KR20040004513A - 트로폴론 유도체의 효소 이노시톨 모노포스파타제저해제로서의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 푸베룰산 또는 푸베룰론산의, 효소 이노시톨 모노포스파타제 EC 3.1.3.25의 저해제로서의 용도에 관한 것이며, 이는 조증 또는 울증 치료에 유용하다.

Description

트로폴론 유도체의 효소 이노시톨 모노포스파타제 저해제로서의 용도 {Use of Tropolone Derivatives as Inhibitors of the Enzyme Inositol Monophosphatase}

본 발명은 몇몇 트로폴론 유도체의 효소 이노시톨 모노포스파타제 (EC 3.1.3.25) (이 후, 머릿 글자를 따서 IMPase로서 나타낸다) 저해제로서의 용도에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 조증 및 울증 치료에서의 이들 화합물의 용도, 및 활성 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 제약 제제에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 또한, IMPase를 검출하기 위한 분석 방법에 사용될 수 있다.

보다 구체적으로, 상기 트로폴론 유도체는 화학식 1의 공지된 화합물이다.

상기 식에서, R은 카르복실기이고 R1은 수소이거나, 또는 R 및 R1이 인접 탄소 원자와 함께 하기 화학식의 헤테로사이클 고리를 형성한다:

상기 화학식에서 R이 카르복실기이고 R1이 수소인 경우, 화합물은 푸베룰산 (즉, 3,4,6-트리히드록시-5-옥소-1,3,6-시클로헵타트리엔-1-카르복실산)이고, 상기에 정의된 바와 같이 R 및 R1이 인접 탄소 원자와 함께 상기 화학식의 헤테로사이클 고리를 형성하는 경우, 화합물은 푸베룰론산 (즉, 3,4,6-트리히드록시-5-옥소-1,3,6-시클로헵타트리엔-1,7-디카르복실산 무수물)이다. 당업계에서 공지된 바와 같이 화학식 1의 화합물의 토오토머 형태들은 서로 균등하므로 본 화학식에 포함된다.

빌킨쇼 (Birkinshaw)등의 문헌 [Biochem Jour. 26, 441 (1932)]에 기재된 바와 같이 이들 화합물은 이미 30 년대 초에 분리되었지만, 그 구조는 콜베트 (Corbett) 등의 문헌 [Jour. Chem. Soc., 1950, 6]에 개시된 바와 같이 약 15 년 후에야 결정되었다. 또한, 몇 년 후에 상기 트로폴론 유도체의 화학 합성이 존스 (Johns) 등의 문헌 [Jour. Chem. Soc., 1954, 198] 및 노조에 (Nozoe) 등의 문헌 [Bull. Chem. Soc. Jap., 33, 1071 (1960)]에 기재되었다.

푸베룰산 및 푸베룰론산은 다른 트로폴론 유도체와 같이, 항균 활성을 갖는다고 공지되어 있는 반면, 몇몇 다른 트로폴론 유도체에 있어서는 항종양 활성 또는 항알레르기 활성을 갖고 있음이 예를 들어, 야마토 엠 (Yamato, M.). 등의 문헌 [Jour. Med. Chem. 30(10), 1897-1900 (1987)] 또는 바글리 제이. 에프. (Bagli J. F.)의 문헌[Jour. Med. Chem. 22(10), 1186 (1979)]에 각각 기재되어 있다.

항-조증 및 항울증 치료에 있어서 바람직하게는 탄산 리튬 형태로 사용되는 리튬의 사용은 진정 또는 "안정"을 통해서 지나친 조증 상태를 완화시키는 것보다는 조증을 감소시키고 조증 환자의 기분을 정상화시키는 것으로 알려져 있다. 또한, 병의 재발 및 악화에 대한 확실한 예방이 정신 의학에서 유일한 약인 것처럼 설명되어 왔다. 리튬은 조증 및 울증 모두, 또한 조증만을 포함하는 양극성 장애에 있어서 가장 확실한 효과를 나타낸다. 이들 장애는 양극성 Ⅰ 및 Ⅱ 장애로 나누어진다. 전자의 경우는 심한 조증성 에피소드인 반면, 후자의 경우는 단지 온건한 경조증성 에피소드이다.

