂，降低脂的试剂，直接的溶血酶抑制剂，糖蛋白Iib/IIIa受体抑制剂，结合细胞黏附分子和抑制白血细胞附着于如下的分子，钙通道封闭剂，β-肾上腺素能受体封闭剂，环氧化酶-2抑制剂，血管紧张肽系统抑制剂，和/或它们的结合。该试剂给药的量是能有效降低未来发展成心血管紊乱的受试者的危险的量。优选的受试者是表面健康的受试者，目前不需要立即用任何前面所述的试剂的一种或它们的结合的治疗。在另外的重要的实施方案中，受试者中不利的心血管事件的危险没有升高(即，没有这样的事件的家族历史的受试者，非吸烟的受试者，非血脂过高的受试者，有正常水平的系统炎症标记的受试者)，而sCD40L的水平升高。

在一些实施方案中，该试剂是选自包括如下的试剂的组，阿氯酚酸(Alclofenac)，阿氯米松(Alclometasone Dipropionate)，Algestone Acetonide，α淀粉酶，Amcinafal，氨酚酸钠(AmfenacSodium)，Amiprilose Hydrochloride，Anakinra，Anirolac，Anitrazafen，Apazone，巴沙拉二钠(Balsalazide Disodium)，苄吲酸(Bendazac)，苯恶洛芬(Benoxaprofen)，盐酸苄卡明(Benzydamine Hydrochloride)，菠萝蛋白酶(Bromelains)，溴四唑哌啶(Broperamole)，布地缩松(Budesonide)，卡布洛芬(Carprofen)，Cicloprofen，曾戊唑酮(Cintazone)，氯噻托酸(Cliprofen)，丙酸倍氯他索(Clobetaso Propionate)，丁氯倍氟松(Clobetasone Butyrate)，氯苯吡咯酸(Clopirac)，CloticasonePropionate，醋酸三氟米松(Cormethasone Acetate)，去氧可的松(Cortodoxone)，去氟可的松(Deflazacort)，丙缩羟强龙(Desonide)，去羟米松(Desoximetasone)，二丙酸地塞米松(Dexamethasone Dipropionate)，双氯酚酸钾(DiclofenacPotassium)，双氯酚酸钠(Diclofenac Sodium)，双醋二氟松(Diflorasone Diacetate)，二氟米铜钠(Diflumidone Sodium)，双氟尼酸(Diflunisal)，醋丁二氟龙(Difluprednate)，双酞嗪酮(Diftalone)，二甲亚砜(Dimethyl Sulfoxide)，丙缩氢炎松(Drocinonide)，甲地松(Endrysone)，Enlimomab，塞庚苯胺钠(Enolicam Sodium)，嘧吡唑(Epirizole)，依托度酸(Etodolac)，Etofenamate，联苯乙酸(Felbinac)，苯四唑胺(Fenamole)，芬布芬(Fenbufen)，二氯苯氧苯乙酸(Fenclofenac)，氯环苯乙酸(Fenclorac)，苯吲柳酸(Fendosal)，苯吡恶二酮(Fenpipalone)，双苯噻酸(Fentiazac)，氟苯哌酮(Flazalone)，氟恶米松(Fluazacort)，氟芬那酸(Flufenamic Acid)，氟咪唑(Flumizole)，醋酸-9-去氟肤轻松(Flunisolide Acetate)，氟胺烟酸(Flunixin)，氟胺烟酸葡胺(Flunixin Meglumine)，氟考丁酯(FluocortinButyl)，氟甲孕松醋酸酯(Fluorometholone Acetate)，苯氟奎酮(Fluqazone)，氟比洛芬(Flurbiprofen)，炔氟联苯(Fluretofen)，丙酸氟地松(Fluticasone Propionate)，苯呋丙酸(Furaprofen)，氧芴丁酮酸(Furobufen)，氯氟舒松(Halcinonide)，HalobetasolPropionate，双醋溴氟龙(Halopredone Acetate)，异丁苯乙酸(Ibufenac)，布洛芬(Ibuprofen)，Ibuprofen Aluminum，皮考布洛芬(Ibuprofen Piconol)，Ilonidap，吲哚美辛(Indomethacin)，吲哚美辛钠(Indomethacin Sodium)，吲哚布洛芬(Indoprofen)，双甲氧苯吲哚(Indoxole)，吲四唑(Intrazole)，醋异氟龙(Isoflupredone Acetate)，氧卓乙酸(Isoxepac)，异恶塞酰胺(Isoxicam)，铜基布洛芬(Ketoprofen)，盐酸氯苯甲咪唑(Lofemizole Hydrochloride)，Lornoxicam，LotepredoneEtabonate，甲氧胺苯酸钠(Meclofenameta Sodium)，甲氯灭酸(Meclofenamic Acid)，甲二氯松二丁酯(MeclorisoneDibutyrate)，甲灭酸(Mefenamic Acid)，Mesalamine，甲氯恶唑酮(Mesaclazone)，甲基氢化泼尼松(MethylprednisoloneSuleptanate)，氟烟吗酯(Morniflumate)，那布米酮(Nabumetone)，萘普生(Naproxen)，萘普生钠(Naproxen Sodium)，甲基萘丙醇(Naproxol)，腈胺唑酮(Nimazone)，偶氮水杨酸钠(OlsalazineSodium)，超氧化物歧化酶(Orgotein)，苯呋丙酸(Orpanoxin)，恶丙嗪(Oxaprozin)，羟基保泰松(Oxyphenbutazone)，盐酸胍苯叉芴(Paranyline Hydrochloride)，戊聚糖多硫酸钠(PentosanPolysulfate Sodium)，Phenbutazone Sodium Glycerate，甲苯吡啶酮(Pirfenidone)，炎痛喜康(Piroxicam)，炎痛喜康肉桂酯(Piroxicam Cinnamate)，炎痛喜康乙醇胺(Piroxicam Olamine)，吡洛布洛芬(Pirprofen)，强地松龙-奋乃静(Prednazate)，Prefelone，丙哚乙酸(Prodolic Acid)，Proquazone，胺丙恶二唑(Proxazole)，胺丙恶二唑柠檬酸酯(Proxazole Citrate)，双甲丙酰龙(Rimexolone)，Romazarit，水杨酸胆碱硫酸镁(Salcolex)，Salnacedine，双水杨酸酯(Salsalate)，Sanguinarium Chloride，氯恶唑酮(Seclazone)，丝炎痛(Sermetacin)，噻氧噻嗪(Sudoxicam)，舒林酸(Sulindac)，噻吩甲酰布洛芬(Suprofen)，Talmetacin，氟烟酞酯(Talniflumate)，醋柳酞酯(Talosalate)，替布费龙(Tebufelone)，替尼达普(Tenidap)，替尼达普钠(TenidapSodium)，替诺西康(Tenoxicam)，氧喹苯胺(Tesicam)，苄叉异喹酮(Tesimide)，四氢甲吲胺(Tetrydamine)，噻庚乙酸(Tiopinac)，特戊酸巯氢可的松(Tixocortol Pivalate)，托耳米丁(Tolmetin)，甲苯酰吡酸钠(Tolmetin Sodium)，三氯氟松(Triclonide)，三氟氨酯(Triflumidate)，叠氮吲酸(Zidometacin)，糖皮质激素或苯酰吡酸钠。

本发明也包括用脂降低试剂治疗受试者的方法，防止心血管紊乱。在具有上面的正常的sCD40L水平的原理上对选择的受试者给药这样的试剂。给药的试剂的量是能有效地降低未来发展成心血管紊乱的受试者的危险的量。在一个实施方案中，受试者已经具有心血管事件，如心脏病或血管成形术。在这一实施方案中，结合细胞黏附分子和抑制白血细胞附着于这样的分子的能力的试剂可能限制了进一步的损伤或帮助防止再狭窄，心肌后梗死或血管成形术后的损伤。在另一个重要的实施方案中，受试者是没有立即需要结合细胞黏附分子和抑制白血细胞附着于这样的分子的能力的试剂的治疗的表面健康的受试者。在重要的实施方案中，受试者中除了sCD40L的水平升高之外，没有其他的不利的心血管事件的危险升高。在另外的重要的实施方案中，治疗的受试者是非血脂过高的受试者。

本发明也包括一种用钙通道封闭剂治疗受试者以便防止心血管紊乱的方法。在具有上面的正常水平的sCD40L的原理上对选择的受试者给药这样的试剂。该试剂给药的量是能有效地降低未来发展成心血管紊乱的受试者的危险的量。在一个实施方案中，受试者已经有心血管事件，如心脏病或血管成形术。在另一个重要的实施方案中，受试者是没有立即需要钙通道封闭剂治疗的表面健康的受试者。在重要的实施方案中，受试者除了Scd40L的水平升高之外，没有其他的不利的心血管事件的危险升高。在另一个重要的实施方案中，治疗的受试者是非血脂过高的受试者。在任何前面所述的实施方案中，钙通道封闭剂可以是但不限于，二羟吡啶，苯烷基胺，和/或苄硫噻平(benzothiazepines)。在优选的实施方案中，用于本发明的钙离子通道封闭剂包括但不限于，氨吡酮(amrinone)，氨氯地平(amlodipine)，苯环庚烷(bencyclane)，地尔硫卓(diltiazem)，费乐地平(feldipine)，芬地林(fendiline)，氟桂嗪(flunarizine)，伊拉地平(isradipine)，硝苯乙吡啶(nicardipine)，硝苯地平(nifedipine)，尼莫地平(nimodipine)，环己哌啶(perhexilene)，加罗帕米(gallopamil)，噻烷丙胺(tiapamil)和噻烷丙胺类似物(如1993RO-11-2933)，维拉帕米(verapamil)，苯妥英(phenytoin)，巴比妥类(barbiturates)，和多肽(peptides dynorphin)，omega-conotoxin，和omega-agatoxind等等，和/或其药物可接受盐。

本发明也包括用β-肾上腺素能受体封闭剂治疗受试者，防止心血管紊乱。在具有上面的正常水平的sCD40L的水平的原理上对选择的受试者给药这样的试剂。给药该试剂的量是能有效地降低受试者未来发展成心血管紊乱的危险的量。在一个实施方案中，受试者已经具有心血管事件，如心脏病或血管成形术。在另一个重要的实施方案中，受试者是没有立即的β-肾上腺素能受体封闭剂治疗需要的表面健康的受试者。在重要的实施方案中，受试者除了sCD40L的水平升高之外，没有其他不利的心血管事件的危险升高。在另外的重要的实施方案中，治疗的受试者是非血脂过高的受试者。在任意的前面所述的实施方案中，β-肾上腺素能受体封闭剂可以是，但不限于阿替洛尔，醋丁洛尔，阿普洛尔，苯呋洛尔，倍他洛尔，布尼洛尔，卡特洛尔，塞里普洛尔，海羟洛尔，茚诺洛尔，拉贝洛尔，左旋布诺洛尔，甲吲洛尔，甲基普拉洛尔，美丁多尔，美托洛尔，甲泛影洛尔，氧烯洛尔，吲哚洛尔，普萘洛尔，普拉洛尔，索他洛尔，纳多洛尔，替普洛尔，托马洛尔，替莫洛尔，布拉洛尔，喷布洛尔，三甲洛尔，2-(3-(1，1-二甲基乙基)-氨基-2-羟基丙氧基)-3-吡啶碳基盐酸，1-丁基氨基-3-(2，5-二氯苯氧基)-2-丙醇，1-异丙基氨基-3-(4-(2-环丙基甲氧基乙基)酚氧基)-2-丙醇，3-异丙基氨基-1-(7-甲基林丹-4-yl氧基)-2-丁醇，2-(3-t-丁基氨基-2-羟基-丙基硫)-4-(5-碳氧基-2-噻吩基)噻唑，7-(2-羟基-3-t-丁基氨基丙氧基)四氯苯肽。

本发明也包括用环氧化酶-2-抑制剂治疗受试者防止心血管紊乱的一种方法。这样的一种试剂是在具有上面的正常水平的sCD40L的原理上对选择的受试者给药的。该试剂给药的量是能有效降低受试者未来发展成心血管紊乱的危险的量。在一个实施方案中，受试者已经具有心血管事件，如心脏病或血管成形术。在另一个重要的实施方案中，受试者是表面健康的受试者，不是立即需要环氧化酶-2抑制剂治疗。在重要的实施方案中，受试者除了sCD40L的水平升高之外，没有其他的不利心血管事件的危险升高。在另一个重要的实施方案中，治疗的受试者是非血脂过高的受试者。在任何的前面所述的实施方案中，环氧化酶-2-抑制剂可以是但不限于苯基杂环，二芳基二环杂环，芳基取代的5，5融合芳香基氮化合物，N苯基吲哚-3-丙酸和/或它的衍生物，5-甲烷亚磺酰氨基-1-二氢茚酮，N苯基吲哚-3-丁酸和/或它的衍生物，二苯基-1，2，3-噻二唑，二芳基-5-氧酸基-2-(5H)-呋喃，3，4-二芳基-2-羟基-2，5-二氢呋喃，均二苯代乙烯和/或它的衍生物，二苯基均二苯代乙烯，烷基化苯乙烯，双芳基环丁烯和/或它的衍生物，取代吡啶，吡啶基-2-环戊烯-1-one，和/或取代磺酸苯基杂环。

本发明也包括了用血管紧张肽系统抑制剂治疗受试者防止心血管紊乱的一种方法。这样的试剂是在具有上面的正常水平的sCD40L的水平的原理上对选择的受试者给药的。该试剂给药的量是能有效受试者未来发展成心血管紊乱的危险的量。在一个实施方案中，受试者已经具有了心血管事件，如心脏病或血管成形术。在另一个重要的实施方案中，受试者是表面健康的受试者，没有立即的需要血管紧张肽系统抑制剂的治疗。在重要的实施方案中，受试者除了sCD40L的水平升高之外，没有其他的不利心血管事件的危险升高。在另一个重要的实施方案中，治疗的受试者是非血脂过高的受试者。在任意的前面所述的实施方案中，血管紧张肽系统抑制剂可以是，但不限于血管紧张肽转换酶(ACE)抑制剂，血管紧张肽II拮抗剂，血管紧张肽II受体拮抗剂，激活血管紧张肽II的代谢的试剂，和/或防止血管紧张肽I的合成的试剂。