그의 치료 특성에도 불구하고, 수많은 문제들이 리튬의 치료학적 유용 가치를 떨어뜨린다. 환자가 리튬의 항-조증 효과를 발휘하는 데에 걸리는 7 내지 10 일을 기다리기 어려운 경우, 항정신병 약물이 급성 양극성 장애의 제1 약물 치료법이다. 리튬 치료에 통상적인 부작용으로 인해, 고가의 프리리튬 (prelithium) 후처리가 요구된다. 실제로, 리튬은 일시적인 백혈구 증가증을 유발시킬 수 있으며, 경계성 갑상선예비능 환자로 하여금 임상적으로 갑상선 기능저하증을 유발할 수 있고, 체액 및 전해질의 이동으로 인해 심장 상태의 보상부전을 일으킬 수 있다.

다뇨증-다음다갈증의 발생이 처리 환자의 60 ％에 이른다는 것이 관찰되었다. 장기간의 리튬 처리 후에 신장에서의 구조적 병변 예를 들어, 간질성 섬유증, 세뇨관 위축 및 사구체 경화증이 특히 리튬 독성을 경험한 환자들에서 보고되고 있다. 리튬의 다른 부작용으로는 진전, 체중 증가, 설사 및 피부 발진이 있다. 이러한 부작용들이 임상적 실용에서의 리튬 사용에 심각한 실제적인 장해가 된다.

부작용, 특히 보다 심각한 것들은 양극성 환자에 있어서 혈장 리튬 농도를 모니터링함으로써 감소시킬 수 있다. 혈장 약물 농도를 모니터하고 이들을 좁은 치료 범위로 유지해야 하는 요건들은 그의 임상적 유용성을 떨어뜨린다.

이상적인 리튬 유사제는 양극성 및 비-양극성 울증 모두에 빠른 작용 개시를 가지며, 단지 1 일 1 회 투여를 요구하고, 광범위한 치료 전 약물 평가 및 혈장 약물의 모니터링을 요구하지 않는 안전한 프로필을 가지며, 리튬 그 자체만큼 심각한 여러 부작용과는 관련되지 않는다.

이노시톨 모노포스파타제는 포스포이노시타이드 사이클에서 주요 효소이며, 이노시톨-1-포스페이트, 이노시톨-3-포스페이트 및 이노시톨-4-포스페이트의 탈인산화에 의해서 이노시톨을 공급한다는 것이 증명되었다. 리튬이 상기 효소의 활성을 저해하므로, 이러한 저해가 항-조증 및 항-울증 활성을 수행하는 분자 메카니즘일 것이라고 제안되어 왔다.

이러한 관점에서, 효과적이고 특이적인 IMPase 저해제의 개발은 조증 및 울증 치료에 효과적인 완전히 신규의 약물을 이끌었다.

상기 IMPase에 대하여 저해 활성을 나타내는 적당한 화합물은 화학식 1의 화합물이다.

상기 언급한 바와 같이 화학식 1의 화합물은 미생물 또는 화학 합성에 의해서 얻어질 수 있다.

미생물 합성시, 통상적으로 푸베룰론산이 푸베룰산에 비해 다량으로 얻어지며, 따라서 푸베룰론산을 탈카르복실화 반응시켜 푸베룰산을 얻는 것이 바람직하다.

푸베룰론산을 얻기 위한 미생물 제조 방법은

(a) 본 발명의 IMPase-저해 화합물을 생산할 수 있는 페니실리움 (Pennicillium) 속의 진균을 동화가능한 탄소원, 질소원 및 무기염 함유의 수성 영양 배지 중의 호기적 상태 하에서 배양하는 단계,

(b) 발효 브로쓰 및(또는) 균사체로부터 IMPase-저해 화합물을 회수하는 단계,

(c) 공지된 자체 기술에 따라서 푸베룰론산을 정제하고 단리하는 단계를 포함한다.

상기 방법에 대한 페니실리움 속의 적당한 미생물로는페니실리움 푸베룰럼(P. puberulum), 페니실리움 오랜티오비렌스(P. aurantiovirens), 페니실리움 요한니올리(P. johannioli) 및페니실리움 사이클로피움 비리디카텀(P. cyclopium viridicatum)이 있으며, 이들은, 예를 들어 상기 인용된 참고 문헌 (즉, 비르킨쇼 등) 또는 옥스퍼드 (Oxford) 등의 문헌 [Chem. Ind. 1942, 61, 485]에 기재된 바와 같은 공지된 기술에 따라 발효시킬 수 있다.

생산 균주를 배양하는데 사용되는 배지는 특정 미생물이 이용할 수 있는 영양을 함유하는 임의의 액체 또는 고체 배지일 수 있으나, 상업적 규모의 배양에 있어서는 액체 배지가 바람직하다.

당업계에 공지된 바와 같이 영양 배지 조성물은 탄소 및 질소원이 발효 배지 중에 존재한다는 조건 하에, 넓은 범위 상에서 변화될 수 있다. 통상의 탄소원으로는 글루코스, 락토스, 말토스, 갈락토스, 슈크로스, 덱스트린, 지방 및 오일 (예를 들어, 대두 오일, 라드 오일, 치킨 오일), 전분, 글리세롤, 만니톨, 소르비톨 등이 있다. 통상의 질소원으로는 암모니아, 황산 암모늄, 아미노산, 예를 들어 글리신, 아르기닌, 트레오닌, 메티오닌, 트립톤, 펩톤, 복합 배지원 예를 들어, 효모 자가 분해물, 맥아, 콩, 면화 종자, 토마토 페이스트, 옥수수 침지액, 효모 추출물, 고기 추출물 및 발효 부산물 예를 들어 전효모 및 증류 용해물 등이 있다. 기타 필수 영양으로 무기염 예를 들어, 나트륨, 칼륨, 암모늄, 마그네슘 및 칼슘의 염화물, 질산염, 황산염, 탄산염 및 인산염에 의해 공급된다. 또한, 영양 배지는 무기 미량 원소 예를 들어 마그네슘, 철, 구리, 망간, 아연, 코발트, 카드뮴, 몰리브덴 등을 포함할 수 있다. 물론, 배지의 pH를 조절할 목적으로 무기산 또는 유기산, 알칼리, 완충액 등을 가할 수 있고, 또는 기포를 제거할 목적으로 오일, 계면 활성제 등을 적당량 첨가할 수도 있다.

통상적으로, 생산 균주를 진동 플라스크 내에서 전배양시키고 나서, 배양물을 사용하여 IMPase-저해 물질의 상당한 양의 생산을 위해서 발효기의 용기에 접종한다. 전-배양용으로 사용되는 배지는 보다 큰 발효에 사용되는 배지와 동일할 수 있지만, 다른 배지도 사용될 수 있다.

생산 균주는 통상적으로 20 ℃ 내지 40 ℃, 바람직하게는 24 ℃ 내지 35 ℃에서 배양되며, 약 25 ℃의 온도가 특히 바람직하다.

발효는 예를 들어 고정, 진동, 호기적으로 교반된 배양액과 같은 임의의 공정에 의해서 수행될 수 있다. 바람직하게는 진동 또는 표면 배양이 사용되며, 회전식 진동기 상에서 발효시키는 것이 특히 바람직하다.