根据本发明的另一方面，提供了评估个体将取益于降低与动脉粥样硬化疾病相关的心血管紊乱的危险的试剂的治疗的可能性。试剂可以从包括抗炎症试剂，抗凝血试剂，抗血小板试剂，纤维溶解试剂，降脂试剂，直接的凝血酶抑制剂，糖蛋白IIb/IIIa受体抑制剂，结合细胞黏连分子和抑制白血细胞附着于这样的分子的试剂(即，抗细胞黏附分子抗体)，钙通道封闭剂，β-肾上腺素能受体封闭剂，环氧化酶-2-抑制剂，血管紧张肽系统抑制剂，和/或前面的试剂的结合的组中选择。为了实施本方法，得到了个体中的sCD40L的水平。然后，将该水平与预定的值比较，其中与预定的值的比较中的sCD40L的水平是个体将取益于该试剂的治疗的可能性的证据。然后，可以在似乎可以通过用该试剂的治疗得到的静益处的关系中鉴定个体。

预定的值可以如上所述。

正如上面提到的，本发明特别适用于确定在心血管紊乱如未来的中风或未来的心肌梗死，包括非致命的心肌梗死的个体中优先取益于用降低危险的试剂的治疗的个体。也允许通过鉴定例如最有可能取益于新治疗或取益于不利的副作用的高危方式已知治疗选择临床实验和用候选药物治疗的候选群体。所以，本发明提供了评估一些候选患者的治疗的可能的净益处的信息。

根据本发明的另一方面，提供了在受试者中降低sCD40L的水平以便降低不利的心血管紊乱的危险的方法。该方法包括对sCD40L的水平升高的受试者给药降低sCD40L水平的试剂，给药的量是能有效地降低受试者中sCD40L的水平。在一个实施方案中，该试剂是降低脂的试剂。优选的受试者是表面健康的受试者。在一些实施方案中，受试者没有其他的不利的心血管事件的危险升高。在一些实施方案中，受试者的C-反应蛋白质(CRP)水平升高。在本发明的这一方面的一些实施方案中，受试者没有立即的需要降低脂的试剂的治疗的适应症。

根据本发明的另一方面，提供了在有发展成心血管紊乱危险的个体中评估血管斑内脂积累的可能性的方法。该方法包括在个体中得到sCD40L水平，将sCD40L水平与预定的值比较，根据与预定的水平的比较中的sCD40L的水平鉴定血管斑内脂积累的个体的危险方式。预定的值可以是多数预定的sCD40L的水平范围，所述的比较步骤包括确定所述的sCD40L水平落在哪个所述的预定sCD40L的水平范围。在一些实施方案中，预定的值约是血液的2.5ng/ml或更高。在一些实施方案中，预定的值约是血液的3.0ng/ml或更高。在重要的实施方案中，预定的值是多数的预定的sCD40L水平范围，一个所述的多数是低于约2.5ng/ml血液，另一个所述的范围是低于约2.5ng/mL的血液，所述的比较步骤包括确定所述的个体的sCD40L水平范围落在哪个所述的多数的预定sCD40L水平范围。在另一个重要的实施方案中，血管斑内脂积累发生在颈动脉中。其他优选的范围和重要的实施方案如上所述和如下所述。

根据本发明的其他方面，提供了制备用于治疗心血管症状的药剂的方法。

本发明的这些和其他方面将结合本发明的详细说明，在下面更详细地叙述。

附图的简要说明

图1是根据sCD40L血液水平，在研究群体中证明心血管事件的相对危险的图。点线表示了对照分布的99个百分位数的切入点。

本发明的详细说明

本发明最初的原理是来自在妇女健康研究(WHS)的参与者中的一个预期中的逐选的情况对照分析的证据，这是一个评估28,263个没有心血管疾病或癌症历史的中年美国妇女中维生素E和低剂量的阿斯匹林的效果的正在进行的初级预防实验。在这一实验中，发现了sCD40L，炎症的介导物的基线水平，可以确定不依赖一大系列的脂和非脂危险的因素，和不依赖其他预示物包括系统炎症的标记的心肌梗死和中风的未来的危险(参见例如，美国专利6,040,147)。特异地说，我们发现最高基线水平的sCD40L的个体未来发展成心血管事件的危险至少有3倍的增高(图1)。

另外，在来自妇女健康研究的数据中，与sCD40L相关的未来发展成心肌梗死和中风的危险似乎是附加到可以通过常用的总胆固醇和HDL胆固醇的评估来确定的哪个个体。在这一实验中，sCD40L的预测值是非致命的以及致命的事件，在一个长时期中是稳定的，并且存在于非吸烟者以及吸烟者中。另外，这一实验的数据表明，表面健康的个体的益处的数量级可以期望来自用于动脉粥样硬化紊乱的防止和治疗中的治疗性试剂。

在一个方面，目前的发明叙述了sCD40L预测目前没有疾病证据的个体中与动脉粥样硬化相关的心血管紊乱如心肌梗死和中风的危险中的用途。所以，这些数据大大地扩展了过去关于sCD40L在已经鉴定的高危人群和症状局部缺血的患者如有不稳定的心绞痛的那些中预测危险的用途的观察。确实，sCD40L的水平在急性局部缺血后升高，所以一直无法确定在急性病或高危人群中过去的研究中观察到的统计学关系是致病性的原因、或是由于短期的炎症而改变，或归因于其他危险因子，特别是吸烟和血脂过高。

相反，来自妇女健康研究的数据表明，第一次，sCD40L在目前健康和低危险的个体中预测危险，预测非致命已经致命的事件，在非吸烟者中预测危险，在预测与筛选总和HDL胆固醇相关的危险中有用途。来自妇女健康研究的数据同时第一次表明，设计降低与sCD40L血浆/血液水平的方法的基础上有数量级不同的动脉粥样硬化事件如心肌梗死和中风的危险降低的干扰的效果的可能性。参考下面的术语的简要的解释可以更好地理解本发明。

“心血管心肌局部缺血，紊乱”包括心肌梗死，中风，心肌局部缺血，心绞痛和周边动脉血管疾病。心肌紊乱不包括静脉凝血。

“表面健康”，如本文所用，指过去没有急性不利的心肌事件如心肌梗死的个体(即，没有由于初级不利的心血管事件的二级不利心血管事件的危险升高的个体。表面健康的个体同样不具备疾病的症状。用另一句话来说，这样的个体，如果通过医学专业检测，可以鉴定为健康和无疾病症状。

在重要的实施方案中，受试者中不利的心血管事件的危险没有升高。危险升高的受试者包括有心血管疾病家族历史，脂升高，吸烟者，过去有急性心血管事件等等(参见例如，实验医学的Hrrison原则，第15版，McGraw-Hill公司，纽约，下文中称为“Harrison”)。根据本发明的一个重要的方面，提供了治疗受试者降低心血管紊乱的危险的方法。该方法包括对已知具有上面的正常水平的sCD40L的受试者选择和给药降低心血管紊乱的危险的试剂。该试剂可以是抗炎症试剂，抗凝血试剂，抗血小板试剂，纤维蛋白溶解试剂，降低脂的试剂，直接的凝血酶抑制剂，糖蛋白Iib/IIIa受体抑制剂，结合细胞黏附分子和抑制白血细胞附着于这样的分子的试剂，钙通道封闭剂，β-肾上腺素能受体封闭剂，环氧化酶-2抑制剂，血管紧张肽系统抑制剂，和/或它们的结合。该试剂的给药的量是能有效降低受试者未来发展成心血管紊乱危险的量。

优选的受试者是在其他的情况下并不需要立即采用本发明的试剂治疗的表面健康的受试者。例如，如果根据sCD40L水平升高而需要特殊试剂的治疗，那么，该患者优选地是除了sCD40L的水平升高这个症状之外，没有其他的需要用该试剂(或该试剂所属类别的其他试剂)治疗的症状。在一些实施方案中，受试者没有需要用所有前面的试剂的类别的任意一个或任何结合的治疗的症状。如关于抗炎症试剂，没有类风湿关节炎，慢性背痛，自身免疫疾病，血管疾病，病毒疾病，恶性肿瘤等等的症状。在另一个实施方案中，受试者除了sCD40L的水平升高之外，没有其他的不利的心血管事件的危险升高(即，没有这样的事件的家族历史的受试者，非吸烟的受试者，没有血脂过高的受试者，系统的炎症标记物的水平没有升高的受试者)。在一些实施方案中，受试者没有需要用所有前面的试剂的类别的任意一个，任意的结合或所有进行治疗的的症状。

在一些实施方案中，受试者没有需要用前面的试剂的任意一个，任何结合或全部来来治疗的症状。在进一步重要的实施方案中，治疗的受试者是非血脂过高的受试者。“非血脂过高”是非血胆固醇过高和/或非血甘油三酯过高的受试者。“非血胆固醇过高”的受试者是不符合已确定的血胆固醇过高的标准的受试者受试者。非甘油三酯过高的受试者是不符合目前的甘油三酯过高的标准的受试者(参见例如，实验医学的Harrison原理，第15版，McGraw-Hill公司，纽约，下文中称为“Harrison”)。血胆固醇过高的受试者和甘油三酯过高的受试者是与早期的冠状动脉心脏病的适应症增加有关。血胆固醇过高的受试者具有的LDL水平大于160mg/dL，或大于130mg/dL，并且至少具有选自包括雄性性别，早期的冠状动脉心脏疾病家族历史，吸烟者(每天大于10支)，高血压，低HDL(＜35mg/dL)，糖尿病，血胰岛素过高，腹部肥胖，高血脂蛋白质，和个人历史的脑血管疾病或闭塞周边血管疾病的组中的两个危险因素。血甘油三酯过高受试者具有的甘油三酯(TG)水平大于250mg/dL。所以，非血脂过高的受试者定义为胆固醇和甘油三酯水平低于如上所述为血胆固醇过高和血甘油三酯过高的受试者设定的极限的受试者。

在一些实施方案中，受试者具有正常水平的系统炎症标记物。为了本申请书的目的，正常的这些水平指与水平没有升高相似的水平。正常水平将依赖特殊的系统炎症标记物(参见美国专利号，6,040,147，该文献的内容通过在此引述而全部合并于本文)。

“非吸烟“，如本文所用，指个体在评估时间不是个吸烟者。这包括从没有吸烟的个体以及过吸过烟但现在不再吸烟的个体。

降低心血管紊乱的危险的试剂包括，但不限于从包括抗炎症试剂，抗凝血试剂，抗血小板试剂，纤维蛋白溶解试剂，降低脂的试剂，直接额凝血酶抑制剂，糖蛋白IIb/IIIa受体抑制剂，结合细胞黏附分子和抑制白血细胞附着于这样的分子的能力的试剂，钙通道封闭剂，β肾上腺素能受体封闭剂，环氧化酶-2-抑制剂，血管紧张肽系统抑制剂，和/或其任何结合的组的那些。

“抗炎症“试剂包括但不限于，阿氯酚酸(Alclofenac)，阿氯米松(Alclometasone Dipropionate)，Algestone Acetonide，α淀粉酶，Amcinafal，氨酚酸钠(Amfenac Sodium)，AmipriloseHydrochloride，Anakinra，Anirolac，Anitrazafen，Apazone，巴沙拉二钠(Balsalazide Disodium)，苄吲酸(Bendazac)，苯恶洛芬(Benoxaprofen)，盐酸苄卡明(Benzydamine Hydrochloride)，菠萝蛋白酶(Bromelains)，溴四唑哌啶(Broperamole)，布地缩松(Budesonide)，卡布洛芬(Carprofen)，Cicloprofen，曾戊唑酮(Cintazone)，氯噻托酸(Cliprofen)，丙酸倍氯他索(ClobetasoPropionate)，丁氯倍氟松(Clobetasone Butyrate)，氯苯吡咯酸(Clopirac)，Cloticasone Propionate，醋酸三氟米松(CormethasoneAcetate)，去氧可的松(Cortodoxone)，去氟可的松(Deflazacort)，丙缩羟强龙(Desonide)，去羟米松(Desoximetasone)，二丙酸地塞米松(Dexamethasone Dipropionate)，双氯酚酸钾(DiclofenacPotassium)，双氯酚酸钠(Diclofenac Sodium)，双醋二氟松(Diflorasone Diacetate)，二氟米铜钠(Diflumidone Sodium)，双氟尼酸(Diflunisal)，醋丁二氟龙(Difluprednate)，双酞嗪酮(Diftalone)，二甲亚砜(Dimethyl Sulfoxide)，丙缩氢炎松(Drocinonide)，甲地松(Endrysone)，Enlimomab，塞庚苯胺钠(Enolicam Sodium)，嘧吡唑(Epirizole)，依托度酸(Etodolac)，Etofenamate，联苯乙酸(Felbinac)，苯四唑胺(Fenamole)，芬布芬(Fenbufen)，二氯苯氧苯乙酸(Fenclofenac)，氯环苯乙酸(Fenclorac)，苯吲柳酸(Fendosal)，苯吡恶二酮(Fenpipalone)，双苯噻酸(Fentiazac)，氟苯哌酮(Flazalone)，氟恶米松(Fluazacort)，氟芬那酸(Flufenamic Acid)，氟咪唑(Flumizole)，醋酸-9-去氟肤轻松(Flunisolide Acetate)，氟胺烟酸(Flunixin)，氟胺烟酸葡胺(Flunixin Meglumine)，氟考丁酯(FluocortinButyl)，氟甲孕松醋酸酯(Fluorometholone Acetate)，苯氟奎酮(Fluqazone)，氟比洛芬(Flurbiprofen)，炔氟联苯(Fluretofen)，丙酸氟地松(Fluticasone Propionate)，苯呋丙酸(Furaprofen)，氧芴丁酮酸(Furobufen)，氯氟舒松(Halcinonide)，HalobetasolPropionate，双醋溴氟龙(Halopredone Acetate)，异丁苯乙酸(Ibufenac)，布洛芬(Ibuprofen)，Ibuprofen Aluminum，皮考布洛芬(Ibuprofen Piconol)，Ilonidap，吲哚美辛(Indomethacin)，吲哚美辛钠(Indomethacin Sodium)，吲哚布洛芬(Indoprofen)，双甲氧苯吲哚(Indoxole)，吲四唑(Intrazole)，醋异氟龙(Isoflupredone Acetate)，氧卓乙酸(Isoxepac)，异恶塞酰胺(Isoxicam)，铜基布洛芬(Ketoprofen)，盐酸氯苯甲咪唑(Lofemizole Hydrochloride)，Lornoxicam，LotepredoneEtabonate，甲氧胺苯酸钠(Meclofenameta Sodium)，甲氯灭酸(Meclofenamic Acid)，甲二氯松二丁酯(MeclorisoneDibutyrate)，甲灭酸(Mefenamic Acid)，Mesalamine，甲氯恶唑酮(Mesaclazone)，甲基氢化泼尼松(MethylprednisoloneSuleptanate)，氟烟吗酯(Morniflumate)，那布米酮(Nabumetone)，萘普生(Naproxen)，萘普生钠(Naproxen Sodium)，甲基萘丙醇(Naproxol)，腈胺唑酮(Nimazone)，偶氮水杨酸钠(OlsalazineSodium)，超氧化物歧化酶(Orgotein)，苯呋丙酸(Orpanoxin)，恶丙嗪(Oxaprozin)，羟基保泰松(Oxyphenbutazone)，盐酸胍苯叉芴(Paranyline Hydrochloride)，戊聚糖多硫酸钠(PentosanPolysulfate Sodium)，Phenbutazone Sodium Glycerate，甲苯吡啶酮(Pirfenidone)，炎痛喜康(Piroxicam)，炎痛喜康肉桂酯(Piroxicam Cinnamate)，炎痛喜康乙醇胺(Piroxicam Olamine)，吡洛布洛芬(Pirprofen)，强地松龙-奋乃静(Prednazate)，Prefelone，丙哚乙酸(Prodolic Acid)，Proquazone，胺丙恶二唑(Proxazole)，胺丙恶二唑柠檬酸酯(Proxazole Citrate)，双甲丙酰龙(Rimexolone)，Romazarit，水杨酸胆碱硫酸镁(Salcolex)，Salnacedine，双水杨酸酯(Salsalate)，Sanguinarium Chloride，氯恶唑酮(Seclazone)，丝炎痛(Sermetacin)，噻氧噻嗪(Sudoxicam)，舒林酸(Sulindac)，噻吩甲酰布洛芬(Suprofen)，Talmetacin，氟烟酞酯(Talniflumate)，醋柳酞酯(Talosalate)，替布费龙(Tebufelone)，替尼达普(Tenidap)，替尼达普钠(TenidapSodium)，替诺西康(Tenoxicam)，氧喹苯胺(Tesicam)，苄叉异喹酮(Tesimide)，四氢甲吲胺(Tetrydamine)，噻庚乙酸(Tiopinac)，特戊酸巯氢可的松(Tixocortol Pivalate)，托耳米丁(Tolmetin)，甲苯酰吡酸钠(Tolmetin Sodium)，三氯氟松(Triclonide)，三氟氨酯(Triflumidate)，叠氮吲酸(Zidometacin)，糖皮质激素或苯酰吡酸钠。