배양 혼합물의 교반 및 통기는 여러 가지 방식으로 수행될 수 있다. 교반은 프로펠러 또는 유사한 기계적 교반 장치에 의해서, 발효기를 회전시키거나 진동시킴으로써, 여러 가지 펌프 장치에 의해서 또는 배지 속으로 멸균 공기의 통과에 의해서 제공될 수 있다. 통기는 발효 혼합물 속으로 멸균된 공기를 통과시킴으로써 수행될 수 있다.

발효하는 동안, IMPase-저해 화합물의 생산은 브로쓰 또는 균사체 추출물 시료를 시험 예를 들어, 생물 분석 또는 TLC 또는 HPLC 공정에 의하여 시험함으로써 IMPase-저해 활성을 모니터할 수 있다.

통상적으로 발효는 약 3 내지 5 일 내에 완성된다.

균사체 또는 생산 미생물의 발효 브로쓰로부터 IMPase-저해 화합물의 회수는 공지된 자체 기술 예를 들어, 용매를 사용한 추출, 비-용매 첨가 또는 용액의 pH 변화에 의한 침전, 분배 크로마토그래피, 역상 분배 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피 및 분자 배제 크로마토그래피 등에 의해서 수행된다.

본 발명의 조 IMPase-저해 물질을 회수하기 위한 바람직한 공정은 물과 혼합가능한 유기 용매를 사용하여 여과 또는 원심 분리된 균사체를 추출하고, 추출물을 농축하여, 임의로 침전제를 첨가함으로써 침전, 물과 혼합가능한 유기 용매를 사용하여 수성 잔류물을 추출함으로써 또는 흡착 크로마토크래피에 이어 흡착 매트릭스로부터 목적하는 생성물을 용출시킴으로써 조 IMPase-저해 물질을 회수하는 것을 포함한다. 바람직하게는, 조 IMPase-저해 물질은 흡착 크로마토그래피에 의해서 회수된다.

상기 크로마토그래피 흡착 단계에서 유용하게 사용되는 고정상의 예로는 알루미나, 규조토, 탄소, 폴리스티렌 수지 (예를 들어, 암버라이트 (Amberlite) XAD2 또는 XAD4, 롬 앤 하스 (Rohm and Haas); 도웩스 (Dowex) M112 또는 S112, 다우 케미칼 사 (Dow Chemical Co.); 디아이온 (Diaion) HP 20, 미츠비시 (Mitsubishi)), 아크릴 수지 (예를 들어, XAD7 또는 XAD8, 롬 앤 하스), 폴리카프롤락탐과 같은 폴리아미드 수지, 나일론 및 가교 결합된 폴리비닐피롤리돈 (예를 들어, 폴리아미드-CC 6, 폴리아미드-SC 6, 폴리아미드-CC 6.6, 폴리아미드-CC 6AC 및 폴리아미드-SC 6AC, 마처리-나겔 사 (Macherey-Nagel & Co., 웨스트 저머니); PA 400, (엠. 우오엘름 에이지 (M. Woelm AG), 웨스트 저머니) 및 폴리비닐피롤리돈 수지 PVP-CL, (알드리치 케미 지엠비에이치 앤드 사 (Aldrich Chemie GmbH & Co.), 케이지 (KG), 웨스트 저머니)) 및 조절된 기공의 가교 결합된 덱스트란 (예를 들어, 세파덱스 (Sephadex) LH-20, 파마시아 파인 케미칼스, 에이비 (Pharmacia Fine Chemicals Ab))이 있다. 바람직하게는, 폴리스티렌 수지가 사용되며, 특히 바람직하게는S112 수지가 사용된다.

흡착 매트릭스로부터 IMPase-저해 화합물을 용출하는데 바람직한 용매는 특정 고정상에 따라서 다르다.

예를 들어, 실리카겔 또는 알루미나가 사용될 경우, 바람직한 용매는 할로겐화된 탄화수소, 저급 알칸올, 에테르, 고급 케톤 및 그의 혼합물이다. 아세톤과 같은 저급 케톤 또는 메탄올과 같은 저급 알코올이 고정상으로서 탄소와 함께 사용될 수 있다. 에탄올과 같은 물과 혼합가능한 용매 또는 그의 혼합물이 폴리스티렌 또는 아크릴 수지에 있어서 바람직한 용출액인 반면, 물과 혼합가능한 용매의 수성 혼합물은 폴리아미드 수지에 바람직하다.

조 푸베룰론산의 정제는 공지된 자체 기술 예를 들어, 메탄올과 같은 적당한 유기 용매에 조 생성물을 현탁시키고 침전물을 제거함으로써 얻어진다. 그 후, 푸베룰론산은 공지된 크로마토그래피 기술에 의해서 분리된다. 예를 들어, 고정상으로서 조절된 기공의 가교 결합된 덱스트란 (예를 들어, 세파덱스 LH-20, 파마시아 파인 케미칼 에이비) 및 이동상으로서 메탄올을 포함하는 분리 시스템이 사용될 수 있다. 활성 분획을 진공 하에서 수집하고 농축하여 얻어지는 분말은 이온-교환 크로마토그래피에 의해서 추가로 정제할 수 있다. 예를 들어, 완충된 용액 (예를 들어, 0.02 M 아세트산 나트륨, pH 5.5) 중에 재용해시킬 수 있으며, 얻어진 용액은 바람직하게는 10 ％ 내지 20 ％의 농도 구배로 하는 1 N 염산의 수성 용액으로 용출되는 가교-결합된 아가로스 수지 (예를 들어, Q-세파로스 (Sepharose), 파마시아)를 포함하는 크로마토그래피 칼럼의 상부에 가해진다.

그 후, 코르베트 (Corbett) 등의 문헌 [Jour. Chem. Soc., 1950, 6]에 기재된 바와 같이 푸베룰산은 푸베룰론산을 탈카르복실화하여 얻는다.

또한, 존스 (Johns) 등의 문헌 [Jour. Chem. Soc., 1954, 198]에 기재된 바와 같이 푸베룰산은 직접 화학 합성에 의해서도 얻을 수 있다. 이 방법에 따라서, 클로로포름 중의 3,4,6-트리메톡시시클로헵타트리엔-카르복실산 용액 (디아조아세트산 에스테르와 1,2,4-트리메톡시벤젠을 반응시킴으로써 얻어지는 중간체)을 사염화탄소 중의 브롬 용액과 반응시킨다. 그 후, 얻어진 침전물을 에틸 아세테이트 중에서 가열하고 얼음 중에서 냉각시킨 후, 브롬화 수소산으로 가수분해하여 스티피태트산 (stipitatic acid)을 얻는다. 그 후, 상기 스티피태트산을 브롬과 함께 반응시켜 모노브로모스티피태트산을 얻은 후 수산화 칼륨과 반응시켜 목적하는 푸베룰산을 얻는다.

노조에 (Nozoe) 등의 문헌 [Bull. Chem. Soc. Jap., 33, 1071 (1960)]에 기재된 푸베룰론산의 화학적 합성은 트로폴론-3,4-디카르복실산 무수물 (퍼푸로갈린 (purpurogallin)의 알칼리성 과산화수소 산화 작용에 의해서 얻어짐)을 아세트산 중에서 브롬과 반응시킴으로써 7-브로모트로폴론-3,4-디카르복실산 무수물을 얻고, 나트륨 β-나프탈렌술포네이트, 수산화 나트륨 및 구리 분말의 혼합물과 반응시켜 3-히드록시-트로폴론-4,5-디카르복실산 무수물을 얻는다. 상기 두 단계를 반복함으로써, 추가의 히드록시기가 분자 중에 삽입되어 목적하는 푸베룰론산을 얻는다.