“抗凝血”和/或“纤维蛋白溶解”试剂包括但不限于，纤溶酶原(通过前激肽释放酶的相互作用的纤溶酶，激肽酶，XII因子，XIIIa，纤溶酶原前激活剂，和组织纤溶酶源激活剂[TPA])，链激酶；尿激酶，茴香酰纤溶酶原-链激酶激活剂复合物；前尿激酶(Pro-UK)；rTPA(alteplase和激活酶；r表示重组)；rPro-UK；abbokinase；隆突酶；Sreptase Anagrelide Hydrochloride；bivalirudin；Dalteparin Sodium；Danaparoid Sodium；盐酸咪唑乙氧基甲酸(Dazoxiben)，Efegatran Sulfate；伊诺肝素钠(EnoxaparinSodium)，Ifetroban Sodium；Tinzaparin Sodium；Retaplase；Trifenagrel；苄丙酮香豆素(Warfarin)，葡聚糖。

“抗血小板”试剂包括但不限于，Clopridogrel；Sulfinpyrazone；阿斯匹林；潘生丁；氯贝特；吡醇氨酯；PGE；胰高血糖素；抗血清素药物；卡非因；茶碱；己酮可可碱；噻氯匹定；阿那格雷(anagrelide)。

“降低脂”的试剂包括但不限于，吉莫非齐，cholystyramine，colestipol，尼克酸，丙丁芬(probucol lovastatin)，氟伐地丁(fluvastatin)，simvastatin，atorvastatin，帕伐他丁(pravastatin)，cerivastatin，和其他HMG-CoA还原酶抑制剂。

HMG-CoA(3-羟基-3-甲基戊二基-辅酶A)还原酶是在胆固醇生物合成(HMG-CoA6Mevalonate)中的速度限制的反应的微体酶。HMG-CoA还原酶抑制剂抑制HMG-CoA还原酶，并且作为结果抑制了胆固醇的合成。许多HMG-CoA还原酶抑制剂已经可以用血胆固醇过高治疗个体。更新的发现，HMG-CoA还原酶抑制剂已经显示是在中风的治疗中受益的(Endres M，et al.，《美国国家科学院院刊》1998，95：8880-5)。

本发明中有用的HMG-CoA还原酶抑制剂包括，但不限于simvastatin(美国专利号，4,444,784)，lovastatin(美国专利号，4,231,938)，Pravastatin sodium(美国专利号4,346,227)，氟伐地丁(fluvastatin，美国专利号4,739,073)，atorvastatin(美国专利号，5,273,995)，cerivastatin和许多其他的抑制剂，描述于如下给出的各项美国专利中，美国专利5,622,985，美国专利5,135,935，美国专利5,356896，美国专利4,920109，美国专利5,286,895，美国专利5,262,435，美国专利5,260,332，美国专利5,317,031，美国专利5,283,256，美国专利5,256,689，美国专利5,182,298，美国专利5,369,125，美国专利5,302,604，美国专利5,166,171，美国专利5,202,327，美国专利5,276,021，美国专利5,196,440，美国专利5,091,386，美国专利5,091,378，美国专利4,904,646，美国专利5,385,932，美国专利5,250,435，美国专利5,132,312，美国专利5,130,306，美国专利5,116,870，美国专利5,112,857，美国专利5,102,911，美国专利5,098,931，美国专利5,081,136，美国专利5,025,000，美国专利5,021,453，美国专利5,017,716，美国专利5,011,144，美国专利5,001,128，美国专利4,997,837，美国专利4,996,234，美国专利4,994,494，美国专利4,992,429，美国专利4,970,231，美国专利4,968,693，美国专利4,963,538，美国专利4,957,940，美国专利4,950,675，美国专利4,946,864，美国专利4,946,860，美国专利4,940,800，美国专利4,940,727，美国专利4,939,143，美国专利4,929,620，美国专利4,923,861，美国专利4,906,657，美国专利4,906,624，美国专利4,897,402，这些专利都通过在此引述而合并于本文。

“直接的凝血酶抑制剂”包括但不限于，蛭素，hirugen，hirulog，agatroban，PPACK，凝血酶aptamers。

“钙通道封闭剂”“是在控制各种疾病中，包括几种心血管紊乱，如血压过高，心绞痛，和心律失常时，具有重要治疗价值的化学上不同的类别的化合物[Fleckenstein，Cir.Res.v.52，(supp1.1)，p.13-16(1983)；Fleckenstein，实验事实和治疗前景，John Wiley，New York(1983)；McCall，D.，Curr Pract Cardiol，v.10，p1-11(1985)]。钙通道封闭剂是通过调节细胞钙通道防止或放慢钙进入的药物的异源的组[Remington，《药学科学和实践》，第19版，Mack出版公司，Eaton，PA，p963(1995)]。大多数目前可得的钙通道封闭剂，是本发明可利用的，属于三个主要的药物的化学物组之一，二氢吡啶，如硝苯地平，苯基烷基胺，如维拉帕米，和benzothiazepines，如diltiazem。用于本发明的其他钙离子通道封闭剂包括但不限于，氨力农，氨氯地平(amlodipine)，苄环庚烷(bencyclane)，费乐地平(felodipine)，芬地林(fendiline)，氟桂嗪(flunarizine)，伊拉地平(isradipine)，硝苯乙吡啶(nicardipine)，尼莫地平(nimodipine)，环己哌啶(perhexilene)，加罗帕米(gallopamil)，噻烷丙胺(tiapamil)和噻烷丙胺1类似物(如1993RO-11-2933)，苯妥英(penytion)，巴比妥类(barbiturates)，和多肽(peptides dynorphin)，omega-conotoxin和omega-agatixin等等和/或其药物可接受盐。

“β-肾上腺素能受体封闭剂”是在心绞痛，高血压，和心律失常中类似具有儿茶酚胺的心血管效果的一类药物。β-肾上腺素能受体封闭剂包括，但不限于阿替洛尔，醋丁洛尔，阿普洛尔，苯呋洛尔，倍他洛尔，布尼洛尔，卡特洛尔，塞里普洛尔，海羟洛尔，茚诺洛尔，拉贝洛尔，左旋布诺洛尔，甲吲洛尔，甲基普拉洛尔，美丁多尔，美托洛尔，甲泛影洛尔，氧烯洛尔，吲哚洛尔，普萘洛尔，普拉洛尔，索他洛尔，纳多洛尔，替普洛尔，托马洛尔，替莫洛尔，布拉洛尔，喷布洛尔，三甲洛尔，2-(3-(1，1-二甲基乙基)-氨基-2-羟基丙氧基)-3-吡啶碳基盐酸，1-丁基氨基-3-(2，5-二氯苯氧基)-2-丙醇，1-异丙基氨基-3-(4-(2-环丙基甲氧基乙基)酚氧基)-2-丙醇，3-异丙基氨基-1-(7-甲基林丹-4-yl氧基)-2-丁醇，2-(3-t-丁基氨基-2-羟基-丙基硫)-4-(5-碳氧基-2-噻吩基)噻唑，7-(2-羟基-3-t-丁基氨基丙氧基)四氯苯肽。上面鉴定的化合物可以用作等体混合物，或分别是他们的左旋或右旋形式。

环氧酶-2(COX-2)是最新鉴定的环氧酶形式。“环氧酶”是在大多数组织中存在的酶复合物，从花生四烯酸产生各种前列腺素和血栓烷。非甾类化合物，抗炎症药物发挥大部分他们的抗炎症，麻醉，解热镇痛活性，抑制激素诱导的子宫收缩，和一些类型的通过抑制环氧化酶(也已知作为前列腺素G/H合成酶和/或前列腺素-内过氧化合成酶)的癌症生长。最初，已知只有一个形式的环氧化酶，“构成性酶”或环氧化酶-1(COX-1)。它最初是在小牛原始的液泡中鉴定的。

最初已经从鸡，小鼠，和人来源克隆、测序和鉴定环氧化酶-2(COX-2)(参见例如，美国专利号，5,543,297，1996年8月授予Cromlish等，指定给Merck Frosst Canada公司，Kirkland，CA，题目是：“评估环氧化酶-2活性的人环氧化酶-2 cDNA和实验”)。这一酶是与COX-1不同的。COX-2是许多试剂，包括促细胞分裂剂，内毒素，激素，细胞因子和生长因子能快速和容易地诱导的。正如前列腺素具有生理和病理作用，可以确信，构成性酶COX-1是在大部分中是对前列腺素的内源基本释放是可应答的，所以在它们的生理功能如维持胃肠完整性和肾血液流中是重要的。相反，可以确信，可以诱导形式的COX-2主要是应答前列腺素的生理效果的，其中快速的酶的诱导将发生在这样的试剂，如炎症试剂，激素，生长因子，和细胞因子的应答中。所以，可以确信，选择性抑制剂COX-2具有常规的非甾类抗炎症药物的相似的抗炎症，镇痛和麻醉特性，和另外抑制激素诱导的子宫收缩和同时具有潜在的抗癌症效果，但副作用降低。特别是，确信，这样的COX-2抑制剂具有的肠胃毒性的潜力降低，肾副作用的潜力降低，对出血时间的作用降低，和可能在阿斯匹林敏感的气喘受试者中诱导气喘病的潜力降低，所以可以用于本发明。

许多选择性的“COX-2抑制剂”是本领域已知的。这些包括，但不限于，美国专利号5,474,995“作为cox-2抑制剂的苯基杂环”，美国专利5,521,213“作为环氧化酶-2的抑制剂的二芳基双环杂环”；美国专利5,536,752“作为COX-2抑制剂的苯基杂环”；美国专利5,550,142“作为COX-2抑制剂的苯基杂环”；美国专利5,552,422“作为抗炎症试剂的芳基取代5，5融合芳基氮化合物”；美国专利5,604,253“作为环氧化酶抑制剂的N苯基磷酸司甲苯酯-3-yl丙酸衍生物”，美国专利5,604,260“5-甲烷亚磺酰氨基-1-二氢茚酮”；美国专利5,639,780“作为环氧化酶抑制剂的N苯基吲哚-3-y1-正丁酸”；美国专利5,677,318“作为抗炎症试剂的二苯基-1，2，3-噻二唑”；美国专利5,691,374“作为COX-2抑制剂的二芳基-5-氧酸化-2-(5H)-呋喃”；美国专利5,698,584“作为COX-2抑制剂的前药物的3，4-二芳基-2-羟基-2，5-二氢呋喃”；美国专利5,710,140“作为COX-2抑制剂的苯基杂环”；美国专利5,733,909“作为COX-2抑制剂的前药物的二苯基均二苯代乙烯”；美国专利5,789,413“作为COX-2抑制剂前药物烷基化苯乙烯”；美国专利5,817,700“作为环氧化酶抑制剂的顺式芳基环丁烯”；美国专利5,849,943“作为环氧化酶抑制剂的均二苯代乙烯衍生物”；美国专利5,922,742“作为选择性环氧化酶-2抑制剂的吡啶-2-环戊基-1-ones”；美国专利5,925,631“作为COX-2抑制剂的前药物的烷基化苯乙烯”中所述的COX-2抑制剂；所有这些专利都是指定给Merck Frosst Canada公司(Kirkland，CA)。其他的COX-2抑制剂也在指定给G.D.Searle&公司(Skokie，IL)，题目为：作为环氧化酶-2和5-脂氧化酶抑制剂的取代磺基苯基杂环“的美国专利5,643,933中叙述了。

许多上面鉴定的COX-2抑制剂是选择的COX-2抑制剂的前药物，通过体内转换成活性的和选择性的COX-2抑制剂发挥它们的作用。从上面已鉴定的COX-2抑制剂前药物形成的活性的和选择性的COX-2抑制剂在1995年1月公开的WO95/00501，1995年7月13日公开的WO95/18799和1995年12月12日公开的美国专利5,474,995，题目：“评估环氧化酶-2活性的人环氧化酶-2 cDNA和实验”中已详细叙述，本领域的一个普通技术人员能够确定是否一种试剂是选择性的COX-2抑制剂或COX-2抑制剂的前体，所以是本发明的一部分。

“血管紧张肽系统抑制剂”是干扰血管紧张肽II的合成和代谢功能的试剂。这些试剂包括，但不限于，血管紧张肽-转换酶(ACE)抑制剂，血管紧张肽II拮抗物，血管紧张肽II受体拮抗物，激活血管紧张肽II的试剂，和防止血管紧张肽II最终从中派生的血管紧张肽I的合成的试剂。肾素-血管紧张肽系统参与了血动力学和水和电平衡的调节。在血浆中降低血液体积，肾扩散压，或Na+的浓度的因子趋向于激活该系统，而提高这些参数的因子趋向于抑制它的功能。

血管紧张肽I和血管紧张肽II是通过酶的肾素-血管紧张肽途径合成的。当酶肾素作用于血管紧张肽原，血浆中的一种假球蛋白时，启动了该合成过程，产生了十肽菌素血管紧张肽I。将血管紧张肽I通过血管紧张肽转换酶(ACE)转换成血管紧张肽II(血管紧张肽-[1-8]十肽菌素)。后者是已经包含作为各种哺乳动物种类如人中的几种形式的高血压的成因剂的活性加压物质。

血管紧张肽(肾素-血管紧张肽)系统抑制剂是作用为干扰从血管紧张肽原或血管紧张肽I产生血管紧张肽II，或干扰血管紧张肽II的活性额化合物。这样的抑制剂是本领域普通技术人员已知的，包括作用为抑制参与血管紧张肽II，包括肾素和ACE的最终生产的酶的化合物。一旦生产，他们也包括干扰血管紧张肽II的活性的化合物。这样的化合物的实施例类别包括抗体(例如，肾素)，氨基酸和其类似物(包括与更大的分子结合的那些)，肽(包括血管紧张肽的肽类似物和血管紧张肽I)，前肾素的相关类似物等。在大多数有潜力的和有用的肾素-血管紧张肽系统抑制剂是肾素抑制剂，ACE抑制剂，和血管紧张肽II拮抗物。在本发明的优选的实施方案中，肾素血管紧张肽系统抑制剂是肾素抑制剂，ACE抑制剂，和血管紧张肽II拮抗物。

“血管紧张肽II拮抗物”是通过结合血管紧张肽II受体和干扰它的活性干扰血管紧张肽II的活性的化合物。血管紧张肽II拮抗物是已知的，包括肽化合物和非肽化合物。大多数血管紧张肽II拮抗物是轻微修饰的同类，其中的拮抗剂活性是通过在位置8用其他的氨基酸取代苯丙氨酸来减弱的；稳定性可以通过放慢体内的间并的其他取代来增强。血管紧张肽II拮抗物的例子包括：肽化合物(例如，saralasin，[(San1)(Val5)(Ala8)]血管紧张肽-(1-8)十肽菌素和相关的类似物)；N取代咪唑-2-one(美国专利号5,087,634)；咪唑乙酸衍生物，包括2-N-丁基-4-氯-1-(2-邻二氯苯)咪唑-5-乙酸(参见Long et al.，J.Pharmacol.Exp.Ther.247(1)，1-7(1988))；4，5，6，7-四羟基-1H-咪唑[4，5-c]吡啶-6-羧酸和类似衍生物(美国专利号，4,816,463)；N2-四唑β-葡糖苷类似物(美国专利号5,085,992)；取代的吡咯，吡唑和tryazoles(美国专利号5,081,127)；酚和杂环衍生物如1，3-咪唑(美国专利号，5,073,566)；咪唑融合的7-元环杂环(美国专利号5,064,825)；肽(例如，美国专利号4,772,684)；对血管紧张肽II的抗体(例如，美国专利号，4,302,386)和芳烷基咪唑化合物如双酚基-甲基取代咪唑(例如，EP号253,310,1988年1月20日)；ES8891(N-吗啉乙基-(1-萘基)-L-丙氨酰-(4-噻唑基)-L-丙氨酰(35，45)-4-氨基-3-羟基-5-环己戊基-N-己基酰胺，Sankyo公司，东京，日本)；SKF108566(E-α-2-[2-丁基-1-(羧基苯基)甲基]1H-咪唑-5-基[亚甲基]-2-硫代酚丙酸，Smith Kline Beecham药学，PA)；Losartan(DUP 753/MK954，杜邦迈克药学公司)；Remikirin(RO42-5 892，F.Hoffman LaRocheAG)；A2拮抗剂(Marion Merrill Dow)和一些非肽杂环(G.D.Searle公司)。

“血管紧张肽转换酶(ACE)”是催化血管紧张肽转换成血管紧张肽II的酶。ACE抑制剂包括氨基酸和其衍生物，肽，包括二和三肽，和ACE的抗体，通过抑制ACE的活性干预肾素-血管紧张肽系统，从而减少或去除了加压物质血管紧张肽II的形成。ACE抑制剂已经在医学上用于治疗高血压，先天性心脏衰竭，心肌梗死和肾疾病。已知可用作ACE抑制剂的化合物的类别包括酰巯基和巯基阿尔卡诺脯氨酸如甲巯丙脯酸(美国专利号4,105,776)和佐诺普利(zofennopril，美国专利号，4,316,906)，羧基烷基二肽如伊那普利(enalapril，美国专利号4,374,829)，赖诺普利(lisinopril，美国专利号4,374,829)，喹那普利(quinapril，美国专利号4,344,949)，雷米普利(ramipril，美国专利号4,587,258)，和哌道普利(perindopril，美国专利号4,508,729)，羧烷基二肽模拟物如西拉普利(cilazapril，美国专利号4,512,924)和苯并普利(benazapril，美国专利号4,410,520)，磷酸烷氧基脯氨酸如福森普利(fosinopril，美国专利号4,337,201)和群多普利(trandolopril)。

“肾素抑制剂”是干预肾素活性的化合物。肾素抑制剂包括氨基酸和其衍生物，肽和其衍生物，和肾素的抗体。肾素抑制剂的实施例是美国专利的受试者，如下：肽的尿衍生物(美国专利号，5,116,835)；通过非肽键结合的氨基酸(美国专利号5,114,937)；二和三肽衍生物(美国专利号，5,106,835)；氨基酸和其衍生物(美国专利号5,104,869和5,095,119)；二氧磺酰胺和亚磺酰(美国专利号5,098,924)；修饰的肽(美国专利号5,095,006)；肽基-β-氨基乙酰氨基二氨基甲酸酯(美国专利号5,089,471)；吡唑咪唑啉酮(美国专利号5,075,451)；氟和氯抑胃酶氨酸或含statone的肽(美国专利号5,066,643)；肽基氨基diols(美国专利号5,063,208和4,845,079)；N-吗啉衍生物(美国专利号5,055,466)；抑胃酶素衍生物(美国专利号4,980,283)；N-杂环乙醇(美国专利号4,885,292)；肾素单克隆抗体(美国专利号4,780,401)；和各种其他的肽和其类似物(美国专利号5,071,837，5,064,965，5,063,207，5,036,054，5,036,053，5,034,512，和4,894,437)。

结合细胞黏附分子和抑制白血细胞附着于这样的分子的试剂包括多肽试剂。这样的多肽包括根据常规方法制备的多克隆和单克隆抗体。这样的抗体是本领域已知的，包括抗ICAM1抗体以及其他这样的抗体。很明显，正如本领域已知的，只有一小部分抗体分子，paratrope，参与了抗体与它的表位的结合(参见，Clark，W.R.(1986)现代免疫学实验功能，Wiley&Sons公司，纽约；Roitt，I.(1991)，基本免疫学，第7版，Blackwell科学出版社，牛津)。PFc’和Fc区域例如是补充级联的效应物，但不参与抗原结合。PFc’区域已经酶裂解的抗体，或已经没有pFc’区域产生，命名为F(ab’)₂片段，保留了完整抗体的抗原结合位点。同样，Fc区域已经酶裂解，或产生时已经没有Fc区域的抗体，命名为Fab片段，保留了完整抗体分子的一个抗原结合位点。进一步，Fab片段包括了共价结合的抗体轻链，和贡献给Fd的抗体重链的一部分。Fd片段是抗体特异性的主要决定簇(一个可以结合多达10个不同的轻链而不改变抗体特异性的Fd片段)，并且Fd片段在分离中保留了表位结合能力。

在抗体的抗原结合部分内，正如本领域已知的，有互补的决定区域(CDR)，可以直接与抗原的表位和框架区域(Frs)相互作用，保留了paratope的四级结构(参见，Clar，1986；Roitt，1991)。在两个重链Fd片段和轻链IgG免疫球蛋白中，由三个互补决定区域(CDR1到CDR3)分开的四个框架区域。CDR，特别是CDR3区域，更特别地重链CDR3是大大应答抗体特异性的。

现在本领域已经很好地确定，哺乳动物抗体的非CDR区域可以用非特异或杂特异的抗体的相似区域来取代，而保留了原始抗体的表位特异性。这在“人化”抗体的发展和用途中是最明显的证据，其中非人的CDR是共价地结合人FR和/或Fc/pFc区域产生功能性抗体的。所以，例如，PCT国际出版号WO 92/04381涉及人化小鼠RSV抗体的生产和用途，其中至少一部分小鼠FR区域已经用人起源的FR区域取代。这样的抗体，包括具有抗原结合能力的完整抗体的片段经常称为“嵌合”抗体。

所以，正如本领域普通技术人员能了解的，本发明也提供了F(ab’)₂，Fab，Fv和Fb片段；嵌合抗体，其中Fc和/或Fr和/或CDR1和/或CDR2和/或轻链CDR3区域已经用同源的人或非人序列取代；嵌合F(ab’)₂片段抗体，其中FR和/或CDR1和/或CDR2和/或CDR2和/或轻链CDR3区域已经用同源的人或非人序列取代；嵌合Fd片段抗体，其中FR和/或CDR1和/或CDR2区域已经用同源的人或非人序列取代。本发明也包括这样称谓的单链抗体。

所以，本发明包括特异地结合细胞黏附分子的许多大小和类型的多肽。这些多肽也可以是从抗体技术以外的来源派生的。例如，这样的多肽结合剂可以提供间并的肽文库来提供，可以容易地在溶液中制备成固定形式或噬菌体展示文库。结合文库也可以合成肽，含有一个或多个氨基酸。文库进一步可以合成peptoid和非肽合成成分。

噬菌体展示文库在鉴定用于本发明的结合肽时可能特别有效。简要地说，利用传统的方法，制备了噬菌体文库(利用例如，m13，fd，或λ噬菌体)，展示了4到约80个氨基酸残基的插入。这些插入片段可以代表例如完全间并或非线性排列。然后，可以选择结合细胞黏附分子的含噬菌体的插入片段。这一过程可以结合细胞黏附分子的噬菌体的几个再选择循环来重复。重复循环导致富积含有噬菌体的特别序列。可以进行DNA序列分析鉴定表达的多肽的序列。可以确定结合细胞黏附分子的序列的最小的线性部分。利用含有插入片段的非线性排列可以重复该过程，插入片段中含有所有最小线性部分中的一部分和它上游或下游的一个或多个其他的间并残基。也可以利用酵母二杂合体筛选方法鉴定结合细胞黏附分子的多肽。所以，细胞黏附分子或其片段可以用于筛选肽文库，包括噬菌体展示文库，鉴定和选择细胞黏附分子的肽结合伙伴。

在实施本发明的方法中，需要得到个体的sCD40L水平。可溶的sCD40L是本领域的普通技术人员已知的。通过任何技术已认识的方法可以得到个体的sCD40L的水平。通常，通过在体液，例如，血液，淋巴，唾液，尿等等中测量标记物的水平可以确定水平。该水平可以通过ELISA或免疫测试或确定标记物的存在的其他传统技术来确定。传统的方法包括将患者的体液的样品送到检测的商业实验室。

本发明也包括将个体的sCD40L的水平与预定的值比较。预定的值可以采取各种形式。可以是单一的截止值，如平均值。可以根据比较组来确定，如在一个确定的组中的危险是另一个确定的组的两倍。可以是一个范围，例如测试的群体同等地分成组，如低危险组，中等危险组，和高危险组，或四等分，最低的四分之一是危险最低的个体，最高的四分之一是危险最高的个体。

预定值可以依赖于选择的特殊的群体。例如，没有可检测疾病和过去没有心血管紊乱历史的表面健康的非吸烟群体将有与吸烟群体或过去有心血管紊乱历史的群体不同的‘正常’范围的sCD40L。因此，选择的预定值可以考虑个体所落在的类别范围。通过本领域普通技术溶液，可以用常规实验选择适当的范围和类别。

优选的体液是血液。对于sCD40L，对于表面健康的非吸烟者的群体的一个重要的截止值是2.9ng/mL或更低。SCD40L的另一个重要的截止值是3.0，3.1，3.2，3.3，3.4，3.5，36.，3.7，.3.8，3.9，4.0，4.1，4.2，4.3，4.4，4.5，4.6，4.7，4.8，4.9，5.0，5.1，5.2，5.3，5.4，5.5，5.6，5.7，5.8，5.9，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，8.5，9.0，9.5，10.0，10.5或11.0ng/mL。在鉴定危险时，可以确定许多预定的值。

现在已经有生产sCD40L的测试的试剂的商业来源。这些包括，但不限于BenderMedSystems(维也纳，奥地利)，和阿伯特医药(阿伯特园，伊利诺斯州)。

在优选的实施方案中，本发明提供了特异于和对根据本发明选择的预定值具有适当的敏感性的的新试剂盒或测试方法。所以，优选的试剂盒将是与目前市场上可得的那些不同的，其中包括截止值不同，对特别的截止值有不同的敏感性，以及根据测试的结果鉴定危险的说明书或其他印刷材料。

如上所述，本发明提供了评估个体将取益于用降低未来发展成心血管紊乱危险的试剂的治疗的可能性的方法。这一方法对患者的治疗和对新治疗的临床发展具有重要的意义。医生根据对患者的期望的净益处选择治疗患者的治疗方案。净益处是从危险对益处的比例中来的。本发明允许选择最有可能通过干扰受益的个体，从而辅助医生选择治疗方案。这可能包括利用更大危险方式的药物，其中期望的益处的可能性增加。同样，临床研究者需要为临床实验选择一个有高度可能性得到净益处的群体。本发明可以帮助临床研究者选择这样的个体。可以期望临床研究者现在利用本发明确定临床实验的进入规则。

本发明的另一个惊人的方面是发现了，在发展成心血管紊乱的危险升高的个体中存在血管的斑内脂积累时，sCD40L具有预测性价值。如本文所用，“有发展成心血管紊乱危险”的个体是根据传统的医学实践可以确定的一个类别的受试者(参见例如，Harrison的实验医学原理，第15版，McGraw-Hill公司，纽约)。通常，有发展成心血管紊乱危险的个体具有与心血管疾病相关的一个或多个危险因素。这样的危险因素包括心血管紊乱家族历史，高血压，血胆固醇过高，糖尿病，吸烟，动脉粥样硬化等等。另外，心室纤维化，或最近有中风和/或心肌梗死是重要的危险因素。过去，在有发展成心血管紊乱危险的个体中血管斑内的脂积累的测定只能利用昂贵的，一些情况中是有限的技术(例如，MRI)来完成。