피.디. 펠톤 (P.D. Pelton) 및 에이.제이. 간즈혼 (A.J. Ganzhorn)의 문헌[Journal Biolog. Chem., 267, 1992, pp. 5916-5920]에 기재된 바와 같이 화학식 1의 화합물 활성을 측정하기 위해, SDS-PAGE (sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis)에 의해서 90 ％ 이상의 순도로 판정된 IMPase를 정제한다. 효소는 동물의 뇌 또는 동물의 IMPase를 발현하는 재조합 이. 콜라이 (E. coli) 균주로부터 정제될 수 있다. 조 효소 제제가 사용될 수 있지만, 정제 효소를 사용하는 것이 바람직하다. 기질로서 4 mM의 2-글리세롤포스페이트를 사용한 표준 분석 (피.브이. 아트우드(P.V. Attwood) 등의 문헌[Biochem. Jour., 1988, 253, pp. 387-394])에 의해 측정된 바와 같이 정제된 효소는 일반적으로 25 μmol의 Pi/분/단백질 mg 비활성을 갖는다.

효소 활성은 에이. 제이. 간즈혼 및 엠. 씨. 카날 (M. C. Chanal)의 문헌[Biochem., 1990, 29]에 따라서 측정될 수 있다. 반응 혼합물은 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 2 mM 염화마그네슘 및 0.1 mM EGTA를 함유한다. 그 후, IMPase 효소 5 μg/㎖ 및 4 mM의 2-글리세롤포스페이트 기질을 반응 혼합물에 가한다. 별법으로, 효소 첨가 전에 반응 혼합물에 직접 기질을 가할 수도 있다.

반응은 기질 또는 효소 첨가로부터 30 분 후 (나중에 첨가되는 것에 따라 변함)에 종결되는 것으로 간주한다. 유리된 포스페이트는 시마즈 (Shimadzu) 분광분석기 UV 2100를 사용하여 350 nm에서 몰리브데이트 착색법 (피.브이. 아트우드 등의 문헌[Biochem. Jour., 1988, 253, pp. 387-394])에 의해서 측정한다.

효소 활성의 50 ％를 저해하는 데에 요구되는 저해제의 몰량 (IC50)을 결정하기 위해서, 효소 반응을 여러 가지 농도의 화학식 1 화합물의 존재 또는 부재 하에서 수행한다.

상기 IC50값은 푸베룰론산의 경우 약 4 μM이며, 푸베룰산의 경우 약 40 μM이며, 약 1250 μM인 리튬보다 훨씬 적다.

상기 결과를 기초로 하여, 화학식 1의 화합물의, 치료 분야에서 항-조증 및 항-우울제로서의 적용을 확인할 수 있다.

조증 또는 울증의 치료에 있어서, 본 발명의 화합물을 그대로 투여하거나 또는 제약학적으로 허용가능한 담체를 사용하여 제제화함으로써 투여될 수 있다. 투여는 경구, 비경구 또는 직장으로 수행할 수 있다.

경구 투여용으로, 본 발명의 화합물은 캡슐, 환약, 정제, 구내정, 분말, 시럽, 용액, 현탁액 또는 에멀젼과 같은 고체 또는 액체 제제로 제제화될 수 있다.

정제와 같은 고체 조성물을 제조하기 위해서, 주요 활성 성분을 제약학적 담체, 예를 들어, 아카시아, 옥수수 전분 또는 젤라틴과 같은 결합제, 감자 전분 또는 알긴산과 같은 분해제, 스테아르산 또는 스테아르산 마그네슘과 같은 윤활제 및 물과 같은 기타 제약학적 희석제와 배합된 락토스, 슈크로스 및 옥수수 전분과 같은 종래의 정제화 성분과 혼합시킴으로써, 균질한 혼합물을 함유하는 고체 예비 제제 조성물을 형성한다. 이들 예비 제제 조성물이 균질하다고 말할 경우, 이는 활성 성분이 조성물에 전체적으로 고르게 분산되어 있음을 의미하므로, 조성물은 쉽게 정제, 환약, 캡슐 등과 같은 동일하게 효과적인 단위 투여 형태로 용이하게 나누어질 수 있다. 그 후, 고체 예비 제제 조성물은 본 발명의 활성 성분 50 내지 약 350 mg을 함유하는 상기 기재된 타입의 단위 투여 형태로 나누어진다. 신규 조성물의 정제 또는 환약은 코팅되거나 다르게는 혼합되어 지속성으로 작용하는 장점을 가진 투여 형태로 제공될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 환약은 내부 투여 성분 및 외부 투여 성분을 포함할 수 있으며, 외부 투여 성분은 내부 투여 성분 위에 외피의 형태로 존재한다. 두 성분들은 장막에 의해서 분리될 수 있으며, 장막은 위에서 분해되는 것을 견딜 수 있게 하고, 내부 성분이 손상없이 그대로 십이지장으로 통과하게 하거나 내부 성분의 방출을 지연시킨다.