本领域已知，引起冠状凝血的主要因素是动脉粥样硬化斑的裂解。正如本文另外解释的，在发展成心血管紊乱的个体中测定斑内脂积累是测定斑额易损性(即，有裂解危险的斑)的重要步骤，因此评估了未来出现凝血事故的危险。完整的和裂解的斑的比较研究已经用于确定易损的斑的特征。这些特征是脂核心占据了50％的全部斑体积，薄的斑帽，很大的绝对数目和密度的巨嗜细胞，光滑肌含量的斑的降低。所以，在确定有发展成本发明的方法中所述的心血管紊乱危险的个体中有斑内脂的积累，本领域一个技术人员可以评估是否斑是易损的，并且可以设计适当的治疗/干扰方案防止个体中随后的凝血事件的出现。

本发明也包括用治疗方案来治疗受试者防止心血管紊乱的方法。选择包括抗炎症试剂，抗凝血试剂，抗血小板试剂，纤维蛋白溶解试剂，降脂试剂，直接的凝血抑制剂，糖蛋白IIb/IIIa受体抑制剂，或结合细胞黏附分子和抑制白血细胞附着于这样的分子和/或其任意的结合的能力的试剂的组的试剂是对具有上面的正常水平的系统炎症的标记物的受试者给药的。试剂的给药的量是能优选地降低受试者未来发展成心血管紊乱的危险的量。在一些实施方案中，试剂是非阿斯匹林抗炎症试剂。试剂如本文中其余部分所述。

有效的量是足以提供医学上需要的结果如危险的降低的试剂的剂量。有效的量将随着待处理的条件，待治疗的受试者的年龄和物理症状，症状的严重性，治疗的持续时间，目前的治疗的特性(如果有)，给药的特异途径等在健康的实践者的知识和实验内的因素而改变。例如，有效量可以依赖于个体具有正常的sCD40L的水平升高的程度。应该理解，本发明利用的试剂打算降低心血管紊乱的危险，即他们可以用于预防。所以，有效量是可以降低慢的，或许一起防止心血管紊乱的发展的危险的量。

通常，活性化合物的剂量将是来自约0.01mg/kg每天到1000mg/kg每天。可以期望，剂量范围50-500mg/kg将是适当的，优选地是口服，并且是每天一次或几次给药。降低剂量将来自其他形式的给药，如静脉内给药。在该事件中，受试者中的一次应答在最初应用的剂量时是不足的，更高的剂量(或不同的，更定位的递送途径的有效的更高的剂量)可以用于患者耐受力允许的程度。应该关注每天几次剂量，得到适当的化合物的系统水平。

当给药时，将本发明的药学制剂以药物可接受的量和以药物可接受的组合物施加。这样的制剂可以常规含有盐，缓冲试剂，防腐剂，兼容载体和可选择的其他治疗试剂。当在医药中使用时，该盐应该是药物可接受的，但非药物可接受的盐传统上可以用于制备药物可接受的盐，并且不排除在本发明的范围内。这样的药学可接受盐包括，但不限于那些从下面的酸；盐酸，溴酸，硫酸，硝酸，磷酸，马来酸，乙酸，唾液酸，柠檬酸，富马酸，丙二酸，琥珀酸等。同样，药物可接受盐可以制备成碱性金属或碱土盐，如钠，钾或钙盐。

或者，抗炎症试剂可以结合药物可接受载体。如本文所用，“药物可接受载体”指一个或多个兼容的固体或液体填充剂，稀释剂或适于对人给药的包囊物质。术语“载体”指天然的或合成的有机或无机成分，它们与活性成分结合简化了应用。药物组合物的成分也能与本发明的分子共混合，和相互混合，混合的方式是使没有基本上损害需要的药学效率的相互作用。

药物组合物可以含有适当的缓冲试剂，包括盐中的乙酸，盐中的柠檬酸，盐中的硼酸和盐中的磷酸。

药物组合物或者也可以含有适当的防腐剂，如苯扎氯胺，氯代丁醇；paraben和硫柳汞钠。

适于肠胃外给药的组合物通常包括无菌的抗炎症试剂的水溶液制剂，优选地是与受体的血液等渗的。水溶液制剂可以利用适当的分散或加湿剂和悬浮试剂的已知方法来配制。无菌可注射制剂也可以是非毒性的肠胃外可接受的稀释液或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如作为1，3丁烷的溶液。在可以应用的可接受的载体和溶剂中的是水，Ringer溶液，和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的，固定的油传统上可以用作溶剂或悬浮介质。为了这一目的，可以利用任意的带固定的油包括合成的单或二甘油。另外，可以在可注射的制剂中使用脂肪酸如油酸。适于口服，皮下，静脉内，肌肉内等给药的载体配方可以在Remington药物科学，Mack Publishing公司，Easton，PA。

各种给药途径是可行的。选择的特殊方式当然将依赖于选择的特殊药物，待治疗的症状的严重性，和治疗效果要求的剂量。通常说，本发明的方法可以用任意的给药方式来实施，这些给药方式是药物可接受的，指产生有效的活性化合物水平，而不引起临床不可接受的不利的影响的任何方式。这样的给药方式包括口服，直肠，局部的，鼻的，腹内的，和肠胃外的途径。术语“肠胃外”包括皮下，静脉内，肌肉内或灌注。静脉内或肌肉内的途径不是特别适用于长期治疗和预防额。但是，它们在紧急情况中可以是优选的。由于对患者方便，口服给药是优选的预防治疗以及剂量方案。

药物组合物可以方便地以单位剂量的形式存在，可以通过本药物领域已知的任意方法来制备。所有的方法包括将抗炎症试剂结合载体的步骤，构成一个或多个辅助成分。通常，通过均一地和最初地将抗炎症试剂结合液体载体，一种细微分开的固体载体，或两者，并且然后如果需要将产物成形来制备组合物。

适于口服给药的组合物可以作为分散的单位如胶囊，片剂，锭剂存在，各含有预定量的抗炎症试剂。其他组合物包括水溶液液体或非水溶液液体如糖浆，赋形剂或乳液的悬浮液。

其他递送系统可以包括按时间释放，推测释放或持续释放的递送系统。这样的系统可以避免本发明的试剂的重复给药，提高对受试者和医生的方便。许多类型的释放递送系统是本领域普通技术人员可得和已知的。它们包括多聚物碱基系统，如聚(交酯-glycolide)，共聚草酸，聚carprolactone，聚酯酰胺，聚原酸酯，聚羟丁酸和聚酸酐。含有药物的前面所述多聚物的微胶囊如美国专利5,075,109中所述。递送系统也包括非多聚物系统：包括甾醇如胆固醇，胆固醇酯，和脂肪酸或中性脂肪酸如单，二，和三甘油；水凝胶释放系统：sylastic系统；基于肽的系统；蜡包衣；利用传统的结合物和赋形剂的压缩的片剂；部分融合的植入体；等等。特定的例子包括，但不限于：(a)腐蚀系统，其中本发明的试剂包含的形式在基质中，如美国专利号4,452,775，4,675,189，和5,736,152中所述，和(b)扩散系统，其中活性成分以一个受控制的速度从多聚物如中渗透，如美国专利号3,854,480，5,133,974和5,407,686中所述。另外，基于泵的硬件递送系统也可以利用，其中的一些适于植入。

长期维持释放的植入体的使用特别适于慢性疾病的治疗。长期释放如本文所用，指构建植入体，和排列成活性成分的递送治疗水平，至少30天，优选地60天。长期持续释放的植入体是本领域技术人员已知的，包括如上所述的一些释放系统。

参考下面的实施例，本发明将能更完全地理解。但是，这一实施例仅仅打算用于解释本发明的实施方案，并且不构成对本发明的范围的限制。

实施例

实施例1：高血浆浓度的sCD40L是与表面健康

       的妇女中心血管危险增高有关

我们在妇女健康研究(WHS)的参与者中进行了一个有前景的，逐选情况下的对照分析，这是一个评估28,263名没有心血管疾病或癌症¹¹的美国妇女中维生素E和低剂量的阿斯匹林的效果的初级预防实验。在EDTA中收集血液样品，并且储藏在液氮中直到进行分析。在这一研究中，我们选择130个随后发展成非致命的心肌梗死或中风，或在开始的四年追踪期死于急性心血管事件的妇女作为“情况”受试者。由一个医生的委员会利用标准方法确定终点。对于每一种已证实的情况，选择一个“对照”参与者，她的年龄相仿(±2岁)，相似的吸烟状态(过去有，现在有，从没有)，并且还没有心血管疾病的报告。

基准的血浆sCD40L浓度的测定利用了ELISA(BenderMedSystems；Vienna，Austria)。简要地说，将稀释(1∶5)的血浆样品成三份加到用小鼠抗人CD40L抗体预包衣和混合(1∶2)了辣根-过氧化物酶标记的第二小鼠抗人CD40L抗体(2h)的96孔平板中。随后，洗涤平板，利用TMB底物，通过色度计确定抗体的结合。在650nm读出吸光值，通过比较重组人CD40L的系列稀释确定sCD40L的血浆浓度以盲式进行分析。对所有样品，三份之间的内部测试的变化小于15％。在疾病控制标准化中心的一个实验室测定脂水平。

计算该研究的参与者的基准临床特征的平均和比例，利用学生的Tenant检验或chi平方统计进行比较。然后，在一系列的逻辑回归分析中计算与基准的sCD40L的水平增高有关的发展成将来的心血管事件的相对危险，这些分析中的研究样品是根据sCD40L的对照分布的50，75，90，95，和99个百分位数切入点来分的。所有的p值是双尾的，所有的置信区间的计算水平是95％。

结果

表1显示了研究的参与者的基准临床特征。如预期的，在追踪期发展成心血管疾病的妇女与保持没有疾病的妇女相比，在进入研究时更似乎是肥胖，高血压，糖尿病，或有早期动脉粥样硬化的家族历史。在所有情况中，基准的LDL胆固醇和甘油三酯的水平较高，而HDL胆固醇水平较低(所有p≤0.01)。利用激素替代治疗在两个组之间没有明显的差异。

从整体上说，在所有情况中，基准的sCD40L的血浆水平超过对照中的(2.86±0.35和2.09±0.19ng/ml；p≤0.02)。这一差异差不多完全是有情况的受试者之间很多值特别高的结果。大部分有情况的和对照的受试者在进入研究时有相似水平的sCD40L(图1)。但是，11个情况个体中sCD40L的基准水平与对照组中的唯一的1个研究受试者比较，在控制分布中超过了99个百分位数切入点(p≤0.01)。

根据该研究对照的分布确定的特异切入点，在未来发展成心血管事件的相对危险随着sCD40L的浓度的提高而上升，并且sCD40L的水平在统计学上变得明显，超过了95和99个百分位数切入点(RR：3.29(p≤0.02)和11.83(p≤0.01))(表II)。

在sCD40L水平超过99个百分位数切入点的12个参与者与较低水平的248个参与者之间比较临床特征，进行另外的hoc后分析。在这两个研究组中，年龄，吸烟情况，体重指标，LDL，和HDL胆固醇水平和激素替代治疗是相似的。随着sCD40L的水平特别地提高，研究的参与者高血压和家族历史性的早期冠状动脉疾病的速度似乎更快，但这些差异中没有一个在统计学上是明显的。12个sCD40L基准水平明显升高的妇女中没有一个有糖尿病。另外，11个极端的sCD40L水平的情况个体和较低的sCD40L水平的其余情况个体之间的随机化时间到心血管事件的时间没有明显差异(15.9到19.5个月，p＝0.3)。分配阿斯匹林和安慰剂可以假定是不影响我们的观察的，因为显示最高的sCD40L浓度的12个受试者的组中，6个任意指定为阿斯匹林组，其余6个是安慰剂组。另外，测试sCD40L的血液是在随机化之前取的。

在这一部分的过去的报告中，在C反应蛋白质，IL-6，血清淀粉样A和ICAM-1的血浆水平与心血管疾病的危险的升高之间有报道的关系¹²。但是，我们观察到，在这些参数和sCD40L之间没有明显的关系。

讨论

在这一对表面健康的中年妇女的前景，逐选的有情况的对照研究中，基准(≥5.5ng/ml)的sCD40L的血浆浓度明显升高预示了将来的心血管事件的危险明显升高。前面的研究证明，有不稳定的咽痛的患者当与有稳定的咽痛的患者和对照比较时，sCD40L的血清水平明显升高¹⁰。在这一情况中，激活的血小板和/或T淋巴细胞可以第二次释放sCD40L。但是，本研究证明，在可能是急性血栓导致的事件之前，一些妇女中sCD40L浓度升高。

关于可溶形式的CD40L的释放机制知之甚少。在血浆中的sCD40L的潜在的源包括血小板和T淋巴细胞以及单核吞噬细胞和内皮细胞。^1-5与sCD40L血浆水平的增高相关的心血管疾病的家族历史的趋势表明，遗传因素可能影响我们观察到的现象。我们发现，在sCD40L和C反应蛋白质，IL-6和ICAM-1水平没有关系。因此，延伸的意义是，CD40/CD40L独立机制可能与有些妇女尽管sCD40L水平是低的，但仍发展成心血管综合症有很大关系。我们的发现表明，sCD40L的血浆浓度高反映了与其他炎症标记标志的那些不同的存在危险的方面。

实施例1中的掺入的参考文献

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附图的详细说明

图1.在保持没有(对照，n＝130)或已发展成心血管事件(有情况，n＝130)的中年健康妇女中的基本的sCD40L的血清浓度。以一式三份分析样品，表示出了平均值。成点的线表示了控制分布的99个百分位数的切入点。

                     表I.研究的参与者的基本特征

               对照(n＝130)  有情况(n＝130)    p-值

年龄               60.3           60.3       符合要求

吸烟状态(％)                                 符合要求

           现在    26.9           26.9

           过去    31.6           31.6

           没有    41.5           41.5

体重指标(kg/m²)   25.7           27.6          0.004

高血压(％)         34.9           56.9          0.001

CAD的家族历        10.8           22.7           0.01

史(％)^*

糖尿病(％)         3.1            10.8           0.02

现在HRT^**(％)     40.0           44.6            0.1

LDL(mg/dL)         118.4          128.5          0.02

HDL(mg/dL)         48.4           42.6           0.01

甘油三酯           136.5          161.0          0.01

(mg/dL)

sCD40L(ng/mL)      2.09           2.86           0.02

^*60岁以前；^**HRT，激素替代治疗

              表II.研究的参与者的基本特征

  切入点     sCD40L     对照      情况

                                           RR     95％Cl    P-值

(百分位数)  (ng/mL)    ％(N)     ％(N)

   50^th    ＞1.76    50.4(65)  50.8(66)  1.02   0.62-1.65  0.95

   75^th    ＞2.15    24.9(32)  30.8(40)  1.35   0.78-2.33  0.29

   90^th    ＞2.92    10.1(13)  17.7(23)  1.92   0.93-3.98  0.08

   95^th    ＞3.71    5.0(6)    13.9(18)  3.29   1.26-6.59  0.02

   99^th    ＞5.54    0.8(1)    8.5(11)   11.83  1.50-93.0  0.01

        表III.SCD40L浓度在控制分布的99个百分位数以上

        (≥5.54ng/mLsCD40L)的研究的参与者的临床特征

                        sCD40L，       sCD40L，

                                                      P-值

                      ＞99(N＝12)    ≤99(N＝248)

  年龄                    63.1           60.2         0.3

吸烟状态(％)                                          0.7

            现在          25.0           27.1

            过去          33.3           47.7

            没有          41.7           31.2

体重指标(kg/m²)          27.3           26.7         0.7

高血压(％)                58.3           45.1         0.4

CAD的家族历史(％)^*       30.0           16.0         0.2

糖尿病(％)                0              7.3          0.9

目前HRT^**(％)            50.0           41.7         0.8

LDL(mg/dL)                126.9          127.7        0.9

HDL(mg/dL)                49.8           48.4         0.7

甘油三酯(mg/dL)           165.5          174.3        0.8

^*在60岁以前；^**HRT，激素替代治疗

       实施例2：在人血管细胞中HMG-CoA还原酶

           抑制剂限制CD40和CD40L的表达

这一研究检验了HMG-CoA还原酶抑制剂(菌株)可以减少体外这些细胞上受体/配体二分体以及体内sCD40L血浆水平的表达，和氧化修饰的LDL诱导了与动脉粥样硬化有关的CD40/CD40L在细胞上的表达，称为人血管EC和SMC，以及MΦ的假说。

材料和方法

材料

从生物医药技术公司(Stoughton，MA)得到天然的和氧化的(5uM CuSO4，37℃，24h)LDL(TBARS：0.4和8.3nM MDA/mg蛋白质)。从Endogen得到人重组IL-1β，TNFα，和IFNγ(Woburn，MA)。

细胞分离和培养

从隐静脉分离人血管EC和SMC，如上所述培养。^4，26通过密度梯度离心，利用淋巴细胞分离培养基，从白细胞浓缩物分离单核吞噬细胞(MΦ)(Organon-Teknika，Durham，NC)，并且在含有2％的人血清(Sigma；St.Louis，MO)的RPMI 1640(BioWhittaker，Walkersville，MD)中培养(10天)。²⁶在没有血清的培养基中进行实验之前和过程中，将所有的细胞类型培养24小时。通过锥虫蓝(Sigma，St.Louis，MO)排除计数以及寡核体形成实验(细胞死亡检测ELISA，Boehringer Mannheim，德国)确定培养物的成活力。

逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)

通过分光光谱评估从RNAzol培养的EC，SMC，或MΦ(Tel-实验；Friendswood，TX)分离的总RNA的纯度和产量(2100生物分析仪，Agilent技术公司，Wilmington，DE)并且利用SuperscriptII逆转录酶(生命技术公司，Carlsbad，CA)逆转录(2ug总RNA；50分钟，42℃)。在热开始后，利用前面所述的CD40或CD40L的引物，将PCR在95℃(120秒)，62℃(120秒)和72℃(180秒，每个循环延长2秒)进行35个循环。⁴20，25，30，35和40个循环的半定量PCR研究证明，在扩增的指数范围内利用的条件产生了PCR产物，并且对信号：背景的比例进行了最佳化。在含有溴化乙锭的1.3％的琼脂糖凝胶上分析PCR产物，并通过UV透射观察。通过GAPDH的RT-PCR证明加载的模板量相等。没有逆转录酶或利用H₂O作为模板的模拟RT反应证明了得到的信号的特异性。

Western印迹

通过SDS-PAGE分离培养溶解物(50ug总蛋白质/道)和上清液，利用半干的印迹仪器(3mA/cm²，30分钟；Bio-Rad，Hercules，CA)印迹到聚乙烯利啶二氟膜(Bio-Rad，Hercules，CA)。封闭印迹，加入5％脱脂肪干牛奶/PBS/0.1％吐温20中的初级(小鼠-抗-人CD40或CD40L；两者都是1∶1,000；PharMingen，圣地亚哥，CA)抗体。1小时后，洗涤印迹3次(PBS/0.1％吐温20)，加入二级的，结合过氧化物酶的，山羊抗小鼠抗体(Jackson免疫研究，WestGrove，PA)(1小时)。最后，洗涤印迹，利用Western印迹化学发光系统观察免疫反应蛋白质(NEN^TM，波士顿，MA)。利用来自Santa Cruz(Santa Cruz，CA)的抗-CD40/-CD40L抗体证明数据。

流动细胞计

用冰冷的PBS洗涤人血管EC，SMC，或MΦ，通过胰蛋白酶化收获，并且固定(PBS/4％低聚甲醛，15分钟)。随后，用PBS/2％BSA洗涤细胞一次，然后与单独的缓冲液，或结合FITC的对照IgG，小鼠-抗-人CD40，或小鼠抗人CD40L抗体(1ug/ml；PharMingen，圣地亚哥，CA)一起温育(1小时，4℃)。最后，用PBS/2％BSA洗涤细胞，利用CELLQUEST^软件(BecktonDickinson；San Jose，CA)在Beckton Dickinson FACSCAN^流动细胞计中分析。每种条件下至少分析20,000个存活的细胞。

患者研究

从用于冠状动脉搏描记法的27个患者将全部(10mL)的血液收集在EDTA中，这些患者至少在一个冠状动脉中有一个30％的狭窄。将该组分成在导管插入术时用任意的抑制素处理或不处理的患者。在基线时(0个月)和最后的追踪访问(6个月)取血液，将血浆储存在-70℃。以快速的状态研究所有的受试者。从所有的受试者得到签字的同意书，经Brigham的人健康研究委员会和妇女医院批准该研究。通过ELISA(Sigma，St.Louis，MO；Endogen，Woburn，MA；BenderMedSystems，Vienna，Austria)检测血浆液体以及IL-1β，IL-6，TNFα，IFNγ，sVCAM，C反应蛋白质(CRP)，和sCD40L。这两组在年龄，性别，糖尿病mellitus，吸烟，甘油三酯，或HDL(表I)中没有明显区别。抑制素处理的组的总胆固醇和LDL，如期望的明显较低。

来自体内的纤维素凝血块形成

用非包衣的毛细管通过眶后取血从小鼠收集血液到0.1个体积的0.13M柠檬酸三钠中。通过离心(500xg，5分钟，20℃)制备富血小板的血浆(PRP)，利用如上所述的微滴平板凝血溶解实验的修改方法检测纤维凝血块的形成。血块是用2.94uM的纤维原，0.24uM的纤溶酶原，36pM t-RA，3.8nM的凝血酶，和5.3mMCaCl₂(都是最后浓度)制备的。PRP(最后浓度10％(v/v))掺入到凝血块中。在405nM检测凝血块的形成，时间长达15分钟。

统计学分析

数据表示为平均±SD，利用学生t-test比较各组。p≤0.05的值被认为是明显。

结果

HMG-CoA还原酶抑制剂减少了人血管内皮和光滑肌细胞以及体 外巨嗜细胞上CD40和CD40L的表达

与HMG-CoA还原酶抑制剂接触可以依赖浓度地少人血管EC，SMC，和MΦ中CD40和CD40L的表达。浓度≥2nM的cerivastatin减少了EC中受体的构成性的以及IL-1β/TNFα/IFNγ-诱导的表达。在10-50nM的cerivastatin达到最大的抑制。甲羟戊酸逆转了抑制素减少CD40和CD40L的表达。利用oxLDL作为刺激物或SMC或MΦ作为细胞类型的平行研究产生了相似的结果。为了决定是否CD40/CD40L的表达的调节扩展到其他菌株，平行实验中利用了人vastatin或猿vastatin。这些HMG-CoA还原酶抑制剂同样降低CD40/CD40L的表达，但要求浓度更高(100nM)。用小鼠抗人GAPDH抗体再发展Western印迹提供了穿过凝血块的相似的带强度，证明在道之间有同等的加载量，同样表明抑制素处理不影响Western印迹分析。记住，抑制素影响的细胞数或分析浓度(达到250nM)的存活力都如锥虫蓝排除细胞计数以及单/寡核体形成所确定的。

HMG-CoA还原酶抑制剂另外也减少了用炎症前细胞因子(IL-1β/TNFα/IFNγ)或oxLDL刺激的人血管EC和MΦ中CD40和CD40L mRNA的表达。人vastatin或猿vastatin产生了相似的结果。甲羟戊酸逆转了CD40和CD40L转录物的表达的减少。分析GAPDH转录物的平行研究证明，对每个反应应用等量的反转录mRNA，另外证明了用抑制素处理不影响RT-PCR。

根据整个细胞溶解物的发现，cerivastatin依赖浓度地减少CD40和CD40L在人血管EC以及MΦ上的细胞表面的表达。值得注意的是，CD40和CD40L表面表达中最小和最大的降低要求的cerivastatin的浓度和Western印迹以及RT-PCR研究中整个细胞溶解物观察到的相似。所有这三种抑制素作用相似，但要求的浓度不同，以便达到同等地降低CD40/CD40L的表达(cerivastatin＞simvastatin＝atorvastatin)。

因为CD40L也可以同样以一个生物活性可溶形式sCD40L释放，我们应该检验一下是否用HMG-CoA还原酶抑制剂处理EC，SMC和MΦ会影响sCD40L的分泌。确实，cerivastatin处理明显降低了培养物中sCD40L的浓度。

结合RT-PCR，Western印迹和FACS研究表明，oxLDL诱导了抑制素通过调节基因活性而不是细胞内的易位减少CD40或CD40L的细胞表面的表达和/或释放。

HMG-CoA还原酶抑制剂降低了人中sCD40L血浆水平

为了评估这些体外发现的潜在的临床相关性，我们进行了飞行研究，确定是否用HMG-CoA还原酶抑制剂治疗患者降低sCD40L的血浆水平。抑制素处理动脉硬化的受试者的血浆与未处理的患者相比明显降低了sCD40L的水平(8.3±3.1ng/ml(n＝11)vs 13.1±2.5ng/ml(n＝16)；p＜0.05)。如果基线时的患者的处理状态和6个月的追踪期不变，那么个体的sCD40L的水平没有明显改变。但是，6个月的追踪期的sCD40L血浆水平在改变成抑制素处理(13.1±5.74ng/ml和5.21±2.36ng/ml(n＝4)；p＜0.05)的患者中明显降低。用抑制素处理没有改变IL-1β，IL-6，TNFα，IFNγ和sVCAM-1的血浆水平。C反应蛋白质(CRP)的血浆浓度在抑制素处理的组中是低的，虽然差异没有达到统计学上明显的程度。

氧化的LDL诱导了在人血管细胞中CD40和CD40L的表达

氧化修饰的LDL(oxLDL)依赖浓度地增强人血管EC和MΦ中微弱的CD40和CD40L蛋白质的构成性表达。在每种细胞类型上基本的CD40/CD40L的表达的增强要求1-3ug的oxLDL/ml。用10-30ug ox LDL/ml得到了CD40(5.1±1.1倍以上的非刺激对照；n＝4)和CD40L(4.2±2.1倍；n＝3)的最大表达。天然的LDL也诱导受体(2.8±1.1倍；n＝2)和配体(2.2±0.8倍；n＝2)的表达，尽管程度较低。另外，oxLDL依赖浓度地增强人血管EC或MΦ中CD40和CD40L mRNA的表达。分析GAPDH转录物的表达的平行研究证明了在每个反应中应用了等量的逆转录mRNA，另外表明了oxLDL刺激不影响RT-PCR。

CD40L的效率延长了小鼠血液来自体内的凝聚时间

根据如上所述的表明凝血中的CD40L和抑制素介导的血浆sCD40L水平的降低的最新数据，我们进一步检验了CD40L的表达的降低影响血液凝固的假说。确实，当与野生型小鼠制剂比较，在纤维素凝血块形成实验中，来自CD40L缺陷的小鼠的富血小板血浆显示凝固延迟，支持了血液凝固中CD40L有作用。对CD40L在血液可凝固性的作用上的这些观察提供了CD40通过HMG-CoA还原酶抑制剂发信号减少可能降低动脉粥样硬化可能降低凝血综合症。

讨论

具有平均或低于平均LDL水平的患者的临床优势和在一系列前面的临床实验中心血管疾病的危险的降低与LDL的降低的程度无关非常强调了推断的抑制素的“多效”效果的相关性。^{21- 24，28}这一药物类别(cerivastatin，atorvastatin或simvastatin)的三个成员明显降低了动脉粥样硬化中暗含的细胞类型，称为人血管EC，SMC，和MΦ中的CD40和CD40L蛋白质和转录物的构成性的以及细胞因子诱导的表达，加强了抑制素的降低脂的独立功能。但是，在这些细胞类型中鉴定oxLDL作为CD40和CD40L的诱导物进一步证明，抑制素可能至少部分地由他们的降低脂的特性影响CD40/CD40L的表达。记住，前面的研究在早期的人动脉粥样硬化病灶中将oxLDL与CD40和CD40L共定位，³¹这是根据我们的假说，oxLDL在动脉粥样硬化斑中CD40受体/配体二分体的表达的初始信号。

用抑制素除了患者的飞行观察已经减少了sCD40L的水平支持了体外观察中存在的临床相关性。几个细胞类型可能产生sCD40L。血小板在体外和体内形成凝血的基础上连接凝血受体释放sCD40L。^32，33但是，如我们自己和其他前面的研究观察到的，我们的细胞类型，包括EC，MΦ，和T淋巴细胞可能也产生sCD40L。^{11，12，17，18}

本观察，富CD40L缺陷血小板血浆比来自野生型小鼠的制剂凝血更慢，表明膜结合和/或可溶形式的CD40L调节凝血作用，心血管疾病危险的关键决定因素。CD40L可以通过作为α_IIbβ₃配体起作用激活血小板进一步支持了这一假说。³⁵