본 발명의 신규 조성물이 경구 투여용으로 주입될 수 있는 액체 형태로는, 수성 용액, 적당하게 향미를 낸 시럽, 수성 또는 유성 현탁액, 식용유 예를 들어, 면실유, 참기름, 코코넛유, 낙화생유 등을 첨가한 향미를 낸 에멀젼 뿐 아니라 엘릭실제 (elixirs) 및 유사한 제약학적 비히클이 있다. 수성 현탁액을 위한 적당한 분산제 또는 침전 방지제로는 합성 또는 천연검 예를 들어, 트라가칸트 (tragacanth), 아카시아, 알긴산염, 덱스트란, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 젤라틴 등이 있다.

비경구 투여용으로, 본 발명의 화합물은 액체 비히클을 함유하는 적당한 주사용 제제로 제제화될 수 있다. 그러한 비히클은 통상, 치료 효과를 갖지 않으며 독성이 없어야 한다. 본 발명의 화합물을 주사용 투여 형태로 제조하기 위한 적당한 비히클의 예로는 물, 수성 비히클 (예를 들어, 염화 나트륨 주사액, 덱스트로스 주사액 등), 물과 혼합가능한 용매 (예를 들어, 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 등) 및 비-수성 비히클 (예를 들어, 옥수수유, 면실유, 낙화생유 및 참기름과 같은 "픽스트 오일 (fixed oil)"이 있다. 임의로, 주사용 제제는 용액을 안정화시키는 완충액 (예를 들어, 시트레이트, 아세테이트 및 포스페이트)및(또는) 항산화제 (예를 들어, 아스코르브산 또는 아황산수소 나트륨)을 추가로 포함한다. 비경구 투여의 바람직한 경로는 특별한 제제를 요구할 것이다. 예를 들어, 현탁액은 불용성 입자들이 혈관을 막을 위험이 있으므로 혈류에 직접 투여될 수 없는 반면, 피하에 투여될 용액은 긴장도 조절에 대한 각별한 주의를 요구하며, 달리 해부학적 영역 내의 신경 말단의 자극은 심한 고통을 유발할 수 있다.

경구, 비경구 또는 직장 투여 형태의 적당한 제제에 대한 유용한 보고가 레밍톤 (Remington)의 문헌 [Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, 1985 (Merck Publishing Company, Easton, Pennsylvania)]에 기재되어 있다.

활성 성분의 투여량은 환자의 타입, 나이 및 상태, 특정 활성 성분과 투여 및 투여를 위해 선택된 제제, 투여 스케줄 등을 포함한 많은 인자에 따라 결정된다.

일반적으로, 1 일 1 내지 4 회 투여 요법으로 약 1 내지 20 mg/kg/일의 투여량이 바람직하다.

정학한 치료량은 치료될 환자의 병력에 따라서 다르며, 최종 분석에 있어서, 상기 지시 범위 내의 정확한 치료량은 의사의 재량에 달려 있다.

하기는 본 발명의 화합물을 제조하기 위한 예시적인 실시예들이다.