实施例2中引入的参考文献

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         实施例3：可溶的CD40配体水平表明在

                颈动脉粥样化中积累脂

引起冠状动脉凝血的主要因子是动脉粥样硬化斑的破坏。比较完整的和破坏的斑的研究已经用于确定易损的斑的特征，即在破坏危险中的那些。特征是占据了50％的全部斑体积的脂核心，一个薄的斑帽，一个大的绝对数目和密度的巨嗜细胞，和斑中的光滑肌含量的降低。这样的易损的斑组成了大多数个体中存在所有斑中的一小部分。但是，血管造影术的狭窄没有预测易损性，因为在核心大小或斑的大小与狭窄之间没有关系。大比例的破坏事件在临床上不引起注意地发生，因为凝血并没有完全占据腔以致引起局部缺血。但是，这些亚临床事件将引起斑的生长。斑破坏后发生了类似于成血管细胞术后发生的光滑肌增殖修复应答。在两种情况中，高度增长的修复导致了事件后的狭窄。在尸体解剖时冠状病灶的再构建显示，70％的高级狭窄(血管造影＞50％的直径)具有一个愈合的裂解的事件。这样的数据强调了不管是否发生急性的临床事件，在产生高级狭窄病灶中斑的裂解的作用。

简要地说，动脉粥样化的结构和动力生物学，而不是狭窄的严重性大大地决定了心血管的事件。大的脂库和薄的纤维帽鉴定了易损的斑，并且炎症机制在决定斑的稳定性中起了优势的作用。^1.2我们的不稳定的动脉粥样化的知识的大部分来自mortem后的检测，并且已知更少的是关于体内炎症机制和病灶结构的关系。

动物研究的证据证明，CD40配体在动脉硬化趋向的小鼠中抑制CD40发信号的重要性降低了动脉病灶的大小和脂含量，并且在光滑肌含量和纤维胶原中产生了一个相对的增加。⁹另外，如本文其余讨论的(参见实施例1)，基线上的可溶CD40配体的血浆水平升高有前景地预测了表面健康的妇女中的心血管事件。

在磁共振成象(MRI)中的最新的进展已经允许非侵入性地评估颈动脉斑的组成。^11-13特异地说，利用定做的相排列颈动脉线圈已经证明，在颈动脉MRI发现和进行颈动脉内膜炎手术的22个患者的组织学结构之间有高水平的一致性(89％一致性；Kappa＝0.83；95％置信区间0.67-1.0)。¹⁴另外，高分辨的颈动脉MRI准确地检测了斑内富脂的核心。^{12，13，15，16}

这一研究检验了，可溶CD40配体的血浆水平升高与在高分辨的颈动脉MRI上的富脂核心的建设性特征有关。

方法

我们邀请超声波扫描术下，狭窄大于或等于内部或普通的颈动脉的30％的男人和女人参加2001年1月到2002年1月的研究。用起搏器或可植入的心血管除纤颤器的任意患者以及在过去两个月中接受了外科手术条或冠状stent的患者都排除在外。需要系统的皮质类固醇治疗系统的炎症症状的患者也排除在外。该研究群体包括49个患者，他们有书面同意参加该研究。该研究是经Brigham的人研究委员会和妇女医院的同意的。

对每个参与者，由进行研究的医生记录包括心血管疾病历史，危险因素，医药的使用的详细的医学历史。通过非创伤静脉穿刺取血液样品，离心，并且将血浆在-80℃储存在EDTA中。

MRI方案：利用推荐的相排列颈动脉线圈(IGC，Inc.)，在1.5TSigma CV/I MRI扫描仪(GE医学系统，Milwaukee，WI)上患者进行颈动脉的高分辨MRI。得到了3D次的飞行成象，中度的质子密度称重成象，和脂肪抑制中度T2称重成象。对于3D时间飞行序列，参数如下：回声时间(TE)3.5ms，重复时间(TR)33-40ms，滚翻角度25度，带宽15.63kHz，观察空间12-14cm，片厚度2mm，插入到1mm，32片，获得的基质256×256，再构建基质512×512，一次激发。对于中度的质子密度称重序列，利用了21-22ms的TE，对于中度的T2称重获得物，利用了53-58的TE，有化学选择脂肪抑制。这些扫描的参数是：TR 2R-R区间，回声实验长度16，带宽度62.5kHz，观察空间14cm，片厚度3mm，获得性基质256×256，再构建基质512×512，一次激发。在每个患者中，片水平的中心是颈动脉双功能。两个对所有其他信息一无所知的委员会确定的放射学家根据质子密度称重成象，和脂肪抑制中等-T2称重快速旋转回声成象之间的信号损失，和3D时间的飞行成象上的等强度信号确定存在或没有斑内脂。¹⁵如参考直径分开的，在3D时间飞行轴成象上的参考和狭窄直径之间的差异计算狭窄的直径百分数，乘于100。下线独立地读成象。内部观察者的变化率＜10％。

如上所述，通过ELISA测量基线血浆可溶CD40配体浓度。10简要地说，在用小鼠抗人CD40配体抗体预包衣和用辣根-过氧化物酶-标记的二级小鼠抗人CD40配体抗体混合(1∶2)2小时的96孔平板中一式三份加入1∶5稀释的血浆样品。然后，洗涤平板，并且利用3，3’-5，5’-四甲基联苯胺底物的色度计确定结合的抗体。在650nm读出吸光值，通过与重组人CD40配体的系列稀释液比较确定可溶的CD40配体的血浆浓度。在所有样品中的三份中实验内的变化率小于10％，实验间的可变化率是7.4％。

我们将研究的参与者分成两组，颈动脉MRI上有斑内脂的证据的那些，和没有斑内脂证据的那些。计算可溶CD40配体的平均水平，利用Wilcoxon的等级总量实验，在两组之间比较。利用逻辑回归模型，计算与可溶的CD40配体水平升高有关的斑内脂的相对危险，根据没有斑内脂的证据的那些中的可溶CD40配体的平均水平分实验样品。

结果

在登记的49个患者中，有3个患者由于幽闭恐怖(claustrophobia)不能得到颈动脉MRI成象。我们利用了分析其余的46个患者的观察结果。这些患者的基线临床特征(表IV)发现，在整个研究的组中普遍有高血压，糖尿病和高血胆固醇的历史。46个患者中有13个(28.3％)过去有短暂的缺血发病(TIA)(n＝8)或中风(n＝6)的历史；一个患者同时有TIA和中风历史。其余33个患者(71.7％)是无症状。

14个患者有斑内脂的证据，32个没有。有斑内脂证据的患者比没有斑内脂证据的患者更似乎是有糖尿病(p＝0.02)。在有斑内脂的组中，有高血压历史(p＝0.16)，和现在的吸烟者(p＝0.13)的妇女(p＝0.13)的患者的比例有一个增加的趋势。在有和没有斑内脂证据的那些人之间颈动脉直径狭窄(58％±20和56％±24)的平均百分数没有区别。

有斑内脂的受试者具有的可溶CD40配体的基线水平比没有脂积累的那些更高(平均2.54ng/ml(四分位间范围(IQR)1.85-3.52)和平均1.58ng/ml(IQR1.21-2.39)；p＝0.02)。相反，可溶的CD40配体水平与狭窄直径百分数(r＝-0.19；p＝0.21)不相关。斑内脂与平均以上的可溶CD40配体水平相关的相对危险是6.0(95％的置信区间1.15-31.23；p＝0.03)。当用控制性别，糖尿病，高血压和现在吸烟，狭窄百分数和总胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇的比例的多变模型分析时，这一预测效果的数量级基本没有改变(相对危险5.12，95％置信区间0.78-33.73；p＝0.09)。

              表IV.研究群体的基线临床特征

              组的总数       非斑内脂组    斑内脂组      P-值(组1

              (n＝46)        1(n＝32)      2(n＝14)      比组2)

年龄          70.5±8.1      71.0±7.9     69.4±8.8     0.5

平均±SD

雄性性别      31/46          24/32(75％)   7/14(50％)    0.10

              (67.4％)

糖尿病历史    15/46          7/32          8/14          0.02

              (32.6％)       (21.9％)      (57.1％)

高血压历史    37/46          24/32         13/14         0.16

              (80.4％)       (75％)        (92.9％)

现在吸烟      5/46           2/32          3/14(21.4     0.13

              (10.9％)       (6.3％)       ％)

高胆固醇历    34/46          23/32 (71.9   11/14(78.6    0.6

史            (73.9％)       ％)           ％)

过去有TIA     13/46(28.3％)  8/32(25％)    5/14(35.7％)  0.46

或中风

抑制素使用    31/46          20/32         11/14(78.6    0.28

              (67.4％)       (62.5％)      ％)

狭窄直径百    57％±23       56％±24      58％±20      0.6

分数

可溶CD40      1.89           1.58          2.54          0.02

配体(ng/ml)

平均[内部四   [1.35-2.64]    [1.21-2.39]   [1.85-3.52]

分位范围]

TIA＝暂时缺血发病

讨论

如本文其余部分所述(实施例1)，可溶CD40配体的基线血浆水平在表面健康的妇女中有前景地预测了心血管事件。现在的数据提供了对该机制的新研究，通过该机制可溶的CD40配体的水平升高可以反映人中的将来的心血管疾病的危险。我们发现，在可溶的CD40配体的血浆水平升高和颈动脉斑之间的相关性，特征是大的危险与狭窄的严重性无关。这些数据与研究的证据一致，表明中断CD40发信号减少了动脉粥样硬化趋向的小鼠中的动脉病灶中的大小和脂含量。

前面的工作已经发现了利用相似的相排列颈动脉圈的高分辨颈动脉MRI可以准确地预测在颈动脉内膜炎手术后在组织学上发现脂库¹⁵；我们的MRI方案更多地依赖T2称重的方案，其他研究已经显示，可以准确地去除脂库。^12，13，16可溶的CD40配体的预测效果在调整了传统的心血管危险因素后没有改变，尽管在调整分析中置信区间确实增宽了，正如可以期望给出，CD40连接似乎是代表了脂库形成中的一般成因途径。

结论是，我们相信，该研究确定了CD40配体的血浆水平和斑内脂之间有一个关联，代表了斑易损性的一个潜在的重要标记。

实施例3中引入的参考文献

1.1996年《循环》第94期第2012-2020页(Davis MJ.Circulation 1996；94：2012-20)。

2.1995年《循环》第91期第2844-2850页(Libby P Circulation1995；91：2844-50)。

3.1995年《美国自然科学研究》第92期第4342-4346页(Karmann K，et al.Proc Natl Acad Sci USA 1995；92：4342-6)。

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7.1997年《循环》第96期第396-399页(Mach F，et al.Circulation 1997；96：396-9)。

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9.1999年《实验医学》第189期第843-853页(Schonbeck U，J Exp Med 1999；189：843-53)。

10.2001年《循环》第104期第2266-2268页(Schonbeck U，Circulation 2001；104：2266-8)。

11.2001年《循环研究》第89期第305-316页(Fayad ZA，Fuster V.Circ Res 2001；89：305-16)。

12.1999年《动脉凝血血管生物学》第19期第2756-2761页(Shinnar M，et al.Arterioscler Thromb Vasc Biol 1999；19：2756-61)。

13.2001年《放射学》第219期第403-410页(Serfaty JM，etal.Radiology 2001；219：403-10)

14.2000年《循环》第102期第959-964页(Hatsukami TS，et al.Circulation 2000；102：959-64)。

15.2001年《循环》第104期第2051-2056页(Yuan C，et al.Circulation 2001；104：2051-6)。

16.1995年《动脉凝血血管生物学》第15期第1533-1542页(Toussaint JF，et al.Arterioscler Thromb Vasc Biol 1995；15：1533-42)。

同等内容

利用不超过常规实验的范围的实验，本领域技术人员将认识到，或可以确定与本文所述的发明的具体实施方案的许多等同物。这样的等同物打算包括在下面的权利要求中。

所有本文公开的文献都通过在此引述而合并于本文。

Claims (76)

1.一种鉴定未来发展成心血管紊乱的个体的危险方式的方法，包括：

在个体中得到CD40L的水平，

比较sCD40L的水平和预定的值，和

根据sCD40L的水平与预定的水平的比较，鉴定未来发展成心血管紊乱的个体的危险轮廓。

2.权利要求1所述的方法，其中预定值是多个预定的sCD40L的水平范围，所述的比较步骤包括确定所述的个体的sCD40L水平落在哪个所述的预定的sCD40L的水平范围。

3.权利要求1所述的方法，其中个体是表面健康的，非吸烟个体。

4.权利要求1所述的方法，其中个体没有其他的心肌梗死或中风的危险升高。

5.权利要求1所述的方法，其中心肌紊乱是与动脉粥样硬化疾病相关的。

6.权利要求1所述的方法，其中心肌紊乱不是致命的心肌梗死。

7.权利要求1所述的方法，其中预定的值是约血液的2.9ng/mL或更高。

8.权利要求1所述的方法，其中预定的值是约血液的3.2ng/mL或更高。

9.权利要求1所述的方法，其中预定的值是约血液的5.5ng/mL或更高。

10.权利要求1所述的方法，其中预定的值是多个预定的sCD40L水平范围，一个所述的多数水平范围低于2.9ng/mL的血液，另一个所述的范围是约2.9ng/mL血液，其中所述的比较步骤包括确定所述的个体的sCD40L水平落在那个所述的预定的sCD40L水平范围。

11.权利要求1-10中任何一项所述的方法，其中心血管紊乱是中风。

12.一种鉴定未来发展成与动脉粥样硬化疾病相关的心血管紊乱的个体的危险轮廓的方法，包括：

在个体中得到sCD40L的水平，

比较sCD40L与第一个预定值，确定第一个危险值，

在个体中得到胆固醇或C反应蛋白质(CRP)的水平，

比较胆固醇或C反应蛋白质(CRP)的水平与第二个值确定第二个危险值，和

根据第一个危险值和第二个危险值的结合，鉴定发展成心血管紊乱的个体的危险方式，其中第一个危险值和第二个危险值的结合确定了第三个危险值与所述的第一个和第二个危险值不同。

13.权利要求12所述的方法，其中所述的个体是表面健康的，非吸烟个体。

14.权利要求12所述的方法，其中第一个预定的值是约血液的2.9ng/mL。

15.权利要求12所述的方法，其中第一个预定的值是约血液的3.2ng/mL。

16.权利要求12所述的方法，其中第一个预定值是约血液的5.5ng/mL。

17.权利要求12的方法，其中第一个预定值是多个预定sCD40L水平的范围，一个所述的多个水平范围低于血液的2.9ng/mL，另一个所述的多个水平范围是约2.9ng/mL的血液，其中所述的比较步骤包括确定所述的个体的sCD40L水平落在那个所述的多数预定的sCD40L水平范围。