<실시예>

<실시예 1>

페니실리움 푸베룰럼의 발효

페니실리움 푸베룰럼 ATCC 8732를 비르킨쇼 등의 문헌 [Biochem. Jour. 26,441 (1932)]에 기재된 바와 같이 크자펙-독스 (Czapec-Dox) 배지 중에서 발효시켰다.

<실시예 2>

푸베룰론산의 회수

실시예 1에 따라서 얻어진 발효 브로쓰를 회수하여, 하이플로 (Hyflo (등록상표)) 필터 매트릭스를 사용한 여과에 의해 균사체를 제거하였다. 푸베룰론산을 여과물 브로쓰 (회분식으로, pH 3.5에서 3 시간 동안 교반시킴)로부터 S112(등록상표) 폴리스티렌 수지 (더 다우 케미칼 사) 450 ㎖ 상에 흡착시켰다. 그 후, 수지를 회수하고 물로 세척하여, 아세톤 : BuOH : 물 = 8:1:1의 혼합물 1.5 ℓ를 사용하여 용출시켰다. 용출물을 감압 하에서 농축하고, 수성 잔류물을 동결 건조하여 조 푸베룰론산 12.2 g을 얻었다. 또한, 푸베룰론산을 디에틸 에테르와 같은 비극성 용매를 사용하여 침전시키고 나서, 여과 및 침전물을 건조시킴으로써 얻을 수 있었다.

<실시예 3>

푸베룰론산의 정제

조 제제 (실시예 2에 따라서 얻어짐) 5 g을 메탄올 중에 현탁시키고, 침전물을 원심 분리에 의해서 분리하여 제거하였다. 상등액을 감압 하에서 농축하고 얻어진 시료를 메탄올로 미리 평형화시킨 세파덱스(등록상표) LH-20 칼럼 (비드 지름 25 내지 100 ㎛, 파마시아; 칼럼: 6 x 50 ㎝)의 상부에 적용하였다.

압력없이 메탄올을 사용하여 용출시킴으로써 조 항생물질의 단계별 분획화를수행하였다. 활성 분획 (효소 분석으로 시험된 것)을 수집하고, 진공 하에서 농축하였다. 고체를 물에 재용해시키고 동결 건조하여, 60 mg의 분말을 얻었다.

상기 분말 40 mg을 아세트산 나트륨 (0.02 M, pH 5.5) 30 ㎖ 중에 용해시키고 나서, 동일한 완충액으로 미리 평형화시킨 Q-세파로스 (등록상표) (비드 지름 24 내지 44 μm, 파마시아: 칼럼 1.5 x 12 cm) 칼럼 상부에 가하였다. 물질을 완전히 흡착시킨 후, 칼럼을 탈염수 200 ㎖를 사용하여 세척하였다. 용출은 물/1 N HCl을 HCl 10 ％ 내지 20 ％의 단계 농도 구배로 용출시킴으로써 수행하였다. 활성 분획을 수집하여 산성 pH에서 에틸 아세테이트를 사용하여 추출하고, 감압 하에서 농축하고 물로부터 동결 건조하여, 10 mg의 황색 분말을 얻었다.

<실시예 4>

푸베룰론산의 탈카르복실화

푸베룰론산 5 mg을 물 300 ㎕ 중에 용해시키고, 피코-택 (Pico-tag) 장치 (워터스-밀리포어 (Waters-Millipore))를 사용하여 질소하에서, 15 시간 동안 105 ℃에서 처리하였다. 반응 용액을 동결 건조하여, 약 푸베룰산 3 mg을 얻었다.

본 발명은 조증 및 울증의 치료에 유용한, 효과적이고 특이적인 효소 이노시톨 모노포스파타제 EC 3.1.3.25의 저해제를 제공한다.

Claims (1)

1. 푸베룰산 또는 푸베룰론산을 포함하는, 효소 이노시톨 모노포스파타제 EC 3.1.3.25의 저해제.