18.权利要求12-17中任何一项所述的方法，其中心血管紊乱是中风。

19.权利要求12-17中任何一项所述的方法，其中心血管紊乱是非致命的心肌梗死。

20.权利要求12-17中任何一项所述的方法，其中第三个危险值是大于第一个和第二个的危险值。

21.一种评估个体将取益于用一种试剂处理降低与动脉粥样硬化疾病相关的心肌紊乱的危险的方法，所述的试剂选自包括抗炎症试剂，抗凝血试剂，抗血小板试剂，纤维蛋白溶解试剂，降脂试剂，直接的凝血抑制剂，和糖蛋白Iib/IIIa受体抑制剂，所述的方法包括：

得到个体的sCD40L的水平，和

比较sCD40L的水平与预定的值，其中sCD40L的水平在与预定值的比较中指示了是否个体将取益于所述的试剂的治疗，和

鉴定是否个体似乎是取益于根据所述的比较的所述的治疗。

22.权利要求21所述的方法，其中预定值是多个预定sCD40L水平范围，所述的比较步骤包括确定所述的个体的水平落在哪个所述的预定的sCD40L水平范围。

23.权利要求21所述的方法，其中所述的个体是明显健康的，非吸烟的个体。

24.权利要求21所述的方法，其中预定的值是血液的2.9ng/mL或更高。

25.权利要求21所述的方法，其中预定的值约是血液的3.2ng/mL或更高。

26.权利要求21所述的方法，其中预定的值约是血液的5.5ng/mL或更高。

27.权利要求21所述的方法，其中预定的值是多个预定的sCD40L水平范围，所述的多个水平范围中的一个低于血液的约2.9ng/mL，所述的多个水平范围中的另一个约是血液的2.9ng/mL，其中所述的比较步骤包括确定所述的个体的sCD40L水平落在哪个所述的多数预定的sCD40L水平范围。

28.权利要求21-27中任何一项的方法，其中心血管紊乱是中风。

29.权利要求21-27中任何一项的方法，其中心血管紊乱是心肌梗死。

30.一种治疗受试者以降低心血管紊乱的危险的方法，包括：

对已知具有正常水平的上面的受试者选择和给药一种降低心肌血管紊乱的危险的试剂，其量是有效地降低受试者将来发展成心肌紊乱的危险的量，其中该试剂是抗炎症试剂，抗凝血试剂，抗血小板试剂，纤维蛋白溶解试剂，降低脂的试剂，直接的凝血酶抑制剂，糖蛋白Iib/IIIa受体抑制剂，结合细胞黏连分子和抑制白血细胞附着于如下的分子，钙通道封闭剂，β-肾上腺素能受体封闭剂，环氧化酶-2-抑制剂，或血管紧张肽抑制剂。

31.权利要求30所述的方法，其中受试者没有其他的用试剂治疗的症状。

32.权利要求30所述的方法，其中受试者明显健康，受试者中不利的心血管事件的危险没有升高。

33.权利要求30所述的方法，其中受试者是非血脂过高的。

34.权利要求30所述的方法，其中试剂是非阿斯匹林的，抗炎症试剂。

35.权利要求30所述的方法，其中试剂是抗炎症试剂，抗炎症试剂选自包括阿氯酚酸(Alclofenac)，阿氯米松(Alclometasone Dipropionate)，Algestone Acetonide，α淀粉酶，Amcinafal，氨酚酸钠(Amfenac Sodium)，AmipriloseHydrochloride，Anakinra，Anirolac，Anitrazafen，Apazone，巴沙拉二钠(Balsalazide Disodium)，苄吲酸(Bendazac)，苯恶洛芬(Benoxaprofen)，盐酸苄卡明(BenzydamineHydrochloride)，菠萝蛋白酶(Bromelains)，溴四唑哌啶(Broperamole)，布地缩松(Budesonide)，卡布洛芬(Carprofen)，Cicloprofen，曾戊唑酮(Cintazone)，氯噻托酸(Cliprofen)，丙酸倍氯他索(Clobetaso Propionate)，丁氯倍氟松(Clobetasone Butyrate)，氯苯吡咯酸(Clopirac)，Cloticasone Propionate，醋酸三氟米松(CormethasoneAcetate)，去氧可的松(Cortodoxone)，去氟可的松(Deflazacort)，丙缩羟强龙(Desonide)，去羟米松(Desoximetasone)，二丙酸地塞米松(DexamethasoneDipropionate)，双氯酚酸钾(Diclofenac Potassium)，双氯酚酸钠(Diclofenac Sodium)，双醋二氟松(DiflorasoneDiacetate)，二氟米铜钠(Diflumidone Sodium)，双氟尼酸(Diflunisal)，醋丁二氟龙(Difluprednate)，双酞嗪酮(Diftalone)，二甲亚砜(Dimethyl Sulfoxide)，丙缩氢炎松(Drocinonide)，甲地松(Endrysone)，Enlimomab，塞庚苯胺钠(Enolicam Sodium)，嘧吡唑(Epirizole)，依托度酸(Etodolac)，Etofenamate，联苯乙酸(Felbinac)，苯四唑胺(Fenamole)，芬布芬(Fenbufen)，二氯苯氧苯乙酸(Fenclofenac)，氯环苯乙酸(Fenclorac)，苯吲柳酸(Fendosal)，苯吡恶二酮(Fenpipalone)，双苯噻酸(Fentiazac)，氟苯哌酮(Flazalone)，氟恶米松(Fluazacort)，氟芬那酸(Flufenamic Acid)，氟咪唑(Flumizole)，醋酸-9-去氟肤轻松(Flunisolide Acetate)，氟胺烟酸(Flunixin)，氟胺烟酸葡胺(Flunixin Meglumine)，氟考丁酯(FluocortinButyl)，氟甲孕松醋酸酯(Fluorometholone Acetate)，苯氟奎酮(Fluqazone)，氟比洛芬(Flurbiprofen)，炔氟联苯(Fluretofen)，丙酸氟地松(Fluticasone Propionate)，苯呋丙酸(Furaprofen)，氧芴丁酮酸(Furobufen)，氯氟舒松(Halcinonide)，Halobetasol Propionate，双醋溴氟龙(Halopredone Acetate)，异丁苯乙酸(Ibufenac)，布洛芬(Ibuprofen)，Ibuprofen Aluminum，皮考布洛芬(IbuprofenPiconol)，Ilonidap，吲哚美辛(Indomethacin)，吲哚美辛钠(Indomethacin Sodium)，吲哚布洛芬(Indoprofen)，双甲氧苯吲哚(Indoxole)，吲四唑(Intrazole)，醋异氟龙(Isoflupredone Acetate)，氧卓乙酸(Isoxepac)，异恶塞酰胺(Isoxicam)，铜基布洛芬(Ketoprofen)，盐酸氯苯甲咪唑(Lofemizole Hydrochloride)，Lornoxicam，LotepredoneEtabonate，甲氧胺苯酸钠(Meclofenameta Sodium)，甲氯灭酸(Meclofenamic Acid)，甲二氯松二丁酯(MeclorisoneDibutyrate)，甲灭酸(Mefenamic Acid)，Mesalamine，甲氯恶唑酮(Mesaclazone)，甲基氢化泼尼松(MethylprednisoloneSuleptanate)，氟烟吗酯(Morniflumate)，那布米酮(Nabumetone)，萘普生(Naproxen)，萘普生钠(NaproxenSodium)，甲基萘丙醇(Naproxol)，腈胺唑酮(Nimazone)，偶氮水杨酸钠(Olsalazine Sodium)，超氧化物歧化酶(Orgotein)，苯呋丙酸(Orpanoxin)，恶丙嗪(Oxaprozin)，羟基保泰松(Oxyphenbutazone)，盐酸胍苯叉芴(ParanylineHydrochloride)，戊聚糖多硫酸钠(Pentosan PolysulfateSodium)，Phenbutazone Sodium Glycerate，甲苯吡啶酮(Pirfenidone)，炎痛喜康(Piroxicam)，炎痛喜康肉桂酯(Piroxicam Cinnamate)，炎痛喜康乙醇胺(PiroxicamOlamine)，吡洛布洛芬(Pirprofen)，强地松龙-奋乃静(Prednazate)，Prefelone，丙哚乙酸(Prodolic Acid)，Proquazone，胺丙恶二唑(Proxazole)，胺丙恶二唑柠檬酸酯(Proxazole Citrate)，双甲丙酰龙(Rimexolone)，Romazarit，水杨酸胆碱硫酸镁(Salcolex)，Salnacedine，双水杨酸酯(Salsalate)，Sanguinarium Chloride，氯恶唑酮(Seclazone)，丝炎痛(Sermetacin)，噻氧噻嗪(Sudoxicam)，舒林酸(Sulindac)，噻吩甲酰布洛芬(Suprofen)，Talmetacin，氟烟酞酯(Talniflumate)，醋柳酞酯(Talosalate)，替布费龙(Tebufelone)，替尼达普(Tenidap)，替尼达普钠(TenidapSodium)，替诺西康(Tenoxicam)，氧喹苯胺(Tesicam)，苄叉异喹酮(Tesimide)，四氢甲吲胺(Tetrydamine)，噻庚乙酸(Tiopinac)，特戊酸巯氢可的松(Tixocortol Pivalate)，托耳米丁(Tolmetin)，甲苯酰吡酸钠(Tolmetin Sodium)，三氯氟松(Triclonide)，三氟氨酯(Triflumidate)，叠氮吲酸(Zidometacin)，糖皮质激素或苯酰吡酸钠。

36.权利要求31所述的方法，其中所述的试剂是非阿斯匹林，抗炎症试剂。

37.权利要求32所述的方法，其中该试剂是非阿斯匹林的，抗炎症试剂。

38.权利要求33所述的方法，其中该试剂是非阿斯匹林的，抗炎症试剂。

39.权利要求30所述的方法，其中该试剂是降脂试剂。

40.权利要求39所述的方法，其中降脂试剂是吉非贝齐(gemfibrozil)，消胆胺(colestyramine)，降胆宁(colestipol)，尼克酸(nicotinic acid)，丙丁芬(probucol lovastatin)，氟伐地汀(fluvastatin)，simvastatin，atorvastatin，帕伐地汀(pravastatin)或cerivastatin。

41.权利要求40所述的方法，其中降脂的试剂是帕伐地汀(pravastatin)。

42.权利要求31所述的方法，其中试剂是降脂的试剂。

43.权利要求42所述的方法，其中所述的降脂的试剂是吉非贝齐(gemfibrozil)，消胆胺(colestyramine)，降胆宁(colestipol)，尼克酸(nicotinic acid)，丙丁芬(probucol lovastatin)，氟伐地汀(fluvastatin)，simvastatin，atorvastatin，帕伐地汀(pravastatin)或cerivastatin。

44.权利要求43所述的方法，其中所述的降低脂的试剂是帕伐地汀(pravastatin)。

45.权利要求32所述的方法，其中所述的试剂是降低脂的试剂。

46.权利要求45所述的方法，其中所述的降低脂的试剂是吉非贝齐(gemfibrozil)，消胆胺(colestyramine)，降胆宁(colestipol)，尼克酸(nicotinic acid)，丙丁芬(probucollovastatin)，氟伐地汀(fluvastatin)，simvastatin，atorvastatin，帕伐地汀(pravastatin)或cerivastatin。

47.权利要求46所述的方法，其中降低脂的试剂是帕伐地汀(pravastatin)。

48.权利要求33所述的方法，其中所述的试剂是降低脂的试剂。

49.权利要求48所述的方法，其中所述的降低脂的试剂是吉非贝齐(gemfibrozil)，消胆胺(colestyramine)，降胆宁(colestipol)，尼克酸(nicotinic acid)，丙丁芬(probucollovastatin)，氟伐地汀(fluvastatin)，simvastatin，atorvastatin，帕伐地汀(pravastatin)或cerivastatin。

50.权利要求49所述的方法，其中降低脂的试剂是帕伐地汀(pravastatin)。

51.权利要求30所述的方法，其中该试剂是结合细胞黏附分子和抑制白血细胞附着于这样的分子的能力的试剂。

52.权利要求51所述的方法，其中受试者是表面健康的。

53.权利要求51所述的方法，其中受试者是非血脂过高的。

54.权利要求51所述的方法，其中受试者没有其他的需要该试剂的治疗的症状。

55.权利要求30所述的方法，其中所述的试剂是钙通道封闭剂。

56.权利要求55所述的方法，其中受试者是表面健康的。

57.权利要求55所述的方法，其中受试者是非血脂过高的。

58.权利要求55所述的方法，其中受试者没有其他的需要该试剂的治疗的症状。

59.权利要求30所述的方法，其中所述的试剂是β-肾上腺素能受体封闭剂。

60.权利要求59所述的方法，其中受试者是表面健康的，不利的心血管事件的危险没有升高。

61.权利要求59所述的方法，其中受试者是非血脂过高的。

62.权利要求59所述的方法，其中受试者没有其他的需要该试剂的治疗的症状。

63.权利要求30所述的方法，其中该试剂是环氧化酶-2抑制剂。

64.权利要求63所述的方法，其中受试者是表面健康的。

65.权利要求63所述的方法，其中受试者是非血脂过高的。

66.权利要求63所述的方法，其中受试者没有其他的需要该试剂的治疗的症状。

67.权利要求30所述的方法，其中该试剂是血管紧张肽系统抑制剂。

68.权利要求67所述的方法，其中受试者是表面健康的，不利的心血管事件的危险没有升高。

69.权利要求67所述的方法，其中受试者是非血脂过高的。

70.权利要求67所述的方法，其中受试者没有其他的需要该试剂治疗的症状。

71.一种在受试者中降低sCD40L的水平以便降低不利的心血管紊乱的危险的方法，包括：

对受试者sCD40L水平升高的受试者选择和给药降低sCD40L水平的试剂，所述的量能有效地降低受试者中sCD40L的水平。

72.权利要求71所述的方法，其中该试剂是降低脂的试剂。

73.权利要求71所述的方法，其中受试者是表面健康的。

74.权利要求71所述的方法，其中受试者没有其他的不利的心血管事件的危险升高。

75.权利要求71所述的方法，其中受试者中C反应蛋白质(CRP)水平升高。

76.权利要求71所述的方法，其中受试者没有其他的需要降低脂的试剂的治疗的适应症。

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